تطوير نموذج اندماج بين الأجسام الذيلية للفئران: دراسة جدوى تجريبية

ملخص

أظهرت هذه الدراسة الجدوى التقنية لنموذج دمج ذيلي بين الأجسام باستخدام تثبيت القفص الخلفي والصفائح. أكد التحليل النسيجي في الأسبوع 12 وجود جسور عظمية مستمرة وأنماط نضج عظمي مميزة داخل القفص. يعمل هذا النموذج التقني كأساس أولي للدراسات واسعة النطاق المستقبلية.

الملخص

تستخدم الفقرات الذيلية للفئران على نطاق واسع في أبحاث تجديد العظام ودمج العمود الفقري كمواقع مناسبة لاختبار مواد وزراعة الطعوم العظمية. وقد حققت نماذج دمج ذيل الجرذ السابقة الاندماج بين الفقرات من خلال إزالة القرص وزراعة العظام، أو باستخدام أجهزة تثبيت خارجية. ومع ذلك، لم يتم تطوير نموذج حيواني صغير يستخدم قفص اندماج بين الأجسام مشابه لذلك المستخدم سريريا. تم افتراض أنه يمكن إنشاء بيئة دمج عظام ذات قيمة دون مضاعفات عصبية من خلال إجراء إدخال خلفي في القفص يحاكي الإجراءات السريرية، مع دعم تثبيت الصفيحة، في فقرات ذيل الفئران. تم تصميم هذه الدراسة التجريبية الأولية (n = 1) لتقييم الجدوى التقنية. تم تطوير نهج جراحي حيث يتم إدخال قفص تيتانيوم مصغر بدقة في الفراغ القرصي المستقطع بين الفقرات الذيلية المجاورة، ليعكس الإجراء الجراحي البشري بشكل وثيق. تم اختيار التيتانيوم للقفص بسبب استخدامه السريري الواسع وتوافقه الحيوي. أظهرت النتائج الأولية الجدوى التقنية لهذا النهج. حافظ القفص المزروع على ارتفاع القرص ومحاذاة العمود الفقري. لوحظ نمو تدريجي للعظم عبر القفص، مما أدى إلى تأكيد وجود جسر عظمي مستمر عبر الفضاء بين الفقرات بعد 12 أسبوعا من العملية. تم تأكيد وجود بنية ترابيكية مستمرة وغياب نسيج ليفي وسيط من الناحية الإشعاعية والنسيجية. بشكل عام، يوفر هذا النموذج القائم على القفص لدمج ذيل الجرذ منصة واعدة لتقييم المواد الحيوية الجديدة ودراسة آليات اندماج العظام بين الفقرات. ومع ذلك، فإن غياب مجموعة ضابطة وتحليل إحصائي، بسبب التصميم الفردي، يحد من قابلية تعميم هذه النتائج ويستلزم المزيد من التحقق.

المقدمة

الاندماج بين الأجسام هو علاج جراحي معتمد لمختلف اضطرابات العمود الفقري، بما في ذلك عدم الاستقرار، وتقشر الفقار، والأمراض التنكسية؛ ومن الجدير بالذكر أنه تطور على مدى حوالي 70 عاما كإجراء قياسي ^1,2. تتضمن العملية إزالة القرص بين الفقرات وإدخال قفص أو ترقيع عظمي لتعزيز الاندماج الصلب بين الفقرات^{المجاورة 3,4}. علاوة على ذلك، فإن إضافة الأجهزة الخلفية مع الأقفاص تقلل من معدلات الإصابة الكاذبة وتوسع المؤشرات السريرية⁵. ومع ذلك، لا تزال مضاعفات مثل الكاذب الكاذب وسقوط الأقفاص تحديات سريرية كبيرة، مما يستدعي تطوير نماذج ما قبل سريرية موثوقة لتقييم المواد الجديدة والعوامل التي تعزز الاندماج^6،7.

تم استخدام الفئران على نطاق واسع في أبحاث اندماج العمود الفقري بسبب جدوى اقتصادها، وتكاثرها السريع، وشفائها السريع، وسهولة التعامل مع الجرذان^8،9. ومع ذلك، تظهر نماذج الاندماج بين الأجسام بين الفئران الحالية محدوديات كبيرة. على وجه التحديد، يتطلب نهج الدمج بين الأجسام القطنية الأمامية (ALIF) في الفئران تلاعبا رئيسيا بالأوعية البطنية والأعضاء، مما يؤدي إلى تدخل جراحي عالي ومخاطر كبيرة للمضاعفات^10,11. يتضمن نهج الاندماج بين الأجسام القطنية الخلفية (PLIF) خطرا لا مفر منه من إصابة عصبية بسبب صغر حجم القنوات الشوكية والعناصر العصبية جدا، مما يجعل الانكماش العصبي شبه مستحيل¹². وبالتالي، اقتصرت معظم دراسات الفئران على الاندماج الخلفي الجانبي (PLF)، الذي يفشل هيكليا في دراسة آليات اندماج العظام داخل القفص، وهو جانب حاسم في البيئات السريرية¹³. علاوة على ذلك، رغم وجود نماذج ذيلية، إلا أنها تفتقر إلى نظام تقييم يدمج قفص بين الجسم يشبه السريري مع تثبيت الصفيحة الخلفية.

يقدم العمود الفقري الذيلي للفئران مزايا فريدة في أبحاث الاندماج بين الأجسام. تظهر الأقراص الذيلية تشابهات هندسية وتركيبية وميكانيكية قوية مع أقراص اللومبار البشري، مما يجعلها أكثر شعبية في أبحاث الأقراص^14،15. بالإضافة إلى ذلك، توفر جراحة العمود الفقري الذيلي سهولة الوصول الجراحي، وفعالية من حيث التكلفة، وتعافي سريع بعد العملية مقارنة بالطرق القطنية¹⁶. ومع ذلك، حتى الآن، لم تسجل أي دراسات عن نجاح إدخال القفص الخلفي في العمود الفقري الذيلي للجرذ مع تقييم نسيجي مفصل لتكوين العظام داخل وحول القفص.

لا يزال التقييم الأنسجي، خصوصا لقياس النسيج العظمي غير المنفصل، المعيار الذهبي لتقييم التكامل العظمي والاندماج العظمي^17,18. على وجه التحديد، يتيح التحليل الكمي لمعايير تكوين العظام الحرجة، بما في ذلك حجم العظم/حجم الأنسجة (BV/TV)، وعدد الترابيكولور، وسماكة الترابيكولار، مع السماح بتقييم نوعي نضج العظم من خلال التمييز بين العظم المنسوج والعظم الرقيحي^19,20. يمكن أن يكشف هذا التقييم التفصيلي عن أنماط التوصيل العظمي المكاني والزماني داخل القفص وعند واجهات القفص مع الفقرات^21,22. ومع ذلك، هناك تقييم شامل للتحليل النسيجي لتوصيل العظام في أقفاص نماذج الفئران مفقودا.

هدفت هذه الدراسة إلى تطوير نموذج تجريبي للاندماج بين الأجسام الذيلية للفئران باستخدام إدخال القفص الخلفي وتثبيت الألواح الإضافية لإثبات جدواها التقنية. تقدم هذه الدراسة تقنية جراحية مفصلة وتقييما نسيجيا شاملا لتكوين العظام داخل القفص وعند واجهات نهاية الصفائح الفقرية. تم افتراض أنه يمكن إنشاء بيئة دمج عظام ذات قيمة دون مضاعفات عصبية من خلال إجراء إدخال خلفي في القفص يحاكي الإجراءات السريرية، مع دعم تثبيت الصفيحة، في فقرات ذيل الفئران. يوفر هذا النموذج منصة فعالة لتقييم مواد الاندماج بين الأجسام، وفي الأدبيات الحالية، يمثل استكشافا تقنيا أوليا لوضع الأقفاص الخلفي الناجح باستخدام تقييم التوصيل العظمي النسيجي في نموذج الفئران.

البروتوكول

أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوانات بجامعة جيكي (رقم الموافقة 2023–034C1). تم تصميم هذه الدراسة كدراسة جدوى تجريبية. لتقييم الجدوى التقنية لهذا الإدخال الخلفي الحساس والمبتكر في العمود الفقري الذيلي للجرذ قبل التحقق على نطاق واسع، تم استخدام حيوان واحد (n = 1)، وفقا للإرشادات الأخلاقية، لتقليل استخدام الحيوانات خلال التقييم الفني الأولي. تم اختيار ذكور فئران سبراج-داولي (SD) كالسلالة القياسية لأبحاث اندماج العمود الفقري. كانت معايير الإدراج الذكور الأصحاء الذين تتراوح أعمارهم بين 8 إلى 10 أسابيع، ووزنهم بين 200–250 جم، لضمان توافق ارتفاع القرص بين الفقرات (1.8–2.2 مم) مع قفص 2 مم. تم استبعاد الحيوانات التي أظهرت فقدانا > 10٪ للوزن خلال فترة التكيف مع المناخ، أو انخفاض في النشاط، أو تشوهات مرئية في الذيل. في هذه الدراسة، ذكر فأر سبراج–داولي (عمره 8 أسابيع، وزنه 221.8 جرام؛ تم استخدام حاملة اليابان SLC، شيزوكا، اليابان). تم إيواء الحيوان في بيئة محكمة عند 25°C ورطوبة نسبية 50٪ (النطاق المسموح به 30–70٪) مع دورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة، وتم توفير الوصول الفوري إلى الماء ونظام غذائي قياسي للقوارض. كانت الفئران تؤوي في أقفاص ذات قاع صلب مزودة بمواد تعشيش وعصي مضغ لإثراء البيئة. تم تنفيذ فترة تأقلم مدتها 3 أيام قبل الإجراء الجراحي. لمنع رفاق القفص من قضم زرعات الذيل، تم الحفاظ على الجرذ في ظروف مأوى طوال الدراسة، وكان ذلك عاملا حاسما في هذا التصميم التجريبي.

تحضير البراغي والألواح

تم تجهيز مواد التثبيت الداخلية قبل الإجراء الجراحي. تم قطع براغي الفولاذ المقاوم للصدأ المتوفرة تجاريا (القطر الأصلي: 1.2 مم، الطول: 14 مم) إلى طول دقيق يبلغ 6 مم باستخدام قاطع أسلاك (الشكل 1A). تم تعقيم هذه البراغي عبر نظام البخار القياسي عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. في لوحة تثبيت داخلية من البولي أوكسي ميثيلين (POM) (طول 18 مم، عرض 3 مم، سمك 1 مم)، كانت ثقوب البراغي بقطر 1.2 مم تحفر بفواصل 12 مم باستخدام مثقاب يدوي (الشكل 1B–D). بعد ذلك، تم تدوير زوايا ألواح POM باستخدام قاطع أسلاك لتقليل التهيج للأنسجة الرخوة المحيطة (الشكل 1E). تم تعقيم الألواح باستخدام غاز أكسيد الإيثيلين (EtO) أو بلازما غاز بيروكسيد الهيدروجين، نظرا لحساسية البوليمر الحرارية. يتميز قفص التيتانيوم بهيكل شبكي مترابط مع قنوات طولية يبلغ قطرها بين 300–500 ميكرومتر. تم إعداد سطحه باستخدام تقنية التيتانيوم ثلاثية الأبعاد من لاميلار لتحقيق خشونة سطحية دقيقة تتراوح بين 3–5 ميكرومتر، مما يسهل نمو العظام المباشر.

التخدير والإجراءات الجراحية

لم يتم إجراء أي صيام قبل العملية لتجنب الإجهاد الأيضي غير الضروري. تم تحفيز التخدير عبر خليط تخدير ثلاثي يتكون من ميديتوميدين (0.15 ملغ/كغ)، ميدازولام (2 ملغ/كغ)، وبوتورفانول (2.5 ملغ/كغ)، وتم إعطاؤه عن طريق حقن تحت الجلد في الظهر باستخدام إبرة 25 قياس²³. تم تقييم مستوى التخدير الجراحي المناسب كل 15 دقيقة من خلال تأكيد فقدان رد فعل انسحاب الدواسة (ضغط إصبع القدم)، والحفاظ على الأغشية المخاطية الوردية، ومراقبة معدل التنفس (70–110 نفس/دقيقة). تم إجراء إجراء جراحي لدمج الفقرات الذيلية بين الأجسام. وضع الحيوان في وضعية الاستلقاء (الشكل 2A)، وتم تعقيم الذيل بالكامل بعد بروتوكول فرك متغير من ثلاث جولات (70٪ إيثانول، فرك بوفيدون-يود، و70٪ إيثانول) لضمان وجود حقل معقم. لتحديد الفقرات المستهدفة، تم إجراء الجو اليدوي بدءا من العجز من البعيد. تم تحديد أول وصلة متحركة على أنها وصلة العجز مع ثاني أكسيد الكربون، وتم تعيين الجزء البعيد مباشرة كثاني أكسيد الكربون، مما حدد موقع الهدف بين ثاني أكسيد الكربون وثاني أكسيد الكربون. تم إجراء شق طولي بحوالي 2 سم على الجانب الظهري، يمتد من الفقرة الذيلية الثانية إلى الثالثة (CO2–Co3) (الشكل 2B)، لكشف السطح الخلفي لكل فقرة. خلال التعرض، تم اتخاذ حرص على تحديد وتجنب الضرر في الوريد الذيلي الظهري؛ تم استخدام التشريح الخفيف والكوية الكهربائية ثنائية القطب لإدارة النزيف الطفيف. لتحضير موقع الاندماج، تم قطع الحلقة الليفية بين فقرتي ثاني أكسيد الكربون وثاني أكسيد الكربون باستخدام مشرط (الشكل 2C). ثم تمت إزالة الحلقة الليفية والنواة البلبوسية بدقة عبر الغطاء باستخدام كوريت وملقط صغير (الشكل 2D). تم إجراء هذه الخطوة تحت تكبير جراحي عالي القدرة (≥3.5x). تم تعريف اكتمال الإزالة بشكل موضوعي من خلال التأكيد البصري لنزيف النقاط (علامة "اللوحة الدامية") وغياب الأنسجة الرخوة المتبقية تماما. تم تعريف تلف اللوحة النهائية غير المقبول بأنه تآكل عميق يشمل > 25٪ من المساحة الكلية أو اختراق في العظم المنسد > 0.5 مم. تم إدخال قفص من التيتانيوم (مقطع عرضي 2 × 2 مم، ارتفاع 2 مم) (الشكل 2E) عميقا في الفضاء بين الفقرات حتى تم الوصول إلى توقف فيزيائي وتأكيد الاتصال الكامل للسطح مع كلا اللوحتين الطرفيتين بصريا، مما خلق توافقا تداخليا قويا (الشكل 2F، 2G).

التثبيت وإغلاق الجرح

لتسهيل تثبيت الصفائح، تم تسوية سطح العظم حول مواقع الثقوب المخصصة في فقرات ثاني أكسيد الكربون وثاني أكسيد الكربون باستخدام جهاز توجيه كهربائي محمول يعمل بسرعة 7,800 دورة في الدقيقة مزود بشفرة كروية من نوع ملف 2.0 مم (الشكل 2H). تم حفر ثقوب العظم بشكل فردي على فواصل تتوافق مع فتحات البراغي في لوحة التثبيت الداخلية البلاستيكية باستخدام مثقاب يدوي مزود برأس حفر بقطر 1.2 مم (الشكل 2I). ثم تم تحميل مسبقا من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر 6 مم في الفتحات. لللوحة البلاستيكية (الشكل 2J). تم إدخال البراغي بزاوية 90° إلى عمق معياري يبلغ 5 مم مع تباعد 12 مم من المركز إلى المركز (الشكل 2K). وأخيرا، تم إغلاق شق الجلد بغرز نايلون 4-0، وتم تعقيم الذيل مرة أخرى بنسبة 70٪ إيثانول لإكمال الإجراء.

الإدارة بعد العملية والقتل الرحيم

خلال مرحلة التعافي الفورية (اليوم 0)، تم مراقبة الحيوان كل 15 دقيقة، وتم دعم درجة حرارة المستقيم حتى يصل إلى الاستلقاء الكامل على القص والمشي المقصود. في التقييم طويل الأمد (الأسبوع 1–12)، تم تنفيذ نظام تقييم يومي يعتمد على درجة حالة الجسم (BCS)، وحالة العناية البدنية، والنشاط العام، إلى جانب مراقبة موقع الجراحة اليومية للكشف عن العدوى أو الانفصال. تم توفير طعام رطب على أرضية القفص خلال أول 48 ساعة. تم قياس وزن الجسم أسبوعيا. تم تعريف نقاط النهاية الإنسانية للقتل الرحيم المبكر بدقة كما يلي: فقدان الوزن ≥20٪، BCS ≤2.0)، عدم القدرة المستمرة على الوصول إلى الطعام أو الماء > 12 ساعة، علامات الألم الشديد/ضيق التنفس، أو مضاعفات شديدة في موقع الجراحة (مثل النخر). تم إعدام الحيوانات التي تستوفي هذه المعايير بشكل إنساني خلال 24 ساعة. شملت الرعاية بعد العملية إعطاء سيفاليكسين (15 ملغ/كجم) داخل العضلات مباشرة بعد الجراحة وبعد العملية بعد 24 ساعة لمنع العدوى. لتخفيف الألم، تم إعطاء الكاربروفين (2 ملغ/كغ) تحت الجلد مباشرة بعد الجراحة وبعد 12 و24 و48 ساعة بعد العملية، ليصبح مجموع أربع جرعات. بعد 12 أسبوعا من الانغراس، تم التخلص من الفأر عن طريق جرعة زائدة من الأيزوفلوران. ثم تم حصاد الجزء من الفقرة الذيلية الثانية إلى الثالثة بشكل جماعي وتثبيته بنسبة 70٪ إيثانول.

توصيات التدريب، وحل المشكلة، وحجم العينة. لتسهيل اعتماد هذا البروتوكول المتطلب بنجاح، يجب على المشغلين الجدد إجراء 3–5 إجراءات تدريبية على جثث الفئران، وتحقيق الكفاءة عندما لا تظهر ثلاث عمليات متتالية أي خطأ في التصوير الشعاعي. تشمل عمليات استكشاف الأخطاء الشائعة قياس ارتفاع القرص مسبقا عبر الأشعة السينية لتحسين اختيار حجم القفص وإعادة التحقق من تسطح العظم الظهري لمنع هجرة القفص. إذا كان شراء البرغي غير كاف، ينصح باستخدام سرعات حفر أقل. بالنسبة لدراسات التحقق المستقبلية، يوصى بحجم عينة لا يقل عن n = 6 إلى 10 لكل مجموعة (مع 10–20٪ إضافية للاستنزاف) لتحقيق القوة الإحصائية الكافية. علاوة على ذلك، يجب أن تتضمن الدراسات المستقبلية مجموعات ضابطة (مثل القفص الفارغ أو الطعم الذاتي) للتحقق من أداء المادة الحيوية.

التحليل الشعاعي والنسيجي

تم إجراء التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (CT) والتصوير الشعاعي الرقمي باستخدام نظام مسح ميكرو-CT بجهد أنبوب 80 كيلوفولت وتيار 0.1 مللي أمبير. تم استخدام فلتر ألمنيوم بسماكة 1.0 مم أثناء الاقتناء لتقليل التأثيرات الصلبة بالحزمة الناتجة عن زرع التيتانيوم. للتقييم الطولي، تم إجراء التصوير في الجسم الحي بعد أسبوع وأربعة أسابيع من العملية بحجم فوكسل 120 ميكرومتر. تم إجراء التصوير خارج الجسم بعد 12 أسبوعا من العملية باستخدام حامل عينة بحجم 24 مم بحجم فوكسل 24 ميكرومتر. تم إعادة بناء بيانات الأشعة المقطعية والصور الإشعاعية باستخدام خوارزمية إسقاط عكسي مفلترة قياسية وتحليلها باستخدام عارض DICOM. تم تحديد معايير كمية لتقييم اتحاد العظام. من الناحية الإشعاعية، تم تأكيد نجاح الاندماج عندما لوحظ وجود بنية ترابيكية مستمرة تربط بين نهايات الفقرات القمجمة والذيلية عبر ثلاث شرائح متتالية على الأقل في التصوير المقطعي الميكروي. تم تطبيق عتبة عالمية تبلغ 700 وحدة هونسفيلد (HU) أثناء تقسيم الصورة. من الناحية النسيجية، اعتبر نسبة BV/TV 70٪ أو أكثر داخل القفص عتبة للإشباع المكاني الجسدي والاندماج. من الناحية النسيجية، كان اتحاد العظام يعرف بوجود جسور عظمية كاملة من الجوانب القحفية إلى الذيلية دون تداخل الأنسجة الليفية. للتحليل الأنسيجي، تم إجراء وسم فلوروكروم متسلسل عن طريق حقن الكالسين تحت الجلد (8 ملغ/كغ) قبل يومين من القتل الرحيم لتحديد التوزيع المكاني للتمعدن النشط في نقطة النهاية الزمنية البالغة 12 أسبوعا. تم تثبيت الفقرات الذيلية المستبعدة بنسبة 70٪ إيثانول لمدة 7 أيام وصبغت بشكل كامل بصبغة عظم فيلانويفا. تم تجفيف العينات عبر درجات تصاعدية من الإيثانول، وتم تضمينها في راتنج ميثيل ميثاكريلات الميثيلي، وتم تقسيمها في منتصف الساجت عند المركز الهندسي الدقيق للقفص، كما تم تحديدها بواسطة توجيه Micro-CT المسبق باستخدام منشار ماسي ميكروتوم. تم إعداد عينات أرضية غير مفكوكة (سمك 5 ميكرومتر) في معهد إيتو لقياس النسيج العظمي (نيغاتا، اليابان). تم التقاط الصور باستخدام مجهر ذو المجال الساطع ومجهر ليزر كونفوكال لدمج الفلورة. تم إجراء المزيد من الفحص تحت مجهر ضوئي مستقطب، وأجري تحليل الهيستومورفومترية باستخدام محلل صور محوسب. تم تعريف منطقة الاهتمام (ROI) بأنها الحجم الداخلي الكلي للقفص، باستثناء الدعامات المعدنية، وتم تقسيمها إلى عائد على الاستثمار داخل القفص الجمجمي والذيلي. تم التعرف على نسيج العظم بلونه البنفسجي/الأرجواني تحت صبغة فيلانويفا. تم تعريف عظم اللاميلا (Lm.V) بهيكله المنظم للغاية والمتوازي تحت الضوء المستقطب، بينما كان العظم المنسوج (Wo.V) يظهر أنماطا ليفية غير منظمة.

النتائج

وزن الجسم (الجدول 1)

تم قياس وزن الجسم حتى 12 أسبوعا بعد العملية، مما أظهر زيادة مستمرة (من 221.8 جرام إلى 346.8 جرام)، مما يشير إلى توازن فسيولوجي ويدعم بشكل غير مباشر غياب الضيق المزمن الشديد. وقد أكدت هذه التقييمات اليومية متعددة الوسائط نشاطا طبيعيا وشفاء الجرح بسهولة.

الجرح (الشكل 3)

تم الشفاء من الجرح بعد 4 أسابيع من العملية؛ حدث بروز خياطة تلقائي، وكا...

المناقشة

هنا، تم إنشاء نموذج دمج جديد بين الأجسام للعمود الفقري الذيلي للجرذ. يتضمن هذا النموذج إدخال قفص من التيتانيوم عبر نهج خلفي مدعوم بتثبيت الصفائح واللولب. لاحقا، تم تقييم تكوين العظم داخل القفص باستخدام تحليل تفصيلي للشراكات النسيجية. الميزات المميزة لهذا النموذج ثلاثية: 1) يحاكي بشكل وثيق عمليات الاندماج بين الأجسام القطنية الخلفية السريرية أو عمليات الدمج بين الأجسام القطنية عبر الثقب من خلال دمج قفص بين الجسم والأجهزة الخلفية؛ 2) تستخدم الفقرات الذيلية، وهي موقع تشريحي يمكن الوصول إليه...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
4-0 nylon sutures	Natsume	ER-25-30N2
Bright-field microscope	Keyence. (Osaka, Japan)	BZ-X800
Butorphanol	FUJIFILM	021-19001
Calcein	FUJIFILM	76082
Carprofen	FUJIFILM	037-19761
Cefalexin	FUJIFILM	036-11051
Computerized image analyzer	System Supply Co. (Nagano, Japan)	Histometry RT CSS-840
Confocal laser-scanning microscope for fluorescence merging	Carl Zeiss. (Jena, Germany)	LSM 980
Curette	Natsume	E-8-00
Diamond saw microtome	Leica. (Wetzlar, Germany)	SP1600
Electric drill	TAMIYA	N/A	https://www.amazon.co.jp /%E3%82%BF%E3%83% 9F%E3%83%A4-%E3% 82%AF%E3%83%A9% E3%83%95%E3%83% 88%E3%83%84%E3% 83%BC%E3%83%A3% %E3%83%BC%E3%82% BF%E3%83%BC-%E3% 83%97%E3%83%A9%E3 %83%A2%E3%83%87%E3 %83%AB%E7%94%A5%E5 %B7%A5%E5%85%B7/dp/B 01LZ05WWY/ref=sr_1_2?ad grpid=54785347873&dib=eyJ 2IjoiMSJ9.f61YHQv80N0nxws VOdlrIFtTsQoJICvSb4t4rVt97 FEBWkOo4ilX5O2lZH-5vADU HT9CRXO308QpVFqdBNli0C osd4iBSfSzEcKxP9HMX4DhiI S-Qko5ix33W7FjPQqpgTWbj3 CV_vBytnvfqvSyoGN9IB8445o 5Kc0pjeKPG-SRR3Ixpqr2-FT_ ZgUyWstoyQVFTcv_Rq_K4-E OWnuT41BBYtBh757EOAoBe z2lkCd6Psz99wZxfUuvzRUAH Ecq9QV6EmiT9LAY8dYYq08k aLt7Klqx2k-MdV8XbWRxgKk. 7TWzXBGA1PeNmB4me_Cz4 mMFAKBAv5H3YXAw_HPuLd E&dib_tag=se&hvadid=651687 588880&hvdev=c&hvexpln=0& hvlocphy=1009309&hvnetw=g& hvocijid=5538300633798619650 --&hvqmt=e&hvrand=55383006 33798619650&hvtargid=kwd-33 4267191534&hydadcr=4289_13 319726&jp-ad-ap=0&keywords= %E3%82%BF%E3%83%9F%E3 %83%A4+%E9%9B%BB%E5% 8B%95%E3%83%8F%E3%83% B3%E3%83%87%E3%82%A3% E3%83%89%E3%83% 83%AB&mcid=6b8ff8c984ba3d45 be477b407ef2d1ba&qid=1767395 580&sr=8-2
hand drill	VEAGIA	N/A	https://www.amazon.co.jp/dp/B0D2 9B4W18/ref=sspa_dk_detail_5?pd _rd_i=B0D29B4W18&pd_rd_w=xe kNz&content-id=amzn1.sym.f293b e60-50b7-49bc-95e8-931faf86ed1e &pf_rd_p=f293be60-50b7-49bc-95e8 -931faf86ed1e&pf_rd_r=HPW6B367R QC0VPB7WTTS&pd_rd_wg=E8mAS &pd_rd_r=dbeb0aa7-1bea-4f40-99dd -38bcb05c8234&sp_csd=d2lkZ2V0T mFtZT1zcF9kZXRhaWw&th=1
Medetomidine	FUJIFILM	135-17473
Midazolam	FUJIFILM	135-13791
Pin vise	ANEX	N/A	https://www.amazon.co.jp/%E3%82% A2%E3%83%8D%E3%83%83%E3% 82%AF%E3%82%B9-ANEX-%E3% 83%A9%E3%83%90%E3%83%BC %E3%82%B0%E3%83%A9%E3% 83%83%E3%83%91%E3%83% 9F-%E3%83%94%E3% %83%B3%E3%83%90%E3% 82%A4%E3%82%B9%E5%8F% 8E%E7%B4%8D%E5%BC%8F -No-98-R/dp/B000T4D0XQ/