التحفيز الكهربائي للأذن عبر الجلد مع محلول سنشي دينغتونغ خفف من الإصابات المرضية في الرحم والتغيرات المرتبطة بالالتهاب في نموذج الفئران لاضطراب الطمث الأولي مع ركود الطاقة وثبات الدم، مصحوبا بتغير تعبير mRNA ل PPAR-γ2 وCOX-2.
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
التحفيز الكهربائي للأذن عبر الجلد مع محلول سنشي دينغتونغ خفف من الإصابات المرضية في الرحم والتغيرات المرتبطة بالالتهاب في نموذج الفئران لاضطراب الطمث الأولي مع ركود الطاقة وثبات الدم، مصحوبا بتغير تعبير mRNA ل PPAR-γ2 وCOX-2.
يرتبط عسر الطمث الأولي مع ركود تشي ونمط سبات الدم بالتهاب وألم الرحم، وقد تسبب العلاجات الدوائية الحالية آثارا جانبية. قيمت هذه الدراسة التأثيرات العلاجية المشتركة للتحفيز الكهربائي عبر الجلد في نقطة الأذن (TEAP) ومحلول سونشي دينغتونغ (SDD) في نموذج فأر لركود الطاقة وعسر ستمثى الدم الأولي. تم تخصيص ستة وثلاثين أنثى من جرذ سبراج-داولي عشوائيا إلى مجموعات الفارغ، والنموذج، وSDD، وTEAP، وTEAP بالإضافة إلى SDD، والإيبوبروفين. تم تحفيز النموذج باستخدام تحسس البنزواتات الإستراديولية، وتحفيز الإجهاد المختلط بهيدروكلوريد الإبينفرين، وإعطاء الأوكسيتوسين. تلقت الفئران محلول ملحي طبيعي، أو SDD، أو إيبوبروفين، أو TEAP في نقاط أذن محددة لمدة سبعة أيام. تم فحص شكل الرحم من خلال صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين. تم قياس مستويات IL-1β وIL-6 وTNF-α وPGF2α وPGE2 في الرحم بواسطة ELISA، وتم قياس تعبير الرحم PPAR-γ2 وCOX-2 mRNA بواسطة PCR في الوقت الحقيقي. أظهرت الفئران النموذجية تدهورا في الظهارة في الرحم، وتسلل للعدلات، وزيادة في تعبير IL-1β، IL-6، TNF-α، PGF2α، وCOX-2، وانخفاضا في تعبير mRNA ل PGE2 وPPAR-γ2. عكس TEAP أو SDD وحده جزئيا هذه التغيرات المرضية والجزيئية، بينما أدى الجمع بين TEAP مع SDD إلى تحسينات أكثر وضوحا، مع تأثيرات مماثلة لتلك التي لوحظت في مجموعة الإيبوبروفين. تشير هذه النتائج إلى أن TEAP مع SDD يخفف من الإصابات المرضية الرحمية والتغيرات المرتبطة بالالتهاب في ركود الكي وتوقف الدم الأولي (QSBSPD)، وأن هذه التأثيرات مرتبطة بتنظيم تعبير mRNA في PPAR-γ2 وCOX-2.
عسر الطمث الأولي (PD)، المعروف أيضا بألم الدورة الشهرية الوظيفية، يتميز بحدوث عسر الطمث دون وجود أي مرض عضوي محدد داخل الأعضاء التناسلية1. غالبا ما تجد المريضات الإناث اللواتي يعانين من عسر الطمث الشديد أنفسهن غير قادرات على أداء المهام اليومية، مما يؤثر بشكل كبير على جودة حياتهن ويستلزم التدخل الدوائي لتخفيف الأعراض2. تشير الأدبيات الموجودة إلى أنه مرتبط بعدة عوامل، منها البروستاجلاندينات (PGs)، الإستروجين، البروجسترون، الفازوبريسين، الأوكسيتوسين (OT)، الجهاز المناعي، التأثيرات العصبية الصماء، وتغيرات في مستويات الكالسيوم الدقيقة3. في الوقت نفسه، يمكن للعوامل الالتهابية مثل عامل نخر الورم (TNF) والإنترلوكين-6 (IL-6) أن تحفز تخليق أو إفراز PGs. تؤدي هذه العملية إلى فرط انقباض عضلات الرحم، مما يؤدي لاحقا إلى ألم إقفاري واضطراب باركنسون4. حاليا، يتم تصنيف إدارة باركنسون في الطب الحديث بشكل رئيسي إلى العلاج العام، والعلاج الدوائي، والتدخل الجراحي. من بين الخيارات الدوائية، تستخدم بشكل متكرر أدوية مضادة للالتهابات غير ستيرويدية مثل الإيبوبروفين. ومع ذلك، يرتبط استخدام مضادات الالتهاب غير الستيرويدية بآثار جانبية كبيرة على الجهاز الهضمي، وقد يؤدي الاستخدام المطول أو المكثف إلى مضاعفات مثل قرحة المعدة ونزيف الجهاز الهضميالعلوي 5. لذا، فإن تحديد وتطوير استراتيجيات أكثر أمانا وفعالية لعلاج باركنسون أمر ضروري وضروري.
تشير الأدلة المتزايدة إلى أن عسر الصيد الأولي غالبا ما يرتبط بنمط مفرط في الطب الصيني التقليدي، ومن بينها ركود الطاقة وسكود الدم بشكل شائع سريريا6. في هذا النمط، يعتبر ضعف حركة الطاقة والدورة الدموية مساهما في سكونات الرحم، وانقباض الرحم المفرط، والألم. لذا تستخدم الاستراتيجيات العلاجية التي تنظم الطاقة، وتنشط الدورة الدموية، وتدفئ خطوط الطول، وتخفف الألم بشكل شائع لهذه الحالة. العلاج بنقطة الأذن هو تدخل مهم غير دوائي في الطب الصيني التقليدي. من السهل تطبيقه وقد استخدم لتخفيف الألم عن طريق تعديل مسارات المسكنات العصبية الصماء والمسارات الداخليةللألم 7. تم استخدام صيغة سنشي دينغتونغ (SDD)، وهي صيغة قائمة على الخبرة السريرية طورتها قسم أمراض النساء في مستشفى فوزو للطب الصيني التقليدي، لعلاج عسر الطمث الذي يتميز بركود الطاقة وتجمد الدم. تعتمد هذه الصيغة على مبدأ علاجي يمثل تنظيم الطاقة والدم، وتعزيز الدورة الدموية، وتدفئة خطوط الطاقة، وتخفيف آلام الدورة الشهرية. يحتوي SDD على شيشياو سان، الذي يتكون من حبوب اللقاح ( بوهوانغ) والبراز التروغوبتيروري (وولينغتشي)، بالإضافة إلى ريزوما سايبيري (شيانغفو)، المير (موياو)، رامولوس سينامومي (غويزي)، الجذور والجذر كليماتيديس شينينسيس (ويلينغشيان)، اللعاب الصيني (شيجيانتشوان)، ريزوما كوريداليس يانهوسوو (يانهوسو)، راديكس أنجيليكاي سينينسيس (دانغغوي)، هيربا أرتيميسيا أنومالاي (ليوجينو)، وفروكتوس فونيكولي (شياوهوي شيانغ). ومع ذلك، لم يتم تقييم فعالية SDD التجريبية، خاصة عند دمجه مع التحفيز الكهربائي عبر الجلد، بشكل منهجي في نموذج حيواني مسيطر على ركود الكي وعسر التوقيض الأولي في حالة سكون الدم.
مستقبلات البيروكسيسوم المنشطة بواسطة التكاثر (PPARs)، التي تنتمي إلى عائلة مستقبلات الهرمونات النووية، هي مستقبلات منشطة بالليغاند وتشكل جزءا أساسيا من تنظيم العديد من العمليات الأيضية داخل الخلية. هناك ثلاثة أنواع فرعية مميزة من PPARs، تعرف باسم PPAR-α، PPAR-β/δ، وPPAR-γ8. تشير النتائج الحديثة إلى أن PPAR-γ2 يعبر عنه عبر مجموعة متنوعة من الأنسجة ويظهر ارتباطا كبيرا بالعمليات الالتهابية9. وفقا للتقرير، يقوم PPAR-γ بكبح تعبير IL-6، وأنزيم السيكلوكسجيناز-2 (COX-2)، وبطانة-1، وإنزيم أكسيد النيتريك السينثاز، وإزيم الميتالوبروتيناز المصفوفة 9، والجيلاتيناز، وجزيئات الالتصاق من خلال تعطيل العامل النووي κB، والبروتين-1 المنشط، ومحول الإشارة ومنشط مسارات إشارات النسخ، مما يثبط الاستجابة الالتهابية10. بالإضافة إلى ذلك، يشير هوانغ وآخرون إلى أن COX-2 وPPAR-γ2 قد يكونا أهدافا حاسمة مرتبطة بالفيزيولوجيا المرضية لاضطرابات ركود الطاقة واضطرابات سكون الدم (QSBS).
لذلك، بحثت هذه الدراسة في التأثيرات العلاجية للتحفيز الكهربائي عبر الجلد لنقطة الأذن (TEAP)، وSDD، وتطبيقها المشترك في نموذج الفئران لركود الطاقة وعسر ستمثى الدم الأولي. من خلال دمج علم النسيج الرحمي، وتحليل الوسيط الالتهابي، وقياس البروستاجلاندين، وتحليل mRNA المرتبط ب PPAR-γ2/COX-2، هدفت هذه الدراسة إلى تقييم ما إذا كان العلاج الداخلي والخارجي القائم على الطب الصيني التقليدي يمكن أن يوفر حماية محسنة ضد التهاب الرحم المرتبط باضطراب الطمث. تكمن جدة هذا العمل في التقييم التجريبي ل TEAP مع صيغة SDD قائمة على الخبرة السريرية في نموذج ركود تشي وثبات الدم وعسر الطمث الأولي (QSBSPD)، وفي استكشاف ارتباطه المحتمل بمحور التنظيم الالتهابي PPAR-γ2/COX-2.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البيان الأخلاقي
تمت مراجعة جميع إجراءات الحيوانات والموافقة عليها من قبل مختبر فوجيان أمبري للتكنولوجيا الحيوية ورقم الموافقة على لجنة أخلاقيات الحيوانات: IACUC FJABR2024031202). إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا لبروتوكول الرعاية والاستخدام المؤسسي المعتمد.
تحضير SDD والإيبوبروفين
تتكون SDD من شيشياو سان (9 ج)، شيانغفو (9 ج)، موياو (6 ج)، قوي تشي (9 ج)، ويلينغشيان (12 ج)، شيجيانتشوان (20 ج)، يانهوسو (12 ج)، دانغقوي (9 ج)، ليوجينو (15 ج)، وشيوهوي شيانغ (5 جرام). تتكون شيسياو سان من بوهوانغ (4.5 جم) وولينغتشي (4.5 جم). تم استخدام جميع المكونات العشبية كحبيبات مركزة ومدرجة في جدول المواد. تحضير SDD عن طريق إذابة 106 جرام من الحبيبات المركزة في 200 مل من الماء المغلي للحصول على تركيز نهائي 0.53 جرام/مل من الدواء الخام المكافئ. اخلط جيدا حتى تذوب الحبيبات تماما، ودع المحلول يبرد إلى درجة حرارة الغرفة، ثم أعطه عن طريق الجرعة داخل المعدة بمعدل 2.5 مل/كجم في كل جرعة. حضر تعليق الإيبوبروفين وفقا للتركيز المطلوب للجفاف داخل المعدة. أعط الإيبوبروفين بجرعة 0.02 ج/كجم كعلاج إيجابي للضبط.
الحيوانات والتجميع
استخدم 36 فأر سبريغ-داولي أنثى بالغة سليمة من درجة محددة خالية من الممرضات، تتراوح أعمارها بين 2-3 أشهر ووزنها بين 200 ± 20 جرام، دون تاريخ حمل أو تزاوج. حافظ على الفئران تحت دورة ضوء/ظلام 12 ساعة لكل 12 ساعة عند 22 ± 2 درجة مئوية ورطوبة نسبية 50٪–70٪، مع إمكانية الوصول المجاني إلى الطعام القياسي ومياه الشرب. بعد أسبوع من التأقلم، قم بتقسيم الفئران عشوائيا إلى ست مجموعات (n = 6 لكل مجموعة): مجموعات فارغة، نموذجية، SDD، TEAP، SDD + TEAP، ومجموعات الإيبوبروفين.
إعداد وإدارة نموذج QSBSPD
في هذه التجربة، تم استخدام النموذج المقبول على نطاق واسع لعسر الطمث الناتج عن العلاج الوظيفي. باختصار، تم تقييم دورات الشبق لدى الفئران من خلال مسحة مهبلية. تم اعتبار الفئران مؤهلة للإدراج في الدراسة إذا تم تحديد مدة دورة الشبق بين 4 إلى 5 أيام.
باستثناء المجموعة الفارغة، تم إعطاء الفئران في المجموعات التجريبية حقن تحت الجلد من البنزوات الإستراديول وهيدروكلوريد الإبينفرين يوميا لمدة 10 أيام. بعد حقن هيدروكلوريد الإبينفرين بجرعة 0.9 ملغ/كجم يوميا، تعرضت الفئران لمحفزات مختلطة مختلفة (أ: تحفيز صوتي: تعرضت الجرذان لمحفزات صوتية (90 ديسيبل، 1 كيلوهرتز) لمدة 5 دقائق في كل مرة، 3–4 مرات يوميا، مع فاصل ساعتين بين كل مرة). ب: التحفيز الضوئي: تعرضت الفئران لمحفزات ضوئية وامضة لمدة 5 دقائق في كل مرة، 3–4 مرات يوميا، مع فاصل ساعتين بين كل مرة. ج: التحفيز الكهربائي: تعرضت الفئران لتحفيز كهربائي (نبضات موجة مربعة ثنائية المرحلة) عند 30–35 فولت، مع تطبيق تيار متردد لمدة 0.3 ثانية كل ثانيتين. تم إعطاء هذا التحفيز لمدة 5 دقائق كل ساعتين، من 2 إلى 4 مرات يوميا. د: التقييد: وضعت الفئران في قفص تقييد مصنوع من أسلاك شائكة، يبلغ طوله حوالي 25 سم وقطره 5 سم. بمجرد دخولها القفص، تم تثبيت أطرافها لتثبيت الفئران وتقييد حركتها لمدة ساعتين، مرة واحدة يوميا). بالإضافة إلى ذلك، في اليومين الأول والعاشر، تم حقن الجرذان تحت الجلد بجرعة 5.0 ملغ/كغ/يوم من بنزوات الإستراديول، وفي الأيام 2–9، تلقت 2.5 ملغ/كغ/يوم.
ابتداء من اليوم الخامس لحقن البنزوات الإستراديول، تلقت الفئران إعطاء أدوية مختلفة داخل المعدة لمدة 7 أيام، مرتين يوميا في الساعة 10:00 صباحا و4:00 مساء، باستثناء مجموعة الإيبوبروفين التي تلقت مرة واحدة يوميا في الساعة 10:00 صباحا. في مجموعات البلانك، والنموذج، وTEAP، تم إعطاء الفئران 2.5 مل/كجم من المحلول الملحي الطبيعي. في مجموعات SDD وTEAP+SDD، تلقت الفئران 2.5 مل/كغ من SDD (تم تحضيرها ك106 جرام من الدواء الخام مذاب في 200 مل من الماء، 0.53 جم/مل)؛ تم تحويل هذه الجرعة من الجرعة اليومية السريرية للبالغين البالغة 106 جرام بناء على تكافؤ مساحة سطح الجسم، مما أدى إلى جرعة مكافئة للفئران. في مجموعة الإيبوبروفين، تلقت الفئران تعليق إيبوبروفين بمقدار 0.02 جم/كجم. في مجموعتي TEAP وTEAP+SDD، تلقت الفئران تحفيز TEAP بدءا من اليوم الخامس بعد حقن بنزوات الإستراديول. ربط الأقطاب الكهربائية بنقاط الأذن الثنائية الثنائية جياوغان، شينمن، نيشينغتشيتشي، ونيفينمي، كما هو معرف وفقا لمعيار سابق لتحديد موقع نقاط الجرذان12. تقع هذه النقاط في تجويف الأذن الثنائية الطرفين، ويغذيه العصب المبهم. كانت الأقطاب الكهربائية متصلة بجهاز علاج إلكتروني بالإبرة، حيث كانت تصدر موجة مستمرة لمدة 20 دقيقة (التردد: 20 هرتز؛ الشدة: 1 مللي أمبير)، مرة واحدة يوميا. كانت فئران مجموعة TEAP+SDD تخضع لاختبار TEAP بعد أول اختبار SDD يوميا. تم إجراء التحفيز النهائي ل TEAP قبل الحقن داخل الصفاق للعلاج الوظيفي.
بعد 24 ساعة من آخر حقنة بنزوات الإستراديول، أي في اليوم الحادي عشر، ساعة واحدة بعد آخر إعطاء داخل المعدة، باستثناء مجموعتي الفراغ وTEAP، تلقت الفئران في المجموعات الأخرى 2 U من OT لكل فأر مع حقن داخل الصفاق. خضع الفئران في مجموعة TEAP لحقن داخل الصفاق من OT بجرعة 2 U لكل فأر بعد التحفيز النهائي ل TEAP. الفئران في المجموعة الفارغة لم تتلق حقن العلاج الوظيفي. نجح هذا البروتوكول في إنشاء نموذج فئران ل QSBSPD. يتم تلخيص اختيار الحيوان بشكل عام، وتحضير النماذج، وجدول إعطاء الدواء، ومعايير تحفيز TEAP، ومواقع نقاط الأذن في الشكل 1.
صبغة رايت-جيمسا
تم تحديد دورة الشبق بواسطة تلطيخ رايت-جيمسا على لطحات المهبل. تم ترطيب مسحة قطنية معقمة بمحلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9٪ ووضعها بلطف بعمق 0.5–1.0 سم في قناة المهبل. تم تدوير المسحة من 1 إلى مرتين لجمع الخلايا المقشرة المهبلية، وتم وضع العينة بشكل متساو على شريحة زجاجية نظيفة في اتجاه واحد. تم تجفيف البقعة بالهواء في درجة حرارة الغرفة. تمت إضافة محلول تلوين رايت-جيمسا لتغطية البقعة وتم حضنها لمدة 5 دقائق. ثم أضيف حجم مماثل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات إلى محلول التلوين، واستمر التلوين لمدة 5 دقائق أخرى. تم شطف الزلاجة بلطف ثلاث مرات بماء فائق النقي، وجففت بالهواء، وفحصت تحت مجهر خفيف. تم تحديد مرحلة دورة الشبق وفقا لأنواع الخلايا السائدة، بما في ذلك الخلايا الظهارية النوية، والخلايا الظهارية المتصلبة، والخلايا البيضاء البيضاء (الكريات البيضاء العميقة).
جمع عينات
تم وضع الفئران في صندوق تحفيز تخدير مع تركيز إيزوفلوران مثبت بين 3٪ إلى 5٪. بعد فقدان الفئران للوعي، تم نقلها إلى طاولة العمليات ووضعها تحت التخدير مع ارتداء قناع. تم تقليل التركيز إلى 1.5٪ إلى 2.5٪. تم تقليم فراء بطن الجرذ باستخدام المقص ثم تعقيمه بوضع موضعي من الكحول. تم عمل شق بطول 2–3 سم على طول خط البطن المتوسط. تم إزالة جانب واحد من الرحم، مع أربطة الرحم، وتم استئصال النسيج الدهني الملتصق بسطح الرحم. ثم تم عزل نسيج الرحم بعناية. إذا كان الفأر لا يزال حيا بعد أخذ العينة، قم بإعدامه باستخدام اختناق ثاني أكسيد الكربون.
تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE)
تم تثبيت أنسجة الرحم، وغرس في البارفين، وتقسيمها بسماكة 5 ميكرومتر. تم إزالة الشمع من الأجزاء بالزيلين مرتين لمدة 10 دقائق لكل منها. ثم تم إعادة ترطيب الأقسام بالإيثانول المطلق مرتين لمدة 5 دقائق لكل منها، تليها 95٪، 90٪، 80٪، و70٪ إيثانول لمدة 5 دقائق لكل منها. تم شطف الأقسام بماء فائق النقي. تم إجراء صبغة الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق، وتم شطف الأقسام بالماء حتى لم يبق أي صبغة زائدة. تم غمر الأقسام في محلول ملحي مخزن بالفوسفات لمدة 5 دقائق للتلوين الأزرق. ثم تم صبغ الأقسام بالإيوزين لمدة دقيقة واحدة وشطفها بالماء. بعد ذلك، تم تجفيف الأقسام بإيثانول بنسبة 95٪ لمدة 10 دقائق وإيثانول مطلق لمدة 10 دقائق، ثم تم تنظيفها بالزيلين لمدة 10 دقائق، وتركيبها على راتنج محايد. تم التقاط صور تمثيلية باستخدام مجهر ضوئي أو ماسح شرائح رقمي.
اختبار التغذية المناعية المرتبطة بالإنزيمات (ELISA)
تم شطف أنسجة الرحم الطازجة بمحلول ملحي مبرد مسبقا بفوسفات لإزالة الدم المتبقي. تم وزن كل عينة من النسيج، وتقطيعها إلى قطع صغيرة، وتجانسها في محلول ملحي مبرد مسبقا بفوسفات مخزن بنسبة نسيج إلى حاجز 1:9. تم طرد المركزي على العنصر المتجانس عند 5000 × جرام لمدة 5–10 دقائق عند 4 درجات مئوية، وتم جمع المادة الفائقة للتحليل لاحقا. تم قياس مستويات IL-1β وIL-6 وTNF-α وPGF2α وPGE2 باستخدام مجموعات ELISA للفئران وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تعديل جميع المواد وشرائط الميكروبلويت إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. تمت إضافة معايير أو عينات (50 ميكرولتر) إلى الآبار المخصصة. تمت إضافة جسم مضاد للكشف المتصرف ببيروكسيداز الفجل الحارس (100 ميكرولتر) إلى كل بئر باستثناء الآبار الفارغة، وتم إغلاق الصفيحة وحضانتها عند حرارة 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. تم التخلص من السائل، وغسل كل بئر خمس مرات باستخدام مخزن غسيل مخفف. بعد ذلك، أضيفت 50 ميكرولتر من الركيزة A و50 ميكرولتر من الركيزة B إلى كل بئر، تلاها الحضانة عند 37 درجة مئوية في الظلام لمدة 15 دقيقة. ثم أضيف محلول توقف (50 ميكرولتر) إلى كل بئر، وتم قياس الكثافة البصرية عند 450 نانومتر خلال 15 دقيقة. تم حساب تركيزات العينات من المنحنيات القياسية.
PCR الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)
تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من أنسجة الرحم باستخدام كاشف استخراج RNA الكلي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. لفترة وجيزة، تم طحن النسيج في نيتروجين سائل، وأضيف 1 مل من مادة استخراج RNA. تم حضن الليزات في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. ثم أضيف الكلوروفورم (200 ميكرولتر)، وهز الخليط بقوة لمدة 15 ثانية، وحضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق، ثم تم طرد مركزه عند 12,000 × جرام لمدة 12 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم نقل الطور المائي إلى أنبوب جديد، وخلط بلطف مع حجم مماثل من الإيزوبروبانول، وحضنه عند −20 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. تم طرد العينات بحرارة 12,000 × جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية، وتم التخلص من المادة الفائقة، وغسل حبيبات الحمض النووي الريبي بنسبة 75٪ إيثانول. تم تجفيف الحبيبة بالهواء وإذابتها في ماء خال من RNase. تم تحديد تركيز ونقاء الحمض النووي الريبي باستخدام مطياف ميكرو حجم. تمت إزالة الحمض النووي الجيني، وتم تصنيع cDNA وفقا لتعليمات كاشف النسخ العكسي. لإزالة الحمض النووي الجيني، تم حضن الحمض النووي الريبي الكلي مع مادة إزالة الحمض النووي الجيني عند درجة حرارة 42 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ثم وضعها على الثلج. تم إجراء النسخ العكسي عند 50 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، تلاه 75 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لإنهاء التفاعل.
تم إجراء PCR في الوقت الحقيقي باستخدام مزيج qPCR قائم على SYBR Green. كل تفاعل بسعة 20 ميكرولتر احتوى على 2 ميكرولتر من cDNA، و0.4 ميكرولتر من البرايمر الأمامي، و0.4 ميكرولتر من البرايمر العكسي، و10 ميكرولتر من خليط 2× SYBR qPCR، و7.2 ميكرولتر من الماء الخالي من النوكليز. تم تشغيل qPCR باستخدام برنامج الدراجات التالي: 95 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة؛ 40 دورة بدرجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 20 ثانية، 56 درجة مئوية لمدة 20 ثانية، و72 درجة مئوية لمدة 38 ثانية؛ يتبع ذلك تحليل منحنى الانصهار. تم استخدام GAPDH كأداة تحكم داخلية، وتم حساب التعبير النسبي للmRNA باستخدام طريقة 2−ΔΔCt . تم قياس كل عينة بيولوجية بثلاث نسخ تقنية. تم استخدام القيمة المتوسطة Ct للثلاثيات التقنية لحساب ΔCt والتعبير النسبي لل mRNA لكل نسخة بيولوجية. تسلسلات البرايمر هي كما يلي: PPAR-γ2، 5′-CGGAAGCCCTGTGTGACTT-3′ والعكسية 5′-CTCGATGGCTTCACGTCCA-3′؛ COX-2، الأمام 5′-AACCAGGTGAACTTCGTCTATTAG-3′ والخلف 5′-GGTCGGTGATGATCACTGA-3′; GAPDH، للأمام 5′-GGTTGTCTCCTGCGACTTCA-3′ والخلف 5′-GGTGGTCCAGGTTCACTC-3′.
التحليل الإحصائي
تم تحليل البيانات باستخدام برامج إحصائية. تم تقديم جميع البيانات الكمية كمتوسط ± انحراف معياري. لتحليل qRT-PCR، تم أولا متوسط الثلاثيات التقنية لكل نسخة بيولوجية، وأجري تحليل إحصائي باستخدام قيم النسخ البيولوجية. تم إجراء مقارنات بين مجموعات متعددة باستخدام تحليل أحادي الاتجاه للتباين تلاه اختبارات بونفيروني بعد الوقوع عندما تفي البيانات بافتراضات التجانس الطبيعي والتجانس. تم تعريف الدلالة الإحصائية بأنها P < 0.05.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
فحص دورة الشبع في الفئران
أظهرت نتائج صبغة رايت-جيمسا أن المسحات المهبلية في الشوقة الأم أظهرت في الغالب خلايا ظهارية نواة، مع كمية صغيرة من الخلايا الكيراتينية. بدت نوى هذه الخلايا الطهارية ملطخة قليلا، متضخمة، وأظهرت علامات ذوبان. في الفهر، تميزت اللطخات بوجود الخلايا الظهارية الكبيرة المتساقطة الأوراق المكيراتية. في ما بعد الشبق، كان هناك وجود كبير لخلايا ظهارية مقرنطة إلى جانب مجموعة صغيرة من الكريات البيضاء (الكريات البيضاء الدقيقة). في ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
باركنسون هو الألم في أسفل البطن الذي يظهر قبل وأثناء الدورة الشهرية دون وجود أي ضرر عضوي واضحفي المناطق التناسلية أو الحوضية. وفقا للاستطلاع، يعاني حوالي 45٪ إلى 90٪ من النساء حول العالم من عسر الطمث، مع 10٪ إلى 25٪ يعانين من عسر الطمث الشديد13. لذلك، من الضروري تحديد تدخلات أكثر أمانا وفعالية لمرض باركنسون وتوضيح آلياتها الأساسية.
حاليا، يتضمن البروتوكول المعتمد لتحفيز نموذج باركنسون في الفئران محاكاة أعراض عسر ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.
يدعم هذا البحث منصة الابتكار في علوم وتكنولوجيا الصحة في فوتشو - "منصة الابتكار التراثية للطب الصيني التقليدي في فوزو" (رقم المنحة 2021-S-wp3) ومشروع مؤسسة فوجيان للعلوم الطبيعية - "استنادا إلى مسار الإشارة PPAR-gamma-2 / COX-2، آلية التحفيز الكهربائي عبر الجلد مع محلول سونشي دينغتونغ في ركود الطاقة وعسر سن القتل الأولي من خلال التنظيم" (رقم المنحة 2022J01121509).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9% sodium chloride solution | Heilongjiang Qiqin Animal Health Products Co., Ltd. | 240314A03 | Rinsing الأنسجة وتحضير العينات |
| 1× phosphate-buffered saline (PBS) | Biosharp | BL601A | تطهير الأنسجة، وتجانس ELISA، وإجراءات التلطيخ |
| Acoustic and light stimulation system | Custom-built in animal facility | Custom-built | تحفيز الإجهاد المشترك أثناء بناء نموذج QSBSPD |
| Adhesive microscope slides | Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd. | 80312-3161 | تحضير شرائح البارافين والملطخات المهبلية |
| Automated digital slide scanner | Guangzhou Guangying Cell Technology Co., Ltd. | GCell-60 | التصوير الرقمي للأقسام الملطخة بـ HE |
| Automatic tissue dehydrator | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-TS | تجفيف الأنسجة قبل تغليف البارافين |
| Biological microscope | Nikon | E200MV | مراقبة الملطخات المهبلية والأقسام النسيجية الملطخة |
| CO2 gas cylinder and euthanasia chamber | Fuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine Animal Center | Institutional CO2 system | تخدير الحيوانات |
| Cold plate for embedding station | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL | تغليف البارافين |
| Cryogenic grinder | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | TISS-24 | تجانس الأنسجة |
| Danggui (Radix Angelicae Sinensis) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A1070343 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة |
| DEPC-treated water | Meilunbio | MA0018 | كواشف qRT-PCR |
| Electronic acupuncture treatment instrument | Suzhou Medical Appliance Factory Co., Ltd. | SDZ-II | تحفيز TEAP والتحفيز الكهربائي |
| Electronic analytical balance | Sartorius Balance Beijing Co., Ltd. | BS 224S | وزن العينات والكواشف |
| Eosin | Epredia | 7111 | تلطيخ HE |
| Epinephrine hydrochloride | TargetMol | 119091 | بناء نموذج QSBSPD |
| Estradiol benzoate | Sigma-Aldrich | E8515 | بناء نموذج QSBSPD |
| Ethanol | Xilong Scientific Co., Ltd. | 240403A1 | معالجة الأنسجة والتجفيف |
| Guizhi (Ramulus Cinnamomi) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A2060533 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة |
| Hematoxylin | Epredia | 7211 | تلطيخ HE |
| Ibuprofen suspension | Shanghai Johnson & Johnson Pharmaceutical Co., Ltd. | H20000359 | الدواء المسيطر الإيجابي؛ 20 ملغ/مل |
| Liujinu (Herba Artemisiae Anomalae) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A210A413 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة |
| Low-speed mini centrifuge | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd. | WTL-4K | تحضير العينات |
| Micro refrigerated centrifuge | Beckman Coulter | Microfuge 22R | استخراج RNA وتحضير المستخلصات النسيجية |
| Microplate reader | Guangdong Danli Technology Co., Ltd. | K3 | قياس امتصاص ELISA عند 450 نانومتر |
| Microscope cover slips | Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd. | 80340-1630 | تحضير الشرائح المجهرية |
| Mold incubator | Shanghai Lichen Bangxi Instrument Technology Co., Ltd. | W0704 | الحضانة أثناء إجراءات التلطيخ أو الفحص |
| Moyao (Myrrh) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | 1107853 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة |
| Neutral balsam | Meilunbio | MB9899 | تركيب الشرائح النسيجية الملطخة |
| NovoScript Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | Novoprotein | E047-01A | النسخ العكسي |
| NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus | Novoprotein | E096-01B | تكاثر qRT-PCR |
| Oxytocin injection | Anhui Fengyuan Pharmaceutical Co., Ltd. | 220906-4 | تحريض نموذج QSBSPD |
| Paraffin wax | Hualing | 20220918 | تغليف البارافين |
| PCR system | Bio-Rad | PTC-100 | إجراءات PCR ذات الصلة |
| Puhuang (Pollen Typhae) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A2092143 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة؛ مكون من Shixiao San |
| qRT-PCR primers for PPAR-γ2, COX-2, and GAPDH | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | Custom synthesis | كواشف qRT-PCR |
| Rat IL-1β ELISA kit | Meimian Biotechnology | MM-0047R2 | مجموعة ELISA |
| Rat IL-6 ELISA kit | Meimian Biotechnology | MM-0190R2 | مجموعة ELISA |
| Rat PGE2 ELISA kit | Meimian Biotechnology | MM-0068R2 | مجموعة ELISA |
| Rat PGF2α ELISA kit | Meimian Biotechnology | MM-0230R2 | مجموعة ELISA |
| Rat restraint cage | Custom-built in animal facility | Custom-built | إجهاد التقييد أثناء بناء نموذج QSBSPD |
| Rat TNF-α ELISA kit | Meimian Biotechnology | MM-0180R2 | مجموعة ELISA |
| Real-time PCR system | Applied Biosystems | 7300 | تحليل qRT-PCR |
| RNAiso Plus | TaKaRa | 9109 | استخراج RNA الكلي |
| Rotary microtome | Thermo Fisher Scientific | HM325 | تقطيع البارافين |
| Shijianchuan (Herba Salviae Chinensis) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A3052113 | عنصر SDD؛ حبيبات مركزة |
| Sprague–Dawley rats | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | SCXK (Jing) 2019-0010 | بناء نموذج الحيوان |
| Tissue embedding cassette | Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd. | 23033 | أداة تقطيع البارافين |
| Tissue embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL | تغليف البارافين |
| Tissue flotation bath and slide warmer | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-P2 | تركيب تقطيع البارافين |
| Ultra-low temperature freezer | Zhongke Meiling Cryogenics Co., Ltd. | DW-HL340 | تخزين العينات |
| Ultramicro UV-Vis spectrophotometer | Beijing BioTeke Corporation | ND5000 | قياس تركيز RNA ونقاءه |
| Ultrapure water system | Sichuan Delishi Technology Co., Ltd. | SP-D |
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن