نموذج فأر لإصابة دماغية مغلقة الدوران المتكررة والمتكررة بسبب ارتجاج الدماغ

ملخص

تم وصف نموذج فأر قابل للتكرار لإصابة الدماغ الارتجاجية الدورانية، يوفر طريقة متعددة الاستخدامات للتحقيق في الأسس الوظيفية والبيولوجية الدقيقة - بما في ذلك التغيرات العصبية الوعائية، الالتهابية، والسلوكية - بعد التأثير الفردي أو المتكرر في غياب تلف هيكلي واضح في الدماغ.

الملخص

إصابة الدماغ الارتجاجية (CBI)، وهي الركيزة الفسيولوجية المرضية التي تكمن وراء الارتجاج السريري، هي حالة شائعة لكنها غير مفهومة بشكل كاف مع احتمال وجود ضعف عصبي طويل الأمد لدى مجموعة فرعية من المرضى. ارتبط التحليل الدماغي المتكرر بشكل خاص، أي في الرياضات الاحتكاكية، بعجز معرفي دائم وحدوث تدهور عصبي تقدمي (مثل اعتلال الدماغ الرضحي المزمن، CTE). لمعالجة هذه الفجوة المعرفية، تم إنشاء نموذج فأر قابل للتكرار لإصابة الدماغ الدورانية ذات الرأس المغلق الذي يعيد تلخيص السمات الحيوية والمرضية الرئيسية ل CBI. تم استخدام جهاز اصطدام كهرومغناطيسي موجه بشكل ستيريوتاكتيك لتوجيه ضربة موحدة إلى الجمجمة السليمة. لتقليل الإجهاد البؤري على الجمجمة وأنسجة الدماغ المجاورة، تم تزويد رأس الاصطدام بغطاء سيليكون مخصص. هذا التكوين كان يحفز بشكل موثوق تدوير الرأس مع انخفاض التغير بين الحيوانات مع منع كسور الجمجمة أو إصابات الأنسجة المجهرية. للحفاظ على النشاط الفسيولوجي العصبي والأوعية الدموية وتجنب التأثيرات العصبية المحتملة للتخدير العميق، تم تحفيز إصابة دماغية في الفئران الواعية تحت التخدير الخفيف باستخدام منشط α2 ميديتوميدين. تسببت الصدمات الناتجة عن حركة دوران رأس قابلة للتكرار مع تغير طفيف يعزى إلى وضع الرأس. تم تقييم سلامة الدماغ الهيكلي باستخدام تصوير الرنين المغناطيسي المرجح بوزن T2 في الجسم الحي ، وتم تأكيده من خلال تحليلات نسيجية خارج الجسم الحي ، والتي لم تكشف عن أي دليل على اضطراب الأنسجة أو الكدمات أو نزيف دقيق، لكنها أظهرت اضطرابا طفيفا وواسع النطاق في واجهة الأوعية الدقيقة الدقيقة. يوفر هذا النموذج الجديد لإصابة الدماغ المغلق الدوراني منصة تجريبية قوية للتحقيقات الطولية للتغيرات العصبية العصبية الوعائية والالتهابية وتغيرات الحواجز الدموية الدماغية التي تحدث في غياب أمراض هيكلية واضحة. يتيح تطبيقه رؤى ميكانيكية حول الفيزيولوجيا المرضية للارتجاج السريري والعواقب التنكسية العصبية المحتملة للإصابة المتكررة، مما يسهل تطوير العلامات الحيوية السريرية التي تحتاجها بشكل عاجل.

المقدمة

تظل إصابات الدماغ الرضحية (TBI) سببا مهما للإعاقة طويلة الأمد عبر جميع الفئات العمرية، حيث يتأثر المراهقون والشباب بشكل غير متناسب ^1,2,3. الغالبية العظمى من إصابات الدماغ الرضحية تصنف كخفيفة (mTBI)، وتعرف عادة باسم ارتجاج في المخ على المستوى السريري. على الرغم من أن الارتجاج بطبيعته غير مرتبط بطبيعته بالضرر الهيكلي الظاهري للدماغ الذي يمكن اكتشافه بواسطة التصوير العصبي التقليدي، إلا أن الأدلة المتزايدة تشير إلى أن آلية الإصابة الأساسية—التي يشار إليها هنا باسم إصابة الدماغ الارتجاجية (CBI)—تمثل كيانا مرضيا مميزا وذو صلة سريرية.

على وجه الخصوص، تم ربط التكرار ب CBI، خاصة عند حدوثه في التتابع الزمني القريب، كما هو شائع في الرياضات الاحتكاكية والجيش، بتدهور معرفي مستمر، وأعراض نفسية عصبية، وتطور اعتلال دماغي رضحي مزمن (CTE)^1,2,3. هذا التفاوت الظاهر بين الطبيعة الطفيفة للإصابة الأولية واحتمالية حدوث آثار عصبية طويلة الأمد يشكل تحديا كبيرا لكل من التشخيص السريري والبحث الميكانيكي.

تشير الأدلة الناشئة إلى أن التغيرات الطفيفة والمستمرة في واجهة الوعاءات العصبية والدبقية تشكل آلية مرضية ذات صلة⁴. تشمل هذه التغيرات سلامة الحاجز الدموي الدماغي (BBB)، والبنية الوعائية الدقيقة، وتنشيط الحواجز الدبقية، واستثارة الخلايا العصبية، وعمليات الإصلاح الداخلية، مما قد يربط الفيزيولوجيا المرضية على مستوى الخلية بالعجز الوظيفي والسلوكي طويل الأمد الذي لوحظ بعد، خاصة التكرار، CBI 5,6,7,8 . بشكل جماعي، تعتبر هذه التغييرات بشكل متزايد مساهمات محتملة في تأخر العجز الوظيفي والسلوكي بعد CBI. ومع ذلك، فإن الطبيعة المشتتة والمتعددة الأوجه تعقد الفهم الآلي، وقد أعاقت حتى الآن تطوير التدخلات العلاجية المستهدفة.

النماذج ما قبل السريرية التي تلخص الجوانب الرئيسية للسلسلة الفيزيولوجية المرضية هي أدوات حاسمة لتحليل هذه الآليات وتحديد مسارات علاجية جديدة. بينما توجد مجموعة واسعة من نماذج TBI التجريبية، صممت معظمها لمحاكاة الإصابات المتوسطة إلى الشديدة أو الاعتماد على الضرر البؤري الهيكلي ^9,10,11. وعلى النقيض من ذلك، هناك نقص مذهل في نماذج الحيوانات لآلية الإصابة المميزة ل CBI⁵. في الغالب، تحدث إصابة دماغية مصنفة بأنها "خفيفة" نتيجة اصطدام بؤري على الرأس المثبت بشكل صلب، أو حتى بسبب الاصطدام المباشر بالقشرة بعد قطع الجمجمة، وهو ما يتناقض بشكل أساسي مع آلية الإصابة المنتشرة المدفوعة بالتسارع والتبطاؤ والتي تعرف الارتجاج في البشر ^6,7. على الرغم من أن هذه الأساليب تسمح بالتحكم الدقيق في معايير الإصابة، إلا أن قدرتها المحدودة على تكرار ديناميكيات الارتجاجات الحقيقية تقلل من أهميتها الانتقالية.

لتجاوز هذه القيود، توجد عدة طرق لتحفيز إصابة دماغية مغلقة قابلة للتكرار والانتشار 12,13,14. استنادا إلى هذه المفاهيم وبهدف تقليل التعقيد التقني، تم تطوير نموذج إصابة دورانية محكمة في الفئران باستخدام جهاز صدم كهرومغناطيسي متوفر تجاريا يستخدم غالبا في نماذج الصدمات التجريبية الأخرى (أي الاصطدام القشري المسيطر عليه، CCI). من خلال إحداث تأثير قابل للتكرار على الرأس الحر، يحافظ هذا النهج على السلامة الهيكلية مع تمكين التحقيق الطولي للتغيرات العصبية الوعائية، والعصبية الدبقية، والوظيفية بعد CBI واحد ومتكرر في ظروف تقترب بشكل وثيق من الخصائص البيوميكانيكية للارتجاج البشري.

وبالاقتران مع التقييم السلوكي الطولي، والتصوير الحي ، وعلم الأنسجة خارج الجسم الحي ، يوفر هذا النموذج منصة متعددة الاستخدامات وسهلة الوصول لاستكشاف التغيرات العصبية الوعائية، الدبقية، والسلوكية بعد تأثيرات فردية أو متكررة. وبالتالي، فهي مناسبة جدا لدراسة الآليات الثانوية الدقيقة للأمراض في CBI، وتحديد معايير الترجمة البديلة، وتقييم التدخلات العلاجية المحتملة في بيئة تجريبية ذات صلة سريرية.

البروتوكول

جميع إجراءات الحيوانات كانت تتوافق مع قانون رعاية الحيوان الألماني وتمت الموافقة عليها من قبل السلطات المؤسسية والحكومية (LANUV نوردراين-وستفالن؛ AZ 81-02.04.2020.A058). أجريت التجارب وفقا لإرشادات ARRIVE. يتم تفصيل سير العمل التخطيطي في الشكل 1. هذا البروتوكول يحفز بشكل موثوق إصابة دماغية ارتجاجية، كما يتضح من لجنة محددة من نتائج التحقق الهيكلية والسلوكية والعوائية العصبية (الشكل 2). جميع المواد المستخدمة في هذه الدراسة مفصلة في جدول المواد.

1. اعتبارات عامة

ملاحظة: كانت الفئران توضع اجتماعيا في ظروف موحدة (دورة ضوء/ظلام 12 ساعة) مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء بشكل مرضي. تم تأقلم الفئران مع المنشأة التجريبية لمدة لا تقل عن 7 أيام قبل الجراحة. تم استخدام ما مجموعه 40 فأرا في هذه الدراسة التجريبية، حيث تم تخصيص 10 حيوانات لكل مجموعة تجريبية (مجموعة ضابطة وهمية، مجموعة CBI فردية، CBI متكررة في التردد العالي، وCBI المتكررة في مجموعة منخفضة التردد). قم بإعداد نظام كاميرا عالي السرعة على مستوى العين مع رأس الفأرة في وضع ثابت أمام الفأرة (مثلا 10 سم). لضمان الاتساق عبر الاختبارات، حافظ على ثبات موقع الكاميرا واتجاهها. تم استخدام كاميرا GoPro Hero6 في هذه الدراسة بسرعة 240 إطارا في الثانية (إطار في الثانية) بدقة 1080 بكسل. يستخدم برنامج تحليل الحركة مفتوح المصدر كينوفيا (الإصدار 2025.2.0) للتحليلات الحركية الموصوفة.

2. التحفيز وتخدير

1. جهز الإعداد، بما في ذلك الإطار المجسم والتركيب الخاص بجهاز الاصطدام الكهرومغناطيسي.
2. أعط ترامادول (1 ملغ/مل) عن طريق ماء الشرب قبل يومين من تحفيز الصدمة واستمر لمدة ثلاثة أيام بعد (الجراحة الأخيرة).
3. تحفز التخدير باستخدام الإيزوفلوران في خليط أكسيد النيتروز/الأكسجين (O₂ 30٪، N₂O 70٪)، مع إيزوفلوران بنسبة 4–4.5٪ في غرفة الحث.
4. قيم تحمل الجراحة باستخدام رد فعل القرص الداخلي. تابع بمجرد غياب استجابة الانسحاب.
5. أخرج الفأرة من غرفة الحث وضعها على وسادة تسخين داخل إطار الستيريوتاكتيك. حافظ على درجة حرارة النواة عند 37 ± 1.0 درجة مئوية باستخدام مسبار مستقيم من الألياف الضوئية. احم العينين من الجفاف عن طريق تطبيق مرهم العيون.
6. حافظ على التخدير عن طريق توصيل الإيزوفلوران بنسبة 2.0–2.5٪ عبر مخروط أنف متصل بنظام التخدير المجسم.

3. تحضير الجمجمة

1. ثبت الفأرة داخل إطار الستيريوتاكتيك باستخدام قضبان أذن محددة.
2. احلق فروة الرأس وقم بتعقيم منطقة الجراحة جيدا باستخدام مطهر كحولي.
3. طبق التخدير الموضعي عن طريق الحقن تحت الجلد لبوبيفاكائين (0.1 ملغ/كغ).
4. أعد تقييم رد فعل القرص الجلدي قبل شق الجلد. تابع فقط في حال عدم وجود استجابة للانسحاب لضمان عمق ثابت للتخدير.
5. قم بإجراء شق في منتصف الجلد بطول حوالي 7 مم لكشف الجمجمة.
6. اعرض الجمجمة بعناية فوق العظم الجداري الأيمن بين بريغما ولامبدا.
7. تأكد من أن الإطار الستيريوتاكتيكي موجه بشكل عمودي على الجمجمة، مع وضع المحور الرأسي بزاوية 90° بالنسبة لسطح الرأس.
8. ثبت دبوس تحديد في حامل الستيريوتاكتيك ومركزه مباشرة على بريغما.
9. قم بصفر جميع الإحداثيات المجسمة ونقل دبوس العلامة إلى الإحداثيات الخلفية الأمامية الخلفية (AP) والمتوسطة الجانبية (ML) المحددة مسبقا (في نموذجنا، عند AP 0.5، ML -2.5). حدد نقطة الهدف بقلم لباد مقاوم للماء.

4. تعديل المسكنات

1. حرر الفأرة من قضبان الأذن.
2. حقن الميديتوميدين تحت الجلد (0.5 ملغ/كغ) وخفض الإيزوفلوران تدريجيا إلى <0.5٪.
3. حافظ على التخدير عند < 0.5٪ من الأيزوفلوران مع مراقبة التنفس ودرجة حرارة الجسم باستمرار.
4. اترك التوازن في هذه الظروف لمدة 10 دقائق للوصول إلى حالة تخدير مستقرة مع الحفاظ على نشاط الشبكة العصبية. تم استخدام معدل التنفس، غياب الاستجابات الانعكاسية، ودرجة حرارة الجسم المستقرة (37 ± 1.0 درجة مئوية) كمؤشرات موحدة لضمان عمق تخدير مماثل بين الحيوانات.

5. الحث بالصدمات

ملاحظة: قبل التجربة، قم بتصنيع حامل رأس للنموذج الحيواني من عزل أنابيب البولي إيثيلين (PE) المتوفر تجاريا، وهو رغوة بوليمرية مغلقة الخلية وغير متشابكة متقاطعة، تحد من التسارع للأسفل مع السماح بالحركة الدورانية. بالإضافة إلى ذلك، تصنع رأس صدمات كروي بقطر 5 مم مصنوع خصيصا من السيلبوران (نسبة 1:1؛ الصلابة 830 كيلو باسكال).

1. قم بإزالة مسبار درجة الحرارة المستقيم ووقف توصيل الإيزوفلوران، ثم ضع الفأر في وضعية الاستلقاء على حامل الرأس.
2. قم بتثبيت غطاء السيليكون المصنوع خصيصا على رأس الصدمات المتوفر تجاريا.
3. قم بتركيب الصدمات الكهرومغناطيسية في حامل الستيريوتاكتيك وتأكد من أن الجهاز موجه بزاوية 10° بالنسبة لسطح الجمجمة.
4. محاذاة طرف الاصطدام فوق المنطقة المستهدفة المحددة مسبقا على الجمجمة.
5. خفض طرف الاصطدام في الوضع الممتد حتى يلامس سطح الجمجمة برفق.
6. اسحب طرف الاصطدام ودفعه إلى عمق الانبعاج المطلوب (أي 3 مم في هذه التجارب) نحو سطح الجمجمة. بالنسبة للحيوانات الضابطة، استبعد الخفض وارفع الرأس بنفس المقدار بدلا من ذلك.
7. ابدأ تسجيل الفيديو. إحداث صدمة دورانية واحدة عن طريق تفعيل المزلاج الكهرومغناطيسي عبر مفتاح التحكم بسرعة 5 مم/ث ومدة نبضة 0.1 مللي ثانية.
8. اسحب الاصطدام فور اكتمال الصدمة.
9. تثبيط تخدير الميديتوميدين باستخدام المضاد أتيبامازول (0.5 ملغ/كجم، ش.س.).

6. تقييم ما بعد الصدمة وإغلاق الجرح

1. حول الفأرة إلى وضعية الاستلقاء على ظهرك.
2. قيم رد فعل التصحيح بتسجيل الوقت اللازم للحيوان للعودة إلى وضعية الاستلقاء.
3. أعد تحفيز التخدير باستخدام الإيزوفلوران في خليط أكسيد النيتروز/الأكسجين (O₂ 30٪، N₂O 70٪) عند 4٪ إيزوفلوران.
4. أخرج الفأرة من غرفة الحث وضعها على وسادة التدفئة بجانب الإطار المجسم. حافظ على درجة حرارة النواة عند 37 ± 1.0 درجة مئوية باستخدام مسبار مستقيم من الألياف الضوئية.
5. ثبت الفأرة في إطار الستيريوتاكتيك باستخدام قضبان الأذن.
6. أغلق شق الجلد باستخدام غرز متقطعة ذات خيوط ذاتية الامتصاص (مثل بوليجلاكتين 910، 6-0).
7. انقل الفأرة إلى صندوق تدفئة وراقب حتى تستعيد وعيها تماما.
8. أعد الحيوان إلى قفصه المنزلي.

7. نموذج التأثير المتكرر

1. تعيين الفئران لمجموعات CBI وهمية أو فردية أو متكررة وفقا لتصميم التجربة.
2. بالنسبة للمجموعات التي تعرضت للإصابات المتكررة، جدولوا جلسات CBI التالية على فترات محددة (مثل كل 48 ساعة).
3. قبل كل تحليل تقريبي (CBI) لاحق، قم بإعطاء مسكنات قبل العملية عبر ترامادول في مياه الشرب كما هو موضح في القسم 3.1.
4. تكرار التخدير، ووضع العلامات المجسمة، والتأثير باتباع نفس الإجراء الموضح في الأقسام 3–6، بما في ذلك التخدير الموضعي بالبوبيفاكين (0.1 ملغ/كجم، ش.ج.)، وإعطاء الميديتوميدين (0.5 ملغ/كغ، s.c.) مع الحفاظ على الإيزوفلوران عند < 0.5٪، والاستهداف المجسم عند AP 0.5 وML −2.5 بالنسبة للبريغما، وتنفيذ تأثير ارتجاعي دوراني باستخدام مصطم كهرومغناطيسي (عمق الانبعاج 3 مم، السرعة 5 مم/ثانية، مدة النبضة 0.1 مللي ثانية، زاوية 10° بالنسبة لسطح الجمجمة).
5. ضمان تحديد المواقع المتسقة (وضعه على حامل رأس رغوة البولي إيثيلين يسمح بالحركة الدورانية)، ومعايير التأثير المتطابقة (الزاوية، العمق، السرعة، والمدة)، وظروف موحدة حول وبعد الإجراءات، بما في ذلك تثبيط الميديتوميدين بالأتيبامازول (0.5 ملغ/كجم، s.c.)، إعادة تحفيز التخدير (4٪ إيزوفلوران في O₂ 30٪/N₂O 70٪)، والتحكم في درجة الحرارة عند 37 ± 1.0 درجة مئوية، عبر جلسات متكررة للحفاظ على قابلية التكرار عبر الحيوانات ونقاط الزمن.
6. ضمان تموضع متسق، ومعايير التأثير، وظروف التعافي عبر جلسات متكررة للحفاظ على قابلية التكرار عبر الحيوانات والنقاط الزمنية.
7. راقب الحيوانات باستمرار بحثا عن العجز السلوكي التراكمي بعد تكرار الاصطدامات.

8. التحليل الحركي

1. تصدير الفيديوهات بصيغة قياسية (مثل MP4) للتحليل وتحميلها إلى برنامج كينوفيا.
2. انتقل إلى نافذة زمنية مناسبة تحتوي على إطارات ما قبل وبعد الاصطدام (مثلا، -0.025 إلى 0.3 ثانية من الاصطدام). تأكد من ضبط معدل إطارات مناسب (مثلا 240 إطار في الثانية) في إعدادات البرنامج. حدد مرجع مقياس (مثل المسافة بين العيون).
3. استخدم أداة تتبع كينوفيا لإنشاء إعداد تتبع ثلاثي النقاط (مثل العين اليمنى، العين اليسرى، الأنف؛ الشكل 3A). ابدأ التتبع لكل نقطة وصحح أخطاء التتبع يدويا، خاصة أثناء الحركة السريعة أو الإخراج.
4. تصدير الإحداثيات المتتبعة كملفات CSV أو Excel.
   ملاحظة: تم إجراء تحليل حركي إضافي باستخدام سكريبت MATLAB مخصص. تم استيراد بيانات التتبع المحلولة زمنيا التي تصدر من كينوفيا ومعالجتها مسبقا لإزالة الإدخالات غير الصالحة وضمان تكبير الوقت المتسق. تم تعريف نقل الرأس بأنه مركز المعالم الثلاثة المدرعة (العين اليمنى، العين اليسرى، والأنف)، والتي تم استخراج الإزاحة الخطية، والسرعة، والتسارع باستخدام التفاضل العددي. تم تقدير دوران الرأس من اتجاه محور العين والأنف، مع حساب الإزاحة الزاوية بالنسبة لخط الأساس والسرعة الزاوية قبل الاصطدام التي تم الحصول عليها كمشتقة أولى. لتقليل تضخيم الضوضاء، تم تنعيم جميع إشارات الموقع والزاوية باستخدام مرشح سافيتسكي–غولاي قبل التفاضل. كان المعامل الأساسي للنتيجة هو أقصى إزاحة زاوية، بينما تم تحليل ملفات السرعة والتسارع كمقاييس نسبية لديناميكيات حركة الرأس عبر التجارب.

النتائج

اعتبارات عامة:

تطبيق هذا البروتوكول يسبب بشكل متكرر إصابات دماغية ارتجاجية، كما يتضح من مجموعة محددة من قراءات التحقق الهيكلية والسلوكية والعصبية الوعائية (انظر الشكل 2). تم الحفاظ على السلامة الهيكلية بعد الإصابة. لم يتم اكتشاف أي اضطراب أو نزيف واضح في الأنسجة الماكروسكوبية، مما يشير إلى أن البروتوكول يسبب إصابة دماغية ارتجاجية بدلا من إصابة صدمية. أكد التقييم النسيجي بنية الأنسجة سليمة دون وجود دليل على فقدان ...

المناقشة

يتميز نموذج فأر جديد لتحليل الدماغ المغلق الرأس يعتمد على إصابة التسارع والتباطؤ، حيث يتميز بضعف خفيف لكنه واسع النطاق في BBB ونمط ظاهري عصبي نفسي مميز يشبه الارتجاج السريري. من خلال إعادة إنتاج السمات الرئيسية ل CBI بطريقة مضبوطة ومتسقة مع الحفاظ على السلامة الهيكلية، يوفر النموذج إطارا تجريبيا مفيدا وموصوفا جيدا لدراسة الآليات الكامنة وراء CBI وتبعاته العصبية النفسية والمعرفية.

الخطوات الحرجة داخل البروتوكول هي تلك التي تحدد التحميل الميكانيكي الفعال للرأس. ...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الدواء
Antipamezole	Vetoquinol	VM 06043/4004	مضاد للمديتوميدين (مضاد مستقبلات ألفا 2)، تحت الجلد (0.5 ملغ / كجم)
Bepanthen مرهم عين	Bayer	11809917	حماية العين خلال التخدير، موضعي
Bupivacaine	Sigma-Aldrich	B1160000	تخدير موضعي، تحت الجلد (0.1 ملغ / كجم)
Isoflurane	CP pharma	1214CN	تخدير، استنشاق (الإحضار والصيانة)
Medotomidine	Vetoquinol	VM 06043/4003	مهدئ/مخدر مساعد (منشط مستقبلات ألفا 2)، عن طريق الجلد (0.5 ملغ / كجم)
Tramadol hydrochloride (100 ملغ / مل)	Grünenthal	6867645	مسكن يتم إعطاؤه عن طريق الماء، تركيز نهائي 1 ملغ / مل للفئران، من يومين قبل الجراحة إلى 3 أيام بعدها
المعدات
وسادة عنق بولي إيثيلين	مخصص		دعم للوضعية المائلة أثناء التأثير
غطاء Silupran لجهاز التأثير الجراحي	مخصص		يوزّع الحمل الميكانيكي، يمنع تلف الجمجمة الموضعي، مرتبط بطرف جهاز التأثير، 830 كيلو باسكال
جهاز التأثير الجراحي	Leica Biosystems	39463923/IM10131	جهاز تأثير كهرومغناطيسي لتوصيل تأثير متحكم فيه
الأدوات
GoPro Hero6	GoPro Inc., San Mateo, CA, USA
Kinovea		(الإصدار 2025.2.0)
MATLAB	MathWorks, Natick, MA, USA	NA