في نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي، خففت كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات من إصابة القولون وحسنت الإجهاد التأكسدي، واختلال توازن السيتوكين الالتهابي، وإشارات JAK2/STAT3، وتغيرات في مؤشرات الفيروبوتوسيس.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
في نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي، خففت كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات من إصابة القولون وحسنت الإجهاد التأكسدي، واختلال توازن السيتوكين الالتهابي، وإشارات JAK2/STAT3، وتغيرات في مؤشرات الفيروبوتوسيس.
لا يزال التهاب القولون التقرحي صعب الإدارة لأن الخيارات العلاجية الفعالة والمستهدفة محدودة، وقد تساهم الإشارات التأكسدية، والإشارات الالتهابية، ومسارات موت الخلايا المنظمة في إصابة المخاط. قيمت هذه الدراسة ما إذا كانت كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات (FSEC) تخفف من التهاب القولون التجريبي، واستكشفت التغيرات المرتبطة بالإجهاد التأكسدي والالتهاب وعلامات الفيروبتوزيس. تم إنشاء نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي باستخدام التعرض الدوري لصوديوم 2.5٪ من كبريتات الدكستران، مع عامل نخر الورم ألفا التحدي. تمت معالجة الفئران بجرعة منخفضة أو متوسطة أو عالية من FSEC أو بمضاد TLR4 CRX-526 كتدخل إيجابي للضابطة. تم تقييم علم النسيج النفسي للقولون من خلال صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين. تم قياس مستويات ديسموتاز فائق أكسيد المصل، والكاتالاز، والجلوتاثيون، والميلوبروكسيداز، ومستويات Fe2⁺ باستخدام اختبارات كيميائية حيوية. تم قياس سيتوكينات نسيج القولون بواسطة اختبار العضلات المناعية المرتبطة بالإنزيم، وتم تقييم تعبير JAK2 وSTAT3 بواسطة الكيمياء المناعية، وتم تحليل تعبير GPX4 وFTH1 وACSL4 بواسطة البلوت الغربي. أدى علاج FSEC إلى تقليل إصابات مخاطية القولون وتسلل الخلايا الالتهابية، وزيادة مؤشرات مضادات الأكسدة، وخفض مستويات الميلوبروكسيداز. كما خفض FSEC مستويات TNF-α وIL-1α، وأعاد جزئيا مستويات IL-13، وارتبط بضعف تصبغ المناعة JAK2 وSTAT3. بالتوازي، حسن FSEC التغيرات المتعلقة بالمؤشرات المرتبطة بالفيروبتوزيس، بما في ذلك انخفاض مستويات Fe2⁺ وACSL4 وزيادة تعبير GPX4 وFTH1. تشير هذه النتائج إلى أن FSEC يخفف من التهاب القولون التقرحي التجريبي في الفئران، على الأقل جزئيا من خلال تحسين حالة الإجهاد التأكسدي، وتخفيف الإشارات الالتهابية، واستعادة ملفات العلامات المرتبطة بالفيروبتوسيس.
التهاب القولون التقرحي (UC) هو اضطراب التهابي مزمن يؤثر بشكل أساسي على الغشاء المخاطي القولوني والمستقيم، ويتميز بنوبات متكررة من التهاب الغشاء المخاطي، وتقرحات، وضعف وظيفة الحاجز 1,2,3. على الرغم من أن القابلية الجينية، والعوامل البيئية، وخلل الحاجز الظهاري، وخلل المناعة قد تم اتهامات في مسببات أمراض الالتهاب التقرحي، إلا أن الآليات الكامنة وراء الإصابة المخاطية المستمرة لا تزال غير مفهومة بشكل كامل. العلاجات الدوائية الحالية، بما في ذلك الأمينوساليسيلات والكورتيكوستيرويدات ومثبطات المناعة والعوامل البيولوجية، يمكن أن تقلل من نشاط المرض لدى ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت مراجعة جميع إجراءات الحيوانات والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية وأخلاقيات الحيوان في كلية نانتشانغ الطبية (رقم الموافقة). NY2SC 20250407). أجريت جميع التجارب وفقا للإرشادات المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. المواد الكيميائية والكواشف والمعدات مدرجة في جدول المواد.
1. الحيوانات والمعاملة
تم استخدام فئران ذكور C57BL/6J (النوع البري، عمرها 8 أسابيع) في هذه الدراسة. تم إيواء الحيوانات في ظروف مختبرية قياسية مع تحكم في درجة الحرارة والرطوبة وتم توفير وصول مجاني للطعام والماء. بعد التكيف، تم تحفيز التهاب القولون المزمن عن طريق إعطاء ثلاث ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يخفف FSEC من الإصابة النسيجة المرضية ويحسن مؤشرات الإجهاد التأكسدي في الفئران المصابة بالتهاب القولون التقرحي
كما هو موضح في الشكل 2، أظهرت المجموعة الضابطة الطبيعية بنية مخاطية قولونية سليمة، مع غدد منظمة جيدا وأقل تسلل للخلايا الالتهابية. في المقابل، أظهرت مجموعة النموذج إصابة مخاطية شديدة تميزت بتمزق الظهارة، وتقرحات مخاطية، وتدمير الغدد، واحتقان، وتسرب ملحوظ للخلايا الالتهابية. مقارنة بمجموعة النموذج، أظهرت الفئران التي عولجت بجرعة عا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بحثت هذه الدراسة في تأثيرات كبسولات Sophora flavescens المغطاة بخمس نكهات (FSEC) في نموذج فأر لالتهاب القولون التقرحي التجريبي (UC)، وقيمت التغيرات المرتبطة في مؤشرات الإجهاد التأكسدي، والسيتوكينات الالتهابية، وإشارات JAK2/STAT3، والمؤشرات المرتبطة بالفيروبتوسيس. كانت النتائج الرئيسية أن علاج FSEC خفف من الإصابات النسيجية القولونية، وحسن المؤشرات الكيميائية الحيوية المرتبطة بمضادات الأكسدة، وخفض مستويات TNF-α وIL-1α، وأعاد جزئيا مستويات IL-13، وكان مرتبطا بتلوين مناعي ضعيف ل JAK.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.
وقد دعمت هذه الدراسة مشروع خطة العلوم والتكنولوجيا التابع للجنة الصحة الإقليمية في جيانغشي (رقم المنحة 202310195 ورقم 2023B0025).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 3,3′-Diaminobenzidine (DAB) substrate kit | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | مادة كروماتوغرافية لمادة HRP-based immunohistochemistry. |
| ACSL4 antibody (F-4) | Santa Cruz Biotechnology | sc-365230 | جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لمادة western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:500؛ RRID: AB_10842002. |
| Antigen retrieval solution, citrate buffer, pH 6.0 | Beyotime Biotechnology | P0081 | محلول استرجاع المستضد المعتمد على الحرارة لمادة immunohistochemistry المثبتة بالبارافين. |
| BCA protein assay kit | Beyotime Biotechnology | P0012 | محلول قياس كمية البروتين قبل فحص western blot. |
| C57BL/6J mice | Fujian Anburui Biotechnology Co., Ltd. | N/A | فئران SPF ذكور، بعمر 8 أسابيع؛ مصدر الحيوانات متوافق مع مواد الموافقة الأخلاقية المرسلة. |
| Catalase (CAT) assay kit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A007-1-1 | محلول قياس نشاط مادة CAT في المصل بطريقة لونية. |
| ChemiDoc XRS+ imaging system | Bio-Rad Laboratories | 1708265 | نظام تصوير بالكيمياء الضوئية لكشف western blot. |
| CRX-526 | TargetMol | T27090 | مضاد TLR4 يُستخدم كتدخل تحكم إيجابي؛ رقم CAS 245515-64-4. |
| Dextran sulfate sodium salt (DSS), colitis grade | MP Biomedicals | 160110 | DSS، درجة التهاب القولون، الوزن الجزيئي 36,000–50,000 Da؛ يُستخدم بنسبة 2.5٪ في ماء الشرب. |
| ECL chemiluminescent substrate | Bio-Rad Laboratories | 1705061 | مادة Clarity Western ECL للكشف عن إشارات western blot المستندة إلى HRP. |
| ELISA kit, mouse IL-13 | Abcam | ab219634 | محلول ELISA قياسي لوني لمادة IL-13 في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر. |
| ELISA kit, mouse IL-1α | Abcam | ab199076 | محلول ELISA قياسي لوني لمادة IL-1α في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر. |
| ELISA kit, mouse TNF-α | Abcam | ab208348 | محلول ELISA قياسي لوني لمادة TNF-α في الفئران؛ قراءة عند 450 نانومتر. |
| Ethanol, absolute | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10009218 | يُستخدم لمعالجة الأنسجة، الجفاف، وإعداد المواد الكيميائية. |
| Ferrous iron (Fe2+) assay kit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A039-2-1 | محلول قياس Fe2+ بطريقة لونية في عينات المصل أو الأنسجة. |
| Five-flavor Sophora flavescens enteric-coated capsules | Beijing Zhonghui Pharmaceutical Co., Ltd. | NMPA approval no. Z20150002 | دواء صينى براءة اختراع؛ 0.4 غرام/كبسولة؛ التركيبة تتضمن Sophora flavescens Aiton، Sanguisorba officinalis L.، Indigo naturalis، Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f.، و Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC.؛ المواصفات الصيدلانية YBZ00152015 |
| Glutathione (GSH) assay kit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A006-2-1 | محلول قياس مادة GSH المخفضة في المصل. |
| GPX4 antibody (E-12) | Santa Cruz Biotechnology | sc-166570 | جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لمادة western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:500؛ RRID: غير مدرج في بيانات المورد. |
| Hematoxylin and eosin staining kit | Solarbio | G1120 | صبغة هيماتوكسيلين و إيوزين للأنسجة المثبتة بالبارافين. |
| Horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG | Santa Cruz Biotechnology | sc-2005 | جسم مضاد ثانوي لكشف western blot؛ يُستخدم بتركيز 1:50,000؛ RRID: AB_631736. |
| ImageJ software | National Institutes of Health | Version 1.54 | برنامج تحليل الصور وقياس الكثافة المُستخدم لتحديد كمية فرق western blot. |
| Immunohistochemistry detection kit | ZSGB-BIO | PV-9000 | مجموعة كشف HRP على أساس البوليمر لكشف immunohistochemistry المثبت بالبارافين. |
| JAK2 antibody (D2E12) | Cell Signaling Technology | 3230 | جسم مضاد أحادي النسيلة أرانبي لكشف JAK2 في الأنسجة المثبتة بالبارافين؛ RRID: AB_2128522. |
| Microplate reader | BioTek Instruments | Synergy H1 | قارئ ألواح لقياس امتصاص ELISA عند 450 نانومتر. |
| Myeloperoxidase (MPO) activity assay kit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A044-1-1 | محلول قياس نشاط مادة MPO في المصل بطريقة لونية. |
| Neutral buffered formalin, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | تثبيت أنسجة القولون قبل تغليفها بالبارافين. |
| Normal goat serum | Solarbio | SL038 | مادة سدادة للكشف المناعي. |
| Paraffin | Leica Biosystems | 39601006 | وسط تغليف لمعالجة أنسجة القولون. |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Solarbio | P1020 | محلول عازل لعمليات تجانس الأنسجة، والغسل، والكشف المناعي. |
| PVDF membrane | MilliporeSigma | IPVH00010 | غشاء نقل البروتين لفحص western blot. |
| Recombinant mouse TNF-α protein | R&D Systems | 410-MT | بروتين TNF-α في الفئران مستنسخ ومُستخدم في التحدي الالتهابي في الأسبوع الأخير. |
| SDS-PAGE and transfer system | Bio-Rad Laboratories | 1658004 | نظام Mini-PROTEAN Tetra لفحص SDS-PAGE ونقل western blot. |
| SPSS Statistics software | IBM | Version 24.0 | برنامج تحليل إحصائي لاختبار ANOVA ذو الاتجاه الواحد واختبار Bonferroni اللاحق. |
| STAT3 antibody (124H6) | Cell Signaling Technology | 9139 | جسم مضاد أحادي النسيلة فئراني لكشف STAT3 في الأنسجة؛ RRID: AB_331757. |
| Superoxide dismutase (SOD) assay kit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A001-3-2 | محلول قياس نشاط مادة SOD في المصل بطريقة WST-1. |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10023418 | محلول إزالة الشمع للأنسجة المثبتة بالبارافين. |
| β-actin antibody (C4) | Santa Cruz Biotechnology | sc-47778 | جسم مضاد أحادي النس |