يصف هذا البروتوكول إعطاء سلالة بروسيللا ميليتينسيس المخففة المنتجة للأندولز عن طريق الوريد لفئران NOD/ShiLtJ، تليها مراقبة السكري الطولي، وتحليل الأنسجة للبنكرياس، واختيارية للبروتيوميات المكانية عالية الانقسام وتسلسل RNA خلوي واحد لتقييم إعادة برمجة مناعة الجزر.
مقالة منهجية
جرعة وريدية واحدة من بروسيلا المخففة المنتجة للإندولز في فئران NOD: تقييم بداية داء السكري من النوع الأول وإعادة تشكيل المناعة في الجزر الصغيرة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
السكري من النوع الأول (T1D) ينتج عن تدمير خلايا β البنكرياس من خلال المناعة الذاتية، والعلاجات الحالية تفشل في استعادة تحمل المناعة الدائم. تمثل البكتيريا المعدلة أيضيا التي تنتج مستقلبات مناعية معدلة استراتيجية علاجية واعدة بجرعة واحدة. هنا، تقدم هذه الورقة بروتوكولا شاملا يستخدم فيه إعطاء وريدي واحد لسلالة بروسيلا ميليتنسس المخففة BmΔvjbR::tnaA لتقييم تأثيرات بداية مرض السكري المناعي الذاتي لدى الفئران الإناث المصابة بمرحلة ما قبل السكري NOD/ShiLtJ.
يبدأ البروتوكول بتحضير BmΔvjbR::tnaA من مخزونات الجلسرون المجمدة، ونموها في وسط انتقائي حتى منتصف المرحلة اللوغاريتمية، وحساب وحدات تكوين المستعمرات بناء على الكثافة البصرية. يتم تقييد الفئران الإناث من نوع NOD البالغ من العمر <5 أسابيع دون تخدير ويتم حقنها وريدي عبر وريد الذيل الجانبي بجرعة بكتيرية محددة في محلول ملحي مخزن بالفوسفات مع الحفاظ على وسادات التسخين. يتم مراقبة مستوى السكر في الدم مرتين أسبوعيا بعد صيام لمدة ساعتين لمدة 70–105 أيام، ويعرف السكري بأنه جلوكوز ≥250 ملغ/ديسيلتر في قراءتين متتاليتين. في نقاط التجارب النهائية، يتم تثبيت البنكرياس المحصود في الفورمالين المحايد المخزن لمدة 72 ساعة، مع تضمين البارافين، وتقسيم البنكرياس لتلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين، والكيمياء المناعية للإنسولين، وقياس مساحة الجزر الكلي. تقدم مقاطع مثبتة بالبارافين للبروتيوميات المكانية باستخدام لوحة أجسام مضادة مكونة من 25 علامة لرؤية مجموعات المناعة التنظيمية والفعالة. أخيرا، تخضع الأنسجة البنكرياسية الطازجة لعزل خلية واحدة، وتحضير مكتبة 3′، وتسلسل الأشياء، وتحليل معلوماتية حيوية قائم على سورات لتحليل التغيرات النسخية عبر مجموعات المناعة والسترومال.
يتيح هذا البروتوكول المتكامل تقديم العلاج البكتيري بجرعة واحدة القابلة للتكرار وتوصيف متعدد الوسائط لإعادة تشكيل مناعة الجزر، مما يوفر إطارا لاختبار الميكروبات المعدلة بالاستيض في نماذج المناعة الذاتية وتحليل آليات المناعة الخاصة بالأنسجة بدقة خلية واحدة.
المقدمة
داء السكري من النوع الأول (T1D) هو مرض مناعي ذاتي مزمن يتميز بتدمير خلايا β البنكرياس المنتجة للأنسولين بواسطة المناعة، مما يؤدي إلى الاعتماد على الأنسولين مدى الحياة وزيادة خطر حدوث مضاعفات وعائية1. يعيد فأر NOD/ShiLtJ السمات الرئيسية لمرض السكري المناعي الذاتي البشري، بما في ذلك التهاب العزل التلقائي وتطور السكري الظاهر، ويستخدم على نطاق واسع كنموذج ما قبل السريري للدراسات الميكانيكية والعلاجية 1,2,3. يمكن للعلاجات الحالية لمرض النوع الأول — بما في ذلك الأدوية المثبطة للمناعة، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة، وعلاجات الخلايا التائية التنظيمية (Treg) التبنية — أن تبطئ تقدم المرض بشكل مؤقت، لكنها غالبا ما تفشل في توفير استعادة دائمة لتحمل المناعة أو الحفاظ المستمر على كتلة الخلايا β 1,2,4,5,6,7,8,9,10, 11.
يعد استهداف التريغز والفئات التنظيمية الأخرى محورا رئيسيا للعلاجات الناشئة لمرض السكري واحد، بما في ذلك حقن التريج متعددة النصوص ذاتيا، وتريغات هندسية خاصة بالمستضدات، وأنظمة IL-2 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 . ومع ذلك، فإن البيئة الدقيقة المؤيدة للالتهابات داخل جزر البنكرياس يمكن أن تقوض فعالية هذه الأساليب، مما يؤكد الحاجة إلى إعادة برمجة شبكات المناعة المقيمة في الأنسجة محليا 2,7. يمكن لمستقلبات التربتوفان المشتقة من الميكروبات، وخاصة الإندول والمركبات المرتبطة به، أن تعدل المناعة الفطرية والتكيفية من خلال تعزيز تمايز الخلايا التائية التنظيمية، وتحفيز استقطاب البلاعم المضادة للالتهابات، وقمع استجابات Th1712,13. لذا فإن العلاجات الميكروبية الحية والبكتيريا المعدلة أيضيا تمثل استراتيجية واعدة لتوصيل المستقلبات المناعية المعدلة في مكانها وإعادة تشكيل مناعة الأنسجة 12,13,14,15,16,17,18.
لقد طورنا سابقا سلالة بروسيلا ميليتينسيس مهندسة أيضيا، BmΔvjbR::tnaA، تنتج الإندول بشكل أساسي وتتحكم في التهاب المفاصل المناعي الذاتي عن طريق توسيع التريغز وإعادة تشكيل البيئات الدقيقة الالتهابية14،15،16. تم تصنيف سلالات بروسيلا المخففة مثل BmΔvjbR بشكل واسع كمنصات لقاح ويمكن تعديلها وراثيا لحمل حمولات مناعيةتنظيمية 14,15,16.
هنا، نقدم بروتوكولا مفصلا لتقييم جرعة واحدة عن الوريد من BmΔvjbR::tnaA في نموذج NOD/ShiLtJ، بما في ذلك تحضير البكتيريا، والإعطاء الوريدي الموحد، ومراقبة مرض السكري، والتحليل متعدد الوسائط لأنسجة البنكرياس بواسطة علم الأنسجة، والبروتيوميات المكانية عالية البلوكس، وتسلسل RNA وواحد الخلية. يوفر هذا السير إطارا عمليا لاختبار الميكروبات المهندسة بالاستيض كعلاجات مناعية بجرعة واحدة في المناعة الذاتية الخاصة بالأعضاء. أظهر تحليل جرعة واستجابة سابقة السلامة والتحمل حتى 1 × 1010 وحدة CFU للسلالة المخففة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للإرشادات الأخلاقية الصارمة وتمت الموافقة عليها من لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في جامعة تكساس A&M (رقم البروتوكول: 2021-0123).
1. تحضير وتوصيف BmΔvjbR::tnaA
- خلفية سلالة البكتيريا وتخزينها
ملاحظة: BmΔvjbR::tnaA مشتق من Brucella melitensis 16M مع حذف منظم الضراوة vjbR وإدخال جين Escherichia coli tnaA لإنتاج الإندول المكون، كما وصفسابقا 14,15,16.- حافظ على مخزون الجلسرول عند −80 درجة مئوية في 20٪ جليسرول.
- الزراعة البكتيرية على الأجار الانتقائي
- استرجع مخزون جليسرول مجمد من تخزين بدرجة حرارة −80 درجة مئوية. سلسلة من 10 إلى 20 ميكرولتر على صفائح آجار الصويا التريبتيكية (TSA) مع إضافة الكلورامفينيكول (25–30 ميكروغرام/مل).
- تحضن الصفائح عند 37 درجة مئوية تحت ظروف CO₂ المحيطة لمدة 48–72 ساعة حتى تظهر المستعمرات الفردية (قطرها 2–3 مم).
تحذير: العمل مع سلالات بروسيلا يتطلب مرافق مناسبة للسلامة البيولوجية (الحد الأدنى ل BSL2). اتباع بروتوكولات السلامة البيولوجية المؤسسية والموافقات المطلوبة.
- تحضير الزراعة السائلة
- اختر طبق TSA جديد (عمره ≤أسبوع واحد). اختر 2–3 مستعمرات معزولة باستخدام حلقة معقمة.
- تلقيح في 10 مل من مرق الصويا التريبتيكي (TSB) مع إضافة الكلورامفينيكول (25–30 ميكروغرام/مل) في أنبوب معقم بسعة 15 مل. الحضانة عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز عند 250 دورة في الدقيقة في ظروف الكربون المحيطة.
ملاحظة: للتكبير، استخدم قارورة Erlenmeyer المحازمة بسعة 250 مل.
- مراقبة النمو والحصاد
- قم بإبعاد مقياس الطيف باستخدام TSB معقم مع كلورامفينيكول.
- قم بقياس OD₆₀₀ كل 2–3 ساعات.
- استمر في الحضانة حتى يصل عمر التيار الأقصى إلى 2.0 ± 0.2 (حوالي 18–24 ساعة).
الخطوة الحرجة: الحصاد عند OD₆₀₀ = 2.0 ± 0.2 للحفاظ على تركيز وثبات البكتيريا وقابلية البقاء.
ملاحظة: في ظل هذه الظروف، يتوافق OD₆₀₀ ≈ 2.0 مع طور اللوغاريتمية المتوسطة إلى المتأخرة.
- تقدير وحدة الزراعة المعتمدة
- تقدير تركيز البكتيريا باستخدام العلاقة:
OD₆₀₀ = 1 يعادل 5 × 109 CFU/mL.
ملاحظة: تحتوي مزرعة بحجم 10 مل عند OD₆₀₀ = 2.0 تقريبا على 1 ×10 11 وحدة CFU. - اختياري: جهز تخفيفات تسلسلية بعشرة أطعات (10⁻6 إلى 10⁻9) في PBS معقمة. طبق 100 ميكرولتر على TSA مع إضافة الكلورامفينيكول. حضانا عند 37 درجة مئوية لمدة 48–72 ساعة. عد المستعمرات لتأكيد CFU.
- تقدير تركيز البكتيريا باستخدام العلاقة:
- حصاد وتركيز البكتيريا
- انقل مزرعة 10 مل إلى أنبوب مخروطي معقم بحجم 15 مل.
- الطرد المركزي عند 3000–4000 جرام × لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- استنشق السوبرنت بعناية وتخلص منها دون إزعاج الحبيبة.
- إعادة التعليق للحقن
- أضف 1 مل من محلول ملحي معقم خال من السموم الداخلية 1× مخبأ بالفوسفات (PBS، pH 7.4) إلى الحبيبات البكتيرية. أعد تعليق التثبيت بلطف عن طريق التوصيل بالضغط 10–15 مرة حتى يتم تحقيق تعليق متجانس دون ظهور كتل ظاهرة.
ملاحظة: التركيز النهائي تقريبا 1 × 1011 وحدة CFU/mL.
- أضف 1 مل من محلول ملحي معقم خال من السموم الداخلية 1× مخبأ بالفوسفات (PBS، pH 7.4) إلى الحبيبات البكتيرية. أعد تعليق التثبيت بلطف عن طريق التوصيل بالضغط 10–15 مرة حتى يتم تحقيق تعليق متجانس دون ظهور كتل ظاهرة.
- التخزين والاستخدام
- احتفظ بتعليق البكتيريا على الثلج في أنبوب مغلق. استخدم التعليق أثناء الحقن الوريدي خلال 4 ساعات من التحضير.
ملاحظة: لا تجمد أو تخزن طوال الليل، لأن فعالية البكتيريا تقل في الحياة.
نقطة توقف: يمكن احتجاز البكتيريا على الثلج لمدة تصل إلى 4 ساعات؛ يوصى بالاستخدام في نفس اليوم.
- احتفظ بتعليق البكتيريا على الثلج في أنبوب مغلق. استخدم التعليق أثناء الحقن الوريدي خلال 4 ساعات من التحضير.
2. شراء وتجهيز الفئران من NOD/ShiLtJ
- احصل على فئران NOD/ShiLtJ الإناث. اعتاد الفئران على التكيف لمدة لا تقل عن 7 أيام قبل بدء التجارب.
ملاحظة: استخدم الفئران الإناث بسبب ارتفاع معدل الإصابة بالسكري وأكثر. - فئران المنزل في أقفاص مهواة بشكل فردي تحت ظروف خالية من مسببات الأمراض محددة. حافظ على ما يصل إلى خمسة فئران في كل قفص.
- توفير الفراش، والإثراء البيئي، والطعام، والماء بإرادة الله. حافظ على درجة الحرارة بين 20–24 درجة مئوية، ورطوبة بين 40–60٪، ودورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة.
- استخدم فئران تقل عن 5 أسابيع. سجل أوزان الجسم الأساسية.
- قم بتوزيع الفئران على مستوى القفص عشوائيا إلى مجموعات العلاج ومجموعة التحكم. خصص معرفات فريدة (بطاقة الأذن أو وشم الذيل) لكل فأرة.
ملاحظة: حافظ على سجل رئيسي لجميع الفئران والمهام الجماعية. - انقل الأقفاص إلى غرفة الإجراء قبل الحقن ب30 دقيقة على الأقل. ضع الأقفاص على وسادات تسخين مضبوطة على 37–40 درجة مئوية لتعزيز توسع الأوردة الذيلية.
3. إعطاء الوريد عبر وريد الذيل الجانبي
- باستخدام تقنية التعقيم، يتم سحب 100 ميكرولتر من التعليق البكتيري إلى حقن الأنسولين المعقمة (29G–30G). ضع علامة على كل حقنة بمعرف الفأرة المقابل.
- جهز محاقن تحكم تحتوي على 100 ميكرولتر من PBS المعقمة.
ملاحظة: جهز الحقن مباشرة قبل الحقن. - ضع كل فأر في مقيد يسمح بالوصول إلى الذيل.
ملاحظة: لا تستخدم التخدير لحقن الأوردة الذيلية. - امسح الذيل بنسبة 70٪ إيثانول واتركه ليجف في الهواء.
- تخيل الأوردة الجانبية للذيل تحت إضاءة مناسبة.
نصيحة: سخن الذيل إذا لم تكن الأوردة مرئية. - أمسك الثلث البعيد من الذيل بتوتر لطيف. أدخل حافة الإبرة بزاوية ضحلة (10–15°) في الوريد الجانبي.
- حقن 100 ميكرولتر ببطء على مدى 5–10 ثوان. اسحب الإبرة واضغط بلطف باستخدام الشاش المعقم.
خطوة حرجة: تأكيد نجاح الحقن الوريدي بغياب المقاومة أو التورم أو الشحول. - أعد الفأرة إلى قفصها على وسادة تدفئة. راقب لمدة 5–10 دقائق بحثا عن علامات الضيق. سجل أي أحداث سلبية.
- قم بإجراء حقن لجميع الفئران بترتيب عشوائي خلال نافذة زمنية مدتها ساعتان.
4. مراقبة مستوى السكر في الدم وتعريف مرض السكري
- ابدأ مراقبة الجلوكوز بعد 7 أيام من الحقن. قس مستوى السكر في الدم مرتين في الأسبوع حتى نهاية الدراسة.
- أزل الطعام قبل القياس بساعتين مع الحفاظ على الوصول إلى الماء.
- قيد الفأرة. نظف طرف الذيل بنسبة 70٪ إيثانول.
- اقطع الذيل باستخدام إبرة أو إبرة معقمة. تخلص من أول قطرة دم. اجمع القطرة الثانية على شريط اختبار جهاز قياس الجلوكوز. سجل قيم سكر الدم مع معرف الفأرة والتاريخ.
ملاحظة: استخدم موقعا جديدا إذا تعرض طرف الذيل للندوب. - عرف السكري بأنه ≥ 250 ملغ/ديسيلتر في قياسين متتاليين يفصل بينهما على الأقل 24 ساعة.
- القتل الرحيم للفئران التي تظهر عليها علامات مرض شديدة وفقا لإرشادات المؤسسات.
5. حصاد البنكرياس وتثبيته ومعالجته
- قتل الفئران وفقا للبروتوكولات المعتمدة. قم بتشريح وجمع البنكرياس بعناية، بما في ذلك جميع الفصصات.
- ضع البنكرياس في فورمالين مخزن 10٪ محايد بنسبة تثبيت إلى حجم نسيجية لا تقل عن 10:1. التثبيت لمدة 72 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
تحذير: تعامل مع الفورمالين في غطاء بخار كيميائي مع معدات الحماية الشخصية المناسبة. - تنقل الأنسجة إلى 70٪ إيثانول بعد التثبيت.
- إرسال الأنسجة الثابتة إلى منشأة للب الأنسجة لدمج البارافين، والتقسيم بسماكة 5 ميكرومتر على شرائح مشحونة موجبة، وتلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين، والكيمياء المناعية للإنسولين.
ملاحظة: اطلب قطع غير مصبوغة إذا كان هناك تخطيط لتحليلات إضافية في المراحل النهائية.
6. التقييم النسيجي وقياس مساحة الجزر الصغيرة
- احصل على صور كاملة باستخدام ماسح الشرائح أو المجهر.
- افتح الصور في البرنامج المشار إليه. قم بتعليق الجزر يدويا باستخدام الأدوات المناسبة.
- قس مساحة الجزر الصغيرة باستخدام أدوات التعليق.
- تصدير القياسات للتحليل.
ملاحظة: تشمل المساحة الكلية للجزر الخلايا الصماء والخلايا المتسللة.
7. تحليلات مختلفة لاحقة
- احسب متوسط مساحة الجزر لكل فأر. قارن المجموعات باستخدام اختبارات إحصائية مناسبة.
- اختياري: تحليل البروتيوميات المكانية (انظر الجدول التكميلي S1)
- جهز أقسام FFPE على شرائح مشحونة بشحنة موجبة. قدم عينات إلى مزود خدمة البروتيوميات المكانية. قدم مواصفات لوحة الأجسام المضادة.
- اختياري: تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (انظر الجدول التكميلي S2)
- احصد البنكرياس وضعه في وسط بارد.
- تقديم عينات إلى منشأة أساسية في علم الجينوم لعزل خلية واحدة وتحضير المكتبة.
- بيانات تسلسل العمليات باستخدام خطوط الأنابيب المناسبة (مثل Cell Ranger، Seurat).
- إيداع بيانات التسلسل في مستودع عام قبل النشر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بينما تم تحسين البروتوكول الأوسع الموضح في هذه المخطوطة لاحقا ليصبح نظام وقائي بجرعة واحدة، إلا أن هذه النتائج التجريبية تعرض هنا فقط لتوضيح النتائج النسيجية ونسبة السكر الغازي المتوقعة التي يمكن تحقيقها من خلال هذا السير العملي.
السياق العام للمرض والتباين بين البنكرياس السكري السليم والبنكرياس السكري من النوع الأول موضح بشكل تخطيطي في الشكل 1A. يعكس تدمير المناعة الذاتية لخلايا β والفقدان الناتج عن إنتاج الأنسولين كما هو موضح في...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
من القيود الحرجة للنتائج الممثلة المعروضة هنا أن البيانات المقدمة لتوضيح نقاط النهاية التحليلية (الشكل 3) تم اشتقاقها من مجموعة تجريبية مبكرة تستخدم جدول جرعتين. نظرا لأن هذا البروتوكول تم تطويره ليصبح نظاما وقائيا بجرعة واحدة، فإن الدراسات المستقبلية الأوسع التي تستخدم بروتوكول الجرعة الواحدة المحسن الموضح هنا مطلوبة لإثبات الفعالية الإحصائية الرسمية.
يصف هذا البروتوكول الوريدي بجرعة واحدة من سلالة بروسيلا ميليتينسيس الم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا توجد مصالح مالية متنافسة بين المؤلفين.
شكر وتقدير
وقد دعم هذا العمل منح المعاهد الوطنية للصحة R01CA273002 و R21AI167793 ل J.S. وP.D.F.، وجائزة الخدمة الوطنية للبحوث المؤسسية من NIH (T32) التي تدعم K.D. نشكر مركز علوم الصحة بجامعة تكساس إيه آند إم على دعمه المؤسسي. نشكر الدكتورة يافا جونز-هول على تقييمات علم الأمراض النسيجي العمى، ومختبر سونغ للطيران والدعم الفني للحيوانات، ومساحة عمل الجينوم الجزيئي لمعهد تكساس إيه آند إم لعلوم الجينوم والمجتمع (TIGSS) لإعداد وتسلسل مكتبة RNA وتسلسل الخلايا الأحادية، ونواة المعلوماتية الحيوية TIGSS لتحليل البيانات وتفسيرها، وأكويا بيوساينسز لخدمات البروتيوميات المكانية. نشكر دعم معهد تكساس إيه آند إم لعلوم الجينوم والمجتمع (TIGSS) الأساسي للمعلوماتية الحيوية (TBC) على مساعدتهم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10٪ فورمالين مخزن محايد (NBF) | VWR | 10790-714 | |
| وحدة تحكم الكروم 10x جينومكس | مساحة عمل الجينوم الجزيئي TIGSS، جامعة تكساس A&. جامعة إم | ||
| 70٪ إيثانول | VWR | 89125-164 | |
| شرائح المجهر اللاصقة ل FFPE | لايكا بيوسيستمز | 3800084E | |
| لوحة الأجسام المضادة FFPE للفأر أكويا (~25 علامة) | أكويا للعلوم الحيوية | [معرف اللوحة/لوحة مخصصة] | |
| المحلل الحيوي أو TapeStation مع مجموعات DNA HS | مساحة عمل الجينوم الجزيئي TIGSS، جامعة تكساس A&. M/ Agilent | ||
| Bm & Delta; vjbR::tnaA سلالة بكتيرية | مخزون المختبر (مختبرات سونغ/دي فيغيريدو) | ||
| خط أنابيب سيل رينجر | 10x جينومكس | v7.1 | |
| الكلورامفينيكول | منتجات البحث الدولية | 56-75-7 | |
| مجموعة Chromium Next GEM Single Cell 3' | 10x جينومكس عبر نواة TIGSS | ||
| الكولاجيناز من كلوستريديوم هيستوليتيكوم | ميليبور سيغما | C7657-100MG | |
| صبغة نووية DAPI | أكويا للعلوم الحيوية | [الخدمة مقدمة] | |
| تضمين FFPE، H&. تلوين E، IHC الأنسولين، وفحص الشرائح | مختبر VMBS لعلم الأنسجة، جامعة تكساس A&. جامعة إم | https://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/ | |
| شرائط اختبار الجلوكوز | تشخيصات EKF / فيشر العلمي | 22-022-649 | |
| شرائط اختبار الجلوكوز (بديلة) | رعاية السكري في أسينسيا | شرائط اختبار كونتور التالية | |
| الجلسرول (بكميات كبيرة، 500 مل) | ميليبور سيغما | G7893-500ML | |
| الجلسرول (معقم، 100 مل) | سيغما ألدريتش (جي بيوساينسز) | G5516-100ml | |
| منشور GraphPad (أو حزمة البقاء R) | برنامج جراف باد / R | الإصدار 10.2 | |
| مقياس الجلوكوز المحمول | رعاية السكري في أسينسيا | كونتور نيكست إيز | |
| متسلسل Illumina NextSeq 2000 | مساحة عمل الجينوم الجزيئي TIGSS، جامعة تكساس A&. جامعة إم | ||
| حقن الإنسولين,29– 30 جي (U-100) | VWR | 10002-702 | |
| لانسيتس لاختبار السكري | بيكتون، ديكنسون وشركاه (BD) | 366594 | |
| درجة البحث في ليبرازيز TL | ميليبور سيغما | 5401020001 | |
| وسائد التدفئة منخفضة الحرارة | علم السلوك | RWD-69025 | |
| مجموعة عزلة النواة/الخلايا من Miltenyi | مساحة عمل الجينوم الجزيئي TIGSS، جامعة تكساس A&. ميلتيني بيوتك | ||
| وسادة تسخين الفأرة (بديلة) | كنت ساينتفيك | رايت تمب | |
| مقيدات الفئران | برينتري ساينتيفك | تي في-ريد 150-STD | |
| فئران NOD/ShiLtJ (أنثى، 5 أسابيع) | مختبر جاكسون | السلالة #001976 | |
| مجموعة خلية تدفق P2 XLEAP 100 دورة | إلومينا عبر نواة TIGSS | ||
| استحواذ بيانات PhenoCycler وخدمة مراقبة الجودة | أكويا للعلوم الحيوية | ||
| كواشف PhenoCycler وسير عمل التصوير | أكويا للعلوم الحيوية | [الخدمة مقدمة] | |
| نظام فينوسايكلر-فيوجن | أكويا للعلوم الحيوية | ||
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)، 1x | ثيرمو فيشر | 10010023 | |
| مثبط RNase الواقي | ميليبور سيغما | 3335402001 | |
| جهاز قياس فلورومتر الكيوبت ومجموعة اختبار HS لدي إس دي إن إيه | مساحة عمل الجينوم الجزيئي TIGSS، جامعة تكساس A&. إم/ ثيرمو فيشر | ||
| كيوباث | المصدر المفتوح | v0.4.3 | |
| برنامج R | مشروع R | v4.0+ | |
| سيورا (حزمة R) | مختبر ساتيجا / CRAN | الإصدار 4.3 | |
| ستارديست | المصدر المفتوح | v0.8.3 | |
| تريبتون صويا أغار (TSA) | VWR | CA90002-706 |
المراجع
- Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
- Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
- . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
- Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
- Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
- Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
- Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
- Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
- Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
- Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
- Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
- Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
- Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
- Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
- Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
- Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
- Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
- Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
- Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
- Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذنالوسوم
