يتيح هذا البروتوكول إمكانية إعادة التصوير لقطرات الدهون وديناميكيات العضيات أثناء الانقسام الانقسامي باستخدام خلايا ورم كبد متزامنة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
طريقة تعتمد على الفلورة لتصور ديناميكيات قطرات الدهون والعضيات أثناء الانقسام في خلايا ورم الكبد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
قطرات الدهون داخل الخلايا (LDs) منتشرة في عدة أنواع من الخلايا. تخزن LDs الدهون المحايدة مثل ثلاثي أسيل جليسرول وكوليستريل إستر وتلعب أدوارا مهمة في استقلابية الطاقة، والإشارات، واستجابات الإجهاد. على الرغم من أن العضيات الخلفية المعترف بها كعضيات داخل الخلية، إلا أن سلوكها خلال تقدم دورة الخلية لا يزال غير واضح. خلال الانقسام الخلوي، تخضع عدة عضيات، بما في ذلك الميتوكوندريا وجهاز جولجي، لإعادة تشكيل واسعة النطاق وإعادة تجميع لاحقة، مما يثير التساؤل عما إذا كانت العضيات الميتوكوندرية تخضع أيضا لتغيرات تعتمد على دورة الخلية. نظرا لأن الديويكس يمكن أن تكون مصادر طاقة ومراكز إشارة، فإن توضيح ديناميكياتها أثناء الانقسام الميتوزيكي أمر بالغ الأهمية. لمعالجة ذلك، نقدم بروتوكولا يجمع بين تزامن دورة الخلية وتلوين LD الفلوري في خلايا الورم الكبدي. يتم مزامنة الخلايا عند حدود G2/M باستخدام نهج قائم على مثبط كيناز 1 المعتمد على السيكلين، وتطلق في دورة الخلية، وتجمع في نقاط زمنية محددة. ثم يتم وسم الديفيدات بصبغة دهنية محايدة ويتم رؤيتها بواسطة مجهر فلوري. توفر هذه الطريقة نهجا قابلا للتكرار لفحص إعادة توزيع LD أثناء الانقسام الانقسابي، ويمكن تطبيقها على نطاق واسع في دراسات بيولوجيا العضيات، وتنظيم الأيض، وفسيولوجيا الخلايا السرطانية.
المقدمة
دورة الخلية هي حدث منسق للغاية يضمن التكرار والفصل الدقيق للحمض النووي الكروموسومي 1,2، حيث تعاد تنظيم العضيات داخل الخلايا ديناميكيا3. يتكون من أربع مراحل رئيسية: G1، S، G2، و M 1,2. أثناء الانقسام الميتوزيكي، تصطف الكروموسومات المكررة عند المستوى الاستوائي للمغزل ثنائي القطب ثم تنتقل لاحقا إلى خليتين ابنتين4. تخضع العضيات مثل الميتوكوندريا وجهاز جولجي لإعادة تشكيل واسعة خلال الانقسام 5,6,7,8. تفككت هذه العضيات إلى حويصلات صغيرة قبل أن توزع على الخليتين الابنتين، حيث تعاد تجميعها خلال التقدم خلال دورة الخليةاللاحقة 3.
قطرات الدهون (LDs) هي عضيات محايدة تحتوي على الدهون تتكون من نواة من الدهون المحايدة محاطة بطبقة أحادية من الفوسفوليبيد. ترتبط بمجموعة متنوعة من البروتينات وتوجد على نطاق واسع في العديد من أنواع الخلايا، بما في ذلك الخلايا المتكاثرة 9,10. تختلف تركيبة البروتين والدهون في LDs حسب نوع الخلية والنسيج11. من بين هذه البروتينات، تم دراسة عائلة البيريبين (PLIN) بشكل مكثف، ويقوم PLIN2 بتثبيت LDs في خلايا الكبد12,13. بالإضافة إلى التثبيت البنيوي، تم ربط بروتينات عائلة PLIN بتنظيم ديناميكيات LD والتفاعلات مع مكونات خلاية أخرى14. تعمل LDs ليس فقط كمستودعات تخزين لترايسيل جليسرول وإستر الكولوستيريل، بل أيضا كمراكز لعملية الطاقة الأيضية15، ومسارات الإشارة16، والتكيف مع الإجهاد17. في الحالات المرضية، مثل التهاب الكبد الدهني المرتبط بخلل الأيض (MASH، المعروف سابقا باسم NASH)، يزداد تراكم LD بشكل ملحوظ مقارنة ب السيطرة الصحية18,19، مما يبرز أهميته في بيولوجيا المرض. ومع ذلك، لم تتوفر سوى ملاحظة محدودة لتحديد المواقع المكانية للديوبلاك في الخلايا المنقسمة، رغم الأبحاث المكثفة حول ديناميكيات الميتوكوندريا، والشبكة الإندوبلازمية، وجهاز جولجي أثناء الانقسام. قمنا بتحليل تحديد موقع الديفيوز اللقائي أثناء الانقسام الانقسابي، باستخدام الطريقة المعروضة هنا. لقد أبلغنا سابقا أن العضيات الخالية أظهرت أنماط توزيع مكاني تختلف عن تلك الخاصة بالعضيات داخل الخلية الأخرى20.
هنا، نقدم بروتوكولا مفصلا لدراسة توزيع LDs والعضيات داخل الخلايا الأخرى أثناء الانقسام في خلايا الورم الكبدي. تشمل الطريقة تزامن دورة الخلية والتلوين الفلوري، مما يتيح التصور المتكرر لديناميكيات LD أثناء الانقسام الميتوزي. تظهر النتائج التمثيلية أن LDs تظهر تغيرات تعتمد على دورة الخلية في التوزيع المكاني بين الطور والانقسام الخلوي، مما يسهل تحليلا مقارنا لتحديد موقع اللانكزال أثناء انقسام الخلايا. يمكن تطبيق هذا النهج بشكل واسع لدراسة تحديد موقع العضيات، والديناميكاة، وتنظيم الأيض في كل من السياقات الفسيولوجية والمرضية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الحلول الأصلية المطلوبة لهذا البروتوكول
- حضر محلول ألبومين مصل البقري (BSA) الخالي من الأحماض الدهنية بنسبة 24٪ (بدون حمض البقري) مذاب في 150 ملليمولار NaCl.
- حضر محلول مخزون RO-3306 بحجم 10 ملليمتر (مثبط انتقائي معتمد على السيكلين كيناز 1 (CDK1)) مذاب في DMSO تحت ظروف معقمة.
ملاحظة: تم تحضير المحاليل الشائعة الأخرى مثل NaOH، NaCl، والمحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS)، وفقا للممارسات المخبرية القياسية. تم تحضير PBS عن طريق إذابة 2.6 جرام من NaH₂PO₄·2H₂O، و29 جرام من Na₂HPO₄·12H₂O، و80 جرام من NaCl، و2.0 جرام من KCl في ماء مقطر وضبط الحجم النهائي إلى 1 لتر.
2. تحضير حمض الأوليك المصاحب مع BSA
- ضع 90 ملغ من حمض الأوليك في كأس سعة 50 مل وأضف 2 مل من الإيثانول (99.5٪) لإذابته.
- أضف 100 ميكرولتر من 5 نيوتنات إلى المحلول وحرك حتى يختلط تماما.
- تبخر الإيثانول تحت تيار من غاز النيتروجين.
- أضف 10 مل من 150 ملليمول NaCl وحضن الخليط عند 60 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
- أضف 12.5 مل من محلول مرق BSA المبرد بالثلج بنسبة 24٪ (مع الفولت) ببطء، بطريقة قطرية، إلى محلول حمض الأوليك (2.4) وحرك الخليط بلطف باستمرار لمدة 10 دقائق للسماح بالخلط التدريجي والمتجانس في درجة حرارة الغرفة.
- اضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 واجعل الحجم النهائي إلى 25 مل مع 150 مللي مولار NaCl. التركيز النهائي لحمض الأوليك سيكون 12.8 ملليمو.
- قم بترشيح المحلول عبر مرشح بحجم 0.22 ميكرومتر تحت ظروف معقمة وتخزين المحلول عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين أو عند -20 درجة مئوية للتخزين الأطول.
3. تزامن حدود G2/M للخلايا
- جهز الضوابط اللازمة.
- تحضير خلايا غير متزامنة غير معالجة دون علاج RO-3306 كقاعدة تحكم.
- في الحالات المعالجة بحمض الأوليك، حضر الخلايا المعالجة بحمض الأوليك فقط دون التزامن كقاعدة تحكم.
- لصبغ الفلورة، قم بإجراء ضوابط تلوين مفردة لكل فلوروفور للتحقق من خصوصية الإشارة واستبعاد التداخل الطيفي بين القنوات (الشكل التكميلي 1).
- التقاط الصور باستخدام إعدادات الاقتطاع المتسلسلة أو تكوينات المرشح المناسبة لتقليل التداخل الطيفي وتقاطع القنوات.
ملاحظة: هذه الضوابط ضرورية لتمييز التغيرات المعتمدة على دورة الخلية عن توزيع العضيات الأساسي وللتحقق من خصوصية التألق.
- الحفاظ على خلايا HuH7 في وسط Eagle المعدل من Dulbecco مع إضافة 10٪ مصل بقري جنيني، 100 U/mL بنسلين، و100 ميكروغرام/مل ستربتوميسين عند 37 °م في حاضنة تحتوي على 5٪ CO₂.
- ضع أغطية زجاجية في طبق زراعة بحجم 35 مم. البذور 2 × 105 خلايا لكل طبق بحجم 35 مم في الوسط الموصوف أعلاه وحضانة الخلايا طوال الليل عند حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة بسعة 5٪ CO₂.
- غسل الخلايا مرتين باستخدام PBS ثم حضن الوسط الطازج الذي يحتوي على 9 ميكرومولار RO-3306 و0.5 مللي مولار حمض الأوليك.
- حضن الخلايا لمدة 20 ساعة تحت ظروف الزراعة القياسية.
4. إزالة كاشف RO-3306 من الخلايا المتزامنة للدخول في المرحلة الانقسامية
- غسل الخلايا (الخطوة 3.4) ثلاث إلى خمس مرات باستخدام PBS.
- اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام وسط زراعة طازج.
- حضانة الخلايا في وسط جديد لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة بسعة 5٪ CO₂ للسماح بالدخول إلى الانقسام المتساوي.
ملاحظة: إزالة RO-3306 تسمح للخلايا المتزامنة بدخول المرحلة الانقسامية من حدود G2/M. بعد غسل الكاشف، تدخل نسبة كبيرة من الخلايا المرحلة الانقسامية خلال حوالي ساعة واحدة، وخلال هذه الفترة يمكن التعرف على الخلايا الانقسامية عن طريق تدوير الخلايا وتكثف الكروموسومات. قد يختلف التوقيت الأمثل لملاحظة مرحلة معينة من الانقسام الانقسامي حسب نوع الخلية وظروف الزرعة.
5. تحضير عينات الخلايا الانقسامية
- ثبت الخلايا ب 4٪ بارافورمالديهايد في PBS لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
تحذير: تميل خلايا الانقسام المنضلوية إلى الانفصال عن الطبق؛ تجنب الغسل قبل التثبيت.
ملاحظة: في تلوين PLIN3، تم تثبيت الخلايا بمزيج من 2٪ بارافورمالديهايد و2٪ جلوتارالديهايد. - نفي الخلايا الثابتة ب 0.1٪ (مع الجهد) ترايتون X-100 في PBS لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- حجب الخلايا التي تحتوي على 1٪ (مع الوزن) BSA في PBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
6. صبغ العضيات الخلوية وغيرها من العضيات الخلوية
- قم بإزالة شرائح الغطاء الزجاجية بعناية من طبق الزراعة باستخدام ملقط ناعم وضعها على وجه الخلية للأعلى في غرفة رطبة لمنع الجفاف.
ملاحظة: قم بجميع خطوات التلوين التالية في بيئة رطبة ومحمية من الضوء للحفاظ على إشارات الفلورة. - اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS وحضن بالأجسام المضادة الأولية المخففة في PBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
- اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS وحضن بالأجسام المضادة الثانوية المخففة في PBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
- اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS وصبغ بصبغة فلورية دهنية محايدة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
ملاحظة: تم اختيار أصباغ ذات خصائص طيفية مميزة لتمكين التصوير متعدد الألوان المرن وتقليل التداخل الطيفي مع علامات العضيات الأخرى. - غسل الخلايا مرتين باستخدام PBS وصبغ نوى الطلاء بصبغة فلورية مرتبطة بالحمض النووي (DAPI: الإثارة، 350–410 نانومتر؛ الانبعاث، 420–450 نانومتر) مخففة بنسبة 1:1,000 في PBS لمدة 5 دقائق.
- اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS، ثم ثبت الأغطية على شرائح زجاجية باستخدام وسط تثبيت مضاد للتلاشي للحفاظ على الفلورة أثناء التصوير.
- أغلق حواف الغطاء بطلاء أظافر شفاف لمنع الجفاف والحركة أثناء التصوير.
ملاحظة: بما أن إشارات الفلورسنت تتلاشى تدريجيا، التقط صورا خلال أسبوع واحد بعد التلوين.
7. ملاحظة العضيات داخل الخلايا وموقعها تحت الخلوي
- الحصول على صور فلورية باستخدام مجهر الفلورة واسعة النطاق لفحص عدة خلايا بسرعة واختيار الخلايا البينية والانقسامية الممثلة، باستخدام إعدادات الإثارة المنخفضة والاكتساب السريع لتقليل التبييض الضوئي.
- التقاط صور للخلايا المختارة بتكبير مناسب لتحليل التلوين بالفلورة.
ملاحظة: عادة ما تظهر خلايا الطور بين الطور نواة واحدة سليمة تقع في مركز السيتوبلازم. على النقيض من ذلك، تظهر الخلايا الانقسامية كروموسومات مكثفة مصطفة في المستوى الاستوائي للمغزل ثنائي القطب. يمكن أن تكون هذه الخصائص الشكلية معايير بصرية لتمييز الخلايا بين الطور والانقسام المنضلي. - تصور الأشكال الفلورية وشكل النواة باستخدام مجموعات مرشح مناسبة لأصباغ الفلورية الدهنية المحايدة وصبغة فلورية مرتبطة بالحمض النووي بواسطة مجهر التألق واسع المجال.
ملاحظة: اختر مجموعات المرشحات وفقا لمواصفات نظام المجهر المستخدم. - للحصول على التحقق بدقة أعلى، قم بالتقاط صور فلورية باستخدام المجهر الكونفوكالي مزود بعدسة موضوعية ذات فتحة رقمية عالية (مثل 60×، NA ≥1.2). اكتشاف إشارات التألق لأصباغ الفلورسنت الدهنية المحايدة وصبغة فلورية مرتبطة بالحمض النووي باستخدام ليزرات الإثارة المناسبة وإعدادات مرشح الانبعاث. معالجة الصور باستخدام برامج اكتساب وتحليل الصور المتوفرة بشكل شائع.
ملاحظة: اعتمادا على نظام المجهر، قد تستخدم عدسات موضوعية بالغمر بالماء أو الزيت. يجب أن يتبع اختيار وسيط الغمر توصيات الشركة المصنعة والغرض التجريبي. المجهر الفلوري واسع المجال مناسب للملاحظة الروتينية ومقارنة توزيع الأشعة اللامعة بين الخلايا التداخل والانقسامية، بينما يوصى بالمجهر الكونفوكلي عندما تكون هناك حاجة إلى دقة مكانية أعلى.
8. قياس عدد وحجم ال LDs
- احصل على صور فلورية للخلايا تحت إعدادات تصوير متطابقة لجميع الحالات.
- افتح الصور المكتسبة باستخدام برنامج تحليل الصور.
- حدد عتبات مناسبة لتحديد القطرات الدهنية وإجراء تحليل الجسيمات لقياس عدد ومساحة قطرات الدهون.
ملاحظة: يجب الحفاظ على معايير التصوير ثابتة عبر جميع الحالات لضمان مقارنة دقيقة لعدد ومساحة ال LD.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تزامن خلايا الورم الدهسي عند حدود G2/M باستخدام RO-3306
لدراسة ديناميكيات العضيات داخل الخلايا أثناء الانقسام الميتوزي، تم استخدام RO-3306، وهو مثبط انتقائي ل CDK1، لمزامنة الخلايا عند حدود G2/M20,21. عندما عولجت الخلايا بمثبط CDK1 لمدة 20 ساعة تليها ساعة إضافية في وسط جديد، تم تزامن أكثر من 50٪ من الخلايا عند حدود G2/M (الشكل 1). بإزالة RO-3306، يسمح للخلايا بالدخول إلى دورة الخلية. قبل غ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تشير إعادة توزيع LDs أثناء الانقسام النصفي إلى أن تموضعها ليس عشوائيا بل يتزامن مع إعادة تنظيم الخلايا الهيكلية وتقدم دورة الخلية. على وجه الخصوص، قد يعكس استبعاد LDs من منطقة المغزل قيودا مكانية تفرضها تجميع المغزل المنصفوي أو آليات النقل النشطة التي تحافظ على فصل العضيات أثناء انقسام الخلية. في هذه الدراسة، نقدم نهجا بسيطا وقابلا للتكرار لتحضير الخلايا الانقسامية للتليين المناعي الفلوري، مع تصور LDs أثناء انقسام الخلايا. لتصوير LD، استخدمنا صبغتين دهنيين متميزتين طيفية (أخضر وأحمر-فلور...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم تضارب مصالح فيما يتعلق بمحتوى هذا المقال.
شكر وتقدير
وقد دعمت هذه الدراسة منحة جامعة شوا للباحثين الشباب ومنحة JSPS KAKENHI رقم 24K10084.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.25% Trypsin/EDTA | Wako | 201-16945 | تفكك الخلايا |
| طبق زراعي مقاس 10 سم | Corning | 430167 | زراعة الخلايا |
| طبق زراعي للأنسجة مقاس 35 ملم | IWAKI | 3000-035 | زراعة الخلايا |
| طبق زراعي للأنسجة مقاس 6 سم | IWAKI | 3010-060 | زراعة الخلايا |
| جسم مضاد لـ PLIN2 (ADRP) | Proteintech | 15294-1-AP | علامة قطيرات الدهون |
| جسم مضاد لـ PLIN3 (TIP47) | Proteintech | 10694-1-AP | علامة قطيرات الدهون |
| جسم مضاد لـ α-tubulin | Sigma-Aldrich | T6199 | علامة المغزل الانقسامي |
| BODIPY 493/503 | Invitrogen | D3922 | تلطيخ الدهون المحايدة |
| فلتر أعلى الزجاجة (0.22 ميكرومتر) | NEST | WNB343001 | ترشيح معقم لمحلول OA-BSA |
| ألبومين مصل البقر (BSA) | Sigma-Aldrich | A8022 | عامل حظر |
| ملمع أظافر شفاف | متاح تجاريا | لا ينطبق | ختم أغطية الشريحة |
| مجهر انعكاسي | Olympus | FV1200 | تصوير عالي الدقة |
| DAPI | Dojindo | 340-07971 | تلطيخ النواة |
| D-PBS (منزوع) | Wako | 049-29793 | زراعة الخلايا |
| وسط دولبيكو المعدّل للخلايا النسر (DMEM) | Wako | 041-30081 | وسط زراعة الخلايا |
| الكحول (99.5%) | Wako | 057-00456 | مذيب لحمض الأوليك |
| BSA خالٍ من الأحماض الدهنية | Sigma-Aldrich | A7030 | بروتين ناقل لحمض الأوليك |
| مصل بقريّ جنيني | Gibco | 10270-106 | مكمل الوسط |
| أجسام مضادة ثانوية فلورية (موصولة بـ Alexa Fluor) | متاح تجاريا | لا ينطبق | أجسام مضادة ثانوية محددة للأنواع لفحص المناعة الفلورية |
| برنامج FV10-ASW | Olympus | لا ينطبق | اكتساب ومعالجة الصور |
| غطاء زجاجي (φ15 ملم) | Matsunami | 2-176-03 | زرع الخلايا للفحص المجهري |
| شرائح زجاجية للمجهر | Matsunami | SFF-001 | شرائح زجاجية لتركيب أغطية الشريحة |
| الغلوتاراتديهيد (محلول 25%) | Wako | 073-00536 | تثبيت بديل لـ PLIN3 |
| خلايا HuH7 | بنك الخلايا JCRB | JCRB0403 | سليلة خلايا سرطان الكبد البشري |
| صبغة LipidTOX Red للدهون المحايدة | Invitrogen | H34476 | صبغة بديلة لقطيرات الدهون |
| غاز النيتروجين (N2) | متاح تجاريا | لا ينطبق | تبخر الإيثانول |
| حمض الأوليك | Sigma-Aldrich | O1383 | لتحضير كومبينات حمض الأوليك-BSA |
| البارافورمالديهايد، 4% في PBS | Nacalai Tesque | 09154-85 | تثبيت |
| البنسللين-ستربتومايسين | Gibco | 15140-122 | مضادات حيوية |
| محلول فوسفات عازل (×10) | لا ينطبق | لا ينطبق | يمكن استبدالها بأي مورد |
| RO-3306 | Sigma-Aldrich | SML0569 | مثبط CDK1 لمزامنة G2/M |
| SlowFade Diamond Antifade Mountant | Invitrogen | S36963 | وسط التركيب |
| كلوريد الصوديوم (NaCl) | Wako | 191-01665 | تحضير 150 ملي مولار من NaCl |
| هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) | Wako | 080-01061 | استخدم في صابونية حمض الأوليك |
| شرائح تحليل الخلايا Tali | Thermo | T10794 | استخدم في تحليل دورة الخلية |
| عداد الخلايا Tali المستند إلى الصور | Thermo | لا ينطبق | استخدم في تحليل دورة الخلية |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | اختراق الخلايا |
| مجهر فلوري واسع المجال | KEYENCE | BZ-9000 | فحص سريع للخلايا الانقسامية |
المراجع
- Wang, G., Jiang, Q., Zhang, C. The role of mitotic kinases in coupling the centrosome cycle with the assembly of the mitotic spindle. J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4111-4122 (2014).
- Asteriti, I. A., De Mattia, F., Guarguaglini, G. Crosstalk between AURKA and PLK1 in mitotic entry and spindle assembly. Front Oncol. 5, 283(2015).
- Gavet, O., Pines, J. Progressive activation of Cyclin B1-CDK1 coordinates entry to mitosis. Dev Cell. 18 (4), 533-543 (2010).
- Mardin, B. R., Agircan, F. G., Lange, C., Schiebel, E. Plk1 controls the NEK2A-PP1γ antagonism in centrosome disjunction. Curr Biol. 21 (13), 1145-1151 (2011).
- Taguchi, N., Ishihara, N., Jofuku, A., Oka, T., Mihara, K. Mitotic phosphorylation of dynamin-related GTPase DRP1 participates in mitochondrial fission. J Biol Chem. 282 (15), 11521-11529 (2007).
- Mitra, K., Wunder, C., Roysam, B., Lin, G., Lippincott-Schwartz, J. A hyperfused mitochondrial state achieved at G1-S regulates cyclin E buildup and entry into S phase. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (29), 11960-11965 (2009).
- Makiyama, T., et al. Trafficking of acetyl-C16-ceramide-NBD with long-term stability and no cytotoxicity into the Golgi complex. Traffic. 16 (5), 476-492 (2015).
- Tang, D., Yuan, H., Vielemeyer, O., Perez, F., Wang, Y. Sequential phosphorylation of GRASP65 during mitotic Golgi disassembly. Biol Open. 1 (12), 1204-1214 (2012).
- Xia, Y., et al. Silencing of ste20-type kinase TAOK1 confers protection against hepatocellular lipotoxicity through metabolic rewiring. Hepatol Commun. 7 (4), e0037(2023).
- Makishima, M., et al. Translation inhibitors induce formation of cholesterol ester-rich lipid droplets. PLoS ONE. 7 (8), e42379(2012).
- Krahmer, N., et al. Protein correlation profiles identify lipid droplet proteins with high confidence. Mol Cell Proteomics. 12 (5), 1115-1126 (2013).
- Takahashi, K., et al. Glucagon regulates intracellular distribution of adipose differentiation-related protein during triacylglycerol accumulation in the liver. J Lipid Res. 51 (9), 2571-2580 (2010).
- Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins. Lipids Health Dis. 16 (1), 83(2017).
- Herker, E., Vieyres, G., Beller, M., Krahmer, N., Bohnert, M. Lipid droplet contact sites in health and disease. Trends Cell Biol. 31 (5), 345-358 (2021).
- Krahmer, N., et al. Organellar proteomics and phospho-proteomics reveal subcellular reorganization in diet-induced hepatic steatosis. Dev Cell. 47 (2), 205-221.e7 (2018).
- Ramosaj, M., et al. Lipid droplet availability affects neural stem/progenitor cell metabolism and proliferation. Nat Commun. 12 (1), 7362(2021).
- Cruz, A. L. S., Barreto, E. A., Fazolini, N. P. B., Viola, J. P. B., Bozza, P. T. Lipid droplets: Platforms with multiple functions in cancer hallmarks. Cell Death Dis. 11 (2), 105(2020).
- Mashek, D. G., Khan, S. A., Sathyanarayan, A., Ploeger, J. M., Franklin, M. P. Hepatic lipid droplet biology: Getting to the root of fatty liver. Hepatology. 62 (3), 964-967 (2015).
- Minami, Y., et al. Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through extracellular lipid secretion. Nat Commun. 14 (1), 4084(2023).
- Makiyama, T., et al. Behavior of intracellular lipid droplets during cell division in Huh7 hepatoma cells. Exp Cell Res. 433 (2), 113855(2023).
- Makiyama, T., Higashi, S., Sakane, H., Nogami, S., Shirataki, H. γ-taxilin temporally regulates centrosome disjunction in a NEK2A-dependent manner. Exp Cell Res. 362 (2), 412-423 (2018).
- Aizawa, R., Ibayashi, M., Mitsui, J., Tsukamoto, S. Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice. J Reprod Dev. 70 (1), 18-24 (2024).
- Ohsaki, Y., Maeda, T., Fujimoto, T. Fixation and permeabilization protocol is critical for the immunolabeling of lipid droplet proteins. Histochem Cell Biol. 124 (5), 445-452 (2005).
- Helps, N., Luo, X., Barker, H., Cohen, P. Nima-related kinase 2 (NEK2), a cell-cycle-regulated protein kinase localized to centrosomes, is complexed to protein phosphatase 1. Biochem J. 349 (Pt 2), 509-518 (2000).
- O'Regan, L., Blot, J., Fry, A. M. Mitotic regulation by nima-related kinases. Cell Div. 2, 25(2007).
- Xie, K., et al. MDT-28/PLIN-1 mediates lipid droplet-microtubule interaction via DLC-1 in Caenorhabditis elegans. Sci Rep. 9 (1), 14902(2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
