تحضير موحد لعضلة الأرنب الملساء المعزولة في الاثني عشر لتقييم دوائي في المختبرية لنشاط الانقباض

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولا لتوحيد تحضير العضلة الملساء المعزولة في الاثني عشر للأرانب للتقييم الدوائي في المختبر ، باستخدام نظام تجارب العضلات الملساء بدرجة حرارة ثابتة أفقية لتسجيل بيانات النشاط الانقباضي في الوقت الحقيقي.

الملخص

يشكل النشاط المنسق الانقباضي للعضلة الملساء في الجهاز الهضمي الأساس الفسيولوجي للحفاظ على وظائف الهضم والامتصاص والنقل الطبيعية، ويرتبط خلل وظيفته ارتباطا وثيقا باضطرابات الحركة. تقنية تروية الأعضاء المعزولة تقضي على التداخلات المعقدة في الجسم الحي —مثل العوامل العصبية والغدد الصماء والهيموديناميكية—وتعد نموذجا كلاسيكيا للدراسات الدوائية. لهذا الغرض، تفصل هذه الدراسة بروتوكولا تدريجيا لتحضير العضلة الملساء المعزولة للأرنب في الاثني عشر. يبرز سير العمل الإجرائي الخطوات الحاسمة لتحضير الحلول، وقتل الأرنب، وإجراء عملية استئصال بطن منتصف البطن المعقم الدقيق لاستئصال الأنسجة السريع، وتعليق شرائط العضلات الملساء، ومعايرة المحولات لتسجيل التوتر في الوقت الحقيقي. استنادا إلى هذه المنصة التقنية، قمنا بالتحقق من صحة الطريقة من خلال تقييم تأثيرات سائل هوشيانغ تشنغتشي الفموي (HXZQ-OL) على الانقباضات التلقائية والانقباضات التيتانية الناتجة عن الأسيتيل كولين/كلوريد الباريوم. في الختام، يوفر هذا البروتوكول إطارا منهجيا قويا وقابلا للتكرار عاليا، يوفر منصة فحص في المختبر قابلة للتطبيق على نطاق واسع للتقييم الدوائي للعوامل العلاجية التي تستهدف حركة الجهاز الهضمي.

المقدمة

يعمل النشاط الانقباضي المنسق للعضلة الملساء في الجهاز الهضمي كأساس فسيولوجي للحفاظ على وظائف الهضم والامتصاص والنقل الطبيعية¹. يرتبط خلله ارتباطا وثيقا باضطرابات سريرية شائعة، بما في ذلك متلازمة القولون العصبي²، وعسر الهضم^{الوظيفي 3}، واضطرابات حركة الجهاز الهضمي بعد العملية⁴. توضيح الآليات الجزيئية والدوائية التي تنظم نشاط العضلات الملساء أمر بالغ الأهمية لتطوير علاجات جديدة للحركية أو مضادة للتشنجات. في هذا المجال البحثي، تعد تقنية تروية الأعضاء المعزولة نموذجا كلاسيكيا. يقدم قيمة عملية من خلال القضاء على التداخلات المعقدة في الجسم الحي مثل العوامل العصبية والغدد الصماء والديناميكية الدموية، مما يتيح تقييما مباشرا ودقيقا لتأثيرات الأدوية أو المواد الفعالة على توتر العضلات الملساء ^5,6.

يعد وضع بروتوكولات مستقرة وموثوقة لتحضير الأنسجة في المختبر وتسجيل البيانات أمرا ضروريا للحصول على نتائج قابلة للتكرار وعالية الجودة. تتطلب طرق التجارب الحالية لعضلات الأمعاء في المختبرات المزيد من التحسين والتوحيد في عدة مجالات: الإدارة الموحدة للحيوانات التجريبية، التقنيات الجراحية الدقيقة لجمع الأنسجة، التحكم البيئي المتسق في أنظمة التروية، وجمع البيانات الآلي مع التحليل الموحد. على سبيل المثال، درجة حرارة سائل التروية ومستويات الرقم الهيدروجيني، والأضرار الميكانيكية أثناء جمع الأنسجة، وإعدادات التحميل المسبق للأنسجة يمكن أن تؤثر بشكل كبير على بقاء الأنسجة وتسبب أخطاء تجريبية. هذه العوامل تؤثر على موثوقية النتائج وتعيق قابلية المقارنة بين الدراسات المختلفة^7،8.

لذلك، تهدف هذه الدراسة إلى وضع وتطوير بروتوكول موحد لتحضير عينات العضلات الملساء المعزولة في الاثني عشر من الأرانب وأداء تسجيل التوتر في الوقت الحقيقي. يصف هذا البروتوكول العملية بأكملها بشكل منهجي، بدءا من أخلاقيات ورفاهية الحيوانات التجريبية، وفتح البطن المعقم، وعزل قطع الأمعاء بدقة، إلى تحقيق التحكم البيئي، وإعدادات التحميل المسبق للتوتر الموحد، وجمع البيانات عالية الدقة باستخدام نظام تروية أفقي ثابت درجة حرارة متكامل ونظام استقطاب إشارات فسيولوجي متعدد القنوات. استنادا إلى هذه المنصة التقنية الموحدة، طبقنا أيضا طرق الجرعات التراكمية لتقييم تأثيرات سائل هوشيانغ تشنغتشي الفموي (HXZQ-OL) بشكل كموي، مع تلبية معايير الجودة لدواء الصين (طبعة 2025^{)، على} الانقباضات التلقائية والانقباضات التيتانية الناتجة عن كلوريد الأستيل كولين والباريوم في العضلات الملساء المعزولة في الاثني عشر. سائل هوشيانغ تشنغتشي الفموي (HXZQ-OL)، وهو شكل جرعة فموية من صيغة هووxiang تشنغتشي التقليدية للطب الصيني التقليدي، يستخدم بشكل شائع في الصين لاضطرابات الجهاز الهضمي، مما يوفر مبررا لتقييم تأثيراته المباشرة على عضلات الأمعاء الملساء المعزولة. لا توفر هذه الدراسة فقط أدلة دوائية تجريبية مباشرة توضح التأثيرات التنظيمية للعضلات الملساء في الجهاز الهضمي ل HXZQ-OL، بل يعمل البروتوكول التجريبي أيضا كنموذج منهجي موحد وقابل للتكرار للفحص الدوائي ودراسات الأنسجة المختبرية لعضلات الجهاز الهضمي الملساء.

البروتوكول

تم استخدام أرانب نيوزيلندية بيضاء بالغة سليمة من كلا الجنسين (تزن 2.0–2.5 كجم) في هذا العمل. تم إجراء جميع إجراءات التجارب على الحيوانات وفقا للإرشادات الخاصة برعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات الحيوانات المختبرية في جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة: [2026070]). تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات المستخدمة. يوضح مخطط سير العمل في الشكل 1.

1. تحضير المحلول

ملاحظة: يجب تحضير جميع المحاليل العاملة، بما في ذلك محلول تايرود، والأسيتيل كولين (ACh)، وكلوريد الباريوم، والأتروبين، والفيراباميل، طازجة قبل التجربة مباشرة.

1. جهز 1 لتر من محلول تايرود عن طريق إذابة 137 ملليمولار NaCl، 5.4 ملليمولار KCl، 1.8 ملليمولار CaCl₂، 0.4 ملليمولار NaH₂PO₄، 1.0 ملليمولار MgCl₂، 12 ملليمولار NaHCO₃، و5.6 ملليمولار D-جلوكوز. قبل الاستخدام، تشبع بخليط 95٪ O₂ / 5٪ CO₂ لمدة 15–30 دقيقة، مع تعديل الرقم الهيدروجيني إلى 7.3–7.4 (انظر جدول المواد).
2. حضر محلول مخزن بسعة 1 مللي ميل تيار متردد. خذ 20 ميكرولتر وأضف إلى 20 مل من محلول تايرود. اخلط جيدا للحصول على محلول ACh بقوة 1 ميكرومول.
3. حضر محلول مخزون بحجم 1 مليون من كلوريد الباريوم (BaCl₂). خذ 20 ميكرولتر وأضف إلى 20 مل من محلول تايرود. امزج جيدا للحصول على محلول 1 مللي مولار BaCl₂.
   ملاحظة: BaCl₂ سام للغاية ومزعج. عند التعامل، ارتد معدات الحماية الشخصية في غطاء بخار وتخلص من سائل النفايات وفقا للأنظمة.
4. حضر محلول مخزون كبريتات الأتروبين بسعة 10 ملليمتر. خذ 20 ميكرولتر وأضف إلى 20 مل من محلول تايرود. اخلط جيدا للحصول على محلول كبريتات أتروبين بقوة 10 ميكرومول.
5. حضر محلول هيدروكلوريد فيراباميل بحجم 1 ملليمتر. خذ 2 ميكرولتر وأضف إلى 20 مل من محلول تايرود. اخلط جيدا للحصول على محلول هيدروكلوريد فيراباميل بقوة 0.1 ميكرومول.
   ملاحظة: تم تحديد تركيزات المحاليل المحضرة من خلال الرجوع إلى الدراسات^{السابقة 6,10,11} وتم تحسينها أكثر من خلال تجاربنا الأولية لضمان أفضل ظروف تجريبية.

2. تحضير عينات العضلات الملساء في الاثني عشر في المختبر

1. قتل الأرانب
   1. ثبت الأرنب في جهاز تقييد الأرنب (الشكل 2A، B و3A). قم بتنفيذ القتل الرحيم عن طريق إعطاء جرعة زائدة من بنتوباربيتال الصوديوم (120 ملغ/كغ) عبر الوريد الأذني في الأرانب (الشكل 2C و الشكل 3B).
      ملاحظة: يجب تأكيد الوفاة الكاملة بالمعايير التالية: اتساع حدقة العين، غياب رد فعل الضوء في الحدقة، توقف التنفس وضربات القلب، وفقدان ردة فعل الأخمص.
2. تحضير وتعقيم موقع الجراحة
   1. ثبت الأرنب في وضعية الاستلقاء على الظهر على طاولة العمليات (الشكل 2D و الشكل 3C). باستخدام المقص الجراحي (الشكل 2E) أو ماكينة الحلاقة الكهربائية، قم بإزالة جميع شعر البطن بالكامل لكشف الجلد في المنطقة الجراحية المحددة (الشكل 3D).
   2. باستخدام ملقط الإسفنج (الشكل 2E)، أمسك كرة قطن مشبعة باليود (الشكل 2F,G). بدءا من مركز الشق الجراحي المخطط، ضع محلول المطهر بنمط دائري ومتحد-مركزي من الداخل إلى الخارج (الشكل 3E).
      ملاحظة: يجب أن تمتد منطقة التعقيم إلى ما بعد حواف الجرح لضمان تغطية كاملة لكامل جلد الحقل الجراحي. بعد التعقيم، انتظر على الأقل 3 دقائق حتى يجف المطهر بشكل طبيعي على سطح الجلد.
   3. ضع ستارة معقمة (الشكل 2H) فوق منطقة البطن المعقمة لكشف المجال الجراحي (الشكل 3F).
3. تحديد موقع وشق الشق البطني
   1. باستخدام مشرط (شفرة #23) (الشكل 2E)، قم بعمل شق طولي بطول 8 سم على طول منتصف البطن من أسفل النتوء الزيفويدي إلى أعلى العضلة التماثلية العانية.
   2. قم بتشريح الجلد والأنسجة تحت الجلد طبقة تلو الأخرى. باتباع الخط الألبي، قم بتشريح الغلاف الأمامي لعضلة المستقيم البطني، وألياف العضلات، والبريتون طبقة تلو الأخرى لدخول تجويف البطن (الشكل 3G).
   3. ملاحظة: أثناء الإجراء، تجنب تلف أعضاء البطن مع التأكد من الارتخاء لمنع تلوث الدم في مجال الجراحة وأعضاء البطن.
4. فصل الاثني عشر
   1. افتح تجويف البطن على طول الشق (الشكل 3H). اسحب الفصوص الكبدية بلطف باستخدام شاش ملحي رطب (الشكل 2I) لتعريض المعدة والاثني عشر بالكامل (الشكل 3I).
   2. اختر الجزء الأولي من الاثني عشر (الجزء البلبار أو الجزء العلوي النازل) الموجود على بعد 2–3 سم من البواب كموقع لجمع الأنسجة.
   3. ملاحظة: تجنب الجر المباشر أو تثبيت الجزء الداخلي من الأمعاء المستهدف كلما أمكن لتقليل الإصابة الميكانيكية. بدلا من ذلك، استخدم ملقط حاد للإمساك بالمساريق المجاور بلطف، أو استخدم مسحات قطنية مبللة بمحلول ملحي لتحريك النسيج ووضعه بدقة.
   4. باستخدام مقص العيون المعقم (الشكل 2E)، يتم استئصال جزء من أنبوب الاثني عشر بطول 1–2 سم (الشكل 2J) بسرعة ودقة.
   5. انقل فورا الجزء المعوي المستخرج إلى طبق زراعة (الشكل 2K) يحتوي على محلول تايرود المبرد مسبقا (4 درجات مئوية) مع تثبيه مستمر بغاز مختلط (95٪ O₂ / 5٪ CO₂).
5. تقليم وتنظيف وتخزين مؤقت لمقاطع الأمعاء
   1. باستخدام ملقط العيون (الشكل 2E)، قم بتقشير النسيج الدهني المحيط بلطف بجدار الأمعاء.
   2. باستخدام حقنة مملوءة بمحلول تايرود البارد (مزودة بإبرة ذات طرف غير حاد) (الشكل 2L)، حقن محلول الحقنة الشرجية بلطف في تجويف الأمعاء. قم بغسل داخل تجويف الأمعاء ببطء 2-3 مرات لتنظيف محتوياته تماما.
   3. ضع الأجزاء المعوية النظيفة في محلول تايرود البارد المؤكسج الطازج للتخزين المؤقت حتى التجارب القادمة.

3. بدء نظام العضلات الملساء التجريبي بدرجة حرارة ثابتة أفقية وحقن المحلول

1. أضف محلول تايرود إلى طبق التسخين المسبق لنظام تجارب العضلات الملساء ذات درجة الحرارة الثابتة الأفقية DSQG-1 (الشكل 4B؛ انظر جدول المواد).
2. شغل طاقة النظام، المس لوحة التشغيل لضبط درجة حرارة الحمام على 37 درجة مئوية، وابدأ التسخين المسبق (الشكل 4C).
3. اضغط زر التسرب ، وسيطلق النظام تلقائيا 20 مل من محلول تايرود في حوض الاستحمام.
4. اضغط زر التصريف لتصريف السائل إلى حاوية جمع النفايات بالكامل.
5. اضغط على زر الشطف ، وسيكمل النظام تلقائيا عملية تصريف المحتويات أولا ثم إعادة التعبئة بالسائل.
6. اضغط على زر التوقف لإنهاء جميع عمليات التسريب والتصريف والشطف الجارية فورا.
7. اضغط على زر النفخ لإدخال الغاز المختلط باستمرار (95٪ O₂ / 5٪ CO₂) إلى الحوض. اضبط معدل تدفق الغاز إلى المقياس 5 لضمان أكسجة الأنسجة التجريبية لاحقا.
   ملاحظة: يشير المقياس 5 إلى معدل تدفق غاز يبلغ 100 مل/دقيقة. قد تسبب معدلات تدفق الغاز المرتفعة بشكل مفرط زيادة في اضطراب المحلول، مما يؤثر على استقرار تسجيلات التوتر.

4. ربط نظام التسجيل والمعالجة الفسيولوجي متعدد القنوات بتشغيل البرمجيات

1. ربط كابل البيانات الخاص بنظام تجربة العضلات الملساء ذات درجة الحرارة الثابتة الأفقية بالقناة 1 من نظام التسجيل والمعالجة الفسيولوجي متعدد القنوات (الشكل 4D).
2. شغل مصدر الطاقة الخارجي لنظام التسجيل والمعالجة الفسيولوجي متعدد القنوات وشغل الكمبيوتر. انقر مرتين على أيقونة نظام التسجيل والمعالجة الفسيولوجي متعدد القنوات RM6240XC على سطح المكتب لتشغيل النظام البرمجي التجريبي (انظر جدول المواد).
3. في شريط القوائم، اختر تجربة | الهضم | الخصائص الفسيولوجية لعضلة الأمعاء الملساء لتحميل الوحدة التجريبية المقابلة.
4. اضبط المعايير التالية: وضع القناة على التوتر، تردد العينة إلى 400 هرتز، الحساسية إلى 1.5 جم، ثابت الزمن إلى التيار المستمر، وتردد المرشح إلى 30 هرتز.
5. انقر على زر البدء في الزاوية العلوية اليمنى من واجهة البرنامج لبدء استحواذ الإشارة وعرضها في الوقت الحقيقي. انقر على زر التسجيل لعرض راسم الإشارة في نفس الوقت وحفظ الإشارة المكتسبة على القرص الصلب في الوقت الحقيقي.
6. في شريط القوائم، اختر تجربة | الصفر السريع لضبط إشارة الشد على المستوى الأساسي.
   ملاحظة: إذا انحرفت الإشارة عن خط الأساس بأكثر من وحدة إحداثيات عمودية، قم بضبط نقطة الصفر يدويا لمحول التوتر باستخدام مفك براغي.
7. في شريط القوائم، اختر تجربة | طريقة عرض البيانات في الوقت الحقيقي | صفيحة عائمة. في مربع الحوار الذي يظهر، اختر القياس الطبيعي في الوقت الحقيقي - سريع لعرضبيانات التوتر في الوقت الحقيقي لعضلة الأمعاء في نافذة العائمة.

5. تثبيت التعليق والتوتر المسبق لشريط عضلة الاثني عشر

1. قم بضبط التباعد من الأمام إلى الخلف بين خطاطيف الأنسجة عن طريق تدوير مقبض المسمار الأفقي حسب طول شريط عضلة الاثني عشر، مع التأكد من تطابقه مع طول الشريط.
2. حافظ على الجزء الأمعائي في تكوينه الأسطواني الطبيعي، ومحاذاة خط الرؤية مع الفتحة المقطعية الدائرية للتجويف المعوي.
3. باستخدام ملقط العين، قم بسحب فتحة الأمعاء بلطف للحفاظ على الصدمة.
4. أدخل طرف خطاف النسيج بلطف في التفاف الأمعاء.
5. على بعد 2–3 مم من حافة الأمعاء، اخترق جدار الأمعاء العلوي أحادي الطبقة من الداخل إلى الخارج باستخدام طرف خطاف النسيج.
   ملاحظة: يجب أن يخترق الخطاف النسيلي طبقة العضلات لضمان تثبيت ثابت، مع تجنب الالتصاق السطحي فقط بطبقة السيروسال، لمنع القطع الميكانيكي والتمزق الميكانيكي لجدار الأمعاء بواسطة الخطاف عند تطبيق الحمل المسبق.
6. الجانب الآخر من جدار الأمعاء مطابق للجانب الأول. بعد تحديد النقطة الموازية المقابلة، اخترق فقط جدار الأمعاء ذو الطبقة الواحدة في تلك النقطة (الشكل 3L).
7. قم بتدوير مقبض البرغي الأفقي مرة أخرى لضبط تباعد الخطاف، مما يضمن بقاء شريط عضلة الاثني عشر مسترخيا طبيعيا.
8. قم بتطبيق التوتر تدريجيا عن طريق ضبط المعدلة الدقيقة أحادية البعد حتى يستقر متوسط شد شريط عضلة الاثني عشر عند 0.8 ± 0.1 جرام (الشكل 4A).
   ملاحظة: افحص بصريا طول الأمعاء بالكامل للتأكد من بقائها مستقيمة وأسطوانية، خالية من الالتواء أو الدوران أو الطيات الحلزونية. إذا لم يكن هذا هو الحال، قم بتقليل الشد فورا وأعد ضبط نقطة التثبيت في أحد الأطراف.
9. قبل بدء التجربة، قم بتسوية شريط عضلة الاثني عشر في غرفة التروية لمدة 60 دقيقة. خلال فترة التوازن هذه، استبدل محلول تايرود بمخزن جديد كل 15–20 دقيقة حتى يستقر إيقاع الانقباض التلقائي.
   ملاحظة: اعتبرت فترة التوازن التي تبلغ 60 دقيقة مكتملة فقط عندما أظهرت الأجزاء المعزولة نشاطا انقباضيا عفويا مستقرا لمدة لا تقل عن 15 دقيقة متتالية. تم تعريف المعايير الموضوعية للتثبيت كميا كما يلي: (1) انحراف توتر الاستراحة الأساسي بنسبة < ±5٪، (2) تباين في متوسط سعة الانقباض < ±10٪ عبر فترات متتالية مدتها 5 دقائق، و(3) تقلب التردد بمقدار < ± دورة واحدة/دقيقة.
10. سجل منحنى نشاط الانقباض التلقائي لشريط عضلة الاثني عشر كبيانات مرجعية أساسية للتجارب اللاحقة.

6. جمع البيانات التجريبية

1. للتجارب الجارية، اختر في شريط القائمة أدوات | عرض مقسم لإجراء تحليل إحصائي في الوقت الحقيقي على بيانات الموجة الملتقطة.
2. للحصول على ملفات البيانات المخزنة، انقر على زر الفتح في شريط الأدوات، اختر ملف بيانات محفوظ بامتداد .lsd، وقم بتحميل سجلات التجارب التاريخية.
3. انقر على أيقونة القياس في شريط الأدوات، اختر وضع المنطقة . حرك مؤشر الفأرة فوق منطقة الموجة، اضغط باستمرار على زر الفأرة الأيسر لاختيار أي نقطتين، وسيعرض النظام لوحة بيانات تعرض متوسط قيمة الشد داخل ذلك المقطع.
4. انقر على أيقونة القياس في شريط الأدوات، اختر وضع الدورة الشهرية . باستخدام زر الفأرة الأيسر، انقر على خمس قمم موجية متتالية مميزة (نقاط ذروة) على طول شكل الموجة. انقر بزر الفأرة الأيمن على الفأرة، وستحسب لوحة البيانات وتعرض تردد الانكماش (بالنبضة في الدقيقة) (الشكل التكميلي S1).

النتائج

يصف هذا البروتوكول التجريبي طريقة التحضير الموحدة لشرائط عضلات الاثني عشر المعزولة للأرانب وعملية تسجيل توترها الديناميكي وتغيرات التردد في الوقت الحقيقي باستخدام نظام تروية معزولة للعضو. وفقا لهذا البروتوكول، تم إضافة HXZQ-OL بشكل تسلسلي عبر الجرعات التراكمية في حمام محلول تايرود بسعة 20 مل، محققا تركيزات حجم نهائية تبلغ 10، 20، 30، 40، و50 ميكرولتر/مل في الحوض. بالإشارة إلى معايير الدواء الصيني (طبعة 2025)، تتوافق هذه التركيزات مع شرائح الأدوية الخام عند 6.6، 13.2، 19.8، 26.4، و33.0 ملغ/مل على التوالي. عند أعلى تركيز H...

المناقشة

تمثل تقنيات تروية الأعضاء المعزولة وتسجيل التوتر طرقا كلاسيكية لدراسة فسيولوجيا العضلات الملساء وعلم الأدوية. تحظى نتائجهم بأهمية كبيرة لتوضيح الآليات الفسيولوجية المرضية الكامنة وراء اضطرابات حركة الجهاز الهضمي، وأمراض الأوعية الدموية، وخلل وظائف الرحم 12,13,14,15. باستخدام نموذج الاثني عشر المعتمد خارج الجسم الحي، أظهرت هذه الدراسة أن HXZQ-OL يحفز اس...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
0.5-10 µL Pipette	Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd.	7010101004
10 µL Pipette tips	LABSELECT	T-001-10
10 mL Volumetric flask	Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.	B-043804
100 mL Volumetric flask	Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.	B-043807
100-1000 µL Pipette	Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd.	7010101014
1250 µL Pipette tips	LABSELECT	T-001-1250
20 mL Volumetric flask	Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.	B-010105
200 µL Pipette tips	LABSELECT	T-001-200
50 mL Conical centrifuge tube	LABSELECT	CT-002-50A
5-50 µL Pipette	Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd.	7010101006
Acetylcholine chloride	Supelco	PHR1546
All-in-One Lab Computer	Lenovo	R5-3500U
Atropine sulfate	Macklin	A822893
Barium chloride	Sigma-Aldrich	342920
Calcium chloride	Sigma-Aldrich	499609
D-Glucose	Sigma-Aldrich	G5767
Freezing point osmometer	Shanghai Precision Instruments Co., Ltd.	BS100
Horizontal Constant-Temperature Smooth Muscle Experiment System	Chengdu Instrument Factory	DSQG-1
Huoxiang Zhengqi Oral Liquid	Taiji Group Co., Ltd.	Z50020409
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	M8266
Multi-Channel Physiological Recording and Processing System	Chengdu Instrument Factory	RM6240XC
New Zealand White rabbits	Pizhou Dongfang Breeding Co., Ltd. (License No.: SCXK[Su]2022-0004)	either sex (weighing 2.0–2.5 kg)
pH meter	Shanghai Leici	PHS-25
Potassium chloride	Sigma-Aldrich	P5405
Povidone-iodine	H&H Medical Co., Ltd.	3180132
Precision balance (0.1 mg)	Sartorius	BCE64i
Saline solution	H&H Medical Co., Ltd.	100014438029
Sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	S6014
Sodium chloride	Sigma-Aldrich	S9888
Sodium dihydrogen phosphate	Supelco	1063700250
Sodium Pentobarbital	Sigma-Aldrich	P3761
Verapamil Hydrochloride	Macklin	V820460
Vortex mixer	Kylin-Bell	XW-80A