تحدد هذه الورقة بروتوكولات مفصلة للحفاظ على مستعمرة مختبرية من Carausius morosus، بما في ذلك الإجراءات الرئيسية لتربية الحيوانات، والتعامل مع البيض، ورعاية الصغار حديثة الفقس، ومقاييس الأداء التمثيلية، ونظرة عامة على دورة حياة النوع وخصائصه البيولوجية.
مقالة منهجية
بروتوكول موحد لتربية Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) في المختبر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
*Carausius morosus*تُعد حشرة العصا الهندية، وهي حشرة نحيلة تشبه الغصن ومتوطنة في الهند. وعلى الرغم من إدخالها على نطاق واسع في مناطق مختلفة من العالم من خلال الأسر واستخدامها الشائع في المختبرات أو تربيتها كحيوان أليف منزلي، إلا أن هناك نقصاً في بروتوكولات المختبر الموحدة لتربية الحيوانات. ونحن نقدم هنا تفاصيل ظروف الزرع المختبري لـ C. morosusنحن نحتفظ بالمخزونات في 23 °C، ورطوبة نسبية تبلغ 70%، ودورة ضوئية (فترة إضاءة وإظلام) مدتها 12:12 ساعة. وقد استمرت هذه المزرعة بنجاح تحت هذه الظروف لأكثر من عامين، مع تطبيق بروتوكولات موحدة لظروف النظام الغذائي وتجهيزات الأقفاص. كما نعرض أيضاً طرق رعاية البيض والصيصان (فقس البيض) لدعم التجارب الجارية على *C. morosus*في ظل ظروف الاستزراع الخاصة بنا، فقست 105 دفعات مراقبة من البيض وُضعت في نفس الفترة الزمنية البالغة 24 ساعة خلال فترة زمنية ثابتة مدتها 12 يوماً، ووصل 13.9% من صغار الفقس بنجاح إلى مرحلة البلوغ. وتعمل هذه الطرق المعيارية على تحسين قابلية التكرار وسهولة الوصول، مما يتيح استخدام C. morosus على نطاق أوسع كنظام نموذج مختبري لمجموعة واسعة من الدراسات، بما في ذلك تحليلات النمو والسلوك والفسيولوجيا.
المقدمة
مع تزايد الاهتمام بأنظمة النماذج البديلة غير الثديية، توفر الحشرات فرصة لاستكشاف نطاق واسع من التنوع البيولوجي، بينما توفر أيضاً نماذج بحثية أقل تكلفة، ومتطلبات رعاية أبسط، وعوائق تنظيمية أقل مقارنة بالنماذج الثديية1. وتجعل أنظمة نماذج الحشرات الناشئة من الممكن استقصاء ظواهر بيولوجية فريدة، بما في ذلك، على سبيل المثال، التكاثر العذري في الحشرات العصوية مثل Carausius morosus (Sinéty, 1901)2. وبينما ساهمت ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster في تشكيل فهمنا للعمليات التنموية والجينية منذ أوائل القرن العشرين3، فإن أنظمة نماذج الحشرات الأخرى مثل C. morosus تقدم فرصة فريدة ليس فقط لبيولوجيا التطور، ولكن أيضاً لاستقصاء التحكم الحركي، والتنقل، والأنظمة التي تنظمها الهرمونات العصبية4.
بالإضافة إلى ذلك، لا يزال تمثيل الحشرات ذات التحول الناقص (التي تنمو بشكل مباشر) محدوداً في مجال علم الأحياء التنموي التطوري، حيث تُعد حشرة D. melanogaster ذات التحول الكامل (التي تنمو بشكل غير مباشر أو تخضع لعملية التحول) هي الحشرة النموذجية الأكثر دراسة. إن دراسة أنواع الحشرات ذات النمو المباشر مثل C. morosus، والتي تمر بعدة مراحل حورية قبل الوصول إلى النضج الجنسي5، تتيح لنا سد فجوات نسلية رئيسية في أبحاث علم الأحياء التنموي التطوري. وهذا يسمح بالمقارنة بين الحشرات ذات التحول الناقص والحشرات ذات التحول الكامل، والتي تباعدت في وقت مبكر من تطور الحشرات ولكنها غير ممثلة بالتساوي في أنظمة النماذج المختبرية الحالية. وقد كان استخدام C. morosus على نطاق أوسع ككائن مختبري محدوداً بسبب ظروف التربية غير المتسقة وغير القابلة للتكرار، ونقص المعايير الواضحة للنمو والبقاء. وعليه، فإننا نستعرض هنا بروتوكولاً تفصيلياً يتضمن ظروف استزراع محددة ونتائج متوقعة يمكن تطبيقها في مختلف المختبرات، مما يدعم تطبيقات متعددة تشمل تتبع تكوين الجنين، والنمو الطولي، وتجارب المخرجات التكاثرية.
تعد حشرات C. morosus سهلة التربية في الأسر، مما يجعلها مناسبة تماماً لكل من البحوث المختبرية والبيئات التعليمية. وتلغي قدرتها على التكاثر العذري6 الحاجة إلى تجهيزات تزاوج معقدة، مما يقلل من متطلبات الصيانة ويسهل إدارة المجموعات. ورغم أن التربية الناجحة تستفيد من الظروف البيئية الخاضعة للتحكم، إلا أن رعايتها تظل بسيطة وغير مكلفة مقارنة بالعديد من النماذج المختبرية الأخرى. تتغذى C. morosus بسهولة على المواد النباتية الشائعة مثل اللبلاب (Hedera helix)، أو العليق (Rubus fruticosus)، أو أوراق الورد (Rosa spp.). وتشمل المزايا الأخرى لهذا النظام القدرة على البتر الذاتي، والقدرة على تجديد الأرجل7، وحجم الجسم الكبير، والقدرة على التغذي على مجموعة متنوعة من النباتات المضيفة. ومع ذلك، فإن هذا النوع لديه أيضاً بعض المحدوديات، بما في ذلك عدم توفر تسلسل جينومي متاح للعامة، وطول فترة النمو نسبياً، ووجود غشاء خارجي صلب للجنين (exochorion) يمكن أن يجعل عمليات الحقن صعبة8. ورغم هذه المحدوديات، توفر C. morosus نموذجاً عملياً وفعالاً لتطبيقات البحوث والتدريس على حد سواء.
تُعد بروتوكولات التربية الموحدة لـ C. morosus أمرًا بالغ الأهمية لتحقيق نتائج متسقة وقابلة للتكرار في الدراسات البحثية. وعلى الرغم من تسجيل العديد من الدراسات المختبرية حول C. morosus في المراجع العلمية6,9,10,11,12، إلا أنه على حد علمنا، لم يتم نشر بروتوكولات مفصلة لتربية C. morosus في المختبر حتى الآن. في هذه الدراسة، نجحنا في وضع مجموعة شاملة من البروتوكولات الموحدة للمستنبتات المختبرية لـ C. morosus، بما في ذلك تربية البيض، واليرقات حديثة الفقس، والبالغين الناضجين جنسياً. ونهدف من خلال هذه الطرق إلى جعل هذه الحشرة أكثر توفراً لمجتمع البحوث البيولوجية على نطاق أوسع.
البروتوكول
1. ظروف التربية البيئية
- حافظ على المزرعة المختبرية في غرفة ذات مناخ مضبوط أو حاضنة مع إعدادات بيئية كما يلي: 23 °C، ورطوبة نسبية 70%، ودورة ضوئية (ضوء-ظلام) تبلغ 12:12 h.
ملاحظة: تحت هذه الظروف، يُتوقع أن تفقس بيوض C. morosus بعد حوالي 74-80 يوماً من وضعها.
2. إنشاء وصيانة الأقفاص الشبكية
ملاحظة: يُنصح باستخدام أقفاص حشرات شبكية ذات تهوية من القماش الشبكي على ثلاثة جوانب لإيواء C. morosus. ويُعد القفص الذي تبلغ قياساته 61 x 61 x 91.5 cm مناسباً للحفاظ على ما يصل إلى 50 حشرة بالغة، أو ما يصل إلى 500 فقسة عند تأسيس مستعمرة جديدة.
- اختر قفصاً شبكياً بحجم مناسب. تأكد من أن الحاوية نظيفة وخالية من الشوائب قبل إدخال الحيوانات.
- لتأسيس مستعمرة جديدة باستخدام بالغين ناضجين، ضع 25–50 أنثى بالغة في قفص شبكي نظيف بأبعاد 61 cm x 61 cm x 91.5 cm.
ملاحظة: يجب أن تتراوح فتحات الشبكة بين 0.2–1.0 mm لمنع هروب فقاسات الطور الأول الصغيرة. - لتأسيس مستعمرة جديدة باستخدام الفقاسات، انقل ما يصل إلى 500 فقاسة تقريباً إلى قفص شبكي نظيف بأبعاد 61 cm x 61 cm x 91.5 cm.
3. التغذية والرعاية
- أثناء تنظيف القفص، اترك الحشرات داخل الحاوية؛ انقلها بلطف من على أوراق الشجر وضعها في قاع الحاوية الشبكية أثناء التنظيف من حولها.
ملاحظة: من المتوقع أن يستغرق التنظيف حوالي 10–20 دقيقة لكل قفص. - وفر أوراق شجر طازجة مثل اللبلاب، أو العليق، أو الورد مرة واحدة أسبوعياً. تأكد من أن جميع المواد النباتية خالية من المبيدات الحشرية. اغسل أوراق الشجر بمياه الصنبور قبل إضافتها إلى الأقفاص لإزالة الشوائب والملوثات السطحية.
- قلم السيقان لتناسب الأوعية (برطمانات أو زجاجات صغيرة) المملوءة بمياه الصنبور للحفاظ على رطوبة الأوراق. ضع أوراق الشجر المجهزة داخل الحاوية، مع التأكد من أن الأوراق مرتفعة وفي متناول الحشرات. أغلق الحاوية بعناية بعد الوضع.
- أثناء عمليات تنظيف القفص الأسبوعية، قم بإزالة أوراق الشجر الذابلة أو الجافة وأي فضلات متراكمة في قاع الحاوية.
ملاحظة: استبدل أوراق الشجر عندما تظهر على الأوراق علامات الجفاف، مثل الجفاف، أو الهشاشة، أو الذبول، أو تغير اللون. إن الحفاظ على بيئة نظيفة أمر أساسي لصحة المستعمرة وعافيتها. - رش كل حاوية برفق يومياً بـ 1–2 رشة من مياه الصنبور باستخدام زجاجة رش سعة 250 mL لضمان الترطيب المناسب.
ملاحظة: هذا الأمر ضروري للغاية في اليوم الأول بعد الفقس. قلل الكثافة في حالة حدوث استنفاد سريع للغذاء.
4. جمع ورعاية حديثات الولادة من Carausius morosus
ملاحظة: نستخدم في هذه الدراسة مصطلح "فقس" للإشارة إلى الأفراد مباشرة بعد خروجهم من البيضة (الطور الأول)، بينما يشير مصطلح "حورية" إلى المراحل اليافعة التي تلي عمليات الانسلاخ بعد الجنينية.
- جمع أطباق بتري مقاس 6 cm التي تحتوي على حديثات الفقس.
- باستخدام ملقط بلاستيكي غير مدبب، انقل بلطف ما لا يزيد عن 500 من حديثات الفقس إلى حاوية شبكية نظيفة مقاس 61 cm x 61 cm x 91.5 cm.
ملاحظة: اجمع فقط الحوريات التي خرجت بالكامل وتمددت وأتمت عملية تمدد الهيكل الخارجي. قد يؤدي إزعاج الحوريات قبل خروجها الكامل من البيضة إلى إعاقة تمدد الجسم والوفاة المبكرة. ولأسباب مماثلة، حاول تقليل التعامل المباشر مع الحوريات بعد نقلها إلى الحاوية الشبكية. - توفير أوراق شجر طازجة كما هو موضح في القسم 3.
- تسمية حاويات المستعمرات الجديدة بالمعلومات التالية: تاريخ (أو تواريخ) جمع دفعة البيض، وتاريخ الفقس أو نطاق تواريخ الفقس، وعدد حديثات الفقس المضافة.
ملاحظة: يعمل ذلك على تتبع عمر الحاوية والتنبؤ ببداية النضج التكاثري. - رش كل حاوية برذاذ خفيف فور نقل حديثات الفقس، وبشكل يومي بعد ذلك، من 1–2 رشة من مياه الصنبور باستخدام زجاجة رش سعة 250 mL لضمان الترطيب المناسب.
ملاحظة: هذا أمر بالغ الأهمية خاصة في اليوم الأول بعد الفقس. قد تبقى حديثات الفقس في الحاوية نفسها طوال فترة نموها حتى البلوغ. في ظل الظروف المختبرية الموصوفة في القسم 1، ينجو حوالي 13% من حديثات الفقس حتى البلوغ في غضون 4–5 أشهر (الجدول 1). - إزالة أي حديثات فقس ميتة أو تالفة أثناء التنظيف الأسبوعي للأقفاص لمنع التلوث.
5. جمع بيوض C. morosus والحفاظ عليها
- افتح الحاوية التي تحتوي على الإناث البالغة.
- باستخدام يد ترتدي قفازاً، اسحب بلطف الركائز الموجودة في قاع القفص، والتي تحتوي على كل من البيض والمواد البرازية، باتجاه الفتحة الأمامية.
- انقل المواد بعناية باستخدام يد ترتدي قفازاً إلى طبق بتري بقطر 15 cm لاستعادة البيض.
6. إعدام الحشرات والتخلص من نفايات الحظيرة
ملاحظة: عندما لا تعود هناك حاجة لـ C. morosus في التجارب، أو عند نفوقها، أو في حال عدم الحاجة للبيض:
- القتل الرحيم/التخلص من الحشرات: تُنقل الحشرات الحية أو الميتة التي لم تعد مطلوبة للاستزراع أو التجارب إلى كيس نفايات قابل للتعقيم بالبخار (autoclavable)، وتُحفظ في مجمد عند درجة حرارة -20 °C لمدة 72 h على الأقل.
- إتلاف البيض: لمنع الاكتظاظ السكاني، يتم إزالة أي بيض غير مستخدم في التجارب من الأقفاص أو أطباق بتري، ويوضع في كيس نفايات قابل للتعقيم بالبخار، ويُحفظ عند درجة حرارة -20 °C لمدة 72 h على الأقل.
- التعامل مع النفايات: توضع أي نفايات ملوثة من الحاويات أو المواد المستخدمة في جمع البيض أو الحشرات في كيس نفايات قابل للتعقيم بالبخار، وتُحفظ عند درجة حرارة -20 °C لمدة 72 h على الأقل.
- بعد تجميد المواد، يُنقل كيس النفايات القابل للتعقيم بالبخار إلى حاوية النفايات البيولوجية الخطرة للتخلص منها بشكل صحيح.
ملاحظة: نظرًا لأن C. morosus نوع غازي خارج الهند، فمن الضروري التخلص من جميع المواد بشكل صحيح كما هو موضح أعلاه لمنع إطلاقها العرضي في البيئة.
7. سحب البويضات
- باستخدام ملاقط بلاستيكية غير حادة، يتم التقاط كل بيضة بعناية ووضعها في طبق بتري نظيف بقطر 6 سم.
ملاحظة: تكون البيوض الناضجة محمية بغلاف خارجي (exochorion) متصلب، ولونها بني داكن، مما يجعلها تشبه بذور النباتات. ويمكن أن يساعد استخدام خلفية بيضاء في التمييز بين الفضلات والبيوض عند عملية الفرز. - ضع ملصقاً على الطبق يتضمن تاريخ ووقت الجمع لأغراض التتبع. اترك الغطاء مفتوحاً أثناء الحضن للسماح بالتهوية.
ملاحظة: يعتبر طبق بتري بقطر 6 سم كافياً لتخزين ما يصل إلى 200 بيضة. - قبل حوالي أسبوع واحد من نافذة الفقس المتوقعة (74-80 يوماً بعد وضع البيض؛ Kovacikova &؛ Extavour، بيانات غير منشورة)، ثم أعد غطاء طبق بتري.
- ابدأ المراقبة اليومية لحاويات البيض قبل تاريخ الفقس المتوقع لرصد صغار الفقس الناشئة.
8. متوسط العمر المتوقع
- بعد الفقس، يتم مراقبة الأفراد أثناء خضوعهم لخمس إلى ست عمليات انسلاخ قبل الوصول إلى النضج التناسلي، والذي يحدث في المتوسط بعد 139 يوماً من الفقس في ظل الظروف المختبرية الموضحة في القسم 1 (الجدول 1).
- لاتباع هذا البروتوكول، يتم تحديد التوقيت النمائي تحت ظروف الاستزراع هذه كما يلي: مدة التكوين الجنيني (من وضع البيض إلى الفقس) هي 74–80 يوماً؛ والوقت من الفقس إلى النضج الجنسي (بداية وضع البيض) هو 135 يوماً تقريباً، وهو ما يعادل 200 يوم تقريباً من وضع البيض إلى النضج الجنسي، أما إجمالي دورة الحياة من وضع البيض إلى الوفاة فهي 9.5 أشهر تقريباً.
النتائج
قمنا بجمع البيانات التي توثق نجاح تربية C. morosus مخبريًا من مرحلة البيض حتى الوصول إلى مرحلة البلوغ التناسلي بين سبتمبر 2024 ونوفمبر 2025. وخلال هذه الفترة التي استمرت 14 شهرًا، قمنا بتأسيس خمسة أقفاص وصيانتها ومراقبتها لرصد واحد أو أكثر من العوامل التالية: معدل نفوق البالغين، والبيض الموضوع، وتوقيت فقس البيض، وبقاء صغار الفقس على قيد الحياة حتى مرحلة البلوغ. وتدعم طريقتنا صيانة المستعمرة على المدى الطويل دون ظهور علامات واضحة لأمراض مرتبطة بمسببات الأمراض أو تراجع في القدرة التناسلية، وهو ما قد يعتبر من النتائج غير المثالية. وعلى مدار أكثر من عامين من الاستزراع المستمر، لم نلاحظ أي حالات نفوق جماعي واضحة مرتبطة بمسببات الأمراض، وظل إنتاج البيض والصغار مستقرًا عبر الأجيال.
البيانات الموضحة في الشكل 1 و الشكل 2 اعرض الملاحظات المأخوذة من الأقفاص الخمسة المراقبة منذ مرحلة التجهيز وحتى وصول صغار الفقس إلى مرحلة البلوغ، بما في ذلك البيض الذي تم وضعه ومعدل نفوق البالغين في كل قفص. بعد وصول الأفراد المؤسسين في كل قفص إلى النضج الجنسي وبدء وضع البيض، سجلنا عدد البالغين الموجودين في كل قفص لتحديد المجتمع السكاني الابتدائي عند بدء عملية وضع البيض. ويوضح الشكل التالي عدد البالغين في كل قفص بمرور الوقت في الشكل 1 و جدول 1ونفسر الانخفاض المستمر في معدل البقاء على أنه وفيات مرتبطة بالعمر.
قُمنا بمراقبة إنتاج البيض بالتوازي في نفس الأقفاص الخمسة التي خضعت لمراقبة بقاء البالغين على قيد الحياة (الشكل 1 و الشكل 2). كانت أعداد البيض اليومية لكل قفص في أعلى مستوياتها خلال أول 30-50 يوماً من وضع البيض، ثم انخفضت تدريجياً بعد ذلك. وبالرغم من تفاوت إجمالي إنتاج البيض بين الأقفاص (الجدول 2)، إلا أن هذا النمط العام كان ثابتاً في جميع الأقفاص الخمسة المكررة. وراقبنا ديناميكيات فقس البيض على مدار فترة 50 يوماً لإجمالي 105 دفعة من البيض، حيث تُمثّل كل دفعة مجموعة من البيض الذي وُضع في القفص نفسه خلال فترة 24 ساعة. وبالنسبة لتحليلات حجم الدفعات الموضحة في الشكل 3، تم تقسيم 75 دفعة إلى فئات صغيرة ومتوسطة وكبيرة. وجدنا أنه بمجرد فقس أول بيضة في الدفعة، تم الوصول إلى اكتمال فقس بنسبة 90% خلال 12 يوماً من ظهور أول فقس (الشكل 3D)، وبشكل مستقل عن حجم الدفعة (الشكل 3B). وباستخدام مصطلح "اكتمال الفقس" لوصف نسبة البيض في الدفعة الذي فقس بحلول نقطة زمنية محددة بعد ظهور أول فقس من الدفعة، نلاحظ أن توزيع دفعات البيض حسب يوم اكتمال الفقس بنسبة 90% يشير إلى أن معظم الدفعات وصلت إلى هذا الحد بين أيام الفقس 10 و 14 (الشكل 3C) بعد ظهور أول فقس.
الشكل 1ديناميكيات وفيات البالغين. مسارات البقاء عبر خمس مكررات C. morosus الأقفاص التجريبية بمرور الوقت. يتم رسم نسبة البقاء على قيد الحياة بمرور الوقت للأفراد في كل قفص تمت مراقبته. راجع المقاييس الملخصة في جدول 1. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2ديناميكيات إنتاج البيض. عدد البيض الذي تم جمعه من الأقفاص الخمسة نفسها التي تمت مراقبتها في الشكل 1تمت مراقبة الأقفاص من 1 إلى 5 يومياً لمدة 47 و58 و106 و129 و132 يوماً، على التوالي. يوضح المخطط البيانات الخاصة بأول 126 يوماً من وضع البيض. انظر المقاييس الملخصة في جدول 2. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3. ديناميكيات فقس البيض. (أ) العلاقة بين إجمالي عدد البيض في كل دفعة وعدد الأيام المطلوبة للوصول إلى 90% من اكتمال الفقس. (ب) توزيع دفعات البيض حسب اليوم الذي وصلت فيه إلى 90% من اكتمال الفقس خلال أيام الفقس من 7 إلى 20. (ج) توزيع معدل فقس الدفعات عبر دفعات البيض الصغيرة والمتوسطة والكبيرة. n = 25 دفعة لكل فئة من أحجام الدفعات. (د) مسارات الفقس على مدار فترة جمع استمرت 70 يوماً لـ 75 دفعة بيض استخدمت في تحليل حجم الدفعة. تم رصد إجمالي 105 دفعة بيض؛ وبالنسبة للتحليلات الموضحة هنا، تم تجميع 75 دفعة حسب إجمالي عدد البيض باستخدام نقاط تقسيم ثلاثية (tercile cutoffs). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4. العلاقات بين أعداد البالغين، ومعدل نفوق البالغين، وإنتاج البيض لكل قفص. (A) لا توجد علاقة ذات دلالة إحصائية (R2 = 0.025) بين متوسط النفوق اليومي للبالغين وعدد البالغين المؤسسين في القفص. (B) لا توجد علاقة ذات دلالة إحصائية (R2 = 0.017) بين إجمالي إنتاج البيض وعدد البالغين المؤسسين في القفص. (C) يوجد ارتباط سلبي متوسط (R2 = 0.411) بين متوسط إنتاج البيض اليومي ومتوسط النفوق اليومي للبالغين. متوسط النفوق اليومي للبالغين = (% إجمالي النفوق) / (إجمالي عدد أيام المراقبة). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| رقم القفص | رقم القفص القديم | أول يوم لإضافة الفراخ إلى قفص المؤسس | آخر يوم لإضافة الفراخ إلى قفص المؤسس | عدد الفراخ المضافة إلى القفص | نطاق أيام إضافة الفراخ | متوسط الوقت بين بدء القفص وعدّ البالغين | أول يوم لعدّ البالغين | أول يوم بدأت فيه البالغات في وضع البيض | الوقت المنقضي بين الفقس والبلوغ | الوقت المنقضي بين الفقس ووضع البيض | العدد البدائي للبالغين | بقاء الفراخ حتى البلوغ | آخر يوم لعدّ البالغين | العدد النهائي للبالغين | مدة مراقبة عدد البالغين [أيام] | متوسط نفوق البالغين خلال فترة المراقبة [%] | متوسط نفوق البالغين اليومي [%] |
| 1 | 7 | 12/7/ 2024 | 12/21/ 2024 | ND | 14.00 | 166.00 | 5/29/ 2025 | 5/29/ 2025 | 173.00 | 173.00 | 61.00 | ND | 10/9/ 2025 | 9.00 | 133.00 | 85.25% | 0.64% |
| 2 | 8 | 2/10/ 2025 | 3/9/ 2025 | ND | 27.00 | 130.00 | 7/17 /2025 | 7/17/ 2025 | 157.00 | 157.00 | 42.00 | ND | 11/5/ 2025 | 12.00 | 111.00 | 71.43% | 0.64% |
| 3 | 9 | 4/5/ 2025 | 4/12/ 2025 | ND | 7.00 | 110.00 | 7/17/ 2025 | 7/27/ 2025 | 103.00 | 113.00 | 45.00 | ND | 11/5/ 2025 | 36.00 | 111.00 | 20.00% | 0.18% |
| 4 | 10 | 5/8/ 2025 | 5/22/ 2025 | 350 | 14.00 | 121.00 | 9/4/ 2025 | 9/13/2 025 | 119.00 | 128.00 | 36.00 | 10.29% | 11/5/ 2025 | 24.00 | 62.00 | 33.33% | 0.54% |
| 5 | 11 | 5/23/ 2025 | 6/6/ 2025 | 536 | 14.00 | 117.00 | 9/4/ 2025 | 9/24/ 2025 | 104.00 | 124.00 | 86.00 | 16.04% | 11/5/ 2025 | 66.00 | 62.00 | 23.26% | 0.38% |
| المتوسطات | 15.20 | 128.80 | 131.20 | 139.00 | 54.00 | 13.17% | 29.40 | 95.80 | 46.65% | 0.48% |
الجدول 1: ديناميكيات بقاء البالغين والنفوق عبر الأقفاص التجريبية. نتائج بقاء البالغين لخمسة أقفاص تجريبية مكررة. لكل قفص، نسجل النطاق الزمني لإنشاء القفص، وعدد صغار الفقس المستخدمة لإنشاء كل قفص (لقفصين من أصل 5)، ونسبة بقاء صغار الفقس حتى مرحلة البلوغ (لقفصين من أصل 5)، والمدة الزمنية الفاصلة بين إنشاء القفص وبدء تعداد البالغين وبدء وضع البيض، ومدة مراقبة البالغين، وأحجام مجتمع البالغين عند البداية والنهاية، ونفوق البالغين خلال فترة المراقبة، ومعدل النفوق اليومي المتوسط. تم حساب نسبة بقاء صغار الفقس حتى مرحلة البلوغ فقط للأقفاص التي عُرفت أعداد صغار الفقس الأولية فيها.
| رقم القفص # | تاريخ بدء جمع البيض | تاريخ انتهاء جمع البيض | مدة جمع البيض [أيام] | إجمالي عدد البيض/القفص | متوسط عدد البيض الموضوع/يومياً | العدد الابتدائي للأفراد البالغين | إجمالي عدد البيض/البالغين عند البدء | متوسط عدد البيض/البالغ عند البدء/اليوم |
| 1 | 5/29/2025 | 10/8/ 2025 | 132.00 | 6721.00 | 50.92 | 61.00 | 110.18 | 0.83 |
| 2 | 7/4/2025 | 11/10/2025 | 129.00 | 7333.00 | 56.84 | 42.00 | 174.60 | 1.35 |
| 3 | 7/27/2025 | 11/10/2025 | 106.00 | 9198.00 | 86.77 | 45.00 | 204.40 | 1.93 |
| 4 | 9/13/2025 | 11/10/2025 | 58.00 | 2583.00 | 44.53 | 36.00 | 71.75 | 1.24 |
| 5 | 9/24/2025 | 11/10/2025 | 47.00 | 6104.00 | 129.87 | 86.00 | 70.98 | 1.51 |
| المتوسطات | 94.40 | 6387.80 | 73.79 | 54.00 | 126.38 | 1.37 |
الجدول 2: إنتاج البيض عبر الأقفاص التجريبية. مخرجات وضع البيض لخمسة أقفاص تجريبية مكررة تحتوي على بالغين ناضجين. لكل قفص، نذكر تواريخ بدء وانتهاء جمع البيض، والمدة الإجمالية لجمع البيض، وإنتاج البيض التراكمي لكل قفص، ومتوسط عدد البيض الموضوع يومياً.
المناقشة
توفر طرق التربية المفصلة هنا إطارًا مباشرًا وقابلًا للتكرار للحفاظ على المجموعات المختبرية من C. morosus. وعلى الرغم من أن C. morosus قد تم الاحتفاظ بها لفترة طويلة في المختبرات أو كحيوانات أليفة، إلا أن بروتوكولات التربية في الأبحاث المختبرية قد تباينت عبر الدراسات6,9,10,11,12. إن ضمان اتساق الظروف البيئية وممارسات التغذية أمر ضروري لجعل C. morosus كائنًا نموذجيًا مختبريًا موثوقًا للأبحاث التنموية والفسيولوجية والتطورية.
التوقيت النمائي في C. morosus مقارنة بالحشرات النموذجية الأخرى
بالمقارنة مع الحشرات كاملة الاستحالة مثل ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster، تُظهر C. morosus معدلات نمو أبطأ ومرحلة يافعة أكثر طولاً. فبينما تُكمل D. melanogaster عملية تكوين الجنين في غضون ~24 h وتصل إلى النضج التكاثري خلال 10–12 days عند 25 °C13، تتطلب C. morosus في ظل ظروف التربية الخاصة بنا 74–80 days لتكوين الجنين وحوالي 135–139 days بعد الفقس للوصول إلى النضج التكاثري، وهو ما يعادل حوالي 200 days من وضع البيض حتى النضج التكاثري عند 23 °C (البيانات غير معروضة). ويعكس هذا الجدول الزمني الممتد اختلافات فسيولوجية وتطورية جوهرية بين الحشرات ناقصة الاستحالة والحشرات كاملة الاستحالة14,15، وهو أمر يتكرر في رتبة Phasmatodea16,17,18. وبينما تُكمل حشرات ناقصة الاستحالة أخرى، مثل صرصار الحقل Gryllus bimaculatus، تكوين الجنين وتصل إلى النضج الجنسي في إطار زمني أقصر (عشرة أيام وستة أسابيع، على التوالي، عند 29 °C19)، فإن النمو البطيء لـ C. morosus يوفر فرصة فريدة لإجراء أبحاث قابلة للتكرار ودراسات طولية مفصلة لتكوين الجنين والنمو في المرحلة اليافعة.
مصدر المجموع الخضري وممارسات التغذية
نستعرض في هذا البروتوكول استخدام اللبلاب (Hedera helix) كمصدر غذائي أساسي لمستعمرة C. morosus الخاصة بنا، حيث تم جمع الأوراق من موقع ثابت داخل الحرم الجامعي على مدار العام. وعلى الرغم من أن اللبلاب قد لا يكون متاحاً لجميع المختبرات، فقد تم الإبلاغ عن ملاءمة عدة مصادر غذائية نباتية بديلة للحفاظ على مستعمرات C. morosus، بما في ذلك العليق (Rubus spp)، والبربيس (Ligustrum spp.)، والبيركانثا (Pyracantha spp.)، والورد (Rosa spp.)، والزعرور (Crataegus monogyna)، والبلوط (Quercus spp)، والبندق (Corylus spp.)20. ومن الاعتبارات الهامة عند استخدام الأوراق التي يتم جمعها من مصادر خارجية أن المحتوى الغذائي يكون أقل تحكماً مقارنة بالأنظمة المختبرية التي تعتمد على أنظمة غذائية موحدة (على سبيل المثال، Drosophila melanogaster)، مما قد يؤدي إلى إدخال تباين غذائي. وللمساعدة في الحد من ذلك، استخدمنا نفس نوع النبات من نفس الموقع طوال جميع الفصول، ووفرنا الأوراق لجميع الأقفاص مرة واحدة في الأسبوع أثناء الصيانة الدورية للأقفاص. وكانت أغصان اللبلاب المستخدمة في التغذية تحتوي عادةً على مزيج من الأوراق النابتة والناضجة؛ ولم نقم باختيار الأغصان بناءً على مرحلة نمو معينة للأوراق. كما غُسلت جميع الأوراق قبل إضافتها إلى الأقفاص. وقد تم تطبيق جدول الاستبدال الأسبوعي الخاص بنا، والذي يتضمن إزالة جميع الأوراق واستبدالها في نفس اليوم، لضمان الاتساق وإدارة حجم المستعمرة. وحُفظت أوراق اللبلاب المقطوعة في أوعية مملوءة بالماء داخل الأقفاص للحفاظ على رطوبتها طوال الأسبوع. وفي معظم الحالات، ظلت الأوراق في حالة جيدة طوال الأسبوع، على الرغم من احتمال حدوث جفاف أو استهلاك جزئي أحياناً، وفي هذه الحالة كنا نستبدل الأوراق في فترة أقل من 1 week.
حجم المستعمرة ومعدلات البقاء على قيد الحياة وتكاثر البالغين
كان التأسيس السليم للمستعمرة والإدارة الدقيقة لكثافة عدد السكان أمرين أساسيين للحفاظ على صحة المخزونات. وقد ساعد الحفاظ على حد أقصى يبلغ حوالي 500 من صغار الفقس أو 50 بالغاً لكل وحدة حجز بأبعاد 61 cm x 61 cm x 91.5 cm في دعم استقرار الظروف، وصيانة المستعمرة، وضمان إمكانية تكرار الملاحظات النمائية.
مقارنة متوسط الوفيات اليومية بعدد البالغين المؤسسين في القفص (الشكل 4أ و الجدول 1لم تكشف عن وجود علاقة يمكن التنبؤ بها بين هذين المعلمتين. وبالمثل، لم تكن هناك علاقة تنبؤية قوية بين العدد الإجمالي للبالغين المؤسسين وإجمالي إنتاج البيض (الشكل 4B, الجدول 1، و جدول ٢). وبدلاً من ذلك، أظهرت الأقفاص التي سجلت متوسط معدل وفيات يومي أقل للبالغين ميلاً طفيفاً نحو تحقيق متوسط إنتاج يومي أعلى من البيض (الشكل 4ج). ومع ذلك، تشير الاختلافات بين الأقفاص إلى أن إنتاج البيض قد تباين بين البالغين (جدول 1 و الجدول ٢)، مما قد يعني أن هناك عوامل أخرى غير بقاء البالغين تساهم في أنماط الخصوبة، وأن الإناث قد تختلف أيضاً فيما بينها من حيث عدد البيض الذي تضعه كل واحدة يومياً.
انخفض إنتاج البيض بشكل عام في جميع الأقفاص التي تمت مراقبتها على مدار التجربة (الشكل 2). وقد سجلت معظم الأقفاص أعلى معدلات وضع البيض اليومية في بداية الفترة التناسلية (أول 50 يوماً)، وبعد ذلك تراجع الإنتاج تدريجياً (الشكل 2). ويتسق هذا النمط مع ملاحظتنا بأن الأفراد يصلون عادةً إلى النضج الجنسي ويبدأون في وضع البيض بعد حوالي 135 يوماً من الفقس، وأن الوفيات تبدأ بعد ذلك بنحو 90 يوماً (~225 يوماً بعد الفقس؛ البيانات غير معروضة).
توقيت وديناميكيات الفقس
عبر دفعات البيض التي تمت مراقبتها، حدث معظم الفقس خلال فترة ثابتة مدتها 12 يوماً تلت بدء الظهور (الشكل 3D). وبالمثل، لم يكن هناك ارتباط بين حجم الدفعة وتوقيت اكتمال فقس 90% من البيض (الشكل 3A)، ووصلت معظم الدفعات إلى اكتمال فقس 90% بين اليومين 10 و14 بعد ظهور أول فقس (الشكل 3B). تعد فترة الفقس المتوقعة هذه ميزة مفيدة في إدارة مستعمرات C. morosus لأنها تسمح بتجميع المواليد في مجموعات ذات أعمار متقاربة، مما يحسن تحديد مراحل النمو ويقلل من التباين التجريبي. كما أن معرفة موعد حدوث الفقس الجماعي تسمح بتخطيط أفضل لتدوير الحظائر وتخصيص الموارد، بما في ذلك التجهيز في الوقت المناسب للحظائر والمجموعات الورقية ومواد التتبع، وهو أمر مهم بشكل خاص للدراسات واسعة النطاق أو طويلة الأمد. وعلى الرغم من دراسة أنواع من Phasmatodea تتكاثر جنسياً وعن طريق التكاثر العذري، إلا أننا لا نعرف أي دليل على أن نمط التكاثر وحده هو الذي يسبب الاختلافات في توقيت تكوين الجنين. وبدلاً من ذلك، تم الإبلاغ عن أن التباين في النمو يكون خاصاً بكل نوع ويتأثر بالظروف البيئية2.
التعامل مع البيوض واعتبارات الركيزة
تتضمن طريقتنا في التعامل مع البيض جمع البيض مباشرة من أرضية الحظيرة وتحضينه في أطباق بتري المهواة. تجعل هذه الطريقة البيض سهل الملاحظة، على عكس أنظمة صرصور الليل التي تجمع البيض في ركائز مثل ألياف جوز الهند أو فتائل القطن21. يوفر الغشاء الخارجي الصلب (exochorion) لبيض C. morosus الحماية أثناء التعامل ومنع الجفاف، مما يسمح بالتحضين الآمن في أطباق بتري دون الحاجة إلى ركيزة إضافية تحت ظروف الزرع المتبعة لدينا. وبجمع هذه الإجراءات الموحدة معاً، فإنها توفر نهجاً منظماً للحفاظ على مجتمعات صحية من C. morosus لإجراء أبحاث نمائية أو سلوكية أو جينية أو فسيولوجية قابلة للتكرار. إن الضوابط البيئية المتسقة (23 °C، 70% RH، 12:12 LD)، والصيانة الدورية للحظيرة، والجداول الزمنية النمائية المتوقعة، تجعل من C. morosus نظاماً نموذجياً متاحاً ومنخفض التكلفة. ومن المهم الإشارة إلى أنه على عكس بعض أنظمة صرصور الليل حيث يمكن للاكتظاظ أو الافتراس أو الحمل الممرض أن يزعزع استقرار المستعمرات بسرعة22، فإن C. morosus سهل التربية، مما يجعله مناسباً للتجارب واسعة النطاق والدراسات التي تمتد عبر أجيال متعددة. ومع زيادة اعتماد C. morosus كنوع نموذجي نصف متحول (hemimetabolous)، فإن استخدام الأساليب الموحدة من شأنه أن يعزز إمكانية التكرار والمقارنة بين الدراسات في مجالات متعددة من بيولوجيا الحشرات.
البقاء على قيد الحياة من الفقس حتى مرحلة البلوغ
إن نسبة البقاء على قيد الحياة من مرحلة الفقس إلى مرحلة البلوغ في دراستنا (نحو 13%) أقل بكثير من تلك التي أبلغت عنها دراسة كمية أخرى لـ *C. morosus* بقاء الحوريات على قيد الحياة في ظل ظروف مختبرية محكومة، حيث نجا 68% من الأفراد حتى مرحلة البلوغ في ظل التقييد السعري، وما يصل إلى 87% تحت بقدر ما يشاء (ad libitum) تغذية23نحن نفترض أن انخفاض معدل البقاء الذي لاحظناه في مستعمرتنا (حوالي 13%) مقارنة بالتقرير السابق يعود إلى الاختلافات في كيفية تربية الحيوانات، والتي تعكس بدورها الأهداف المختلفة لعملية الاستزراع لدينا وتلك الخاصة بالدراسة السابقة. فقد صُمم البروتوكول الخاص بنا للحفاظ على مستعمرات كبيرة تتكاثر باستمرار، بدلاً من زيادة معدل بقاء المجموعات الفردية إلى الحد الأقصى. وبناءً على ذلك، أبقينا الحيوانات بكثافات عالية نسبياً، على عكس الدراسة السابقة التي قامت بتربية حيوانات معزولة من مرحلة البيضة حتى البلوغ في أقفاص فردية.23نحن نفترض أن طريقة الاستزراع عالية الكثافة الموصوفة هنا قد تزيد من معدلات النفوق مقارنة بالتربية في عزل، لا سيما خلال المراحل الحورية المبكرة، حيث قد تكون الأفراد أكثر حساسية للتزاحم أو التنافس. وفي أقفاصنا الأكبر حجماً، قد يكون التباين في جودة النبات قد لعب دوراً أيضاً، مقارنة بنهج التربية الفردية الذي اعتمد على تغذية الأفراد بـأقراص ذات حجم محدد مقطوعة من أوراق النبات.23ومع ذلك، وعلى الرغم من انخفاض معدل البقاء على قيد الحياة نسبياً، فقد أنتجت المستعمرة لدينا باستمرار أعداداً كبيرة من البيوض وظلت مستقرة بمرور الوقت (الشكل 1, الشكل 3, جدول 1، و جدول ٢). وهذا يشير إلى أن النهج الذي نصفه هنا فعال في الحفاظ على مستنبت مختبري طويل الأمد.
العوامل المؤثرة على البقاء ومحددات البروتوكول
من المرجح أن تؤثر عدة عوامل في هذا البروتوكول على معدلات البقاء، لذا يجب التحكم فيها بدقة. وتعد الكثافة السكانية معلماً هاماً، حيث قد يؤدي الازدحام إلى تقليل فرص البقاء، خاصة خلال مراحل الأعمار اليرقية المبكرة. وهناك معلم آخر يؤثر على البقاء وهو الترطيب الكافي، لا سيما في مراحل الأعمار اليرقية المبكرة. تعتمد جميع الإجراءات والتوقيتات الموصوفة في البروتوكول على الظروف البيئية المحددة المستخدمة في هذه الدراسة. ومع ذلك، فإن التغيرات في الرطوبة أو درجة الحرارة أو تدفق الهواء أو نوع النبات قد تؤثر على وتيرة رذاذ الماء، ومدى تكرار الحاجة لاستبدال أوراق الشجر، ووقت فقس البيض، ومعدل البقاء العام. فعلى سبيل المثال، في ظروف الاستزراع الأكثر جفافاً، قد تكون هناك حاجة إلى رذاذ ماء واستبدال للنباتات بشكل أكثر تكراراً للحفاظ على الترطيب. كما قد تؤثر أنواع النباتات المختلفة على التغذية والنمو. ويجب تعديل هذه العوامل بناءً على ظروف التربية والأهداف التجريبية. وبالنسبة للتطبيقات التي تتطلب معدلات بقاء عالية لليافعين، أو تتبعاً فردياً، أو اختبارات سلوكية، فقد يكون من الأفضل استخدام كثافات بدئية أقل.
الإفصاحات
يصرح المؤلفون بأنه لا توجد تضاربات في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا المشروع من خلال منحة مؤسسة العلوم الوطنية رقم IOS 22207477 المقدمة لـ CGE، وهو باحث في معهد هوارد هيوز الطبي. ونقر بأن Carausius morosus يُعتقد أن موطنها الأصلي هو تاميل نادو في الهند، وأن المستنبتات المختبرية لهذا النوع قد تمت صيانتها خارج الهند منذ عام 1908 على الأقل. ونتوجه بخالص الشكر إلى ستانيسلاف غورب وتيس بوشر (جامعة كيل) لتوفير المجموعة الأولى من البالغين المستخدمة في إنشاء مستنبتنا، وإلى جميع أعضاء مختبر Extavour على دعمهم، بما في ذلك عضو المختبر السابق الدكتور أوبيندرا بهاتاراي (الانتساب الحالي: جامعة براون)، الذي قام بتأسيس المستعمرة الأولى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أكياس بولي بروبيلين قابلة للتعقيم بالأتوكلاف، 30.5 cm × 61 cm | VWR | 95042-554 | للتخلص من نفايات الحشرات والبيض والأقفاص |
| حاوية مخاطر بيولوجية | N/A | N/A | للتخلص منها بعد التجميد |
| ملاقط بلاستيكية غير حادة | Amazon | B07YZ5FB27 | لجمع ومناولة البيض واليرقات حديثة الفقس |
| غرفة يتم التحكم في مناخها أو حاضنة | N/A | N/A | للحفاظ على درجة حرارة 23 °C، ورطوبة نسبية 70% RH، ودورة ضوئية (ضوء:ظلام) 12:12 ساعة |
| قفازات تستخدم لمرة واحدة | N/A | N/A | لجمع البيض ومناولة النفايات |
| أطباق بتري تستخدم لمرة واحدة، 150 × 15 mm | VWR | 25384-326 | لجمع البيض |
| أطباق بتري تستخدم لمرة واحدة، 60 × 15 mm | VWR | 25384-092 | لتحضين البيض |
| أوراق شجر طازجة (أوراق اللبلاب، أو العليق، أو الورد) | N/A | N/A | مصدر غذاء خالٍ من مبيدات الآفات |
| مجمد (فريزر)، -20 °C | N/A | N/A | للقتل الرحيم/التخلص، وتجميد البيض أو النفايات قبل التخلص منها |
| أقفاص شبكية للحشرات | Amazon | B09GS2CH1G | تستخدم لإيواء الحشرات |
| زجاجة رش، 250 mL | Amazon | B000H88PCU | لرش الأقفاص الشبكية بالرذاذ |
| وعاء زجاجي طويل، ارتفاع 18–23 cm | N/A | N/A | يستخدم لحفظ الماء وسيقان النباتات |
| ماء صنبور | N/A | N/A | للترذيذ والحفاظ على رطوبة أوراق الشجر |
| سطح أو صينية فرز بيضاء | N/A | N/A | للتمييز بين البيض والفضلات أثناء الفرز |
المراجع
- Adamski Z, et al. Beetles as model organisms in physiological, biomedical and environmental studies: a review. Front Physiol. 2019;10:319.
- Schwander T, et al. On the repeated evolution of parthenogenesis in stick insects. Evolution. 2026;80(3):513-24.
- Arias AM. Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century. Methods Mol Biol. 2008;420:1-25.
- Dürr V, König Y, Kittmann R. The antennal motor system of the stick insect Carausius morosus: anatomy and antennal movement pattern during walking. J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 2001;187(2):131-44.
- Roth HL. XIX. Observations on the growth and habits of the stick insect, Carausius morosus, Br.; intended as a contribution towards a knowledge of variation in an organism which reproduces itself by the parthenogenetic method. Trans R Entomol Soc Lond. 1917;64(3-4):345-86.
- Pijnacker LP. The maturation divisions of the parthenogenetic stick insect Carausius morosus Br. (Orthoptera, Phasmidae). Chromosoma. 1966;19(1):99-112.
- Browaeys-Poly E. Extracellular matrix of the regeneration chamber and plasma membranes of the epidermis during leg regeneration in an insect Carausius morosus. Tissue Cell. 1991;23(1):41-55.
- Di Cristina G, et al. Pioneering genome editing in parthenogenetic stick insects: CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in Medauroidea extradentata. Sci Rep. 2025;15(1):2584.
- Cavallin M. [“Substitutive polyembryony” and the problem of germinal line origin in the phasma Carausius morosus Br]. C R Acad Hebd Seances Acad Sci D. 1971;272(3):462-5.
- Giorgi F, Cecchettini A, Masetti M. Changes in the patterns of proteins stored and synthesized by developing embryos of the stick insect Carausius morosus Br. Comp Biochem Physiol B. 1990;95(1):107-13.
- Pijnacker LP, Godeke J. Development of ovarian follicle cells of the stick insect, Carausius morosus Br. (Phasmatodea), in relation to their function. Int J Insect Morphol Embryol. 1984;13(1):21-8.
- Pijnacker LP. Effect of centrifugation of the eggs on the sex of Carausius morosus Br. Nature. 1966;210(5041):1184-5.
- Hales KG, Korey CA, Larracuente AM, Roberts DM. Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system. Genetics. 2015;201(3):815-42.
- Truman JW, Riddiford LM. The evolution of insect metamorphosis: a developmental and endocrine view. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2019;374(1783):20190070.
- Truman JW, Riddiford LM. The origins of insect metamorphosis. Nature. 1999;401(6752):447-52.
- Bedford GO. Description and development of the eggs of two stick insects (Phasmatodea: Phasmatidae) from New Britain. Aust J Entomol. 1977;15(4):389-93.
- Kim MJ, et al. Development of a phenology model for egg hatching of walking-stick insect, Ramulus mikado (Phasmatodea: Phasmatidae) in Korea. Forests. 2023;14(9):1710.
- Lee J, et al. Temperature-dependent development and oviposition models of Ramulus irregulariterdentatus (Phasmida: Phasmatidae). J Asia Pac Entomol. 2018;21(3):903-13.
- Donoughe S, Extavour CG. Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus. Dev Biol. 2016;411(1):140-56.
- Conle O, Hennemann F, Riquelme PV, Kneubühler B. Phasmatodea [Internet]. 2000. Available from: https://www.phasmatodea.com/
- Ventura MK, Stull VJ, Paskewitz SM. Maintaining laboratory cultures of Gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology. J Vis Exp. 2022; (184):e63277.
- de Miranda JR, et al. Virus diversity and loads in crickets reared for feed: implications for husbandry. Front Vet Sci. 2021;8:642085.
- Roark AM, Bjorndal KA. Bridging developmental boundaries: lifelong dietary patterns modulate life histories in a parthenogenetic insect. PLoS One. 2014;9(11):e111654.
إعادة الطباعة والأذونات
