يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحليل الأيض بالرنين المغناطيسي النووي لوسائط زراعة الأجنة البشرية المستهلكة: التحقق من الطريقة والاعتبارات التقنية

97 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/71285

⸱

يوليو 31, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Reproductive Medicine and Gynaecological Endocrinology, University Medical Centre Maribor, 2Faculty of Medicine, University of Ljubljana, 3National Institute of Chemistry, 4EN-FIST Centre of Excellence, 5Faculty of Chemistry and Chemical Technology, University of Ljubljana, 6Department of Reproductive Science, Manipal Academy of Higher Education

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولا لجمع وتحضير وتحليل وسط زراعة الأجنة البشري المستهلك باستخدام مطيافية الرنين المغناطيسي النووي (NMR)، مما يتيح الكشف القابل للتكرار عن مستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي من عينات بمقياس ميكرولتر في ظروف الزراعة السريرية الروتينية.

الملخص

تحتوي وسائط زراعة الأجنة البشرية المستهلكة على مستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي يمكنها توفير قراءة غير جراحية لفسيولوجيا الجنين قبل الانغراس. ومع ذلك، فإن التحليل الأيضي القائم على الرنين المغناطيسي النووي (NMR) لهذه العينات يمثل تحديا تقنيا لأن ظروف زراعة الأجنة الروتينية تتضمن أحجام ميكرولتر، ومكملات البروتين، وطبقات زيت البرافين التي تولد إشارات خلفية وتؤثر على جودة الطيف. هنا، نقدم سير عمل محسب لميتابولوم الرنين المغناطيسي النووي لوسائط زراعة الأجنة المستهلكة يتضمن جمع قطرات محكمة لتقليل تلوث الزيت، وبطانات أنابيب الإيثيلين بروبيلين المفلورة (FEP) لعزل العينة كيميائيا عن المرجع الخارجي (TMSP) مع استيعاب أحجام الميكرولتر، والحصول على تسلسل نبضات Carr-Purcell-Meiboom-Gill لقمع إشارات الخلفية الجزيئية الكبيرة. يتيح البروتوكول الكشف والقياس المتسق للمستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي من الأجنة البشرية المزروعة بشكل فردي، ويدعم التحليل القابل للتكرار في ظروف المختبر الروتينية. نظرا للعديد من التحديات التقنية، يجب التحقق من صحة الطريقة بشكل صحيح قبل استخدامها لأغراض بحثية أو سريرية.

المقدمة

خلال التطور قبل الزرع في المختبر، تستهلك الأجنة باستمرار وتطلق مستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي في الوسط المحيط. لذلك، فإن تركيب وسط زراعة الأجنة المستهلك (SECM) يعكس النشاط الأيضي للجنين ويوفر قراءة وظيفية غير جراحية لفسيولوجيا الجنين وكفاءة النمو 1,2. قد يكمل تحليل هذا البصمة الأيضية طرق التقييم التقليدية ويحسن استراتيجيات اختيار الأجنة في تكنولوجيا الإنجاب المساعد 3,4. على وجه الخصوص، تم ربط التغيرات في تغير الأحماض الأمينية والكربوهيدرات بإمكانية تطور الجنين وقابليته للبقاء 5,6,7.

يستخدم مطيافية الرنين المغناطيسي النووي (NMR) على نطاق واسع في التنميط غير المستهدف للمستقلبات لعينات بيولوجية متنوعة، بما في ذلك وسائط زراعة الأجنة المستهلكة 8,9,10. ومع ذلك، لا يزال تحليل هذه العينات تحديا تحليليا11. في الممارسة السريرية الروتينية، يتم زراعة الأجنة في بيئات دقيقة محددة مصممة لمحاكاة الظروف الفسيولوجية. يتم تعزيز وسط الزراعة بالبروتينات، عادة الألبومين، لتثبيت الضغط الأسموزي، وربط المركبات السامة، وتوفير جزيئات حاملة للدهون وعوامل النمو التي تدعم النمو الطبيعي12. لمنع التبخر والحفاظ على تركيزات ثابتة للمذاب، يتم تغطية قطرات الزراعة بزيت بارافين معقم13.

تولد الدهون الناتجة عن مكونات الزيت والبروتين المسطحة إشارات خلفية واسعة تحجب الرنين الضيق الناتج عن المستقلبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض مثل الجلوكوز، والبيروفات، والأحماض الأمينية. علاوة على ذلك، يتطلب تحليل أحجام عينات الميكرولتر في أنابيب NMR القياسية بقطر 5 مم تخفيفا كبيرا للوصول إلى الحجم النشط لملف التردد الراديوي. يقلل هذا الانخفاض في تركيز المحللات بشكل كبير من نسبة الإشارة إلى الضوضاء (S/N)، مما يخفي المستقلبات منخفضة الوفرة ويعيق القياس القابل للتكرار. على الرغم من أن العديد من الدراسات طبقت معدلات الأيض القائمة على الرنين المغناطيسي النووي على وسائط زراعة الأجنة البشرية المستهلكة، فإن غياب بروتوكولات الجمع والتحضير الموحدة والقابلة للتكرار قد حد من قابلية التكرار والمقارنة بين الدراسات 8,9,11.

هنا، نقدم سير عمل استقلابی قائم على الرنين المغناطيسي النووي (الشكل 1) مصمم لتجاوز التحديات التقنية المرتبطة بأخذ عينات وتحليل وسائط زراعة الأجنة البشرية. يجمع هذا النهج بين جمع القطرات المتحكم به لتقليل انتقال الزيت، واكتساب حجم الميكرولتر باستخدام بطانات الإيثيلين البروبيلين المفلورة (FEP) لتجنب تشوهات التخفيف، وتخفيف الإشارات الجزيئية الكبيرة باستخدام تسلسل نبضات Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة بين يناير وأبريل 2023 في قسم الطب التناسلي والغدد الصماء النسائية، المركز الطبي الجامعي ماريبور، سلوفينيا. تم إجراء تحليل الرنين المغناطيسي النووي في المعهد الوطني للكيمياء في ليوبليانا، سلوفينيا. تم الحصول على موافقة مكتوبة مستنيرة من جميع المشاركين. حصل على موافقة كل من لجنة الأخلاقيات المؤسسية (رقم: UKC-MB-KME-1/21) واللجنة الوطنية لأخلاقيات الطب (رقم: 0120-37/2021/15).

1. تصميم الدراسة

ملاحظة: حللت الدراسة وسائط زراعة الأجنة البشرية باستخدام استقلاب الميتابولوميات القائمة على الرنين المغناطيسي النووي (NMR).

  1. جمع عينات بعد زراعة جنين ممتدة بعد حقن الحيوانات المنوية داخل الخلايا البلازمية (ICSI). اجمع عددا متساويا من عينات التحكم غير المستهلكة والحضنة.

2. جمع العينات

  1. اجمع عينات وسائط زراعة الأجنة المستهلكة (SECM) بعد حضانة الجنين، كما هو موضح في الشكل 2.
  2. بعد إزالة الجنين من قطرة الزراعة، قم باستنشاق الزيت الزائد بعناية من سطح طبق الزراعة دون إزعاج الوسط (الشكل 2، الخطوة 1).
  3. باستخدام ماصة معقمة، يتم استنشاق حوالي 35 ميكرولتر من وسط الزراعة من القطرة الأصلية، مع ترك حوالي 5 ميكرولتر خلفه لتجنب سحب الزيت السطحي المتبقي. انقل هذا الحجم إلى طبق بتري معقم لتكوين قطرة جديدة (الشكل 2، الخطوة 2).
  4. تحت المجهر المجسم، افحص القطرة الجديدة بصريا. استنشق بحذر حوالي 30 ميكرولتر من هذه القطرة، مع ترك حوالي 5 ميكرولتر لتقليل انتقال الزيت. انقل هذا الحجم إلى موقع معقم ثان لتكوين قطرة أنظف (الشكل 2، الخطوة 3).
  5. افحص القطرة الثانية بصريا تحت التكبير. حدد المناطق التي تكون فيها قطرات الزيت أقل وضوحا. أدخل طرف الماصة في هذه المنطقة واسحب حوالي 25 ميكرولتر من الوسط، مع ترك حوالي 5 ميكرولتر خلفه لتقليل انتقال الزيت (الشكل 2، الخطوة 4).
  6. انقل فورا ال 25 ميكرولتر المجمع إلى أنبوب طرد مركزي دقيق معقم خال من RNase. تجنب لمس الجدران الداخلية للأنبوب أثناء صرف العينة لتجنب التلوث وفقدان العينة. قم بتجميد جميع العينات المجمعة فورا في النيتروجين السائل وتخزينها عند -80 درجة مئوية حتى تحليل الرنين المغناطيسي النووي (الشكل 2، الخطوة 5).
  7. جمع قطرات التحكم الحاضنة غير المستهلكة المطابقة (وسط حضن بدون أجنة) محضرة وحضنة ومعالجة تحت ظروف زراعة متطابقة باستخدام نفس أطباق الزرعة، وزيت متراكب، ومدة الحضانة، وبيئة الحاضنة، وإجراءات التعامل الموضحة أعلاه لتقليل التباين البيئي والتحيز المنهجي المحتمل.
    ملاحظة: الالتزام الصارم بنقل القطرات المتسلسل والفحص البصري يقلل بشكل كبير من تلوث النفط. في هذه المرحلة، يمكن إيقاف التجربة واستئنافها قبل معالجة العينات لمزيد من الفحص لجمع الرنين المغناطيسي النووي.

3. تحضير العينة لتحليل الرنين المغناطيسي النووي

  1. قم بإذابة العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة ~10 دقائق.
  2. تحضير خليط الرنين المغناطيسي النووي:
    1. انقل 25 ميكرولتر من SECM إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل. أضف 200 ميكرولتر من D₂O. قم بإضفاء الدوامة لمدة 10 ثوان ثم استخدم الطرد المركزي عند 1000 × جرام لمدة 10 ثوان في درجة حرارة الغرفة.
  3. إدخال الحمولة: انقل 225 ميكرولتر من الخليط إلى بطانة FEP.
  4. جهز أنبوب المرجع الخارجي.
    1. املأ أنبوب NMR بحجم 5 مم ب 150 ميكرولتر من D₂o يحتوي على 1 ملليمتر 3-(ثلاثي ميثيل سيليل)بروبيونيك-2,2,3,3-d4 حمض ملح الصوديوم (TMSP-d4).
  5. تجميع العينة: أدخل إدخال FEP في أنبوب الرنين المغناطيسي النووي وأغلقه بغشاء بارامي.

4. اكتساب الرنين المغناطيسي النووي والمعالجة الطيفية

  1. الحصول على 1اكتساب H-CPMG باستخدام تسلسل نبضات Bruker cpmgpr1d مع: 64 مسحا; 65,536 نقطة بيانات؛ تأخير الاسترخاء: 8 ثوان؛ العرض الطيفي: 11.9 كيلوهرتز؛ زمن الصدى: 400 ميكروثانية × 80 حلقة (فلتر T₂ فعال 32 مللي ثانية); إجمالي وقت الاستحواذ: ~15 دقيقة.
    ملاحظة: تم اختيار مدة مرشح CPMG T₂ الفعالة البالغة 64 مللي ثانية بناء على بروتوكولات الأيض المعتمدة للعينات البيولوجية التي تحتوي على البروتين، حيث توفر هذه القيمة قمعا فعالا للإشارات الجزيئية الكبيرة مع الحفاظ على رنينات الأيض منخفضة الوزن الجزيئي14.
  2. إجراء المعالجة الطيفية:
    1. الحصول على أطياف تحويل فورييه.
    2. طبق توسيع خط أسي بتردد 0.3 هرتز.
    3. قم بتصحيح الطور وتصحيح الأساس (phase) وخط الأساس (Basicline).
    4. الطيف المرجعي ل TMSP-d4 عند 0 جزء في المليون.
    5. التحولات الكيميائية المرجعية (δ) إلى إشارة TMSP-d4 الخارجية عند 0 جزء في المليون (0 جزء في المليون الأمريكي).
      ملاحظة: نظرا لأن خليط العينة داخل بطانة FEP (225 ميكرولتر) والمحلول المرجعي الخارجيTMSP-d 4 في الفجوة المحورية الخارجية (150 ميكرولتر) يشغلان هندسات وأحجام فيزيائية مميزة ضمن نافذة كشف ملفات الرنين المغناطيسي النووي النشطة، فإن شدة الإشارة المطلقة بينهما لا تتدرج بنسبة 1:1. يتطلب القياس المطلق المباشر باستخدام المرجع الخارجي منحنى معايرة هندسي خاص بالنظام. لذلك، وبالنظر إلى حجم العينات الثابت بدقة التكرار العالي في هذا البروتوكول، تم استخدام تكاملات الدلاء الخام مباشرة لتتبع التغيرات الأيضية النسبية بين العينات، مع استبعاد الحاجة إلى مرجع خارجي أو تطبيع شدة مجموع كلي.
  3. إجراء التقسيم الطيفي:
    1. استبعد منطقة رنين الماء (مثلا، 4.65–5.00 جزء في المليون) ومنطقة مرجعية TMSP-d4 (مثل -0.05–+0.05 جزء في المليون) قبل التثبيت.
    2. قسم الأطياف إلى دلاء بعرض متغير لتجنب انقسام القمم.
    3. استخدم تكاملات الدلو الخام للتحليل الإحصائي بدلا من التطبيع إلى إشارة TMSP-d4 الخارجية، حيث أن المرجع معزول فعليا في حجم الأنبوب الخارجي. يتجنب هذا النهج أخطاء القياس الناتجة عن اختلاف الأحجام النشطة للإدخال مقابل الأنبوب الخارجي.
    4. تصدير تكاملات الدلو كمصفوفة بيانات رقمية للتحليل الإحصائي.
      ملاحظة: يمثل كل "دلو" (أو حاوية للحوامل) التكامل العددي المجمع لجميع إشارات الرنين المغناطيسي النووي ضمن نطاق محدد من PPM. بينما تعكس هذه التكاملات التركيز النسبي للمجموعات الكيميائية الموجودة في ذلك النطاق، قد يحتوي دلو واحد على إشارات من عدة مستقلبات متداخلة أو فقط جزء من إجمالي إشارة استيض معين.

5. التحليل الإحصائي

  1. استيراد طيف H-CPMG واحدمعالج إلى بايثون (v3.12) باستخدام nmrglue15.
  2. إزالة المياه والمناطق الطيفية TMSP-d4.
  3. تصدير تكاملات الدلو للتحليل.
  4. قم بإجراء اختبارات إحصائية باستخدام SciPy (الإصدار 1.14.1):
    1. تقييم طبيعية كل دلو طيفي باستخدام اختبار شابيرو-ويلك.
    2. تطبيق تحليل التحليل المعاد (ANOVA) أحادي الاتجاه (للبيانات الموزعة طبيعيا) أو كرسكال-واليس (للبيانات غير المعلمية) لتحديد الدلاء التي تحتوي على فروق ذات دلالة إحصائية بين الوسائط الضابطة غير المستهلكة والوسائط المستهلكة.
    3. بالنسبة للدلاء التي تظهر فروقا كبيرة، قم بإجراء التعيين الهيكلي باستخدام مزيج من تجارب الرنين المغناطيسي النووي أحادي البعد وثنائي الأبعاد: 1 H-13C HSQC، 1 H-13C HMBC، و1 H-1H-1 H H COSY.
    4. قارن الارتباطات ثنائية الأبعاد الملحوظة مع قواعد البيانات القياسية (مثل HMDB) للتحقق من هوية المستقلبات التي تساهم في المجموعات التمييزية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم تلخيص سير العمل التحليلي للتحليل الأيضي غير المستهدف بالرنين المغناطيسي النووي لوسط زراعة الأجنة المستهلك في الشكل 1.

إزالة تلوث الزيت أثناء أخذ العينة
يوضح الشكل 2 عملية نقل القطرات المتسلسل المستخدمة لتقليل انتقال الزيت التراكيبي. أظهرت العينات التي تم جمعها دون استخدام دقيق للأنابيب رنينات هيدروكربونية واسعة تمتد عبر المنطقة الأليفاتية من الطيف (δ 0.5–2.3 جزء في المليون)، مما أدى إلى تشويه كبير في خط الأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة، تناولنا التحديات التحليلية الرئيسية المرتبطة بتحديد وقياس المستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي في وسط زراعة الأجنة المستهلك باستخدام أيض الرنين المغناطيسي النووي غير المستهدف. تظهر نتائجنا أن سير العمل المحسن يتيح الحصول على أطياف عالية الجودة وغنية بالمعلومات مناسبة للكشف الموثوق عن مستقلبات منخفضة الوزن الجزيئي.

ثبت أن نقل القطرات المتسلسل بعناية كان ضروريا لتقليل تلوث الزيت، الذي يولد رنينات واسعة تخفي إشارات الأيض منخفضة الوزن الجزيئي ذات الاهتم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا توجد لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

وقد دعمت هذه الوكالة السلوفينية للبحث والابتكار (ARIS) [رقم المشروع P3-0327].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
5 mm FEP tube linerSP Wilmad-LabGlass4682701Inner insert for coaxial NMR
5 mm NMR tubeSP Wilmad-LabGlass535-PP-7-SBOuter tube
6-well culture plateOosafeOOPW-SW02Embryo culture dish
Cryogenic liquid nitrogenMesserContact manufacturerSample snap-freezing
Deuterium oxide (D2O)EurisotopD214LNMR solvent
Micropipette (10–100 µL)Eppendorf4924000053Adjustable volume pipette
Microcentrifuge tubes, 1.5 mL, RNase-freeEppendorfN216966NSample collection and storage
Mineral oilVitrolifeVTL-10029Culture droplet overlay
NMR spectrometer, 600 MHzBrukerhttps://www.bruker.com/en/products-and-solutions/mr/nmr/avance-nmr-spectrometer.htmlSpectral acquisition
Pasteur pipetteFalconFAL-357575Droplet transfer
Pipette, single-channel mechanicalSartorius728060Sample handling
Pipette tips, sterileEppendorf22491148Compatible with micropipette
Pipette tips, sterile filterSartorius790201FAerosol barrier
Sequential G-series culture mediaVitrolifeVTL-10143Embryo culture medium
TMSP-d4 (sodium 3-trimethylsilylpropionate-d4)Cambridge Isotope LaboratoriesDLM-48-1Chemical shift reference
Tubes, Safe-LockEppendorf0030121589Storage tubes

المراجع

  1. Seli E, Botros L, Sakkas D, Burns DH. Non-invasive metabolomic profiling of embryo culture media using proton nuclear magnetic resonance correlates with reproductive potential of embryos in women undergoing in vitro fertilization. Fertil Steril. 2008;90(6):2183-2189.
  2. Vergouw CG et al. Metabolomic profiling by near-infrared spectroscopy as a tool to assess embryo viability: a novel, non-invasive method for embryo selection. Hum Reprod. 2008;23(7):1499-1504.
  3. Eldarov C et al. LC-MS analysis revealed significantly different metabolic profiles in spent culture media of human embryos with distinct morphology, karyotype and implantation outcomes. Int J Mol Sci. 2022;23(5):2706.
  4. Simopoulou M et al. Editorial: The role of metabolomics in ART: from diagnosis to treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 2025;16:1558561.
  5. Gardner DK et al. Human and mouse embryonic development, metabolism and gene expression are altered by an ammonium gradient in vitro. Reproduction. 2013;146:49-61.
  6. Sturmey RG, Hawkhead JA, Barker EA, Leese HJ. DNA damage and metabolic activity in the preimplantation embryo. Hum Reprod. 2009;24:81-91.
  7. Sturmey RG, Brison DR, Leese HJ. Assessing embryo viability by measurement of amino acid turnover. Reprod Biomed Online. 2008;17:27-33.
  8. Nadal-Desbarats L et al. Is NMR metabolic profiling of spent embryo culture media useful to assist in vitro human embryo selection? Magn Reson Mater Phy. 2013;26:193-202.
  9. Wallace M et al. 1H NMR-based metabolic profiling of Day 2 spent embryo media correlates with implantation potential. J Assist Reprod Genet. 2014;31:58-63.
  10. Salmerón AM et al. Solution NMR in human embryo culture media as an option for assessment of embryo implantation potential. NMR Biomed. 2021;34:e4536.
  11. Kirkegaard K et al. NMR metabolomic profiling of Day 3 and 5 embryo culture medium does not predict pregnancy outcome in good prognosis patients. Hum Reprod. 2014;29(11):2413-2420.
  12. Otsuki J, Nagai Y, Chiba K. Damage of embryo development caused by peroxidized mineral oil and its association with albumin in culture. Fertil Steril. 2009;91(5):1745-1749.
  13. Martinez CA et al. The overlaying oil type influences in vitro embryo production: differences in composition and compound transfer into incubation medium between oils. Sci Rep. 2017;7:10505.
  14. Beckonert O et al. Metabolic profiling, metabolomic and metabonomic procedures for NMR spectroscopy of urine, plasma, serum and tissue extracts. Nat Protoc. 2007;2:2692-2703.
  15. Helmus JJ, Jaroniec CP. Nmrglue: an open-source Python package for the analysis of multidimensional NMR data. J Biomol NMR. 2013;55:355-367.
  16. Siristatidis C et al. Why has metabolomics so far not managed to efficiently contribute to the improvement of assisted reproduction outcomes? Diagnostics (Basel). 2021;11(9):1602.
  17. Miao SB et al. Glutamine as a potential non-invasive biomarker for human embryo selection. Reprod Sci. 2022;29(6):1721-1729.
  18. Ferrick L, Lee YSL, Gardner DK. Metabolic activity of human blastocysts correlates with their morphokinetics, morphological grade, KIDScore and artificial intelligence ranking. Hum Reprod. 2020;35(9):2004-2016.
  19. Boyama BA et al. Homocysteine in embryo culture media as a predictor of pregnancy outcome in assisted reproductive technology. Gynecol Endocrinol. 2016;32(3):193-195.
  20. Yazdani A, Halvaei I, Boniface C, Esfandiari N. Effect of cytoplasmic fragmentation on embryo development, quality, and pregnancy outcome: a systematic review of the literature. Reprod Biol Endocrinol. 2024;22:1-40.
  21. Scott R et al. Non-invasive metabolomic profiling of human embryo culture media using Raman spectroscopy predicts embryonic reproductive potential: a prospective blinded pilot study. Fertil Steril. 2008;90:77-83.
  22. Vergouw CG et al. Day 3 embryo selection by metabolomic profiling of culture medium with near-infrared spectroscopy as an adjunct to morphology: a randomized controlled trial. Hum Reprod. 2012;27(8):2304-2311.
  23. Figoli CB et al. A robust metabolomics approach for the evaluation of human embryos from in vitro fertilization. Sci Rep. 2024;14(1):17447.
  24. Olcay IO et al. Non-invasive amino acid turnover predicts human embryo aneuploidy. Gynecol Endocrinol. 2022;38(8):461-466.
  25. Tesarik J. Non-invasive biomarkers of human embryo developmental potential. Int J Mol Sci. 2025;26(10):4928.
  26. Alizadeh Moghadam Masouleh A et al. Embryo metabolism as a novel non-invasive preimplantation test: nutrients turn over and metabolomic analysis of human spent embryo culture media (SECM). Hum Reprod Update. 2025;31(5):405-444.
  27. Hajnajafi K, Iqbal MA. Mass-spectrometry based metabolomics: an overview of workflows, strategies, data analysis and applications. Proteome Sci. 2025;23:5.
  28. Emwas AH et al. NMR spectroscopy for metabolomics research. Metabolites. 2019;9(7):123.
  29. Giera M, Yanes O, Siuzdak G. Metabolite discovery: biochemistry's scientific driver. Cell Metab. 2022;34(1):21-34.
  30. Lippi G et al. Influence of hemolysis on routine clinical chemistry testing. Clin Chem Lab Med. 2006;44:311-316.
  31. An Z, Shi C, Li P, Liu L. Stability of amino acids and related amines in human serum under different preprocessing and pre-storage conditions based on iTRAQ®-LC-MS/MS. Biol Open. 2021;10(2):bio055020.
  32. Fomenko MV, Yanshole LV, Tsentalovich YP. Stability of metabolomic content during sample preparation: blood and brain tissues. Metabolites. 2022;12(9):811.
  33. Wishart DS et al. HMDB 5.0: The Human Metabolome Database for 2022. Nucleic Acids Res. 2022;50(D1):D622-D631.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الطبالعدد 233العدد 233قيمة فارغةعددمطيافية الرنين المغناطيسي النوويالميتابولومياتالتلوث النفطيتسلسل CPMG
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.