يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تصور تنشيط الجينوم الزيجوي في الخلايا المفردة للأجنة المبكرة

394 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/70592

⸱

أبريل 3, 2026

 , 
1Department of Biological Sciences, University of South Carolina

في هذه المقالة

ملخص

نحن نصف طرقا لتصور النسخ الناشئ أثناء تنشيط الجينوم الزوجوي في الخلايا الفردية خلال التطور الجنيني المبكر.

الملخص

يتطلب التطور المبكر للجنين الانتقال من الأم إلى الزيغوتي (MZT) الذي يتطلب تنشيط الجينوم الزنججي (ZGA). خلال ZGA، يتم نسخ مئات إلى آلاف الجينات، وهو أمر ضروري لعمليات مختلفة في تطور الأجنة المبكر، بما في ذلك الحفاظ على بقاء الجنين، وتحديد مصير الخلية، وتكوين الطبقة الجرثومي. كان أحد التحديات الرئيسية في دراسة ZGA هو تصور ZGA مباشرة في خلايا الأجنة الفردية. هنا، نصف طريقة لرؤية الز جي أوريد مباشرة في الخلايا الفردية للأجنة المبكرة من خلال وضع العلامات الأيضية للنسخ الناشئة باستخدام 5-إيثينيل يوريدين (5-EU)، تليها اقتران الحمض النووي الريبي الأوروبي الناشئ مع الفلوروفورات عبر كيمياء النقر وتصورها في الأجنة الكاملة بواسطة المجهر الكونفوكلي، باستخدام زينوبوس لايفيس كنموذج. مكنتنا هذه الطريقة من تتبع ZGA أحادي الخلية في الأجنة الكاملة وكشف بداية ZGA غير المتجانسة في الزمان والمكان خلال التكوين المبكر. يمكن استخدامه في أنظمة أو أنسجة جنينية أخرى لدراسة نسخ الجينات وتنظيم الجينوم على مستوى الخلية الواحدة.

المقدمة

خلال مرحلة التطور المبكر، يخضع الجنين للانتقال من الأم إلى الوجنة (MZT) الذي يتحول تدريجيا إلى العوامل الأمومية إلى الجينات الزيجوتية. يتطلب MZT تنشيط الجينوم الزيجوي الخامد في البداية، وهي عملية تسمى تنشيط الجينوم الزيجوي (ZGA)؛ الجينات المعبر عنها أثناء ZGA مطلوبة لتحديد مصير الخلية المبكر، والتمع، وتكوين المحور 1,2. ومن المهم أن ZGA محفوظ في جميع الميتازويانات، وتوقيت ZGA تحت رقابة صارمة، رغم أنه يختلف بين الأنواع 3,4. يمكن أن يؤدي اختلال تنظيم ZGA إلى عواقب وخيمة، تتراوح بين عيوب تطورية إلى موت جنيني، مثل الإجهاض. لذلك، فإن دراسة آليات ZGA ليست مهمة فقط لفهم أساسيات تنظيم الجينات، بل لها أيضا آثار سريرية كبيرة.

كان التحدي الرئيسي في دراسة ZGA هو التصور المباشر لZGA واسع النطاق في الأجنة المبكرة ودراسة آلياته على مستوى الخلية الواحدة. تغلبنا على هذا التحدي من خلال تطوير طريقة تستخدم التصنيف الأيضي للنسخ الناشئة خلال ZGA باستخدام 5-إيثينيل يوريدين (5-EU)، تليها اقتران الحمض النووي الريبي الأوروبي الناشئ مع الفلوروفورات عبر كيمياء النقر والتصوير في الأجنة الكاملة بواسطة المجهر الكونفوكالي، باستخدام Xenopus laevis كنموذج. يحتوي جنين زينوبوس الكبير (قطره ~1.2 مم) على تدرج بحجم الخلية، ويحدث الجنين الكبير ZGA حول مراحل منتصف الأبلاستولا (مع بداية حول المرحلة 7 وذروتها حول المرحلة 9)، مما يجعله نموذجا مثاليا لدراسة أنماط ZGA5. باستخدام وسم 5-EU في أجنة Xenopus المبكرة، تمكنا من تصور وقياس ZGA واسع النطاق مباشرة في خلايا الأجنة المبكرة الكاملة، مما قادنا لاكتشاف نمط جديد في مكان-زمان لZGA ينظم بشكل أساسي بحجم الخلية 5,6.

هنا نصف تفاصيل هذا النهج، المقتبسة من أعمال سابقة مع التحسينات 5,7، بما في ذلك تثبيت الأجنة بعد وضع العلامات الأيضية للنسخ الناشئة باستخدام 5-EU، وربط الحمض النووي الريبي الأوروبي الناشئ مع فلوروفور عبر تفاعل النقر8، والتلوين المناعي للعلامات تحت الخلية، يليه تنظيف الأجنة للتصوير الكونفوكلي. يمكن تطبيق هذه الطريقة على أنظمة جنينية أخرى، بما في ذلك سمك الزرد9، 10، أو استخدامها في التسلسل لتحليل نسخ11 الناشئة، مما يدعم تطبيقه العام والواسع في أنواع مختلفة من العينات والتحليلات. بشكل عام، توفر هذه الطريقة وسيلة جديدة مهمة لدراسة آليات تنظيم الجينوم في الخلايا الفردية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم الموافقة على العمل الحيواني الموضح هنا من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في جامعة ساوث كارولينا.

1. التحضير قبل بدء البروتوكول

ملاحظة: قبل بدء البروتوكول، جهز الحلول التالية باستخدام ماء خال من RNase.

  1. حضر 1× محلول ملحي مخزن بتريس-مخزنة (TBS)، درجة حموضة 7.6: 50 ملليمولايتر تريس-HCl و150 ملليمولار NaCl. اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.6. خزن في درجة حرارة الغرفة. استخدم المخزن خلال شهرين.
  2. حضر 1× محلول ملحي مخزن تريس مع Tween 20 (TBST)، درجة حموضة 7.6: أضف Triton X-100 بتركيز نهائي 0.1٪ (حجم/حجم) إلى 1× TBS (درجة حموضة 7.6) محضر بواسطة ماء خال من RNase. خزن في درجة حرارة الغرفة. استخدم المخزن خلال شهر واحد.
  3. حضر 4٪ بارافورمالديهيد (PFA)/1× MEM: اخلط قارورة واحدة (10 مل) من مخزون PFA بنسبة 16٪ و4 مل من 10× MEM (1000 ملم 3- (N-مورفولينو)بروبان سولفونيك حمض [MOPS] pH 7.4، 20 ملليمولار EGTA، و10 ملليمولار MgSO4). أضف ماء خال من RNase إلى 40 مل. أليكوت وخزن عند -20 درجة مئوية. استخدم الحل خلال 6 أشهر.
  4. تحضير 70٪، 50٪، و25٪ ميثانول بمقدار 0.5× SSC: اخلط الميثانول و0.5× SSC بمقدار 3:1، 1:1، و1:3 على التوالي. استخدم الحل خلال ستة أشهر.
  5. تحضير محلول التبييض: اخلط لتصل إلى تركيز نهائي 2٪ (فوليوم/فول)H2O 2، 5٪ (فوليوم/فول) فوراميد، و0.5× SSC في مياه خالية من RNase. حضر هذا المحلول طازجا قبل الاستخدام مباشرة.
  6. تحضير محلول الانسداد: أضف تركيزا نهائيا من 10٪ (حجم/حجم) سيروم الماعز و0.2٪ (وزن/فول) BSA في 1× TBST. تخزين عند -20 درجة مئوية. استخدم الحل خلال 6 أشهر.
  7. حضر مادة تنظيفية BABB: اخلط جزءا واحدا من كحول البنزيل (BA) وجزئين من بنزوات البنزيل (BB). خزن في درجة حرارة الغرفة. استخدم الحل خلال 6 أشهر.

2. إصلاح الأجنة التي تم حقنها بخمسة أعضاء EU-micro

  1. لحقن 5-إيثينيل-يوريدين (5-EU) في أجنة خلية واحدة، اتبع الإجراءات الموضحةسابقا 11. دع الأجنة تتطور إلى المراحل المرغوبة من ZGA، مثل المرحلة 9 عندما يكون ZGA نشطا في معظم خلايا الجنين.
  2. لتثبيت الأجنة المحقونة ب 5-EU، أضف أولا حوالي 1.8 مل من 4٪ PFA/1× MEM إلى قارورة زجاجية وميضية بسعة 2 مل. ثم استخدم ماصة نقل بلاستيكية لنقل ~20 جنينا إلى القارورة الزجاجية. قلل كمية وسط الزراعة المضاف إلى القارورة الزجاجية.
  3. املأ القارورة الزجاجية حتى الأعلى بزيادة 4٪ PFA/1× MEM. أغلق القارورة بالغطاء؛ لا ينبغي ترك فقاعات هواء خلفهم.
  4. ضع القارورة الزجاجية على مدور وقم بتدوير الجنين بسرعة منخفضة (مثل 10 دورات في الدقيقة) لمدة لا تقل عن ساعتين في درجة حرارة الغرفة.
  5. استخدم ماصة لإزالة المثبت بعناية. املأ القارورة الزجاجية بميثانول 100٪. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة 5 دقائق.
  6. قم بإزالة الميثانول بحذر وأضف ميثانول جديد. كرر التدوير والجفاف مرتين على الأقل حتى تجف الأجنة تماما.
  7. تخزين الأجنة في الميثانول عند -20 درجة مئوية.
    ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا هنا. دع الأجنة تبقى في الميثانول لمدة يومين على الأقل قبل المضي قدما في الخطوات التالية. يمكن استخدام الأجنة خلال شهرين.

3. اقتران الحمض النووي الريبي الناشئ مع فلوروفور عبر تفاعل النقر

  1. لإعادة ترطيب الأجنة، قم أولا بإزالة الميثانول من القارورة الزجاجية، ثم أضف 2 مل من 75٪ ميثانول في 0.5× SSC، وأغلق القارورة بالغطاء. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة 5 دقائق.
  2. أزل السائل من القارورة الزجاجية بعد التدوير. كرر الخطوة السابقة بشكل متسلسل باستخدام 50٪ ميثانول في 0.5× SSC، 25٪ ميثانول في 0.5× SSC، و0.5× SSC. لإعادة ترطيب الأجنة بالكامل، كرر الغسل النهائي ب 0.5× SSC مرتين على الأقل.
  3. أضف 2 مل من محلول التبييض الطازج (2٪ H2O و5٪ فوراميد بمقدار 0.5× SSC) إلى القارورة الزجاجية. ضع القارورة الزجاجية على قطعة من ورق الألمنيوم، ثم ضعها تحت ضوء LED على مسافة لا تسخن العينات أكثر من اللازم.
  4. قم بتبييض الأجنة تحت الضوء حتى تصبح جميع الأصباغ بيضاء، وعادة ما يستغرق ذلك من 5 إلى 6 ساعات. لاحظ أنه بسبب تحلل H2O2 إلىO2، سيولد فقاعات هواء صغيرة يمكن أن تجعل الأجنة تطفو. افحص الأجنة بشكل دوري (مثلا كل 30 دقيقة) وقم بتدوير الزجاجة بلطف لتسمح للأجنة بالاستقرار في محلول التبييض.
  5. أزل حاجز التبييض بحذر. أضف 2 مل من 0.5× SSC لشطف الأجنة بسرعة. كرر عملية الشطف السريع مرة أخرى إذا لزم الأمر.
  6. أضف 2 مل من 1× TBST في القارورة الزجاجية. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة ساعة. أزل السائل من القارورة الزجاجية بعد التدوير.
  7. كرر الخطوة السابقة على الأقل 5 مرات. لاحظ أن غسل الأجنة بشكل جيد أمر بالغ الأهمية للخطوات التالية.
  8. أضف 2 مل من 1× تيرايت ثانية إلى الزجاجة. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة 5 دقائق. أزل السائل من القارورة الزجاجية بعد التدوير.
  9. كرر الخطوة السابقة مرة أخرى.
  10. جهز الخليط لتفاعل النقر في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل بإضافة الكواشف التالية للوصول إلى تركيزات نهائية 100 ملليمول تريس-HCl (pH 8.5)، 1 ملليمولار CuSO4، 25 ميكرومولار تتراماثيل رودامين (TAMRA)-أزيد، و100 ملليمول حمض الأسكوربيك. أضف حمض الأسكوربك أخيرا إلى التفاعل. أضعها للرفع والأسفل لخلط الخليط بشكل جيد.
  11. أضف خليط تفاعل 200 ميكرولتر إلى الأجنة في القارورة الزجاجية. تأكد من أن حجم خليط التفاعل كاف لغمر جميع الأجنة في القارورة. حضن لمدة 12 ساعة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  12. أزل خليط تفاعل النقر بعناية. لاحظ أنه يمكن رؤية فلورة غير محددة على الأجنة. اغسل الأجنة بسرعة مرتين ب 1× TBST، ثم اغسلها ب 1× TBST لمدة لا تقل عن 5 مرات، مع تغيير المحلول كل ساعة كما هو موضح أعلاه.
  13. استمر في غسل الأجنة بتغيير 1× TBST كل ساعتين، واتركها طوال الليل عند 4 درجات مئوية على جهاز دوار. توقف عن الغسل عندما يكون الفلورة غير المحددة بالكاد ملحوظا. لاحظ أنه نظرا لأن بقايا تفاعل النقر قد تكون ضارة للصبغة المناعية في المرحلة اللاحقة، تأكد من غسل الأجنة جيدا لمدة يوم إلى يومين قبل الانتقال إلى الخطوات التالية.

4. صبغ المناعة للأجنة باستخدام علامات تحت الخلوية (اختياري)

  1. لحجب الأجنة، قم بإزالة 1× TBST من الزجاجة في الخطوة النهائية للغسل أعلاه، وأضف 200 ميكرولتر من محلول الانسداد (10٪ سيروم ماعز/0.2٪ BSA/1× TBST). لف القارورة الزجاجية بقطعة من ورق الألمنيوم لحماية الأجنة من الضوء. ضع القارورة الزجاجية على جهاز نوتاتور وهز الأجنة بلطف لمدة لا تقل عن ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة (أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية).
  2. قم بتخفيف الجسم المضاد الأساسي (مثل الأجسام المضادة H3) بنسبة 1:1,000 في 200 ميكرولتر من 10٪ مصل ماعز/1× TBST. أضف الجسم المضاد المخفف إلى القارورة الزجاجية ولف الزجاجة بقطعة من ورق الألمنيوم. حضن الأجنة طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية على جهاز نوتاتور بسرعة منخفضة.
  3. أزل الجسم المضاد بعناية من القارورة الزجاجية. شطف الأجنة بسرعة مرتين بإضافة 2 مل من 1× TBST إلى الزجاجة وإزالتها.
  4. أضف 2 مل من 1× TBST إلى الزجاجة، ثم لفها بقطعة من ورق الألمنيوم. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة ساعة. أزل السائل من القارورة الزجاجية بعد التدوير.
  5. كرر الخطوة السابقة على الأقل 5 مرات.
  6. قم بتخفيف الأجسام المضادة الثانوية (مثل الأرنب أليكس فلور 488) بمعدل 1:1,000 في 200 ميكرولتر من 10٪ مصل ماعز/1× TBST. إذا كان هناك حاجة لتلوين الحمض النووي، قم بتخفيف صبغة الحمض النووي (مثل TO-PRO-3) مع الجسم المضاد الثانوي.
  7. أضف الجسم المضاد المخفف إلى القارورة الزجاجية ولفها بورق الألمنيوم. حضن الأجنة طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية على جهاز نوتاتور بسرعة منخفضة.
  8. أزل الجسم المضاد بعناية من القارورة الزجاجية. شطف الأجنة بسرعة مرتين بإضافة 2 مل من 1× TBST إلى الزجاجة وإزالتها.
  9. أضف 2 مل من 1× TBST إلى الزجاجة، ثم لفها بقطعة من ورق الألمنيوم. ضع القارورة الزجاجية على جهاز دوار وقم بتدوير الأجنة بسرعة منخفضة لمدة ساعة.
  10. كرر الخطوة السابقة على الأقل 5 مرات.

5. تنظيف الأجنة قبل التصوير الكونفوكالي

  1. لتجفيف الأجنة، قم بإزالة المخزن من القارورة الزجاجية بعناية بعد الغسل النهائي، وأضف 2 مل من الميثانول بنسبة 100٪. لف الزجاجة بورق الألمنيوم، وضعها على محول دوار، ودع الأجنة تدور بسرعة منخفضة لمدة 5 دقائق. أزل السائل من القارورة الزجاجية بعد التدوير.
  2. كرر الخطوة السابقة على الأقل 5 مرات.
  3. لتجفيف الأجنة بالكامل، كرر الخطوة السابقة على الأقل 5 مرات باستخدام 2 مل من الميثانول اللامائي بنسبة 100٪.
  4. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من الميثانول من الزجاجة بعناية.
  5. استخدم ماصة زجاجية لإضافة 500 ميكرولتر من مادة الكواشف التنظيفية BABB ببطء إلى القارورة الزجاجية. ستطفو الأجنة في ال BABB وتنتظر لمدة 10 دقائق حتى تستقر جميع الأجنة في قاع القارورة الزجاجية. لاحظ أن الأجنة ستصبح شبه غير مرئية، وقم بإزالة ال BABB بعناية دون إتلاف الأجنة.
  6. كرر الخطوة أعلاه مرتين إضافيتين على الأقل، أو حتى لا تظهر خطوط شليرين. لتنظيف الأجنة تماما، احتفظ بها في BABB لمدة يوم إلى يومين قبل التصوير.
  7. اصنع غرف تصوير عن طريق قطع مربع صغير (مثلا، ~5 مم × 5 مم) من شريط VHB بسماكة ~ 1.1-1.2 مم (مماثل لحجم الجنين) وحجم ~10 مم × 10 مم، ثم تثبيته على زجاج غطاء بحجم 24 مم × 40 مم.
  8. انقل الأجنة التي تم تنظيفها بعناية إلى الحجرة، ثم غطيها بزجاج غطاء آخر. ستكون الأجنة داخل شطيرة النظارات المغلقة بحيث يمكن تصوير كلا الجانبين.
  9. قم بإجراء التصوير تحت المجهر الكونفوكلي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم حقن أجنة Xenopus laevis في مرحلة الخلية الواحدة بميكرو ب 5-EU، وتم تثبيت الأجنة في المرحلة 9 عندما يحدث ZGA واسع النطاق في جميع أنحاء الجنين. تمت معالجة الأجنة وفقا للبروتوكول كما هو موضح أعلاه. تم تصنيف الحمض النووي الريبي الناشئة في الأجنة ب TAMRA-أزيد عبر تفاعل النقر، وتم وسم هيستون H3 باستخدام الأجسام المضادة المضادة للهيستون H3، وتم وسم الحمض النووي ب TO-PRO-3. تم تصوير الأجنة تحت المجهر الكونفوكالي باستخدام الهدف 10×. كما هو موضح في الشكل 1...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يمثل ZGA واحدة من أهم التحولات خلال المراحل الأولى من تطور الأجنة 2,3. هنا وصفنا إجراءات مفصلة لتحضير العينات لرؤية ZGA مباشرة في أجنة Xenopus المبكرة الكاملة، بما في ذلك تثبيت الأجنة المحقونة ب 5-EU، وربط الحمض النووي الريبي الناشئ مع فلوروفور عبر تفاعل النقرة، وتلوين المناعي للعلامات تحت الخلوية بعد تفاعل النقرة، وتنظيف الأجنة للتصوير الكونفوكلي7. نظرا لأن كمية 5-EU المدمجة تتناسب مع النسخ المست...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلف يصرح بعدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

نشكر مختبر ماثيو جود في جامعة بنسلفانيا على تدريبه. وقد دعم هذا العمل جزئيا من قبل المعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية (R03HD105802).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
16٪ بارافورمالديهيد (PFA)خدمات الطوارئ الطبية15710-Sلصنع الحل التثبيتي
20&00; SSCميدياتيكMT46-020-CMلصنع محلول التبييض
خلاط التوزيع ثلاثي الأبعادVWR76595-802للأجنة المعدلة
قوارير لولبية بحجم 9 مم (2 مل)VWR46610-722لمعالجة الأجنة
الأجسام المضادة المضادة لهيستون H3أبكامab1791لعلاج المناعة
حمض الأسكوربيكسيغما-ألدرتشA7506لجعل رد فعل النقر
كحول البنزيلسيغما-ألدرتش305197لتنظيف الأجنة
البنزيلات البنزواتكأكروس أورجانيكس105860010لتنظيف الأجنة
ألبومين مصل البقر (BSA)سيغما-ألدرتشA3059لصنع حل الحجب
أغطية لأنابيب لولبي 9 مم (2 مل)VWR46610-712لمعالجة الأجنة
الغطاء الزجاجي (24 مم ومرة 40 مم)VWR48393-060لصنع غرفة التصوير
CuSO4سيغما-ألدرتش61230لجعل رد فعل النقر
الإيثيلينيبيس (أوكسي إيثيلينينيتريلو) حمض رباعي الأسيتيك (EGTA)ثيرمو فيشر العلميAC409915000لصنع الحل التثبيتي
فيجي إيمج جالمعاهد الوطنية للصحةلمعالجة الصور
الفوراميدثيرمو فيشر العلميAC181090010لصنع محلول التبييض
ماصات باستور الزجاجيةVWR14673-010لتحويل BABB
مضاد الأرانب للماعز أليكس فلور 488 - الجسم الثانويثيرمو فيشر العلميA27034لعلاج المناعة
مصل الماعزأبكامab7481لصنع حل الحجب
بيروكسيد الهيدروجينسيغما-ألدرتشH1009لصنع محلول التبييض
كبريتات المغنيسيوم (MgSO4)ثيرمو فيشر العلميM65-500لصنع الحل التثبيتي
الميثانولثيرمو فيشر العلميA4524لتجفيف الأجنة
الميثانول، اللامائيسيغما-ألدرتش322415لتجفيف الأجنة
الممسحاتثيرمو فيشر العلميAC172631000لصنع الحل التثبيتي
خلاط منشط متعدد الأنماطVWR76595-812للأجنة المعدلة
ماصة نقل بلاستيكيةثيرمو فيشر العلمي13-711-9 صباحالنقل الأجنة
شفرة الحلاقةثيرمو فيشر العلمي18-100-970لقطع الأشرطة
مياه خالية من RNaseثيرمو فيشر العلميBP561-1لصنع حلول خالية من Rnase
روتو-ميني بلس (دوار)VWR470313-912لتدوير الأجنة
تتراماثيل رودامين (TAMRA)-أزيدأبكامab146486لجعل رد فعل النقر
TO-PRO-3ثيرمو فيشر العلميT3605لتلوين الحمض النووي
ترايتون X-100سيغما-ألدرتش10789704001لصنع مخزن الغسيل
قاعدة تريزما (قاعدة تريس)سيغما-ألدرتشT1503لصنع حاجز تريس
أشرطة VHB 3M GPH-110GF (45 ميل)VWR76524-608لصنع غرفة التصوير
مجهر زايس LSM 700 الكونفوكالزايسللتصوير الكونفوكلي

المراجع

  1. Kojima, M. L., Hoppe, C., Giraldez, A. J. The maternal-to-zygotic transition: Reprogramming of the cytoplasm and nucleus. Nat Rev Genet. 26 (4), 245-267 (2025).
  2. Vastenhouw, N. L., Cao, W. X., Lipshitz, H. D. The maternal-to-zygotic transition revisited. Development. 146 (11), dev161471(2019).
  3. Jukam, D., Shariati, S. A. M., Skotheim, J. M. Zygotic genome activation in vertebrates. Dev Cell. 42 (4), 316-332 (2017).
  4. Palfy, M., Joseph, S. R., Vastenhouw, N. L. The timing of zygotic genome activation. Curr Opin Genet Dev. 43, 53-60 (2017).
  5. Chen, H., Einstein, L. C., Little, S. C., Good, M. C. Spatiotemporal patterning of zygotic genome activation in a model vertebrate embryo. Dev Cell. 49 (6), 852-866.e7 (2019).
  6. Chen, H., Good, M. C. Nascent transcriptome reveals orchestration of zygotic genome activation in early embryogenesis. Curr Biol. 32 (19), 4314-4324.e7 (2022).
  7. Chen, H., Good, M. C. Imaging nascent transcription in whole-mount vertebrate embryos to characterize zygotic genome activation. Methods Enzymol. 638, 139-165 (2020).
  8. Jao, C. Y., Salic, A. Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (41), 15779-15784 (2008).
  9. Chan, S. H., et al. Brd4 and P300 confer transcriptional competency during zygotic genome activation. Dev Cell. 49 (6), 867-881.e8 (2019).
  10. Adar-Levor, S., et al. Cytokinetic abscission is part of the midblastula transition in early zebrafish embryogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (15), e2021210118(2021).
  11. Chen, H. Quantifying nascent transcription in early embryogenesis. Methods Mol Biol. 2923, 143-162 (2025).
  12. Harland, R. M. In situ hybridization: An improved whole-mount method for Xenopus embryos. Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تحليل الخلية الواحدةالتخلق الجنيني المبكرالانتقال من المرحلة الأمومية إلى الزيجوتيةوسم النسخ الناشئة5-إيثينيل يوريدينكيمياء النقرالمجهر البؤريأجنة Xenopus Laevisتنظيم الجينوم
تصور تنشيط الجينوم الزيجوي في الخلايا المفردة للأجنة المبكرة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.