تحدد تحليلات المجموعات العامة والتجارب القائمة على خلايا الورم الدبقي MRC2 كمؤشر توقعات ضعيفة مرتبطة بزيادة التكاثر، والهجرة، والغزو، والتغيرات المرتبطة ب β-كاتينين/EMT في الدبقية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
تحدد تحليلات المجموعات العامة والتجارب القائمة على خلايا الورم الدبقي MRC2 كمؤشر توقعات ضعيفة مرتبطة بزيادة التكاثر، والهجرة، والغزو، والتغيرات المرتبطة ب β-كاتينين/EMT في الدبقية.
لا يزال الورم الدبقي ورما خبيثا قاتلا للجهاز العصبي المركزي، ولا تزال هناك حاجة إلى مؤشرات حيوية إضافية تحسن التدرج التنبؤي وتوجه الاستكشاف العلاجي. قيمت هذه الدراسة مستقبل مانوز من النوع C 2 (MRC2/Endo180) من خلال دمج مجموعات النسخ النصية العامة مع التحقق من صحة المختبر . تم الحصول على ملفات تعريف التعبير والتعليقات السريرية المتطابقة من أطلس جينوم السرطان (TCGA) ومشروع تعبير النمط الجيني-الأنسجي (GTEx) للمقارنات بين الأورام والحالات الطبيعية والفحص الشامل للسرطان، كما تم فحص الروابط التنبؤية بشكل أعمق في مجموعة أطلس جينوم الورم الدبقي الصيني (CGGA). تم تقييم تعبير MRC2 في خطوط خلايا الورم الدبقي من خلال النسخ العكسي وPCR الكمي (RT-qPCR) والاختطام المناعي، وتم تثبيت MRC2 مستقر في خلايا U87 وU251 باستخدام RNA قصير الشعر (shRNAs) من الفيروس. تم تقييم نمو الخلايا وتكلنجيته باستخدام اختبارات CCK-8 وتكوين المستعمرات، بينما تم تقييم الهجرة والغزو باستخدام اختبارات إدخال الغشاء المسامي. تم تحليل مؤشرات CDK4 وCDK6 و β-كاتينين/الانتقال الظهاري–الميزنشيمي (EMT) من خلال القطع المناعي. عبر مجموعات البيانات، ارتفع MRC2 في الورم الدبقي المزمن، وكان التعبير الأعلى مرتبطا ببقاء أسوأ بشكل عام، وبقاء خاص بالمرض، وفترة خالية من التقدم. في المختبر، قلل استنزاف MRC2 من التكاثر، والتكاثر التكسيسي، والهجرة، والغزو، مصحوبا بانخفاض مستويات بروتينات CDK4 و CDK6 وتغيرات في مؤشرات β-كاتينين ومؤشرات EMT. معا، تدعم هذه النتائج MRC2 كمؤشر حيوي تنبؤي مرشح مرتبط بأنماط الورم الدبقي العدوانية وتستدعي المزيد من التحقيقات الميكانيكية والحية الجسدية.
تمثل الأورام الدبقية أكثر الأورام الأولية شيوعا التي تنشأ في الجهاز العصبي المركزي وتمثل جزءا كبيرا من الأورام داخل الجمجمة 1,2. تقدر الدراسات الوبائية حدوث الحالات بعدة حالات لكل 100,000 شخص سنويا، مع الإبلاغ عن فروق جغرافية وجنسية بين السكان 3,4. سريريا، تمتد الأورام الدبقية عبر طيف واسع من السلوكيات: الأورام الدبقية منخفضة الدرجة يمكن أن تتبع دورة طويلة، بينما يظل المرض عالي الدرجة — وخاصة الورم الأرومي الدبقي — مميتا بسرعة لمعظم المرضى 5,6,7,8. تدمج تصنيفات منظمة الصحة العالمية الحديثة علم الأنسجة مع السمات الجزيئية الرئيسية (مثل طفرة IDH، تغيير محفز TERT، مثيلة محفز MGMT، والحذف المشترك 1p/19q)، والتي تحسن التشخيص وتؤثر على التوقعات 9,10. على الرغم من الإدارة متعددة الوسائط التي تجمع بين الجراحة والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي، إلا أن الانتكاس شائع، وتظل النتائج طويلة الأمد للأورم عالية الدرجة ضعيفة. لذلك، يبقى تحديد علامات التنبؤ الإضافية والثغرات القابلة للاستهداف أولوية عاجلة.
MRC2 (مستقبل مانوز من النوع C-2؛ ويشار إليه أيضا باسم Endo180/CD280/uPARAP) هو عضو عبر الغشاء من عائلة مستقبلات الليكتين من النوعC رقم 11. يثري في أقسام البثمار والمناعة مثل الخلايا الليفية والبلاعميات، ويشارك في دوران المصفوفة خارج الخلية (ECM)، وإعادة تشكيل التليف، والتفاعلات بين الأورام والبيئة الدقيقة12،13. هيكليا، يحتوي MRC2 على منطقة غنية بالسيستين في الطرف N، ومجال فيبرونكتين من النوع الثاني يرتبط بالكولاجين، وعدة مجالات شبيهة بالليكتين من النوع C، وقطعة عبر الغشاء، وذيل سيتوبلازمي14,15. من خلال استيعاب الكولاجين وإعادة تشكيله، يمكن ل MRC2 تسهيل حركة الخلايا وغزو الأنسجة، وقد تم ربط ارتفاع MRC2 بسلوك عدواني في عدة سرطانات، بما في ذلك الثدي، والبنكرياس، والبروستاتا، والميلانوما، والورم الأرومي الدبقي 11,14,16,17,18 . تشير الأعمال السابقة أيضا إلى روابط بين MRC2 وبرامج الإشارات الغازية (مثل المسارات المرتبطة بTGF-β)، ونشاط إنزيمات الميتالوبروتيناز المصفوفية، والتغيرات الظاهرية الشبيهة بEMT، بالإضافة إلى الأدوار في الحالات الليفية والبلاعمية المرتبطة بالسرطان 17,18,19,20,21. ومع ذلك، لا تزال الأهمية السريرية لMRC2 في الورم الدبقي والعواقب الوظيفية لاختلال تنظيم MRC2 في خلايا الورم الدبقي غير واضحة.
على الرغم من أن MRC2 تم تورطه في إعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية والسلوك الغازي في عدة أورام خبيثة، إلا أن أهميته السريرية في الورم الدبقي لم تثبت بشكل منهجي عبر مجموعات النسخ المستقلة، ولم يتم تقييم تأثيراته المرتبطة بالنمط الظاهري في خلايا الورم الدبقي ضمن إطار متكامل يجمع بين تحليل مجموعات البيانات العامة والتحقق الوظيفي. لذلك، افترضت هذه الدراسة أن MRC2 مرتبط بنتائج سريرية سلبية وأنماط خبيثة في الورم الدبقي (glioma). لمعالجة هذا السؤال، تم دمج الفحص الشامل للسرطان، والتحقق المستقل من الورم الدبقي من المجموعة، وتجارب الإحراج المستقر في خطوط خلايا الورم الدبقي لتقييم الأهمية التنبؤية لمرض MRC2 وارتباطه بالتكاثر، والهجرة، والغزو، والتغيرات في العلامات المرتبطة ب β كاتينين/EMT. نظرا لأن MRC2 ينتمي إلى عائلة مستقبلات المانوز وتطور الورم الدبقي يتشكل أيضا بالبيئة الدقيقة للورم، فقد تم تضمين تحليل استكشافي إضافي لتعبير MRC1 حسب حالة IDH لتوفير معلومات سياقية حول الفروق المناعية بين الأنواع الفرعية للدبقية.
تكمن حداثة هذا العمل في التقييم المشترك ل MRC2 عبر مجموعات بيانات الورم الدبقي العامة والاختبارات الوظيفية في المختبر ، مما يوفر أدلة سريرية وتجريبية مكملة على أهميته في الورم الدبقي (glioma). مقارنة بالتحليلات الفردية أو الدراسات الخلوية فقط، يقدم هذا السير المتكامل عدة مزايا عملية. يتيح دمج TCGA وGTEx وCGGA التحقق من صحة المجموعات المختلفة ويقلل الاعتماد على مجموعة بيانات واحدة. بالإضافة إلى ذلك، يربط الربط بين تحليلات المجموعات العامة واختبارات إسقاط خلايا الورم الدبقي الروابط السريرية بأدلة على مستوى النمط الظاهري. أخيرا، يمكن استخدام القراءات التكميلية، بما في ذلك RT-qPCR، وتحليل المناعة اللوط، وCCK-8، وتكوين المستعمرات، واختبارات إدخال الغشاء المسامي، من تقييم التغيرات النسخية، ومستوى البروتين، والتكاثر، والتغيرات المتعلقة بالحركة بالتوازي. يتم تلخيص التصميم العام للدراسة وسير العمل التحليلي في الشكل 1. معا، تحسن هذه الاستراتيجية من المتانة وقابلية التفسير البيولوجي للنتائج مقارنة بأساليب المعلوماتية الحيوية فقط أو الاختبارات الفردية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
استخدمت هذه الدراسة مجموعات بيانات متاحة للجمهور وغير محددة الهوية (TCGA، GTEx، وCGGA) وأنشأت خطوط خلايا تجارية. لم يشارك أي مشاركين بشريين جدد، أو معلومات مرضى يمكن تحديدها، أو عينات مشتقة من المرضى. أجريت جميع التحليلات وفقا للإرشادات المؤسسية والدولية ذات الصلة لاستخدام البيانات المتاحة للجمهور. لذلك، لم تكن هناك حاجة لموافقة إضافية لأخلاقيات المؤسسات أو موافقة مستنيرة لهذه الدراسة.
1. سير العمل المعلوماتي الحيوي ومعالجة البيانات المسبقة
تم الحصول على ملفات تعريف التعبير الجيني والتعليقات السريرية المتطابقة من مصادر متاحة للجمهور، بما في ذلك أطلس جينوم السرطان (TCGA)، ومشروع تعبير النمط الجيني والأنسجة (GTEx)، وأطلس جينوم الورم الدبقي الصيني (CGGA). تم استيراد مصفوفات التعبير والبيانات الوصفية السريرية إلى R وتوحيدها وفقا لمعرفات العينة. تمت إزالة الإدخالات المكررة أو غير المتطابقة، وتم استبعاد العينات التي تفتقر إلى معلومات البقاء الأساسية من تحليلات البقاء. تم استخراج قيم تعبير MRC2 والمتغيرات السريرية المرضية المقابلة للتحليلات اللاحقة. في المقارنات بين الورم والطبيعي، تمت مقارنة تعبير MRC2 عبر أنواع السرطان باستخدام بيانات TCGA فقط عندما تتوفر الأنسجة الطبيعية المتطابقة، وباستخدام بيانات TCGA–GTEx متكاملة عند الحاجة إلى ضوابط طبيعية إضافية. في التحليلات التي تركز على الورم الدبقي الذهني، تم تصنيف المرضى في مجموعتي TCGA-LGG وCGGA إلى مجموعات ذات تعبير عالي ومنخفض وفقا لمستوى التعبير الوسيط MRC2 في المجموعة. ثم أجريت تحليل البقاء على قيد الحياة من كابلان-ماير، وتحليل خصائص تشغيل المستقبل المعتمدة على الوقت (ROC)، وانحدار المخاطر النسبية لكوكس لتقييم الصلة التنبؤية ل MRC2. شملت نماذج كوكس متغيرات متاحة مثل العمر، الجنس، درجة منظمة الصحة العالمية، ومتغيرات سريرية مرضية أخرى، اعتمادا على اكتمال البيانات داخل كل مجموعة. أجريت تحليلات المجموعات الفرعية وفقا لمتغيرات تشمل العمر، النوع الفرعي النسجي، درجة منظمة الصحة العالمية، حالة طفرات IDH، حالة الترميز 1p/19q، والمعلومات المتعلقة بالعلاج، حيثما توفرت. تم توليد الأشكال باستخدام سير عمل رسم إحصائي قياسي في R وGraphPad Prism.
2. تحليل التعبير والبقاء على مستوى السرطان
تمت مقارنة تعبير MRC2 بين الأنسجة الورمية والأنسجة الطبيعية عبر أنواع السرطان باستخدام مجموعات بيانات TCGA وGTEx. تم تصور الفروقات باستخدام مخططات الصناديق وتلخيصها باستخدام مخططات الرادار. أجريت تحليلات الانحدار النسبي للمخاطر كوكس لتقييم الارتباطات بين تعبير MRC2 والبقاء الكلي (OS)، والبقاء على قيد الحياة الخاص بالمرض (DSS)، والفترة الخالية من التقدم (PFI) عبر أنواع السرطان. تم تصور نسب المخاطر ومستويات الدلالة المقابلة باستخدام مخططات الغابات وخرائط الحرارة.
3. التحقق التنبؤي وتحليل المجموعات الفرعية في مجموعات الورم الدبقي
في مجموعة TCGA للورم الدبقي منخفض الدرجة (TCGA-LGG)، تم تصنيف المرضى إلى مجموعات تعبير MRC2 العالي والمنخفض. أجريت تحليلات بقاء كابلان–ماير لمقارنة OS، DSS، وPFI بين المجموعات. تم توليد منحنيات خصائص تشغيل المستقبل (ROC) المعتمدة على الزمن لتقييم الأداء التنبؤي. تم إجراء تحليلات الانحدار أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات لتقييم القيمة التنبؤية المستقلة ل MRC2. تم إجراء التحقق الخارجي باستخدام مجموعة بيانات الورم الدبقي CGGA، بما في ذلك تحليل البقاء على قيد الحياة من كابلان-ماير، وتحليل ROC، وانحدار كوكس. أجريت تحليلات المجموعات الفرعية لتقييم تعبير MRC2 عبر المتغيرات السريرية المرضية، بما في ذلك العمر، درجة الورم، النوع النسيجي، حالة طفرة IDH، حالة الترميز 1p/19q، والمتغيرات المرتبطة بالعلاج.
4. تعبير MRC1 في الأورام الدبقية المتحولة من نوع IDH مقابل الأورام الدبقية البرية من النوع البدمي IDH
تم تقييم العلاقة بين تعبير MRC1 وحالة طفرات IDH باستخدام منصة الويب GlioVis ومجموعة بيانات TCGA GBMLGG. تم تصنيف الحالات بناء على حالة IDH المشروحة إلى أورام دبقية متحولة IDH ونوع برية من نوع IDH. تم الاستعلام عن تعبير mRNA ل MRC1 داخل مجموعة البيانات المختارة، وتمت مقارنة مستويات التعبير بين المجموعتين باستخدام دالة التحليل الإحصائي المدمجة في المنصة. تم عرض توزيعات التعبير حسب المجموعة كما تولدها المنصة، وتم تعريف الدلالة الإحصائية بأنها P < 0.05.
5. زراعة الخلايا
تم الحصول على خطوط خلايا الورم الدبقي البشرية والخلايا النجمية الطبيعية من مستودعات خلايا معروفة. تم زراعة الخلايا في وسط نسر معدل من دولبيكو (DMEM) مع إضافة 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS) وحافظت على درجة حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة رطبة تحتوي على 5٪ CO₂ ورطوبة نسبية تقارب 95٪. تم اختيار خلايا U87 وU251 لتجارب فقدان الوظيفة لأن الفحص الأساسي عبر لوحة خلايا الورم الدبقي التي تم اختبارها أظهر أن هاتين الخطين الخلويتين يعبران عن مستويات MRC2 أعلى نسبيا، وبالتالي كانتا مناسبتين للتحليلات الوظيفية القائمة على الإسقاط.
6. إسقاط فيروس لينتي فيروس MRC2
تم استنساخ RNA قصير الدبوس (shRNAs) يستهدف MRC2 وضابط غير مستهدف إلى ناقلات فيروسات عدسية. تم إنتاج جزيئات اللينتيفيروس عن طريق التحويل المشترك لخلايا HEK293T باستخدام البلازميدات الناقلة والبلازميدات المعبأة باستخدام مادة التحويل القياسي. تم جمع المواد الفائقة الفيروسية بعد 48 ساعة و72 ساعة من النقل، وتم طرد مركزها على حرارة 2,100 × جرام لمدة 5 دقائق لإزالة خلايا التعبئة وحطام الخلايا، ثم مررت عبر مرشح بحجم 0.45 ميكرومتر قبل الاستخدام الفوري أو التخزين عند −80 درجة مئوية19. تم استخدام المواد الفائقة التي تحتوي على الفيروس فورا أو تم جمعها وتخزينها عند −80 درجة مئوية. تم تجنب دورات التجمد والذوبان المتكررة. كانت خلايا الورم الدبقي مصابة بجسيمات الفيروسية العدسية في وجود بوليبرين. بعد العدوى، تم اختيار الخلايا باستخدام البوروميسين لإنشاء خطوط خلايا مستقرة للهبوط. كانت التسلسلات المستخدمة كما يلي: sh-MRC2-1: 5′-GAAATGAATGAGCAGCAAGAA-3′; sh-MRC2-2: 5′-CCGGTATTGCTATAAGGTGTT-3′; SH-NC: 5′-TTCTCCGAACGTGTGTCACGT-3′.
7. التحقق من فقدان MRC2 بواسطة RT-qPCR والحقن المناعي
تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام مادة ترايزول، وتم تصنيع cDNA باستخدام مجموعة نسخ عكسي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء PCR الكمي باستخدام كيمياء SYBR Green تحت ظروف الدورة التالية: إزالة الطبيعة الأولية عند 95 °م لمدة 30 ثانية، تليها 40 دورة من 95 °م لمدة 5 ثوان و60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، مع تحليل منحنى التفكك في نهاية التضخيم. كانت تسلسلات التمهيد كما يلي: MRC2 للأمام، 5′-GGCAAGGACAAGAAGTGCGT-3′؛ MRC2 العكس، 5′-CTTTGGTGACGTGCTGCGCTT-3′; GAPDH مهاجم، 5′-TCCACCACCGGCAATTCC-3′؛ وعكس GAPDH، 5′-TCGCCCCACTTGATTTGG-3′. تم حساب تعبير mRNA النسبي باستخدام طريقة Ct المقارنة (2^-ΔΔCt) باستخدام GAPDH كأداة تحكم داخلية20. تم إجراء الحقن المناعي بالتوازي لتأكيد انخفاض MRC2 على مستوى البروتين. بالنسبة ل RT-qPCR، تم تحليل ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة، وتم تشغيل كل عينة في ثلاث نسخ تقنية.
8. اختبار تكاثر الخلايا
تم تقييم تكاثر الخلايا باستخدام اختبار CCK-8. تم زرع الخلايا في صفائح بئر 96 بكثافة مناسبة وزراعتها لفترات زمنية محددة. في كل نقطة زمنية، يضاف كاشف CCK-8 إلى كل بئر ويحتضن وفقا لتعليمات الشركة المصنعة، وبعد ذلك يتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الألواح الدقيقة. تم إجراء ما لا يقل عن ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.
9. اختبار تكوين المستعمرة
تم زرع الخلايا بكثافة منخفضة في صفائح بستة آبار وزراعتها لمدة 10–14 يوما. تم تثبيت المستعمرات ب 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وصبغت بلون بنفسجي كريستالي بنسبة 0.1٪ لمدة 15 دقيقة. تم غسل المستعمرات باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)، وتجفيفها بالهواء، والعد يدويا أو باستخدام برنامج تحليل الصور21. تم إجراء ما لا يقل عن ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.
10. اختبارات هجرة الخلايا والغزو
تم تقييم هجرة الخلايا والغزو باستخدام اختبارات إدخال الغشاء المسامي22. في اختبارات الغزو، تم تغطية الأجزاء العلوية مسبقا بهلام المصفوفة خارج الخلية؛ في اختبارات الهجرة، تم استخدام إدخالات غير مطلية. تمت إضافة خلايا معلقة في وسط خال من المصل إلى الغرفة العلوية، ووضع وسط يحتوي على المصل في الحجرة السفلية كجاذب كيميائي. بعد الحضانة، تم إزالة الخلايا غير المهاجرة من سطح الغشاء العلوي بلطف باستخدام مسحة قطنية. الخلايا التي هاجرت أو غزت السطح السفلي كانت تثبت ب 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 15 دقيقة، وتصبغ بلون بنفسجي بلوري بنسبة 0.1٪ لمدة 15 دقيقة، وتغسل بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات البارد، وتجفيف بالهواء، وتصور تحت مجهر مقلوب بتكبير ×200. تم عد الخلايا في خمسة حقول مجهرية مختارة عشوائيا لكل إدخال. تم إجراء ما لا يقل عن ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.
11. تحليل البقعة الغربية
تم تحلل الخلايا في مخزن RIPA الممزوج بمثبطات بروتيز، وتم تحديد تركيز البروتين باستخدام اختبار BCA. تم فصل كميات متساوية من البروتين الكلي بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى أغشية PVDF. تم حجب الأغشية في حليب خالي من الدسم بنسبة 5٪ لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة وحضنتها بالأجسام المضادة الأولية طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم استخدام الأجسام المضادة الأولية والتخفيفات العاملة التالية في الطلاء الغربي: مضاد MRC2 (1:5,000)، مضاد CDK4 (1:1,000)، مضاد CDK6 (1:2,000)، مضاد β-كاتينين (1:5,000)، مضاد إ-كاديرين (1:10,000)، مضاد N-كاديرين (1:3,000)، ومضاد β-أكتين (1:5,000). بعد الغسيل، تم حضن الأغشية بأجسام مضادة ثانوية مضادة للفأر IgG مضادة للفجل الحار أو أجسام مضادة ثانوية IgG مضادة للأرانب (1:5,000) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم تصور الإشارات باستخدام التلويض الكيميائي، وتم قياس شدة الشريط وتطبيعها إلى β-أكتين. تم إجراء ما لا يقل عن ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.
12. التحليل الإحصائي
تم إجراء تحليلات إحصائية باستخدام R ومنشور GraphPad. تمت مقارنة منحنيات البقاء باستخدام اختبار اللوغاريتم-رنت. تم استخدام نماذج الانحدار للمخاطر النسبية كوكس في التحليلات أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات. بالنسبة للتجارب المعتمدة على الخلايا، تعرض البيانات كمتوسط ± SD. قبل الاختبارات البارامترية، كان يتم تقييم الطبيعية باستخدام اختبار شابيرو-ويلك. بالنسبة للبيانات الموزعة بشكل طبيعي، تم تقييم الفروق بين مجموعتين باستخدام اختبار t الخاص بطالب، وأجريت مقارنات بين مجموعات متعددة باستخدام تحليل التحليل الذكري أحادي الاتجاه. إذا لم تتحقق افتراضات الطبيعية، تستخدم الاختبارات غير المعلمية المقابلة. تم تعديل قيم P لإجراء اختبارات متعددة باستخدام إجراء معدل الاكتشاف الكاذب Benjamini–Hochberg23,24. اعتبر النسبة الثقيلة ذات الجانبين < 0.05 ذات دلالة إحصائية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
التعبير الشامل للسرطان والمشهد التنبؤي لمرض MRC2
أجريت تحليلات شاملة للسرطان أولا لتوصيف نمط التعبير والأهمية التنبؤية لMRC2 عبر الأورام الخبيثة البشرية. أظهرت المقارنات المبنية على مجموعات بيانات TCGA وGTEx أن تعبير MRC2 يختلف بشكل ملحوظ بين الأنسجة الورمية والأنسجة الطبيعية في أنواع متعددة من السرطان (الشكل 2A، 2B). وقد أوضح ملخص مخطط الرادار بشكل أكبر التفاوت الواسع في تعبير MRC2 عبر أنواع السرطان (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعتمد العلاج القياسي للورم الدبقي على الاستئصال الآمن القصوى يليه العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي، وغالبا ما يكون التيموزولوميد4. ومع ذلك، غالبا ما يحد التسرب المنتشر من الإزالة الجراحية الكاملة ويساهم في الانتكاسة الحتمية، خاصة في الأمراض عالية الدرجة 3,25. تستخدم عدة ميزات جزيئية — بما في ذلك مثيلة منشط MGMT، طفرة IDH، الحذف المشترك 1p/19q، وتعديلات EGFR — سريريا للتوقعات والتخطيط للعلاج 26,27,28.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون لا يذكرون أي مصالح متنافسة.
حصل هذا العمل على دعم مالي من صندوق أبحاث العلوم والتكنولوجيا الطبية في مقاطعة قوانغدونغ (رقم A2024508)، وبرنامج محطة العمل لخبراء العلوم والتكنولوجيا الإقليمي في مستشفى هويتشو المركزي للشعب، ومشروع الابتكار وريادة الأعمال في هويتشو للابتكار وريادة الأعمال (رقم 2025EQ050012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الأجسام المضادة المضادة CDK4 | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 11026-1-AP | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID:AB_2078702. |
| الجسم المضاد المضاد ل CDK6 | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 66278-1-Ig | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID: AB_2881661. |
| الأجسام المضادة المضادة لمادة E-كاديرين | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 20874-1-AP | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID:AB_10697811. |
| الجسم المضاد المضاد ل-MRC2 | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 86028-1-RR | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID: AB_2879692. |
| الأجسام المضادة المضادة N-كاديرين | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 22018-1-AP | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID: AB_2813891. |
| الأجسام المضادة المضادة للبيتا؛ الأكتين | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 66009-1-Ig | الأجسام المضادة للتحكم في التحميل لإزالة الطلاء الغربي. RRID:AB_2687938. |
| الأجسام المضادة المضادة للبيتا;-كاتينين | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 51067-2-AP | الجسم المضاد الأساسي لمنطقة ويسترن بلوتينغ. RRID:AB_2086128. |
| مجموعة اختبار بروتين BCA | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | P0012 | مجموعة اختبار بروتين BCA لتحديد تركيز البروتين. |
| مجموعة عد الخلايا-8 (CCK-8) | مختبرات دوجيندو، اليابان | CK04-500T | اختبار البقاء/التكاثر الخلوي. |
| نظام تصوير الإضاءة الكيميائية | شركة Uvitec المحدودة، فرنسا | دليل التحالف Q9 المتقدم | نظام التقاط الصور لاكتشاف البقعة الغربية. |
| حاضنة CO2 | معدات مختبرية عامة | غير محدد | حاضنة CO2 المرطبة المستخدمة في زراعة الخلايا عند 37 ودرجة مئوية؛ C و5٪ CO2. |
| محلول البنفسجي الكريستالي (0.1٪) | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | C0121-100 مل | محلول صبغة بنفسجي كريستالي يستخدم بتركيز عمل 0.1٪. |
| DMEM، ارتفاع الجلوكوز | جيبكو، ثيرمو فيشر ساينتيفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | C11995500BT | وسط قاعدي لزراعة خلايا الورم الدبقية. |
| مصل البقر الجنيني (FBS) | إكس سيل بايو، الصين | FSP500 | مكمل مصل لزراعة الخلايا. |
| غليوفيس | gliovis.bioinfo.cnio.es | غير قابل للتطبيق | منصة قائمة على الويب لتصور وتحليل مجموعات بيانات تعبير أورام الدماغ، وخاصة الأورام الدبقية. |
| منشور جراف باد | جراف باد سوفتوير، الولايات المتحدة الأمريكية | الإصدار 10.4.0 | برنامج التحليل الإحصائي والرسوم البيانية. RRID: SCR_002798. |
| HEK293T الخلايا | مجموعة ثقافة الأنواع في الأكاديمية الصينية للعلوم، شنغهاي، الصين | GNHu43 | خط خلايا التعبئة المستخدم لإنتاج الفيروسات العدسية. RRID: CVCL_0063. |
| معالج IgG مضاد للفأر من نوع HRP (H+L) | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | SA00001-1 | الأجسام المضادة الثانوية لإزالة الطلاء الغربي. RRID: AB_2722565. |
| معالج IgG مضاد للأرانب الماعز المتعامل مع HRP (H+L) | مجموعة بروتين تيك، الولايات المتحدة الأمريكية | SA00001-2 | الأجسام المضادة الثانوية لإزالة الطلاء الغربي. RRID: AB_2722564. |
| الخلايا النجمية البشرية | مجموعة ثقافة الأنواع في الأكاديمية الصينية للعلوم، شنغهاي، الصين | غير متوفر للجمهور | الخلايا النجمية البشرية الطبيعية المستخدمة كوسيلة للتحكم غير الورمية؛ رقم الكتالوج غير متوفر للجمهور. |
| المجهر المقلوب | معدات مختبرية عامة | غير محدد | المجهر المقلوب المستخدم لالتقاط الصور في اختبارات الهجرة والغزو. |
| مصفوفة ماتريجيل | كورنينغ، الولايات المتحدة الأمريكية | 354234 | مصفوفة الغشاء القاعدي المستخدمة لتغطية الإدخال أثناء اختبارات الغزو. |
| قارئ الميكروبليت | معدات مختبرية عامة | غير محدد | قارئ الميكرولوح المستخدم لقياس الامتصاص عند 450 نانومتر في اختبارات CCK-8. |
| مجموعة تحضير جل PAGE، 10٪ | إبيزايم، الصين | PG212 | مجموعة تحضير جل SDS-PAGE. |
| مجموعة تحضير جل PAGE، 7.5٪ | إبيزايم، الصين | PG111 | مجموعة تحضير جل SDS-PAGE. |
| محلول بارافورمالديهايد (4٪) | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | P0099-100 مل | 4٪ مثبت بارافورمالديهايد لتكوين المستعمرات واختبارات الهجرة/الغزو. |
| محلول البنسلين-ستريبتوميسين | جيبكو، ثيرمو فيشر ساينتيفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 15140163 | مكمل مضاد حيوي لزراعة الخلايا. |
| بوليبرين | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | C0351-1 مل | محلول بروميد هيكساديميثرين (10 ملغ/مل) يستخدم لتسهيل نقل الفيروسات العدسية. |
| علامة البروتين الملطخة مسبقا | إلابساينس، الصين | E-IR-R331 | مؤشر وزن جزيئي للبروتين. |
| مجموعة كاشف RT برايم سكريبت | شركة تاكارا بيو، اليابان | RR047A | مجموعة النسخ العكسي لتخليق cDNA. |
| بوروميسين | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | ST551-10 ملغ | يستخدم دي هيدروكلوريد بوروميسين لاختيار خلايا الانهيار المستقرة. |
| غشاء PVDF | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | FFP20 | غشاء PVDF المحبة للماء (0.45 وميكرو؛ م) لنقل البقعة الغربية. |
| R | مؤسسة R للحوسبة الإحصائية، النمسا | الإصدار 4.5.1 | بيئة الحوسبة الإحصائية المستخدمة في التحليلات الحيوية المعلوماتية. RRID: SCR_001905. |
| مخزن تحليل RIPA | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | P0013B | محلول RIPA للتحليل (قوي) لاستخراج البروتين. |
| مخزن تحميل SDS-PAGE (5×) | بيوتايم بيوتكنولوجي، الصين | P0015L | مخزن تحميل عينات البروتين. |
| SYBR بريمكس إكس تاك II | شركة تاكارا بيو، اليابان | RR066A | مزيج qPCR الرئيسي. |
| إدخالات ترانسويل 8.0 وميكرو؛ حجم المسام | كورنينغ، الولايات المتحدة الأمريكية | 3422 | إدخالات زراعة الخلايا بمقياس 8.0 وميكرو؛ غشاء بولي كربونات بحجم المسام؛ صيغة 24 بئر قياسية لاختبارات الهجرة والغزو. |
| كاشف ترايزول | إنفيتروجين، ثيرمو فيشر ساينتفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | 10296010CN | مادة استخراج RNA. |
| خلايا الورم الدبقي U251 | المجموعة الوطنية لثقافات الخلايا المعتمدة، الصين | SCSP-559 | سلالة خلايا الورم الدبقي البشرية تستخدم في الفحوصات الهادمة والوظيفية. RRID: CVCL_0021. |
| خلايا الورم الدبقي U87 | المجموعة الوطنية لثقافات الخلايا المعتمدة، الصين | SCSP-5432 | سلالة خلايا الورم الدبقي البشرية تستخدم في الفحوصات الهادمة والوظيفية. RRID: CVCL_0022. |