بروتوكول موحد لعلم الأيض لتحليل التحولات الأيضية الناتجة عن التمارين لدى الملاكمين النخبة باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة - مطيافية الكتلة

Summary

يصف هذا البروتوكول سير عمل موحد لاستقلاب المصل يعتمد على الكروماتوغرافيا السائلة مرتبطا بمطيافية الكتلة المزدوجة على زمن الطيران الرباعي الأقطاب (LC-QTOF-MS/MS) وتحليل البيانات متعددة المتغيرات لتحديد التحولات الأيضية الحادة والقصيرة الأمد المرتبطة بالتعافي لدى الملاكمين الذكور النخبة.

Abstract

الملاكمة النخبوية تحفز تغييرات أيضية سريعة لا تلتقط بالكامل من خلال القياسات الفسيولوجية التقليدية. تم تطبيق سير عمل موحد غير مستهدف لتحليل أيض المصل يعتمد على الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة المزدوجة رباعي الأقطاب (LC-QTOF-MS/MS) على عينات تم جمعها قبل المبارزة، مباشرة بعد المبارزة، و24 ساعة بعد المبارزة في سبعة ملاكمين نخبة ذكور. شمل سير العمل جمع عينات موحد، ومراقبة مراقبة الجودة المجمعة، وتحليل المستقلبات، والتحليل الإحصائي متعدد المتغيرات، وتفسير المسارات. ارتبط المبارزة الحادة بتغيرات في المستقلبات المرتبطة بالتحلل السكري وتكوين الجلوكوز، بينما ارتبطت فترة 24 ساعة باستقلاب الكبريت.

أظهر فوسفاتيديلينوسيتول PI(16:0/18:2(9Z,12Z)) تمييزا قويا في الحالة الفورية بعد المبارزة، وكان الثيوسلفات مرتبطا بحالة التعافي لمدة 24 ساعة. تدعم هذه النتائج استخدام هذا السير في التحليل القابل لتكرار التغيرات الأيضية المرتبطة بالتمارين في هذه المجموعة المكونة من سبعة ملاكمين نخبة من الذكور. يهدف البروتوكول إلى دراسات مجموعة صغيرة محكمة حول التمارين الحادة والتعافي قصير الأمد، ويركز على التعامل مع العينات القابلة للتكرار، والمراقبة المجمعة لضبط الجودة، والتحليل القابل للتفسير في مرحلة لاحقا.

Introduction

تتميز الملاكمة النخبوية بثلاث جولات مدة كل منها دقيقتان من المبارزة عالية الشدة، وتعتمد على مزيج من الأيض اللاهوائي والهوائي وتحفز تحولات سريعة في ركائز الطاقة، ووسائط الإجهاد التأكسدي، والمستقلبات المرتبطة بإصلاح الأنسجة. التقييمات التقليدية (اللاكتات الدموية ومعدل ضربات القلب) تلتقط فقط نقاط نهاية فسيولوجية معزولة، وتفشل في حل التغيرات الأيضية النظامية المترابطة التي تمتد عبر "الأساس قبل المبارزة → الإجهاد الحاد بعد المبارزة → التعافي لمدة 24 ساعة."

تستدعي الأيض غير المستهدفة، الممكنة من خلال الكروماتوغرافيا السائلة - رباعية الأقطاب في مطياف الكتلة التاثلية المتتالية، هذا القيد من خلال تحليل شامل لمستقلبات الجزيئات الصغيرة في العينات البيولوجية. عادة ما يكتشف آلاف القمم الأيضية ويعلق على مئات إلى آلاف المستقلبات من خلال التكامل مع قواعد البيانات المنسقة ^1,2,3. يمكن لهذا النهج أن يكشف عن ديناميكيات أيضية دقيقة تغفل عنها الطرق التقليدية، لكن الدراسات القائمة التي تركز على الملاكمة في الأيض تفتقر إلى التوحيد القياسي: غالبا ما تتجاهل بروتوكولات المبارزة المحكمة، أو خطوات مراقبة الجودة الصارمة، أو فترات التعافي طويلة الأمد، مما يؤدي إلى نتائج لا يمكن تكرارها وتحويلها إلى استراتيجيات التدريب أو التعافي^4،5.

تم تقديم سير عمل أيضي موحد يعتمد على الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة المزدوجة رباعي الأقطاب ومعدل للملاكمين النخبة لالتقاط كل من الاستجابات الحادة للتمارين والتأخير في التعافي. يتضمن البروتوكول ثلاث نقاط زمنية رئيسية (قبل المبارزة [T0]، مباشرة بعد المبارزة [T1]، 24 ساعة بعد المبارزة [T2]) لتمييز الإجهاد المؤقت عن التكيف المستمر^6،7،8. تشمل الميزات التقنية الحرجة: (1) المبارزة المسيطر عليها (80–85٪ أقصى معدل ضربات قلب) لضمان شدة تمرين ثابتة ^7,9; (2) LC-QTOF عالي الدقة للكشف الحساس عن مستقلبات المصل منخفضة الوفرة ^2,3,10; (3) التحليلات متعددة المتغيرات وأحادية المتغيرات، بما في ذلك تحليل المكونات الرئيسية (PCA)، والتحليل الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-DA)، والاختبارات الإحصائية الزوجية، لتحديد المستقلبات المستجيبة للتمرين ^6,8,11; و(4) عينة QC مصل واحدة مجمعة (خلط متساوي الحجم لعينات الدراسة) مع حقن متعددة لتقييم استقرار الجهاز ضد انحراف الإشارة¹².

قد يكون هذا البروتوكول قابلا للتكيف مع رياضات أخرى عالية الشدة وقصيرة المدة (مثل العدو السريع والمصارعة)، لكن مثل هذه القابلية للنقل تتطلب التحقق من الصحة في مجموعات رياضية محددة. في هذه الدراسة، يوفر سير العمل إطارا أوليا لتحديد العلامات الأيضية للتوتر والتعافي لدى الملاكمين الذكور النخبة. هذا السير هو الأنسب للدراسات المحكمة حول التمارين الحادة والتعافي قصير الأمد في مجموعات رياضية صغيرة وذات خصائص جيدة باستخدام أيض غير مستهدف قائم على المصل. قد يكون أقل ملاءمة للاستقراء المباشر على رياضات أخرى، أو الرياضيات، أو مجموعات سكانية أكبر وغير متجانسة، أو دراسات التكيف طويلة الأمد دون التحقق الإضافي.

هدفت الدراسة إلى توصيف التغيرات الأيضية في المصل الناتجة عن المبارزة النخبوية في الملاكمة والتمييز بين الاستجابات الحادة بعد المبارزة والتغيرات المرتبطة بالتعافي لمدة 24 ساعة. تم افتراض أن المبارزة الحادة ستؤثر بشكل رئيسي على استقلاب الطاقة، في حين أن التعافي لمدة 24 ساعة يرتبط بالمستقلبات المرتبطة بتوازن الأكسدة والاختزاز وإصلاح الأنسجة. يظهر سير العمل العام في الشكل 1.

Protocol

أداء جميع الإجراءات وفقا لموافقة لجنة الأخلاقيات المؤسسية للبحوث البشرية في جامعة كابيتال للتربية البدنية والرياضة (الموافقة رقم 2025A005).

تحذير: عامل جميع عينات دم الإنسان على أنها محتملة العدوى. ارتد قفازات، ومعطف مختبر، وحماية للعين. إجراء جمع الدم الوريدي، والتعامل مع المصل، والتخلص من النفايات وفقا لإجراءات السلامة البيولوجية المؤسسية. قم بتطهير أسطح العمل بعد التعامل مع العينة.

تحذير: الميثانول، والأسيتونيتريل وحمض الفورميك هي مواد كيميائية خطيرة. التعامل مع مراحل تحضير المذيب واستخراجه وإعادة التكوين في غطاء بخار كيميائي معتمد. تجنب ملامسة الجلد والاستنشاق. اجمع نفايات المذيبات في حاويات معتمدة.

1. تجنيد المشاركين في الدراسة وتحضيرهم

1. تجنيد سبعة ملاكمين نخبة تتراوح أعمارهم بين 20 و28 سنة ويتنافسون في فئات الأوزان 60–75 كجم.
2. تأكد من أن كل مشارك لديه خبرة تدريبية مهنية لا تقل عن 5 سنوات ولا تاريخ من أمراض الأيض.
3. استبعد المشاركين الذين تعرضوا لإصابة عضلية هيكلية خلال الأشهر الستة الماضية.
4. نصح المشاركين باتباع نظام غذائي موحد يحتوي على 55٪ كربوهيدرات، 25٪ بروتين، و20٪ دهون لمدة 3 أيام قبل الفحص.
5. نصح المشاركين بتجنب التمارين الشاقة عند أو أكثر من 60٪ من معدل ضربات القلب الأقصى لمدة 48 ساعة قبل الفحص.
6. نصح المشاركين بالصيام لمدة 12 ساعة قبل جمع الدم. السماح بتناول الماء خلال فترة الصيام.
7. حدد الحد الأقصى لمعدل ضربات القلب من خلال اختبار تمارين متدرجية قبل أسبوع من المبارزة.
8. زد سرعة جهاز المشي بمقدار 1 كم/س كل 3 دقائق حتى الإرهاق. استخدم الحد الأقصى المقاس لمعدل ضربات القلب لتحديد هدف شدة المبارزة.

2. بروتوكول المبارزة وجمع عينات المصل

1. جهز حلبة ملاكمة قياسية بطول 6 × 6 أمتار، وقفازات بوزن 16 أونصة، وجهاز مراقبة معدل ضربات القلب بحزام صدر.
2. قم بإجراء إحماء موحد لمدة 10 دقائق يتضمن 5 دقائق من الجري بسرعة 8 كم/س، 3 دقائق من التمدد الديناميكي، و2 دقائق من الظل.
3. نفذ بروتوكول المبارزة كما يلي.
   1. قم بإجراء ثلاث جولات تدريب كل منها دقيقتين.
   2. مطابقة الخصوم حسب فئة الوزن والمستوى الفني.
   3. اترك فترة راحة دقيقة واحدة بين الجولات.
   4. راقب معدل ضربات القلب كل 30 ثانية طوال الجلسة.
   5. ضبط شدة المبارزة للحفاظ على معدل ضربات القلب عند 80٪–85٪ من معدل ضربات القلب المغناطيسية.
   6. أوقف المبارزة إذا تجاوز معدل ضربات القلب 90٪ من معدل ضربات قلب القلب. استأنف المبارزة فقط بعد عودة معدل ضربات القلب إلى النطاق المستهدف.
4. اجمع عينات المصل في ثلاث نقاط زمنية كما يلي.
   1. اجمع 5 مل من الدم الوريدي من الوريد قبل الدهان بعد 30 دقيقة من تسخين T0 باستخدام أنبوب فصل مصل واحد بحجم 8 مل (SST).
   2. اجمع 5 مل من الدم الوريدي خلال 5 دقائق من الجولة النهائية لعلاج T1 باستخدام SST جديد.
   3. اجمع 5 مل من الدم الوريدي في نفس وقت اليوم مع T0 لعلاج T2 باستخدام SST جديد. تأكد من أن المشاركين يلتزمون بنفس قيود الصيام والنشاط المستخدمة في T0.
5. معالجة عينات الدم كما يلي.
   1. قم بالطرد المركزي لكل SST عند 11000 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية خلال ساعة واحدة من الجمع.
   2. انقل 2–3 مل من طبقة المصل العلوية إلى 1.5 مل من التجميد البارد.
   3. خزن الكرايفيلات فورا عند -80 درجة مئوية.
   4. حدد كل عينة إلى دورتين لا تزيد عن دورتي تجميد وإذابة.
6. جهز عينة مراقبة جودة مجمعة.
   1. قم بإذابة جميع عينات المصل ال21 في الدراسة (T0، T1، وT2 من سبعة مشاركين) على الثلج قبل تحضير تجميع العينات للمراقبة الكمومية.
   2. انقل مجموعا متساويا من كل عينة دراسة إلى أنبوب واحد بسعة 1.5 مل.
   3. انقل 20 ميكرولتر من كل عينة للحصول على حجم تجميع نهائي للمراقبة الكموم بقيمة 420 ميكرولتر.
   4. Vortex عينة QC المجمعة لمدة 10 ثوان.
   5. استخدم عينة QC المجمعة للحقن المتكرر أثناء تحليل LC-QTOF-MS لمراقبة استقرار الأجهزة وانحراف الإشارة.

3. استخراج المستقلبات من عينات المصل

1. قم بإزالة عينات المصل المجمدة (T0، T1، T2، وQC) من -80 درجة مئوية. قم بإذابة العينات على الثلج لمدة 30 دقيقة واستخدمها في دوامة كل عينة لمدة 10 ثوان.
2. أنبوب 100 ميكرولتر من المصل في أنبوب طرد مركزي منخفض البروتين بحجم 1.5 مل. أضف 500 ميكرولتر من مذيب الاستخراج البارد المثلج المكون من الميثانول:الأسيتونيتريل (1:1، فولت/فولت). Vortex لمدة 30 ثانية.
   1. لا تضيف معيارا داخليا أثناء الاستخراج. لا تطبق تصحيح الاستخراج القائم على المعيار الداخلي أو التطبيع في سير العمل النهائي.
3. قم بعمل صوت الأنبوب في حمام ماء مثلج بدرجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 10 دقائق عند 300 واط و40 كيلوهرتز. حضن الأنبوب عند -20 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لترسيب البروتين.
4. قم بالطرد المركزي للأنبوب عند 13200 × جرام لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية. انقل حوالي 450 ميكرولتر من المادة الفائقة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد وتخلص من الحبيبات كنفايات بيولوجية خطرة.
5. جفف المادة الفائقة في مركز فراغي عند 37 درجة مئوية و-0.09 ميغاباسكال لمدة 45 دقيقة أو حتى يصل الجفاف التام.
6. إعادة تكوين المستخلص المجفف في 100 ميكرولتر من الأسيتونيتريل في الماء (1:1، فولت/فولت). Vortex لمدة 30 ثانية.
   ملاحظة: تم استخدام الأسيتونيتريل (1:1، v/v) لأنه كان متوافقا مع عمود الكروماتوغرافيا المعكوس المستخدم في هذا السير ولم ينتج هطوبا مرئيا في الاختبارات الأولية.
7. الطرد المركزي المحلول المعاد تشكيله عند 13200 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. نقل حوالي 90 ميكرولتر من المادة الفائقة إلى قارورة زجاجية LC-MS مزودة بإدخال 200 ميكرولتر وأغلق القارورة.

4. كشف الكروماتوغرافيا السائلة - الطيف الكتلي

1. تركيب عمود كروماتوغرافيا الطور المعكوس مناسب لتحليل أيض المصل (انظر جدول المواد) في نظام الكروماتوغرافيا السائل. اضبط فرن العمود على 40 درجة مئوية.
2. جهز الطور المتنقل A كحمض فورميك 0.1٪ (v/v) في مياه فائقة النقي. حضر المرحلة المتنقلة B كحمض فورميك 0.1٪ (v/v) في الأسيتونونتريل.
3. ترشيح كلا الطورين المتنقلين عبر غشاء بحجم 0.22 ميكرومتر.
4. اضبط معدل التدفق إلى 400 ميكرولتر/دقيقة وحجم الحقن إلى 5 ميكرولتر.
5. طبق التدرج التالي: 0.0–0.5 دقيقة، 95٪ A و5٪ B؛ 0.5–5.5 دقيقة، تدرج خطي إلى 50٪ A و50٪ B؛ 5.5–9.0 دقيقة، التدرج الخطي إلى 5٪ A و95٪ B؛ 9.0–10.5 دقيقة، 5٪ A و95٪ B; 10.5–12.0 دقيقة، ثم أعد إلى 95٪ A و5٪ B وأعد التوازن
6. قم بربط نظام الكروماتوغرافيا السائل بمطياف كتلة عالي الدقة مزود بمصدر تأين بالرش الكهربائي.
7. جمع البيانات في أوضاع الأيونات الموجبة والسالبة في جولات منفصلة.
8. في وضع الأيونات الموجبة، اضبط جهد الشعيرات الدموية على 2500 فولت وجهد المخروط على 30 فولت.
9. في وضع الأيونات السالب، اضبط جهد الشعيرات الدموية على -2000 فولت وجهد المخروط على 25 فولت.
10. اضبط درجة حرارة غاز الذوبان إلى 500 درجة مئوية، وتدفق غاز المذاب إلى 800 لتر/ساعة، وتدفق غاز المخروط إلى 50 لتر/ساعة.
11. جمع البيانات عبر m/z 50–1200 مع زمن مسح 0.2 ثانية.
12. الحصول على بيانات مطيافية الكتلة المتتالية باستخدام طاقة تصادم منخفضة عند 0 فولت وطاقة تصادم عالية عند 10–40 فولت.
13. شغل العينات بالترتيب التالي: حقنة فارغة واحدة من مذيب إعادة التكوين؛ ثلاث حقن متتالية لعينة QC المجمعة؛ جميع عينات الدراسة مع حقنة فارغة واحدة وحقنة QC واحدة بعد كل خمس عينات دراسة؛ حقنة QC أخيرة؛ وحقنة بيضاء أخيرة
14. تقييم جودة البيانات واستقرارها التحليلي في كلا الوضعين الأيونيين من خلال تحليل الارتباط المجمع بمراقبة الجودة وتجميع تحليل المكونات الرئيسية (PCA).
15. تفسير معاملات الارتباط المجمعة في QC التي تزيد عن 0.8 على أنها تشير إلى الاستقرار التحليلي المقبول عبر التسلسل التحليلي.

5. معالجة البيانات المبدئية والتحليل الإحصائي

1. استيراد ملفات تحليل الكروماتوغرافيا السائلة-الطيف الكتلي الخام إلى برامج معالجة البيانات لمحاذاة وقت الاحتفاظ، وفك الالتفاف، ومحاذاة الذروة، واستخراج الميزات (انظر جدول المواد).
   1. اختر أول حقن QC مجمع كمرجع محاذاة.
   2. قم بمحاذاة وقت الاحتفاظ، وفك الالتفاف، ومحاذاة الذروة باستخدام سير العمل الافتراضي للبرنامج المختار. استخدم تحمل زمن احتفاظ ± 0.1 دقيقة وتحمل كتلة ± 5 جزء في المليون.
   3. قم باختيار القمة واحتفظ بخصائص بشدة تزيد عن 1000 عد موجودة في 80٪ على الأقل من العينات في مجموعة واحدة على الأقل.
   4. لا تطبق تطبيع إضافي لما بعد المعالجة المسبقة في أي من وضعي الأيون.
   5. تصدير جدول الميزات المعالج الذي يحتوي على قيم m/z، وقت الاحتفاظ، وقيمة مساحة الذروة.
   6. جميع التحويلات اللوغرمينية 2 تحتفظ بشدات الذروة.
   7. قم باحتساب القيم المفقودة بخمس القيمة الموجبة الدنيا لكل ميزة.
   8. كل ميزة-مركز وقسمة على انحرافها المعياري قبل التحليل متعدد المتغيرات.
   9. استخدم المصفوفة المحولة والمحجمة لتحليل المكونات الرئيسية (PCA)، وتحليل المربعات الصغرى الجزئي (PLS-DA)، والتحليل الجزئي المتعامد لأصغر المربعات (OPLS-DA)، والتجميع، وتحليل الترابط. استخدم شدة الميزات المعالجة الأصلية لمخططات الوفرة.
2. يرجى ملاحظة المستقلبات من خلال مطابقة الميزات مع قواعد بيانات المستقلبات العامة، بما في ذلك قاعدة بيانات المستقلبات البشرية (HMDB)، وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)، وخرائط الدهون حيثما ينطبق.
   1. وسجل كل تعليق حسب خطأ كتلة الأيونات السابقة، وتوزيع النظائر، ومطابقة شظايا الطيف الكتلي المتتالية. خصص حد أقصى 20 نقطة لكل معيار.
   2. تطبيق نافذة خطأ كتلة الأيونات الأولية بقيمة 100 جزء في المليون ونافذة خطأ كتلة أيونات شظايا بقيمة 50 جزء في المليون. لا تطبق نافذة زمنية ثابتة للاحتفاظ.
   3. احتفظ بالتعليقات التي تحصل على مجموع تقييم لا يقل عن 40 من 60. استبعد التعليقات ذات الدرجات المنخفضة.
3. عرف مجموعات المقارنة بشكل صريح كما يلي: A = T0 (قبل المبارزة)، B = T1 (ما بعد المبارزة مباشرة)، و C = T2 (24 ساعة بعد المبارزة).
4. قم بإجراء تحليلات إحصائية لاحقة باستخدام برامج الحوسبة الإحصائية وحزم التحليل المرتبطة بها (انظر جدول المواد).
   1. قم بتشغيل تحليل المكونات الرئيسية (PCA) بعد مقياس التباين الوحدوي وتصور مخططات الدرجات.
   2. ابن نماذج تحليل المربعات الجزئية التمييزية (PLS-DA) وتحليل المربعات الأدنى الجزئي المتعامد (OPLS-DA) لنماذج A مقابل B، B مقابل C، و A مقابل C.
   3. استخدم التحقق المتقاطع بسبعة أطعاف عندما يكون عدد العينة على الأقل 7. إذا كان عدد العينة أقل من 7، اجعل عدد الطيات مساويا لعدد العينات.
   4. قم بإجراء 200 اختبار تبديل لتقييم صحة النموذج.
   5. فحص المستقلبات التفاضلية بتطبيق العتبات التالية: تغيير الطية (FC) ≥ 2 أو FC ≤ 0.5، وأهمية متغيرة في الإسقاط (VIP) ≥ 1، واختبار t P. < 0.05.
   6. قم بإنشاء مخططات البراكين والرسوم الإحصائية ذات الصلة للمقارنات الزوجية.
   7. توليد خرائط حرارية باستخدام المصفوفة المحولة إلى log2 والمصفوفة المعدلة بوحدة التباين (MUT).
   8. توليد خرائط حرارية للارتباط بعتبة دلالة P ≤ 0.05 وعرض ما يصل إلى 20 مستقلبا.
   9. حدد العدد الأمثل للعناقيد قبل التجميع بقيم k. قم بتنفيذ تجميع k-means بعد مقياس التباين الوحدوي.
   10. توليد مخططات شريط الوفرة من شدة الميزات المعالجة الأصلية.
   11. قم بتوليد مخططات فين لتلخيص التداخل بين المقارنات الزوجية.
   12. إجراء تحليل خصائص تشغيل المستقبل (ROC) للمستقلبات المختارة. قيم أداء التشخيص حسب المساحة تحت المنحنى (AUC).
5. رسم خريطة المستقلبات التفاضلية إلى مسارات KEGG باستخدام دالة إثراء المسار في حزمة معلوماتية حيوية مناسبة (انظر جدول المواد).
   1. تفسير المسارات باستخدام P. < 0.05. لم يتم الإبلاغ عن تصحيح متعدد الاختبارات في سجل التحليل النهائي.

Results

التحقق من صحة مراقبة الجودة (QC) لبيانات LC-QTOF-MS/MS

لتقييم استقرار الإشارة وقابليتها للتكرار، تم تحليل الحقن المتكررة لعينة QC المجمعة في كلا الوضعين الأيونيين. تجاوزت معاملات الارتباط سبيرمان بين حقن QC المجمعة 0.8 في كلا وضعي الأيونات، مما يشير إلى أداء مستقر للأداة عبر التسلسل التحليلي. أظهرت PCA لجميع عينات الدراسة وحقن QC تجمعا دقيقا لحقن QC وعدم وجود مؤشرات شاذة واضحة، مما دعم الاستقرار التحليلي المقبول (الشكل 2

Discussion

وقد ميز هذا السير الموحد تغيرات المستقلبات المرتبطة بتدريبات الملاكمة النخبوية والتعافي قصير الأمد في مجموعة صغيرة ومضبوطة. دعمت حقن QC المجمعة، وتحليل الارتباط القائم على QC، وتجميع PCA، والتحليلات متعددة المتغيرات معا الاستقرار التحليلي المقبول. كان نجاح البروتوكول يعتمد بشكل أساسي على أربعة عوامل: الحفاظ على شدة المبارزة ضمن 80٪–85٪ من الحد الأقصى لمعدل ضربات القلب، معالجة عينات الدم خلال ساعة واحدة من الجمع، تحديد كل عينة إلى دورتين لا تزيد عن دورتين من التجميد والذوبان، ومراقبة التس...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
المواد الكيميائية	الأسيتونيتريل	ميرك	درجة LC-MS، CAS 75-05-8
المواد الكيميائية	الميثانول	ميرك	درجة LC-MS، CAS 67-56-1
المواد الكيميائية	حمض الفورميك	TCI	درجة LC-MS، CAS 64-18-6
المواد الاستهلاكية	منشط جلطة المصل بأنبوب الفراغ	غرينر بيو-ون	أنبوب تنشيط جلطة مصل بحجم 8 مل
المواد الاستهلاكية	قارورة نالجين المبردة	ثيرمو فيشر العلمي	1.5 مل، خيط خارجي
المواد الاستهلاكية	أنبوب ربط البروتين	إبندورف	كات. رقم 0030108442، 1.5 مل
الأواني الزجاجية	قارورة زجاجية ذات غطاء لولبي مع إدخال	أجيلينت	قارورة 2 مل مع 200 ومل؛ إل، إدخال زجاجي؛ أدخل القط. رقم 5183-2090
المواد الاستهلاكية	فلتر ميلكس-جي بي	ميرك	كات. لا. SLGP033RS، 0.22 μ غشاء m
الآلات الموسيقية	خاتم ملاكمة مخصص 6x6 متر	رياضة المواي تاي	6 ×؛ حلقة التدريب 6 أمتار
المواد الاستهلاكية	قفازات الملاكمة Pro Style 2	إيفرلاست	16 أونصة
الآلات الموسيقية	بولار H10	بولار	حساس معدل ضربات القلب على حزام الصدر
الآلات الموسيقية	الكوازار	H/P/Cosmos	جهاز المشي الآلي
الآلات الموسيقية	الطرد المركزي 5425 R	إبندورف	الطرد المركزي الدقيق المبرد
الآلات الموسيقية	برانسونيك CPX2800	إيمرسون / برانسون	حمام رقمي فوق صوتي بتردد 40 كيلوهرتز
الآلات الموسيقية	SPD1030 سافانت سبيد فاك	ثيرمو فيشر العلمي	مركز الفراغ المتكامل
الآلات الموسيقية	VWR Mini Vortex Mixer	أفانتور / VWR	كات. رقم 10153-688
الآلات الموسيقية	فريزر TSX ULT	ثيرمو فيشر العلمي	نموذج TSX50086A
الآلات الموسيقية	أكويتي UPLC I-Class PLUS	المياه	نظام UHPLC
الآلات الموسيقية	زيفو G2-XS QTof	المياه	مطياف الكتلة QTOF
الآلات الموسيقية	عمود ACQUITY UPLC HSS T3	المياه	ملاحظة الاسم 176001132، 1.8 μ m، 2.1 ×؛ 100 مم
البرمجيات	ماس لينكس	المياه	الإصدار 4.2
البرمجيات	النشأة الجزئية	المياه	الإصدار 2.3
البرمجيات	R	مؤسسة R للحوسبة الإحصائية	الإصدار 3.6.1
البرمجيات	prcomp	القاعدة R	دالة الأساس R
البرمجيات	ROPLS	الموصل الحيوي	حزمة R
البرمجيات	خريطة الخيمة	كران	حزمة R
البرمجيات	كوربلوت	كران	حزمة R
البرمجيات	الكيمين	القاعدة R	دالة الأساس R
البرمجيات	NbClust	كران	حزمة R
البرمجيات	فين	كران	حزمة R
البرمجيات	MetaboAnalystR	مختبر CRAN / شيا	الإصدار 1.0
البرمجيات	بروك	كران	الإصدار 1.15.0
البرمجيات	clusterProfiler	الموصل الحيوي	حزمة الموصلات الحيوية
قواعد البيانات	قاعدة بيانات الأيض البشري (HMDB)	HMDB	قاعدة البيانات الإلكترونية
قواعد البيانات	موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)	كيغ	قاعدة البيانات الإلكترونية
قواعد البيانات	خرائط الدهون	خرائط الدهون	قاعدة البيانات الإلكترونية