يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

التأثيرات المسكنة والمضادة للالتهاب لعامل طلاء شيوشان جينلوهان وآلياته عبر الجلد

231 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/70480

⸱

أبريل 30, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Qingdao Academy of Chinese Medicinal Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. Ltd, 4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Laboratory of Epigenetics and Immunology, West China Institute of Women and Children's Health, NHC Key Laboratory of Chronobiology, Department of Obstetric and Pediatric, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children of MOE, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Second University Hospital, Sichuan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تقدم هذه الدراسة نهجا متكاملا لتقييم التأثيرات المسكنة والمضادة للالتهابات لعامل الطلاء المسكن للألم شوشان جينلوهان. كانت التأثيرات تعتمد على المنطقة والزمن، وحدد التحليل عبر الجلد البنزويلاكونين كمكون رئيسي يتغلغل مع إفراز متحكم فيه بالانتشار.

الملخص

تستخدم مستحضرات الطب الصيني التقليدي الموضعي (TCM) على نطاق واسع لإدارة الحالات الالتهابية والمرتبطة بالألم لأنها توفر تأثيرات علاجية موضعية مع تقليل التفاعلات السلبية الجهازية المحتملة. ومع ذلك، لا تزال الخصائص الدوائية والآليات عبر الجلد الكامنة وراء العديد من التركيبات المطبقة سريريا غير موصوفة بشكل كاف. يوصف عامل الطلاء المسكن للألم شيوشان جينلوهان (XJCA)، وهو تركيبة طبية تبتية، عادة لعلاج الألم الالتهابي، لكن لم يتم تقييم تأثير منطقة التطبيق، ومدة التأثير، والمساهمات النسبية بين التأثيرات المحلية مقابل الجهازية بشكل منهجي. تؤسس هذه الدراسة إطارا منهجيا متكاملا في الجسم الحي–في المختبر لدراسة هذه المعايير. تم استخدام نماذج حيوانية مكملة متعددة لتقييم النشاط المسكن المركزي والمحيطي والاستجابات الالتهابية الحادة، مما أتاح تقييم التأثيرات الزمنية والمحلية مقابل النظامية. بالتوازي، تم استخدام نظام خلية انتشار فرانز مع كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء – مطيافية الكتلة المتتالية (UPLC-MS/MS) لتوصيف حركية الامتصاص عبر الجلد لقلويين رئيسيين، البنزويلاكونين والأكونيتين. أظهر XJCA تأثيرات كبيرة في مسكنات الألم ومضادات الالتهاب تعتمد على المنطقة والوقت، وكانت مناطق التطبيق الأكبر مرتبطة بمساهمة جهازية أكبر في فعالية المسكنات. كشف تحليل الحركة عبر الجلد أن البنزويلاكونين أظهر تدفقا في الحالة المستقرة أعلى بكثير وتبع الإفراج المنظم بالانتشار بما يتوافق مع نموذج هيغوتشي، في حين أظهر الأكونيتين نفاذية أقل وملف إطلاق أكثر تعقيدا. تربط هذه النتائج سلوك التوصيل عبر الجلد بالنتائج الدوائية الملحوظة، وتوفر إطارا منظما لتقييم وتحسين تركيبات الطب الصيني التقليدي الموضعية.

المقدمة

الالتهاب والألم هما استجابات فسيولوجية ومرضية مترابطة تلعب دورا رئيسيا في دفاع الجسم ضد الإصابة والعدوى1. ومع ذلك، فإن الالتهاب والألم المستمر أو المفرط، مثل التهاب المفاصل العظمي، أو التهاب المفاصل الروماتويدي، أو الألم بعد الصدمة، يمكن أن يؤدي إلى تلف الأنسجة الذي قد يؤثر بشكل خطير على الوظائف البدنية والصحة النفسيةللمرضى. حاليا، تعتمد العلاجات السريرية للالتهاب والألم بشكل رئيسي على الأدوية المضادة للالتهاب غير الستيرويدية (NSAIDs) (مثل ديكلوفيناك، الإيبوبروفين) والأفيونات. بينما تستخدم مضادات الالتهاب غير الستيرويدية على نطاق واسع لتأثيراتها المضادة للالتهاب والمسكنات، غالبا ما تسبب الإعطاء الفموي تهيج الجهاز الهضمي، وتلف الكلى، ومخاطر القلب والأوعية الدموية. الأفيونات، رغم كونها مسكنة قوية للألم، ترتبط بالإدمان، واكتئاب التنفس، وآثار جانبية شديدة أخرى 5,6. وبالتالي، هناك حاجة سريرية متزايدة لبدائل أكثر أمانا. التحضيرات الموضعية، التي توصل الأدوية مباشرة إلى موقع العمل، تقدم حلا استراتيجيا للتخفيف من هذه الآثار الجانبية الجهازية.7. ومع ذلك، فإن فعاليتها تعتمد بشكل كبير على قدرة الدواء على تجاوز حاجز الجلد، وهو عامل يمكن أن يحد من قابلية ترجمة النتائج قبل السريرية، خاصة للجزيئات الأكبر أو تلك التي تعاني من ضعف حب الدهون8،9. لذلك، أصبح تطوير علاجات بديلة آمنة وفعالة، خاصة التحضيرات الموضعية ذات التأثير الموضعي والتعرض الجهازي الأدنى، محور بحث في علم الأدوية.

تمتلك مستحضرات طب الصيني الصيني الصيني الموضعية تاريخا طويلا في الاستخدام لعلاج الالتهاب والألم. تشمل مزاياها تأثيرا مباشرا على موقع الآفات، تقليل الآثار الجانبية الجهازية،وإطلاق الدواء لفترة أطول. XJCA هو جل لتكوين أفلام الطب الصيني التقليدي يستخدم سريريا ويتكون من عدة مكونات عشبية. يستخدم على نطاق واسع في الصين لتخفيف الألم والالتهاب الناتج عن التهاب المفاصل العظمي، وإصابات الأنسجة الرخوة، والألم العصبي 12,13,14. ومع ذلك، فإن الأدلة العلمية على فعاليته محدودة، ولا تزال الخصائص الدوائية الرئيسية مثل العلاقة بين منطقة التطبيق والفعالية، ومسار العمل، والفرق بين التأثيرات المحلية والجهازية، غير واضحة. تعيق هذه الفجوات التطبيق السريري العقلاني ل XJCA.

الامتصاص عبر الجلد هو عامل رئيسي يؤثر على التأثير العلاجي للمستحضرات الموضعية. باعتباره الحاجز الأساسي، يقيد الجلد اختراق الأدوية إلى الدورة الدموية الجهازية أو الأنسجة المحلية15,16. بالنسبة ل XJCA، فإن فهم خصائص الامتصاص عبر الجلد لمكوناته الفعالة أمر بالغ الأهمية لتوضيح تأثيراته الدوائية وتحسين شكل الجرعة. أظهرت الدراسات السابقة على مستحضرات الطب الصيني التقليدي أن القلويدات (مثل مشتقات الأكونيتين) هي مكونات نشطة مهمة ذات تأثيرات مضادة للالتهاب ومسكنات الألم17,18. البنزويلاكونين والأكونيتين هما قلويدان رئيسيان في XJCA19,20، وقد يؤثر محتواهما وسلوكهما عبر الجلد مباشرة على فعالية XJCA. ومع ذلك، لا توجد تقارير عن امتصاص هذين المكونين عبر الجلد في XJCA، ولا عن خصائصهما الحركية وآليات الإطلاق بينهما.

لسد هذه الفجوة البحثية، تهدف هذه الدراسة إلى تطوير والتحقق من صحة إطار منهجي منهجي لتقييم صيغ الطب الصيني التقليدي الموضعية الحديثة، باستخدام XJCA كدراسة حالة. كان الهدف هو إظهار نهج تقييم متكامل يشمل: (1) نموذج (نماذج ديناميكية دوائية في الجسم الحي) مصمم لتحليل تأثيرات موقع التطبيق، ومدة العلاج، والتوزيع المحلي مقابل الجهازي للدواء على الفعالية؛ و(2) تقييم حركي عبر الجلد في المختبر باستخدام خلايا فرانز الانتشار وUPLC-MS/MS لقياس امتصاص وإطلاق القلويات النشطة الرئيسية عن طريق الجلد. افترضنا أن فعالية XJCA في الجسم الحي، وخاصة اعتمادها على المنطقة والزمن، تعتمد بشكل أساسي على حركية مكوناته الرئيسية عبر الجلد الداخلي. من خلال ربط معلمات الفعالية في الجسم الحي ببيانات الحركة المقابلة في المختبر، يوفر هذا النهج فهما ميكانيكيا لكيفية تأثير التوصيل عبر الجلد على الديناميكا الدوائية لتحضيرات الطب الصيني التقليدي الموضعية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة وفقا لإرشادات المراجعة الأخلاقية لرفاهية الحيوانات المخبرية (GB/T 35892-2018) والآراء التوجيهية حول المعاملة الإنسانية للحيوانات المختبرية. تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوانات التجريبية في جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة) TCM-09-315).

الحيوانات التجريبية والمساكن
تم استخدام فئران كونمينغ الخالية من مسببات الأمراض المحددة (SPF) (20~25 جم، ذكر/إناث = 1:1) وفئران SPF سبراج-داولي (SD) (180~200 جم). تم إيواء الحيوانات في ظروف مضبوطة: دورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة، ودرجة حرارة 23 ± 2 درجة مئوية، ورطوبة 60٪ ± 5٪، مع وصول مجاني إلى الطعام والماء. لتقييم الملف المسكن ومضاد الالتهاب ل XJCA بشكل شامل، تم استخدام مجموعة من نماذج الفئران في الجسم الحي. قام اختبار الصفيحة الساخنة بتقييم عتبة الألم التي يتم توسيط مركزها؛ وقد ميز اختبار الفورمالين بين الألم العصبي (المرحلة الأولى) والألم الالتهابي (المرحلة الثانية)؛ قيم اختبار وذمة الأذن الناتجة عن الزيلين النشاط المضاد للالتهابات الحاد؛ واختبار الالتفاف الناتج عن حمض الخليك نمذج الألم الالتهابي العضوي. لاحظ أن XJCA هو جل جاهز لتشكيل الفيلم. لا يتطلب الأمر تحضيرا إضافيا قبل التقديم.

تأثير منطقة التطبيق على فعالية المسكنات ومضادات الالتهاب
تم تقسيم فئران كونمينغ SPF عشوائيا إلى 4 مجموعات (ذكر/إناث = 1:1): مجموعة ضابطة طبيعية (NC)، مجموعة XJCA ذات مساحة صغيرة (1×1 سم، 1 سم2) (XJCASAAG)، مجموعة XJCA متوسطة المساحة (1×2 سم، 2 سم2) (XJCAMAAG)، ومجموعة XJCA ذات المساحة الكبيرة (1.5×2 سم، 3 سم2) (XJCALAAG). تم تطبيق XJCA بمعدل 0.015 جم/سممربع (0.15 مل لكل فأرة) لمدة 7 أيام متتالية. تلقت مجموعة NC محلول ملحي طبيعي بنفس الطريقة. بعد 120 دقيقة من آخر إعطاء، تم تقييم فعالية المسكنات باستخدام اختبارات الصفيحة الساخنة والفورمالين.

في اختبار الصفيحة الساخنة، تم فحص الفئران مسبقا بوضعها على صفيحة ساخنة بدرجة حرارة ثابتة عند 55 ± 0.5 درجة مئوية. تم تسجيل زمن انسحاب الكف (PWL)، ولم يتم اختيار سوى الفئران التي كان لديها PWL الأساسي بين 5 و30 ثانية (n = 40، ذكر/أنثى = 1:1). بعد 7 أيام من العلاج، تم قياس PWL بفواصل زمنية 30 دقيقة 3 مرات، وتم تسجيل القيمة المتوسطة. تم تطبيق زمن قطع 60 ثانية لمنع تلف الأنسجة.

في اختبار الفورمالين (n = 40، ذكر/أنثى = 1:1)، بعد 7 أيام من العلاج، تم حقن 1٪ فورمالين (1 مل/كغ) تحت الجلد في الكف الخلفي الأيمن. مباشرة بعد الحقن، وضعت الفئران في غرف مراقبة فردية. تم تسجيل سلوكيات مرتبطة بالألم (اللعق، الرفع، والهروب) خلال المرحلة الأولى (0–10 دقائق، ألم عصبي) والمرحلة الثانية (15–30 دقيقة، ألم التهابي). تم تأكيد نجاح الحقن بتورم واضح في الكف.

تقييم فعالية المسكنات ومضادات الالتهاب حسب الوقت
تم تقسيم 120 فأر كونمينغ SPF عشوائيا إلى ثلاث مجموعات (n = 10 لكل نقطة زمنية، ذكر/أنثى = 1:1): مجموعة ضابطة نموذجية (MC)، مجموعة XJCALAAG (1.5×2 سم، 3 سم2)، ومجموعة ضابطة إيجابية لديكلوفيناك ديثيل أمين إيمولجل (DDE). تم تطبيق XJCA (0.015 جم/سم 2، 0.15 مل/فأرة) وDDE (0.016 جم/سم مربع، 0.15 مل/فأرة) لمدة 7 أيام متتالية، بينما حصلت مجموعة MC على محلول ملحي طبيعي. بعد 2 و4 و6 و8 ساعات من آخر إعطاء، أجريت كل من اختبار وذمة الأذن الناتجة عن الزيلين واختبار الالتفاف الناتج عن حمض الخليك.

في اختبار وذمة الأذن الناتجة عن الزيلين، تم تطبيق 30 ميكرولتر من الزيلين على جانبي الأذن اليمنى (تلقت مجموعة MC محلول ملحي طبيعي)، وبعد 60 دقيقة، تم تخدير الفئران بالبنتوباربيتال الصوديوم (30 ملغ/كجم، i.p.) وتم التضحية بها؛ ثم تم ثقب أقراص الأذن (قطرها 8 مم) ووزنها. تم حساب درجة وذمة الأذن كوزن قرص الأذن اليمنى مطروحا منها وزن قرص الأذن اليسرى، وتم تحديد معدل تثبيط الوذمة ك [(درجة وذمة مجموعة MC – درجة وذمة مجموعة العلاج) / درجة وذمة مجموعة MC] × 100٪. تم أخذ ثقب أذن دائري (قطر 8 مم) من نفس الموضع على الأذنين اليسرى واليمنى، ووزن نسيج الأذن باستخدام ميزان إلكتروني.

في اختبار الالتفاف الناتج عن حمض الخليك، تم حقن محلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.6٪ (0.1 مل /10 جرام) داخل الصفاق، وتم تسجيل أوقات استجابة الالتفاف (امتداد الطرف الخلفي، انقباض البطن، والتواء الجذع) خلال 20 دقيقة. مباشرة بعد حقن حمض الخليك، وضعت الفئران في أقفاص مراقبة فردية. تم حساب معدل تثبيط الالتفاف وفقا للصيغة التالية: [(أوقات التلوي في مجموعة MC – أوقات التلوي في مجموعة العلاج)/أوقات التلوي في مجموعة MC]×100٪.

مقارنة بين فعالية مسكنات الألم المحلية مقابل الجهازية
لفصل المسكنات المقيدة محليا عن التأثيرات الناتجة عن الامتصاص عبر الجلد والتوزيع الجهازي، قمنا بتصور نظامين للإعطاء بتعريفات تشغيلية واضحة. يشير التأثير الموضعي إلى تأثير الدواء في موقع محدد في الأنسجة مباشرة تحت أو مجاورة لموقع التطبيق، مع مساهمة قليلة من الدواء المنتشر. أما التأثير الجهازي، فيشير إلى تسكين الألم الذي يتوسط دواء دخل الدم ويعمل في مواقع مركزية أو طرفية بعيدة عن موقع التطبيق. اختبرنا بشكل مباشر الفرضية التي تقول إن زيادة مساحة التطبيق تؤدي إلى امتصاص أكثر جهازيا للدواء، وبالتالي ينتج تأثيرات مسكنة أكبر من تلك الناتجة عن الفعل المحلي فقط، من خلال الحفاظ على الجرعة لكل وحدة مساحة ثابتة مع تغيير إجمالي المساحة المعالجة. يتيح هذا التصميم قياس كيفية تحديد الحجم المكاني للتعرض للتوفر البيولوجي النظامي والمساهمة الناتجة للتأثيرات المنهجية.

تم تقسيم ثلاثين فأر كونمينغ ب SPF (مع PWL 5~30 ثانية في اختبار الصفيحة الساخنة) عشوائيا إلى ثلاث مجموعات (n = 10 لكل مجموعة، ذكر/أنثى = 1:1): مجموعة NC، مجموعة الأدوية الموضعية (TMG)، ومجموعة الأدوية الجهازية (SMG). تم إعطاء XJCA بجرعة ثابتة 0.015 جم/سممربع، بحجم 0.15 مل، لمدة 7 أيام متتالية.

بالنسبة للفتغ السفكي، تم تطبيق التركيبة على منطقة محددة من جلد الطرف الخلفي. بالنسبة للرشاشة الرشاشة الصغيرة، ولمحاكاة زيادة الامتصاص الجهازي، تم تطبيق التركيبة على منطقة مشتركة تشمل الأطراف الخلفية وجلد الظهر، مع الحفاظ على نفس الجرعة لكل وحدة مساحة (0.015 جم/سممربع). ضمن هذا التصميم أن الكمية الإجمالية ل XJCA المطبقة على مجموعة SMG كانت أعلى نسبيا من مجموعة TMG، مما سهل إمكانيات أكبر لامتصاص عبر الجلد في الدورة الدموية الجهازية. بعد 120 دقيقة من آخر إعطاء، تم قياس PWL باختبار الصفيحة الساخنة (3 مرات بفواصل 30 دقيقة، مع تسجيل متوسط القيمة). من خلال مقارنة TMG (التأثير المحلي السائد) و SMG (التأثير المحلي + الجهازي)، يمكننا تحليل مساهمة توزيع الأدوية الجهازي في تخفيف الألم بشكل عام.

دراسة الامتصاص عبر الجلد في المختبرات
استخدمت الدراسة خلايا انتشار فرانز ذات مساحة انتشار فعالة تبلغ 1.76625 سممربع. خلية انتشار فرانز هي المعيار الذهبي لتقييم الامتصاص عبر الجلد. يتكون النظام من حجرة متبرع (تحتوي على تركيبة الاختبار)، وحجرة مستقبلات (مملوءة بعازلة فسيولوجية)، وجلد مقطوع مركب بينهما. تنتشر جزيئات الدواء عبر الجلد إلى محلول المستقبل، وتجمع عينات مع مرور الوقت لقياس حركية النفاذ. تم استئصال جلد البطن من فئران SD المخدرة بصوديوم بنتوباربيتال (30 ملغ/كجم، i.p.) بعناية عن طريق إزالة الدهون تحت الجلد، وشطفها بمحلول ملحي عادي، ونقعها في محلول ملحي طبيعي لمدة 24 ساعة. من الضروري حماية سلامة الطبقات القرنية. لا تمد أو تطوي أو تلمس سطح البشرة. تتأثر نفاذية الجلد بشكل كبير بحالة الترطيب. وقت الترطيب يعطي نتائج قابلة للتكرار.

كان الجلد المحضر مركبا بين حجرتي المتبرع والمستقبل، مع مواجهة الطبقة القرنية لمقصورة المتبرع. تلقى الجانب المتبرع 200 ميكرولتر من XJCA (ما يعادل 0.06 جرام من الدواء الخام)، بينما تم ملء حجرة المستقبل بمحلول استقبال بمقدار 15 مل (30٪ إيثانول: 70٪ PBS، تم تفريغه بواسطة الصوتية لمدة 15 دقيقة)، وحافظت على 32 ± 0.5 درجة مئوية تحت التحريك المغناطيسي المستمر عند 350 دورة في دقيقة واحدة. يجب إزالة الغازات من المحلول المستقبل عن طريق السونيك لمدة 15 دقيقة قبل الاستخدام لمنع تكون الفقاعات أثناء التجربة.

تم جمع عينات بحجم ملتر واحد من حجرة المستقبل عند 2، 4، 6، 8، 10، 12، 20، و24 ساعة، وفي كل مرة تم تعبئتها بحجم متساو من محلول استقبال طازج مسبق التسخين (32 درجة مئوية).

ملاحظة: يجب أن يكون المحلول البديل عند نفس درجة الحرارة لتجنب تقلبات درجة الحرارة التي قد تؤثر على حركية الانتشار. تم ترشيح العينات المجمعة عبر أغشية دقيقة مسامية بحجم 0.22 ميكرومتر ثم تم تحليلها لاحقا بواسطة UPLC-MS/MS خلال 24 ساعة. نظرا لعدم استقرار الأكونيتين، يجب تحليل العينات خلال 24 ساعة من الجمع، أو إضافة مثبتات. إذا لم يكن التحليل الفوري ممكنا، قم بتقسيم العينات وتخزينها عند -80 درجة مئوية، ولكن تحقق من استقرارها تحت هذه الظروف قبل المتابعة.

شروط UPLC-MS/MS
تم إجراء تحليل كروماتوغرافي باستخدام عمود Agilent ZORBAX SB-C18 (2.1 × 100 مم، 1.8 ميكرومتر) محفوظا عند 40 درجة مئوية، مع معدل تدفق 0.3 مل/دقيقة وحجم حقن 2 ميكرولتر. تكونت المرحلة المتحركة من أسيتيتريل (A) ومحلول أسيتات أمونيوم بسعة 0.1 مول/لتر يحتوي على 0.5 مل/لتر حمض الخليك الجليدي (B)، باستخدام البرنامج التدرج التالي: 0–5 دقائق (26٪–45٪ أمبير)، 5–7 دقائق (45٪–74٪ أمبير)، 7–10.1 دقيقة (74٪–90٪ أمستريح)، 10.1–12 دقيقة (90٪ أمستريح)، 12–12.1 دقيقة (90٪–26٪ أمستريح). و12.1–15 دقيقة (26٪ A).

تم إجراء الكشف الطيفي الكتلي باستخدام مصدر تأين الرش الكهربائي (ESI) في وضع الأيونات الموجب وتحت الإعدادات التالية: درجة حرارة غاز تجفيف 500 درجة مئوية، تدفق غاز تجفيف 5 لتر/دقيقة، ضغط جهاز التنشيح 50 رطل لكل بوصة مربعة، درجة حرارة غاز الغلاف 500 درجة مئوية، تدفق غاز الغلاف 11 لتر/دقيقة، جهد الشعيرات الدموية 5500 فولت، وجمع البيانات في وضع مراقبة التفاعلات المتعددة (MRM). تم ضبط انتقالات ومعلمات MRM كما يلي: الأكونيتين (m/z 646.6→586.4، زمن التوقف 100 مللي ثانية، DP 102.930 فولت، CE 49.810 فولت) والبنزويلاكونين (m/z 604.4→105.1، زمن التوقف 100 مللي ثانية، DP 105.120 فولت، CE 74.270 فولت).

التحقق من صحة الطريقة وتحليل البيانات
تم إجراء التحقق من صحة الطريقة من خلال تقييم النوعية، الخطية، الدقة، الاستقرار، والتكرار. تم التحقق من الخصوصية من خلال تحليل محلول الاستقبال الفارغ، والمحلول القياسي، ومحلول العينة لتأكيد عدم وجود تداخل من المواد الداخلية. للخطية، تم بناء منحنيات قياسية عن طريق رسم مساحة الذروة مقابل التركيز باستخدام طريقة الانحدار للمربعات الصغرى (أقل مربعات). تم تقييم الدقة من خلال اختبارات خلال اليوم (6 نسخ) وبين اليوم (تكرارين على مدى 3 أيام) باستخدام محلول قياسي 50 نانوغرام/مل، معبرا عنه كانحراف معياري نسبي (RSD) لمناطق الذروة. تم تقييم الاستقرار من خلال تحديد مساحة الزاوية القصوى للحلول العينة عند 0، 2، 4، 6، 8، 12، 16، 18، و24 ساعة. تم تأكيد التكرار بقياس مساحة الذروة RSD من ست تحضيرات عينة متوازية. تم تحضير المحاليل القياسية من خلال وزن دقيق 2.5 ملغ لكل من البنزويلاكونين والأكونيتين، ثم إذابتهما في خليط إيزوبروبانول:ثنائي كلوروميثان (1:1) لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 25 ميكروغرام/مل. لحل الاختبار، تم نقل كمية مناسبة من العينة إلى أنبوب طرد مركزي وخضوعها للطرد المركزي عالي السرعة عند 12,000 x g لمدة 5 دقائق، وبعدها تم جمع المادة الفائقة للتحليل.

تم حساب مقدار النفاذية التراكمية (Qn، ng/cm2) في كل نقطة زمنية باستخدام الصيغة التالية:

Qn = [(Cn × V + ΣCi × Vi) / A]

حيث:
س: كمية النفاذية التراكمية عند وقت العينة n (ng/cm2).
Cn: تركيز الدواء في المحلول المستقبل عند وقت أخذ العينة n (ng/mL).
جi: تركيز الدواء في المحلول المستقبل عند وقت أخذ العينة من الألف (ng/mL).
V: حجم محلول الاستقبال (15 مل).
Vi: حجم أخذ العينة عند كل نقطة زمنية (1 مل).
ج: منطقة الانتشار الفعالة لخلية انتشار فرانز (1.76625 سممربع).

تم رسم منحنى مقدار النفاذ-الزمن التراكمي (Q-t) بحيث يكون Qn كإحداثي والزمن (t, h) كالحقل. تم تخضع الجزء الخطي من منحنى Q-t لانحدار خطي، وتم اعتبار ميل معادلة الانحدار كتدفق عبر الجلد في الحالة المستقرة (Js, ng/cm2/h).

تم تركيب منحنى Q-t على نموذج الرتبة الصفرية (Q = kt + b)، ونموذج الرتبة الأولى (ln(Q max - Q) = -kt + lnQmax)، ونموذج هيغوتشي (Q = kt1/2 + b)، حيث Qmax هو أقصى مقدار نفاذية تراكمية، وk هو ثابت المعدل، وb هو التقاطع. تم تقييم الملاءمة باستخدام معامل الارتباط (R2)، مع R2 أعلى مما يشير إلى توافق أفضل.

التحليل الإحصائي
يتم توفير البيانات الخام لكل الحيوان لجميع اختبارات السلوك في الجسم الحي وبيانات الكروماتوغرافيا الخام UPLC-MS/MS لدراسة النفاذية في المختبر كملفات تكميلية 1 و2 على التوالي. تم تقديم جميع البيانات التجريبية كمتوسط ± انحراف معياري (x̄ ± SD). تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام GraphPad Prism 9.0. تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) يليه اختبار دانيت متعدد المقارنات لمقارنة الفروق الجماعية. تم اعتبار p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

اعتماد فعالية المسكنات ومضادات الالتهاب على منطقة التطبيق
أظهر XJCA علاقة إيجابية بين منطقة التطبيق وفعالية المسكن/الالتهابات في نماذج الفئران، بعد 7 أيام متتالية من الإعطاء بجرعة ثابتة 0.03 جرام/سممربع. في اختبار الصفيحة الساخنة، أظهرت مجموعة NC أقصر متوسط PWL، مما يشير إلى أقوى استجابة ألم. على النقيض من ذلك، أظهرت مجموعات معالجة XJCA تمديدا يعتمد على المنطقة ل PWL: أظهرت مجموعات XJCASAAG وXJCAMAAG وXJCALAAG جميعها فروقا ذات دلالة كبيرة مقارنة بمجموعات NC...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الالتهاب والألم هما عمليان مرضيان معقدان يتضمنان عدة مسارات إشارات. أصبحت التحضيرات الموضعية مفضلة بشكل متزايد لأنها تستطيع التأثير بدقة على الآفات وتقليل التفاعلات السلبية الجهازية21,22. نجحت هذه الدراسة في تأسيس والتحقق من وجود إطار منهجي منهجي لتقييم صيغ الطب الصيني التقليدي الموضعية، باستخدام XJCA كحالة توضيحية. أثبت النهج المتكامل، الذي يجمع بين نماذج الحيوانات المصممة استراتيجيا في الجسم الحي والتحليل الكمي عبر الجلد في الم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

شكر وتقدير

وقد دعمت هذه الدراسة برنامج علماء تايشان في مقاطعة شاندونغ (tsqn20250730)، وجامعة سيتشوان-إنتربرايز (شركة تبت روديولا للأدوية القابضة، المحدودة). مشروع التعاون (24H0764, 24H1043) وبرنامج بيان كوي سكولار في جامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.22 μ مرشحات الغشاء الدقيقة المسامية mميليبورسيغما، برلنغتون، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكيةGSWP04700
حمض الخليكCNW تكنولوجيز GmbHN3800060درجة الكروماتوغرافيا
الأسيتونيتريلميرك KGaAI1241129242درجة مطيافية الكتلة
أكونيتينشركة تشنغدو ليميتيان لتقنية الأدوية المحدودة.DSTDW00060220 ملغ، &GE; نقاء 98٪
عمود Agilent ZORBAX SB-C18أجيلينت2.1 &00; 100 مم، 1.8 & mu; m
أسيتات الأمونيومالكاشف العامP1492146الدرجة التحليلية
البنزويلاكونينشركة تشنغدو ليميتيان لتقنية الأدوية المحدودة.DSTDB00550220 ملغ، &GE; نقاء 98٪
ثنائي كلوروميثانشركة CINC للكيماويات المحدودة.P3048495الدرجة التحليلية
ديكلوفيناك ديثيلامين إيمولجل (DDE)شركة نوفارتيس فارما بكين المحدودة.H20020176
محلول الفورمالينشركة سينوفارم للكاشف الكيميائي المحدودة10010061
خلايا انتشار فرانزشركة شنتشن رويتوو للأدوات التحليلية المحدودة.RT806
برنامج GraphPad Prism 9.0شركة جراف باد سوفتويرالإصدار 9.0
إيزوبوبانولالكاشف العام0530240601Dدرجة الكروماتوغرافيا
محلول ملحي عاديشركة سينوفارم للكاشف الكيميائي المحدودةSY15931
الصوديوم البنتوباربيتالسيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكيةP3761
الماء المنقىشركة قوانغتشو واتسون للأغذية والمشروبات، المحدودة.رقم الدفعة 20240717C
فئران كونمينغ SPFشركة تشنغدو إنسويل للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.الترخيص: SYXK (سيتشوان) 2019-049
فئران SPF سبراج-داوليشركة بكين سبايفو للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.الرخصة: SYXK (بكين) 2024-0010
نظام UPLC-MS/MSشركة أجيلينت تكنولوجيز، سانتا كلارا، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةأجيلينت 1260 إنفينيتي
عامل الطلاء المسكن للألم من شوشان جينلوهان (XJCA)شركة تبت للأدوية المحدودة.Z20010095
زيلينشركة سينوفارم للكاشف الكيميائي المحدودة10023418

المراجع

  1. Kang, S. Y., Ryu, Y. Editorial: Chronic inflammation and related diseases: From mechanisms to therapies. Int J Mol Sci. 24 (13), (2023).
  2. Liu, Y., et al. The analgesic effects of Yu-Xue-Bi tablet (YXB) on mice with inflammatory pain by regulating LXA4-FPR2-TRPA1 pathway. Chin Med. 19 (1), 104(2024).
  3. Lara, C. O., Burgos, C. F., Moraga-Cid, G., Carrasco, M. A., Yévenes, G. E. Pentameric ligand-gated ion channels as pharmacological targets against chronic pain. Front Pharmacol. 11, 167(2020).
  4. Yang, E. L., et al. Abietane-type diterpenoids from Nepeta bracteata Benth and their anti-inflammatory activity. Front Chem. 10, 944972(2022).
  5. Allen, H. N., Hestehave, S., Duran, P., Nelson, T. S., Khanna, R. Uncoupling the CRMP2-Ca(V)2.2 interaction reduces pain-like behavior in a preclinical osteoarthritis model. bioRxiv. , (2024).
  6. Ochandarena, N. E., Niehaus, J. K., Tassou, A., Scherrer, G. Cell-type specific molecular architecture for mu opioid receptor function in pain and addiction circuits. Neuropharmacology. 238, 109597(2023).
  7. Singh, S., Awasthi, R. Berberine HCl and diacerein loaded dual delivery transferosomes: Formulation and optimization using Box–Behnken design. ADMET DMPK. 12 (3), 553-580 (2024).
  8. Madawi, E. A., et al. Polymeric nanoparticles as tunable nanocarriers for targeted delivery of drugs to skin tissues for treatment of topical skin diseases. Pharmaceutics. 15 (2), (2023).
  9. Li, L., et al. Evaluation of physical and chemical modifications to drug reservoirs for stimuli-responsive microneedles. Drug Deliv Transl Res. 15 (7), 2390-2414 (2025).
  10. Wang, Q., et al. Naturally derived anti-inflammatory compounds from Chinese medicinal plants. J Ethnopharmacol. 146 (1), 9-39 (2013).
  11. Kheoane, P. S., et al. Anti-inflammatory effects of orally and topically administered nanoformulations of Malva parviflora root extracts, and Prunus persica and Cupressus sempervirens exudates. Pharmacol Res Mod Chin Med. 17, 100685(2025).
  12. Zhenping, W., Yanxiu, L., Kun, G., Lei, Z. Clinical observation of Xueshan Jinluohan plastic for relieving pain in the treatment of 66 patients with osteoarthritis. J Clin Med Pract. , (2013).
  13. Kui, S., Guiming, L. Xueshan Jinluohan odynolysis plastics for postherpetic neuralgia: Observation of clinical efficacy. China Pharm. , (2007).
  14. Hai-Yan, W., Lei, Z., Ya-Fang, Z., Xue, J. Clinical observation on Xueshan Jinluohan analgesic film in treating 66 patients with rheumatoid arthritis with syndrome of blood stasis and obstructive arthralgia. Tianjin J Tradit Chin Med. , (2014).
  15. Zhao, L., et al. Topical drug delivery strategies for enhancing drug effectiveness by skin barriers, drug delivery systems and individualized dosing. Front Pharmacol. 14, 1333986(2023).
  16. Kathe, K., Kathpalia, H. Film forming systems for topical and transdermal drug delivery. Asian J Pharm Sci. 12 (6), 487-497 (2017).
  17. Xue, M., et al. Illumination on chemical compounds from Qufeng Zhitong capsule and its potential pharmacological mechanism against rheumatoid arthritis based on UHPLC/Q-Orbitrap-MS combined with network pharmacology analysis. Int J Anal Chem. 2022, 7863435(2022).
  18. Zhao, P., et al. Aconitine and its derivatives: Bioactivities, structure-activity relationships and preliminary molecular mechanisms. Front Chem. 12, 1339364(2024).
  19. Ling-Li, L., Lan-Xia, W., Ling, N., Xi, Y. Determination of safflower glucoside I and gentiopicrin in Xueshan Jinluohan pain-relief liniment by HPLC. Chin Tradit Pat Med. 34 (3), 499-502 (2012).
  20. Xiang, G., Guo, S., Wu, C., Wang, S., Zhang, Y. Deciphering the mysteries of Aconitum pendulum: Unique identification of various processed products and characteristic chemical markers. Arab J Chem. 17 (2), 105585(2024).
  21. Yang, C., et al. Development and evaluation of a Chinese herbal gel for analgesic and anti-inflammatory effects. Pak J Pharm Sci. 36 (4 Suppl), 1261-1269 (2023).
  22. Zhang, W., et al. Nicotine in inflammatory diseases: Anti-inflammatory and pro-inflammatory effects. Front Immunol. 13, 826889(2022).
  23. Zhan, M. X., et al. Ulinastatin exhibits antinociception in rat models of acute somatic and visceral pain through inhibiting the local and central inflammation. J Pain Res. 14, 1201-1214 (2021).
  24. Liu, C., et al. Investigation of the permeation enhancer strategy on benzoylaconine transdermal patch: The relationship between transdermal enhancement strength and physicochemical properties of permeation enhancer. Eur J Pharm Sci. 138, 105009(2019).
  25. Jiang, Z., Liu, S., Li, Y., Yuan, S. Study on the absorption mechanism of glucocorticoids in the stratum corneum. Colloids Surf B Biointerfaces. 256 (Pt 1), 114984(2025).
  26. Fabbrocini, G., et al. Skin needling to enhance depigmenting serum penetration in the treatment of melasma. Plast Surg Int. 2011, 158241(2011).
  27. Costa, R., Costa Lima, S. A., Gameiro, P., Reis, S. On the development of a cutaneous flavonoid delivery system: Advances and limitations. Antioxidants (Basel). 10 (9), (2021).
  28. Li, Z., et al. Analgesic and neuroprotective effects of Baimai ointment on diabetic peripheral neuropathy. J Ethnopharmacol. 292, 115122(2022).
  29. Lei, Y., et al. Formulation and evaluation of a drug-in-adhesive patch for transdermal delivery of colchicine. Pharmaceutics. 14 (10), (2022).
  30. Sirisha Mulukuri, N. V. L., et al. Statistical modeling, optimization and characterization of andrographolide loaded emulgel for its therapeutic application on skin cancer through enhancing its skin permeability. Saudi Pharm J. 32 (6), 102068(2024).
  31. Cohen, E., Lee, Y. C. A mechanism-based approach to the management of osteoarthritis pain. Curr Osteoporos Rep. 13 (6), 399-406 (2015).
  32. Boehnke, K. F., Gagnier, J. J., Matallana, L., Williams, D. A. Cannabidiol product dosing and decision-making in a national survey of individuals with fibromyalgia. J Pain. 23 (1), 45-45 (2022).
  33. Pan, S. Y., et al. New perspectives on Chinese herbal medicine (Zhong-Yao) research and development. Evid Based Complement Alternat Med. 2011, 403709(2011).
  34. Sana, E., et al. Topical delivery of curcumin-loaded transfersomes gel ameliorated rheumatoid arthritis by inhibiting NF-κB pathway. Nanomedicine (Lond). 16 (10), 819-837 (2021).
  35. Ya-Nan, H., et al. New understanding of aconitine hydrolysis pathway: Isolation, identification and toxicity evaluation based on intermediate products. Arab J Chem. 15 (11), 104255(2022).
  36. Shakeel, F., et al. Investigating antiarthritic potential of nanostructured clove oil (Syzygium aromaticum) in FCA-induced arthritic rats: Pharmaceutical action and delivery strategies. Molecules. 26 (23), (2021).
  37. Zhou, C., et al. Benzoylaconine modulates LPS-induced responses through inhibition of toll-like receptor-mediated NF-κB and MAPK signaling in RAW264.7 cells. Inflammation. 44 (5), 2018-2032 (2021).
  38. Jin, X., et al. Aconitine – a promising candidate for treating cold and mechanical allodynia in cancer-induced bone pain. Biomed Pharmacother. 161, 114284(2023).
  39. Tao, H., et al. Pharmacokinetics and pharmacology of aminoalcohol-diterpenoid alkaloids from Aconitum species. J Ethnopharmacol. 301, 115726(2023).
  40. Teaima, M. H., et al. Enhanced transdermal delivery of bisoprolol hemifumarate via combined effect of iontophoresis and chemical enhancers: Ex vivo permeation/in vivo pharmacokinetic studies. Pharmaceutics. 13 (5), (2021).
  41. Liu, X., et al. The inhibition of PPARα protein degradation alleviates the cardiotoxicity of Tiebangchui by regulating fatty acid metabolism. J Ethnopharmacol. 348, 119838(2025).
  42. Abdella, S., Afinjuomo, F., Song, Y., Upton, R., Garg, S. Mucoadhesive buccal film of estradiol for hormonal replacement therapy: Development and in vivo performance prediction. Pharmaceutics. 14 (3), (2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.