يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

MiR-483-3p كمؤشر تنبؤي في سرطان الرئة غير الصغير: تثبيط تقدم الورم عبر خفض KIF3B

141 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/71006

⸱

يونيو 5, 2026

 , 
1Department of Respiratory and Critical Care Medicine, The Affiliated Taizhou People's Hospital of Nanjing Medical University, Taizhou School of Clinical Medicine, Nanjing Medical University, 2Department of Oncology, The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

في هذه المقالة

ملخص

خفض تنظيم miR-483-3p هو مؤشر تنبؤي ضعيف في NSCLC. يؤدي فرط التعبير عن miR-483-3p إلى قمع الأنماط الخبيثة لخلايا NSCLC، التي تم عكس وظيفتها بسبب الإفراط في التعبير عن KIF3B.

الملخص

تلعب الميكرو RNA أدوارا واسعة في سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC). لدراسة القيمة السريرية ل miR-483-3p في NSCLC وهدفه الجزيئي، تم تجنيد 350 مريضا من NSCLC في هذه الدراسة. أظهرت نتائج RT-qPCR أن التعبير النسيجي للورم ل miR-483-3p انخفض تدريجيا مع زيادة مرحلة انتشار العقدة الورمية (TNM). أظهر منحنى خاصية تشغيل المستقبل (ROC) أن مستوى miR-483-3p النسيجي يمكنه بفعالية التمييز بين مرضى NSCLC ذوي المرحلة العالية من TNM (III) وأولئك الذين لديهم مرحلة منخفضة (I+II) (المساحة تحت منحنى ROC = 0.869). أظهر منحنى كابلان-ماير أن مرضى NSCLC الذين لديهم تعبير منخفض عن miR-483-3p أظهروا معدل بقاء إجمالي أقل لمدة 5 سنوات. بعد تعديل عوامل أخرى مربكة، حدد تحليل كوكس متعدد المتغيرات أيضا miR-483-3p كعامل حماية مستقل لبقاء NSCLC. ميكانيكيا، أظهر اختبار سحب الحمض النووي الريبي أن زيادة تنظيم miR-483-3p كان مرتبطا ب mRNA KIF3B وثبط تعبيره، مما أدى إلى كبح الأنماط الخبيثة لخلايا NSCLC وتحفيز الاستماتة المبرمجة. في الختام، يعد انخفاض تنظيم miR-483-3p علامة تنبؤية ضعيفة في NSCLC، مما قد يؤثر على تقدم السرطان من خلال تنظيم KIF3B سلبا.

المقدمة

من بين الوفيات المرتبطة بالسرطان، يعد سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) أحد الأسباب الرئيسية. يعزى معدل الوفيات المرتفع بشكل أساسي إلى النمو العدواني للأورام، والانتشارات المبكرة، وتطور المقاومة المكتسبة 1,2,3. على الرغم من التقدم في الاستراتيجيات السريرية الحالية، لا يزال التشخيص العام لمرضى NSCLC ضعيفا 4,5,6. بالإضافة إلى التحديات البيولوجية، غالبا ما يعاني مرضى NSCLC من عبء أعراض ثقيلة، بما في ذلك الألم، وعسر التنفس، والتعب، والضيق النفسي، مما يؤثر بشكل كبير على جودة حياتهم ويعقد الإدارة السريرية. تلعب الرعاية التمريضية الفعالة — مثل تقييم الأعراض، وتثقيف المرضى، والدعم النفسي الاجتماعي، وتنسيق الرعاية متعددة التخصصات — دورا حيويا في تحسين نتائج المرضى والتزامهم بالعلاج. لذلك، فإن التحقيق المعمق في الآليات الجزيئية الرئيسية التي تحرك تطوير وتقدم NSCLC أمر بالغ الأهمية لتطوير مؤشرات حيوية تنبؤية جديدة واستراتيجيات علاجية فعالة، وكذلك لتوجيه تدخلات تمريضية مستهدفة تلبي الاحتياجات المرتكزة على المرض والمريض.

تم الإبلاغ على نطاق واسع عن أن الميكرو RNA (miRNAs) ينظم التعبير الجيني إما عن طريق تثبيط ترجمة mRNA المستهدف أو تعزيز تحللها عند المستوىالتالي للنسخ 7. تشير الأبحاث الموسعة إلى أن ال miRNA يلعب دورا تنظيميا حيويا في أنواع مختلفة من السرطان، بما في ذلك NSCLC. يرتبط اختلال تنظيمها ارتباطا وثيقا بالنمط الظاهري لالخلايا الورمية الخبيثة ومقاومة العلاج الكيميائي 7,8,9,10,11. لذلك، أصبح تحديد ال miRNA التي تعبر عنها بشكل غير طبيعي في NSCLC وتتجه أدوارا وظيفية مهمة موضوعا ساخنا في أبحاث الأورام الحالية. كشف تحليلنا الأولي للمعلوماتية الحيوية عن انخفاض مستمر في miR-483-3p لدى مرضى NSCLC وخطوط الخلايا المقاومة للأدوية، مما يشير إلى ارتباطها المحتمل بتقدم المرض السلبي. لذلك، تركز هذه الدراسة على miR-483-3p لاستكشاف وظيفته في NSCLC. تشير الأدلة الحالية إلى أن miR-483-3p يعمل كجين مثبط للورم في أنواع مختلفة من سرطانات الإنسان 12,13,14,15، ويعتقد أن إسكاتها مرتبط بمقاومة الجفيتينيب في NSCLC 16. ومع ذلك، لا تزال نمط تعبيره المحدد في NSCLC، وقيمته التنبؤية السريرية، والآليات الجزيئية الأساسية غير مفهومة بشكل كامل.

كان هدف هذه الدراسة توضيح الأهمية السريرية والوظائف البيولوجية ل miR-483-3p في NSCLC بشكل منهجي، وتوضيح دور عضو عائلة الكينيسين المستهدف 3B (KIF3B) بشكل منهجي. لتحقيق ذلك، قمنا أولا بتحليل تعبيره في عينات الأنسجة السريرية وارتباطه بالخصائص السريرية والمرضية للمرضى وتوقعات مرضهم. لاحقا، أجريت اختبارات وظيفية في المختبر لدراسة تأثيرات miR-483-3p على وظائف خلايا NSCLC. علاوة على ذلك، حددنا KIF3B كجين هدف رئيسي في الأسفل لاختبار miR-483-3p من خلال التنبؤ بالمعلوماتية الحيوية وتجارب علم الأحياء الجزيئي، وأكدنا العلاقة التنظيمية عبر اختبارات الإنقاذ الوظيفي. يرتبط التعبير العالي ل KIF3B بزيادة التكاثر، وزيادة الهجرة، ومقاومة العلاج الكيميائي في خلايا السرطان 17,18,19,20,21,22، لكن دوره الوظيفي في NSCLC لا يزال غير واضح. حسب معرفتنا، هذه الدراسة هي الأولى التي تصف دور وأهمية محور miR-483-3p/KIF3B في NSCLC من ثلاثة وجهات نظر—التوقعات السريرية، تحديد الجينات المستهدفة، والآليات الوظيفية—مما قد يوفر رؤى جديدة لتقييم توقعات NSCLC والعلاج المستهدف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وافقت لجنة الأخلاقيات في المستشفى الثاني التابع لجامعة نانجينغ الطبية على هذه الدراسة. تم تطبيق المبادئ الأساسية لإعلان هلسنكي باستمرار طوال عملية البحث بأكملها. تم الحصول على موافقة مكتوبة مستنيرة من جميع المشاركين الفرديين المشاركين في الدراسة. تم توفير معلومات مفصلة عن جميع المواد والكواشف في جدول المواد.

تحليل المعلوماتية الحيوية:

تم تطبيق قاعدة بيانات التعبير الجيني (www.ncbi.nlm.nih.gov) للبحث في مجموعات البيانات المتعلقة ب NSCLC. GSE171517 هو تحليل RNA غير مشفر يعتمد على عينات المصل من مرضى NSCLC وأفراد الضابطين الأصحاء. GSE110815 هو تحليل مصفوفة RNA غير مشفرة يجرى على خلايا NSCLC المقاومة للجيفيتينيب والحساسة. تم فحص miRNA المعبر عنها بشكل تفاضلي في هاتين المجموعتين من خلال تحديد عتبة |log2FC| ≥ 2، الصفحات < 0.05. على الرغم من أن هذه المجموعات تأتي من أقسام مختلفة (المصل، خطوط الخلايا)، استخدمنا استراتيجية تكميلية: miRNA مشتقة من المصل لإمكانات المؤشرات الحيوية غير الغازية، وmiRNA المشتقة من خطوط الخلايا المقاومة للأدوية لأهمية وظيفية مع التقدم والمقاومة. تم ترشيح التقاطع miR-483-3p للتحقق من صحة الأنسجة، بافتراض أن خلل التنظيم عبر الأقسام يشير إلى صلة بيولوجية قوية ب NSCLC.

تم التنبؤ بالأهداف المحتملة ل miR-483-3p في قواعد بيانات miRDB (https://mirdb.org/custom.html) وقاعدة النجوم (https://rnasysu.com/encori/index.php) في نفس الوقت. كان عتبة الفحص في هاتين القاعدتين هي Target Score ≥ 60 وTDMDScore ≥ 1 على التوالي. ثم تم استخدام منصة تحليل المعلوماتية الحيوية (www.bioinformatics.com.cn) لتحليل GO باستخدام تقاطع هذه الأهداف.

إدراج العينة السريرية:

هذه الدراسة هي دراسة رصدي رجعي تعتمد على عينات NSCLC التي تم استئصالها جراحيا. شملت هذه الدراسة 350 مريضا من NSCLC خضعوا لعلاج جراحي في المستشفى، منهم 96 مريضا يعانون من انتشار العقد الورمية (TNM) في المرحلة الأولى، و96 مريضا في المرحلة الثانية، و158 مريضا في المرحلة الثالثة. تم عرض خصائصها السريرية التفصيلية في الجدول 1. تم تشخيص جميع هؤلاء المرضى بمرض NSCLC من خلال الفحص النسيجي. تشمل معايير الاستبعاد ضعف الوظائف القلبية أو الكبدية أو الكلوية، أو العدوى النشطة أو أمراض المناعة الذاتية، أو اضطرابات نفسية شديدة أو ضعف معرفي، أو فقدان أو نقص السجلات السريرية، وعدم الحصول على موافقة مستنيرة من المرضى. تم إجراء التحليل السريري بجمع عينات أنسجة الورم وحالة البقاء خلال خمس سنوات بعد التشخيص. منهجية المتابعة هي كما يلي: تم متابعة جميع المرضى من تاريخ الجراحة حتى وفاتهم، أو فقدان المتابعة، أو نهاية الدراسة. خلال السنة الأولى، تم إجراء المتابعة كل 3 أشهر. بعد ذلك، كان يجرى كل 6 أشهر من خلال الفحوصات الخارجية والمقابلات الهاتفية. في كل متابعة، تم تسجيل معلومات عن حالة البقاء على قيد الحياة، وسبب الوفاة، وتكرار المرض، والعلاج اللاحق. تم تعريف فترة البقاء الكلية بأنها الفترة من تاريخ الجراحة حتى تاريخ الوفاة لأي سبب.

معالجة الخلايا:

تم زراعة BEAS-2B، وهو خط خلوي ظهاري طبيعي في الرئة البشرية، في DMEM يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و1٪ بنسلين/ستربتوميسين (P/S). جميع خطوط خلايا NSCLC (HCC827، H1299، H520، A549) كانت تزرع في وسط نمو مخصص يزوده نفس المورد. الصياغة الأساسية للوسط المتخصص ل HCC827 وH1299 وH520 هي RPMI-1640 + 10٪ FBS + 1٪ P/S، والتي بالنسبة ل A549 هي F-12K من Ham + 10٪ FBS + 1٪ P/S. تذيب الخلايا المجمدة بسرعة في حمام ماء بدرجة حرارة 37 درجة مئوية، ويتم طرد مركزها لإزالة وسط الحفظ بالتجميد، وتعليق في وسط زراعة طازج. عندما تصل الخلايا إلى 90٪ من التقاء البعض، تهضم ب 0.25٪ تريبسين-إيدتا وتمر بنسبة 1:3. تم التحقق من جميع خطوط الخلايا بواسطة تحليل STR (الملف التكميلي 1)، وهي خالية من تلوث الميكوبلازما. جميع التجارب المختبرية استخدمت خلايا من الجيل الرابع حتى العاشر.

تم نقل منشط miR-483-3p وجهاز التحكم السلبي (المنشد الكهربائي-NC)، والحمض النووي الريبي المتداخل الصغير ل KIF3B (si-KIF3B) والتحكم السلبي (si-NC)، بالإضافة إلى متجه التعبير الزائد KIF3B (oe-KIF3B) والتحكم الفارغ (oe-NC) باستخدام كاشف التحويل. كان تركيز العمل لمنبه miR-483-3p أو المنشط-NC 100 نانومتر، وكمية بلازميد oe-KIF3B كانت 2.5 ميكروغرام (صفيحة ذات 6 آبار). تم جمع الخلايا بعد 48 ساعة من النقل للتجارب اللاحقة.

RT-qPCR:

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي في عينات أنسجة الورم والخلايا باستخدام كاشف تريزول. تم تحضير cDNA المنسوخ عكسيا باستخدام مجموعة كاشف RT، ثم تم إجراء qPCR على نظام 7500 Fast RT-PCR باستخدام SYBR Green Pro Taq HS Premix. تم تطبيع التعبير النسبي ل miR-483-3p وKIF3B باستخدام نظام تنظيف U6 وGAPDH من خلال طريقة 2-ΔΔCT . التتاليات التمهيدية المقابلة هي كما يلي:

miR-483-3p (F)، 5'-ACACTCCAGCTGGGTCACTCTCTCCTCCTCC-3'

miR-483-3p (R)، 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGGAGTCGGCAATTCAGTGAGAGAGGG-3'

KIF3B (F)، 5'-ATCCTGGGCAGAACGACGAG-3'

KIF3B (R)، 5'-GTTCCAAGGTCTCTCTCG-3'

U6 (F)، 5'-ATGTTCCAGTATGACTCTA-3'

U6 (R)، 5'-ATGTTCCAGTATGACTCTA-3'

GAPDH (F)، 5'-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3'

GAPDH (R)، 5'-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3'

تم إجراء RT-qPCR باستخدام ثلاثة نسخ بيولوجية مستقلة.

بقاء الخلايا:

تم زرع خلايا HCC827 (3000 خلية/بئر) وA549 (2000 خلية/بئر)، مع أو بدون تحويل، في صفيحة مكونة من 96 بئر لفترات زراعة مختلفة. بعد التصاق الخلايا بالسطح، تم تقييم صلاحية الخلايا في نقاط زمنية محددة في الآبار المخصصة. على وجه التحديد، أضيفت 10 ميكرولتر من مجموعة عد الخلايا (CCK-8) و90 ميكرولتر من الوسط إلى الآبار لحضانة لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. ثم تم قياس امتصاص كل بئر عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوبلات. تم إجراء بقاء الخلايا باستخدام ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.

اختبار ترانسويل:

تم استخدام جهاز غرفة ترانسويل المغطى بالمصفوفة أو غير المطلي بغشاء القاعدة (8 ميكرومتر) لاختبار الغزو/الهجرة. بعد أن تم زرع الغرفة العلوية بخلايا NSCLC المنقولة (8 × 104، 500 ميكرولتر)، وتم ملء الحجرة السفلية ب 700 ميكرولتر من DMEM (10٪ FBS). تم إجراء حضانة لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. بعد مسح الخلايا في الطبقة العليا من غشاء الحجرة بلطف باستخدام مكشوفة قطنية، تم تثبيت الخلايا على السطح السفلي للغشاء ب 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم صبغت بمحلول بنفسجي بلوري بنسبة 0.1٪ لمدة 10 دقائق على درجة حرارة الغرفة، تليها غسل قصير بماء الصنبور الجاري لإزالة البقع الزائدة. تم عد الخلايا المنقولة يدويا باستخدام المجهر الضوئي. لكل غرفة ترانسويل، تم اختيار ثلاثة مجالات رؤية غير متداخلة عشوائيا، وتم احتساب عدد الخلايا الملونة في كل حقل. ثم تم حساب متوسط عدد الخلايا. تم إجراء هذا العد من قبل باحثين مستقلين لم يكونا على دراية بالظروف التجريبية، وتم استخدام القيم المتوسطة الناتجة للتحليل الإحصائي. تم إجراء اختبار عبر البئر باستخدام ثلاثة نسخ بيولوجية مستقلة.

اكتشاف الخلايا المبرمجة

تم استخدام مجموعة تلوين Annexin V-FITC/PI لاكتشاف موت الخلايا في NSCLC. باختصار، تم تحضير تعليق يحتوي على 6 ×10 4 خلايا باستخدام 195 ميكرولتر من مخزن الربط Annexin V-FITC. ثم أضيفت محلول Annexin V-FITC (5 ميكرولتر) ومحلول تلوين PI (10 ميكرولتر) بشكل متسلسل لمدة حضانة لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. بعد انتهاء الحضانة، تم استخدام مقياس التدفق الخلوي فورا لاكتشاف الخلايا المراد اختبارها. لكل عينة، تم الحصول على 10,000 حدث. كانت استراتيجية البوابات كما يلي: تم أولا تغليف الخلايا على FSC-A مقابل SSC-A لاستبعاد الحطام، تلتها بوابات السينغلت على FSC-A مقابل FSC-H. ثم تم تحديد الخلايا الاستماتية في مخططات Annexin V-FITC مقابل PI dot. تم ضبط الأرباع باستخدام أدوات تحكم غير مصبوغة وملوعة بلون واحد. تم حساب نسبة الاستماتة المبرمجة كمجموع خلايا الاستماتة المبكرة (Annexin V⁺/PI⁻) والخلايا المتأخرة المبوتة (Annexin V⁺/PI⁺). تم إجراء كشف الاستماتة الخلوية باستخدام ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.

سحب الحمض النووي الريبي للأسفل

تم تصنيع جزء من الحمض النووي الريبي الريبي لجهاز KIF3B (KIF3B/NM004798.4/NP004789.1: 32334713–32334791، 5'-AGAAATCTGTCACCTTCTGCCTGCCTTGGTTTTGGTTGGTTGAATGAATGAATGCTGGTTTTATATGAGGTTATGAATGAATGTGTTGGTTATATGAAGGAGTGATCCT-3'، 78 NT) في المختبر ووضع علامة بيوتين باستخدام مجموعة RNA 3' End Desthiotinylation. بعد حضانة مستخلصات الخلايا باستخدام mRNA الموسوم بالبيوتين KIF3B لمدة 1.5 ساعة عند 4 درجات مئوية، أضيفت خرزات مغناطيسية من الستربتافيدين لحضانة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. وأخيرا، تم اكتشاف مستوى miR-483-3p في كل تفاعل بواسطة RT-qPCR، مع ثلاث نسخ بيولوجية مستقلة.

التحليل الإحصائي

تم التعبير عن المتغيرات المستمرة في هذه الدراسة كمتوسط ± انحراف معياري (متوسط ± SD)، بينما تم تقديم البيانات الفئوية كأعداد. تم استخدام برامج التحليل الإحصائي المناسبة للتحليل الإحصائي. تم استخدام تحليل التنفس الجديد/الاتجاهين في تحليل البيانات التجريبية، تلاه اختبار ما بعد الوقوع لتوكي. تم اعتبار النسبة < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

تم إجراء تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لتحديد قدرة التعبير miR-483-3p على التمييز بين مرضى NSCLC ذوي المرحلة العالية (III) وأولئك الذين لديهم تصنيف TNM في المرحلة المنخفضة (I + II). تم استخدام مؤشر يودن (الحساسية + النوعية – 1) لتحديد قيمة القطع التي تعظم التوازن بين الحساسية والنوعية. تم حساب المساحة تحت المنحنى (AUC) لتقييم القدرة التمييزية العامة للتعبير miR-483-3p. تم اعتبار معدل AUC > 0.7 مقبولا. تم إجراء جميع تحليلات ROC باستخدام منشور GraphPad.

لتحليل البقاء، تم استخدام طريقة كابلان-ماير لتقدير منحنيات البقاء الكلي. تم تطبيق اختبار التصنيف اللوغاريتمي لمقارنة توزيعات البقاء بين المجموعات (miR-483-3p في مجموعات تعبير عالي مقابل منخفض التعبير). تم رسم منحنيات كابلان-ماير بفترة ثقة 95٪ (CI). بالنسبة لنموذج الانحدار النسبي متعدد المتغيرات لكوكس، تم تطبيق استراتيجية اختيار المتغيرات التالية: تم إجراء التحليل أحادي المتغير أولا لكل متغير مرشح. تم اعتبار المتغيرات ذات القيمة p < 0.10 في التحليل الأحادي المتغير كمؤشرات محتملة وأدخلت لاحقا في نموذج الانحدار متعدد المتغيرات كوكس. تم إجراء التحليل متعدد المتغيرات باستخدام طريقة الاختيار خطوة بخطوة (مشروطة) استنادا إلى اختبار نسبة الاحتمالية، مع تحديد معايير الدخول والإزالة عند p < 0.05 و p > 0.10 على التوالي. تم التحقق من افتراض المخاطر النسبية لكل متغير باستخدام بقايا شونفيلد (أشار p > 0.05 إلى عدم وجود انتهاك). تم الإبلاغ عن النتائج كنسب خطر (HR) مع فاصل ثقة 95٪. كانت جميع الاختبارات ثنائية الجانب، واعتبرت قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية ما لم يذكر خلاف ذلك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يمثل انخفاض مؤشر miR-483-3p تشخيصا سيئا في NSCLC

يشير مخطط فين (الشكل التكميلي 1) إلى أن miR-483-3p يبدو منخفضا في عينات مصل مرضى NSCLC وخطوط الخلايا المقاومة للعلاج الكيميائي. أظهر تحليل ANOVA أحادي الاتجاه أن تعبير miR-483-3p في الورم انخفض تدريجيا مع زيادة مرحلة TNM (الشكل 1A). تم إجراء تحليل منحنى ROC لتقييم دقة تعبير miR-483-3p في التمييز بين المرضى ذوي المرحلة العالية (III) ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بحثت هذه الدراسة بشكل منهجي في دور miR-483-3p في تثبيط أورام NSCLC وآليتها الأساسية من خلال تحليل العينات السريرية واستكشاف الآليات الجزيئية. كان هدف هذه الدراسة من جانبين: (1) تحديد ما إذا كان miR-483-3p يعمل كمؤشر تنبؤي مستقل في NSCLC، و(2) توضيح الآلية الجزيئية التي قد تثبط من خلالها miR-483-3p الأنماط الخبيثة من خلال استهداف KIF3B. تشير نتائجنا إلى القيمة السريرية ل miR-483-3p كمؤشر تنبؤي مستقل وقد تساعد في توضيح مساره الجزيئي في التأثير على الأنماط الخبيثة للأورام من خلال استهداف KI...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.1٪ بنفسجي كريستاليسولاربيو/الصينG1064
0.25٪ trypsin-EDTAجيبكو/الولايات المتحدة الأمريكية25200056
4٪ بارافورمالديهيدبيوتايم/الصينP0099
نظام 7500 سريع RT-PCRأنظمة حيوية تطبيقية/الولايات المتحدة الأمريكية4351106
A549بروسيل/الصينCL-0016
وسيط خاص ب A549بروسيل/الصينCM-0016
مجموعة التلوين ANNEXIN V-FITC/PIبيوتايم/الصينC1062S
BEAS-2BSTEM RECELL/الصينSTM-CL-5102
مجموعة عد الخلايا-8 (CCK-8)سولاربيو/الصينCA1210
DMEM mediumميلون بيو/الصينPWL003
مصل الأبقار الجنينيجيبكو/الولايات المتحدة الأمريكيةA5256701
برنامج GraphPad Prism جراف بادالإصدار 7.0
H1299بروسيل/الصينCL-0165
وسيط خاص ب H1299بروسيل/الصينCM-0165
H520بروسيل/الصينCL-0402
الوسط الخاص ب H520بروسيل/الصينCM-0402
HCC827بروسيل/الصينCL-0094
وسط خاص ب HCC827بروسيل/الصينCM-0094
mRNA KIF3BGenscript Biotech/الصينمخصص
كاشف Lipo6000بيوتايم/الصينC0526
miR-483-3p منشط/منشط-NCميدكيم إكسبريس/الولايات المتحدة الأمريكيةHY-R01451A 
oe-KIF3B/oe-NCريبو بيو/الصينمخصص
البنسلين/الستربتوميسينسولاربيو/الصينP1400
بيرس RNA 3' مجموعة نهاية إزالة البيوتينيلثيرمو فيشر ساينتفيك/الولايات المتحدة الأمريكية20163
مجموعة كاشف PrimeScript RT (الوقت الحقيقي المثالي)تاكارا/اليابانRR037A
si-KIF3B/si-NCريبو بيو/الصينمخصص
SPSS آي بي إمالإصدار 23.0
خرز سترابتافيدين المغناطيسينيو إنجلاند بايولابز/الولايات المتحدة الأمريكيةS1420S
SYBR Green   برو تاك  HS بريمكسالبيولوجيا الدقيقة/الصينAG11701
غرفة ترانسويلكورنينغ/الولايات المتحدة الأمريكية3428
كاشف ترايزولإنفيتروجين/الولايات المتحدة الأمريكية15596026CN

المراجع

  1. Lee, J. W., et al. Characterization of chemoresistant human non-small cell lung cancer cells by metabolic and lipidomic profiling. Metabolomics. 19 (9), 80(2023).
  2. Ziolkowska-Suchanek, I., Rozwadowska, N. Advancements in gene therapy for non-small cell lung cancer: current approaches and future prospects. Genes Basel. 16 (5), 569(2025).
  3. Zhang, W., et al. Investigating the mechanism of beta-elemene-mediated LINC00511 modulation to suppress cisplatin resistance in lung cancer. J Vis Exp. (222), e68825(2025).
  4. Miller, M., Hanna, N. Advances in systemic therapy for non-small cell lung cancer. BMJ. 375, n2363(2021).
  5. Qian, D., et al. Potentially functional genetic variants in the complement-related immunity gene-set are associated with non-small cell lung cancer survival. Int J Cancer. 144 (8), 1867-1876 (2019).
  6. Liu, Y., Sun, Y., Chen, N. A nursing intervention combining case management and CBT for postoperative NSCLC patients: effects on anxiety, depression, and quality of life. J Vis Exp. (228), e69622(2026).
  7. Mao, X., Peng, S., Lu, Y., Song, L. Regulatory functions of microRNAs in cancer stem cells: mechanism, facts, and perspectives. Cells. 14 (14), 1073(2025).
  8. Hassanein, S. S., Ibrahim, S. A., Abdel-Mawgood, A. L. Cell behavior of non-small cell lung cancer is at EGFR and microRNAs hands. Int J Mol Sci. 22 (22), 12496(2021).
  9. He, B., et al. miRNA-based biomarkers, therapies, and resistance in cancer. Int J Biol Sci. 16 (14), 2628-2647 (2020).
  10. Salunkhe, S. S., Ghatage, T., Prabhakar, B. S. Multi-oncogene targeting in cancer therapy: a miRNA-driven pharmacological approach. Biochem Pharmacol. 242, 117417(2025).
  11. Samson, J. S., Parvathi, V. D. Prospects of microRNAs as therapeutic biomarkers in non-small cell lung cancer. Med Oncol. 40 (12), 345(2023).
  12. Li, W., et al. Curcumin inhibits prostate cancer by upregulating miR-483-3p and inhibiting UBE2C. J Biochem Mol Toxicol. 38 (2), e23645(2024).
  13. Liang, H., et al. MiR-483-3p regulates oxaliplatin resistance by targeting FAM171B in human colorectal cancer cells. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 47 (1), 725-736 (2019).
  14. Menbari, M. N., et al. miR-483-3p suppresses the proliferation and progression of human triple negative breast cancer cells by targeting the HDAC8 oncogene. J Cell Physiol. 235 (3), 2631-2642 (2020).
  15. Wu, W., et al. circZNF609 promotes the proliferation and migration of gastric cancer by sponging miR-483-3p and regulating CDK6. Onco Targets Ther. 12, 8197-8205 (2019).
  16. Yue, J., et al. Epigenetic silencing of miR-483-3p promotes acquired gefitinib resistance and EMT in EGFR-mutant NSCLC by targeting integrin beta3. Oncogene. 37 (31), 4300-4312 (2018).
  17. Gu, R., Li, X., Yan, X., Feng, Z., Hu, A. Circular RNA circ_0032462 enhances osteosarcoma cell progression by promoting KIF3B expression. Technol Cancer Res Treat. 19, 1533033820943217(2020).
  18. He, Z. C., Zhao, J. J., Yan, T. miR-127-3p inhibits cell stemness and docetaxel resistance in triple-negative breast cancer by targeting KIF3B. Kaohsiung J Med Sci. 42 (3), e70113(2025).
  19. Liu, Z. H., Dong, S. X., Jia, J. H., Zhang, Z. L., Zhen, Z. G. KIF3B promotes the proliferation of pancreatic cancer. Cancer Biother Radiopharm. 34 (6), 355-361 (2019).
  20. Wang, C., et al. Silencing of KIF3B suppresses breast cancer progression by regulating EMT and Wnt/beta-catenin signaling. Front Oncol. 10, 597464(2020).
  21. Ji, L., Zhu, Z. N., He, C. J., Shen, X. MiR-127-3p targets KIF3B to inhibit the development of oral squamous cell carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 23 (2), 630-640 (2019).
  22. Yao, F. Z., Kong, D. G. Identification of kinesin family member 3B (KIF3B) as a molecular target for gastric cancer. Kaohsiung J Med Sci. 36 (7), 515-522 (2020).
  23. Chen, Y., Fu, D., Zhao, H., Cheng, W., Xu, F. GSG2 (Haspin) promotes development and progression of bladder cancer through targeting KIF15 (Kinase-12). Aging Albany NY. 12 (10), 8858-8879 (2020).
  24. Lafanechere, L. The microtubule cytoskeleton: an old validated target for novel therapeutic drugs. Front Pharmacol. 13, 969183(2022).
  25. Merino-Casallo, F., Gomez-Benito, M. J., Hervas-Raluy, S., Garcia-Aznar, J. M. Unravelling cell migration: defining movement from the cell surface. Cell Adh Migr. 16 (1), 25-64 (2022).
  26. Simoes-da-Silva, M. M., Barisic, M. How does the tubulin code facilitate directed cell migration? Biochem Soc Trans. 53 (1), BST20240841(2025).
  27. Zheng, C., et al. YY1 modulates the radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma through KIF3B-mediated Hippo signaling pathway. Cell Death Dis. 14 (12), 806(2023).
  28. Zhou, L., Ouyang, L., Chen, K., Wang, X. Research progress on KIF3B and related diseases. Ann Transl Med. 7 (18), 492(2019).
  29. Guan, L. Y., Lv, J. Q., Zhang, D. Q., Li, B. Collective polarization of cancer cells at the monolayer boundary. Micromachines Basel. 12 (2), 112(2021).
  30. Lopez-Charcas, O., et al. Pharmacological and nutritional targeting of voltage-gated sodium channels in the treatment of cancers. iScience. 24 (4), 102270(2021).
  31. Saadh, M. J., et al. The emerging role of kinesin superfamily proteins in Wnt/beta-catenin signaling: implications for cancer. Pathol Res Pract. 269, 155904(2025).
  32. Pupo, E., et al. Kinesin-2 controls the motility of RAB5 endosomes and their association with the spindle in mitosis. Int J Mol Sci. 19 (9), 2575(2018).
  33. Zhou, M., Han, Y., Jiang, J. Ulk4 promotes Shh signaling by regulating Stk36 ciliary localization and Gli2 phosphorylation. Elife. 12, RP88637(2023).
  34. Wang, B., Liang, Z., Liu, P. Functional aspects of primary cilium in signaling, assembly and microenvironment in cancer. J Cell Physiol. 236 (5), 3207-3219 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)وسحب الحمض الريبي النووي (RNA Pull-Down)ومنحنى كابلان-مايروتحليل كوكسوتحفيز الموت الخلوي المبرمج
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.