يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
في أسماك الزيبرا، ارتبط استخدام مادة الـ Mollugin بجرعات آمنة (≤200 µg/mL) بتحسن في تجديد الذيل، وصاحب ذلك تغيرات في تعبير الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج، والمؤشرات الالتهابية، ونشاط الإنزيمات المضادة للأكسدة، والمؤشرات المرتبطة بالبلعميات. وتشير هذه النتائج إلى أن الـ Mollugin قد يعمل على تعديل استجابة الإصابة الموضعية أثناء تجديد ذيل أسماك الزيبرا.
يعتبر المولوجين (Mollugin) مركباً طبيعياً من النافثوكينون، وقد تم الإبلاغ عن أنشطته المضادة للالتهابات والمضادة للأكسدة، ومع ذلك لا يزال دوره في تجديد الأنسجة غير مفهوم بشكل كامل. في هذه الدراسة، تم استخدام نموذج بتر ذيل سمكة الزيبرا لاستقصاء تأثيرات المولوجين على إصلاح الجروح والاستجابات المناعية واستجابات الأكسدة والاختزال المرتبطة بها. عولجت أجنة سمكة الزيبرا بالمولوجين بتركيزات 22 µg/mL و66 µg/mL و200 µg/mL بعد إصابة الذيل. ارتبط العلاج بالمولوجين بتحسن تعافي منطقة الذيل بطريقة تعتمد على الجرعة، وصاحب ذلك انخفاض في تعبير الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج وتثبيط الوسائط المحفزة للالتهاب، بما في ذلك IL-1β وIL-6 وTNF-α وTLR4 وNF-κB1. وبالتوازي مع ذلك، استعاد المولوجين أنشطة الإنزيمات المضادة للأكسدة سوبر أكسيد ديسميوتاز (superoxide dismutase) والكاتالاز (catalase). أظهر التصوير الفلوري في أسماك الزيبرا من سلالة Tg(mpeg1:GFP) تأثيراً للمولوجين على تراكم البلاعم يعتمد على الوقت، حيث لم يظهر انخفاض واضح عند 24 h، ولكن انخفضت المنطقة الموجبة للبلاعم عند 48 h في مجموعتي 66 و200 µg/mL مقارنة بمجموعة النموذج المصاب. وأظهر تحليل qRT-PCR علاوة على ذلك انخفاضاً في تعبير الوسم المرتبط بـ M1 وهو iNOS وزيادة في تعبير الوسم المرتبط بـ M2 وهو arginase-1. وبشكل جماعي، تشير هذه النتائج إلى أن المولوجين قد يدعم تجديد ذيل سمكة الزيبرا بالتزامن مع تغيرات في واسمات الالتهاب، والإجهاد التأكسدي، وموت الخلايا المبرمج، والواسمات المرتبطة بالبلاعم. هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتحديد الآليات الخلوية والجزيئية الكامنة.
يُعد تجدد الأنسجة عملية فسيولوجية بالغة الأهمية تقوم من خلالها الكائنات الحية بإصلاح التلف، وتتضمن تنظيمًا معقدًا لتكاثر الخلايا وتمايزها والحفاظ على التوازن الداخلي للبيئة المجهرية1. ومن بين نماذج الفقاريات، برزت أسماك الزيبرا كمنظومة محورية لدراسة آليات إصلاح الجروح نظرًا لقدرتها التجديدية المذهلة. وبوجه خاص، يشمل تجدد الزعنفة الذيلية في أسماك الزيبرا تنسيقًا زمانيًا ومكانيًا لأحداث بيولوجية متعددة، بما في ذلك تنظيم الالتهاب، وتوازن الاستجابة التأكسدية، والتحكم في الموت الخلوي المبرمج2,3. وفي السنوات الأخيرة، أصبحت الأنشطة الفارماكولوجية للمنتجات الطبيعية نقطة تركيز في أبحاث الطب التجديدي. وقد تمت دراسة مركبات النافتوكينون على نطاق واسع بشكل خاص بسبب تأثيراتها البيولوجية المتنوعة4. ويُعد المولوغين (Mollugin) مركب نافتوكينون مشتق من نباتات الفصيلة الروبيائية (Rubiaceae)، وقد أظهر أنشطة مضادة للالتهابات ومضادة للأكسدة ومنظمة لدورة الخلية في دراسات سابقة5,6. ومع ذلك، لا تزال آلية عمله في تجدد الأنسجة غير واضحة، كما أن دوره المحتمل في تعديل البيئة المجهرية الالتهابية واستقطاب الخلايا المناعية يستوجب إجراء استقصاء منهجي.
يتم تنشيط الالتهاب بسرعة بعد الإصابة، وهو يؤثر بشكل مباشر على ترميم الأنسجة. تعد إشارات الالتهاب المعتدلة ضرورية لتنقية الأنسجة النخرية وبدء برنامج التجدد، بينما يمكن أن يؤدي الشلال الالتهابي المفرط إلى تفاقم الإجهاد التأكسدي والتسبب في تليف الأنسجة7. تزداد السيتوكينات، بما في ذلك IL-1β وIL-6 وTNF-α، بشكل ملحوظ بعد الإصابة ويصاحب ذلك تنشيط مسار إشارات TLR4/NF-κB، مما يؤدي إلى تضخيم الاستجابات الالتهابية وإعادة تشكيل الأنسجة8,9. كما يرتفع مستوى جزيء الالتصاق بين الخلايا-1 (ICAM-1) وربيطة الكيموكين CC 2 (CCL-2) بعد الإصابة، ويرتبط ذلك بزيادة استقطاب الخلايا المتعادلة والبلعميات إلى الأنسجة المتضررة10. ومن الجدير بالذكر أن الاختلال التأكسدي يزيد من تفاقم تلف الأنسجة، ويشير انخفاض أنشطة سوبر أكسيد ديسميوتاز (SOD) والكاتالاز (CAT) إلى ضعف القدرة المضادة للأكسدة2,11.
تعمل الخلايا البلعمية كمنظمات رئيسية للبيئة الدقيقة الالتهابية، ويؤثر استقطابها الوظيفي بشكل كبير على عملية التجدد12. ترتبط الخلايا البلعمية من النوع M1 بالتعبير عن سينثيز أكسيد النيتريك المستحث (iNOS) والنشاط الالتهابي، بينما تعبر الخلايا البلعمية من النوع M2 عن أرجيناز-1 (Arg-1) وترتبط بإصلاح الأنسجة13,14. يتأثر استقطاب الخلايا البلعمية بالسيتوكينات الموضعية، والإجهاد التأكسدي، والإشارات المرتبطة بالموت الخلوي المبرمج. وفي هذا السياق، فإن شبكة تنظيم الموت الخلوي المبرمج المكونة من بروتينات عائلة B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) وكاسبيز-3 لا تؤثر فقط على بقاء الخلايا في موقع الإصابة، بل تعدل أيضاً وبشكل غير مباشر السلوك الجاذب الكيميائي للخلايا المناعية من خلال إطلاق إشارات "find-me"15. لذلك، فإن استكشاف استراتيجيات التدخل التي تعدل في آن واحد الاستجابات الالتهابية، والإجهاد التأكسدي، واستقطاب الخلايا البلعمية قد يساعد في تحسين تجدد الأنسجة.
أظهرت المركبات الطبيعية مزايا فريدة في تعديل هذه العمليات البيولوجية. وقد أكدت الدراسات الحديثة أن مواد النافثوكينون، وبفضل هياكلها المقترنة، تمتلك القدرة على كنس الجذور الحرة؛ حيث يمكن لنواة البنزوكينون أن تؤثر على مسارات الإشارات الحساسة للأكسدة والاختزال عبر آليات نقل الإلكترونات16,17. وقد أفيد بأن مادة الـ Mollugin تعمل على تخفيف الاستجابات الالتهابية في التهاب القولون الناجم عن DSS، مع تقليل إنتاج السيتوكينات المحفزة للالتهاب وانخفاض تعبير TLR4 في أنسجة القولون18. كما ثبت أن الـ Mollugin يثبط إشارات TAK1-NF-κB/MAPK وينشط مسار Keap1-Nrf2 في البلاعم6؛ ومع ذلك، فإن تأثيره على استقطاب البلاعم وشبكة الموت الخلوي المبرمج ومضادات الموت الخلوي المبرمج في نموذج جرح حي (in vivo) لم يتم توضيحه بعد. علاوة على ذلك، لا تزال التأثيرات البيولوجية المعتمدة على الجرعة للـ Mollugin ودوره التنظيمي أثناء عملية التجدد بحاجة إلى توضيح منهجي.
بحثت الدراسة الحالية في تأثيرات مادة الـ Mollugin في نموذج لتجدد الزعنفة الذيلية لسمكة الزيبرا. وبوجه التحديد، قمنا بفحص إعادة نمو الذيل، والتعبير الجيني المرتبط بموت الخلايا المبرمج، وتأشير الالتهاب، ونشاط الإنزيمات المضادة للأكسدة، والاستجابات المرتبطة بالخلايا البلعمية بعد العلاج بمادة الـ Mollugin. وتشير نتائجنا إلى أن العلاج بمادة الـ Mollugin يرتبط بتحسن تجدد الذيل وتغيرات في العديد من مؤشرات الاستجابة للإصابة في نموذج سمكة الزيبرا هذا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
اتبعت جميع الإجراءات الحيوانية دليل المجلس الوطني للبحوث لرعاية واستخدام حيوانات المختبر، وحصلت على موافقة لجنة الأخلاقيات في مستشفى فوتشو العام الأول (رقم الموافقة 202408002).
تربية أسماك الزيبرا
أُجريت جميع التجارب باستخدام أسماك الزيبرا (Danio rerio) التي تم الحفاظ عليها تحت ظروف مختبرية قياسية. استُخدمت أسماك الزيبرا من النوع البري AB في مقايسة السمية ومقايسة تجديد الذيل بعد البتر. بينما استُخدمت أسماك الزيبرا Tg(mpeg1:GFP) خصيصاً لتصوير الخلايا البلعمية. يُعد Tg(mpeg1:GFP) خطاً تقريرياً للخلايا البلعمية، حيث يعمل تعبير GFP على وسم الخلايا ذات الأصل البلعمي تحت تحكم محفز mpeg1 الذي يتم التعبير عنه في الخلايا البلعمية. تم الحفاظ على جميع سلالات أسماك الزيبرا عند درجة حرارة 28.5 °C تحت دورة ضوء/ظلام مدتها 14 ساعة/10 ساعات. استُخدمت الأجنة السليمة مورفولوجياً فقط في التجارب. وفي جميع التجارب، تم تحضين الأجنة في محلول دانيو المنظم (Danieau’s buffer)، والذي تم تحضيره باستخدام مواد كيميائية ذات درجة نقاء مخبرية تشمل NaCl و KCl و Ca(NO₃)₂·4H₂O و MgSO₄·7H₂O و HEPES مع ضبط الأس الهيدروجيني عند pH 7.2.
تحضير الدواء وتحديد السلامة
أُذيب الـ Mollugin (بتركيز 40 mg) في 1 mL من الـ DMSO لتحضير محلول مخزون بتركيز 40 mg/mL. خُفف المحلول المخزون أولاً بنسبة 1:10 في محلول Danieau المنظم ليصل التركيز إلى 4 mg/mL، ثم أُجري تخفيف إضافي للوصول إلى تركيزات 22 و66 و200 µg/mL لاستخدامها في المعالجات. ولتحديد أقصى تركيز آمن، تم إزالة الغشاء الكوريوني من أجنة سلالة AB بعد 48 ساعة من الإخصاب (hpf) وتعقيمها باستخدام sodium hypochlorite بتركيز 0.003% قبل توزيعها في أطباق ذات 6 آبار (n=20، ثلاث آبار مكررة لكل مجموعة). حُضنت الأجنة مع الـ Mollugin (بتركيزات 22 µg/mL، 66 µg/mL، 200 µg/mL، 240 µg/mL، 280 µg/mL، 320 µg/mL، أو 360 µg/mL) في وسط E3 لمدة 48 h عند درجة حرارة 28.5 °C. تمت مراقبة معدل البقاء على قيد الحياة باستخدام مجهر ستيريو، واعتُمد أعلى تركيز حقق حيوية أجنة ≥90% كحد أقصى آمن للتجارب اللاحقة.
إنشاء نموذج بتر وتجدد الذيل
لدراسات التجدد، تم تخدير أجنة من السلالة البرية AB بعمر 48 hpf باستخدام 0.03% tricaine المحضر في وسط الأجنة، ووضعت جانبيًا تحت مجهر ستيريو. وقبل بتر الذيل، تم الحفاظ على الأجنة في محلول Danieau المنظم. أُجري بتر عرضي معياري للذيل بتوجيه من مجهر ستيريو، حيث وضع خط البتر خلف طرف الحبل الظهري مباشرةً، مع استخدام الطرف الخلفي للحبل الظهري كعلامة تشريحية. وتمت إزالة طية زعنفة الذيل البعيدة عن هذه العلامة باستخدام مشرط دقيق لضمان اتساق مستوى الإصابة بين العينات. وفور عملية البتر (0 h)، تم التقاط صور باستخدام مجهر فلوري ستيريو. بعد البتر، نُقلت الأجنة إلى وسط المعالجة المقابل القائم على E3 لإجراء اختبار التجدد. حُضرت المحاليل العاملة من Mollugin عن طريق تخفيف المحلول المخزون من Mollugin في وسط E3 بتركيزات نهائية بلغت 22 و66 و200 µg/mL. أُعطي Mollugin عن طريق التعريض في الحمام خلال فترة التجدد. ولمطابقة التعرض للمذيب، تم الحفاظ على مجموعة التحكم غير المصابة ومجموعة نموذج الإصابة في وسط E3 يحتوي على 0.5% DMSO، وهو ما يقابل تركيز DMSO النهائي في مجموعة Mollugin بتركيز 200 µg/mL. حُفظت الأجنة في أطباق ذات 6 آبار عند درجة حرارة 28.5 °C لمدة يومين، مع تجديد يومي لوسط المعالجة القائم على E3. وتم توثيق التجدد عن طريق التصوير بعد 24 و48 h من البتر تحت إعدادات الضوء الأبيض والفلورية لتقييم إعادة نمو الذيل وتوزيع الخلايا البلعمية. وأجريت قياسات الصور باستخدام برنامج ImageJ.
من أجل قياس التجدد كمياً، تم قياس مساحة الذيل المستعادة كمساحة مطلقة بوحدة µm2 ولم يتم تطبيعها بالنسبة لحجم الجنين أو حجم الذيل الأصلي. ولتقليل التباين، تم بتر جميع الأجنة عند نفس العلامة التشريحية الموجودة خلف طرف الحبل الظهري مباشرة، واستُخدمت العلامة نفسها لتحديد منطقة القياس عبر جميع المجموعات. تم تحديد المناطق ذات الاهتمام يدوياً في برنامج ImageJ بناءً على مخطط الذيل، وأجرى التحليل باحث لم يكن على علم بمجموعات المعالجة. أما بالنسبة لقياس المساحة الموجبة للخلايا البلعمية، فقد تم تحليل صور فلورة GFP للأجنة من سلالة Tg(mpeg1:GFP) باستخدام برنامج ImageJ. تم تحديد منطقة إصابة/تجدد الذيل يدوياً كمنطقة اهتمام باستخدام نفس العلامة التشريحية المطبقة في قياس مساحة الذيل. حُوِّلت الصور إلى تدرج رمادي 8-bit، وطُرحت فلورة الخلفية باستخدام إعدادات تصحيح الخلفية نفسها لجميع الصور ضمن التجربة الواحدة. ثم طُبق حد عتبة فلورة ثابت بشكل موحد على جميع الصور في كل تجربة لتحديد الإشارات المرتبطة بالخلايا البلعمية الموجبة لـ GFP. حُسبت المساحة الموجبة للخلايا البلعمية كـ مساحة GFP الموجبة للعتبة ضمن منطقة الاهتمام المحددة. واستندت القياسات إلى المساحة الموجبة للفلورة بدلاً من شدة الفلورة أو عد الخلايا يدوياً. وقد أجرى جميع تحليلات الصور باحث لم يكن على علم بمجموعات المعالجة.
استخلاص الـ RNA وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)
بعد الانتهاء من مقايسة التجدد، جُمعت الأجنة من كل حالة تجريبية ووُضعت في مجموعات مشتركة (20 جنيناً على الأقل لكل مجموعة) لتحليل الـ RNA. وبالنسبة لكل حالة، تألفت المكررة البيولوجية الواحدة من عينة مشتركة تحتوي على 20 جنيناً على الأقل من المجموعة التجريبية نفسها. وقد تم إعداد ثلاث مكررات بيولوجية مشتركة ومستقلة لكل حالة واستُخدمت في التحليل الإحصائي. عُزل الـ RNA الكلي بعد التجانس الميكانيكي في كاشف استخلاص RNA يعتمد على الفينول/الغوانيدين. وقُيمت جودة وتركيز الـ RNA طيفياً عن طريق قياس نسب A260/A280. ثم صُنّع الـ cDNA باستخدام طقم نسخ عكسي تجاري. وأُجري تضخيم الـ PCR باستخدام كواشف SYBR Green. وكانت ظروف دورات qRT-PCR كما يلي: مسخ أولي عند 95 °C لمدة 30 s، يليه 40 دورة من المسخ عند 95 °C لمدة 5 s والارتباط/التمديد عند 60 °C لمدة 30 s. وقِيست مستويات تعبير الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج (caspase-3 و Bcl-2)، والالتهاب (TNF-α، و IL-1β، و IL-6، و NF-κB1، و TLR4، و CCL2، و ICAM1)، والنمط الظاهري للبلعميات (iNOS و arginase-1). واستُخدم β-Actin كجين مرجعي. وحُددت التغيرات المضاعفة في التعبير الجيني باستخدام منهج 2−ΔΔCt. وتظهر معلومات البادئات في الجدول 1.
مقايسات النشاط لـ SOD و CAT
استُخدمت مستويات SOD و CAT لتقييم حالة مضادات الأكسدة بعد إصابة الذيل. وبعد 48 h من عملية البتر، جُمعت أسماك الزيبرا من كل مجموعة وتم تجنيسها في PBS بارد. وبعد الطرد المركزي، استُخدمت المستخلصات الرائقة لقياس SOD و CAT باستخدام أطقم مقايسة النشاط التجارية. وقيس نشاط SOD باستخدام طقم مقايسة يعتمد على WST-1 وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. حُمِّلت العينات في أطباق مقايسة ذات 96 بئراً جنباً إلى جنب مع المعايير، وقُرئت الامتصاصية باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة. استُخلصت أنشطة الإنزيمات من منحنيات قياسية. أُجريت جميع المقايسات في ثلاث مكررات.
التحليل الإحصائي
تُعرض البيانات في شكل المتوسط ± الخطأ المعياري للمتوسط (SEM) من ثلاث تجارب مستقلة على الأقل. بالنسبة لمقايسة السميّة، تضمنت كل تجربة مستقلة دفعة واحدة من الأجنة، بواقع 20 جنيناً لكل مجموعة وفي ثلاث آبار مكررة. وبالنسبة لتصوير التجدد وتصوير الخلايا البلعمية في أسماك الزيبرفيش من سلالة Tg(mpeg1:GFP)، استُخدمت الأجنة الفردية كوحدات للقياس، وتم تحليل 10 أجنة لكل مجموعة. أما بالنسبة لتحليل qRT-PCR، فقد تكون المكرر البيولوجي الواحد من عينة مجمعة تحتوي على 20 جنيناً على الأقل من نفس المجموعة التجريبية، وتم تحليل ثلاثة مكررات بيولوجية مجمعة مستقلة لكل حالة. ولتحليل نشاط SOD وCAT، تم تحليل خمسة مكررات بيولوجية مجمعة مستقلة لكل حالة. حُللت الفروق بين المجموعات باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) مع اختبار توكي (Tukey’s) للمقارنات البعدية. أُجريت التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج GraphPad Prism. واعتُبرت الفروق ذات الدلالة الإحصائية عندما كانت قيمة p < 0.05.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
Toxicity and safe dose determination
To investigate the effects of Mollugin, we first performed toxicity tests. The results indicated that zebrafish embryo mortality remained low at concentrations up to 200 µg/mL, whereas increased mortality was observed at concentrations above 200 µg/mL (Table 2). Therefore, the highest safe dose was determined to be 200 µg/mL, while the low and medium doses were set at 22 and 66 µg/mL, respectively.
Tail amputati...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذا العمل، قمنا بفحص تأثيرات مادة Mollugin على تجديد ذيل سمكة الزيبرا. وضمن نطاق الجرعات المختبرة، ارتبط العلاج بمادة Mollugin بتحسن استعادة مساحة الذيل بعد الإصابة، إلى جانب تغيرات في تعبير الجينات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج، والمؤشرات الالتهابية، ونشاط الإنزيمات المضادة للأكسدة، والمؤشرات المرتبطة بالبالعات.
تُظهر أسماك الزيبرابرش، باعتبارها نموذجاً بارزاً لدراسات التجدد، تجدداً في الذيل يتضمن العمل المنسق لمسارات إشارات متعددة19. فبعد الإصابة، ارتفعت مستويات ca...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يصرح المؤلفون بعدم وجود تضارب في المصالح.
تم تمويل الدراسة الحالية من قبل هيئة الصحة في مقاطعة فوجيان بالصين (منحة رقم 2022QNA085).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أطباق زراعة الأنسجة ذات الـ 6 عيون | Corning | 3516 | |
| طقم مقايسة الكاتالاز (CAT) | معهد نانجينغ جيانتشينغ للهندسة الحيوية | A007-1-1 | |
| كلوروفورم | Sigma-Aldrich | 288306 | |
| قارئ الأطباق الدقيقة CMax Plus | Molecular Devices | iD3s | |
| دانيو’المحلول المنظم s – نترات الكالسيوم (Ca(NO3)2)3)2·٤ ساعات2أو | شركة قوانغتشو القابضة للصناعات الدوائية المحدودة، الصين | نظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تزويدي بالنص الذي ترغب في ترجمته من الإنجليزية إلى العربية، وسأقوم بمعالجته وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة في التعليمات. | التركيز النهائي في محلول Danieau’المحلول المنظم: 0.6 ميلي مولار. |
| دانيو’محلول منظم s – هيبس (HEPES) | شركة قوانغتشو القابضة للصناعات الدوائية المحدودة، الصين | لا ينطبق | التركيز النهائي في محلول دانيو (Danieau)’المحلول المنظم: 5 ميلي مولار؛ تم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.2. |
| دانيو’محلول منظم s – KCl | شركة قوانغتشو القابضة للمستحضرات الصيدلانية المحدودة، الصين | نظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تقديم المحتوى الذي ترغب في ترجمته من الإنجليزية إلى العربية، وسأقوم بصياغته بدقة وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة. | التركيز النهائي في محلول دانيو (Danieau)’المحلول المنظم: 0.7 ملي مولار. |
| دانيو’محلول منظم s – MgSO4·7H2O | شركة قوانغتشو القابضة للمستحضرات الصيدلانية المحدودة، الصين | لا ينطبق | التركيز النهائي في محلول Danieau’المحلول المنظم: 0.4 ملي مولار. |
| دانيو’محلول منظم s – NaCl | شركة قوانغتشو القابضة للمستحضرات الصيدلانية المحدودة، الصين | لم يتوفر نص للترجمة. يرجى تزويدنا بالنص المصدر باللغة الإنجليزية لنقوم بترجمته إلى اللغة العربية وفقاً للمعايير العلمية والأكاديمية المطلوبة. | التركيز النهائي في محلول Danieau’محلول منظم: 58 ملي مولار. |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| وسط E3 لنمو الأجنة | مُحضّر مختبريًا (وصفة قياسية) | لم تتوفر بيانات | الوصفة القياسية. |
| بادئات qPCR خاصة بجين (tnfα، الإنترلوكين 1βil6, nfkb1, tlr4, ccl2, icam1, inos, أرجيناز-1, كاسباز-3, bcl2, β-أكتين) | Sangon Biotech | غير متاح | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية | يرجى تقديم النص المراد ترجمته. | الإصدار 8.0. |
| برنامج ImageJ | المعاهد الوطنية للصحة (NIH) | لا ينطبق | الإصدار 1.52n. |
| مولوجين (≥(98%، كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء HPLC) | Sigma-Aldrich | SMB00431 | مركب نشط مستخلص من نبات Rubia cordifolia، مُذاب في DMSO بتركيز 40 مجم/مل ومُخفف إلى 22 و66 و200 µجم/مل في وسط E3. |
| مجانس أنسجة آلي | IKA, T10 basic ULTRA-TURRAX (أو ما يعادله) | نظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تزويدي بالمحتوى العلمي الذي ترغب في ترجمته إلى اللغة العربية وفقًا للمعايير المحددة. | |
| مزيج NovoScript الفائق لتخليق شريط cDNA الأول | Novoprotein | abs60077 | |
| المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS) | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | الأس الهيدروجيني 7.4 |
| نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Archimed X4) | شركة Sansure Biotech Inc. | Archimed X4 | |
| جهاز طرد مركزي دقيق مبرد | SCILOGEX | CF1524R | |
| رؤوس ماصات خالية من الـ RNA | Sangon Biotech | F603222-0010 | |
| RNAiso Plus | Takara Bio Inc. | 9109 | كاشف استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) القائم على الفينول/الجوانيدين. |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة خالية من RNase، سعة 1.5 مل | Axygen / Eppendorf | يرجى تزويدي بالنص المصدر الذي ترغب في ترجمته. | |
| المجهر الستيريوفلوري SMZ800N | Nikon | SMZ800N | مجهر ستيريو فلوري يستخدم لتصوير يرقات Tg(mpeg1:GFP) وقياس تجمعات البلاعم كمياً. |
| محلول هيپوكلوريت الصوديوم | ماكلين، الولايات المتحدة الأمريكية | لا ينطبق | محلول عمل بتركيز 0.003%. |
| مزيج SYBR Green qPCR (2× مزيج SYBR qPCR | Novoprotein | E096 | |
| المجهر المجسم SZX16 | Olympus | SZX16 | تُستخدم لإجراء الملاحظات المورفولوجية، وتقييم السمية، وبتر الزعنفة الذيلية ليرقات الأسماك. |
| طقم فحص إجمالي سوبر أكسيد ديسميوتاز (T-SOD) | معهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيوية | A001-3 | |
| أسماك الزيبرا المعدلة وراثياً Tg (mpeg1:GFP) | أنبوي، فوجيان، الصين (أو مستعمرة داخلية) | لا ينطبق | خط مراسل للخلايا البلعمية. |
| تري كاين ميثان سلفونات (MS-222) | Sigma-Aldrich | E10521 | محلول عمل بتركيز 0.03%. |
| مياه مقطرة فائقة النقاء خالية من الـ DNase والـ RNase | Invitrogen | 10977023 | |
| أسماك الزيبرا من النوع البري، سلالة CZ98 (Danio rerio) | أنبوروي، فوجيان، الصين | لا ينطبق | تم الحصول على أجنة مخصبة ويرقات من قطيع تربية بالغ. |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.