سوفورا فلافيسنس ذات خمس نكهات: كبسولات مغطاة بالأمعاء تخفف من التهاب القولون التجريبي والتغيرات المرتبطة بفيروس فيروبوتوسيس

ملخص

في نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي، خففت كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات من إصابة القولون وحسنت الإجهاد التأكسدي، واختلال توازن السيتوكين الالتهابي، وإشارات JAK2/STAT3، وتغيرات في مؤشرات الفيروبوتوسيس.

الملخص

لا يزال التهاب القولون التقرحي صعب الإدارة لأن الخيارات العلاجية الفعالة والمستهدفة محدودة، وقد تساهم الإشارات التأكسدية، والإشارات الالتهابية، ومسارات موت الخلايا المنظمة في إصابة المخاط. قيمت هذه الدراسة ما إذا كانت كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات (FSEC) تخفف من التهاب القولون التجريبي، واستكشفت التغيرات المرتبطة بالإجهاد التأكسدي والالتهاب وعلامات الفيروبتوزيس. تم إنشاء نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي باستخدام التعرض الدوري لصوديوم 2.5٪ من كبريتات الدكستران، مع عامل نخر الورم ألفا التحدي. تمت معالجة الفئران بجرعة منخفضة أو متوسطة أو عالية من FSEC أو بمضاد TLR4 CRX-526 كتدخل إيجابي للضابطة. تم تقييم علم النسيج النفسي للقولون من خلال صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين. تم قياس مستويات ديسموتاز فائق أكسيد المصل، والكاتالاز، والجلوتاثيون، والميلوبروكسيداز، ومستويات Fe²⁺ باستخدام اختبارات كيميائية حيوية. تم قياس سيتوكينات نسيج القولون بواسطة اختبار العضلات المناعية المرتبطة بالإنزيم، وتم تقييم تعبير JAK2 وSTAT3 بواسطة الكيمياء المناعية، وتم تحليل تعبير GPX4 وFTH1 وACSL4 بواسطة البلوت الغربي. أدى علاج FSEC إلى تقليل إصابات مخاطية القولون وتسلل الخلايا الالتهابية، وزيادة مؤشرات مضادات الأكسدة، وخفض مستويات الميلوبروكسيداز. كما خفض FSEC مستويات TNF-α وIL-1α، وأعاد جزئيا مستويات IL-13، وارتبط بضعف تصبغ المناعة JAK2 وSTAT3. بالتوازي، حسن FSEC التغيرات المتعلقة بالمؤشرات المرتبطة بالفيروبتوزيس، بما في ذلك انخفاض مستويات Fe²⁺ وACSL4 وزيادة تعبير GPX4 وFTH1. تشير هذه النتائج إلى أن FSEC يخفف من التهاب القولون التقرحي التجريبي في الفئران، على الأقل جزئيا من خلال تحسين حالة الإجهاد التأكسدي، وتخفيف الإشارات الالتهابية، واستعادة ملفات العلامات المرتبطة بالفيروبتوسيس.

المقدمة

التهاب القولون التقرحي (UC) هو اضطراب التهابي مزمن يؤثر بشكل أساسي على الغشاء المخاطي القولوني والمستقيم، ويتميز بنوبات متكررة من التهاب الغشاء المخاطي، وتقرحات، وضعف وظيفة الحاجز ^1,2,3. على الرغم من أن القابلية الجينية، والعوامل البيئية، وخلل الحاجز الظهاري، وخلل المناعة قد تم اتهامات في مسببات أمراض الالتهاب التقرحي، إلا أن الآليات الكامنة وراء الإصابة المخاطية المستمرة لا تزال غير مفهومة بشكل كامل. العلاجات الدوائية الحالية، بما في ذلك الأمينوساليسيلات والكورتيكوستيرويدات ومثبطات المناعة والعوامل البيولوجية، يمكن أن تقلل من نشاط المرض لدى العديد من المرضى؛ ومع ذلك، قد يكون استخدامها السريري محدودا بسبب الانتكاس بعد توقف العلاج، والآثار الجانبية، والتكلفة العالية، وعدم اكتمال الاستجابات العلاجية³.

الفيروبتوزيس، وهو شكل يعتمد على الحديد من موت الخلايا المنظم ويتميز بتكسيد الدهون وتغير أيض الحديد، أصبح مرتبطا بشكل متزايد بالتهاب الأمعاء وإصابة الظهارة المرتبطة بالالتهاب القوليلي ^4,5,6,7,8. بالتوازي، جذبت تركيبات الطب الصيني التقليدي اهتماما متزايدا كنهج مكمل لعلاج القولون التقرحي بسبب إمكاناتها العلاجية متعددة الأهداف⁹.

تستخدم كبسولات سوفورا فلافيسنس المغطاة بخمس نكهات (FSEC) سريريا لعلاج التهاب القولون التقرحية النشط الخفيف إلى المتوسط في الطب الصيني التقليدي. تشير الدراسات السابقة إلى أن FSEC قد يحسن أعراض القولون التقرحية من خلال آليات متعددة المكونات والأهداف¹⁰. ومع ذلك، لا تزال تأثيرات FSEC على الإجهاد التأكسدي، والإشارات الالتهابية، ونشاط JAK2/STAT3، والتغيرات المرتبطة بالفيروبتوزيس في التقرحية التجريبية غير موصوفة بشكل كاف.

الإجهاد التأكسدي والإشارات الالتهابية هما من العوامل المهمة في إصابة الجهاز المخاطي في الالتهاب التقرئوي. يمكن أن يؤدي الإنتاج المفرط لأنواع الأكسجين التفاعلية إلى تعطيل سلامة الظهارة، وتعزيز تسرب الخلايا الالتهابية، وإضعاف أنظمة الدفاع المضادة للأكسدة. المسارات التي توسطها السيتوكينات مثل إشارات JAK2/STAT3 تساهم في تضخيم الالتهاب وإصابة الأنسجة^{11،12،13،14،15}. بالإضافة إلى ذلك، يرتبط الإجهاد التأكسدي والفيروبتوسيس ارتباطا وثيقا من خلال تغييرات في دفاعات مضادات الأكسدة، واستقلاب الحديد، وتكسيد البيروبيدات 16,17,18,19,20. لذلك، قد يوفر التقييم المتزامن لمؤشرات الإجهاد التأكسدي، والسيتوكينات الالتهابية، وإشارات JAK2/STAT3، والمؤشرات المرتبطة بالفيروبتوسيس فهما أكثر شمولا لإصابة الغشاء المخاطي والاستجابات العلاجية في التجارب التقرحية التقرحية.

في هذه الدراسة، تم استخدام نموذج فأر متحدى عامل نخر الورم الحلقي لتقييم تأثيرات FSEC منخفضة ومتوسطة وعالية الجرعة من كبريتات الدكستران. من نقاط القوة المنهجية الرئيسية لهذا التصميم دمج التقييم النسيجي المرضي مع قياسات مؤشرات الإجهاد التأكسدي في المصل، وأجهزة السيتوكينات في أنسجة القولون، والكيمياء المناعية JAK2/STAT3، وتحليل البلوت الغربي للبروتينات المرتبطة بالفيروبتوزيس ضمن إطار تجريبي واحد. تم استخدام هذا النهج لتحديد ما إذا كان FSEC يخفف من التقرحية التقرحية التجريبية ولتوصيف التغيرات المرتبطة في الإجهاد التأكسدي، والإشارات الالتهابية، وملفات العلامات المرتبطة بالفيروبوتوسيس. يتم تلخيص التصميم التجريبي العام وسير العمل التحليلي في الشكل 1.

الشكل 1: سير العمل التجريبي لنموذج الفأر والتحليلات التالية. تم تحفيز التهاب القولون التقرحي التجريبي المزمن نتيجة التعرض الدوري ل 2.5٪ من كبريتات الدكستران الصوديوم (DSS) مع تحدي عامل نخر الورم ألفا (TNF-α) خلال الأسبوع الأخير من البروتوكول التجريبي. تم توزيع الفئران على مجموعات ضابطة طبيعية، ونماذج للنماذج، وFSEC بجرعة منخفضة، وFSEC بجرعة متوسطة، وجرعة عالية، وCRX-526 إيجابي الضابطة. تم إعطاء FSEC عن طريق التشهيق داخل المعدة بجرعات 108 أو 216 أو 432 ملغ/كجم من وزن الجسم. تم استخدام CRX-526 كتدخل إيجابي للضابطة. بعد العلاج النهائي، تم جمع عينات للتقييم النسيجي المرضي، والاختبارات الكيميائية الحيوية المرتبطة بالإجهاد التأكسدي، وتحليل السيتوكين بواسطة ELISA، والكيمياء المناعية، وتحليل البلطات الغربية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع إجراءات الحيوانات والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية وأخلاقيات الحيوان في كلية نانتشانغ الطبية (رقم الموافقة). NY2SC 20250407). أجريت جميع التجارب وفقا للإرشادات المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. المواد الكيميائية والكواشف والمعدات مدرجة في جدول المواد.

1. الحيوانات والمعاملة

تم استخدام فئران ذكور C57BL/6J (النوع البري، عمرها 8 أسابيع) في هذه الدراسة. تم إيواء الحيوانات في ظروف مختبرية قياسية مع تحكم في درجة الحرارة والرطوبة وتم توفير وصول مجاني للطعام والماء. بعد التكيف، تم تحفيز التهاب القولون المزمن عن طريق إعطاء ثلاث دورات من 2.5٪ ديكستران سلفات الصوديوم (DSS) في ماء الشرب. كل دورة استمرت أسبوعا واحدا وكانت تفصل بينها فترة تعافي مدتها أسبوعان مع مياه شرب منتظمة. خلال الأسبوع الأخير من البروتوكول التجريبي، تلقت الفئران في مجموعتي النموذج والعلاج عامل نخر الورم ألفا (TNF-α؛ 10 ميكروغرام/100 جرام وزن الجسم، مرتين يوميا) بواسطة التمقم داخل المعدة لزيادة تفاقم إصابة القولون. تلقت الفئران الضابطة العادية مركبة فقط ولم تتعرض لDSS أو TNF-α.

تم استخدام كبسولات سوفورا فلافيسنس المغطاة بخمس نكهات (FSEC) كدواء صيني معتمد ومعتمد تجاريا متاحا تجاريا. احتوت التركيبة على Sophora flavescens Aiton، Sanguisorba officinalis L.، Indigo naturalis، Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f.، و Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC. تم وزن محتويات الكبسولات من نفس دفعة الإنتاج وتعليقها في ماء مقطر معقم لتحضير تعليقات جرعات جديدة قبل الإعطاء. تم خلط التعليق جيدا قبل كل تشويش لضمان توزيع موحد. مصدر المنتج، رقم الموافقة، مواصفات الأدوية، ومعلومات مراقبة الجودة متوفرة في جدول المواد. تم وصف جودة المنتج وفقا لمواصفات الأدوية المعتمدة والمعلومات المقدمة من الشركة المصنعة، بما في ذلك مواصفات الكبسولة، ومتطلبات المظهر، ومتطلبات الإطلاق المعوي والتفكك، ومتطلبات الحد الميكروبي، ومعايير مراقبة الجودة.

تلقت الفئران المعالجة ب FSEC جرعة منخفضة (108 ملغ/كجم وزن الجسم)، أو FSEC بجرعة متوسطة (216 ملغ/كغ وزن الجسم)، أو جرعة عالية (432 ملغ/كغ وزن الجسم) عن طريق التقاوس داخل المعدة مرتين يوميا خلال الأسبوع الأخير من النمذجة. تم اختيار مستويات الجرعة بناء على الجرعة السريرية المعتمدة، وتحويل مساحة الجسم إلى سطح الجسم، والاعتبارات الأولية لتحديد الجرعات. تلقت الفئران المعالجة بالمركبات نفس حجم الماء المقطر المعقم بواسطة التجويز داخل المعدة.

تلقت مجموعة الضابط الإيجابية مضاد TLR4 CRX-526 بجرعة 1 ملغ/كغ عن طريق حقن وريد الذيل خلال الأسبوع الأخير من النمذجة. تم استخدام CRX-526 كعلاج مضاد للالتهاب مرجعي. شملت الدراسة ست مجموعات (n = 6 لكل مجموعة): مجموعة ضابطة طبيعية، نموذج، FSEC جرعة منخفضة، FSEC جرعة متوسطة، FSEC جرعة عالية، وCRX-526 إيجابي الضابطة. تم التضحية بالفئران بعد 24 ساعة من آخر علاج دراسي. تم تنفيذ القتل الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم تحت تخدير إيزوفلوران، وفقا للإرشادات المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

2. التقييم النسيجي بواسطة تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين

تم جمع أنسجة القولون من المنطقة الأكثر تأثرا من الناحية المكلية بين فتحة الشرج ومنطقة اللفائفي القرنية. لكل فأر، تم تثبيت جزء ممثل من القولون من هذه المنطقة في فورمالين مخزن 10٪ متعادل، مدمجة في البارافين، وتم تقسيمها وصبغها بالهيماتوكسيلين والإيوزين. للتقييم الأنسيجي، تم إعداد ثلاثة أقسام على الأقل من كل حيوان، وتم فحص خمسة حقول عالية القدرة غير متداخلة لكل قسم. تم اختيار الحقول بشكل منهجي عشوائيا عن طريق مسح المقطع من حافة إلى أخرى، مع تجنب المناطق الممزقة أو المطوية أو الملونة بشكل سيء. تم تقييم التغيرات النسيجية، بما في ذلك تقرحات الغدد المخاطية، وتدمير الغدد، والاحتقان، وتسرب الخلايا الالتهابية، تحت المجهر الضوئي.

3. قياس المؤشرات الكيميائية الحيوية المرتبطة بالإجهاد التأكسدي

تم جمع عينات دم (0.5 مل) في أنابيب تحتوي على مضادات التخثر وتم طردها على حرارة تقارب 1160 × جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم جمع المادة الفائقة واستخدامها لقياس مستويات الحديد في المصل، وإنزيم الأكسجين الفائق (SOD)، والجلوتاثيون (GSH)، والكاتالاز (CAT)، والميلوبروكسيداز (MPO) باستخدام مجموعات التحليل المقابلة المدرجة في جدول المواد وفقا لتعليمات المصنعين.

4. التحليل الكيميائي المناعي لنظام JAK2 و STAT3

تم إزالة البارافين من أنسجة القولون المدمجة بالبارافين (5 ميكرومتر) في زيلين، وأعيد ترطيبها عبر سلسلة إيثانول متدرجة، وشطفها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات. تم استرجاع المستضدات في مخزن السيترات (pH 6.0) باستخدام التسخين بالميكروويف. بعد التبريد إلى درجة حرارة الغرفة، تم حجب نشاط البيروكسيداز الداخلي بنسبة 3٪ H₂O₂ لمدة 10 دقائق. تم حجب الأقسام بمصل ماعز طبيعي بنسبة 5٪ لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وحضنتها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد JAK2 وSTAT3 عند تخفيف 1:50 و1:80 على التوالي. بعد غسلات محلول ملحي مخزف بالفوسفات، تم حضن الأقسام بجسم مضاد ثانوي مرافق مع بيروكسيداز الفجل الحار وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم رصد الإشارات المناعية الفعالة باستخدام 3,3′-ديامينوبينزيدين، وتم تلوينها بالهيماتوكسيلين على النوى. تم تجفيف الأقسام وتركيبها وفحصها تحت المجهر الضوئي.

5. قياس السيتوكين بواسطة اختبار التوربينت المناعي المرتبط بالإنزيمات

تم تقطيع أنسجة القولون إلى قطع بحجم 2–3 مم³ ، وتجانس على الجليد في محلول ملحي مخزن بالفوسفات، وتم تمركزها في 12,000 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم جمع المادة الفائقة، وتم قياس تركيزات TNF-α وIL-1α وIL-13 باستخدام مجموعات ELISA المقابلة وفقا لتعليمات المصنعين. تم قياس قيم الامتصاص باستخدام قارئ ميكروبلايت، وتم حساب تركيزات السيتوكين من منحنيات قياسية مولدة لكل اختبار.

6. تحليل البقعة الغربية للبروتينات المرتبطة بالفيروبتوزيس

تم استخراج البروتينات الكلية من أنسجة القولون، وتم تحديد تركيزات البروتين باستخدام اختبار حمض البيسينكونينيك. تم فصل كميات متساوية من البروتين من كل عينة بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى الأغشية. بعد الحجب بحليب خالي من الدهون بنسبة 5٪ أو حاجز مكافئ لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة، تم حضان الأغشية طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد GPX4 وFTH1 وACSL4 وبروتين التحكم في التحميل β أكتين، كما هو موضح في جدول المواد. في اليوم التالي، تم غسل الأغشية وحضانتها بالجسم المضاد الثانوي المصاحب للبيروكسيداز الفجل الحار لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. تم تصور أشرطة البروتين باستخدام ركيزة كيميائية مضيئة وتصويرها باستخدام نظام تصوير تلألؤ كيميائي. تم قياس شدة النطاقات باستخدام برامج قياس الكثافة. تم تطبيع مستويات التعبير من GPX4 وFTH1 وACSL4 إلى β-أكتين، وتم حساب التعبير النسبي للبروتين للتحليل الإحصائي.

7. التحليل الإحصائي

تعرض البيانات كمتوسط ± انحراف معياري (SD). أجريت مقارنات بين مجموعات متعددة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه، تلاها اختبار بونفيروني بعد الوقوع عندما تم تحقيق افتراضات الطبيعية وتجانس التباين. تم اعتبار قيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

يخفف FSEC من الإصابة النسيجة المرضية ويحسن مؤشرات الإجهاد التأكسدي في الفئران المصابة بالتهاب القولون التقرحي
كما هو موضح في الشكل 2، أظهرت المجموعة الضابطة الطبيعية بنية مخاطية قولونية سليمة، مع غدد منظمة جيدا وأقل تسلل للخلايا الالتهابية. في المقابل، أظهرت مجموعة النموذج إصابة مخاطية شديدة تميزت بتمزق الظهارة، وتقرحات مخاطية، وتدمير الغدد، واحتقان، وتسرب ملحوظ للخلايا الالتهابية. مقارنة بمجموعة النموذج، أظهرت الفئران التي عولجت بجرعة عا...

المناقشة

بحثت هذه الدراسة في تأثيرات كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات (FSEC) في نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي التجريبي (UC)، وقيمت التغيرات المرتبطة في مؤشرات الإجهاد التأكسدي، والسيتوكينات الالتهابية، وإشارات JAK2/STAT3، والمؤشرات المرتبطة بالفيروبتوسيس. كانت النتائج الرئيسية أن علاج FSEC خفف من الإصابات النسيجية القولونية، وحسن المؤشرات الكيميائية الحيوية المرتبطة بمضادات الأكسدة، وخفض مستويات TNF-α وIL-1α، وأعاد جزئيا مستويات IL-13، وكان مرتبطا بتلوين مناعي ضعيف ل JAK...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
3,3′-Diaminobenzidine (DAB) substrate kit	ZSGB-BIO	ZLI-9018	مادة كروماتوغرافية لمادة HRP-based immunohistochemistry.
ACSL4 antibody (F-4)	Santa Cruz Biotechnology	sc-365230	جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لمادة western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:500؛ RRID: AB_10842002.
Antigen retrieval solution, citrate buffer, pH 6.0	Beyotime Biotechnology	P0081	محلول استرجاع المستضد المعتمد على الحرارة لمادة immunohistochemistry المثبتة بالبارافين.
BCA protein assay kit	Beyotime Biotechnology	P0012	محلول قياس كمية البروتين قبل فحص western blot.
C57BL/6J mice	Fujian Anburui Biotechnology Co., Ltd.	N/A	فئران SPF ذكور، بعمر 8 أسابيع؛ مصدر الحيوانات متوافق مع مواد الموافقة الأخلاقية المرسلة.
Catalase (CAT) assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A007-1-1	محلول قياس نشاط مادة CAT في المصل بطريقة لونية.
ChemiDoc XRS+ imaging system	Bio-Rad Laboratories	1708265	نظام تصوير بالكيمياء الضوئية لكشف western blot.
CRX-526	TargetMol	T27090	مضاد TLR4 يُستخدم كتدخل تحكم إيجابي؛ رقم CAS 245515-64-4.
Dextran sulfate sodium salt (DSS), colitis grade	MP Biomedicals	160110	DSS، درجة التهاب القولون، الوزن الجزيئي 36,000–50,000 Da؛ يُستخدم بنسبة 2.5٪ في ماء الشرب.
ECL chemiluminescent substrate	Bio-Rad Laboratories	1705061	مادة Clarity Western ECL للكشف عن إشارات western blot المستندة إلى HRP.
ELISA kit, mouse IL-13	Abcam	ab219634	محلول ELISA قياسي لوني لمادة IL-13 في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر.
ELISA kit, mouse IL-1α	Abcam	ab199076	محلول ELISA قياسي لوني لمادة IL-1α في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر.
ELISA kit, mouse TNF-α	Abcam	ab208348	محلول ELISA قياسي لوني لمادة TNF-α في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر.
Ethanol, absolute	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	10009218	يُستخدم لمعالجة الأنسجة، الجفاف، وإعداد المواد الكيميائية.
Ferrous iron (Fe2+) assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A039-2-1	محلول قياس Fe2+ بطريقة لونية في عينات المصل أو الأنسجة.
Five-flavor Sophora flavescens enteric-coated capsules	Beijing Zhonghui Pharmaceutical Co., Ltd.	NMPA approval no. Z20150002	دواء صينى براءة اختراع؛ 0.4 غرام/كبسولة؛ التركيبة تتضمن Sophora flavescens Aiton، Sanguisorba officinalis L.، Indigo naturalis، Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f.، و Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC.؛ المواصفات الصيدلانية YBZ00152015
Glutathione (GSH) assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A006-2-1	محلول قياس مادة GSH المخفضة في المصل.
GPX4 antibody (E-12)	Santa Cruz Biotechnology	sc-166570	جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لمادة western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:500؛ RRID: غير مدرج في بيانات المورد.
Hematoxylin and eosin staining kit	Solarbio	G1120	صبغة هيماتوكسيلين و إيوزين للأنسجة المثبتة بالبارافين.
Horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG	Santa Cruz Biotechnology	sc-2005	جسم مضاد ثانوي لكشف western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:50,000؛ RRID: AB_631736.
ImageJ software	National Institutes of Health	Version 1.54	برنامج تحليل الصور وقياس الكثافة المُستخدم لتحديد كمية فرق western blot.
Immunohistochemistry detection kit	ZSGB-BIO	PV-9000	مجموعة كشف HRP على أساس البوليمر لكشف immunohistochemistry المثبت بالبارافين.
JAK2 antibody (D2E12)	Cell Signaling Technology	3230	جسم مضاد أحادي النسيلة أرانبي لكشف JAK2 في الأنسجة المثبتة بالبارافين؛ RRID: AB_2128522.
Microplate reader	BioTek Instruments	Synergy H1	قارئ ألواح لقياس امتصاص ELISA عند 450 نانومتر.
Myeloperoxidase (MPO) activity assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A044-1-1	محلول قياس نشاط مادة MPO في المصل بطريقة لونية.
Neutral buffered formalin, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128	تثبيت أنسجة القولون قبل تغليفها بالبارافين.
Normal goat serum	Solarbio	SL038	مادة سدادة للكشف المناعي.
Paraffin	Leica Biosystems	39601006	وسط تغليف لمعالجة أنسجة القولون.
Phosphate-buffered saline (PBS)	Solarbio	P1020	محلول عازل لعمليات تجانس الأنسجة، والغسل، والكشف المناعي.
PVDF membrane	MilliporeSigma	IPVH00010	غشاء نقل البروتين لفحص western blot.
Recombinant mouse TNF-α protein	R&D Systems	410-MT	بروتين TNF-α في الفئران مستنسخ ومُستخدم في التحدي الالتهابي في الأسبوع الأخير.
SDS-PAGE and transfer system	Bio-Rad Laboratories	1658004	نظام Mini-PROTEAN Tetra لفحص SDS-PAGE ونقل western blot.
SPSS Statistics software	IBM	Version 24.0	برنامج تحليل إحصائي لاختبار ANOVA ذو الاتجاه الواحد واختبار Bonferroni اللاحق.
STAT3 antibody (124H6)	Cell Signaling Technology	9139	جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لكشف STAT3 في الأنسجة؛ RRID: AB_331757.
Superoxide dismutase (SOD) assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A001-3-2	محلول قياس نشاط مادة SOD في المصل بطريقة WST-1.
Xylene	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	10023418	محلول إزالة الشمع للأنسجة المثبتة بالبارافين.
β-actin antibody (C4)	Santa Cruz Biotechnology	sc-47778	جسم مضاد أحادي النس