مقالة منهجية

توليد هياكل تشبه عضويات الجزر المشتقة من نخاع العظم الميزنشيمي من نسيج بنكرياس طازج

DOI:

10.3791/70717

⸱

يونيو 5, 2026

 ,  , 
1Department of Histology and Embryology, School of Basic Medicine Science, Guangxi Medical University, 2Department of Surgical Nursing, Nursing College of Guangxi Medical University, 3Department of Human Anatomy, School of Basic Medical Sciences, Guangxi Medical University, 4Key Laboratory of Human Development and Disease Research, Education Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Guangxi Medical University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نقدم بروتوكولا لتمييز الخلايا الجذعية الميزنشيمية لنخاع العظم (BMSCs) إلى هياكل تشبه عضويات جزر البنكرياس باستخدام تحليل نسيج البنكرياس الخنزيري. تتكون هياكل شبيهة بالعضويات بعد 22 يوما. هذه الطريقة البسيطة والفعالة من حيث التكلفة تنتج هياكل مشابهة شكليا لجزر البنكرياس الصغيرة للدراسات المخبرية وفحص الأدوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باعتباره مرضا مزمنا شائعا حول العالم، يتميز مرض السكري (DM) باضطراب توازن الجلوكوز في الجسم. في مرض السكري من النوع الأول (T1DM)، تدمر الاستجابات المناعية الذاتية خلايا البنكرياس β بالكامل، مما يؤدي إلى نقص كامل في الأنسولين. يحتاج المرضى المصابون بهذه الحالة إلى علاج أنسولين إضافي مدى الحياة. تهدف الدراسة الحالية إلى إنشاء منصة زراعة موثوقة واقتصادية لتوليد هياكل تشبه عضويات جزر البنكرياس من خلايا جذعية ميزنكيمية في نخاع العظم (BMSCs). يمكن لهذه المنصة أن لا تخفف فقط من نقص الجزر المتبرعة للزراعة، بل تعمل أيضا كنموذج مخبري للأبحاث المتعلقة بالسكري.

من خلال تحسين عملية تحضير تحلل أنسجة البنكرياس الخنزيري (الطرد المركزي عند 12,000 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية، تليها ترشيح 0.22 ميكرومتر للتعقيم)، تم تحفيز BMSCs بنجاح على التمايز إلى هياكل عضوية تشبه الجزر البنكرياسية. أكد التحقق الشفهي أن BCSCs المستحثة فقط هي التي تشكل تجمعات مضغوطة وممتلئة وشفافة للغاية تشبه الجزر، بينما أظهرت القطع غير المستحثة تكوينا كبيرا وشفافية منخفضة.

أظهرت المراقبة الديناميكية أن تجمعات الخلايا (قطرها 50–100 ميكرومتر) تشكلت في اليوم السادس عشر من الزراعة وتطورت إلى هياكل تشبه الكبسولة (قطرها 200–300 ميكرومتر) بحلول اليوم الثاني والعشرين. هذه الطريقة بسيطة في التشغيل، وفعالة من حيث التكلفة، ولا تتطلب معدات معقدة. العضويات الناتجة تشبه من الناحية الشكلية جزر البنكرياس، مما يوفر أداة للدراسات المخبرية وفحص الأدوية ذات الصلة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كأنظمة نماذج ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد) في المختبر، ظهرت هياكل شبيهة بعضويات جزر البنكرياس كأدوات حاسمة في أبحاث السكري والطب التجديدي، نظرا لقدرتها على محاكاة التركيب الخلوي المتعدد والبنية المكانية لجزر البنكرياس الأصلية1. لا توفر هذه النماذج منصة فريدة لفهم بيولوجيا تطور الجزر والآليات المرضية للسكري 2,3 فحسب، بل تدعم أيضا تطوير علاجات استبدال الخلايا وأنظمة فحص الأدوية4. مع استمرار انتشار السكري في الارتفاع العالمي — وخاصة النقص التام في الأنسولين الناتج عن تلف الخلايا β غير القابل للعلاج في مرض السكري من النوع الأول — يمكن للعلاج التقليدي باستبدال الأنسولين السيطرة على الأعراض لكنه لا يعالج المرض. وفي الوقت نفسه، تواجه زراعة الجزر نقصا شديدا في المتبرعين، مما يجعل تطوير مصادر الجزر البديلة القابلة للتوسع أولوية عاجلة 1,5. من خلال الاستفادة من القدرة الموجهة للتمايز للخلايا الجذعية متعددة القدرات أو الخلايا الجذعية البالغة، قد تساعد تقنية الشبيهة بعضويات جزر البنكرياس في معالجة هذا القيد 6,7,8.

في السنوات الأخيرة، تم إحراز تقدم كبير في أنظمة زراعة تشبه عضويات جزر البنكرياس تعتمد على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) والخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة (iPSCs). أكدت عدة دراسات أنه من خلال تحسين بروتوكولات التحفيز وظروف الزراعة، يمكن للخلايا الجذعية التمايز إلى خلايا شبيهة بالجزر ذات وظائف إفراز الأنسولين تستجيب للجلوكوز10. مكنت الاختراقات في تكنولوجيا إعادة البرمجة الكيميائية من توليد hiPSCs دون التلاعب الجيني، مما حسن الإمكانات الانتقالية11. فيما يتعلق بأنظمة الزراعة، يمكن للزراعة ثلاثية الأبعاد مع تركيبات محددة من المصفوفة خارج الخلية وعوامل النمو أن تعزز التنظيم الذاتي لخلايا الجزر السلفية إلى هياكل عضوية تتكون من خلايا α و β و δ12. ومع ذلك، لا تزال التقنيات الحالية تواجه العديد من التحديات، بما في ذلك كفاءة التمايز غير المستقرة، ونضج وظيفي غير كاف، ونقص الشبكات الوعائية والبيئة الدقيقة المناعية — وهي عوامل رئيسية تحددالتطبيق الأوسع.

على الرغم من التقدم في أبحاث البنية العضوية الشبيهة ببنيد جزر البنكرياس، لا تزال هناك عدة قضايا علمية حاسمة في هذا المجال بحاجة إلى معالجة.14. أولا، غياب تعريفات وإجراءات بناء موحدة للعضويات يجعل من الصعب مقارنة النتائج مباشرة بين المختبرات المختلفة15. ثانيا، لا يمكن لأنظمة الزراعة الحالية أن تكرر بالكامل التركيب الخلوي المعقد والترتيب المكاني الدقيق لجزر البنكرياس الأصلية16. ثالثا، القضايا الأساسية مثل الاستقرار الوظيفي أثناء الزراعة العضوية طويلة الأمد والبقاء بعد الزراعة لا تزال غير موصوفة بشكل كاف17. بالإضافة إلى ذلك، لا تزال معظم البروتوكولات الحالية تعتمد على مواد مصفوفة مشتقة من الحيوانات، والتي تعاني من تركيب غير محدد وتفاوت كبير من دفعة إلى دفعة، مما يعيق مراقبة الجودة للتطبيقات السريرية18. تعيق هذه الفجوات المعرفية والتقنية بشكل كبير نقل هياكل تشبه العضويات الشبيهة بجزر البنكرياس من البحث الأساسي إلى الممارسة السريرية.

تم تصميم هذا البروتوكول لبناء نهج مستقر وميسور التكلفة وقابلا للتكرار لتوليد هياكل عضوية تشبه الجزر البنكرياسية باستخدام الخلايا الجذعية الميزانشيمية في نخاع العظم (BMSCs). الطريقة المعتمدة مخصصة للأبحاث التجريبية المخبرية وتطبيقات فحص الأدوية قبل السريري. تعاني الاستراتيجيات الحالية لتمييز الجزر الناتجة عن BMSC من عدة قيود، منها التكاليف المفرطة، والمعايير التشغيلية غير المتسقة، والتطبيق المحدود. تعتمد معظم أنظمة الحث الحالية على السيتوكينات المؤتلفة المكلفة، ومصفوفات الزراعة الاحترافية، وأجهزة الزراعة عالية الدقة، مما يحد بشكل كبير من استخدامها على نطاق واسع. لحل هذه العيوب، يعتمد البروتوكول الحالي على تحليل نسيج البنكرياس الخنزيري كعامل تحفيز أساسي. تتيح هذه الاستراتيجية المحسنة والمبسطة للزراعة التمييز الفعال بين الأنظمة الضخمة إلى هياكل تشبه الجزر الصغيرة مع معدات وظروف مختبرية روتينية فقط.

مقارنة بالطرق التقليدية التي تعتمد على hESCs أو iPSCs أو تركيبات عامل النمو عالي التكلفة، تقدم الاستراتيجية الحالية عدة مزايا عملية مميزة. يلغي الحاجة إلى كواشف باهظة الثمن وإعدادات زراعة معقدة، ويقلل من تكاليف التجريب، ويتيح نتائج متسقة مع أقل قدر ممكن من التباين بين الدفعات 10,11,12,13. على عكس أنظمة المصفوفة الجينية الغريبة، يستخدم هذا البروتوكول تحلل الأنسجة مبسط، مما يحسن قابلية التحكم التجريبية وقابلية التكرار عبر المختبرات 15,16,17,18. علاوة على ذلك، فإن الخلايا الجذعية متعددة القدرات سهلة الوصول، ومستقرة في الزراعة، وخالية من القيود الأخلاقية المرتبطة بالخلايا الجذعية متعددة القدرات، مما يجعل هذا النهج مناسبا بشكل خاص للاستخدام الروتيني في المختبر.

الأساليب البحثية الحالية منقسمة في مجال نمذجة البنكرياس العضوية: المنصات العضوية المتقدمة للتحول السريري مكلفة ومعقدة تقنيا، بينما النماذج البديلة المبسطة تفشل في دعم التحليل الوظيفي المتعمق. البروتوكول المقترح في هذا العمل يسد هذه الفجوة البحثية من خلال تقديم نظام تقني موحد وسيط. يحافظ هذا النهج على الخصائص الفسيولوجية الأساسية لجزر البنكرياس وهو متوافق تماما مع البيئات المخبرية التقليدية الأساسية. تعد أداة عملية للباحثين الذين يركزون على آليات تطور الجزر، ونمذجة أمراض السكري، والتقييم الأولي لمرشحي الأدوية، خاصة للفرق المجهزة ببنية تحتية روتينية لزراعة الخلايا ولكن تفتقر إلى منصات احترافية لزراعة الخلايا الجذعية. على الرغم من أن هذه الطريقة لا يمكنها توليد عضويات محصنة بالكامل أو مناعية كفؤة لأبحاث متقدمة محددة، إلا أنها مناسبة جدا للفحص التجريبي الأولي، والاستكشاف الميكانيكي، والتدريب الأكاديمي في أبحاث الجزر البيولوجية.

يركز هذا العمل على بناء نظام زراعة اقتصادي وموحى للهياكل العضوية الشبيهة بجزر البنكرياس، بهدف تقديم نموذج بحثي ثلاثي الأبعاد موثوق للدراسات المتعلقة بالسكري. من خلال تحليل منهجي لكيفية تأثير أنظمة الحث المتنوعة وبيئات الزراعة على كفاءة تكوين العضويات والخصائص الشكلية بشكل منهجي، يحاول هذا البحث اختراق العقبات التقنية الرئيسية التي تحد من التقدم في هذا المجال. تشمل الأهداف الأساسية للبحث ثلاثة جوانب رئيسية: إنشاء بروتوكول زراعة عالمي ينطبق على المختبرات الأساسية العادية بدون أجهزة متطورة، وصياغة معايير تقييم كمية لتقييم جودة العضويات، وتحسين استراتيجيات الزراعة للحفاظ على الاستقرار الشكلية والوظيفي للعضويات خلال الحضانة طويلة الأمد. يمكن أن توفر نتائج هذه الدراسة دعما تقنيا قويا للاستكشاف التجريبي في المختبر، مع بناء نموذج عملي وموثوق للبحث حول آليات تطور الجزر وفحص أدوية نقص السكر في الدم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات التجريبية التزمت بإرشادات رفاهية الحيوانات المختبرية المعتمدة من لجنة الأخلاقيات في جامعة قوانغشي الطبية (رقم الموافقة: SYXK 2014-0003)، وامتثلت للمدونات الأخلاقية لرعاية واستخدام الحيوانات المحددة في المبادئ التوجيهية الدولية للأبحاث الطبية الحيوية التي تشمل الحيوانات والتي صاغها مجلس المنظمات الدولية للعلوم الطبية (CIOMS).

يجب إجراء جميع العمليات المتعلقة بمعالجة الأنسجة وتحضير الكواشف في خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية لمنع التلوث. اترك ما لا يقل عن 8 ساعات لإكمال معالجة الأنسجة الطازجة وتحضير البنية العضوية الشبيهة بالبنية العضوية لجزر البنكرياس. احتفظ بجميع العينات والكواشف على التجميد طوال فترة التجربة.

1. التحضير التجريبي

  1. قتل الجرذان الصغيرة سبراج داولي (SD) التي تبلغ من العمر 7 أيام وهي ترضع عن طريق خلع عنقي. تخدير الخنازير المنزلية عن طريق الحقن الوريدي للبنتوباربيتال صوديوم بجرعة 20 ملغ/كغ، وتأكد من التخدير الكافي عن طريق اختفاء رد فعل انسحاب الدواسة ومعدل تنفس مستقر.
  2. معالجة أنسجة البنكرياس الخنازيري في خزانة أمان حيوي من الفئة الثانية تحت ظروف معقمة. معالجة أنسجة البنكرياس الخنازيري الطازجة خلال 24 ساعة من الجمع. تخزين عينات الأنسجة المجمعة عند 4 درجات مئوية في وسط DMEM كامل (كما هو موضح في الجدول 1) حتى المعالجة.
  3. قم بضبط جهاز الطرد المركزي المبرد على 4 درجات مئوية واختر وضع الطرد المركزي منخفض السرعة لتجنب تلف تحضيرات الخلايا. تخزين رؤوس الماصة بسعة 1000 ميكرولتر، وأطراف ماصة بسعة 200 ميكرولتر، وأنابيب طرد مركزي بسعة 50 مل في فريزر بدرجة حرارة −20 درجة مئوية حتى يتم استخدامها في التجربة. جهز ما يكفي من مرشحات معقمة بقدرة 0.22 ميكرومتر وحقن معقمة قابلة للتخلص منها بسعة 20 مل. قم بتعقيم المقصات العيونية، الملقط المنحني، أطباق البترى الزجاجية، والأمبولات عن طريق التعقيم بدرجة حرارة عالية (121 درجة مئوية، 20 دقيقة).
  4. قبل الاستخدام التجريبي، يتم تحليل نسيج البنكرياس المحضر بالكامل لتحليل النزيل. لتحقيق التناسق التجريبي الأمثل، يتم استخدام ماصة 100 ميكرولتر من التجانس إلى أنابيب منفصلة للطرد المركزي بسعة 1.5 مل للتخزين المنفصل والاستخدام اللاحق.

2. معالجة أنسجة البنكرياس الطازجة لتحضير بنية عضوية تشبه جزر البنكرياس

  1. اجمع عينات البنكرياس الطازجة من الخنازير ونقلها فورا إلى الثلج الجاف للحفاظ على النشاط البيولوجي للأنسجة. يتم شطف الأنسجة المكتسبة أولا بشكل متكرر باستخدام محلول ملحي طبيعي معقم عبر الماصات. بعد خطوات التنظيف الأولية، يستخدم 3 مل من محلول ملحي معقم بالفوسفات (PBS) للغسل الشامل لإزالة بقع الدم والملوثات الأنسجة تماما.
  2. قم بإزالة وتخلص من أي سائل متبقي من ألواح الزراعة المعقمة، ثم أضف إلى الألواح 2 مل من وسط DMEM. يتم تقطيع الأنسجة المعالجة مسبقا إلى شظايا منتظمة بحجم 1 مم³ باستخدام مقص عيوني معقم (الشكل 1A,B). تجمع جميع قطع الأنسجة المفروم في أنبوب طرد مركزي بسعة 50 مل، يتبعه عملية تفريغ ناعمة للأعلى والأسفل لمدة 10 مرات لتحقيق خلط متجانس.
  3. يتم توحيد الأنسجة باستخدام مدقة زجاجية معقمة (الشكل 1C). خلال عملية الطحن، يتم خلط شظايا نسيج البنكرياس بالتساوي مع وسط DMEM بنسبة حجم 1:1. يتم نقل نظام التعليق الأنسجي المتجانس بالكامل إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 50 مل ويخضع للطرد المركزي المبرد عالي السرعة عند 21,600 × جرام لمدة 30 دقيقة تحت ظروف 4 درجات مئوية.
  4. بعد الطرد المركزي، يتم استخراج المادة الشفافة المصفية ببطء باستخدام ماصة معقمة. ثم يمر الفائق المثبت المحجوز عبر مرشح معقم بحجم 0.22 ميكرومتر لإزالة الحطام الصغير من الأنسجة والشوائب غير المذابة (الشكل 1D). يتم تقسيم السائل المنقى أخيرا إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة بسعة 1.5 مل بحجم ثابت يبلغ 100 ميكرولتر لكل أنبوب للحفظ المغلق والتجارب اللاحقة (الشكل 1E).
  5. تخزين محفز البنية العضوية الشبيهة بالبنية العضوية في جزر البنكرياس عند −20 درجة مئوية.
    ملاحظة: يبقى المحفز مستقرا لمدة سنة واحدة تحت ظروف التخزين المناسبة. قيم نشاط الحث للمحلل المحضر من خلال الفحص البصري والتحريض الوظيفي. تحديد التحلل النشط من خلال مظهره الوردي الفاتح الشفاف دون أي هطول واضح؛ يتعرف على فقدان النشاط بسبب الهطول المرئي والفشل في تحفيز تكوين عضويات الجزر النموذجية.

3. تحضير وسط الحث

  1. جهز وسط الحث مباشرة قبل عمليات زراعة الخلايا. ادمج محفز عضوي البنكرياس المصنوع ذاتيا مع وسط DMEM عالي الجلوكوز يحتوي على 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS-H-DMEM) وفقا للنسبة المدرجة في الجدول 1.
  2. وضع عينات البنكرياس العضوية المزروعة في حاضنة خلايا محفوظة عند درجة حرارة ثابتة تبلغ 37 درجة مئوية مع تشبع ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ للزراعة المستمرة.

4. الملاحظة الشكلية ومراقبة نمو العضوية

  1. يتم إجراء المراقبة المجهرية في نقاط زمنية مجدولة طوال فترة الزراعة، بما في ذلك اليوم الأول، اليوم الثالث، اليوم السابع، اليوم العاشر واليوم الخامس عشر بعد بذر الخلايا.
  2. يتم اعتماد مجهر ضوئي لتتبع التغيرات الشكلية وظروف النمو والقدرة على البقاء الخلوية للهياكل الشبيهة بالخلايا العضوية في البنكرياس خلال كل جلسة كشف، لتسجيل خصائص النمو الديناميكية للبنى.

5. مرور وحفظ الأورجينويدات بالتجميد

  1. مرور البذرة 3 BMSCs بكثافة 1 × 105 خلايا لكل بئر في ألواح زراعة 6 آبار، والزراعة في وسط كامل طوال الليل للسماح بتثبيت الخلايا قبل التحفيز.
  2. أضف 1 مل من التربسين الذي يحتوي على 0.02٪ EDTA إلى نظام الزراعة. قم بعمل ماصة برفق على سطح طبق الزراعة 5–8 مرات لفصل عضويات البنكرياس من الطبق.
  3. أضف 2 مل من وسط H-DMEM-F12 بنسبة 10٪ لإنهاء هضم التربسين. قم بطرد المركزي بالخليط عند 1,500 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية باستخدام جهاز طرد مركزي مبرد. استنشق وتخلص من المادة الفائقة بعد الطرد المركزي.
  4. أضف ضعف حجم وسط FBS-H-DMEM الطازج بنسبة 10٪ إلى حبيبة الخلية لتحقيق نسبة مرور 1:2.
  5. قم بحفظ الزراعة العضوية بالتجميد كما يلي: أعد تعليق الحبيبات الخلوية التي تم الحصول عليها في 1 مل من محلول الحفظ بالتبريد الخالي من المصل. تخزين الأعضاء المعلقة عند −80 درجة مئوية للحفاظ على المدى القصير (حتى سنة واحدة) وفي النيتروجين السائل للتخزين طويل الأمد.
    ملاحظة: اضبط حجم الوسط الطازج لتحقيق نسب ممرات مختلفة. على سبيل المثال، استخدم نفس حجم الوسط الذي استخدمه في المقطع بنسبة 1:1، أو أضف 3 أضعاف حجم الوسط الابتدائي لمقطع بنسبة 1:3.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد تسجيل ديناميكيات نمو الثقافات الشبيهة بعضويات الجزر البنكرياسية مع مرور الوقت أمرا بالغ الأهمية، خاصة في الأسابيع الأولى من الزراعة، لأنه يسمح بالتنبؤ بأداء نظام الزراعة في التجارب اللاحقة. يوضح الشكل 2 مثالا على زراعة لمدة 22 يوما، حيث تم عزل BMSCs بكفاءة من نخاع العظم لفئران الرضيعة التي تبلغ من العمر 7 أيام، واستخدمت بنجاح لتوليد هياكل تشبه عضويات جزر البنكرياس. تم تأكيد هوية BMSCs من خلال التمايز الثلاثي الخطوط والتعبير عن علامات ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

داء السكري هو اضطراب أيضي عالمي، يصنف بشكل رئيسي إلى نوع السكري من النوع الأول (T1DM) والسكري من النوع الثاني (T2DM). T1DM هو مرض مناعي ذاتي يتميز بالتدمير الانتقائي لخلايا β في البنكرياس، مما يؤدي إلى نقص مطلق في الأنسولين19. يحتاج المرضى إلى علاج الأنسولين الخارجي مدى الحياة، لكنهم لا يزالون يواجهون مخاطر انخفاض سكر الدم الشديد والمضاعفات الميكروأوعية الدموية. زراعة الإنسولين هي حاليا الطريقة العلاجية الوحيدة التي يمكنها استعادة إفراز الأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعمت هذه الدراسة برنامج تدريب المواهب الشابة المتميزة في جامعة قوانغشي الطبية ومؤسسة علوم الشباب في جامعة قوانغشي الطبية (GXMUYSF202307)، وهو بناء تخصص من الدرجة الأولى — الطب ما قبل السريري (DC2300011025).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.22 μ m فلتر معقمميرك ميليبورSLGP033RBترشيح معقم لتحليل أنسجة البنكرياس لإزالة الشوائب والحطام
0.25٪ تريبسين (ضمن 0.02٪ EDTA)ويسنت325-043-CLتفكك بسيط لعضويات جزر البنكرياس لعملية المرور
أنابيب الطرد المركزي الدقيق بسعة 1.5 ملكورنينغ أكسجينAXY-20-1500تحليل وتخزين تحليل أنسجة البنكرياس (100 &mu؛ L لكل أنبوب)
10 μ نصائح L Pipetteإبندورف22491653نقل السائل للأجسام المضادة والمحاليل الإنزيمية صغيرة الحجم
1000 μ نصائح L Pipetteإبندورف22491651نقل السائل للكواشف وتعليق الخلايا
-20&de; الفريزرهايرHYC-326تخزين الكواشف (مثل FBS، التربسين) ورؤوس الماصات
200 μ نصائح L Pipetteإبندورف22491652نقل سائل دقيق للكواشف ذات الحجم الصغير (مثل تقسيم الليزات)
10 μ نصائح L PipetteهايرDW-86L626التخزين طويل الأمد لتحليل أنسجة البنكرياس والعضوية المحجوزة بالتجميد
أنابيب الطرد المركزي بسعة 50 ملكورنينغ430829الطرد المركزي عالي السرعة ومنخفض الحرارة لأنسجة البنكرياس المحللة وتعليق الخلايا
ألواح زراعة 6-آباركورنينغ3516زراعة عضويات جزر البنكرياس وBMSCs
خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانيةهايرHR40-IIA2المعالجة المعقمة لأنسجة البنكرياس الخنازيري وعمليات زراعة الأعضاء
حاضنة CO2ثيرمو فيشر العلمي3111حضانة عضويات جزر البنكرياس عند 37&g; C، 5٪ CO2
الملقط المنحنيشركة شنغهاي هواكي للأدوات الطبية المحدودةHQ-1302التعامل مع أنسجة البنكرياس أثناء المعالجة، معقم بدرجات حرارة عالية
متوسط DMEM (الجلوكوز العالي)ويسنت318-025-CLيستخدم في زراعة تحفيز العضوية في جزر البنكرياس
متوسط DMEM (منخفض الجلوكوز)ويسنت319-015-CLوسط قاعدي لزراعة BMSC ومعالجة الأنسجة
مصل الأبقار الجنيني (FBS)جيبكو (ثيرمو فيشر ساينتيفيك)10099141Cأضيف إلى DMEM بنسبة حجم 10٪ لزراعة الخلايا وإنهاء الهضم
H-DMEM-F12 متوسطويسنت315-080-CLيستخدم لإنهاء هضم التربسين أثناء مرور الأعضاء
جهاز الأوتوكلاف عالي الحرارةهايرGR80DAتعقيم الأدوات (121&درجة؛ C، 20 دقيقة) وأدوات زجاجية
المجهر الضوئيأوليمبوسCX43ملاحظة وتصوير عضويات جزر البنكرياس بتكبيرات مختلفة (&time; 4، &مرة؛ 10، &مرة؛ 20)
مقص العيونشركة شنغهاي هواكي للأدوات الطبية المحدودةHQ-1201تقطيع نسيج البنكرياس الخنزيري إلى 1 مم وأعلى 3؛ شظايا، معقمة بواسطة التداخل بدرجات حرارة عالية
محلول البنسلين-ستريبتوميسينثيرمو فيشر العلمي15140122يستخدم بنسبة حجم 1٪ لمنع التلوث البكتيري في وسط الزراعة
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)جيبكو (ثيرمو فيشر ساينتيفيك)10010023حاجز الغسيل لأنسجة البنكرياس الخنازيري وشطف الخلايا
الطرد المركزي المبردإبندورف5810Rالطرد المركزي عالي السرعة عند 4&00; C لتحضير الليزات في البنكرياس وجمع حبيبات الخلايا
حل الحفظ بالتبريد الخالي من المصلشركة سوتشو شينسايماي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.#C40050يستخدم لحفظ العضويات في جزر البنكرياس بالتبريد، مع تعليق حبيبات الخلايا قبل -80 درجة؛ تخزين C

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة