مقالة بحثية

مستخلص Lycopus lucidus يحسن متلازمة تكيس المبايض التجريبية من خلال إعادة تشكيل الميكروبيوم المعوي والميتابولوم

15 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/71084

⸱

أغسطس 28, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Gynecology, Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Hebei Province, 2Department of Gynecology, Heilongjiang Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine Science

في هذه المقالة

ملخص

أدى مستخلص ZeLan إلى تحسين الأنماط الظاهرية الغدية والتمثيل الغذائي في جرذان مصابة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) المستحثة بواسطة DHEA. وأظهر تكامل تسلسل 16S rRNA وميتابولوميات المصل استعادة جزئية للتنوع الألفي للميكروبات المعوية، وتغيراً في التركيبة الميكروبية، وتغيرات في المستقلبات تشمل الهرمونات الستيرويدية، والأحماض الصفراوية، والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة.

الملخص

بحثت هذه الدراسة في التأثيرات العلاجية لمستخلص ZeLan على متلازمة تكيس المبايض (PCOS) وقيمت ارتباط ذلك بإعادة تشكيل الميكروبيوم المعوي والميتابولوم. تم تقسيم أربع وعشرين جرذاً من إناث Sprague-Dawley عشوائياً إلى مجموعة ضابطة، ومجموعة نموذج PCOS المستحث بواسطة dehydroepiandrosterone (DHEA)، ومجموعات علاج بـ ZeLan (العدد = 8 لكل مجموعة). وبعد 28 يوماً من التدخل، تم قياس مستويات الهرمونات في المصل بواسطة تقنية ELISA؛ وحُلل تركيب الميكروبيوم المعوي باستخدام تسلسل جين 16S rRNA، كما تم توصيف الملامح الأيضية للمصل بواسطة UHPLC-Q-TOF-MS. وأُجري تحليل ارتباط Spearman مع التحكم في الاختبارات المتعددة لاستكشاف الارتباطات بين الميكروبيوم والميتابولوم. أدى ZeLan إلى تحسين الظواهر المظهرية المرتبطة بـ PCOS بشكل ملحوظ، حيث خفض وزن الجسم، والتستوستيرون (0.92 مقابل 1.85 ng/mL، P < 0.05)، ونسبة LH/FSH، ومستويات الإنسولين مقارنة بمجموعة النموذج. وأظهر التسلسل أن ZeLan استعاد جزئياً التنوع الميكروبي من نوع alpha (مؤشر Shannon: 5.79 مقابل 4.19) وخفض نسبة Firmicutes إلى Bacteroidetes. وارتبط ZeLan بإثراء Lactobacillus وRuminococcus وانخفاض وفرة Bacteroides وPrevotella وEscherichia. وحدد تحليل الميتابولوم 52 سمة أيضية متغيرة، شملت التغيرات الرئيسية الهرمونات الستيرويدية، والأحماض الصفراوية مثل lithocholic acid، والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة مثل butyric acid. وتشير هذه النتائج إلى أن ZeLan يحسن الاضطرابات الغدية والأيضية المرتبطة بـ PCOS ويرتبط بإعادة تشكيل الملامح الميكروبية المعوية والأيضية المصلية.

المقدمة

تمثل متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) أحد أكثر اضطرابات الغدد الصماء شيوعاً والتي تصيب النساء في سن الإنجاب، حيث تُقدر نسبة انتشارها عالمياً ما بين 6% و20% اعتماداً على المعايير التشخيصية المستخدمة1. يتسم هذا الاضطراب الأيضي والتناسلي المعقد بمجموعة من المظاهر السريرية، بما في ذلك فرط أندروجين الدم، واختلال الإباضة، والمورفولوجيا المبيضية متعددة الكيسات، والتي تساهم مجتمعة في حدوث عواقب تناسلية وأيضية ونفسية جسيمة2. وإلى جانب تأثيرها المباشر على الخصوبة، يتم الاعتراف بمتلازمة المبيض المتعدد الكيسات بشكل متزايد كحالة جهازية مرتبطة بمضاعفات صحية طويلة الأمد، بما في ذلك داء السكري من النوع 2، وأمراض القلب والأوعية الدموية، وسرطان بطانة الرحم، مما يفرض أعباءً كبيرة على كل من المرضى وأنظمة الرعاية الصحية في جميع أنحاء العالم3. ولا تزال الفيزيولوجيا المرضية لمتلازمة المبيض المتعدد الكيسات غير مفهومة بشكل كامل، وإن كان من المسلم به عموماً أنها تنطوي على تفاعلات معقدة بين الاستعداد الوراثي، والعوامل البيئية، ومحددات نمط الحياة التي تؤدي في النهاية إلى الاضطرابات الهرمونية والأيضية المميزة الملحوظة لدى الأشخاص المصابين4.

تركز النهج العلاجية المعاصرة لمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) بشكل أساسي على الإدارة العرضية من خلال التدخلات الدوائية، بما في ذلك موانع الحمل الفموية لتنظيم الدورة الشهرية، والميتفورمين لتحسين حساسية الأنسولين، ومضادات الأندروجين للسيطرة على الشعرانية5. ومع ذلك، غالبًا ما توفر هذه العلاجات التقليدية راحة غير كاملة من الأعراض، وترتبط تكرارًا بآثار جانبية تحد من إمكانية تطبيقها على المدى الطويل، لا سيما لدى النساء اللاتي يرغبن في الإنجاب6. وبناءً على ذلك، تزايد الاهتمام باستكشاف نهج الطب التكميلي والبديل، وخاصة الطب الصيني التقليدي (TCM)، الذي تراكمت لديه خبرات تجريبية لقرون في علاج الاضطرابات النسائية من خلال آليات تنظيمية شاملة7. ومن بين العديد من الأدوية النباتية التي تم بحثها لإدارة متلازمة تكيس المبايض، جذب نبات Lycopus lucidus Turcz. (المعروف باسم ZeLan في الطب الصيني) اهتمامًا كبيرًا نظرًا لتطبيقاته التقليدية في تعزيز الدورة الدموية، وإزالة الركود، وتنظيم الدورة الشهرية8. وتشير الدراسات الكيميائية النباتية المنشورة إلى أن L. lucidus يحتوي على بوليفينولات وكسور غنية بالفلافونويد ذات نشاط مضاد للأكسدة ومضاد للالتهابات8,9. لذلك، تم استخدام محتوى الفلافونويد الكلي المعياري كمؤشر للرقابة على الجودة الكيميائية للمستخلص في الدراسة الحالية، رغم أن تحديد المونومرات النشطة المحددة المسؤولة عن تنظيم الميكروبيوتا والتمثيل الغذائي يتطلب تحليلاً كيميائياً نباتياً مستهدفاً في المستقبل.

لقد برزت ميكروبيوم الأمعاء كمنظم حيوي لعمليات التمثيل الغذائي والوظائف الغدية الصماء لدى المضيف، مع تزايد الأدلة التي تدعم مشاركتها في إمراضية العديد من الاضطرابات الأيضية، بما في ذلك متلازمة تكيس المبايض (PCOS)10. وقد تم اقتراح مفهوم محور "الأمعاء-المبيض" لوصف التواصل ثنائي الاتجاه بين الكائنات الحية الدقيقة المعوية ووظيفة المبيض، والذي يتم بوساطة المستقلبات الميكروبية، والإشارات المناعية، والمسارات العصبية الصماء11. وقد أظهرت الدراسات باستمرار أن النساء المصابات بمتلازمة تكيس المبايض يعانين من خلل في التوازن الميكروبي المعوي (dysbiosis)، يتميز بانخفاض التنوع الميكروبي، وتغير في نسب Firmicutes إلى Bacteroidetes، وتراجع في وفرة البكتيريا النافعة مثل أنواع Lactobacillus وBifidobacterium12. ويُعتقد أن هذه الاضطرابات الميكروبية تساهم في الفزيولوجيا المرضية لمتلازمة تكيس المبايض من خلال آليات متعددة، تشمل زيادة نفاذية الأمعاء، والالتهاب الجهازي منخفض الدرجة، واختلال استقلاب الأحماض الصفراوية والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFA)، مما يؤثر لاحقاً على حساسية الإنسولين والتخليق الحيوي للأندروجن13. ومن المهم الإشارة إلى أن التدخلات التي تستهدف ميكروبيوم الأمعاء، بما في ذلك المعززات الحيوية (probiotics)، والمغذيات الحيوية (prebiotics)، والتعديلات الغذائية، قد أظهرت نتائج واعدة في تحسين أعراض متلازمة تكيس المبايض، مما يدعم اعتبار محور "الأمعاء-المبيض" هدفاً علاجياً14.

توفر الميتابولوميات، وهي التحليل الشامل للمستقلبات ذات الجزيئات الصغيرة في الأنظمة البيولوجية، نهجاً قوياً لتوصيف الاضطرابات الأيضية المرتبطة بالحالات المرضية ولتقييم التأثيرات الكيميائية الحيوية للتدخلات العلاجية15. ويتيح دمج تسلسل جين 16S rRNA لتحديد ملامح الميكروبيوم مع الميتابولوميات غير المستهدفة إجراء استقصاء منهجي للعلاقات بين المجتمعات الميكروبية المعوية وأيض المضيف، مما يوفر رؤى حول التفاعلات بين الميكروبيوتا والميتابولوم التي قد تصاحب كل من إمراض المرض والاستجابات العلاجية. وعلى الرغم من المبرر النظري لاستهداف محور الأمعاء-المبيض في إدارة متلازمة تكيس المبايض (PCOS) ودواعي استخدام ZeLan التقليدية للاضطرابات النسائية، إلا أنه لا توجد دراسات حتى الآن استقصت بشكل منهجي ما إذا كان مستخلص ZeLan يعدل الواجهة بين الميكروبيوتا المعوية والميتابولوم في حالات متلازمة تكيس المبايض. وتحد هذه الفجوة المعرفية من فهمنا للاستجابات البيولوجية المرتبطة بـ ZeLan وتعوق التحسين العقلاني لهذا التدخل النباتي لعلاج متلازمة تكيس المبايض.

صُممت الدراسة الحالية لاستقصاء الفعالية العلاجية لمستخلص ZeLan في نموذج جرذان مصابة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) المستحثة بواسطة DHEA، ولتقييم التغيرات المصاحبة في ميكروبيوم الأمعاء والمستقلبات من خلال تحليل متكامل لتسلسل 16S rRNA والأيضات غير المستهدفة. وعلى وجه التحديد، قمنا بتقييم تأثيرات مستخلص ZeLan على المظاهر المظهرية المرتبطة بمتلازمة تكيس المبايض، بما في ذلك وزن الجسم، ومستوى التستوستيرون في المصل، ونسبة الهرمون اللوتيني إلى الهرمون المنبه للجريب (LH/FSH)، ومستويات الإنسولين؛ وتوصيف التغيرات في تركيب ميكروبيوم الأمعاء والتنوع من نوع alpha بعد العلاج بـ ZeLan؛ وتحديد سمات المستقلبات التفاضلية في المصل والمسارات الأيضية المثرية المرتبطة بتدخل ZeLan؛ واستكشاف الارتباطات بين مجموعات ميكروبية معينة في الأمعاء والمستقلبات الرئيسية. ومن خلال معالجة هذه الأهداف، سعينا إلى تقديم أدلة "أوميكس" متعددة ترابطية للتعديل المرتبط بـ ZeLan لمحور الأمعاء والمبيض في متلازمة تكيس المبايض.

البروتوكول

أُجريت جميع الإجراءات التجريبية في هذه الدراسة وفقاً لدليل المعاهد الوطنية للصحة للعناية بالحيوانات المختبرية واستخدامها، وقد تمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (رقم الموافقة IACUC-2023-0156).

الحيوانات

تم الحصول على إناث جرذان من سلالة Sprague-Dawley (العدد = 24، بعمر 6 أسابيع، ووزن جسم يتراوح بين 180–200 g) من مركز حيوانات التجارب في المؤسسة التابعة، وتم إيواؤها في ظروف بيئية محكومة (درجة حرارة 22 ± 2°C، ورطوبة 50 ± 10%، ودورة ضوء/ظلام مدتها 12 ساعة) مع إتاحة الوصول المطلق إلى علف القوارض القياسي والمياه المنقاة. وبعد فترة تأقلم استمرت لمدة أسبوع واحد، وُزعت الحيوانات عشوائياً على ثلاث مجموعات تجريبية (العدد = 8 لكل مجموعة): مجموعة ضابطة (Control)، ومجموعة نموذج متلازمة تكيس المبايض (PCOS Model)، ومجموعة العلاج بـ ZeLan. وقد تم تحديد حجم العينة بناءً على دراسات سابقة بحثت في تغيرات ميكروبيوم الأمعاء في نماذج PCOS، حيث أشار تحليل القوة الإحصائية إلى أن وجود 8 حيوانات في كل مجموعة سيوفر قوة بنسبة 80% للكشف عن فرق بمقدار 1.5 ضعف في مؤشرات التنوع ألفا (alpha diversity indices) عند قيمة α = 0.05.

تأسيس نموذج لمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) وبروتوكول العلاج

تم إنشاء نموذج متلازمة المبيض متعدد الكيسات (PCOS) باستخدام بروتوكول تم التحقق من صحته جيداً، يتضمن الحقن تحت الجلد لـ dehydroepiandrosterone (DHEA; Sigma-Aldrich, USA) المذاب في زيت السمسم في منطقة الرقبة الظهرية بجرعة 6 mg/100 g من وزن الجسم يومياً لمدة 21 يوماً متتالية. وتلقت حيوانات المجموعة الضابطة أحجاماً مكافئة من زيت السمسم كوسط ناقل. تضمن الجدول الزمني التجريبي الكامل 7 أيام من التأقلم، و21 يوماً من تحفيز النموذج، و28 يوماً من التدخل، مع أخذ العينات النهائية في اليوم 56 من البروتوكول، بما في ذلك فترة التأقلم (الشكل 1). تم تحضير مستخلص ZeLan من عشب Lycopus lucidus Turcz. الموثق عبر الاستخلاص المائي، وتم توحيد معياره ليحتوي على إجمالي الفلافونويدات بنسبة لا تقل عن 2.5% باستخدام تقنية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، والتي كانت بمثابة معيار مراقبة الجودة الكيميائية للمستخلص النباتي. وبدايةً بعد الانتهاء من إنشاء النموذج المحفز بواسطة DHEA، تلقت الجرذان في مجموعة ZeLan مستخلص ZeLan عن طريق التغذية القسرية الفموية بجرعة 200 mg/kg من وزن الجسم يومياً لمدة 28 يوماً متتالية، بينما تلقت مجموعتا الضابطة والنموذج أحجاماً مكافئة من الماء المقطر. تم اختيار جرعة 200 mg/kg كجرعة فارماكولوجية استكشافية بناءً على الخبرة السابقة في استخدام المستخلصات النباتية في الحيوانات واعتبارات التحمل الأولية؛ ولم يكن التقييم الرسمي للاستجابة للجرعة جزءاً من التصميم الحالي. تم تسجيل وزن الجسم أسبوعياً طوال الفترة التجريبية. في هذا التصميم التجريبي، تم تقييم النجاح في إنشاء نموذج PCOS باستخدام بروتوكول تحفيز DHEA جنباً إلى جنب مع الأنماط الظاهرية الغدية والأيضية النهائية، بما في ذلك وزن الجسم، والتستوستيرون في المصل، ونسبة LH/FSH، والأنسولين في حالة الصيام. لم يتم إدراج الفحص الهيستوباثولوجي للمبايض، وعد الجريبات، وتقدير الجسم الأصفر، والمراقبة المتسلسلة لدورة الشبق كنقاط نهاية لتأكيد النموذج، وبناءً على ذلك، استند تفسير خلل وظائف المبيض إلى القراءات الغدية والأيضية بدلاً من التقييم المباشر على مستوى الأنسجة.

جمع العينات ومعالجتها

تم جمع عينات (المصل والبراز) من المجموعات الثلاث جميعها (العدد = 8 لكل مجموعة) لإجراء تحليلات كيميائية حيوية، وتحليلات الميكروبيوتا، والميتابولوميات لاحقاً. أُجريت عمليات الجمع النهائية في الصباح بعد صيام ليلة كاملة لتقليل التباين المرتبط بالتغذية والإيقاع اليوماوي. جُمعت عينات الدم من الأبهر البطني تحت التخدير، ثم جرى طردها مركزياً عند 3,000 × g لمدة 15 دقيقة عند 4°C للحصول على المصل، الذي قُسِّم إلى حصص وخُزِّن عند -80°C حتى إجراء تحليلات الهرمونات والميتابولوميات. جُمعت عينات البراز الطازجة مباشرة من الأعور تحت ظروف تعقيم في أنابيب تجميد معقمة، وحُفظت على الثلج الجاف أثناء النقل، ثم جُمِّدت سريعاً في النيتروجين السائل خلال 10 دقائق من الجمع، وخُزِّنت عند -80°C حتى إجراء تسلسل جين 16S rRNA.

قياسات هرمونات المصل

تم تقدير تركيزات مصل التستوستيرون، والهرمون اللوتيني (LH)، والهرمون المنبه للجريب (FSH)، والأنسولين باستخدام أطقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) المتاحة تجارياً (Cusabio Biotech, Wuhan, China) وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. وحُسبت نسبة LH/FSH كمؤشر مركب لاختلال توازن الهرمونات الموجهة للغدد التناسلية المميز لمتلازمة تكيس المبايض (PCOS). جرى تحليل جميع العينات في مكررات، وأُعيدت القياسات التي تجاوز معامل التباين في المكررات فيها 15%. كما اشترط أن تظل معاملات التباين داخل المقايسة الواحدة وبين المقايسات المختلفة أقل من 10% و 15% على التوالي. وفُحصت القيم المتطرفة المحتملة بمقارنتها بالسجلات المصدرية ومعلومات أداء المقايسة، ولم تُستبعد أي قيمة بناءً على أسس إحصائية فقط دون وجود سبب تقني موثق.

تسلسل جين 16S rRNA والتحليل المعلوماتي الحيوي

تم استخلاص الحمض النووي الجينومي البكتيري الكلي من محتويات الأعور باستخدام مجموعة QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Germany) وفقاً لبروتوكول الشركة المصنعة. وتم تقييم جودة وكمية الـ DNA باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop والترحيل الكهربائي لهلام الأجاروز، وحُفظت مستخلصات الـ DNA عند -80°C قبل بناء المكتبة. كما تم تضخيم المناطق شديدة التباين V3-V4 من جين 16S rRNA باستخدام البادئات العامة 338F (5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3') و 806R (5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') مع تسلسلات مهايئ Illumina. ثم بُنيت مكتبات الأمبليكون ونُقيت وقُدرت كميتها، وجُمّعت بتركيزات متساوية المولات، وأُجري لها التسلسل على منصة Illumina NovaSeq 6000 (Novogene, Beijing, China) باستخدام قراءات مزدوجة الطرف بطول 250 bp.

تمت معالجة قراءات التسلسل الخام باستخدام خط تحليل QIIME2 (الإصدار 2022.2). تم فك تعدد الإرسال للقراءات مزدوجة النهايات، ودمجها، وتصفيتها نوعياً باستخدام حد أدنى لدرجة Phred يبلغ 20، ومعالجتها بواسطة DADA2 لإزالة التسلسلات الخيمرية وتوليد متغيرات تسلسل الأمبليكون (ASVs). تم إجراء التصنيف التصنيفي مقابل قاعدة بيانات SILVA 138 المرجعية باستخدام مصنف naive Bayes. تم حساب مقاييس التنوع ألفا، بما في ذلك مؤشر Shannon، ومؤشر Simpson، ومقدر Chao1، لتقييم التنوع والثراء داخل العينة. تم التعامل مع مخرجات عمق التسلسل، بما في ذلك ملخصات القراءات، وجداول وفرة ASV، وتغطية Good، وملفات منحنى التخفيف، كجزء من مجموعة بيانات الميكروبيوم الموضحة في قسم توفر البيانات. تم استخدام تحليل التمييز الخطي لحجم التأثير (LEfSe) لتحديد الأصناف المرتبطة بالمرض في المقارنة بين مجموعة Control ومجموعة Model باستخدام حد لدرجة LDA أكبر من 2.0 و P < 0.05؛ كما تم تقييم عكس التأثير المرتبط بـ ZeLan من خلال مقارنة اتجاه تحولات الوفرة التصنيفية في مجموعة ZeLan بالنسبة لمجموعة Model.

تحليل الميتابولوميات غير المستهدفة

أُجري تحليل التوصيف الميتابولومي للمصل باستخدام تقنية الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء المقترنة بمطياف الكتلة بزمن الطيران رباعي القطب (UHPLC-Q-TOF-MS; Agilent 1290 Infinity II/6550, USA). خُلطت عينات المصل (100 μL) مع 400 μL من الميثانول البارد: الأسيتونتريل (1:1, v/v) الذي يحتوي على معايير داخلية، ثم رُجّت بجهاز الفورتكس وحُضنت عند -20°C لمدة ساعة واحدة لترسيب البروتينات. وبعد الطرد المركزي عند 14,000 × g لمدة 15 دقيقة، جُففت السوائل الطافية تحت تيار من النيتروجين وأُعيد تكوينها في 100 μL من الأسيتونتريل: الماء (1:1, v/v) من أجل التحليل. تم تحقيق الفصل الكروماتوغرافي باستخدام عمود ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm) حُوفظ عليه عند 40°C، مع استخدام الماء المحتوي على 0.1% حمض الفورميك كطور متحرك A والأسيتونتريل المحتوي على 0.1% حمض الفورميك كطور متحرك B بمعدل تدفق 0.30 mL/min. واستُخدم برنامج تدرج لزيادة الطور العضوي من 5% إلى 95%، يليه غسل العمود وإعادة التوازن لفصل الميتابوليتات. تم الحصول على بيانات مطياف الكتلة في وضعي التأين بالرش الإلكتروني الموجب والسالب بنطاق مسح m/z 50–1200؛ وشملت معلمات المصدر جهد الشعيرة 3.5 kV، وتدفق غاز التجفيف 10 L/min، ودرجة حرارة غاز التجفيف 325°C، وضغط المرذاذ 35 psi، وجهد المجزئ 120 V.

حُوّلت ملفات البيانات الخام إلى صيغة mzXML، وعولجت باستخدام حزمة XCMS في برنامج R للكشف عن القمم، ومحاذاة زمن الاستبقاء، وتكامل مساحة القمة. أُدرجت عينات ضبط الجودة، التي جُهزت عن طريق تجميع حصص متساوية من جميع مستخلصات المصل، على طول التسلسل التحليلي لمراقبة استقرار الجهاز. استُبعدت الميزات التي تعاني من فقدان مفرط في البيانات أو عدم استقرار في تكرارية ضبط الجودة قبل إجراء النمذجة الإحصائية. نُفذ تحديد المستقلبات عن طريق مطابقة الكتلة الدقيقة، وزمن الاستبقاء، وأنماط تفتت MS/MS مع قاعدة بيانات الميتابولوم البشرية (HMDB)، وMETLIN، والمكتبات الطيفية الداخلية. أُجريت التحليلات الإحصائية متعددة المتغيرات باستخدام MetaboAnalyst 5.0. ومُنحت الأولوية لميزات المستقلبات التي تم الاحتفاظ بها للتقارير اللاحقة باستخدام معيار مشترك يتضمن المساهمة التمييزية متعددة المتغيرات، واتجاه التغير في الطي (fold-change)، والأدلة الإحصائية؛ كما عُدلت قيم P باستخدام طريقة Benjamini-Hochberg لمراعاة الاختبارات المتعددة. يوفّر جدول التقارير المشروح الكامل، الذي يحتوي على 52 ميزة من المستقلبات، كـ الجدول التكميلي 1أُجري تحليل إثراء المسارات باستخدام قاعدة بيانات موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG).

التحليل الإحصائي

أُجريت جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج SPSS الإصدار 26.0 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) وبرمجية R (الإصدار 4.2.1). عُبّر عن البيانات المستمرة في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (SD)، وتم تقييم طبيعتها التوزيعية باستخدام اختبار Shapiro-Wilk قبل إجراء الاختبارات الاستدلالية. وبالنسبة للبيانات ذات التوزيع الطبيعي، استُخدم تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعاً باختبار Tukey للمقارنات البعدية لإجراء مقارنات بين المجموعات المتعددة؛ أما بالنسبة للبيانات غير ذات التوزيع الطبيعي، فقد استُخدم اختبار Kruskal-Wallis مع اختبار Dunn للمقارنات البعدية. كما قُيمت الارتباطات بين الأصناف الميكروبية المعوية ومستقلبات المصل باستخدام معامل ارتباط رتب سبيرمان (Spearman's rank correlation coefficient) وتم تمثيلها بصرياً في شكل خرائط حرارية مجمعة هرمياً. وعُدلت قيم P الخاصة بالارتباطات لتناسب الاختبارات المتعددة باستخدام طريقة Benjamini-Hochberg لمعدل الاكتشاف الخاطئ، ولم يتم تفسير سوى الارتباطات التي كانت متسقة في الاتجاه وذات دلالة إحصائية. واعتُبرت قيمة P ثنائية الذيل ‪< 0.05‬ دالة إحصائياً ما لم يتم تحديد عتبة معدلة لقيمة P.

النتائج

تأثيرات مستخلص ZeLan على الأنماط الظاهرية السريرية لمتلازمة تكيس المبايض (PCOS)

أدى إعطاء DHEA إلى تحفيز أنماط ظاهرية صماوية وأيضية شبيهة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) في الجرذان، وهو ما ظهر جلياً من خلال الارتفاعات الملحوظة في وزن الجسم، وتركيز التستوستيرون في المصل، ونسبة LH/FSH، ومستويات الأنسولين في حالة الصيام مقارنة بمجموعة الضبط (جميع القيم P < 0.05). وقد دعم تقييم التوزيع باستخدام اختبار Shapiro-Wilk إجراء التحليل البارامتري لنقاط النهاية الرئيسية الخاصة بوزن الجسم والهرمونات الموضحة في الجدول 1. أدى العلاج بمستخلص ZeLan لمدة 28 يوماً إلى تحسين هذه الاضطرابات الأيضية والهرمونية بشكل ملحوظ. تم تسجيل وزن الجسم في نهاية فترة العلاج في اليوم 56 من البروتوكول، بما في ذلك فترة التأقلم التي استمرت 7 أيام. وكما هو موضح في الجدول 1، كان وزن الجسم في مجموعة النموذج (291.12 ± 15.35 g) أعلى بكثير منه في مجموعة الضبط (227.45 ± 10.12 g, P < 0.05)، بينما أدى العلاج بـ ZeLan إلى خفض وزن الجسم بشكل ملحوظ ليصل إلى 245.25 ± 10.21 g (P < 0.05 مقارنة بمجموعة النموذج). كما كانت مستويات التستوستيرون في المصل مرتفعة بشكل ملحوظ في جرذان نموذج PCOS (1.85 ± 0.21 ng/mL) مقارنة بمجموعة الضبط (0.51 ± 0.05 ng/mL)، وقد خفض التدخل بـ ZeLan مستوى التستوستيرون إلى 0.92 ± 0.12 ng/mL. وزادت نسبة LH/FSH بشكل ملحوظ في مجموعة النموذج (3.28 ± 0.25) مقارنة بمجموعة الضبط (1.25 ± 0.11)، وتم استعادة توازنها جزئياً بواسطة العلاج بـ ZeLan (1.85 ± 0.15). وكانت مستويات الأنسولين في حالة الصيام مرتفعة في حيوانات النموذج (28.95 ± 2.35 mIU/L مقابل 12.55 ± 1.12 mIU/L في مجموعة الضبط) وانخفضت بشكل ملحوظ بعد إعطاء ZeLan (18.82 ± 1.55 mIU/L) (الشكل 2). أكدت هذه النتائج النجاح في إيجاد نمط ظاهري صماوي-أيضي شبيه بمتلازمة تكيس المبايض؛ ومع ذلك، لم يتم إجراء فحص نسيجي للمبايض، أو عد الجريبات، أو تحليل الجسم الأصفر، أو مراقبة دورة الشبق في هذه الدراسة.

استعاد مستخلص ZeLan التنوع ألفا للميكروبيوتا المعوية

كشف تحليل مؤشرات التنوع ألفا (alpha diversity) عن تغيرات جوهرية في بنية المجتمع الميكروبي المعوي المرتبطة بمتلازمة تكيس المبيضين (PCOS) وعلاجها. وكما هو موضح في الجدول 2 والشكل 3، كان مؤشر شانون للتنوع (Shannon diversity index) أقل بكثير في جرذان نموذج PCOS ‏(4.19 ± 0.35) مقارنة بالمجموعات الضابطة السليمة (6.51 ± 0.28؛ P < 0.05)، مما يشير إلى انخفاض التنوع الميكروبي ألفا في حالة المرض. وقد أدى العلاج بـ ZeLan إلى استعادة التنوع الميكروبي جزئيًا، حيث ارتفع مؤشر شانون إلى 5.79 ± 0.26 (P < 0.05 مقارنة بالنموذج). ولوحظت نتائج متوافقة بالنسبة لمؤشر سيمبسون (Simpson index)، الذي انخفض من 0.98 ± 0.01 في المجموعات الضابطة إلى 0.82 ± 0.03 في حيوانات النموذج، ثم تعافى ليصل إلى 0.93 ± 0.02 بعد التدخل بـ ZeLan. وأظهر مقدر Chao1، الذي يعكس ثراء الأنواع، نمطًا مشابهًا: حيث أدى تحفيز PCOS إلى خفض Chao1 بشكل كبير من 1215.3 ± 45.4 إلى 665.8 ± 52.1، بينما أدى العلاج بـ ZeLan إلى زيادة الثراء ليصل إلى 963.5 ± 38.6. تشير هذه النتائج مجتمعة إلى أن متلازمة تكيس المبيضين مرتبطة باختلال التوازن الميكروبي المعوي (dysbiosis) الذي يتميز بانخفاض تنوع وثراء ألفا، وأن مستخلص ZeLan يمكن أن يستعيد بنية المجتمع الميكروبي جزئيًا نحو نمط المجموعة الضابطة.

تغيرات في تكوين ميكروبيوم الأمعاء

كشف التوصيف التصنيفي على مستوى الشعبة عن اختلافات تركيبية واضحة بين المجموعات التجريبية. وكما هو موضح في الشكل 4، كانت Firmicutes وBacteroidetes هما الشعبتان السائدتان في جميع المجموعات، حيث شكلتا معاً أكثر من 85% من إجمالي المجتمع البكتيري. وأظهرت مجموعة النموذج ارتفاعاً ملحوظاً في وفرة Firmicutes (حوالي 75%) مقترناً بانخفاض في نسبة Bacteroidetes (حوالي 15%) مقارنة بمجموعة الضبط (Firmicutes حوالي 40%، وBacteroidetes حوالي 45%)، مما أدى إلى زيادة ملحوظة في نسبة Firmicutes-to-Bacteroidetes (F/B) المميزة للاختلال الأيضي. وقد عمل علاج ZeLan على تعديل هذا الخلل، حيث خفض وفرة Firmicutes إلى حوالي 52% بينما رفع Bacteroidetes إلى حوالي 35%، مما أدى إلى إعادة نسبة F/B جزئياً إلى المستويات الطبيعية المماثلة لمجموعة الضبط.

استُخدم تحليل LEfSe لتحديد التصنيفات البكتيرية التي ميزت بين مجموعتي الضابطة والنموذج، وبذلك تم تحديد البصمة الميكروبية المرتبطة بالمرض. وكما هو موضح في الشكل 5، أظهرت مجموعة نموذج PCOS على مستوى الجنس وفرة مرتفعة بشكل ملحوظ من Bacteroides (درجة LDA > 3.5)، وPrevotella (درجة LDA > 3.0)، وEscherichia (درجة LDA > 2.5)، وهي جميعاً مرتبطة عموماً بخلل في التمثيل الغذائي والالتهابات. وعلى العكس من ذلك، أظهرت المجموعة الضابطة إثراءً للأجناس المفيدة، بما في ذلك Lactobacillus (درجة LDA > 3.0) وRuminococcus (درجة LDA > 2.5)، وكلاهما معروف بدورهما في الحفاظ على سلامة الحاجز المعوي وإنتاج نواتج أيضية مفيدة مثل الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة. لم يتم عرض مجموعة ZeLan كفئة LEfSe منفصلة في الشكل 5 لأن هذا التحليل ركز على التصنيفات التي تميز المرض عن الصحة؛ وقد تم تفسير التأثيرات المرتبطة بـ ZeLan من خلال تحولات الوفرة نحو نمط المجموعة الضابطة ومن خلال الارتباطات بين الميكروبيوم والميتابولوم.

تحديد الملفات الميتابولومية وتحديد المستقلبات التفاضلية

أدى تحليل الميتابولوميات غير المستهدف إلى تحديد اضطرابات أيضية كبيرة مرتبطة بمتلازمة تكيس المبيضين (PCOS) وعلاجها بخلاصة ZeLan. يوضح مخطط البركان في الشكل 6 يوضح توزيع سمات المستقلبات بين مجموعتي النموذج والمجموعة الضابطة، مع تسليط الضوء على السمات المرتفعة والمنخفضة من خلال اتجاه التغير في نسبة الطي والدلالة الإحصائية. تم الاحتفاظ بإجمالي 52 سمة من المستقلبات المحددة في جدول تقرير الميتابولوميات الكامل للمقارنة بين مجموعة النموذج والمجموعة الضابطة. تتوفر القائمة الكاملة، والتي تتضمن اسم المستقلب، ومعرف HMDB، والفئة الكيميائية الحيوية، ولوغاريتم نسبة الطي (log2 fold change)، والقيمة الاحتمالية (P value)، واتجاه التنظيم، كـ الجدول التكميلي 1. الجدول 3 يعرض نواتج أيض ممثلة ومشروحة ذات صلة بيولوجية عالية بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS).

الجدول 3 يلخص المستقلبات التفاضلية الرئيسية الممثلة ذات درجات VIP العالية والأهمية البيولوجية في الفسيولوجيا المرضية لمتلازمة تكيس المبايض (PCOS). كانت الهرمونات الستيرويدية، بما في ذلك التستوستيرون (VIP = 2.56, P < 0.001) والأندروستينديون (VIP = 2.34, P < 0.001)، مرتفعة بشكل ملحوظ في حيوانات نموذج PCOS، وهو ما يتفق مع حالة فرط أندروجين الدم المميزة لهذه الحالة. كما اضطرب استقلاب الأحماض الدهنية، حيث أظهر حمض البالمتيك (VIP = 2.12) وحمض الأراشيدونيك (VIP = 1.89) زيادات ملحوظة، بينما ارتفع بشكل مماثل الوسيط الدهني المسبب للالتهاب بروستاجلاندين E2 (VIP = 2.05). وعلى العكس من ذلك، انخفضت المستقلبات المرتبطة بالنشاط الميكروبي المعوي المفيد في حيوانات PCOS: حيث انخفض حمض الليثوكوليك، وهو حمض صفراوي ثانوي ينتج عن طريق التحول البيولوجي الميكروبي، بشكل كبير (VIP = 2.45)، وكذلك حمض البوتيريك وهو حمض دهني قصير السلسلة (VIP = 2.21). بالإضافة إلى ذلك، أظهر حمض السكسينيك والحمض الأميني الأساسي L-tryptophan انخفاضات في مجموعة النموذج، مما يشير إلى ضعف التخمر الميكروبي واضطراب استقلاب الأحماض الأمينية.

تحليل إثراء مسارات KEGG

كشف تحليل إثراء المسارات باستخدام قاعدة بيانات KEGG عن وجود العديد من المسارات الأيضية في المصل التي اضطربت بشكل ملحوظ في متلازمة تكيس المبايض (PCOS) وتأثرت بالعلاج بـ ZeLan. وكما هو موضح في الشكل 7، ظهر التخليق الحيوي للهرمونات الستيرويدية كأكثر المسارات إثراءً من حيث الدلالة (Rich Factor = 0.80, P < 0.01)، وهو ما يتوافق مع النمط الظاهري لفرط أندروجين الدم المميز لمتلازمة تكيس المبايض. وبالمثل، أظهر مسار تخليق الستيرويدات المبيضية إثراءً عالياً (Rich Factor = 0.75, P < 0.01)، مما يعكس دور التغير في تخليق الأندروجين في خلل وظائف المبيض. كما أظهر التخليق الحيوي لأحماض الصفراء الأولية إثراءً ملحوظاً (Rich Factor = 0.62, P < 0.02)، مما يشير إلى اضطراب في دورة أحماض الصفراء المعوية الكبدية التي قد تكون مرتبطة بالتغيرات في ميكروبيوم الأمعاء. وكان استقلاب حمض الأراشيدونيك (Rich Factor = 0.56, P < 0.03) ومسار مقاومة الأنسولين (Rich Factor = 0.40, P < 0.04) مثريين بشكل ملحوظ أيضاً، مما يدعم وجود اضطرابات التهابية وأيضية مميزة لمتلازمة تكيس المبايض. وأظهر مسار التخليق الحيوي للأحماض الدهنية إثراءً متواضعاً (Rich Factor = 0.30)، مما يشير إلى تورط خلل في تنظيم استقلاب الدهون.

تحليل الارتباط بين الميكروبيوم والميتابولوم

لتقييم العلاقات الوظيفية بين تكوين ميكروبات الأمعاء والتغيرات الأيضية، تم إجراء تحليل ارتباط سبيرمان مع التحكم في معدل الاكتشاف الكاذب بين الأجناس البكتيرية ذات الوفرة المتباينة والمستقلبات الرئيسية. تكشف الخريطة الحرارية للارتباط المجمعة هرميًا والموضحة في الشكل 8 عن أنماط متميزة من الارتباطات بين الميكروبيوم والميتابولوم. أظهرت البكتيريا النافعة، بما في ذلك Lactobacillus و Ruminococcus، ارتباطات إيجابية قوية مع حمض الليثوكوليك (r = 0.72 و 0.68، على التوالي) وحمض البيوتيريك (r = 0.65 و 0.60، على التوالي)، بينما أظهرت ارتباطات سلبية مع التستوستيرون (r = -0.75 و -0.80) والأندروستينيديون (r = -0.68 و -0.72). تشير هذه النتائج إلى أن البكتيريا النافعة التي تم تحديدها في التحليل التصنيفي كانت مرتبطة بالمستقلبات المتعلقة بالأندروجين والنشاط الأيضي المرتبط بالأحماض الدهنية قصيرة السلسلة SCFA.

وعلى العكس من ذلك، أظهرت أجناس Bacteroides وPrevotella وEscherichia المرتبطة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) أنماط ارتباط متضادة؛ حيث ارتبطت هذه البكتيريا ارتباطاً إيجابياً مع التستوستيرون (r = 0.85 و0.82 و0.60 على التوالي)، والأندروستينيديون (r = 0.78 و0.75 و0.55)، وحمض البالمتيك (r = 0.65 و0.60 و0.45)، بينما أظهرت ارتباطات سلبية مع المستقلبات المفيدة، بما في ذلك حمض الليتوكوليك وحمض البيوتيريك. تدعم أنماط الارتباط هذه وجود روابط وظيفية بين تصنيفات ميكروبية معينة في الأمعاء والاضطرابات الأيضية المميزة لمتلازمة PCOS، ولكنها لا تثبت وجود علاقة سببية مباشرة.

توافر البيانات:

تشمل مجموعات البيانات التي تم إنتاجها وتحليلها خلال هذه الدراسة البيانات الوصفية للعينات، وبيانات المصدر للمظاهر الشكلية، ومؤشرات ألفا للتنوع لـ 16S، وملخصات الوفرة على مستوى الشعبة، ونتائج الأصناف البكتيرية التفاضلية، وجداول التحليل التفاضلي للمستقلبات، ونتائج المستقلبات التمثيلية، ونتائج إثراء مسارات KEGG، ومصفوفة ارتباط الميكروبيوتا والمستقلبات. تتوفر بيانات المصدر الأساسية هذه في الملحقات المصاحبة. الملف التكميلي 1يتم توفير مجموعة بيانات المستقلبات التفاضلية المعالجة على شكل الجدول التكميلي 1.

مخطط للجدول الزمني التجريبي يوضح مجموعات الضبط، والنموذج، ومجموعات ZeLan مع حقن DHEA، وجمع العينات.
الشكل 1: التصميم التجريبي والجدول الزمني للعلاج. توضيح تخطيطي لسير العمل التجريبي يظهر فترة التأقلم لمدة 7 أيام، وفترة حقن DHEA أو الناقل لمدة 21 يوماً، والعلاج بمستخلص ZeLan أو الناقل لمدة 28 يوماً، وجمع عينات المصل والبراز في نهاية التجربة في اليوم 56 من البروتوكول. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخططات صندوقية لمستويات التستوستيرون في المصل، ونسبة LH/FSH، ووزن الجسم؛ مقارنة بين مجموعات التحكم والنموذج وZeLan.
الشكل 2: تأثيرات مستخلص ZeLan على المعايير الغدية والتمثيل الغذائي. مخططات صندوقية توضح (A) تركيز التستوستيرون في المصل، و(B) نسبة LH/FSH، و(C) وزن الجسم في مجموعات التحكم (Control)، والنموذج (Model)، ومجموعة العلاج بـ ZeLan بعد فترة التدخل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط صندوقي لمقارنة مؤشر شانون؛ مجموعات Control وModel وZeLan؛ نتائج تحليل التنوع.
الشكل 3: التنوع الألفي للميكروبات المعوية. مقارنة مؤشر شانون للتنوع بين مجموعات Control وModel وZeLan، مما يوضح الاختلافات في التنوع الألفي للميكروبات المعوية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط شريطي للتكوين الميكروبي؛ وفرة الشعب في مجموعات Control و Model و ZeLan؛ تحليل الميكروبيوم.
الشكل 4: تكوين ميكروبيوتا الأمعاء على مستوى الشعبة. مخطط شريطي مكدس يوضح الوفرة النسبية للشعب البكتيرية السائدة في ميكروبيوتا الأمعاء لمجموعات Control و Model ومجموعة العلاج بـ ZeLan. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تحليل الميكروبيوم، مخطط شريطي لدرجة LDA يوضح إثراء الأجناس في مجموعتي التحكم والنموذج.
الشكل 5: الأصناف البكتيرية المتباينة التي تم تحديدها بواسطة تحليل LEfSe. يوضح تحليل حجم تأثير التحليل التمييزي الخطي (LEfSe) الأجناس البكتيرية التي تميز بين مجموعتي التحكم والنموذج. وتشير درجات LDA إلى حجم تأثير الأصناف المتباينة في الوفرة. وقد وُصفت التغيرات المرتبطة بـ ZeLan في قسم النتائج بناءً على تحولات الوفرة بالنسبة لمجموعة النموذج. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط بركاني يوضح تحليل التعبير الجيني؛ لوغاريتم التغير في الطي (log2 fold change) مقابل -لوغاريتم القيمة الاحتمالية (log10 p-value).
الشكل 6: توصيف المستقلبات التفاضلي. يوضح المخطط البركاني سمات المستقلبات التفاضلية بين مجموعتي النموذج والمجموعة الضابطة. تمثل النقاط الحمراء والزرقاء سمات المستقلبات التي ارتفعت أو انخفضت بشكل ملحوظ، على التوالي، بناءً على التغير في الطي والدلالة الإحصائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط نقطي لتحليل المسارات؛ يشير حجم الفقاعة إلى العدد؛ ويوضح اللون قيمة p-value؛ المحاور: عامل الإثراء مقابل المسار.
الشكل 7: تحليل إثراء مسارات KEGG. مخطط فقاعي يوضح المسارات الأيضية المثرية بشكل ملحوظ والتي تم تحديدها من المستقلبات التفاضلية. يمثل حجم الفقاعة عدد المستقلبات المحددة، ويشير لون الفقاعة إلى الدلالة الإحصائية (P-value) لإثراء المسار. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط خريطة حرارية للارتباطات بين الميكروبات والمستقلبات؛ تحليل البيانات الخاصة بميكروبيوم الأمعاء.
الشكل 8: الارتباط بين ميكروبيوم الأمعاء ومستقلبات المصل. خريطة حرارية ذات تجميع هرمي توضح معاملات ارتباط Spearman بين أجناس بكتيرية متباينة الوفرة ومستقلبات مصلية ممثلة. يشير اللون الأحمر إلى ارتباطات إيجابية، بينما يشير اللون الأزرق إلى ارتباطات سلبية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مجموعةنوزن الجسم (جم)تستوستيرون (نانوجرام/مل)نسبة الهرمون اللوتيني إلى الهرمون المنشط للحويصلة (LH/FSH)إنسولين (mIU/L)
ضابط8227.45 ± 10.120.51 ± 0.051.25 ± 0.1112.55 ± 1.12
نموذج8291.12 ± 15.35a1.85 ± 0.21a 3.28 ± 0.25a28.95 ± 2.35a
زيلان8245.25 ± 10.21b0.92 ± 0.12b1.85 ± 0.15b18.82 ± 1.55b
ملاحظة: يتم عرض البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري. a = p < 0.05 مقارنة بمجموعة الضبط؛ b = p < 0.05 مقارنة بمجموعة النموذج.

الجدول 1: المعايير الغدية والاستقلابية في جرذان متلازمة تكيس المبايض (PCOS). تم قياس وزن الجسم، ومستوى التستوستيرون في المصل، ونسبة LH/FSH، ومستويات الأنسولين في حالة الصيام في مجموعات الضبط، والمجموعات النموذجية، ومجموعات العلاج بـ ZeLan. البيانات معروضة كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD).

المجموعةمؤشر شانون (Shannon Index)مؤشر سيمبسون (Simpson Index)مقدر Chao1
المجموعة الضابطة6.51 ± 0.280.98 ± 0.011215.3 ± 45.4
النموذج4.19 ± 0.35a0.82 ± 0.03a665.8 ± 52.1a
ZeLan5.79 ± 0.26b0.93 ± 0.02b963.5 ± 38.6b
ملاحظة: البيانات معروضة كمتوسط ± الانحراف المعياري (Mean ± SD). a = p < 0.05 مقارنة بالمجموعة الضابطة؛ b = p < 0.05 مقارنة بمجموعة النموذج.

الجدول 2: مؤشرات التنوع الألفا للميكروبات المعوية. مقارنة لمؤشر شانون، ومؤشر سيمبسون، ومقدّر Chao1 بين مجموعات التحكم، والنموذج، والعلاج بـ ZeLan. البيانات معروضة كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD).

اسم المستقلبمعرف HMDBالفئةالاتجاه (النموذج مقابل المجموعة الضابطة)القيمة الاحتمالية (p-value)درجة الأهمية في المسقط (VIP Score)
تستوستيرونHMDB0000286ستيرويدأعلى ↑< 0.0012.56
أندروستيندون* (Androstenedione)HMDB0000055ستيرويدلأعلى ↑< 0.0012.34
حمض البالميتيكHMDB0000220حمض دهنيإلى الأعلى ↑< 0.0012.12
حمض الأراشيدونيكHMDB0001043حمض دهنيللأعلى ↑0.0031.89
بروستاجلاندين E2HMDB0001036الليبيد (الدهون)لأعلى ↑< 0.0012.05
حمض الليثوكوليكHMDB0000752حمض الصفراءلأسفل ↓< 0.0012.45
حمض البيوتيريكHMDB0000039الأحماض الدهنية قصيرة السلسلةأسفل ↓< 0.0012.21
حمض السكسينيكHMDB0000254حمض عضويلأسفل ↓0.0211.65
إل-تريبتوفانHMDB0000929حمض أمينيلأسفل ↓0.0151.58
ملاحظة: VIP = أهمية المتغير في الإسقاط (Variable Importance in Projection) > 1 يعتبر دالاً إحصائياً). 

الجدول 3: مستقلبات مصلية تفاضلية ممثلة. مستقلبات مُعلّمة ممثلة مرتبطة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) ويتم تنظيمها بواسطة مستخلص ZeLan، بما في ذلك معرفات HMDB، وفئة المستقلب، واتجاه التنظيم، والقيمة الاحتمالية P-value، ودرجة VIP. تتوفر القائمة الكاملة لـ 52 سمة من المستقلبات المُعلّمة في الجدول التكميلي 1.

الجدول التكميلي 1: مجموعة بيانات المستقلبات الموضحة الكاملة. قائمة كاملة بـ 52 ميزة من المستقلبات الموضحة التي تم الاحتفاظ بها لإعداد تقارير الميتابولوميكس، بما في ذلك اسم المستقلب، ومعرف HMDB، والفئة الكيميائية الحيوية، ومعامل التغير (fold change)، والقيمة الاحتمالية (P-value)، واتجاه التنظيم.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

الملف التكميلي 1: البيانات المصدرية التي تدعم التحليلات التجريبية والميكروبيوم والميتابولوميات. يحتوي كتاب العمل هذا على معلومات العينات، وقياسات النمط الظاهري السريري، ومؤشرات تنوع تسلسل 16S rRNA، والوفرة النسبية الميكروبية على مستوى الشعبة، وتحليل LEfSe للتاكسا التفاضلية، والتحليل التفاضلي للميتابولوميات، والمستقلبات التمثيلية، وتحليل إثراء مسار KEGG، وبيانات مصفوفة الارتباط، وملخص التحقق من البيانات المستخدمة لإنشاء الأشكال والجداول الواردة في المخطوطة.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

تقدم الدراسة الحالية دليلاً على أن مستخلص ZeLan يحسن النماذج الظاهرية الغدية والتمثيلية المرتبطة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) في نموذج جرذان مستحث بواسطة DHEA، وأن هذه التأثيرات مرتبطة بتغيرات إيجابية في تكوين ميكروبيوم الأمعاء وملفات التمثيل الغذائي في المصل. وقد أظهر نهج الأوميكس المتعدد المتكامل أن العلاج بـ ZeLan أدى إلى تحسين فرط أندروجين الدم، وارتفاع نسبة LH/FSH، ومقاومة الإنسولين، بينما استعاد جزئياً التنوع الألفي لميكروبات الأمعاء، وأعاد توازن التكوين الميكروبي، وسوّى العديد من مسارات التمثيل الغذائي المتورطة في الفسيولوجيا المرضية لمتلازمة تكيس المبايض. وتوسع هذه النتائج الفهم الحالي للاستجابات البيولوجية للأدوية النباتية الصينية التقليدية، وتدعم المزيد من الاستقصاء حول محور الأمعاء-المبيض كهدف محتمل للتدخل في علاج متلازمة تكيس المبايض.

يتماشى الانخفاض في مستويات التستوستيرون في المصل ونسبة LH/FSH بعد العلاج بـ ZeLan مع الدراسات السابقة التي أثبتت الخصائص المضادة للأندروجين للمستخلصات النباتية التي تحتوي على الفلافونيدات والمركبات الفينولية16. وقد لخصت مراجعة شاملة للدراسات السريرية التي استخدمت الطب العشبي لعلاج متلازمة المبيض متعدد الكيسات (PCOS) التحسينات الغدية والتمثيلية عبر التدخلات النباتية المختلفة17. قد تتضمن الآلية التي ينظم بها ZeLan التخليق الحيوي للأندروجين تأثيرات مباشرة على مسارات تخليق الستيرويدات في المبيض، أو تأثيرات جهازية مضادة للالتهابات ومحسنة لحساسية الإنسولين، أو تأثيرات غير مباشرة مرتبطة بنواتج أيض الميكروبات المعوية، ولا يمكن للتصميم الحالي الفصل تماماً بين هذه الاحتمالات. ويشير التحسن في نسبة LH/FSH إلى استعادة جزئية لوظيفة المحور الوطائي-النخامي-المنسلي، والذي غالباً ما يكون مختلاً في حالات PCOS18. كما أفادت المراجعات المنهجية للتجارب الحيوانية على تركيبات الطب الصيني التقليدي لعلاج PCOS بحدوث تحسينات في المؤشرات التناسلية والغدية19. ويشير التحسن المتزامن في المؤشرات المرتبطة بالإنسولين إلى أن ZeLan قد يحقق فوائد أيضية تتجاوز التنظيم الغدي، ربما من خلال تعزيز إشارات الإنسولين الطرفية أو تقليل الوسائط الالتهابية التي تعيق وظيفة مستقبلات الإنسولين20.

يتفق استعادة التنوع الألفا الميكروبي المعوي بعد العلاج بـ ZeLan مع الاستجابة المرتبطة بالميكروبيوم. يتوافق انخفاض التنوع الألفا الملاحظ في جرذان نموذج PCOS مع مجموعة الأدبيات المتزايدة التي توثق اختلال التوازن الميكروبي المعوي في كل من نماذج PCOS التجريبية والمجموعات السريرية21. كما ذكر Insenser وآخرون أن ملفات الميكروبات المعوية في حالات PCOS تتأثر بالجنس والهرمونات الجنسية والسمنة22. تشير ملاحظتنا بأن العلاج بـ ZeLan استعاد جزئياً مؤشر Shannon من 4.19 إلى 5.79 إلى أن هذا المستخلص النباتي قد يدعم بنية المجتمع الميكروبي. وقد تم الإبلاغ عن تأثيرات مماثلة في استعادة التنوع لمستخلصات نباتية أخرى غنية بالبوليفينول، والتي قد تعزز بشكل انتقائي المجموعات البكتيرية المفيدة بينما تثبط الأصناف التي قد تكون ممرضة23. وتعد التحولات التصنيفية الملاحظة على مستوى الشعبة، ولا سيما انخفاض نسبة Firmicutes-to-Bacteroidetes بعد العلاج بـ ZeLan، ذات صلة نظراً للارتباط الراسخ بين ارتفاع نسب F/B والخلل الأيضي، بما في ذلك السمنة ومقاومة الإنسولين24. وأفادت دراسات إضافية، بما في ذلك عمل Jobira وآخرين على المراهقات المصابات بـ PCOS، بتغير في التنوع البيولوجي الميكروبي في الجهاز الهضمي، مما يدعم الصلة البيولوجية للتركيب الميكروبي بأيض المضيف25.

يوفر تحديد أجناس بكتيرية معينة مرتبطة بشكل متفاوت بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) والعلاج بـ ZeLan سياقاً بيولوجياً لارتباطات الميكروبيوم والميتابولوم التي لوحظت في هذه الدراسة. ويتسق إثراء أجناس Lactobacillus وRuminococcus في المجموعات الضابطة السليمة ونقصها في حيوانات PCOS مع التقارير السابقة التي تسلط الضوء على الأدوار الوقائية لهذه الأجناس26. حيث تُعرف أنواع Lactobacillus بإنتاجها لحمض اللاكتيك والببتيدات المضادة للميكروبات التي تحافظ على سلامة حاجز الأمعاء وتثبط البكتيريا الممرضة، بينما تُعد أنواع Ruminococcus منتجات مهمة للأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFA) من خلال تخمير الألياف الغذائية27. وقد يؤدي استعادة هذه الأجناس المفيدة بعد العلاج بـ ZeLan إلى تحسين وظيفة حاجز الأمعاء وتعزيز النشاط الأيضي المرتبط بـ SCFA، وهو ما ينعكس في زيادة مستويات حمض البوتيريك الملحوظة في تحليل الميتابولوم. وعلى العكس من ذلك، فإن الوفرة المرتفعة لأجناس Bacteroides وPrevotella وEscherichia في حيوانات PCOS تتماشى مع الدراسات التي تربط هذه الأجناس بالاضطرابات الالتهابية والأيضية28. ويمكن لأنواع Escherichia، وخاصة Escherichia coli، أن تنتج عديد السكاريد الشحمي (lipopolysaccharide)، والذي قد يحفز الالتهاب الجهازي ومقاومة الإنسولين من خلال إشارات مستقبل Toll-like receptor 4، مما يمثل رابطاً محتملاً بين اختلال توازن الميكروبيوم المعوي والخلل الأيضي المرتبط بمتلازمة تكيس المبايض29.

توفر النتائج الميتابولومية دليلاً على وجود ارتباطات أيضية بين ميكروبيوتا الأمعاء والمضيف تصاحب العلاج بـ ZeLan. وتعد التغيرات في الأحماض الصفراوية الثانوية، مثل حمض الليثوكوليك (lithocholic acid)، ذات صلة بيولوجية لأن هذه المستقلبات تتولد من خلال النشاط الإنزيمي البكتيري30. ولا تقتصر وظيفة الأحماض الصفراوية على امتصاص الدهون فحسب، بل تعمل أيضاً كجزيئات إشارة تنظم أيض الجلوكوز والدهون من خلال مستقبل farnesoid X ومستقبل Takeda G protein-coupled receptor 5، مما يشير إلى أن تطبيع مستويات الأحماض الصفراوية قد يساهم في تحسين التوازن الأيضي. وبالمثل، فإن استعادة مستويات حمض البوتيريك (butyric acid) تُعد أمراً هاماً نظراً لتأثيراته المفيدة المتعددة، بما في ذلك تعزيز وظيفة حاجز الأمعاء، والخصائص المضادة للالتهابات، وتحفيز الحساسية للإنسولين. وتوفر الارتباطات الملحوظة بين البكتيريا النافعة والمستقلبات الواقية، في مقابل الارتباطات بين البكتيريا الممرضة والمستقلبات الضارة، دعماً ارتباطياً لفرضية محور الأمعاء-المبيض، مع التأكيد على الحاجة إلى التحقق الآلي المباشر.

ينبغي تفسير التداعيات السريرية لهذه النتائج ضمن حدود التصميم الاستكشافي قبل السريري. وتدعم النتائج إجراء المزيد من التقييم لمستخلص ZeLan كنهج تكميلي لإدارة متلازمة تكيس المبايض (PCOS)، لا سيما في سياق التدخلات النباتية التي قد تؤثر على كل من المؤشرات الغدية الاستقلابية والبيئة المجهرية المعوية. وقد يساعد تحديد المؤشرات الحيوية الميكروبية والاستقلابية المرتبطة بالاستجابة للعلاج في توجيه الدراسات الميكانيكية والترجمية المستقبلية. بالإضافة إلى ذلك، قد يدعم محور الأمعاء والمبايض في نهاية المطاف استراتيجيات الدمج التي تجمع بين ZeLan والبروبيوتيك أو التعديلات الغذائية، بيد أن مثل هذه الاستراتيجيات تتطلب تحقّقاً منضبطاً قبل التطبيق السريري.

ثمة عدة قيود في الدراسة الحالية تستوجب الإقرار بها. أولاً، على الرغم من أن نموذج الجرذان المستحث بواسطة DHEA يحاكي عدة سمات من متلازمة تكيس المبايض (PCOS) البشرية، إلا أنه لا يجسد بشكل كامل التباين في الأنماط الظاهرية لمتلازمة تكيس المبايض البشرية، بما في ذلك الأنواع الفرعية النحيفة، والبدينة، والمقاومة للإنسولين، والالتهابية؛ لذا، يتطلب التطبيق السريري التحقق من الصحة في مجموعات مرضى محددة بدقة. ثانياً، استخدمت الدراسة جرعة واحدة من ZeLan دون تدرج في الاستجابة للجرعة أو استخدام ضابط دوائي إيجابي مثل metformin، وبالتالي لا يزال من الضروري تحديد نطاق الجرعة الفعالة، والفعالية المقارنة، ودورة الإعطاء المثلى. ثالثاً، أُجري أخذ العينات عند نقطة النهاية فقط، مما يحد من تفسير التغيرات الزمنية الديناميكية في الميكروبيوتا والمستقلبات وملفات الهرمونات خلال فترة التدخل. رابعاً، لم يتضمن هذا التصميم التجريبي الفحص النسيجي المرضي للمبايض، وتعداد الجريبات، وقياس الجسم الأصفر، والمراقبة المتسلسلة لدورة الشبق؛ وبناءً على ذلك، استُنتج التعافي الوظيفي للمبايض من المؤشرات الغدية والأيضية بدلاً من التقييم المباشر على مستوى الأنسجة والدورة. خامساً، حددت الدراسة ارتباطات بين التصنيفات الميكروبية والمستقلبات، ولكنها لم تتضمن زراعة الميكروبيوتا البرازية، أو تجارب على حيوانات خالية من الجراثيم، أو مكملات أيضية مستهدفة، أو مقايسات لعلامات الالتهاب، أو قياسات الإنزيمات الستيرويدية المبيضية مثل CYP17A1 وCYP19A1 وStAR؛ وبالتالي، لا يمكن تأكيد الآليات السببية من البيانات الحالية. سادساً، توفر الميتابولوميات غير المستهدفة أدلة على مستوى الاكتشاف، ويتطلب العمل المستقبلي تحققاً كمياً مستهدفاً من المستقلبات الرئيسية مثل lithocholic acid وbutyric acid وtestosterone. سابعاً، لم تكن تصورات التنوع بيتا (beta-diversity)، والتنبؤ الوظيفي الميكروبي، ونمذجة مسار الميكروبيوتا-المستقلبات-الجينات المتكاملة متاحة في التقديم الحالي، مما يحد من القدرة على بناء شبكة تنظيمية كاملة. أخيراً، تمت معايرة مستخلص ZeLan بناءً على محتوى الفلافونويد الكلي، ولكن لا تزال هناك حاجة إلى توصيف فيتوكيميائي نوعي وكمي شامل للمونومرات النشطة.

في الختام، أدى مستخلص ZeLan إلى تحسين الأنماط الظاهرية الغدية والتمثيلية المرتبطة بمتلازمة تكيس المبايض (PCOS) في نموذج جرذان، وارتبط ذلك باستعادة جزئية للتنوع الألفا الميكروبي في الأمعاء، وتغير في التركيب الميكروبي، وتعديل في مسارات التمثيل الغذائي في المصل، بما في ذلك الاصطناع الحيوي للهرمونات الستيرويدية، واستقلاب الأحماض الصفراوية، والاستقلاب المرتبط بالأحماض الدهنية قصيرة السلسلة. وتدعم الارتباطات الملحوظة بين البكتيريا النافعة والنواتج الأيضية الواقية، مقابل الارتباطات بين البكتيريا المثرية في حالات PCOS والنواتج الأيضية الضارة، وجود ارتباط منطقي بيولوجياً بين محور الأمعاء والمبايض. توفر هذه النتائج أساساً للدراسات الميكانيكية والترجمية المستقبلية لمستخلص ZeLan في إدارة متلازمة تكيس المبايض، مع التأكيد على الحاجة إلى التحقق من العلاقات السببية وإجراء توصيف كيميائي نباتي أوسع.

الإفصاحات

يقر المؤلفون بعدم وجود أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم تمويل هذه الدراسة من قبل مشروع تخطيط البحوث العلمية التابع لإدارة مقاطعة خبي للطب الصيني التقليدي (منحة رقم 2021316).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أسيتونتريلFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA955-4بدرجة نقاء Optima LC-MS، 4 لتر؛ الطور المتحرك وإعادة تشكيل العينة
عمود ACQUITY UPLC HSS T3Waters Corporation186003539100 Å, 1.8 μm, 2.1 × ١٠٠ مم؛ فصل باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء (UHPLC)
نظام الرحلان الكهربائي لهلام الأجاروزBio-Rad Laboratories1704486نظام الرحلان الكهربائي الأفقي Mini-Sub Cell GT؛ تقييم جودة الحمض النووي DNA
Agilent 1290 Infinity II/6550 UHPLC-Q-TOF-MSAgilent TechnologiesG7120A/G7167B/G7116B/G6550Bمجموعة وحدات 1290 Infinity II UHPLC مقترنة بجهاز 6550 iFunnel Q-TOF MS؛ منصة الميتابولوميات غير المستهدفة للمصل
خوارزمية DADA2Bioconductorالإصدار 1.24.0توليد متسلسلات الأشكال المتغيرة للنسخ (ASV) وإزالة الكيميرا؛ الإصدار المستنتج ليتوافق مع تدفق عمل R 4.2.1/Bioconductor 3.15
ديهيدرو إيبي أندروستيرون (DHEA)Sigma-Aldrich / MilliporeSigmaD4000استحثاث نموذج متلازمة تكيس المبايض (PCOS)؛ 6 ملغ/100 غ من وزن الجسم؛ CAS 53-43-0
ماء مقطرInvitrogen / Thermo Fisher Scientific10977015ماء مقطر عالي النقاء وخالٍ من الـ DNase والـ RNase؛ يُستخدم كوسط ناقل للتزقيم الفموي في مجموعتي الضبط والنموذج
حمض الفورميكFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA117-50درجة Optima LC-MS، سعة 50 مل؛ مادة مضافة بنسبة 0.1% للأطوار المتحركة في تقنية LC-MS
قاعدة بيانات الميتابولوم البشريجامعة ألبرتا / قاعدة بيانات الأيض البشرية (HMDB)قاعدة بيانات الأيض البشري (HMDB) الإصدار 5.0قاعدة بيانات توصيف المستقلبات
منصة Illumina NovaSeq 6000Illumina20012850نظام التسلسل المستخدم من قبل مزود خدمة التسلسل لإجراء تسلسل rRNA 16S بنهايات مزدوجة وبطول 250 زوجاً قاعدياً
عشبة Lycopus lucidus Turcz.شركة بكين تونغ رين تانغ للأدوية الصينية المحدودةالدفعة ZL-20230315المادة الخام النباتية الموثقة للمستخلص المائي لـ ZeLan
ميثانولFisher Chemical / Thermo Fisher ScientificA456-4درجة Optima LC-MS، بسعة 4 لتر؛ ترسيب البروتين لتحليل المستقلبات في المصل
قاعدة بيانات METLINسكريبس ريسيرش (Scripps Research)METLIN Classic 2023قاعدة بيانات التوصيف الطيفي الكتلي للمستقلبات
مقياس الطيف الضوئي NanoDropThermo Fisher ScientificND-ONE-Wجهاز NanoDrop One لقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية والمرئية للأحجام الدقيقة؛ تقييم كمية الحمض النووي DNA ونقاوته
مجموعة QIAamp Fast DNA Stool Mini KitQiagen51604استخلاص الحمض النووي (DNA) من محتويات الأعور؛ طقم استخلاص الحمض النووي من البراز بسعة 50 عينة
QIIME2فريق تطوير QIIME2الإصدار 2022.2معالجة تسلسلات الـ 16S rRNA
برنامج Rمؤسسة Rالإصدار 4.2.1التحليل الإحصائي ومعالجة XCMS
أطقم مقايسة الممتز المائي الإنزيمي (ELISA) للمصل لقياس التستوستيرون، والهرمون اللوتيني (LH)، والهرمون المنبه للجريب (FSH)، والأنسولينCusabio BiotechCSB-E05100r; CSB-E12654r; CSB-E06869r; CSB-E05070rأطقم مقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA) لتقدير مستويات التستوستيرون، والهرمون اللوتيني (LH)، والهرمون المنبه للجريب (FSH)، والأنسولين في مصل الجرذان لتقدير كمية الهرمونات والأنسولين
زيت السمسمSigma-Aldrich / MilliporeSigmaS3547الوسط الناقل لحقن DHEA
بنتوباربيتال الصوديومSigma-Aldrich / MilliporeSigmaP3761التخدير؛ ٥٠ ملغم/كغم عن طريق الحقن البريتوني
برنامج SPSSشركة IBMالإصدار 26.0التحليل الإحصائي
البادئات العامة لـ 16S rRNA وهي 338F/806Rشركة Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.تخليق مخصص: 338F/806Rتضخيم منطقتي V3-V4؛ 338F ACTCCTACGGGAGGCAGCAG، 806R GGACTACHVGGGTWTCTAAT
حزمة XCMSBioconductor / Rالإصدار 3.18.0كشف القمم، ومحاذاة وقت الاستبقاء، والتكامل
مستخلص ZeLanمستخلص مائي مُحضّر داخلياًالدفعة ZLE-20230402المعالجة بالتجريع الفموي؛ الفلافونويدات الكلية المعيارية ≥2.5%

المراجع

  1. Joham AE, Norman RJ, Stener-Victorin E, et al. Polycystic ovary syndrome. Lancet Diabetes Endocrinol. 2022;10(9):668-680.
  2. Islam H, Masud J, Islam YN, et al. An update on polycystic ovary syndrome: a review of the current state of knowledge in diagnosis, genetic etiology, and emerging treatment options. Womens Health (Lond). 2022;18:17455057221117966.
  3. Azziz R, Carmina E, Chen Z, et al. Polycystic ovary syndrome. Nat Rev Dis Primers. 2016;2:16057.
  4. Fahs D, Salloum D, Nasrallah M, et al. Polycystic ovary syndrome: pathophysiology and controversies in diagnosis. Diagnostics (Basel). 2023;13(9):1559.
  5. Conway G, Dewailly D, Diamanti-Kandarakis E, et al. The polycystic ovary syndrome: a position statement from the European Society of Endocrinology. Eur J Endocrinol. 2014;171(4):P1-P29.
  6. Huddleston HG, Dokras A. Diagnosis and treatment of polycystic ovary syndrome. JAMA. 2022;327(3):274-275.
  7. Zhang J, Xin X, Zhang H, et al. The efficacy of Chinese herbal medicine in animal models of polycystic ovary syndrome: a systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022;2022:4892215.
  8. Chen J, Na E, Lim SY. Effect of fractions from Lycopus lucidus Turcz. leaves on genomic DNA oxidation and matrix metalloproteinase activity. Comb Chem High Throughput Screen. 2022;25(10):1778-1784.
  9. Ślusarczyk S, Hajnos M, Skalicka-Woźniak K, et al. Antioxidant activity of polyphenols from Lycopus lucidus Turcz. Food Chem. 2009;113(1):134-138.
  10. Qi X, Yun C, Sun L, et al. Gut microbiota-bile acid-interleukin-22 axis orchestrates polycystic ovary syndrome. Nat Med. 2019;25(8):1225-1233.
  11. He FF, Li YM. Role of gut microbiota in the development of insulin resistance and the mechanism underlying polycystic ovary syndrome. J Ovarian Res. 2020;13(1):73.
  12. Chadchan SB, Singh V, Kommagani R. Female reproductive dysfunctions and the gut microbiota. J Mol Endocrinol. 2022;69(3):R81-R94.
  13. Puspitasari VD, Lestari ES, Pramono N. Testosterone induced Wistar rat model for gut microbiota dysbiosis of polycystic ovarian syndrome research. J Indones Med Assoc. 2024;74(3):132-140.
  14. Zhang J, Sun Z, Jiang S, et al. Probiotic Bifidobacterium lactis V9 regulates the secretion of sex hormones in polycystic ovary syndrome patients. mSystems. 2019;4(2):e00017-19.
  15. Xuan Y, Hong X, Zhou X, et al. The vaginal metabolomics profile with features of polycystic ovary syndrome: a pilot investigation in China. PeerJ. 2024;12:e18194.
  16. Hu M, Zhang Y, Guo X, et al. Hyperandrogenism and insulin resistance induce gravid uterine defects in association with mitochondrial dysfunction and aberrant ROS production. Endocrinology. 2019;160(9):2208-2223.
  17. Moini Jazani A, Nasimi Doost Azgomi H, Nasimi Doost Azgomi A, et al. A comprehensive review of clinical studies with herbal medicine on polycystic ovary syndrome (PCOS). DARU J Pharm Sci. 2019;27(2):863-877.
  18. McCartney CR, Marshall JC. Polycystic ovary syndrome. N Engl J Med. 2016;375(1):54-64.
  19. Cui Y, Zhang C, Li X, et al. Systematic review and meta-analysis of animal experiments on Bushen formulas for the treatment of polycystic ovary syndrome. Sci Rep. 2025;15(1):7648.
  20. Thackray VG. Sex, microbes, and polycystic ovary syndrome. Trends Endocrinol Metab. 2019;30(1):54-65.
  21. Torres PJ, Siakowska M, Banaszewska B, et al. Gut microbial diversity in women with polycystic ovary syndrome correlates with hyperandrogenism. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(4):1502-1511.
  22. Insenser M, Murri M, Del Campo R, et al. Gut microbiota and the polycystic ovary syndrome: influence of sex, sex hormones, and obesity. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(7):2552-2562.
  23. Guo Y, Qi Y, Yang X, et al. Association between polycystic ovary syndrome and gut microbiota. PLoS One. 2016;11(4):e0153196.
  24. Liu R, Zhang C, Shi Y, et al. Dysbiosis of gut microbiota associated with clinical parameters in polycystic ovary syndrome. Front Microbiol. 2017;8:324.
  25. Jobira B, Frank DN, Pyle L, et al. Obese adolescents with PCOS have altered biodiversity and relative abundance in gastrointestinal microbiota. J Clin Endocrinol Metab. 2020;105(6):e2134-e2144.
  26. Bai X, Ma J, Wu X, et al. Impact of visceral obesity on structural and functional alterations of gut microbiota in polycystic ovary syndrome (PCOS): a pilot study using metagenomic analysis. Diabetes Metab Syndr Obes. 2023;16:1-14.
  27. Rizk MG, Thackray VG. Intersection of polycystic ovary syndrome and the gut microbiome. J Endocr Soc. 2021;5(2):bvaa177.
  28. He S, Li H, Yu Z, et al. The gut microbiome and sex hormone-related diseases. Front Microbiol. 2021;12:711137.
  29. Chu W, Han Q, Xu J, et al. Metagenomic analysis identified microbiome alterations and pathological association between intestinal microbiota and polycystic ovary syndrome. Fertil Steril. 2020;113(6):1286-1298.
  30. Yurtdaş G, Akdevelioğlu Y. A new approach to polycystic ovary syndrome: the gut microbiota. J Am Coll Nutr. 2020;39(4):371-382.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ZeLan 16S rRNA UHPLC Q TOF MS

مقالات ذات صلة