مقالة منهجية

اختبار التصوير القائم على الصفائح لقياس الاستجابات الدورية الضوئية في نيوروسبورا كراسا باستخدام تطور البروتوبيريثيسيا

DOI:

10.3791/71271

⸱

يونيو 9, 2026

 , 
1Center for Computational and Integrative Biology (CCIB) Rutgers, The State University of New Jersey, 2Rutgers University-Camden, Department of Biology Rutgers, The State University of New Jersey, 3Institute for Empowering Equitable Education in STEM (E3-STEM)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقوم اختبار البروتوبيريثيسيا بقياس الاستجابات الدورية الضوئية في نيوروسبورا كراسا من خلال قياس تكوين البروتبريثيسيا تحت دورات محددة من الضوء والظلام. توفر هذه الطريقة القائمة على الصفائح نهجا بسيطا وقابلا للتوسع لمقارنة الاستجابات التطورية المعتمدة على فترة الضوء عبر الظروف التجريبية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نيروسبورا كراسا هو نموذج كائن حي راسخ لدراسة التوقيت البيولوجي والتطور المنظم بالضوء. اختبار البروتو بريثيسيا (PPA) هو طريقة تصوير تعتمد على الصفائح لقياس الاستجابات الدورية الضوئية عن طريق قياس تكوين البروتوبريثيسيا كمخرج تطوري. هدف هذا البروتوكول هو توفير سير عمل قابل للتكرار والتوسع لتقييم كيفية تأثير دورات الضوء والظلام المحددة على التطور الجنسي الفطري. في هذا الاختبار، تزرع المزارع الفطرية على وسط تقاطع صناعي تحت ظروف فترة ضوئية مضبوطة، تليها إزالة موحدة لمخلوقات السطح لتحسين التصور. يتم قياس البروتوبيريثيسيا عن طريق العد اليدوي المعتمد على الصورة، ويستخدم متوسط العد لكل لوحة للمقارنات الإحصائية عبر ظروف فترة الضوء. على عكس الأساليب السابقة، يدمج PPA ظروف الزراعة الموحدة، والتعرض الضوئي المسيطر عليه، والتصوير القائم على الربع لتمكين مقارنات كمية قابلة للتكرار عبر السلالات. يمتد هذا السير إلى ما هو أبعد من البروتوكول الأساسي من خلال إنشاء إطار عمل متسق وقابل للتوسع لقياس الناتج التنموي المعتمد على فترة الضوء تحت ظروف تجريبية محددة. تتطلب الطريقة حوالي أسبوع من التلقيح حتى التحليل ويمكن تطبيقها على عدة سلالات تحت ظروف بيئية محددة. يوفر PPA منصة بسيطة وسهلة الوصول للتحليل المقارن لتطور الفطريات المعتمد على فترة الضوء في ظروف مختبرية مضبوطة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقوم اختبار البرتوبريثيسيا (PPA) بقياس الاستجابات الضوئية الدورية في فطر نيوروسبورا كراسا. تقيس العديد من الكائنات الحية طول النهار والليل لتنسيق العمليات البيولوجية في ظاهرة تعرف بالفوتوبريودية 1,2,3,4,5,6,7,8. في هذا الاختبار، يعمل تطور البنية الجنسية الأنثوية، البروتوبريثيسيوم، كبديل قابل للقياس يعتمد على الضوء للاستجابة الدورية الضوئية. على الرغم من أن الفوتوبريودية تم توصيفها جيدا في النباتات من خلال تجارب الفجر3، إلا أن هناك طرقا أقل توحيدا لقياس الاستجابات الدورية الضوئية في حقيقيات النواة غير التمثيلية ضوئيا مثل الفطريات. يوفر N. crassa نظام نموذج قابل للتنفيذ لهذا الغرض بسبب معرفته جيناته ومسارات تطوره المستجابة للضوء. لوحظ تنظيم توقيت التكاثر المعتمد على فترة الضوء عبر الكائناتالحائزة 1,2,3,4,5,6,7,8، مما يدعم أهمية الاستجابات الفسيولوجية المدفوعة بالضوء؛ ومع ذلك، لا تزال الدراسات الميكانيكية في الفطريات محدودة بسبب نقص الاختبارات القابلة للتكرار.

البروتوبريثيسيا هي هياكل جنسية أنثوية مبكرة في N. crassa. تنشأ من الأسكوجونيا، التي تطور تريكوجينات ملفوفة تندمج مع الهيفا أو الكونيديا من النوعالمقابل للتزاوج 9. بعد الاندماج، تدخل نوى الشريك "الذكر" إلى البروتوبريثيسيوم. عدد البروتوبريثيسيا الناتج منظم موسميا ويعمل بقوةبالضوء 10. يعد تنظيم الدورات الضوئية مركزيا في علم البيئة، وعلم الأحياء الزمنية، وفسيولوجيا الفطريات لأن العديد من العمليات التي تتحكم بها الساعة تعتمد على الضوء. يؤثر الضوء على العديد من المسارات الجينية، بما في ذلك المستقبلات الضوئية، الكيناز، وآليات نقل الضوء المرتبطة بالتطور الجنسي11. البروتوبريثيسيا مناسبة جدا لقياس النتاج الضوئي لأنها يمكن رؤيتها بسهولة تحت المجهر وتستجيب بحساسية للضوء.

على الرغم من أهمية الفوتوبريوتيسيا في الفطريات، إلا أن هناك عددا قليلا من الاختبارات الموحدة والقابلة للتكرار لقياس إنتاج البروتبريثيسيا تحت دورات ضوئية مضبوطة. يعد الاختبار المتوسط الإنتاجية والقائم على الصفائح ذا قيمة لأن الفطريات كائنات نموذجية رخيصة وسهلة الصيانة، مما يتيح تحليلا منهجيا للتطور الجنسي الناتج عن الضوء ووظائف الجينات. ركزت معظم أبحاث الفوتوبيرودية على النباتات، بينما تظل الأطر الكمية المكافئة للأنظمة الفطرية محدودة. في كائنات أخرى، بما في ذلك الحشرات، تصنف الظواهر المعتمدة على الضوء مثل السبات بشكل جيد7، لكن الأساليب المماثلة في الفطريات تفتقر. تقيد هذه الفجوة المقارنة القابلة للتكرار للاستجابات الدورية الضوئية عبر السلالات والظروف التجريبية.

يبني التحليل على دراسة أجريت عام 2004 قست إنتاج البروتوبيريثيسيا عبر أطوال أيام متزايدة، من الظلام الثابت إلى الضوء الثابت، في طفرة الشريط (bd) (RAS-1bd)، والتي استخدمت في الدراسات اليومية 4,12. لوحظت تغيرات تعتمد على فترة الضوء في إنتاج البروتوبريثيسيا في هذا الخلفية. يتكيف سير العمل الحالي ويوسع هذا النهج باستخدام السلالة المرجعية FGSC 2489، المرتبطة بتسلسل الجينوم الكامل وموارد القضاء13,14. يقوم الاختبار بقياس متوسط عدد البروتوبيريثيسيا الناتج تحت فترات ضوئية محددة خلال أسبوع واحد كمؤشر على الاستجابة الدورية الضوئية. يقوم هذا النهج بتوحيد ظروف الزراعة والتصوير والقياس، مما يمكن من المقارنة القابلة لإعادة الإنتاج عبر الظروف التجريبية والسلالات. تشمل التطورات المنهجية الرئيسية ظروف الزراعة الموحدة المعتمدة على الصفائح، ومعايير التعرض المحددة، والتصوير القائم على الربع الطبقي، وسير عمل القياس القابل للتكرار.

يقوم هذا البروتوكول بقياس الاستجابات الدورية الضوئية في N. crassa عن طريق قياس تكوين البروتو بريثيسيا بعد التعرض لدورات محددة من الضوء والظلام. لكل حالة دورية ضوئية، تستخدم أربع نسخ بيولوجية، كل منها يتكون من صفيحة عبور صناعية (SC) ملقحة بشكل مستقل. يتم جمع أربع صور لكل لوحة ويتم قياسها لتوليد قيمة واحدة لكل نسخة بيولوجية للتحليل الإحصائي. تحضن الصفائح لمدة سبعة أيام تحت فترات ضوئية معايرة (مثل دورات 12 ساعة:12 ساعة أو 8 ساعات:16 ساعة من الضوء والظلام).

يتم وضع جهاز تسجيل بيانات داخل غرفة النمو لتسجيل شدة الضوء ودرجة الحرارة والرطوبة بشكل مستمر، مما يتحقق من استقرار الظروف البيئية. تحافظ شدة الضوء فوق 1000 لوكس، حيث تقلل المستويات المنخفضة من إنتاج البروتبريثيسيا. يتم تجنب الإضاءة المفرطة لمنع ارتفاع درجة حرارة الحجرة والتأثيرات الحرارية المربكة. بعد الحضانة، تزال الماكروكونيديا بلطف باستخدام منشفة ورقية مبللة مشبعة بنسبة 70٪ إيثانول. يتم تصوير أربعة أرباع متباعدة بشكل متساو عند محيط كل لوحة بتكبير 40× باستخدام مجهر ستيريو تحت إضاءة المجال الساطع. يتم عد البروتوبيريثيسيا يدويا باستخدام حزمة معالجة الصور، ويستخدم متوسط العد لكل لوحة للمقارنات الإحصائية عبر فترات الضوء.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكواشف والبرمجيات والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير الوسائط والمواد

(الوقت المقدر: 1–1.5 ساعة وقت نشاط؛ تبريد ليلا اختياري)

  1. تحضير وسائط التهجين الصناعي (SC)
    1. حضر متوسط SC: 0.2٪ سكاروز، 5 ميكروغرام/لتر بيوتين، 1.5٪ أجار، وأملاح ويسترغارد (pH 6.5 مع 1 N NaOH)15.
    2. استخدم الوسيط بنظام التعقيم (autoclave). دعه يبرد إلى 50–55 درجة مئوية حتى يصل إلى حالة الصب.
      تحذير: استخدم قفازات مقاومة للحرارة عند إزالة القارورات من جهاز الأوتوكلاف.
  2. أطباق الصب
    1. بيبت 10 مل من الوسط المنصهر في أطباق بترى بقطر 60 مم باستخدام ماصة ذات مرة واحدة.
    2. اترك الألواح لتتصلب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30–45 دقيقة.
    3. الألواح المقلوبة على درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 4 أسابيع.
      ملاحظة: حافظ على ترطيب الطبق. لا تخزن الصحون لأكثر من 4 أسابيع عند 4 درجات مئوية.
  3. تحضير السلالات الفطرية
    1. ازرع كل سلالة في أنابيب اختبار زجاجية صغيرة تحتوي على وسط كامل أو بسيط محضر وفقا لتعليمات دليل المختبر15.
    2. تحضن الأنابيب في ظلام دائم (DD) عند 30 درجة مئوية حتى يتكون غطاء ميسيليمي مرئي على سطح الأنبوب (عادة 2-3 أيام).
      تحذير: التعامل مع زراعة الفطريات باستخدام الممارسات الميكروبيولوجية القياسية والعمل ضمن خزانة السلامة الحيوية لتقليل التلوث.

2. تلقيح الألواح

(الوقت المقدر: 15–30 دقيقة لكل مجموعة من اللوحات)

  1. كونيديا الفطريات المنتقلة
    1. قم بتطعيم كل لوحة SC باستخدام تقنية التعقيم وحلقة تلقيح.
    2. ضع الكونيديا في مركز الصفيحة لضمان النمو الموحد (الشكل 1A). تظهر الكونيديا كأبواغ بودريكية فاتحة اللون تغطي سطح المستعمرة.
    3. تطبيق حوالي 1–2 ميكرولتر من التعليق المخروطي المركز (أو حلقة مكافئة) لتوحيد التلقيح عبر الصفائح.
  2. تحضير الألواح للحضانة
    1. أغلق الألواح بإحكام لمنع التلوث مع السماح بتبادل الغاز.
    2. ضع علامة على كل لوحة باسم السلالة، التاريخ، وحالة فترة الضوء.

3. إعداد علاج الدورة الضوئية

(الوقت المقدر: 10 دقائق إعداد + حضانة لمدة 7 أيام)

  1. معايرة غرفة النمو
    1. اضبط درجة حرارة الحجرة على 25 درجة مئوية.
    2. اضبط الرطوبة على 50٪ (النطاق المقبول: 40٪–60٪) لمنع جفاف الطبق.
    3. دورات التصوير البرنامجي: EQ (الاعتدال): 12 ساعة ضوء / 12 ساعة مظلمة وSDP (نهار قصير): 8 ساعات ضوء / 16 ساعة مظلمة
    4. اضبط شدة الضوء على >1000 لوكس على مستوى اللوحة باستخدام مقياس ضوء معاير. تجنب الشدة التي تزيد درجة حرارة الحجرة فوق 25 درجة مئوية.
      ملاحظة: تأكد من أن أضواء الحجرة لا تسخن الداخل بشكل زائد.
      تحذير: لا تستخدم الأكياس البلاستيكية أو البارافيلم للحفاظ على الرطوبة، لأنها تحد من تبادل الغازات وتعيق نمو الفطريات. إذا لم يكن هناك تحكم في الرطوبة، ضع خزان مياه داخل الحجرة.
  2. وضع الألواح في الحجرة
    1. رتب الأطباق بشكل متساو على الرفوف لضمان تعرض الضوء بشكل متساو.
    2. ضع جهاز تسجيل بيانات داخل الغرفة لمراقبة درجة الحرارة والرطوبة باستمرار والتحقق من استقرار الظروف البيئية.
  3. ابدأ الفحص
    1. حضانة الألواح خلال فترة التصوير المبرمجة لمدة 7 أيام دون إزعاج.

4. مراقبة وتحضير الألواح للتصوير

(الوقت المقدر: 15–20 دقيقة لكل صحن)

  1. إزالة الألواح من الحجرة
    1. أزل الألواح بعد 7 أيام من الحضانة.
    2. افحص الصفائح بحثا عن نمو مخروطية وتكوين البروتبريثيسيا.
  2. ألواح نظيفة للرؤية
    1. إزالة الكونيديا السطحية من غطاء اللوحة وسطح الأجار باستخدام مناشف ورقية ممزقة (الشكل 1B).
    2. بلل منشفة ورقية ب 1–2 مل من الإيثانول بنسبة 70٪. امسح سطح الصفيحة بلطف 3–5 مرات لإزالة الكونيديا. اترك الألواح تجف في الهواء لمدة 1–3 دقائق قبل التصوير (الشكل 1C).
      تحذير: الإيثانول قابل للاشتعال؛ ابتعد عن مصادر الحرارة.
      ملاحظة: تجنب الضغط المفرط. لا تسحب المنشفة على سطح الأجار، لأن ذلك قد يتلف الوسط أو يزعج البروتبريثيسيا.

5. تصوير البروتوبريثيسيا

(الوقت المقدر: 5 دقائق لكل طبق)

  1. استعد للتصوير
    1. قم بتركيب مجهر بإضاءة وتكبير متسقين (عادة 40×).
    2. تأكد من أن سطح اللوحة جاف وخال من الحطام.
  2. التقاط الصور
    1. صور أربعة أرباع متساوية المسافة عند محيط اللوحة باستخدام تكبير متسق.
    2. ضع علامة على كل صورة بالإجهاد، وحالة فترة الضوء، ورقم اللوحة، وموقع الربع.
    3. احفظ الصور بتنسيق متسق (مثل TIFF) للتحليل.

6. القياس الكمية وتحليل البيانات

(الوقت المقدر: 10–20 دقيقة لكل لوحة للعد؛ 15–25 دقيقة للتحليل)

  1. كونت بروتوبريثيسيا
    1. افتح كل صورة في حزمة معالجة الصور.
    2. استخدم إضافة Cell Counter لعد البروتوبريثيسيا يدويا. استبعد الفقاعات، والقطع الأثرية الحوافية، والهياكل الغامضة. عد البروتوبريثيسيا المجمعة كوحدات فردية ومميزة.
    3. عد السجلات لكل ربع وحساب المتوسط لكل لوحة.
  2. تحليل البيانات
    1. استيراد البيانات الكمية إلى برنامج التحليل الإحصائي.
    2. قم بإجراء تحليل إحصائي باستخدام اختبار t الخاص بويلش للمقارنات الموضحة في الشكل 2.
    3. توليد رسوم بيانية تقارن بين معالجات فترة الضوء أو الإجهادات أو النسخ المتغيرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد التطعيم بالسلالة البرية، غطت الكونيديا سطح SC خلال 36–48 ساعة. بعد 7 أيام من التعرض للضوء، تكونت طبقة مخروطية كثيفة وتمت إزالتها بمنشفة ورقية مبللة مشبعة بنسبة 70٪ إيثانول (الشكل 1). كشفت هذه الخطوة عن البروتوبريثيسيا الأساسية دون أن تعطل بنيتها. تحت المجهر، ظهرت البروتوبريثيسيا كهياكل داكنة دائرية موزعة على سطح الصفيحة. أظهرت هذه البنى شكلا كرويا وكانت مميزة عن الخيوط المحيطة. داخل الصفيحة، كانت البروتبريثيسيا عادة موحدة في الحجم، وتختلف توزيعها حسب ظروف فترة الضوء. أظهرت الصفائح التي ن...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هدف PPA هو استخدام التطور الجنسي في الفطريات كبديل لتحديد ما إذا كان الكائن الحي يدرك فترة ضوئية محددة. من خلال قياس متوسط عدد البرتوبريثيسيا الناتج تحت دورات ضوئية مختلفة، يمكن تقييم الاستجابات الدورية الضوئية ومقارنتها عبر الظروف. تماشيا مع الملاحظاتالسابقة 4،16، يظهر N. crassa إنتاجا أعلى للبروتوبريثيسيا تحت فترات ضوئية شبيهة بالاعتدال، بينما تعطي ظروف اليوم القصير هياكل أقل (الشكل 2). يو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون كاثرين ماينزا، ميو ثينزار هتين أونغ، آي ثينزار هتين أونغ، ومورغان بارتلسون على دعمهم ومساعدتهم ومساهماتهم في هذا المشروع. كما يشكر المؤلفون قسم الأحياء في جامعة روتجرز–كامدن ومركز علم الأحياء الحاسوبي والتكاملي (CCIB) لتقديمهم الدعم المؤسسي ومرافق البحث والموارد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AgarBD90000-786لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Alcohol burner flameWards470346-104لتعقيم حلقة التطعيم
Ammonium iron sulfate hexahydrateSupelcoFX0245-1لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Ammonium nitrate (NH4NO3)BeanTown ChemicalBT134170-250Gللوسائط الدنيا
AutoclaveVWR International76683-456لتعقيم الأواني الزجاجية والوسائط
Biological Safety CabinetThermoFischer Scientific 1323TSلتقليل تلوث الأقراص، والمختبر.
BiotinVWR97061-444لوسائل التقاط الصليبية التركيبية
Boric acid (H3BO3)Electron Microscopy Sciences100503-696لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Calcium chloride (CaCl2)AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLCJT1311-1لوسائل التقاط الصليبية التركيبية
Calcium chloride dihydrate (CaCl2·2H2O)Sigma-Aldrich223506-25Gللوسائط الدنيا
Citric acid monohydrate (C6H8O7·H2O)Sigma-Aldrich1002440500لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Copper sulfate pentahydrate (CuSO4·5H2O H2O)BeanTown ChemicalBT121245-1KGلوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
EthanolDecon Labs71001-754يستخدم لإزالة الرشاشيات من سطح اللوحة وتعقيم حلقة التطعيم
FIJI/ImageJNational Institutes of Health (NIH)N/Aلتحليل الصور/العد
GlovesSW Safety Solutions76382-944للسلامة
GraphPad PrismGraphPad Software, LLCN/Aلإجراء الاختبارات الإحصائية وإنشاء الرسوم البيانية
Growth ChamberCaron Products & Services6320 & 6340 Seriesقابلة للبرمجة لدورات الفترة الضوئية
HOBO Data LoggerOnset Computer CorporationMX2202لتسجيل شدة الضوء ودرجة الحرارة
Inoculation loopVWR International10806-354لنقل المواد الفطرية إلى أطباق بتري
Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4·7H2O)BeanTown ChemicalBT145380-1KGلوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Manganese sulfate monohydrate (MnSO4·H2O H2O)Sigma-Aldrich1059410250لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Microscope (Leica S6 D Greenough Stereo Microscope)Leica Microsystems10446297للتصوير
Neurospora crassa FGSC 2489Fungal Genetics Stock Center74-OR23-1VA, JCM19069سلالة فطرية
Paper TowelsKimberly-Clark Professional, Scott and Kleenex6666114لصب الوسائط
Permanent MarkerSharpie30072لتسمية الأقراص
Petri DishesVWR International25384-164لصب وسائل التقاط الصليبية التركيبية
PipettesVWR International75816-090لصب الوسائط
Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)BeanTown ChemicalBT225070-500Gلوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Potassium nitrate (KNO3)Sigma-Aldrich221295-100Gلوسائل التقاط الصليبية التركيبية
Small Disposable Glass Test TubesVWR International470211-698للنمو الأولي للسلالات الفطرية
Sodium chloride (NaCl)VWR InternationalBDH9286-500Gلوسائل التقاط الصليبية التركيبية
Sodium citrate dihydrate (Na3C6H5O7·2H2O)VWR97061-008للوسائط الدنيا
Sodium hydroxide (NaOH)AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLCJT5635-2لوسائل التقاط الصليبية التركيبية
Sodium molybdate dihydrate (Na2MoO4·2H2O)Supelco1.06524.1000لوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
SucroseVWR InternationalBDH9308-500Gلوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا
Zinc sulfate heptahydrate (ZnSO4·7H2O)BeanTown ChemicalBT122545-500Gلوسائل التقاط الصليبية التركيبية/الوسائط الدنيا

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Protoperithecia AssayFungal Sexual DevelopmentLight Dark CyclesSynthetic Crossing MediumImage Based CountingPhotoperiod ExposureDevelopmental Output
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة