يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

توليد ثقافات العضوية الورمية من خط خلايا سرطان الغدة في الرئة

296 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/70387

⸱

يونيو 12, 2026

 ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Genetics and Development of Complex Phenotypes, School of Life Sciences, Fudan University, 2Shanghai Key Laboratory of Lung Inflammation and Injury, Department of Pulmonary Medicine, Zhongshan Hospital, 3National Demonstration Center for Experimental Biology Education, School of Life Sciences, Fudan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم طريقة سريعة ونقية وفعالة من حيث التكلفة لتحديد عضويات الورم من سلالة خلايا A549، مناسبة للاختبارات الأولية ولأغراض التعليم.

الملخص

هنا، نصف بروتوكولا لتوليد عضويات الأورام المشتقة من خط الخلايا (CDTOs) من سلسلة خلايا سرطان الغدة في الرئة البشرية A549. يتضمن البروتوكول تضمين خلايا A549 الموسعة ثنائية الأبعاد في Matrigel والحفاظ عليها في وسط زراعة ثلاثي الأبعاد لزراعة طويلة الأمد. تم تحديد كثافة البذور الموصى بها 500 خلية/ميكرولتر لدعم تكوين عضوي متسق. تميزت الأقراص الناتجة بصبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين (H&E) وتألق المناعي (IF). حافظت العضويات على تعبير عال عن علامات سرطان الغدة الدرقية في الرئة مثل عامل النسخ الغدقي 1 (TTF-1)، وبروتين الالتصاق E-كاديرين (ECAD)، وبروتين الهيكل الخلوي كيراتين 7 (KRT7). علاوة على ذلك، أظهر تعبير بروتين الوصلة الضيقة Zona Occludens 1 (ZO-1) استقطبية غير منظمة في عضويات الأورام. يقدم هذا البروتوكول منصة عضوية أورامية بسيطة تقنيا، وفعالة من حيث التكلفة، وبحتة لأبحاث سرطان الغدة في الرئة. بساطته وقابليتها للتكرار تجعلها مناسبة أيضا للتدريس المختبري الجامعي، حيث يمكنها مساعدة الطلاب على اكتساب تقنيات زراعة الأورام العضوية ثلاثية الأبعاد الأساسية ضمن جدول مختبري محدود.

المقدمة

العضويات هي هياكل ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد) منظمة ذاتيا في المختبر ، تنشأ من الخلايا الجذعية وقادرة على إعادة تلخيص التعقيدات البيولوجية للأعضاء الحقيقية إلى حد كبير1. قد تنبع الخلايا التي تشكل العضويات من خلايا جذعية متعددة القدرات محفزة أو خلايا مشتقة من الأنسجة، وتشمل الأخيرة الخلايا الجذعية/السلفية الطبيعية، والخلايا المتمايزة، وخلايا الورم2. مقارنة بأنظمة الزراعة ثنائية الأبعاد التقليدية ونماذج الحيوانات، يمكن للعضويات تقليد الخصائص الفسيولوجية لجسم الإنسان بشكل أوثق مع توفير مرونة تجريبية أكبر. وبالتالي، تم تطبيق تقنية العضوية على نطاق واسع في تطوير الأدوية3، والطب الشخصي4، ونمذجة الأمراض5.

وقد أنشأت العديد من الدراسات نماذج عضوية لمجموعة واسعة من السرطانات، بما في ذلك أورام القولون والمستقيم6، البروستاتا7، البنكرياس8، المعدة9، الكبد10، الصفراوية11، الثدي12، والأورام العصبية الصماء. ومع ذلك، فإن أحد التحديات الرئيسية في أبحاث الأورام العضوية يكمن في الحفاظ على النقاء. على سبيل المثال، كشفت دراسة على سرطان الرئة غير صغير الخلايا أن 17٪ فقط من الأعضاء المعتمدة كانت أورامية بحتة، حيث تحتوي عينات الأورام غالبا على مزيج من الخلايا الطبيعية والخبيثة التي يصعب فصلها بالكامل قبل الزراعة13. يمكن أن تسبب مشكلة الشوائب هذه القضاء على خلايا الورم عن طريق نمو الخلايا غير الورمية، ويتداخل مع نتائج اختبارات الحساسية للأدوية، ويؤدي إلى تحليلات جزيئية غير دقيقة مثل RT-qPCR أو Western Blot، حيث يتم تخفيف الحمض النووي الريبي والبروتينات من خلايا الورم بسبب نسب غير قابلة للتحكم من الخلايا الملوثة.

لمعالجة هذه المشكلة، استكشف الباحثون تصميم وسائط زراعة انتقائية تستغل تقليل اعتماد خلايا الورم على عوامل نمو معينة، مما يثبط النمو الطبيعي للخلايا مع تعزيز توسع خلايا الورم14. بالإضافة إلى ذلك، يتم تطوير استراتيجيات مثل فرز الخلايا أو التعرف على وحيد النسيلة لبناء عضويات أورامية نقية.

يصف هذا البروتوكول توليد عضويات الأورام المشتقة من خط الخلايا (CDTOs) باستخدام خط الخلايا A549 لسرطان الغدة في الرئة البشرية، والتي أبلغ عن أنها تظهر جزئيا خصائص شبيهة بالخلايا الجذعية السرطانية، بالإضافة إلى تعزيز التكاثر، والقدرة على التكاثر، وزيادة الإصابة بالأورام في المختبر.15. حافظت CDOs الناتجة على تعبير علامات حيوية خاصة بالسلالة مثل عامل نسخ الغدة الدرقية 1 (TTF-1)16، وبروتين الالتصاق E-كاديرين (ECAD)17، وبروتين الهيكل الخلوي كيراتين 7 (KRT7)16 ، وأظهرت سمات فسيولوجية مميزة للعضويات الورمية. هذا النموذج سهل التأسيس ويحتوي على مكونات محددة من خلايا السرطان، مما يجعله مناسبا للباحثين الجدد في مجال الورم العضوي أو الذين يواجهون صعوبة فقدان هوية الورم في الزراعة العضوية الأولية للأورم. تشمل التطبيقات المحتملة اختبار الحساسية الدوائيةالأولي 18، ودراسات البيئة الدقيقةللأورام 19، والتدريب التعليمي على تقنيات الزراعة ثلاثية الأبعاد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

درجة حرارة الغرفة في المختبر تتراوح بين 22–24 درجة مئوية وتسمى RT. يوصى باستخدام جهاز طرد مركزي من نوع دلو التأرجح. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تأسيس العضويات الأولية من A549

  1. التحضير وحصاد الخلايا بواسطة A549
    1. حضر طبقا بحجم 6 سم يحتوي على خلايا A549 عند التقاء بنسبة 70٪. التريب الخفيف وPBS قبل التسخين حتى 37 درجة مئوية. احسب كمية الخلية وحجم المادة وفقا لتصميم التجربة والجدول 1.
      1. تطلب الذوبان من Matrigel aliquots مع الاحتياط لبئرين على الأقل على الجليد لمدة لا تقل عن 60 دقيقة. جهز صفائح بوليسترين ومعالجة ب TC للسماح للقباب بالبقاء نصف كروي.
      2. وسط ثنائي الأبعاد جاهز حديثا (وسط النسر المعدل من دولبيكو يحتوي على 10٪ مصل أبقار جنيني) ووسط ثلاثي الأبعاد (وسط عضوي سرطان الغدة في الرئة البشرية). يمكن توليد وسط ثلاثي الأبعاد من مجموعات تجارية أو وفقا لأعمال ساكس ن. وآخرون من مختبر هانز كليفررقم 20.
        ملاحظة: يمكن لطبق واحد بحجم 6 سم أن ينتج عادة حوالي 5,000,000 خلية بعد الهضم. تقليل عدد خلايا الإدخال في تصميم التجربة. الألواح المصممة للتصوير الكونفوكلي باستخدام قاع زجاجي غير مناسبة لماتريغيل لتشكيل شكل ثلاثي الأبعاد مناسب.
    2. استنشق الوسط المستهلك ثنائي الأبعاد واغسل الخلايا مرة واحدة ب 1 مل PBS لإزالة المصل المتبقي. استنشق PBS، أضف 1 مل من TrypLE المسخن مسبقا، وحضن اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 دقائق.
    3. راقب الخلايا تحت المجهر. عندما ينكمش السيتوبلازم وتفقد الخلايا الاتصالات بين الخلايا، أضف حجما متساويا (1 مل) من وسط ثنائي الأبعاد طازج لإنهاء التفاعل الإنزيمي.
    4. استخدم الماصة بلطف لفصل وإعادة تعليق الخلايا الملتصقة بسطح الزراعة. انقل تعليق الخلية إلى أنابيب طرد مركزي بسعة 1.5 مل وجهاز الطرد المركزي عند 300 × جرام لمدة 3 دقائق عند RT لإطلاق الخلايا.
    5. تخلص من المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبة الخلوية في وسط ثنائي الأبعاد بحجم 1 مل. قم بتخفيف تعليق الخلايا بسعة 10 ميكرولتر إلى 100 ميكرولتر وعد أعداد الخلايا باستخدام جهاز قياس الهيموسيتوميتر. احسب الحجم المطلوب وفقا للخطوة 1.1.1 واسحب إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 1.5 مل مع أطراف مغسولة مسبقا.
  2. زرع الخلايا المحصودة في ماتريجيل
    1. حضر رؤوس الماصات الثلج والتبريد في ثلاجة بدرجة -20 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة واستخدم رؤوس منخفضة الاحتجاز إذا أمكن. تأكد من عدم بقاء أي بلورات في مقاطعات Matrigel وعدم تكوين فقاعات عند دخول الطرف إلى المحلول.
    2. قم بطرد الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا المحصودة عند 300 × جرام عند RT وتخلص من الفائق. ضع الأنبوب على الثلج. استخدم رؤوس الماصة المبردة مسبقا لاستنشاق الحجم المطلوب من ماتريغيل ببطء وإضافها إلى الحبيبة على الثلج. أعد تعليق التثبيت باستخدام التوقف الأول فقط من الماصة ببطء على الثلج. يرجى عدم ترك الثلج لأكثر من 10 ثوان إذا كان هناك حاجة للمراقبة.
    3. استخدم رؤوس الماصة المبردة مسبقا وحافظ على الخليط على الثلج. أضف قطعة واحدة من الخليط إلى وسط كل بئر. سحب الماصة ببطء أثناء الصرف، باستخدام التوقف الأول فقط لتجنب تكون الفقاعات.
      ملاحظة: يجب أن يشكل الخليط هيكلا ثلاثي الأبعاد على شكل قبة في المركز. أعد تعليق الخليط قبل الانتقال إلى البئر التالي. إذا أمكن، تجنب استخدام آبار الحافة وأضف PBS إلى هذه الآبار.
    4. حضن اللوحة عند حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة بسعة 5٪ CO₂ لمدة 40 دقيقة للسماح ببلمرة الهلام. بعد أن تصلب المادة، أضف وسط ثلاثي الأبعاد بعناية على طول جدار البئر، واستمر في الزراعة عند 37 درجة مئوية.
      ملاحظة: تجنب تكوين فقاعات أثناء الصرف. إذا كانت هناك فقاعات، تجنب استخدام ذلك الجزء من الخليط.
    5. أثناء الزراعة، استبدل الوسط ثلاثي الأبعاد كل 3 أيام أو كلما لاحظ تغير لون (من الوردي إلى الأصفر). افحص نمو العضويات تحت المجهر المقلوب عند كل تغير في الوسط، وتوثيق الشكل التصويري لمراقبة تطور الهيكل.
      ملاحظة: يجب أن تكون العضويات كثيفة ومعقدة بأقطار تزيد عن 30 ميكرومتر بدلا من تفك أو تجزئة كما يشير 5000 خلية/ميكرولتر (الشكل 1D).

2. تثبيت وتضمين، وتقسيم الأعضاء

  1. جهز الزراعة العضوية في اليوم 6–9. أزل وسط الزراعة من لوحة زراعة الخلية. قم بفصل الأعضاء بلطف عن طريق توصيل الماصات ب 1 مل من PBS البارد، وانقلها إلى أنبوب بحجم 1.5 مل مغسول مسبقا بنسبة 5٪ من BSA لمنع الالتصاق. دع الأعضاء تستقر طبيعيا بالجاذبية على الجليد وأزل السوبرناتانت بعناية.
  2. أضف 1 مل من PBS باردة لإعادة تعليق الحبيبة. دع الأعضاء العضوية تستقر طبيعيا بالجاذبية لمدة لا تقل عن 5 دقائق ثم أزل السوبرناتانت بحذر. إذا فشلت بعض العضويات في الترسب، قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة عند 200 × جرام لمدة دقيقة واحدة عند 4 درجات مئوية لجمعها. يتم تنفيذ هذه الخطوة عدة مرات وستسمى "غسل صغير".
  3. قم بغسل خفيف مرتين لإزالة بقايا ماتريجيل. إذا استمر بقايا المادة، أضف تركيزا نهائيا 10 ملليمول EDTA إلى PBS البارد أثناء الغسيل.
    تحذير: نقل العينات إلى غطاء الأبخرة. أضف 4٪ بارافورمالديهيد (PFA) تكفي لتغطية الأورجينويد، وثبته على الثلج لمدة ساعة واحدة في غطاء البخار. تخلص من المثبت وقم بالغسيل الصغير مرتين. تابع الخطوة 4.1 لتلوين الصيام الصيام.
  4. بعد أن تستقر العضويات في قاع الأنبوب، تخلص من المادة الفائقة وسخن العينات مسبقا في حمام معدني بدرجة حرارة 70–75 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لتجنب التصلب السريع للأغاروز خلال الخطوة 2.7.
  5. حضر 3٪ (بدون ضبط) أجاروز في 1× PBS، وسخن الخليط في حمام ماء ميكروويف حتى يذوب بالكامل ويصبح شفافا. تجنب الغليان لمنع فقدان الحجم أو تغيرات في تركيز الأغاروز.
  6. أعد تعليق الأعضاء الثابتة بسرعة في 30–50 ميكرولتر من 3٪ أغاروز، لضمان توزيع متساو، وبرد على الجليد لمدة 20–30 دقيقة حتى يتصلب، متجنبا توليد الفقاعات.
  7. بمجرد أن يتصلب خليط الأغاروز-الأورجينويد، قم بإزالة كتلة الأغاروز بعناية من الأنبوب باستخدام إبرة وانقلها إلى شريط نسيج مميز بعلامة مسننة.
  8. يغمر الكاسيت الذي يحتوي على كتلة الأغاروز بشكل متسلسل في محاليل إيثانول مصنفة (30٪، 50٪، 70٪ [يمكن تخزينه طوال الليل عند 4 درجات مئوية]، 80٪، 90٪، 95٪، 100٪، و100٪ لتجفيف الكاسيت بشكل متتالي. حضن كل خطوة على منصة اهتزاز بسرعة 20 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.
  9. قم بإذابة كتل شمع البارافين مسبقا في الفرن قبل الاستخدام عند درجة حرارة 65 درجة مئوية. انقل الأعضاء المصابة بالأجاروز المصابة بالجفاف إلى الزيلين لإزالتها. اغمر مرتين، كل مرة لمدة 15–20 دقيقة، لإزالة بقايا الإيثانول.
  10. انقل أشرطة الأنسجة بشكل متسلسل إلى حمام البارافين 1 لمدة 45 دقيقة، ثم إلى حمام البارافين 2 لمدة 45 دقيقة أخرى.
  11. ضع أشرطة الأنسجة والقوالب المعدنية في غرفة البارافين المنصهرة في محطة التضمين. قم بإزالة العينة العضوية أو النسيج من الكاسيت وضعها في مركز القالب المعدني. ضع القالب على لوحة باردة لتثبيت اتجاه العينة.
  12. ضع شريط النسيج فوق القالب المعدني، املأه ببارافين منصهر إضافي، واتركه يبرد على الطبق البارد لمدة لا تقل عن 60 دقيقة. بمجرد أن تتصلب كتلة البارافين بالكامل، قم بإزالة القالب المعدني، وتخزين كتلة العضوية المدمجة في البرافين عند درجة حرارة 4 درجات مئوية حتى يتم تقسيمها.
  13. يتم تقسيم كتل العضويات المدمجة بالبارافين باستخدام ميكروتوم. تأكد من أن سمك كل قسم متساوي لتسهيل التلوين والتصوير لاحقا.
  14. تسمح للأجزاء المقطوعة بالطفو في حمام ماء يحافظ عليه عند 40 درجة مئوية للسماح بالتوسع الكامل لأشرطة البارافين. تأكد من أن كل قسم يمتد كطبقة واحدة خالية من التجاعيد؛ تخلص من أي أقسام مطوية أو متداخلة.
  15. قم بتركيب الأقسام الموسعة على شرائح المجهر اللاصقة عن طريق غمر الشريحة بزاوية طفيفة تحت المقطع ورفعه عموديا لالتقاط الأنسجة. ضع علامة على الشرائح بقلم الرصاص للحفاظ على التعرف على العينة أثناء المعالجة اللاحقة.

3. تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين (H&E)

  1. اخبز شرائح الشرائح التي تحتوي على أجزاء من الأنسجة أو الأعضاء في فرن بدرجة حرارة 60 درجة مئوية لمدة 1–2 ساعة لضمان التصاق مناسب وإزالة البارافين المتبقي.
  2. قم بإزالة الشمع من الأقسام بشكل متسلسل بغمرها في الزيلين I لمدة 15 دقيقة، والزيلين II لمدة 15 دقيقة، ثم أعد ترطيب الأجزاء عبر سلسلة إيثانول متدرجة تتراوح بين 100٪، 100٪، 95٪، 90٪، 80٪ و70٪، كل منها لمدة 5 دقائق. ثم اشطف الشرائح بماء مقطر مزدوج (ddH₂O) مرتين، كل واحدة لمدة 5 دقائق.
  3. صبغ الأقسام بالهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق، اشطف بماء الصنبور الجاري لمدة 1–2 دقيقة، ثم تميز في كحول حمضي بنسبة 1٪ لمدة 2 ثانية. اغسله مرة أخرى بماء الصنبور لمدة 1–2 دقيقة، ثم أبيض النوى بماء أمونيا بنسبة 1٪ لمدة 5 ثوان، ثم شطف أخير بماء الصنبور لمدة 1–2 دقيقة.
  4. جفف الأقسام عبر سلسلة إيثانول متدرجة من 70٪، 80٪، 90٪، و95٪ لكل منها لمدة 3 دقائق، ثم قم بصبغ الإيوزين بالإيوزين في محلول كحولي لمدة 10 دقائق.
  5. اشطف الأقسام مرتين بالإيثانول المطلق، كل واحدة لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: بالنسبة للإيوسين المعتمد على الكحول، تأكد من تجفيف الإيثانول بنسبة تصل إلى 95٪ قبل التلوين. بالنسبة لالإيوزين القابل للذوبان في الماء، قم بالصبغ قبل الجفاف.
  6. نظف الأجزاء بغمرها مرتين في الزيلين، كل مرتين لمدة 5 دقائق، واحتفظ بها في الزيلين حتى يتم تركيبها.
  7. قم بتركيب الشرائح مباشرة بعد إزالة الزيلين باستخدام وسط تثبيت راتنج محايد، مع تجنب فقاعات الهواء بعناية.
  8. جفف الشرائح المثبتة في الهواء عند RT لمدة 30–60 دقيقة، ثم راقبها تحت المجهر الضوئي.
    ملاحظة: التركيب الفوري بعد إزالة الزيلين يمنع الأكسدة ويضمن وضوح بصري.

4. التلوين بالفلورية المناعية الكاملة

  1. تابع الخطوة 2.4. أضف محلول حجب ونفاذية بسعة 1 مل (5٪ BSA + 0.3٪ Triton X-100) إلى الحبيبة وحضن عند RT لمدة 60 دقيقة أو عند 4 °م كنقطة توقف لمدة 1–2 يوم.
  2. تخفيف الأجسام المضادة الأولية والثانوية وفقا للنسبة الموصى بها من الشركة المصنعة في محلول الحجب والنفاذ. غسل الحبيبات مرة صغيرة وأضف 200 ميكرولتر أجسام مضادة أولية مخففة إلى الحبيبة. حضانه عند 4 درجات مئوية خلال الليل.
  3. قم بالغسيل الصغير 3 مرات وأضف 200 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المخففة إلى الحبيبة. احتضن التمارين أثناء العلاج المؤقت لمدة 60 دقيقة.
  4. بعد ذلك، قم بغسل الحمام الصغير ثلاث مرات. أضف وسط تثبيت 15 ميكرولتر لإعادة تعليق الحبيبة وسقط الوسط الذي يحتوي على عضويات على شريحة زجاجية. ضعي غطاء غطاء ببطء على الوسط وأغلقي عليه بطلاء الأظافر. لا تضغط غطاء الغطاء يدويا ولا تسمح لوسط التثبيت بالانتشار بتوتر سطحي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تشمل العملية العامة لهذا البروتوكول توسيع خلايا A549 ثنائية الأبعاد إلى المرحلة الأسية (الشكل الإضافي 1A) والمرور إلى المادة ثلاثية الأبعاد لتشكيل عضويات (الشكل 1A). عند تغليف الخلايا في ماتريجيل، تكاثرت الخلايا وتجمع ذاتيا، مكونة في الغالب عضويات أحادية النسيلة (الشكل 1B). كان شكلها الكثيف والمعقد موحدا عبر الممرات (الشكل التكميلي 1C). وبالمقارنة، كانت معظم هذه الهياكل كروية وزادت حجمها مع استمرار الثقافة؛ جزء واحد التصق بأسفل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يصف هذا البروتوكول طريقة لتوليد عضويات الأورام المشتقة من خط الخلايا في سرطان الغدة الرئوي A549، محسنة للبساطة التقنية وقابلية التكرار والاستخدام التعليمي. ثلاثة معايير تحدد النجاح بشكل حاسم: الحالة الابتدائية للخلية، وتركيب الوسط، وتركيب المصفوفة. بالإضافة إلى ذلك، لا ينصح بتجاوز مدة الزراعة 14 يوما. فيما يلي مؤشرات رئيسية وحل المشكلة.

الحالة الأولية للخلية
تم الحفاظ على عدد ممرات منخفض للخلايا (<20 مقطعا) لتقليل الانجراف الجيني والانتقاء ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يوجد لدى المؤلفين تضارب مصالح للكشف عنها.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل برنامج فودان للممارسة الجيدة للتدريس والتعلم، والمعهد الوطني للأبحاث لمواد التدريس، والبرنامج الوطني لتدريب المواهب في التخصصات الأساسية (رقم J1210012)، بالإضافة إلى برنامج تنمية الطلاب المتفوقين في التخصصات الأساسية التابع لوزارة التعليم (رقم 20211021). تم إنشاء الشكل 1A في BioRender (جو، ز. (2026) https://BioRender.com/0qi2gmd).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.5 mL Micro Centrifuge tubeBiofilCFT003015
A549 [A-549]human non-small cell lung cancer cellsZQXZbioZQ0003STR: Amelogenin: X,Y; CSF1PO: 10,12; D13S317: 11; D16S539: 11,12; D5S818: 11; D7S820: 8,11; TH01: 8,9.3; TPOX: 8,11; vWA: 14. Mycoplasma was negetive when purchased was tested every 2 weeks. Passage number within 10 passages from the P1 aliquots of the purchased batch was used.
Advanced DMEM/F12Gibco12634010
Anti-E Cadherin antibodyAbcam ab231303
Anti-Fade Mounting MediumYEASEN 36307ES08
Anti-HIF-1 alpha antibodyAbcam ab51608
Biological Safety CabinetNuaire LABGARDNU-540
Biological Tissue Embedding MachineKEDEEKD-BM
BSASigma A1933
Cell-Grade BSASigma A1933-100G
CentrifugeEppendorfCentrifuge 5702 RSwing bucket; Mild to low speed.
Centrifuge tubeBiofilCFT920150
Citrate Antigen Retrieval Solution (pH 6.0)ZSGB-BIO ZLI-9065
CryostageKEDEEKD-BL
Cytation 5 Cell Imaging Multimode
 Reader		BiotekCytation 5
Cytokeratin 7 (KRT7) Rabbit mAbAbclonal A4357
DMEMGibco11965092
DMSOSolarbio D8371
Donkey SerumSolarbioSL050
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco11965118
Eclipse Ts2 Inverted MicroscopeNikon Eclipse Ts2
Eosin Staining Solution (Alcohol-Soluble)Servicebio G1001
FBSNobimpexB118-500
Forma Steri-Cycle i160 CO2 IncubatorThermo Scientifici60
Hematoxylin Bluing SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Differentiation SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Staining SolutionServicebio G1004
HemocytometerSolarbioYA0810
Human Lung Adenocarcinoma Organoid Medium (3D medium)PMO Bio HC1001
Immunohistochemistry (IHC) PenZSGB-BIO ZLI-9305Store in 4°C
Laser Confocal Microscope  FV3000OlympusFV3000Usual parameter range: PMT Voltage: 500 ± 200 V; Laser Transmissivity: 5 ± 3%; Offset: 3 %
Manual Rotary MicrotomeLeicaRM2235
Metal BathALLSHENGMK-3000
Microwave OvenGalanz
Nail PolishLete
Neutral Balsam (Mounting Medium for Microscopy)BeyotimeC0173
Organoid-Specific Extracellular Matrix GelPMO Bio BM1001
PBSWISENT 311-010-CL
Peroxidase Blocking SolutionBeyotime P0100A
PipettesEppendorf312300063/312300020/312400083
Pipettes tipsAxygen14-222-692/14-222-723/14-222-869Consider using low retention tips if possible.
Three-Dimensional ShakerSCILOGEXSK-D3309-ProLow speed.
Tissue Flotation Water BathKEDEEKD-P
Triton X-100VWR92046-34-9
Trypan BlueGibco 15250061
TryPLEGibco12605028
TTF1 Recombinant Monoclonal AntibodyHUABIO HA720067

المراجع

  1. Huch, M., Koo, B. K. Modeling mouse and human development using organoid cultures. Development. , (2015).
  2. Hofer, M., Lutolf, M. P. Engineering organoids. Nat Rev Mater. , (2021).
  3. Kim, M., et al. Patient-derived lung cancer organoids as in vitro cancer models for therapeutic screening. Nat Commun. , (2019).
  4. Al Shihabi, A., et al. Personalized chordoma organoids for drug discovery studies. Sci Adv. , (2022).
  5. Clevers, H. Modeling development and disease with organoids. Cell. , (2016).
  6. Van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. , (2015).
  7. Gao, D., et al. Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer. Cell. , (2014).
  8. Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. , (2015).
  9. Yan, H. H. N., et al. A comprehensive human gastric cancer organoid biobank captures tumor subtype heterogeneity and enables therapeutic screening. Cell Stem Cell. , (2018).
  10. Guan, Y., et al. A human multi-lineage hepatic organoid model for liver fibrosis. Nat Commun. , (2021).
  11. Roos, F. J. M., et al. Human branching cholangiocyte organoids recapitulate functional bile duct formation. Cell Stem Cell. , (2022).
  12. Guillen, K. P., et al. A human breast cancer-derived xenograft and organoid platform for drug discovery and precision oncology. Nat Cancer. , (2022).
  13. Dijkstra, K. K., et al. Challenges in establishing pure lung cancer organoids limit their utility for personalized medicine. Cell Rep. , (2020).
  14. Xu, Z., et al. Establishment of novel colorectal cancer organoid model based on tumor microenvironment analysis. Life Med. , (2024).
  15. Xia, H., et al. Identification and isolation of cancer stem cells from A549 cells. Zhongguo Fei Ai Za Zhi. , (2013).
  16. Nakata, J., Whittall, I., Russo, M. G., Su, S., Friedberg, J. Systematic review of lung cancer with breast metastasis. J Thorac Dis. , (2025).
  17. Kumari, P., Dash, S., Samanta, D. E-cadherin a potential biomarker in cancer and a therapeutic target. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. , (2025).
  18. Yun, W., et al. Tumor organoids may be more suitable for clinical personalized chemotherapeutic drug screening in lung adenocarcinoma. Front Cell Dev Biol. , (2025).
  19. Monleón-Guinot, I., et al. Morphological characterization of human lung cancer organoids cultured in type I collagen hydrogels a histological approach. Int J Mol Sci. , (2023).
  20. Sachs, N., et al. Long-term expanding human airway organoids for disease modeling. EMBO J. , (2019).
  21. Liu, Y., et al. Modeling lung adenocarcinoma metastases using patient-derived organoids. Cell Rep Med. , (2024).
  22. Peng, K., et al. HIF-1α promotes kidney organoid vascularization and applications in disease modeling. Stem Cell Res Ther. , (2023).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

عضويات الخطوط الخلويةخلايا A549زراعة الخلايا ثلاثية الأبعادالتضمين في الماتريجيل (Matrigel)تكوين العضوياتصبغ التألق المناعيصبغ الهيماتوكسيلين والإيوسينتعبير مؤشرات الورم
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.