تقييم صلابة الشريان الأبهر الداخلي للفأر باستخدام التصطير الداخلي بالدبوس: إطار ترجمي لاستكشاف تأثير البيئة المتداولة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولا لتقييم صلابة جدار الشريان الأبهر الداخلي (معامل المرنة) عبر التصوير العضلي للدبابيس وطرق لاستجواب الدور المحتمل للبيئة الدورية في تعديل صلابة جدار الشريان الأبهري.

الملخص

تصلب الأبهر هو عامل خطر مستقل لأمراض القلب والأوعية الدموية وأمراض مزمنة أخرى، بما في ذلك التدهور المعرفي، وضعف الكلى، وضعف الرؤية، وانخفاض وظيفة الجلوكوز-الأنسولين. في الجسم الحي، يتم تقييم تيبس الأبهر عادة باستخدام تقنيات تعتمد على التونومتري أو الموجات فوق الصوتية التي تصور الموجات الشريانية أو الأجزاء الشريانية الطولية على التوالي. ومع ذلك، تتأثر القياسات في الجسم الحي بعوامل متعددة — مثل ضغط الشريان والمدخلات الذاتية — التي تحد من البصيرة الميكانيكية حول كيفية ولماذا يتغير صلابة الأبهر. توفر نماذج الفأر قبل السريرية، التي تسمح بالاقتناء المباشر لنسيج الأبهر، إطارا تجريبيا فريدا لتقييم كل من صلابة الشريان الأبهر في الجسم الحي والخصائص الميكانيكية الجوهرية للشريان الأبهر، خالية من المتغيرات الفسيولوجية المربكة. تمكن هذه النماذج أيضا من الاستجواب المباشر للبيئة الدورية (أي جمع الجزيئات النشطة بيولوجيا في مجرى الدم) ودورها في تعديل صلابة الأبهر عبر طيف الترجمة قبل السريري إلى السريري. ظهرت التغيرات في البيئة المتداولة كأساس ميكانيكي رئيسي لتصلب الأبهر في العديد من الحالات — بما في ذلك الشيخوخة الأولية والشيخوخة المبكرة المرتبطة بالسرطان وعلاجات السرطان — عبر الدراسات ما قبل السريرية والسريرية، وكذلك في التوسط في تأثيرات التدخلات. تقدم هذه المقالة دليلا خطوة بخطوة لتقييم: (1) صلابة الأبهر الداخلي (معامل المرنة) في نماذج الفأر قبل السريرية، و(2) مساهمة البيئة المتداولة (ومكوناتها) في تصلب الأبهر باستخدام العينات الحيوية قبل السريرية والسريرية.

المقدمة

تصلب الأبهر هو عامل خطر مستقل لأمراض القلب والأوعية الدموية وأمراض مزمنة أخرى^1،2. قد يفتقر تقييم صلابة الشريان الأبهر في الجسم الحي إلى الدقة الميكانيكية، نظرا للعمليات الفسيولوجية التكاملية التي تنظم صلابة الشريان الأبهر في الجسم الحي (مثل ضغط الدم والمدخلات الذاتية)². وبالتالي، يتيح تقييم صلابة الشريان الأبهر (أي صلابة جدار/معامل المرنة) خارج الجسم باستخدام التصوير العضلي للدبوس فرصة لتقييم مباشر لصلابة الشريان الأبهر بغض النظر عن المتغيرات الفسيولوجية المربكة². علاوة على ذلك، يسمح استخدام النهج التجريبي خارج الجسم بفحص الآليات الجزيئية المحتملة التي قد تتوسط في تصلب جدار الأبهر. على عكس الطرق الأخرى المعتمدة لتقييم صلابة الشرايين خارج الجسم الحي، مثل التصوير العضلي الضغطي، واختبار السطح ثنائي المحور، وأنظمة الميوغراف الدورية/النابضة، التي تعتمد على نمذجة الأنظمة الفسيولوجية (مثل الضغط داخل الضوء والديناميكا الدموية النابضة)، يسمح تصوير الدبوس بتقييم مباشر لصلابة جدار الأبهر عبر القوة الإيزومترية، تحت بيئات محكمة للغاية لا تتطلب نمذجة في الجسم الحي .

البيئة الدورية (أي تجمع الجزيئات الحيوية النشطة في مجرى الدم)، التي تتصل مباشرة ومتكررة بالشريان الأبهري، تتغير عادة في حالات تصلب الأبهر (مثل الشيخوخة الزمنية/الأولية والشيخوخة المبكرة، مثل الناجين من السرطان أو نماذج النجاة من السرطان)^3,4. لقد أثبتنا، باستخدام كل من العينات الحيوية ما قبل السريرية (الفأر) والسريرية (البشرية) (البلازما والمصل)، أن البيئة الدورية تساهم مباشرة في تصلب الشريان الأبهر مع كل من السنة^{الرابعة} الأولى والشيخوخة^{المبكرة الثالثة}. علاوة على ذلك، أنشأنا إطارا تجريبيا لتحديد المساهمة المباشرة لمكونات مختارة ضمن البيئة المتداولة في التوسط في تأثيرها على تصلب الأبهر ^3,5,6. هنا، نشرح ونصف الأساليب التجريبية خطوة بخطوة لتقييم صلابة الشريان الأبهر الداخلي ومساهمة البيئة المتداولة (ومكوناتها) في تصلب الأبهر باستخدام التصوير العضلي بالدبوس ونقدم نتائج تمثيلية (مع أشكال واستشهادات).

البروتوكول

تم استخدام ذكور فئران البالغين الشباب من النوع البري C57BL/6J (عمرهم 4 أشهر) طوال هذه الدراسة. تمت الموافقة على الإسكان والإجراءات المتعلقة بالفئران التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات في الحرم الطبي بجامعة كولورادو أنشوتز (IACUC).

1. تحضير محلول ملحي فسيولوجي بارد (CPSS)

1. جهز محلول التخزين Ca²⁺ Ringer في 1 لتر من diH₂O وخزنها عند 4 درجات مئوية (الجدول 1).
2. أضف 13.9 جرام من MOPS في 100 مل من diH₂O لتحضير محلول مخزن MOPS وتخزينه عند 4 درجات مئوية.
3. أضف 0.186 جرام من EDTA في 100 مل من diH₂O لتحضير محلول EDTA الأصلي، ودرجة الحموضة إلى 8.0، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
4. جهز CPSS التي تحتوي على محاليل مخزون محضرة أعلاه والمواد الكيميائية المدرجة أدناه (الجدول 2). ارفع الحجم الكلي إلى 2 لتر مع diH₂O، ودرجة حموضة إلى 7.4 عند 34 درجة مئوية، وترشيح CPSS عبر مرشح ≤ 0.45 ميكرومتر. توزع في أنابيب مخروطية بحجم 50 مل وتخزن في -20 درجة مئوية.

2. تشريح الشريان الأبهر في الفأر (الشكل 1، الشكل 2، والشكل 3)

1. قم بتخدير الفأر عن طريق استنشاق الإيزوفلوران (2.5٪) وضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهرية (الشكل 1A-C).
2. بمجرد أن يكون الفأر تحت سطح التخدير الجراحي، اجمع الدم عن طريق إجراء ثقب قلبي وأكمل طريقة القتل الرحيم الثانوية عن طريق استئصال الصدر الثنائي (الشكل 1B–C).
3. بعد ذلك، قم بإزالة الشريان الأبهر بعناية من القوس الأبهر إلى الشريان الأبهر البطني (الشكل 1D–F).
4. ضع الشريان الأبهر في حالة CPSS وقم بإزالة جميع الأنسجة الدهنية الضامة وحول الأوعية الدموية باستخدام مقص فاناس سبريك من Fine Science Tools (2.5 مم) (الشكل 2A–E).
5. قم بقص ثلاثة مقاطع أبهرية بعرض 1 مم في منطقة الصدر أسفل قوس الأبهر مباشرة (الشكل 3).
6. ضع القطعتين الأبهرتين بقطر 1 مم في أنبوب بحجم 1.5 مل مملوء ب CPSS وخزنها في -80 درجة مئوية حتى تجارب التصوير الفموتوغرافي لدبوس الإجهاد. تخزين^الجزء الثالث بشكل مناسب للقياسات النسيجية التالية كما هو موضح أدناه.

3. تجارب الاختصاصية على دبوس الإجهاد والانفعال

ملاحظة: سيتم استخدام نظام التصوير السريري للدبوس لإجراء اختبار في المختبر لصلابة الأبهر (الشكل 4 والشكل 5).

1. أولا، قم بتسخين الغرف إلى 37 درجة مئوية تحتوي على حوالي 6 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) وإذابة أجزاء الأبهر المجمدة بحجم 1 مم.
   ملاحظة: يمكن أيضا استخدام محاليل ملح فسيولوجية بديلة مؤكسجة ومضبوطة على الرقم الهيدروجيني كما هو موضح^{سابقا 7}.
2. بمجرد الحصول على 37 درجة مئوية، اتبع بروتوكول المعايرة الخاص بالشركة المصنعة.
   1. ضع جسر المعايرة على المايوغراف بحيث لا يلمس قضيب T-balance الدبوس المتصل بمحول القوة في غرفة التصوير الخيالي.
   2. تأكد من أن دبوس محول القوة لا يتعرض لأي قوة. عندما تكون القوة النسبية مستقرة، ضع وزنا بوزن 2 جرام على جسر T بحيث يطبق قضيب توازن T الآن ~2 جرام من القوة على دبوس محول القوة.
   3. تأكد أن قراءة القوة تقع ضمن 9.71–9.91 مللي نيوتن. إذا كان الأمر كذلك، فإن المعايرة اكتملت.
3. تحديد القراءة الأساسية للميكرومتر وقيمة التسجيل (أي القراءة الأولية).
   1. تحت منظار التشريح، حدد المسافة الأساسية الميكرومترية التي يكاد يكون فيها الدبوسان المتوازيان يلامسان بعضهما (الشكل 4).
      ملاحظة: لا تسمح للدبوسين باللمس، لأن ذلك قد يسبب ضررا أو تعطيل محول القوة داخل غرفة المايوغراف.
4. تحت مجهر التشريح، ضع قطعة أبهرية بقطر 1 مم فوق الدبوسين وسجل عرض المقطع باستخدام الكاليبرات الدقيقة (الشكل 6A). ثم أوصل وحدة الحجرة بواجهة نظام التصوير الميغرافي للدبابيس.
   ملاحظة: زد عرض الدبوس لوضع توتر على قطاع الشريان الأبهر أثناء تركيب الشريان الأبهر لتثبيته على الدبوسين، مما يمنع انفصال الشريان الأبهري.
5. إذا تم وضع توتر على الشريان الأبهر وتم توصيل الحجرة وتركيبها على نظام التصوير الفطري للدبوس، أعد الموضع الدقيق إلى "الموضع الأولي" كما هو محدد في الخطوة 3.3 أعلاه.
6. تمديد كامل قبل التمدد للشريان الأورطي.
   1. قم بتمديد الشريان الأورطي بزيادة المسافة بين الدبوسين بمقدار 1 مم من موضع الموضع الدقيق الأولي (الشكل 6B).
   2. بعد ذلك، قم باسترخاء الشريان الأبهر بإعادة الدبابيس إلى القراءة الأولية للمؤشر الدقيق (micro positioner). قم بتنفيذ تسلسل التمدد-الاسترخاء هذا ثلاث مرات (الشكل 6A).
      ملاحظة: بعد آخر تسلسل تمديد واسترخاء، يجب أن يعود محدد الدقيقة إلى القراءة الأولية.
7. على واجهة نظام التصوير الدقيقي للدبابيس، قراءة قوة صفرية لكل غرفة مستخدمة (الشكل 7).
8. ابدأ تجربة الإجهاد-الانفعال.
   1. زد قراءة القوة إلى حوالي 1 مللي نيوتن عن طريق ضبط الموضع الدقيق (الشكل 7).
   2. بعد توازن القوة ~1 مللي نيوتن (3–5 ثوان)، سجل قراءة الموضع الدقيق الجديد عند قوة ~1 مللي نيوتن وسجل أول قراءة قوة.
   3. زد موضع الميكرو بمقدار 50 ميكرومتر (أي 5 نقرات/هاش) وترك مقطع الشريان الأبهر يمكن تمديده لمدة 3 دقائق. بعد 3 دقائق، القوة القياسية.
   4. استمر في زيادة الموضع الدقيق 50 ميكرومتر كل 3 دقائق وسجل القوة حتى يتم الوصول إلى "نقطة الانضمام".
      ملاحظة: نقطة الانحناء هي أعلى كمية قوة تولد قبل حدوث ضرر هيكلي لا رجعة فيه في الشريان الأبهر (أي تمزق أو كسر في الشريان الأبهر، وهو انخفاض كبير في القوة).
   5. تأكيد نقطة الانطلاق عن طريق شد الشريان الأبهر بمقدار 50 ميكرومتر إضافي بعد نقطة الانطلاق الأولية. تأكد من أن قيمة القوة تبقى منخفضة أو أعلى قليلا من نقطة العائم. إذا لم يتم تأكيد نقطة العائد، استمر بزيادات لمدة 3 دقائق حتى يتم الوصول إلى نقطة العائد.
   6. عند تأكيد نقطة الانسحاب، تكتمل التجارب. ابدأ التحليل الآن.

4. تحليل تجارب التصوير الاختصاصي لدبوس الإجهاد والانفعال لتحديد معامل مرونة منطقة الكولاجين والإيلاستين

1. باستخدام قراءات القوة المستخرجة من الميوجراف، تولد منحنى إجهاد-انفعال باستخدام المعادلات التالية:
   الإجهاد (λ)=∆d/[d(i)]
   هنا d هو القطر و d_i هو القطر الابتدائي و؛
   الإجهاد (t)=λL/[2(HD)]
   حيث L هو حمل أحادي البعد، H هو سمك الوسط الداخلي، وD هو طول الوعاء. بمجرد توليد منحنيات الإجهاد-الانفعال، استخدمها لحساب مناطق القوة العالية والمنخفضة كما هو موضح سابقا ^8,9 (الشكل 8).
2. احسب منطقة القوة العالية (منطقة الكولاجين) (الشكل 8B).
   1. حدد معامل المرونة لمنحنى الإجهاد-الانفعال كأن ميل الانحدار الخطي يتناسب مع النقاط الأربع الأخيرة من منحنى الإجهاد-الانفعال. للحصول على قياس القوة العالية من رسم الإجهاد-الانفعال، اتبع الخطوات التالية:
      1. انقر بزر الفأرة الأيمن على نقطة بيانات في الرسم البياني واختر اختيار البيانات > إضافة > أدخل اسم السلسلة: معامل المرنة.
      2. قيم سلسلة X: اختر 4 نقاط بيانات من قيم الإجهاد. يجب أن تكون هذه هي النقاط الثلاث مع اقتراب القوة من "نقطة الانضمام". تأكد من تضمين نقطة العائد كنقطة رابعة.
      3. قيم السلسلة Y: اختر 4 نقاط بيانات من قيم الإجهاد. يجب أن تكون هذه هي النقاط الثلاث مع اقتراب القوة من "نقطة الانضمام". تأكد من تضمين نقطة العائد كنقطة رابعة.
      4. انقر موافق وأضف خط الاتجاه > معادلة عرض > الخطية على الرسم البياني > عرض القيمة المربعة R على الرسم البياني.
   2. ميل المعادلة هو معامل المرونة عالي القوة. تأكد من أن قيمة R-تربيع هي ≥ 0.99 لكي يكون معامل المرونة دقيقا.
3. احسب منطقة القوة المنخفضة (منطقة الإيلاستين) (الشكل 8C)
   1. تحديد حدود منطقة الإلاستين السائدة (منطقة القوة المنخفضة حيث الانحناء ~0) لمنحنى الإجهاد-الانفعال عن طريق ملاءمة معادلة كثيرة حدود من الدرجة السابعة على البيانات (r² > 0.99) ثم حساب جذور المعادلة. انظر إلى الجذر الأول، وهو الحد الفاصل بين منطقة القوة المنخفضة جدا ومنطقة الإلاستين، والجذر الثاني، وهو الحد الفاصل بين منطقة الإلاستين وبداية تفاعل ألياف الكولاجين.
   2. ثم نحدد معامل مرونة منطقة القوة المنخفضة كميل لمعادلة خطية ملاءمة لبيانات الإجهاد-الانفعال بين الجذرين ^8,9. للحصول على ذلك:
      1. أنشئ جدول بيانات يحتوي على الأعمدة كما هو موضح في الجدول التكميلي 1.
      2. حول هذا إلى مستند "txt" وافتحه في سكريبت R الخاص ببرنامج رمز R "Modulus of Elasticity".
      3. لاستخدام البيانات، تحقق من الانحدارات العمودية - يجب أن يكون الرسم البياني المشتق الثالث على خرج R على شكل "M".
      4. في تبويب النتائج ، القيمة الرقمية تحت عمود الميل هي معامل المرونة. تأكد من أن قيمة R المربعة أكبر أو تساوي 0.99 لكي يكون معامل المرونة دقيقا.
      5. للحصول على هذه القيمة في جدول البيانات، اختر قيم الانفعال (وقيم الإجهاد المقابلة لها) بين المشتقة الأولى والثانية التي تم الحصول عليها من تبويب نتائج رمز R .
      6. اتبع الخطوات الموضحة في الخطوة 4.2 للحصول على المعادلة وقيمة R² على رسم بياني جداول البيانات.

5. تقييم قطر الشريان الأبهر وسماكة الجدار

1. ضع آخر جزء أبهر بحجم 1 مم في مبرد مجمد مملوء بمركب درجة حرارة القطع المثلى (OCT). وجه الحلقة بحيث يكون التلومين مسطحا ومركزيا في أسفل القالب مع المحور الضوئي عمودي على سطح القطع للحصول على مقاطع عرضية.
2. حضر وعاء يحتوي على 2-ميثيل بوتان مبرد في النيتروجين السائل ثم اغمر الكريموولد في 2-ميثيل بوتان بارد حتى يتحول OCT إلى أبيض معتم.
3. خزن التجميد في -80 درجة مئوية حتى يتم تقسيمه. اضبط درجة حرارة التجميد على درجة حرارة قطع OCT المناسبة (≈-20 درجة مئوية) ثم ثبت الكتلة المجمدة على حامل العينة.
4. بعد تثبيتها على الحامل، قم بقص الكتلة بعناية مع الحفاظ على السماكة عند 7 ميكرومتر حتى تظهر الأنسجة.
5. ضع علامة على شريحة بمعرف الفأرة وقص 4–5 مقاطع عرضية من نسيج الأبهر بسماكة 7 ميكرومتر.
6. لنقل النسيج المقطع إلى الشرائح، ضع جميع الأجزاء المقطوعة على مرحلة التجميد (وتسمى أيضا مرحلة السكين) قبل وضع الشريحة المميزة فوقها مباشرة.
7. بمجرد اكتمال النقل، يتم الانزلاق بالتجفيف بالهواء.
8. أقسام الصور بدرجة تكبير 10 أضعاف على مجهر ذو مجال ساطع. احفظ الصور بصيغة JPG/TIFF مع شريط مقياس في أسفل الصورة.
9. للتحليل، افتح ImageJ، اذهب إلى ملف > فتح واختر صورة الشريان الأبهري.
10. بمجرد رفع صورة الشريان الأبهري، قم بالتكبير داخل شريط السلم باستخدام أيقونة Control + + ثم استخدم أداة الخط لقياس طول شريط السلم. لملء النتيجة، اضغط Control + M. القياس المحسوب تحت الطول هو قياس شريط الميزان.
11. لمعايرة البرنامج، اذهب إلى تحليل > مقياس التعيين. بالنسبة للمسافة بالبكسل، أدخل طول الخط المحسوب بواسطة ImageJ في الخطوة 8. بالنسبة للمسافة المعروفة ، أدخل الطول الفعلي لشريط المقياس، وتحت الوحدات اكتب وحدة القياس (ميكرومتر، مليمتر، سم، إلخ).
12. حدد المربع العالمي لمعايرة جميع الصور التالية تلقائيا. لاحظ ما إذا كان شريط التدرج في الصور الأخرى مختلفا، أو إذا كان ImageJ مغلقا؛ إذا كان الأمر كذلك، فهناك حاجة لإعادة المعايرة.
13. لسمك الجدار، استخدم أداة الخط المستقيم وارسم خطا عموديا من الحافة الضوئية إلى الحافة الخارجية العرضية. اضغط Control + M لملء الطول تلقائيا في تبويب النتائج .
14. كرر الخطوة 5.13 لإجراء القياسات عند 6 مواقع متباعدة بشكل متساو حول محيط الشريان الأورطي وتسجيل كل قيمة.
15. لحساب متوسط السماكة لكل شريان أبهر للفأر، يتم الحصول على متوسط جميع السماكات المأخوذة من 4–5 عينات من نفس الفأر.
16. لقياس قطر الضوء، اختر أداة المضلعات وتتبع الحافة الداخلية الضوئية باتجاه عقارب الساعة. سجل محيط (ميكرومتر) بالضغط على Control + M.
17. كرر التتبع عكس عقارب الساعة، بدءا من نقطة مختلفة. تأكد من أن قيمتي المحيط قريبتان من بعضهما البعض ومتوسط القيم لتلك الحلقة الأبهرية.
18. كرر الخطوة 5.16 لعينات الأبهر من 4 إلى 5 من نفس الفأر وقم بمتوسط جميع قيم المحيط.
19. لحساب القطر، استخدم المعادلة: القطر (ميكرومتر) = المحيط/3.14.

6. معامل المرونة الأبهري المحيطي الدوراني

ملاحظة: لتحديد ما إذا كانت العوامل الدورانية أو المركبات المحددة تغير صلابة الشريان الأبهر الداخلي، يمكن حضان حلقات الأبهر الصدري من فئران ساذجة تدخل خارج الجسم تحت ظروف زراعة قياسية محددة (37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون_2، 20٪ أكسجين₂، رطبة) (الشكل 9).

1. قم بتشريح الشريان الأبهر الصدري وقطع قطعتين حلقيتين بحجم 1 مم حسب الحالة. قم بإزالة جميع الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية.
2. في صفيحة بسعة 96 بئرا، حضن حلقات الأبهر في وسط قياسي، يتكون من DMEM + 1٪ بنسلين-ستريبتوميسين.
3. أضف معالجة تجريبية إلى الوسائط. بالنسبة للبلازما أو المصل (يمكن استخدام البلازما/المصل غير المعالج لذلك)، استخدم 10٪ من إجمالي حجم الوسط. استخدم البلازما أو المصل قبل السريري والسريري (البشري) ^3,4,6 (الشكل 9).
4. لتحديد الدور السببي لعامل دوار ثبت اختلافه بين مجموعات الدراسة، كرر التعرض للبلازما/المصل مع تصحيح الفرق الملحوظ في التركيز بين المجموعات (أي تطبيع تركيز العامل المعني)، وتحديد التأثير المباشر لعامل الاهتمام عند تركيز يمثل متوسط فرق المجموعة، أو يمنع إشارة العامل الذي يعتقد أنه مسؤول عن التوسط في تأثير البيئة المتداولة.
   ملاحظة: تم تنفيذ النهجين الأخيرين سابقا، على التوالي، باستخدام ثلاثي ميثيل أمين-إن-أكسيد (TMAO)⁵ ومع حجب المستقبل لمنتجات نهائية للجليكيشن المتقدم³.
5. لتوضيح دور الإجهاد التأكسدي الزائد المرتبط بالأكسجين الفائق أو الميتوكوندريا-
   الإجهاد التأكسدي المرتبط بالأكسيد الفائق المحدد في هذا النظام النموذجي، يستخدم التركيزات التالية عند حضنة حلقات الأبهر: TEMPOL: 1 ميكرومولار ^5,10 و MitoQ: 1 ميكرومولار⁶.
6. بعد 48–72 ساعة من الحضانة، قم بتحميل حلقات الأبهر في منظار الميكروغراف الدبابيس واتبع الخطوات الموضحة أعلاه.

النتائج

تصلب الشريان الأبهر المرتبط بالعمر

بالنسبة للصلابة الميكانيكية الجوهرية، يتم تسجيل القوة المقابلة لكل فترة تمدد واستخدامها في الحسابات. في الحسابات التي نوقشت سابقا، سيتم توليد منحنيات الإجهاد-الانفعال وحساب معامل المرونة ل 1) منطقة الكولاجين و/أو 2) منطقة الإيلاستين في هذه المنحنيات، كما هو موضح أعلاه وأظهره جيوشيا-رايان وآخرون⁹. يتم تحديد معامل المرونة للمنطقة الأكثر سيطرة على الكولاجين في منحنى الإجهاد-الانفعال كميل...

المناقشة

يوفر استخدام تقنية التصوير العضلي للدبوس لتقييم التيبس الداخلي للأبهر الخارجي فرصة لتقييم التيبس الداخلي للأبهر بغض النظر عن المتغيرات الفسيولوجية المحتملة المربكة في الجسم الحي ، مثل ضغط الدم والمدخلات الذاتية². علاوة على ذلك، يوفر هذا النهج التجريبي خارج الجسم الحيوي فرصة لفحص الآليات الجزيئية المحتملة التي قد تكمن وراء الفروقات في صلابة الشريان الأبهري. هنا، قدمنا دليلا خطوة بخطوة لتقييم تيبس الأبهر الداخلي باستخدام التصوير العضلي للد...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
2-methylbutane	Fisher Scientific	AA19387AP
BSA	Fisher Bioreagents	BP1600
Calcium Chloride Dihydrate	Sigma-Aldrich	C7902
Cryomold	Fisher Scientific	NC9511236
D-(+)-Glucose (Dextrose)	Sigma-Aldrich	G7021
DMEM	Fisher Scientific	MT10017CV
EDTA (A.C.S.)	Fisher Chemical	E478
KCl	Sigma-Aldrich	P4504
Magnesium Sulfate Heptahydrate	Sigma-Aldrich	M2773
MitoQ	Cayman Chemical	845959-50-4
Monosodium Phosphate	Sigma-Aldrich	S5011
MOPS (Na salt)	Sigma-Aldrich	M9024
Multi Pin Myography System	Danish Myo Technology (DMT)	620M
NaCl	Fisher Chemical	S271
Penicillin-streptomycin	Fisher Scientific	15-140-148
RAGE antibody	R&D System	AF1145
Sodium pyruvate	Sigma-Aldrich	P2256
TEMPOL	Sigma-Aldrich	2226-96-2
Tissue-tek OCT compound	Sakura	4583
Trimethylamine N-oxide (TMAO)	Sigma Aldrich	317594