شملت هذه الدراسة المواد النباتية فقط ولم تتضمن تجارب تشمل البشر أو الحيوانات؛ وبناءً على ذلك، لم تكن هناك حاجة للحصول على موافقة أخلاقية. الأدوات البحثية المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في جدول المواد.
1. موقع التجربة
أُجريت التجربة خلال موسمي 2023/24 و2024/25 في المزرعة التجريبية لمحطة بحوث البساتين بالقناصين، محافظة الإسماعيلية، مصر (30°53′ شمالاً، 31°56′ شرقاً)، لتقييم استجابة نباتات الشمر (F. vulgare Mill.) للتسميد العضوي وتطبيقات المحفزات الحيوية. وقد سُجلت الظروف المناخية خلال فترة النمو (نوفمبر–أبريل) بواسطة محطة أرصاد الإسماعيلية. وتراوحت متوسطات درجات الحرارة الدنيا والقصوى للهواء بين 12–18 °C و 22–30 °C على التوالي، بينما تراوحت الرطوبة النسبية بين 50%–65%. ولم يتم تسجيل أي ظواهر جوية متطرفة خلال فترات التجربة (الشكل 1).

الشكل 1: تمثيل تخطيطي للتصميم التجريبي بنظام القطع المنشطرة، يوضح مستويات شاي الكمبوست المخصصة للقطع الرئيسية ومعاملات المحفزات الحيوية الموزعة داخل القطع المنشطرة عبر ثلاث مكررات. تمثل Ct.1 و Ct.2 و Ct.3 قيم 360 و 480 و 600 لتر لكل هكتار (ha) كتطبيق على التربة، بينما يمثل الرش الورقي F.1 و F.2 و F.3 و F.4 و F.5 تركيز 2 cm3/L من الماء لكل من مستخلصات الشاهد، و Azolla، و Spirulina، و Nostoc، و Chlorella على التوالي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
2. المادة النباتية
تم الحصول على بذور الشمر من قسم بحوث النباتات الطبية والعطرية بمعهد بحوث البساتين التابع لمركز البحوث الزراعية في الدقي، الجيزة، مصر. زُرعت البذور في مشاتل خلال الأسبوع الأول من شهر نوفمبر، ثم جرى لاحقاً تخفيف الشتلات لتصبح نبتة واحدة لكل تلة بعد مرحلة التثبيت.
3. أخذ عينات التربة وتحليلها
قبل تحضير التربة، جُمعت عينات تربة مركبة (بعمق 0–30 cm)، وجُففت هوائيًا، ثم نُخلت باستخدام منخل بفتحات 2 mm، وحُللت خصائصها الفيزيائية والكيميائية وفقًا للبروتوكولات القياسية13,14 (الجدول 1).
| توزيع حجم الجسيمات (%) | الفئة القوامية | *المادة العضوية (%) |
| رمل خشن | رمل ناعم | غرين | طين | ساندي | 0.48 |
| 80.65 | 14.06 | 3.8 | 1.49 |
| الرقم الهيدروجيني (pH) | الموصلية الكهربائية dS/m | النسبة المئوية للنوع (SP %) | الكاتيونات (مكافئ/لتر) | الأنيونات (مكافئ/لتر) |
| Ca++ | Mg++ | الصوديوم+ | K+ | HCO3- | كلور- | ثاني أكسيد الكبريت4 |
| 8 | 0.79 | 28 | 4 | 2.68 | 1.79 | 0.61 | 1.4 | 4.38 | 2.98 |
| *O.M.(%): المادة العضوية |
الجدول 1: الخصائص الفيزيائية والكيميائية للتربة التجريبية. تشمل السمات توزيع حجم الجسيمات، والفئة القوامية، ومحتوى المادة العضوية، والـ pH، والموصلية الكهربائية، ونسبة التشبع، والكاتيونات والأنيونات الرئيسية.
4. المخطط التجريبي
اتبعت التجربة تصميم القطاعات العشوائية الكاملة المنشقة مع ثلاث مكررات. حيث تم تخصيص مستويات شاي الكومبوست للقطاعات الرئيسية، ومعاملات المحفزات الحيوية للقطاعات المنشقة (الشكل 2). بلغت مساحة كل قطعة 8.4 m2 واحتوت على 24 نباتاً مرتبة في ثلاثة صفوف (بطول 4 m)، مع ترك مسافة 70 cm بين الصفوف و 50 cm بين النباتات داخل الصف الواحد.
طُبقت الري بالتنقيط باستخدام منقطات توفر 4 L h⁻1 لكل تلة لمدة 1 h كل يومين. ولمنع التداخل بين المعاملات، تُرك خط واحد بين القطع دون زراعة ليكون منطقة عازلة.
تلقّت جميع القطع التجريبية 24 t ha⁻1 من السماد العضوي (compost) أثناء تحضير التربة قبل أسبوعين من الزراعة. طُبقت الأسمدة المعدنية بنسبة 50% من الجرعة الموصى بها (RD): 360 kg ha⁻1 من كبريتات الأمونيوم (20.6% N)، و240 kg ha⁻1 من سوبر فوسفات الكالسيوم (15.5% P₂O₅)، و120 kg ha⁻1 من كبريتات البوتاسيوم (48% K₂O). أضيفت أسمدة النيتروجين والبوتاسيوم على ثلاث جرعات متساوية بفواصل زمنية مدتها 15 يوماً، بينما أضيف سماد الفوسفور كجرعة أساسية واحدة. تم اتباع الممارسات الزراعية القياسية طوال فترة النمو.

الشكل 2: إنتاج الزيت لكل هكتار (kg ha⁻1) وزيادته النسبية مقارنة بمعاملة الشاهد (T1: Ct1 × F1) خلال الموسمين الأول (S1) والثاني (S2). يمثل Ct1 أدنى مستوى لشاي الكومبوست (360 L ha⁻1)، ويمثل F1 الشاهد غير المرشوش. تُعرف المعاملات كما يلي: T1 (Ct1 × F1)، وT2 (Ct1 × F2)، وT3 (Ct1 × F3)، وT4 (Ct1 × F4)، وT5 (Ct1 × F5)، وT6 (Ct2 × F1)، وT7 (Ct2 × F2)، وT8 (Ct2 × F3)، وT9 (Ct2 × F4)، وT10 (Ct2 × F5)، وT11 (Ct3 × F1)، وT12 (Ct3 × F2)، وT13 (Ct3 × F3)، وT14 (Ct3 × F4)، وT15 (Ct3 × F5). تمثل أشرطة الخطأ الأخطاء المعيارية للمتوسط (SEM). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
5. معالجات شاي السماد
تم استخلاص سماد نباتي ناضج هوائيًا في مياه عذبة لمدة 24–48 h. وكان شاي السماد الناتج يتميز بموصلية كهربائية تتراوح بين 1.2–1.6 dS m⁻1 وقيمة pH قاعدية قليلاً (7.5–8.0). تم تطبيق شاي السماد عن طريق الري بالتنقيط بمعدلات 360 أو 480 أو 600 L ha⁻1 على مدار فترة 16 أسبوعًا، بدأت بعد شهر واحد من الزراعة.
6. تحضير المحفز الحيوي وتطبيقه
تم تجانس الكتلة الحيوية الطازجة لكل من Azolla caroliniana وSpirulina platensis وNostoc muscorum وChlorella vulgaris في ماء مقطر بنسبة 1:10 (وزن/حجم)، ثم رُشحت وخُففت لتصل إلى تركيز نهائي قدره 2 cm3 L⁻1 (حوالي 1200 L ha⁻1). تم تحضير المستخلصات طازجة قبل الاستخدام، ورُشت على الأوراق ثلاث مرات خلال موسم النمو (بعد 30 و60 و90 يوماً من الزراعة) باستخدام رشاش يدوي حتى سيلان السائل.
7. البيانات المسجلة
معايير النمو الخضري
تم حصاد ست نباتات اختيرت عشوائياً من كل وحدة تجريبية بعد 65 يوماً من الزراعة. وقيس طول النبات (cm) من القاعدة إلى قمة الساق الرئيسية. كما سُجل الوزن الرطب الكلي للمجموع الخضري (g) والوزن الجاف (g)، حيث حُدد الوزن الجاف بعد تجفيف العينات في الفرن عند 70 °C لمدة 48 h حتى الوصول إلى وزن ثابت. وحُسب عدد الفروع لكل نبات كمتوسط عدد الفروع في النباتات التي تم أخذ عينات منها.
استخلاص الزيت العطري (EO)
تَم استخلاص الزيت العطري من 40 g من الثمار المجمعة باستخدام التقطير المائي لمدة 3 h، وفقاً للطريقة التي وصفها Miller15. تُرِك الزيت المستخلص دون تحريك لضمان الفصل التام16.
تقدير محتوى وإنتاجية الزيت الأساسي
حُسب محتوى الزيت العطري (% w/w) وفقاً لما يلي:

حيث:
WEO = وزن الزيت الأساسي المستخلص (g)
Wsample = الوزن الجاف لعينة النبات الخاضعة للتقطير المائي (g)
تَمَّ حساب إنتاج الزيت العطري لكل نبات على النحو التالي:

حيث أن:
DWplant = الوزن الجاف للعشبة بأكملها لكل نبات (g)
EO content = نسبة الزيت الأساسي على أساس الوزن الجاف (% w/w)
ملاحظة: افترضنا أن كثافة الزيت العطري تبلغ حوالي 1 g cm⁻3، مما يسمح بالتحويل من الغرامات إلى السنتيمترات المكعبة.
تم حساب إنتاج الزيت العطري لكل هكتار على النحو التالي:

حيث:
EO yieldplant - 1= إنتاج الزيت العطري لكل نبات (cm3)
Nplants = عدد النباتات لكل هكتار
1000 = معامل التحويل من cm3 إلى L
ملاحظة: استندت جميع حسابات إنتاجية الزيت إلى المادة الجافة لتجنب التباين المرتبط بمحتوى الرطوبة في النبات.
سمة الحصيلة
تم تسجيل عدد الخيم لكل نبات في مرحلة نضج الثمار عن طريق عد جميع الخيم في كل نبات.
8. التحليل الإحصائي
لكل صفة وموسم، تم اختبار ملاحظات مستوى المكررات من حيث التوزيع الطبيعي باستخدام اختبار شابيرو-ويلك (Shapiro–Wilk). وبما أنه لم يتم رصد انحرافات ذات دلالة إحصائية عن التوزيع الطبيعي (p > 0.05)، فقد تم تطبيق التحليل البارامتري. حُللت البيانات باستخدام تحليل التباين (ANOVA) لتصميم القطع المنشقة بواسطة برنامج Statistix 8.1 (Analytical Software, 2008)، وقورنت متوسطات المعاملات باستخدام اختبار أقل فرق معنوي (LSD)17.
أُجري تحليل المكونات الرئيسية (PCA) كأداة متعددة المتغيرات لتلخيص العلاقات بين السمات المقاسة. واستُخدمت القيم الذاتية (Eigenvalues) لتحديد المساهمة النسبية لكل مكون، كما استُخدم التصوير البياني ثنائي المخطط (biplot visualization) لمقارنة المعالجات والارتباطات بين السمات18.