تكبير المثانة اللفائفي الموحد لعملية استوبسط المثانة المعوية في الفئران عبر شق البطن الأوسط

ملخص

يصف هذا البروتوكول نموذج معوي المثانة الموحد للفئران باستخدام رقعة لفائفي مغطاة بيديكل، وعائية وعائية، وأنبوبية مع تحويل بولي مؤقت إلى الخارج عبر أنبوب كانولا لتحقيق تكبير مثانة قابل للتكرار.

الملخص

تظل زيادة المثانة باستخدام شرائح الأمعاء إجراء أساسيا لإعادة بناء المرضى الذين لديهم مثانة ذات قدرة منخفضة أو غير متوافقة عندما تفشل العلاجات المحافظة. على الرغم من أهميتها السريرية، فإن التقدم التجريبي والدراسة المتعمقة محدودان بسبب نقص بروتوكولات موحدة وقابلة للتكرار تمثل المبادئ الجراحية بشكل موثوق في بيئة ما قبل سريرية مضبوطة. هنا، نقدم بروتوكول تصحيح المسيرات المعوية للفئران خطوة بخطوة يستخدم رقعة لفائفي مقلوبة ومزوعة الأنبوب كفتحة مثلثية لتعزيز المثانة الأصلية. تشمل العملية استئصال البطن في منتصف الخط، والتعرض المسيطر عليه، وتثبيت المثانة باستخدام غرز مثبتة، وتحويل البول عبر أنبوب قنية خارجي فولي، وعزل جزء ليليالي قصير مع قدم مساريق سليمة، وإزالة الأنبوب، والتشريح الرقيق بدون توتر مع جدار المثانة. يركز على الحفاظ على تدفق الريشة المساريقية، ومنع التواء الساق، وضمان خياطة محكمة الماء، وتأمين تثبيت القسطرة، وهي أمور ضرورية لنجاح الإجراءات وقابلية التكرار. أظهر التحقق التمثيلي أثناء العملية باستخدام التصوير الطيفي الفائق (HSI) في ثمانية فئران غير ناجية الحفاظ على أكسجة الأنسجة وتروية جزء الأمعاء بعد خطوات العمليات الرئيسية، مما دعم بقاء الأنسجة في نهاية هذا الإجراء. لذا، يوفر هذا البروتوكول نهجا تجريبيا موحدا للتنفيذ الجراحي القابل للتكرار لعملية تصحيح المسيرات المعوية لدى الفئران. تشمل التطبيقات المحتملة لاحقا للنموذج دراسة التغيرات الأيضية والإلكتروليتات، وقابلية العدوى، وإنتاج المخاط، وتحفيز خلل التنسج أو الأورام الخبيثة، ولا تزال هذه الأبحاث قيد الحياة في المستقبل.

المقدمة

تعد وظيفة المثانة البولية الفسيولوجية ضرورية للحفاظ على جودة حياة عالية، حيث أن تخزين البول الفعال والتفريغ ضروريان للتحكم في البول، والرفاهية الاجتماعية، والصحة العامة. الاضطرابات التي تؤثر على وظيفة المثانة قد تؤدي إلى أمراض كبيرة، بما في ذلك سلس البول، والالتهابات المتكررة، وضعف الكلى، وتأثير سلبي عميق على الحياة اليومية.

يمكن أن تسبب كل من أمراض المثانة الخلقية والمكتسبة ضعفا وظيفيا كبيرا، وغالبا ما تتطلب تدخل جراحي عندما تثبت العلاجات المحافظة والدوائية عدم كفايتها. غالبا ما ترتبط الشذوذات الخلقية مثل الصمامات الخلفية الإحليل¹، واستثمور المثانة والتخنق، والتهاب الإبساديا ^2,3 بالمثانات منخفضة السعة وضعيفة التوافق، مما يزيد من خطر تدهور الجهاز البولي العلوي. وبالمثل، غالبا ما تؤدي الحالات العصبية، بما في ذلك خلل التنسج النخاعي⁴، والتصلب المتعدد⁵، وإصابة الحبل الشوكي⁶، إلى خلل في وظيفة المثانة العصبية، مما يعيق آليات التخزين والتفريغ. بالإضافة إلى ذلك، قد تؤدي الأسباب المعدية مثل السل⁷ والبلهارس⁸ إلى تليف جدار المثانة، مما يقلل من الامتثال ويؤدي إلى مضاعفات ثانوية. في الحالات المقاومة للعلاج، يعد تكبير المثانة استراتيجية فعالة لتحسين سعة التخزين، وتقليل الضغط داخل الحويصل، والحفاظ على وظيفة الكلى، مما يعزز جودة الحياة ويخفف من المضاعفات طويلة الأمد.

وفقا لإرشادات الجمعية الأمريكية لجراحة المسالك البولية (AUA) بشأن فرط نشاط المثانة، ينصح بتكبير المثانة (تصحيح المثانة المعوي) للمرضى الذين يعانون من ضعف في قدرة المثانة، أو ضعف الامتثال، أو فرط نشاط المثانة المقاوم للإدارة المحافظة⁹. وصف في الأصل بواسطة تيزوني وفوجي في عام 1888 باستخدام نموذج كلبي^{رقم 10}، ثم تم تكييفه لاحقا للتطبيق البشري بواسطة فون ميكوليتش في عام 1899-11، ولا يزال الإجراء الجراحي المعوي هو النهج الجراحي القياسي لتقليل ضغوط تخزين البول والتخفيف من مخاطر تلف الكلى وسلس البول المرتبط باضطرابات مختلفة في وظائف المثانة، بما في ذلك المثانة العصبية، وبثرة المثانة، وصمامات الإحليل الخلفية ^{12. 13}.

تتضمن تقنية تقليد المثانة المصفوية التقليدية تثنيتين في المستوى الإكليجي أو السهمي حتى العضلة المثلثية، تليها إدخال قطعة أمعاء منزوعة الأنبوب¹². اللفائفي هو الجزء الأكثر استخداما في الأمعاء، وعادة ما يحصد على بعد 25-40 سم قريب من صمام اللفائفي¹². عندما يكون اللفائفي غير مناسب، يعمل القولون السينيي كبديل^{مفضل لل12}.

بينما يوفر هذا الإجراء متانة طويلة الأمد^{ومعدلات رضا} عالية للمرضى، فإن إدخال أنسجة الجهاز الهضمي إلى المسالك البولية يحمل عيوبا ملحوظة، بما في ذلك اضطرابات الأيض، وتكون حصوات المثانة، وزيادة خطر الإصابة بالسرطانات 15,16,17.

نظرا لهذه المضاعفات المحتملة، هناك حاجة ملحة لدراسات محكمة لاستكشاف الآليات الأساسية، وتحسين تقنيات الجراحة، وتقييم مواد التعزيز البديلة. يوفر نموذج القوارض بيئة منظمة وقابلة للتكرار للتحقيق في هذه الجوانب، مما يمكن الباحثين من تحليل التكيفات الأيضية بعد التعزيز، بما في ذلك توازن الحمض والقاعدة واضطرابات الإلكتروليتات. علاوة على ذلك، يسمح بفحص إعادة تشكيل أنسجة المثانة مع مرور الوقت، مما يوفر فهما حول التليف، وتجديد الالتهاب البولي، ودمج الأجزاء المعززة. بالإضافة إلى ذلك، وبالنظر إلى زيادة خطر الإصابة بالسرطان المرتبط بتسرطن المسيرات المعوية، يوفر نموذج القوارض فرصة لدراسة التغيرات النسيجة المرضية مع مرور الوقت وتحديد العلامات المبكرة لتكون السرطان. ومن المهم أن مثل هذا النموذج يسهل أيضا البحث في تطبيقات هندسة المواد الحيوية والأنسجة، مما قد يمهد الطريق لمواد تعزيز بديلة ذات مخاطر أقل مسرطنة ومناوعة¹².

على الرغم من الإبلاغ عن نماذج تجريبية لتكبير المثانة في القوارض وأنواع أخرى، إلا أن هناك بروتوكول موحدة وموحى خطوة بخطوة للمقارنة مباشرة لعملية تصحيح المثانة الأمعوية اللفائفية في الفئران عبر قطع البطن في منتصف الخط المتوسط. أظهرت دراسات سابقة للفئران إجراء تكبير المثانة الكلاسيكي كنموذج تجريبي ووصفت متغيرات مثل جراحة المسيلوث العضلية وجراحة المسيلوث المعوية بمساعدة الليزر 18,19,20. تناولت الأعمال اللاحقة التغيرات النسيجية والبكتيرية طويلة الأمد، وتطور الأورام، وفسيولوجيا النقل، والنتائج الوظيفية، بينما تم استكشاف تعديلات إعادة بناء إضافية مثل زراعة المثانة الجزئية والاستبدال الضوئي الديناميكي للمخاط المخاطي في الأمعاء بالمسالك البولية 21,22,23,24,25,26,27. وعند جمع هذه الدراسات مجتمعة، تظهر أن نماذج تعزيز الفئران موجودة، لكنها متجانسة في نطاقها وتركز بشكل رئيسي على الجدوى، والتبعات البيولوجية، وعلم وظائف الأعضاء، أو التعديلات الترميمية المحددة 18,19,20,21,22,23,24,25,26,27. لذلك، فإن هدف هذا العمل هو تقديم دليل إجرائي مفصل لإجراء جراحة تصحيح المسيرات المعوية الموحد عبر استئصال البطن في منتصف الخط في الفئران. تم تأسيس البروتوكول في بيئة غير مخصصة للبقاء. التطبيقات التي تتطلب مراقبة طويلة الأمد ممكنة، لكنها قد تتطلب تكييف هذا البروتوكول ليشمل بيئة دراسة البقاء مع تعافي بعد العملية ومتابعة طولية. قد تشمل هذه تقييم النتائج الوظيفية، آليات الفشل بعد العملية، تجديد الأنسجة مع مرور الوقت، أو دمج هندسة الأنسجة.

تم تصميم النموذج الحالي لإعادة إنتاج المبادئ التقنية الأساسية لجراحة المصفاء المصفوية السريرية في بيئة فئران مضبوطة مع بقائها ممكنة للتنفيذ التجريبي الموحد. تم اختيار رقعة لباقية مفككة أنبوبية لأن إزالة الأنابيب تقلل من انقباض الأمعاء الداخلي وتعكس بشكل أفضل مبدأ إعادة البناء المستخدم عادة في التكبير السريري. يسمح استخدام قطعة ذات بديكلة وعائية للحفاظ على التروية المسروعية ويتيح تقييما مباشرا لصلاحية الأنسجة أثناء وبعد تحضير الطعم. تم دمج تحويل البول الخارجي عبر أنبوب القنية فولي لتوفير تصريف متحكم فيه للمثانة أثناء العملية ولتسهيل التقييم القياسي أثناء العملية للجزء المعاد بناؤه.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية الموضحة في هذا المستند ضمن منشآت معتمدة وحصلت على موافقة لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) التابعة لمجلس بادن-فورتمبيرغ الإقليمي في كارلسروه، ألمانيا (35-9185.81/G-62/23). تم التعامل مع الحيوانات التجريبية وفقا لبروتوكولات مؤسسية ووفقا للتشريعات الألمانية التي تحكم رفاهية الحيوان، بالإضافة إلى الالتزام بالإرشادات التي وضعتها مجلس المجتمع الأوروبي (2010/63/EU) وإرشادات ARRIVE. تم استخدام ذكور فئران سبراج-داولي (عدد = 8)، تتراوح أعمارهم بين 8 و12 أسبوعا ووزنهم 400 جرام، تم الحصول عليهم من مختبرات جانفيير، بعد فترة تأقلم مدتها أسبوع واحد.

1. التخدير وتخفيف الألم

1. تحفز التخدير بوضع الحيوان في غرفة تحفيز واستخدام إيزوفلوران بنسبة 4٪ فول مخفف بنسبة أكسجين 100٪ بمعدل تدفق 5 لتر/دقيقة.
2. للتخدير الانفصامي، المسكن، والتخدير، أعط حقنة تحت الجلد بجرعة 100 ملغ/كغ كيتامين (محلول 10٪؛ تعادل 0.35 مل لوزن 400 جرام من وزن الجسم) و4 ملغ/كغ زيلازين (تخفيف 1:10 من محلول 2٪؛ ما يعادل 0.75 مل ل400 جم)^{28، 29، 30، 31}عند فقدان رد فعل التقويم. أعط جميع مواد المخدر والمسكنات على أساس ملغ/كجم ووزن الجسم.
   ملاحظة: أي حجم حقن مذكور هو أمثلة تقريبية لفئران بوزن جسم 400 جرام ويجب حسابها بشكل فردي لكل حيوان.
3. تأكد من عمق المسكن عن طريق عدم وجود استجابة ضغط قوية على إصبع القدم باستخدام الملقط وضع مرهم القرنية لمنع جفاف القرنية.
4. تحقيق مسكنات إضافية من خلال حقن تحت الجلد بجرعة 5 ملغ/كغ من الكاربروفين (تخفيف بنسبة 1:10 بمحلول 5٪؛ ما يعادل 0.35 مل ل400 جم).
5. حافظ على التخدير باستخدام الإيزوفلوران التكميلي عبر قناع حديثي الولادة حسب الحاجة طوال فترة الجراحة.
6. قم بإدارة درجة الحرارة أثناء العملية بوضع الحيوان على وسادة تسخين مضبوطة على 40 درجة مئوية. بالإضافة إلى ذلك، ضع مسبار درجة حرارة المستقيم، لكنه ليس إلزاميا.
7. توفير دعم السوائل حول العملية وبعدها عن طريق الحقن تحت الجلد بمحلول ملحي متساوي التوتر بدرجة حرارة 37 درجة مئوية بمعدل 25 مل/كجم في الساعة (ما يعادل 10 مل ل400 جرام) مقسمة إلى حقن كل 20 دقيقة. يجب أن يشمل ذلك حقنة نهائية بعد إغلاق البطن، حسب التخدير المتبقي المتوقع الذي عادة ما يستغرق 30 دقيقة.

2. موقع التشغيل وتحضير الأدوات

1. جهز طاولة التنظيف باستخدام الأدوات والمواد، بما في ذلك:
   ملقط تحضير غير رضحية
   مشابك التثبيت السطحية
   مقص التحضير
   خيط أحادي الذراعين غير قابل للامتصاص 6-0
   خيوط متعددة الخيوط سريعة الامتصاص بذراع واحدة 4-0
   قسطرة قياس 20 كقسطرة فولي مرتجلة
   مسحات قطن مرطبة
   مسحات الشاش
   محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر
2. ركب الحيوان على جهاز التعرض الجراحي للقوارض كما هو موضح في المنشورات السابقة^30,31. احلق منطقة الوصول البطني وتعقيمها بإجراء مسحات مطهرة ثلاثية بالتناوب باستخدام 70٪ إيثانول وبوفيدون-يود أو مسحات مطهرة تعتمد على الكلورهيكسيدين، تعمل في دوائر متحدة المركز من موقع الشق إلى الخارج. كرر ذلك ثلاث مرات.
3. غط الحيوان بستائر معقمة، واترك المجال الجراحي مكشوفا فقط.

3. الوصول الجراحي عبر فتح البطن في منتصف الخط

1. قم بإجراء شق بطني متوسط بطول حوالي 5 سم باستخدام مقص دقيق وشق الخط الأعلى طوليا في منتصف الخط للوصول إلى التجويف البريتوني.
2. استخدم خطاطيف تحضير وكمادات رطبة لسحب جدار البطن وكشف تجويف الصفاق.

4. تحديد وتحضير الأمعاء الدقيقة والمثانة البولية (الشكل 1)

1. حدد الأمعاء الدقيقة وحرك حلقة بلطف باستخدام ملقط تحضير غير مسبب للإصابة ومسحات قطنية رطبة (الشكل 1A.1).
2. قم بتقريب حلقة الأمعاء الدقيقة من المثانة لتحديد الموقع المناسب
3. قطعة من الأمعاء الدقيقة بطول حوالي 12 مم أثناء التكبير (الشكل 1A.2). يجب أن تكون هذه أول حلقة أمعاء مناسبة ميكانيكيا لا تقل عن 2 سم قريبة من الوصلة اللفائفي الليكوسي.
4. تحريك المثانة البولية عن طريق تشريح الأنسجة الضامة المحيطة باستخدام مقص التحضير (الشكل 1B).
5. ضع غرز التثبيت في مواقع الساعة 3، 6، 9، و12 على جدار المثانة باستخدام غرز أحادية الذراع غير قابلة للامتصاص 4-0 (الشكل 1C.1–1C.5).
6. أمسك قبة المثانة باستخدام ملقط غير مصدح وخلق عيبا عرضيا تقريبا بحجم 4 مم بين الغرز باستخدام مقص تشريح (الشكل 1D.1–1D.2).
7. استبدل الغرز الأربع لتتعلق بالحافة المقطوعة: اسحب كل غرزة بشكل متسلسل. غرزة واحدة في كل مرة، توجه الإبرة حول حافة الشق، خذ عضة من الجانب المضيء مباشرة عند الحافة، ثم اخرج من الطبقة السيلوعضلية المجاورة لتدوير الحافة والسحب وكشف الحافة (الشكل 1E.1–1E.6).

5. وضع وتثبيت أنبوب القنية فولي لتحويل البول الخارجي (الشكل 1)

1. أدخل القنية الوريدية (G20) عبر فتحة المثانة وتقدمها من الجانب داخل اللومين عبر جدار البطن إلى الخارج (الشكل 1F.1–1F.3).
2. إزالة القنية المعدنية من الأنبوب أثناء تثبيت أنبوب القنية باستخدام ملقط كقسطرة فولي مرتجلة (الشكل 1F.4–1F.5).
3. لتثبيت أنبوب القنية فولي على الجلد، مرر خيط أحادي غير قابل للامتزاز 4-0 عبر تجويف الأنبوب وثبته بهامش أمان كاف من الفتحة الخارجية لتقليل خطر الانزلاقات لاحقا (الشكل 1G.1–1G.6).
4. غسل أنبوب القنول فولي بمحلول ملحي لتأكيد الاتزانية، باستخدام أنبوب قناة وريدية ثانية أكبر بمقاس واحد (مثلا G18) من القناة الأولى (الشكل 1G.1–1G.9).
5. قم بخياطة أنبوب القنية فولي داخل الحاوية على جدار المثانة باستخدام خيط متعدد الخيوط سريع الامتصاص 4-0، مع الحفاظ على هامش أمان من محور أنبوب القنية لتقليل خطر الانزلاقات العرضية (الشكل 1H.1–1H.4).
6. أمسك محور أنبوب القنية باستخدام الملقط وفصله عن الأنبوب باستخدام المقص (الشكل 1H.5–1H.7).
7. ضع أنبوب القنية فولي داخل المثانة (الشكل 1H.8–1H.9).

الشكل 1: تحضير الأمعاء الدقيقة والمثانة مع وضع أنبوب قنوعة تحويل بول خارجي فولي. (أ) تحديد وتقريب الأمعاء الدقيقة والمثانة (أ.1–أ.2). (ب) تحريك المثانة عن طريق تشريح الصفاق (B.1–B.4). (ج) وضع غرز التثبيت عند قبة المثانة (C.1–C.5). (د) تشريح جدار المثانة (فتحة المثانة) (D.1–D.2). (ه) استبدال غرز التثبيت (E.1–E.6). (و) وضع القنية لتحويل البول الخارجي عبر عملية فتح المثانة (F.1–F.5). (G) تثبيت جزء أنبوب القنية الخارجية عند جدار البطن (G.1–G.9). (ح) تثبيت ووضع نهاية أنبوب القنية داخل الحويصلة (H.1–H.9). (1) رسم تخطيطي يلخص التحضير الموصوف ووضع أنبوب القنية كفولي. الخط المنقط السميك يصور الأمعاء الدقيقة. الخط المنقط الرفيع يصور المثانة. المربعات السوداء تصور قسم الصورة المكبر في الصورة التالية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

6. عزل جزء الأمعاء الدقيقة (الشكل 2)

1. ضع حلقة الأمعاء الدقيقة على مسحة شاش معقمة، وقيم حركتها نحو المثانة البولية، واختر قطعة مناسبة بطول حوالي 12 مم (الشكل 2A.1–2A.4).
2. اقطع الجزء المختار من الأمعاء المتبقية مع الحفاظ على إمداد الدم المسارقيقي والحفاظ على التوجيه الصحيح لمنع التواء لاحق للبيديكلة الوعائية (الشكل 2B.1–1B.4).
3. اخرج بلطف من بقايا الإضاءة المتبقية من كلا طرفي الأمعاء المقطوعة باستخدام قطعة قطنية (الشكل 2C.1–2C.6).
4. انعكس كلا الطرفين المتجاورين من حلقة الأمعاء الدقيقة للأعلى بحيث يبقى الجزء المختار فقط على مسحة الشاش (الشكل 2D–2E).

الشكل 2: تحديد وعزل جزء من الأمعاء الصغيرة لزيادة المثانة. (أ) تعبئة وتحديد جزء من الأمعاء الصغيرة مناسب لتكبير المثانة (A.1–A.4). (ب) قطع قطعة الأمعاء الصغيرة المختارة من الحلقة المعوية المتبقية (B.1–B.4). (ج) إخلاء المحتويات الضوئية المتبقية (C.1–C.4). (د) فصل وتحديد موضع نهايات الفم والحلبة الفمية المتبقية من حلقة الأمعاء الدقيقة. (ه) قطعة معزولة من الأمعاء الدقيقة معدة للزيادة اللاحقة. (و) رسم تخطيطي يلخص اختيار المقاطع وعزله. الخط المنقط السميك يصور الجزء المعزول من الأمعاء الصغيرة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

7. تحضير جزء الأمعاء وتكبير المثانة (الشكل 3)

1. افتح الجزء المعزول من الأمعاء على طول الحافة العضلية باستخدام المقص، مما يخلق بقعة أنبوبية بطول حوالي 12 مم × 8 مم (الشكل 3A.1–3A.3).
2. قم بإزالة الحواف الزاوية الجديدة للطعم (الشكل 3B.1–3B.3).
3. تابع عملية التشريح لجزء الأمعاء الدقيقة باستخدام خيط أحادي الذراعين 6-0. عند وضع الساعة 12، مرر الإبرة عبر جدار المثانة من خارج الضوء إلى الجانب داخل الضوئي (الشكل 3C.1–3C.2).
4. مرر الإبرة عبر الزاوية اليمنى السفلية من جزء الأمعاء الدقيقة من الجانب داخل الضوء إلى الجانب خارج الضوء. تأكد من سحب الغرز ذو الذراعين إلى نقطة المنتصف تقريبا، حيث يحدد ذلك نقطة التثبيت العليا (الشكل 3C.3–3C.4).
5. شد الغرز لتقريب طعم الأمعاء إلى المثانة، مما يؤدي إلى دوران حوالي 45° عكس عقارب الساعة للقطعة. اربط العقدة على الجانب خارج الضوء (الشكل 3D.1–3D.2) ومرر الإبرة الثانية حول المسياريتر في قطعة الأمعاء لتمكين خياطة محيطية للطعم من كلا الجانبين (الشكل 3E.1).
6. ابدأ التشريح المحيطي لرقعة تكبير المثانة: قم بخياطة قطعة الأمعاء بشكل متسلسل في عيب المثانة باستخدام عضة من الخارج إلى الداخل عند حافة المثانة، تليها عضة من الداخل إلى الخارج عبر قطعة الأمعاء، ثم استمر في الغرزة التالية.
7. أطلق غرز التثبيت بشكل متسلسل (الشكل 3E.1–3E.15). استخدم عضات أكبر قليلا لبقعة الأمعاء الدقيقة مقارنة بالمثانة؛ ومع ذلك، من المفترض أن يكون هناك طول أكبر بكثير لتغطيته على الرقعة، حتى يبقى طول الأمعاء الصغير الزائد غير المخياط.
8. بعد الانتهاء من الإغلاق المحيطي لعيب المثانة، اربط طرف أحد الخياطة. باستخدام الغرز المتبقي، أغلق الجزء الحر المتبقي من قطعة الأمعاء بطريقة مخروطية ("تشبه القبعة المدببة") واربط الغرز (الشكل 3F.1–3F.6).
9. أعد المثانة إلى وضعها التشريحي وأعد وضع الأمعاء، لضمان عدم التواء الأمعاء (الشكل 3G.1–3G.2).

الشكل 3: بناء بقعة الأمعاء الدقيقة وتركيب الأنفاس المحيطي للمثانة. (أ) تشريح وتحضير قطعة الأمعاء الدقيقة (تحضير الطعم) (أ.1–أ.3). (ب) استئصال حواف الزوايا للطعم (B.1–B.3). (ج) بدء التشريح بوضع غرزة التثبيت بين الطعم وفتحة المثانة (C.1–C.4). (د) تثبيت نقطة التثبيت لمحاذاة حواف الطعم وفتحة المثانة (D.1–D.2). (ه) التشريح المحيطي لبقعة تكبير المثانة إلى جدار المثانة (E.1–E.15). (F) إغلاق نسيج جزء الأمعاء الصغير المتبقي في تكوين مخروطي ذو غطاء مدبب (F.1–F.6). (G) إعادة تموضع الأعضاء إلى وضعها التشريحي (G.1–G.2). (ح) رسم تخطيطي يلخص تحضير الطعم وتشريح تكبير المثانة. الخط المنقط السميك يصور جزء الأمعاء الدقيقة. الخط المنقط الرفيع يصور فتحة جدار المثانة. السهم الأبيض يصور الإبرة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

8. التشريح الشامل للأمعاء الدقيقة (الشكل 4)

1. استخدم غرزة أحادية الخيط ذات الذراعين المزدوجة غير القابلة للامتصاص 6-0 مقطوعة إلى نصفين لعلاج التشريح. مرر الإبرة عبر الحافة الأنتسميكترية لكلا طرفي الأمعاء. لا تشد العقدة بعد، بل استخدم تقنية المظلة بوضع مشبك على قطعة الغرز بين أطراف الأمعاء للحفاظ على الرؤية (الشكل 4A.3–4A.6).
2. ضع خياطة عبر الحافة الميسارية لكلا طرفي الأمعاء وثبت التثبيت بطريقة مشابهة (الشكل 4A.7–4A.10).
3. ضع غرزتين عبر الجدار الأمامي لكلا طرفي الأمعاء الدقيقة لتسهيل الإغلاق لاحقا، وثبت أطراف الغرز بمشابك (الشكل 4B.1–4B.4).
4. عكس كلا طرفي الأمعاء للأعلى لكشف جدار الأمعاء الصغير الخلفي. مماثل للجدار الأمامي، ضع غرزتين عبر الجدار الخلفي وثبت أطراف الغرز بمشابك (الشكل 4C.1–4C.4).
5. بعد وضع جميع الغرز، اربط جميع الغرز الست بشكل متسلسل (الشكل 4D.1–4D.6).
6. أغلق العيب المسرقي ب 2–3 غرز 4-0 قابلة للامتصاص السريع المنقطع لمنع الانزلاق اللاحق (الشكل 4F.1–4F.8).

الشكل 4: التشريح من الطرف إلى الطرف وإغلاق العيب المسرقيقي. (أ) وضع غرز المحاذاة عند الحدود الأنتيمسترية والميزنتيرية (A.1–A.10). (ب) وضع غرزتين تقريبيتين للجدار الأمامي (B.1–B.4). (ج) تعريض الجدار الخلفي ووضع غرزتين تقريبيتين للجدار الخلفي (C.1–C.4). (د) ربط جميع الغرز الست بشكل متسلسل لإكمال التشريح (D.1–D.6). (ه) تضخم التشريح من طرف إلى طرف (E.1–E.2). (و) إغلاق العيب المسرقي بغرز متقطعة لمنع الانزلاق الداخلي (F.1–F.8). (G) رسم تخطيطي لمرض التقارب الشديد في الأمعاء الدقيقة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

9. الخطوات النهائية والاعتبارات

1. أغلق جدار البطن بطريقة متعددة الطبقات تحت ظروف معقمة، وفقا للبروتوكولات المنشورة^{سابقا 29,30,31}.
2. بالنسبة لإجراءات عدم البقاء أو الإنهاء المجدول بعد المتابعة، قم بقتل الحيوانات تحت التخدير العميق عن طريق استئصال القلب الحاد، أو خلع عنق الرحم، أو قطع الرأس بالمقصلة.
3. إذا لزم الأمر، قم باستئصال المثانة لإجراء تقييم تشريحي لاحق (مثل تقييم موقع تكبير المثانة وتشريح الأمعاء)، أو التحليلات الجزيئية الحيوية، أو التصوير النسيجي المرضي.
4. لهذا الغرض، يتم إزالة المثانة المعززة بشكل كامل عن طريق التشريح التدريجي الدقيق تحت الرؤية المباشرة، مع تحرير لطيف للالتصاقات المحيطة، وتحديد المثانة الأصلية، ورقعة الأمعاء المعززة، والحواف المنسجمية، ثم قطع المخرج البعيد للمثانة والوصلات المساريقية أو الأمعاء المجاورة حسب الحاجة، مع تجنب الضغط أو التشوه في العينة للحفاظ على بنية الأنسجة للتحليل اللاحق.

النتائج

لتأكيد صلاحية الأنسجة بعد هذا البروتوكول، تم تقييم أكسجة الأنسجة والتروية أثناء الإجراء في ثمانية فئران (الجدول 1). قبل جراحة الأمعاء المصفية، تم إجراء تصوير فائق طيفي (HSI) للأمعاء الدقيقة لرؤية تشبع الأكسجين في الأنسجة (StO₂) والتروية (NIR) (الشكل 5A.1). وباعتباره ضابطا سلبيا، تم تحفيز أقصى نقص في التروية عن طريق تثبيت الشريان الأبهر (الشكل 5A.2). تم تكرار HSI للمناطق النسيجية الممثلة بعد خطوات عملية رئيسية لت...

المناقشة

يوفر هذا العمل بروتوكولا جراحيا قابلا للتكرار لعملية تصحيح المسيرات المعوية في الفئران باستخدام عملية فتح البطن في منتصف الخط، والقنية خارج الجسم، ودمج جزء لحرفي منقوب. تتبع التقنية المبادئ التي وصفها تيزوني وفوجي لتكبير المثانة وتكيفها مع نموذج القوارض من خلال الجمع بين التخدير الدقيق، والتحضير المعقم، والقنوات الخارجية لتحويل البول، وجمع بقعة أمعاء دقيقة وعائية.

تم إجراء هذا البروتوكول والتحقق منه في بيئة غير قابلة للبقاء. ومع ذلك، فقد أنشأ منصة انتقالية لتك...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Atraumatic preparation forceps	Aesculap	FB395R	DE BAKEY ATRAUMATA atraumatic forceps, straight
Blunt overholt clamps	Aesculap	BJ012R	BABY-MIXTER preparation and ligature clamp, bent, 180 mm
Cannula tube foley for flusing and diversion	Mdk Mart	23-CA-CD-UL-CD	Cannula G18 (only the tube is used to flush the diversion cannula)
Carprofen	cp pharma	115	Carprofen 0,5% (5% with 50 mg/mL diluted 1:10) (Carprosol)
Cotton whool swabs	Amazon	ASIN: B0FPDB8ZGS	Non-sterile cotton whool swabs (autoclave for survival experiments)
Fast resorbable polyfilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SV-494	Single-armed polyfilament surgical suture from resorbable polyglactin with one P-13 needle
Fixation rods	legefirm	‎500343896	Tuning forks used as y-shaped metal fixation rods
Foley catheter	B. Braun	4242010-02	20 Gauge 50 mm Introcan Safety 2 Catheter as diversion cannula
Gauze swabs	Medrull	ASIN: B09164D1JG	Sterile gauze swabs
Heating pad	Royal Gardineer	IP67	Royal Gardineer Heating Pad Size S, 20 Watt
Hyperspectral imaging camera system	Diaspective Vision	TIVITA Tissue Halogen	HSI system for validation
Isoflurane	Piramal Critical Care	PZN / EAN 09714675 / 4150097146757	100% isoflurane 250 mL
Isoflurane vaporizer	UNO ROESTVASTSTAAL BV	180000002	Isoflurane vaporizer
Isotonic sodium chloride solution	B. Braun	ASIN: B007PZJOQ4	0,9% sodium chloride solution
Ketamine	cp pharma	1202	Ketamine 10% (100 mg/mL)
Metal cannula	BD (Beckton, Dickinson)	301300	BD Microlance 3 cannula 20 Gauge as preparation hooks
Neontal face mask	asia connection	ME03016-0	Neontal face mask size #0 for neonate
Non-resorbable monofilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SP-670	Single-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with one C-16 needle
Non-resorbable monofilament 6-0 sutures	COVIDIEN	VP-733-X	Double-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with two CV-22 needles
Ophthalmic ointment	Bayer Vital GmbH	1578681	5% dexpanthenol
Plastic perfusor tube	M. Schilling GmbH	S702NC150	Connecting tube COEX 150 cm
Preparation scissors	Aesculap	BC177R	JAMESON preparation scissors, bent, fine model, blunt/blunt, 150 mm (6")
Rat induction chamber	wpiinc	EZ-1785	Induction chamber for narcosis
Steel plate	Maschinenbau Feld GmbH	C010206	Galvanized sheet plate, 40 x 50 cm, thickness 4.0 mm
Xylazine	cp pharma	1206	Xylazine 0,2% (2% with 20 mg/mL diluted 1:10) (Xylavet)