تأثيرات الدورة الشهرية على عوامل النمو في الفيبرين الغني بالصفائح الدموية: دراسة مقطعية رصدية

ملخص

تقيم هذه الدراسة تأثيرات مراحل الدورة الشهرية على إفراز عوامل النمو من الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF).

الملخص

يستخدم الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF) على نطاق واسع في جراحة الأسنان للإجراءات التجديدية؛ ومع ذلك، لا يزال التفاوت في محتواه البيولوجي قيدا رئيسيا في التوحيد القياسي. هدفت هذه الدراسة إلى تنفيذ سير عمل تجريبي محكم الرقابة لتقييم كيف تؤثر مراحل الدورة الشهرية على إطلاق عوامل النمو من PRF. تم الحصول على عينات دم وريدي من 21 متطوعة سليمة في ثلاث مراحل شهرية محددة مسبقا (الحيض: الأيام 1–5؛ الجريبات: الأيام 6–14؛ الأصفر: الأيام 15–28)، مع إجراء جميع عمليات الجمع ضمن نافذة زمنية محددة (11:00–11:30 صباحا) لتقليل التغيرات اليومية. لكل مرحلة، تم تخصيص أنابيب منفصلة للعد الكامل للدم، وتحليل الهرمونات (الإستروجين، البروجسترون، هرمون محفز الجريبات [FSH]، وهرمون اللوتين [LH])، وتحضير PRF. تم إنتاج PRF عن طريق الطرد المركزي الفوري تحت ظروف موحدة (708 × جرام لمدة 12 دقيقة؛ دوار بزاوية ثابتة، 40 °؛ نصف قطر 88 مم؛ بدون مضاد تخثر). تم التحقق من الجلطات بشكل كبير (بنية متجانسة ومرنة)، وفصلها بعناية عن طبقة خلايا الدم الحمراء، ووزنها بشكل فردي. لتوحيد إطلاق عامل النمو، تم حضن كل جلطة في وسط RPMI-1640 باستخدام نسبة الوزن (1 جرام PRF: 1 مللتر وسط)، تلتها حضانة محكمة عند 37 درجة مئوية مع تحريك مداري (100 دورة في الدقيقة). تم جمع السوبرناتيلات وتخزينها عند -80 درجة مئوية قبل التحليل. تم قياس عوامل النمو (IGF-1، PDGF، FGF-2، VEGF، وTGF-β1) باستخدام اختبار المقاومة المناعية المرتبط بالإنزيم (ELISA) تحت ظروف اختبار موحدة. ضمن هذا البروتوكول الموحد، كانت مستويات FGF-2 أعلى بشكل ملحوظ خلال المرحلة الجريبية مقارنة بالمرحلتين الشهرية والأصفر. لوحظ ارتباط إيجابي متوسط بين مستويات FGF-2 والإستروجين في هذه المرحلة، بينما لم تلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية لعوامل النمو الأخرى. تشير هذه النتائج إلى أن مرحلة الدورة الشهرية قد تساهم في التباين في ملفات عوامل النمو المشتقة من PRF. يوفر البروتوكول الموضح إطارا قابلا للتكرار لتقليل التباين قبل التحليلي والتحليلي في دراسات PRF. تستدعي الآثار السريرية للفروق المرتبطة بالطور مزيدا من البحث في دراسات تتضمن مجموعات أكبر ونتائج علاجية.

المقدمة

تاريخيا، بدأ استخدام مركزات الصفائح الدموية مع تطوير لاصقات الفيبرين وتطور إلى تركيبات وبروتوكولات تحضير متنوعة. الفيبرين الغني بالصفائح الدموية (PRF)، الذي تم تقديمه لأول مرة بواسطة شوكرون وآخرون في عام 2001، هو مركز من الجيل الثاني من الصفائح الدموية يستخدم على نطاق واسع في طب الأسنان¹. يتم الحصول على هذه المادة الحيوية الذاتية من خلال الطرد المركزي بدون مضادات تخثر وتشكل مصفوفة فيبرين غنية بالصفائح الدموية وخلايا الدم والمكونات المناعية المتداولة². تعمل شبكة الفيبرين كهيكل يسمح بإطلاق عوامل النمو تدريجيا الضرورية لإصلاح وتجديد الأنسجة³.

تلعب الصفائح الدموية دورا مركزيا في شفاء الجروح وحدوث النزيف من خلال إطلاق السيتوكينات وعوامل النمو عند التنشيط⁴. في PRF، تؤدي هذه العملية إلى إطلاق مستمر للوسطاء الرئيسيين، بما في ذلك عامل نمو البطانة الوعائية (VEGF)، عامل نمو الأرومات الليفية-2 (FGF-2)، عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية (PDGF)، عامل النمو الشبيه بالأنسولين (IGF)، وعامل النمو المتحول بيتا1 (TGF-β1^). على الرغم من استخدامه السريري الواسع، تظل النتائج المتعلقة بفعالية PRF التجديدية غير متسقة عبر الدراسات ^3,6. أحد المصادر الرئيسية للتنوع هو تباين تحضيرات PRF، والذي يتأثر بالعوامل التقنية والبيولوجية على حد سواء.

من منظور منهجي، يمكن أن تؤثر الاختلافات في بروتوكولات الطرد المركزي (مثل القوة الطردية المركزية النسبية، والمدة، ونوع الدوار)، ومواد الأنابيب، والتعامل بعد الجمع بشكل كبير في بنية PRF وتوزيع الخلايا⁷. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن تؤدي التباينة التحليلية — مثل نقص التوحيد في معالجة الجلطات، واستراتيجيات التطبيع غير المتسقة، والاختلافات في ظروف الحضانة قبل ELISA — إلى فروقات كبيرة في مستويات عامل النمو المبلغ^{عنها 8}. تحد هذه التناقضات من قابلية المقارنة بين الدراسات وتقلل من الموثوقية الترجمية لأبحاث PRF.

التغير البيولوجي يعقد التفسير أكثر. تعرف عدة عوامل مرتبطة بالمرضى، بما في ذلك العمر والجنس وعدد الصفائح الدموية وعرض توزيع الصفائح الدموية (PDW)، ومتوسط حجم الصفائح الدموية (MPV)، بأنها تؤثر على تركيب PRF⁹. علاوة على ذلك، قد تؤثر التأثيرات الهرمونية والوراثية والبيئية على سلوك الصفائح الدموية وإفراز السيتوكينات¹⁰. هناك أدلة مباشرة وغير مباشرة على أن هرمونات الجنس تؤثر على بيولوجيا الصفائح الدموية¹¹. لقد ثبت الإستروجين، على وجه الخصوص، أنه يعزز استجابة الصفائح الدموية للمنشطات الفسيولوجية ويزيد من التجمع الناتج عن الجلثومبين عبر المسارات التي تتوسط المستقبلات¹². مع تقلب مستويات الإستروجين خلال الدورة الشهرية، قد تختلف وظيفة الصفائح الدموية والمخرجات البيولوجية المرتبطة بها أيضا وفقا لذلك¹³. ومع ذلك، لا تزال الأدبيات غير متسقة، حيث أبلغت بعض الدراسات عن زيادة تنشيط الصفائح الدموية وأخرى أظهرت تأثيرات محايدة أو مثبطة¹⁴.

نظرا لهذا التنوع التقني والبيولوجي المجمع، هناك حاجة واضحة لسير عمل منهجية تتحكم فيه تقلل من التحيز التحليلي المسبق عند تقييم عوامل النمو المشتقة من PRF. على عكس العديد من الدراسات السابقة التي تعتمد على أخذ عينات من نقطة زمنية واحدة، أو التعامل غير المعياري مع الجلطات، أو قياس عامل النمو غير الطبيعي، تستخدم الدراسة الحالية بروتوكول جمع دم محدد الطور ومنظم زمنيا، ومعايير طرد مركزي ثابت، وتطبيع جلطات PRF القائمة على الوزن قبل الحضانة وتحليل ELISA⁸. تم تصميم هذا النهج لتحسين قابلية التكرار والسماح بمقارنة أكثر موثوقية لإطلاق عوامل النمو عبر الحالات الفسيولوجية.

تشمل الأساليب البديلة لأبحاث PRF استخدام تركيبات متقدمة مثل PRF⁷ المتقدم وPRF¹⁵ القابل للحقن، أنظمة الطرد المركزي^{الأفقي 7}، أو زرع الغشاء المباشر بدون تحليل خارج الجسم الحي. بينما قد تعزز هذه الطرق إنتاجية الخلايا أو قابليتها للتطبيق السريري، إلا أنها غالبا ما تضيف تباينا إضافيا في قياس عوامل النمو أو تحد من القدرة على عزل التأثيرات البيولوجية المحددة. في المقابل، يركز سير العمل الحالي على التوحيد التحليلي والمقارنة المضبوطة، مما يجعله مناسبا بشكل خاص لدراسة المعدلات الفسيولوجية مثل التقلبات الهرمونية.

البروتوكول المقترح هو الأنسب للدراسات التجريبية أو الترجمية المحكمة التي تهدف إلى قياس إطلاق عامل النمو تحت ظروف موحدة. قد يكون أقل قابلية للتطبيق في البيئات التي تركز فقط على النتائج السريرية، أو التحضير المبسط على الكرسي، أو الدراسات التي تتطلب طلبا فوريا للعلاج التعويضي المتكرر دون معالجة. ينبغي للباحثين التفكير في اعتماد هذا السير عندما يكون الهدف الأساسي هو تقليل التباين وتحسين قابلية تكرار القياسات المتعلقة ب PRF.

لذلك، كان هدف هذه الدراسة هو تقييم العلاقة بين مستويات الهرمونات عبر مراحل الدورة الشهرية المختلفة وإفراز عوامل النمو من PRF باستخدام إطار منهجي موحد وقابل للتكرار.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة في قسم أمراض دواعم السن، كلية طب الأسنان، جامعة تشوكوروفا في أضنة، تركيا، بمشاركة 21 متطوعة. تم إبلاغ جميع المشاركين بالتفصيل عن هدف الدراسة وتصميمها وإجراءاتها، وتم الحصول على موافقة مكتوبة مستنيرة قبل التضمين. تمت مراجعة بروتوكول الدراسة والموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات في كلية الطب بجامعة تشوكوروفا (رقم الموافقة: 125/56، بتاريخ 16.09.2022). تم إجراء جميع الإجراءات وفقا لمبادئ إعلان هلسنكي للأبحاث التي تشمل البشر.

تم تنفيذ جميع الإجراءات المتعلقة بدم الإنسان، بما في ذلك احتياطات السلامة الحيوية والتعامل مع النفايات البيولوجية والكيميائية الخطرة والتخلص منها، وفقا للإرشادات المعتمدة للسلامة الحيوية كما حددتها مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها والمعاهد الوطنية للصحة¹⁶. استخدم الأفراد معدات الحماية الشخصية المناسبة مثل القفازات، ومعطف المختبر، ونظارات واقية. تم إجراء جميع عمليات معالجة العينات في مناطق مختبرية مخصصة لمنع التلوث والتعرض. تم التخلص من النفايات البيولوجية (بقايا الدم، بقايا PRF، المواد الاستهلاكية) وفقا لبروتوكول إدارة النفايات الطبية بجامعة تشوكوروفا واللوائح الوطنية للنفايات الطبية الحيوية. وضعت الأشياء الحادة في حاويات مقاومة للثقب؛ تم تعقيم النفايات السائلة كيميائيا قبل التخلص منها، وتم تعقيم النفايات البيولوجية الصلبة الخطرة قبل التخلص المرخص.

اختيار المشاركين

تم تضمين الأفراد الذين استوفون المعايير التالية في الدراسة: غياب أي مرض جهازي، دورة الحيض المنتظمة من 27 إلى 30 يوما وعمر بين 18 و25 سنة

تم استبعاد الأفراد الذين استوفون المعايير التالية من الدراسة: وجود مرض جهازي، دورة شهرية غير منتظمة، استخدام أي دواء أو تحضير هرموني، وجود اضطرابات غدد صماء أو نزيف، وتاريخ نزيف مفرط أثناء الحيض

جمع الدم وتوزيع المجموعات

تم استخدام الأيام الأولى من الدورة الشهرية لكل مشارك لوضع بروتوكول جدولة. استنادا إلى التصنيفات الفسيولوجية المقبولة على نطاق واسع، تم تقسيم الدورة إلى ثلاث مراحل: الأيام 1–5 كمرحلة الحيض (المرتبطة بتساقط بطانة الرحم)، والأيام 6–14 كمرحلة الجريبات (تتميز بارتفاع مستويات الإستروجين وتطور الجريبات)، والأيام 15–28 كمرحلة الأصفر (مع زيادة إفراز البروجسترون بعد الإباضة)^12,13. تم جمع عينات دم من كل مشارك خلال المراحل المقابلة. خلال دورة واحدة، تم جمع ما مجموعه تسع أنابيب دم لكل شخص: ثلاث لعدد الدم الكامل (واحدة لكل مرحلة)، وثلاث لتحليل هرمونات الجنس (الإستروجين، البروجسترون، هرمون اللوتين (LH)، هرمون محفز الجريبات (FSH)، وثلاثة لتحضير PRF وتحليل عامل النمو القائم على ELISA. تم جمع جميع عينات الدم بين الساعة 11:00 و11:30 صباحا في نفس الوقت يوميا لتقليل التنوع البيولوجي. تم الحصول على عينات دم وريدي من الوريد الأمامي باستخدام نظام جمع دم معقم قائم على الفراغ وإبر فراشة 21 جرام لضمان أخذ عينات غير مسببة للصدمات. تم جمع الدم مباشرة في أنابيب زجاجية معقمة بسعة 10 مل بدون مضادات تخثر (أنابيب PRF)، وفقا لبروتوكولات تحضير PRF القياسية. لتقليل التباين قبل التحليل، تم جمع جميع العينات من قبل نفس الممرضة المدربة وتحت ظروف موحدة.

مباشرة بعد الجمع، تم التعامل مع الأنابيب بلطف دون تحريك ونقلها إلى الطرد المركزي خلال 60–90 ثانية لمنع التخثر المبكر وضمان تطور البلمرة الليفرينية. تم وضع الأنابيب بشكل متماثل داخل الدوار للحفاظ على التوازن وتجنب التغيرات الناتجة عن الاهتزازات أثناء الطرد المركزي. لم تستخدم أي إضافات أو مضادات تخثر في أي مرحلة من مراحل الإجراء.

نتيجة لذلك، تم إنشاء ثلاث مجموعات دراسية: المجموعة 1: عينات من المرحلة الشهرية، المجموعة 2: عينات من المرحلة الجريبية، والمجموعة 3: عينات من المرحلة الأصفرية

خطوات تحضير PRF:

تم طرد عينات الدم فورا بدون مضادات تخثر باستخدام جهاز طرد مركزي مزود بدوار بزاوية ثابتة (40 °؛ نصف القطر: 88 مم). تم إجراء الطرد المركزي تحت ظروف موحدة عند 708 × جرام لمدة 12 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (22°C–24°C). تم حساب قيم القوة الطرد المركزية النسبية (RCF) باستخدام الصيغة القياسية (RCF = 1.118 × 10⁻⁵ × r ×g²)، مع الأخذ في الاعتبار نصف قطر الدوار (88 مم)، وفقا لبروتوكولات PRF المعتمدة التي وصفها شوكرون ^وآخرون ودراسات التوحيد اللاحقة ^1,3,18. بعد الطرد المركزي، تم تحديد الطبقات الثلاث المميزة: طبقة خليا حمراء سفلى، طبقة بلازما علوية فقيرة بالصفائح الدموية، وجلطة PRF وسيطة. تمت إزالة جلطة PRF بلطف باستخدام ملقط معقم، لتجنب تعطيل واجهة كريات الدم الحمراء. تم تقليم مكونات خلايا الدم الحمراء المتبقية بعناية باستخدام مقص معقم.

تم تقييم جلطات PRF بشكل كبير لوجود سطح أملس ومتجانس، وبنية أسطوانية مرنة، وكثافة وصلبة وفقا للمعايير^{المحددة مسبقا 19,20}. تم التخلص من الجلطات التي لم تستوفي هذه المعايير، وتم الحصول على عينات دم جديدة عند الحاجة. تمت معالجة جميع العينات تحت ظروف موحدة وتجميدها عند -80 درجة مئوية خلال 30 دقيقة من الجمع لتقليل التحلل البروتيولي. تم تخزين العينات لمدة موحدة ومضبوطة (حتى 4 أسابيع) قبل تحليل الدفعات لتقليل التباين بين الاختبارات وضمان قابلية المقارنة بين قياسات عامل النمو.

خطوات تحليل عامل النمو ELISA:

تم فصل جلطات PRF بعناية عن جزء خلايا الدم الحمراء في ظروف معقمة باستخدام مقص جراحي معقم وتم وزنها بشكل فردي باستخدام ميزان تحليلي معاير. تمت إضافة وسط الزراعة RPMI-1640 لكل عينة بنسبة ثابتة بناء على وزن الجلطة (1 جرام PRF: 1 ملتر وسط) لتوحيد استخراج عامل النمو وتقليل التباين المرتبط بالاختلافات في كتلة الجلطات. تم حضن العينات عند 37 درجة مئوية على جهاز هزاز مداري عند 100 × جرام لتسهيل الانتشار المتجانس لعوامل النمو القابلة للذوبان من مصفوفة PRF إلى وسط الزراعة. بعد الحضانة، تم جمع السوبرناتسيكس وتخزينها عند -80 درجة مئوية حتى التحليل.

تم قياس تركيزات عوامل النمو، بما في ذلك عامل النمو الشبيه بالإنسولين-1 (IGF-1)، وعامل النمو المشتق من الصفائح الدموية (PDGF)، وعامل نمو الأرومات الليفية-2 (FGF-2)، وعامل النمو البطاني الوعائي (VEGF)، وعامل النمو المحول-β1 (TGF-β1)، باستخدام مجموعات اختبار المقاومة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA) المتوفرة تجاريا وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم استخدام المجموعات التالية: مجموعة ELISA البشرية IGF-1، مجموعة ELISA البشرية PDGF، مجموعة FGF-2 البشرية ELISA، مجموعة ELISA VEGF البشرية، ومجموعة ELISA البشرية TGF-β1. تم تحليل جميع العينات والمعايير بشكل مكرر، وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوبايت. تم توليد منحنيات المعايرة باستخدام الانحدار اللوجستي الأربع معلمات (4-PL) لتحديد تركيزات المحلل⁵.

خطوات إليسا

تم تحديد تخفيف العينة وفقا لنطاق التركيز المتوقع وتعليمات الشركة المصنعة لكل مجموعة ELISA. تم تحليل العينات المتوقعة أن تقع ضمن نطاق المنحنى القياسي دون تخفيف. عندما تجاوزت القراءات الأولية أو تركيزات التحليل المتوقعة الحد الأعلى للمنحنى القياسي، يتم تخفيف العينات باستخدام مخفف العينة المقدم في المجموعة وإعادة تحليلها. تم حساب التراكيز النهائية بضرب القيم المقاسة في عامل التخفيف المقابل.

تمت إضافة معايير (100 ميكرولتر)، المعدة عن طريق التخفيف التسلسلي وفقا لتعليمات مجموعة FineTest، وعينات غير مخففة أو مخففة بشكل مناسب إلى كل بئر من صفيحة ميكرو مطلية مسبقا بسعة 96 بئر. تم حضن الصفيحة عند 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة للسماح بارتباط المستضد. تم تحليل جميع العينات والمعايير بشكل مكرر. بعد الحضانة، تم إزالة السائل دون غسل، وأضيف 100 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة للكشف الموسوم بالبيوتين إلى كل بئر. تم حضن الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. بعد الحضانة، تم سحب الآبار وغسلها ثلاث مرات باستخدام 350 ميكرولتر من محلول الغسيل 1× لكل بئر. تم ترك مخزن الغسيل في الآبار لمدة تقارب دقيقة واحدة خلال كل دورة غسل لضمان إزالة المكونات غير المرتبطة بشكل كاف. بعد ذلك، أضيف 100 ميكرولتر من محلول العمل المشترك بيروكسيداز الفجل الحار (HRP)–ستربتافيدين إلى كل بئر، وتم حضن الصفيحة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. تم غسل الآبار خمس مرات باستخدام 350 ميكرولتر من مخزن الغسيل لكل بئر لتقليل الإشارة الخلفية. ثم أضيف 90 ميكرولتر من محلول الركيزة التتراميثيل بنزيدين (TMB) إلى كل بئر، وتم حضن الصفيحة على درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10–20 دقيقة في الظلام للسماح بتطور اللون، بينما كان التفاعل يراقب بصريا. تم إنهاء التفاعل الإنزيمي بإضافة 50 ميكرولتر من محلول التوقف المرفق مع المجموعة إلى كل بئر، مما أدى إلى تغير اللون من الأزرق إلى الأصفر.

تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوح خلال 5 دقائق من إضافة محلول التوقف. تم توليد منحنى قياسي باستخدام التركيزات المعروفة المقدمة في المجموعة، وتم تركيب المنحنى باستخدام نموذج الانحدار اللوجستي المكون من أربعة معلمات (4-PL). تم حساب تركيزات العينات وفقا لذلك وتصحيحها لأي عوامل تخفيف.

التحليل الإحصائي

تم تلخيص المتغيرات العددية كمتوسط ± انحراف معياري للبيانات الموزعة بشكل طبيعي، وكوسيط ذو قيم دنيا وقصوى عندما لم تتحقق افتراضات الطبيعية. تم التعبير عن المتغيرات التصنيفية كترددات ونسب مئوية. تم تقييم طبيعة البيانات العددية باستخدام اختبار شابيرو-ويلك. للمقارنات بين القياسات العددية المتكررة التي تم الحصول عليها من نفس الأفراد في نقاط زمنية مختلفة، تم تطبيق تحليل التباين بمقاييس متكررة (ANOVA) عند تحقق الافتراضات البرمترية؛ وإلا، كان يستخدم اختبار فريدمان. تم تقييم الارتباطات بين المتغيرات العددية غير الموزعة بشكل طبيعي باستخدام معامل الارتباط الترتيبي لسبيرمان. أجريت تحليلات إحصائية باستخدام برامج إحصائية (IBM SPSS Statistics الإصدار 26.0)، واعتبرت قيمة p ثنائية الجانب < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

لم تلاحظ أي بيانات مفقودة، حيث أكمل جميع المشاركين أخذ عينات في جميع مراحل الحيض الثلاث. كانت معايير عد الدم الكاملة ضمن نطاقات المرجع الفسيولوجي لجميع العينات، مما يدعم اتساق جودة العينة وموثوقية تحضير PRF.

تقييم معايير الدم عبر مراحل الحيض

يتم عرض مقارنة بين المعايير الدموية عبر مراحل الدورة الشهرية في الجدول 1. أظهرت عداد خلايا الدم البيضاء (WBC) تباينا ذا دلالة إحصائية عبر المراحل (p < ...

المناقشة

الدورة الشهرية هي عملية فسيولوجية معقدة تنظمها تقلبات هرمونية تدفع تغييرات في أنظمة مختلفة داخل جسم المرأة. في هذه الدراسة، درسنا محتوى PRF الذي تم الحصول عليه من عينات دم تم جمعها خلال مراحل مختلفة من الدورة الشهرية وحللنا مستويات عوامل النمو داخل هذا الPRF.

تم تقسيم الدورة الشهرية إلى ثلاث مراحل بناء على تصنيفات فسيولوجية مقبولة على نطاق واسع: المرحلة الشهرية (المرتبطة بتساقط بطانة الرحم)، والمرحلة الجريبية (التي تتميز بارتفاع مستويات الإستروجين وتطور الجريب...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
التوازن التحليلي	توازن دقيق (سهولة قراءة 0.001 جم)	سارتوريوس	إنتريس
أنابيب جمع الدم	أنابيب زجاجية، بدون مضاد تخثر (10 مل)	BD	نظام فاكوتينر
الطرد المركزي	الطرد المركزي ذو السطح الطاولة	هيتيتش	يونيفرسال 320R
مجموعة ELISA – FGF	مجموعة ELISA لقناة FGF البشرية	اختبار دقيق	EH0541
مجموعة ELISA – IGF-1	مجموعة IGF-1 ELISA البشرية	اختبار دقيق	ER0030
مجموعة ELISA – PDGF	مجموعة ELISA بشرية PDGF	اختبار دقيق	ER1240
مجموعة ELISA – TGF-β 1	هيومن TGF-β 1 مجموعة ELISA	اختبار دقيق	EH0287
مجموعة ELISA – VEGF	مجموعة ELISA البشرية VEGF	اختبار دقيق	EH0327
HRP– الستريبتافيدين المزدوج	كاشف ELISA (مشمول في المجموعة)	اختبار دقيق	مشمولة في المجموعة
الحاضنة	الحاضنة المتحكم بها بدرجة الحرارة (37 & درجة؛ C)	ميمرت	—
أنابيب الطرد المركزي الدقيق	أنابيب معقمة (1.5&ndash؛ 2 مل)	إبندورف	—
قارئ الميكروبليت	قارئ امتصاص 450 نانومتر	BioTek	ELx800
إبرة	إبرة 21G معقمة للاستخدام مرة واحدة	BD	—
هزاز المدار	هزاز قابل للتعديل (100 دورة في الدقيقة)	إيكا	تحكم KS 3000i i
معدات الحماية الشخصية	قفازات، معطف مختبر، نظارات واقية	مختلف	—
RPMI-1640 متوسط	وسط زراعة الخلايا	جيبكو (ثيرمو فيشر ساينتيفيك)	11875-093
برنامج التحليل الإحصائي	برنامج تحليل البيانات (الإصدار 26.0)	آي بي إم	إحصائيات SPSS
حل الإيقاف	كاشف إيقاف ELISA	اختبار دقيق	مشمولة في المجموعة
ركيزة TMB	الركيزة الكروموجينية ل ELISA	اختبار دقيق	مشمولة في المجموعة
مخزن الغسيل	مخزن الغسيل ELISA (1×)	اختبار دقيق	مشمولة في المجموعة