يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
استخدمت هذه الدراسة علم الأدوية الشبكي، والالتحام الجزيئي، ونموذج ثقب القرص الذيلي للفئران لدراسة التأثيرات المحتملة قبل السريرية لخلص يي تشي هو شو على تنكس القرص القطني، مع التركيز على الأهداف المرشحة، بما في ذلك AKT1 وBCL2 وSTAT3، ومسارات مثل إشارات PI3K-AKT.
في هذه الدراسة، تم استخدام علم الأدوية الشبكي، والربط الجزيئي، ومحاكاة الديناميكا الجزيئية، والتحقق التجريبي لدراسة الأساس الدوائي والآليات الجزيئية المحتملة لخلع يي تشي هو شيو (YQHXD) في تنكس القرص القطني (LDD). تم تحديد ما مجموعه 678 هدفا نشطا مرتبطا بالمركبات ل YQHXD و296 هدفا علاجيا محتملا مرتبطا ب LDD. حددت تحليل شبكات تفاعل البروتين والتحليل الطوبولوجي عدة أهداف مرشحة، بما في ذلك AKT1 وIL6 وTNF وBCL2 وSTAT3. أشارت تحليلات الإثراء باستخدام أنطولوجيا الجينات وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات إلى أن الأهداف المرشحة مرتبطة بوظائف تشمل ارتباط البروتين وربط ATP، مع إثراء المسارات الذي شمل إشارات PI3K-AKT. تنبأ الالتحام الجزيئي بالتفاعلات بين المركبات النشطة المختارة مثل الكيرسيتين، وتترانيورين A، والإيزورهامنيتين، والأهداف الأساسية. أشارت محاكاة الديناميكا الجزيئية أيضا إلى أن المجمعات ذات الطاقة الأدنى بقيت مستقرة. تم توزيع سبعين فأر من نوع سبراج-داولي بشكل عشوائي إلى مجموعات الضابطة، والجرعة الوهمية، والنموذجية، والضربة الإيجابية، ومجموعات YQHXD بجرعات منخفضة ومتوسطة وعالية. بعد تأسيس نموذج ثقب القرص بين الفقرات في النموذج، والضابط الإيجابي، وYQHXD، تم إعطاء الفئران YQHXD أو celecoxib عن طريق التمقم الفموي لمدة 8 أسابيع، بينما حصلت المجموعات الضابطة والجراحة الوهمية على محلول ملحي طبيعي. أظهر التقييم النسيجي أن علاج YQHXD مرتبط بانخفاض تنكس القرص بين الفقرات في هذا النموذج. أظهرت تحليلات اختبار المقاومة المناعية المرتبطة بالإنزيم، وتفاعل البوليميراز، وتحليل البلوت الغربي تغيرات في مستويات mRNA وتعبير البروتين لأهداف مختارة، بما في ذلك AKT1 وBCL2 وSTAT3. تشير هذه النتائج إلى أن YQHXD قد يمارس تأثيرات وقائية قبل السريرية في LDD من خلال تنظيم متعدد المكونات والأهداف يشمل آليات مرتبطة بالالتهاب والموت المبرمج. توفر هذه الدراسة أدلة أولية قبل سريرية تدعم المزيد من التحقيق في YQHXD لمرض LDD.
تنكس القرص القطني (LDD) هو حالة عظمية شائعة مرتبطة بالعمر تتميز بظهور متأخر، وصعوبة العلاج، وارتفاع التكرار، والإعاقة. ينطوي LDD على تغيرات مرضية تنكسية مرتبطة بعدم توازن بين الأيض الكاتابولي والابتنائي للمصفوفة خارج الخلية (ECM) في القرص بين الفقرات (IVD)، ويرتبط ارتباطا وثيقا بألم أسفل الظهر (LBP)1. تظهر الدراسات الوبائية أن LBP هو أحد الأسباب الرئيسية للإعاقة في الممارسة السريرية2.
من عام 1990 إلى 2017، ارتفع عدد الحالات العالمية من 42.5 مليون إلى 64.9 مليون3، مما أثر على الحياة اليومية وفرض عبئا اجتماعيا واقتصاديا كبيرا. لذلك، لا يزال العلاج الفعال ل LDD مهما سريريا. في الممارسة السريرية، غالبا ما يتم التعامل مع LDD بعلاجات تحفظية أو جراحية تظهر أعراضا، والتي يمكن أن تخفف الأعراض لكنها عادة لا تعكس تنكس القرص بين الفقرات (IVDD). قد ترتبط الأدوية المضادة للالتهابات غير الستيرويدية المستخدمة عادة للعلاج التحفظي أيضا بآثار جانبية على الكلى والجهاز الهضمي والقلبية الوعائية.
الطب الصيني التقليدي (TCM) يستخدم منذ زمن طويل في إدارة الأمراض4. تم الإبلاغ عن أن المركبات العشبية والمكونات الفردية تؤخر تقدم IVDD وتعزز تجدد الأنسجة5. في الممارسة السريرية، تستخدم صيغ الطب الصيني الصيني أيضا كجزء من استراتيجيات إدارة محافظة لأمراض العظام والمفاصل التنكسية. استخدمت كلية الطب العائلية في منطقة سوتشو محلول يي تشي هوو شيو (YQHXD) كوصفة أساسية لاضطرابات الالتهاب اللويلي القطني؛ ومع ذلك، هناك حاجة إلى أدلة ميكانيكية إضافية لتوضيح دوره المحتمل في LDD.
أشارت دراسات سابقة إلى أن YQHXD قد يؤخر IVDD من خلال تعزيز الالتهام الذاتي الخلوي وممارسة تأثيرات مضادة للشيخوخة 6,7. ومع ذلك، لا تزال الآليات الدوائية التي قد تؤثر من خلالها YQHXD على LDD غير واضحة، ولا يزال هناك تحليل منهجي لطريقة عمله مفقودا. في هذه الدراسة، تم استخدام علم الأدوية الشبكي لتحليل الخصائص متعددة المكونات والأهداف المتعددة ل YQHXD بالنسبة ل LDD. تم استخدام الالتحام الجزيئي لتقييم التفاعلات بين المركبات والبروتينات المستهدفة، تلاها محاكاة الديناميكا الجزيئية. ثم تم تقييم هذه التنبؤات باستخدام نموذج ثقب القرص الذيلي للفئران لدراسة الآليات المحتملة ل YQHXD في LDD8. كما هو موضح في الشكل 1، توفر هذه الدراسة دليلا ما قبل سريريا على أن YQHXD قد يؤثر على العمليات المرتبطة ب LDD من خلال تعديل الجينات والبروتينات مثل AKT1 وBCL2 وSTAT3، مع إثراء المسارات الذي يتضمن إشارات PI3K-Akt وفئات مسارات أخرى مرتبطة بالأمراض.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لجامعة نانجينغ للطب الصيني (رمز البروتوكول: 202501A018) وأجريت وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. جميع الإجراءات التجريبية التزمت بإرشادات ARRIVE.
الأدوية التجريبية
احتوى محلول العينة YQHXD على 20 جرام من جذر أستراجالوس ميمبرناسيوس ، و20 جرام من جذر أنجيليكا سينينسيس ، و15 جرام من جذر ليغوستيكوم تشوانشيونغ ، و6 جرام من جذر ستيفانيا تيتراندرا ، و15 جرام من فاكهة تشينوميليس سبيسيوزا ، و10 جرام من بذور سينابيس ألبا الناضجة، مع وزن دوائي إجمالي 86 جراما لكل وصفة طبية. تم توثيق جميع المواد العشبية وفقا لكتاب الأدوية الصيني (طبعة 2020) من قبل قسم الصيدلة، مستشفى رويكانغ التابع لجامعة قوانغشي للطب الصيني. تم تحضير محلول العينة YQHXD باستخدام طريقة الدمج المائي. تمت إضافة ماء مقطر معقم بحجم 8 أضعاف إجمالي حجم الدواء الخام، ونقع الأعشاب لمدة 30 دقيقة حتى غمرها بالكامل. ثم يغلى الخليط ويدهن على نار منخفضة لمدة 30 دقيقة قبل الترشيح. تم استخراج البقايا مرة أخرى بنفس حجم الماء المقطر المعقم باتباع نفس الإجراء. تم دمج الترشيحات من الاستخراجين وتركيزها إلى 55.5 مل تحت ضغط منخفض باستخدام التبخر الدوار للحصول على محلول YQHXD. استنادا إلى الوزن الخام الكلي، كان التركيز النهائي للدواء الخام 1.55 جرام/مل، مع عائد استخراج يقارب 64.5٪. تم تحويل الجرعة التي أعطيت للفئران التجريبية من الجرعة السريرية للبالغين باستخدام طريقة تطبيع مساحة سطح الجسم. كان معامل التحويل بين البشر والفئران حوالي 6.3؛ لذلك، تم حساب جرعة الجرذان (mg/kg) كجرعة بشرية (mg/kg) × 6.3. تلقت مجموعة الجرعات العالية 15.48 جرام/كغ/يوميا كجرعة مرجعية، بينما حصلت الفئتان المتوسطة والمنخفضة على 7.74 جرام/كغ/كغ/يوم و3.87 جرام/كغ/يوميا على التوالي. لحجم جافاج 10 مل/كجم، كانت تركيزات العمل المقابلة 1.548، 0.774، و0.387 جرام/مل للمجموعات ذات الجرعات العالية والمتوسطة والمنخفضة على التوالي. تم تخفيف محلول المخزون وفقا لذلك لتحقيق الجرعة المستهدفة لكل مجموعة تجريبية قبل الإعطاء. بعد التحضير، تم تبريد الدهويات، وتركيبها تحت ظروف معقمة، وتخزينها عند −40 درجة مئوية حتى الاستخدام.
تحليل علم الأدوية الشبكي
التنبؤ بالبروتينات المستهدفة من المكونات الفعالة
في 24 نوفمبر 2025، تم استرجاع المركبات النشطة من قاعدة بيانات TCMSP باستخدام مصطلحات البحث "هوانغتشي، أنجيليكا، تشوانشيونغ، ستيفانيا، موقوا، وجيزي." تم فحص المركبات بناء على التوافر البيولوجي الفموي (OB ≥ 30٪) وتشبه الدواء (DL ≥ 0.18). المنطق لهذه العتبات هو كما يلي: قاعدة بيانات TCMSP تدمج بيانات المركبات من مصادر موثوقة مثل PubChem وChEMBL وChemSpider وتوفر معلمات متعلقة ب ADME، بما في ذلك التوافر الحيوي الفموي. يشير التوافر البيولوجي الفموي إلى نسبة الجرعة التي تعطى عن طريق الفم والتي تصل إلى الدورة الدموية الجهازية دون تغيير، وارتفاع نسبة الأكسجين ضروري لتحديد الجزيئات النشطة بيولوجيا. الشبه الدوائي هو مؤشر يستخدم لتقييم قابلية المركبات إلى الدواء والتنبؤ بذوبانيتها واستقرارها. في هذه الدراسة، تم تطبيق عتبة أكثر صرامة لالتهاب النساء النسائي (≥30٪)، تجاوزت القيمة الموصى بها في قاعدة البيانات (≥20٪)، لتحديد المركبات المرشحة ذات الامتصاص الفموي وملفات الدواء الملائمة. وفي الوقت نفسه، استخدم DL لتقدير الإمكانات الشبيهة بالأدوية للمركبات، وتم اعتماد حد DL ≥ 0.18 بناء على متوسط قيمة DL التي لوحظت في مركبات الطب الصيني التقليدي. تم استرجاع المركبات النشطة المختارة بصيغة SMILES من قاعدة بيانات PubChem واستوردها إلى قاعدة بيانات SwissTargetPrediction للتنبؤ بالأهداف، مع تعيين النوع على Homo sapiens. تم توحيد البروتينات المستهدفة باستخدام رموز جينية رسمية، ولم يتم الاحتفاظ إلا بالأهداف ذات القيم الاحتمالية التي تزيد عن 0 لتحسين موثوقية التنبؤ. تم استبعاد المركبات التي لم تكن أهدافا متوقعة من تحليل الشبكات اللاحق. بعد دمج جميع الأهداف، تمت إزالة الإدخالات المكررة باستخدام برامج جداول البيانات لضمان تمثيل كل هدف مرة واحدة فقط في مجموعة البيانات النهائية.
جمع الأهداف الرئيسية
تم استرجاع الجينات المرتبطة بالأمراض من قواعد بيانات GeneCards10 وOMIM11 وTTD12 باستخدام الكلمة المفتاحية "تنكس القرص القطني". تم دمج الأهداف الجينية المجمعة، وتمت إزالة مدخلات مكررة للحصول على مجموعة نهائية من الأهداف المرتبطة بالمرض.
الأهداف المحتملة ل YQHXD لعلاج LDD
تم استخدام منصة فيني 2.1.0 لتحديد الأهداف المحتملة ل YQHXD في LDD. ثم تم إنشاء شبكة لعرض الارتباطات بين المكونات النشطة وأهدافها المتوقعة. تم اختيار المكونات النشطة الأساسية بناء على قيم درجتها في الشبكة.
بناء الشبكة لمكونات الأدوية وأهداف تقاطع الأمراض
تم استيراد المكونات الفعالة، والبروتينات المستهدفة، والجينات المرتبطة ب LDD من صيغة الطب الصيني التقليدي YQHXD إلى برنامج Cytoscape13 لإنشاء مخطط شبكة مرض-مكون دوائي-هدف.
بناء شبكة PPI وتحديد الأهداف الأساسية الرئيسية
تم تقديم أهداف متقاطعة إلى منصة STRING14 للتحليل، مع تعيين الكائن الكائن على الإنسان العاقل. لبناء شبكة تفاعل البروتين والبروتين (PPI)، تم تعيين عتبة درجة التفاعل عند >0.4، وتم إخفاء العقد المنفصلة، وترك جميع الإعدادات الأخرى كالإعداد الافتراضي. تم استيراد البيانات الناتجة إلى البرنامج، حيث استخدمت أداة NetworkAnalyzer لتقييم الخصائص الطوبولوجية وحساب درجات العقد. تم تحديد أفضل خمس عقد مصنفة حسب الدرجة كأهداف رئيسية للمركز.
تحليل الإثراء للأهداف الأساسية
تم رفع الأهداف المتقاطعة إلى قاعدة بيانات ديفيد15 للتوضيح الوظيفي لعلم الجينات (GO) وتحليل مسار إثراء مسار موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG). تم تعيين خلفية الكائن الحي كإنسان عاقل، مع تحديد حد الإثراء وفقا لمعايير DAVID الافتراضية، بما في ذلك عتبة EASE < 0.1 وعتبة عد ≥ 2. كان عالم الجينات مبنيا على خلفية الجينوم الكامل الافتراضية التي قدمها ديفيد. تم تصحيح اختبارات متعددة باستخدام طريقة بنجاميني-هوشبرغ للتحكم في معدل الاكتشاف الكاذب (FDR)، وتم تعديل نتائج DAVID بناء على ذلك. تم ترتيب المسارات الغنية حسب قيمة العد بترتيب تنازلي. تم إنتاج مخططات بارات الإثراء GO وKEGG باستخدام منصة إلكترونية للمعلوماتية الحيوية.
الالتحام الجزيئي
للتنبؤ بالتفاعلات بين المكونات النشطة الرئيسية ل YQHXD والأهداف الأساسية ل LDD، تم إجراء تحليل الالتحام الجزيئي في هذه الدراسة. تم اختيار أفضل خمسة مركبات نشطة رئيسية، مصنفة وفقا لقيم درجات الطوبولوجيا الشبكية وصلة الهدف، كروابط متتالية، بينما استخدمت البروتينات الأساسية المستهدفة كمستقبلات. تم استرجاع ملفات SDF الخاصة بالليغاند من PubChem، وتم تحميل البنى ثلاثية الأبعاد للبروتينات المستهدفة من بنك بيانات البروتينات (PDB). تم إجراء تحليل الالتحام على منصة CB-Dock2 باستخدام بروتوكول الالتحام الأعمى الآلي بالكامل. بعد تحميل هياكل البروتين، أزالت المنصة تلقائيا ذرات غير متجانسة، بما في ذلك الجزيئات الصغيرة والأيونات وجزيئات الماء، وقامت لاحقا بإصلاح الذرات وذرات الهيدروجين المفقودة. تم استخدام وضع الإرساء التلقائي الأعمى. في هذا الوضع، يحدد CB-Dock2 جيوب ربط سطح البروتين المحتملة باستخدام خوارزمية كشف التجويف القائمة على الانحناء ثم يجري حسابات الالتحام باستخدام محرك فينا16 المدمج أوتودوك. خلال عملية الالتحام، تم التعامل مع البروتينات كهياكل صلبة، بينما اعتبرت الروابط مرنة، وتم تعيين جميع معلمات الالتحام على القيم الافتراضية للمنصة. تم تخضع نتائج الالتحام لتصوير ثلاثي الأبعاد وتحليل تفاعلي باستخدام الأدوات المدمجة في CB-Dock217، وتم حساب طاقات الارتباط لتقدير التقاربات المتوقعة بين المركبات النشطة والبروتينات المستهدفة.
محاكاة الديناميكا الجزيئية
تم إجراء محاكاة للديناميكا الجزيئية لمجمع البروتين-الرابط المستهدف باستخدام GROMACS 2022.2. تم نمذجة البروتين باستخدام حقل القوة Amber14SB، وتم تمثيل نظام المذيب باستخدام نموذج الماء TIP3P. تم حساب شحنات الليغاند الذرية باستخدام طريقة AM1-BCC المنفذة في Antechamber، تلتها تعيين أنواع ذرات GAFF2. تم تحويل ملفات الطوبولوجيا الناتجة إلى صيغة متوافقة مع GROMACS باستخدام ACPYPE. تم تعيين معلمات الأيونات المتوافقة مع نموذج الماء TIP3P بناء على مجموعة معلمات جونغ-تشيثام. تم وضع المجمع الابتدائي في صندوق محاكاة ثنائي الوجهي المقطوع بمسافة لا تقل عن 1.2 نانومتر بين سطح البروتين وحافة الصندوق. تمت إضافة جزيئات الماء من TIP3P لحل النظام، وتم إدخال أيونات Na+ وCl− لتحييد شحنة النظام وضبط القوة الأيونية إلى 0.15 M. تم إجراء تقليل الطاقة باستخدام خوارزمية الهبوط الأكثر انحدارا حتى أصبحت القوة القصوى أقل من 1,000 كيلوجول·مول−1·نانومتر−1. ثم تم تعديل النظام لمعدل 100 حصان تحت مجموعة NVT عند 298 كيلوبايطن و1 بار. بعد التوازن، تم تشغيل محاكاة إنتاج بسرعة 100 نانوثانية تحت مجموعة NPT مع خطوة زمنية 2 fs. تم التعامل مع التفاعلات غير المرتبطة باستخدام نظام قطع ال Verlet. تم حساب التفاعلات الكهروستاتيكية باستخدام طريقة إيوالد الشبكية للجسيمات (PME)، واستخدم قطع 1.2 نانومتر لكل من تفاعلات فان دير فال وكولومب. كانت الروابط المحتوية على الهيدروجين مقيدة بخوارزمية LINCS. تم التحكم في درجة الحرارة باستخدام منظم حرارة نوزي-هوفر، وتم التحكم في الضغط باستخدام باروستات بارينيلو-رحمن، مما حافظ على النظام عند 298 كلفن و1 بار. تم حفظ المسارات كل 10 حصان. تم تحليل الديناميكا الهيكلية والتفاعلات بين الجزيئات باستخدام أدوات GROMACS المدمجة، VMD، وPyMOL. تم تقدير طاقة الربط الحرة مع gmx_MMPBSA حيثما كان ذلك مناسبا.
دراسات الحيوانات
تربية الحيوانات
تم توزيع سبعين ذكرا من جرذ سبراج-داولي (SD) تتراوح أعمارهم بين 3–8 أسابيع عشوائيا إلى سبع مجموعات تجريبية (n = 10 لكل مجموعة) باستخدام أرقام عشوائية مولدة بالحاسوب، مما ضمن عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في وزن الجسم الأساسي بين المجموعات. تم إيواء جميع الحيوانات في ظروف محكمة (22 ± 1 درجة مئوية، 55 ± 10٪ رطوبة نسبية، 12 ساعة دورة ضوء/ظلام) مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء. تم توزيع مواقع الأقفاص عشوائيا عند كل تغيير في القفص لتقليل التحيز البيئي. بعد أسبوع من التكيف، خضعت الفئران في مجموعات النموذج لثقب IVD الذيلي لتحفيز التنكر. تم إعطاء تخدير موضعي ببوبيفاكائين قبل العملية لتقليل الألم. تمت مراقبة الحيوانات عن كثب أثناء الجراحة وخلال فترة التعافي بعد العملية. شملت الملاحظات بعد العملية وقت التعافي، واستعادة النشاط التلقائي، وتناول الطعام والماء، وتغيرات في وزن الجسم. بعد أسبوع من تأسيس النموذج، تم اختيار فئرين من كل مجموعة عشوائيا لتصوير الأشعة الرقمية بعد العملية وتلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE). أظهر التحليل الشعاعي انخفاضا في ارتفاع IVD الذيلي، بينما أظهر التلوين HE انخفاضا ملحوظا في خلايا النوتوكورد (NP) وعدم تنظيم بنية الحلقة الليفيةالصفيحية 18، مما أكد نجاح تأسيس النموذج. بعد ثمانية أسابيع من الجراحة، تم القتل الرحيم للفئران عن طريق استنشاق جرعة زائدة من الأيزوفلوران، وتم جمع عينات من أنسجة الذيل والدم. بعد التحقق الأولي، تم استخدام ثلاث عينات مستقلة لكل مجموعة تستوفي معايير جودة محددة مسبقا لتحليل الأنسجة النهائية، وELISA، وPCR، وتحليل الصبغة الغربية. تم تقييم المقاطع الأنسجة في ظروف تعمية أحادية، مع وسم الشرائح فقط بأرقام تعريف الحيوانات. في اختبارات ELISA، وPCR، وWestern Blot، تم تطبيق ترميز أعمى أثناء جمع العينات ووضع العلامات، وتم توزيع ترتيب العينات عشوائيا قبل التجارب. تم فك تشفير البيانات الخام، بما في ذلك قيم الامتصاص، وقيم Ct ، وشدة النطاق، إلى هويات مجموعات بواسطة إحصائي غير مشارك في التجميع التجريبي أو معالجة العينات، ثم تم تحليلها لاحقا بواسطة الطاقم الإحصائي. تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية بواسطة إحصائيين لم يشاركوا في التجميع التجريبي أو معالجة العينات. تم تسجيل وتقييم أي أحداث جانبية، بما في ذلك عدوى الجرح، أو الانفصال، أو النزيف، أو الخمول الشديد. تمت مراقبة الحالات الخفيفة عن كثب مع رعاية داعمة معززة. تم تطبيق نقاط نهاية إنسانية إذا أظهرت الفئران فقدانا في وزن الجسم يتجاوز 20٪ من الوضع الطبيعي، وألم شديد لم يخفف بالمسكنات، وفقدان الحركة، وعدم القدرة على الوصول إلى الطعام أو الماء، أو عدوى، أو نخر، أو مضاعفات شديدة بعد العملية، أو ضيق تنفسي، أو أي حالة تهدد الحياة. في مثل هذه الحالات، تم إعدام الحيوانات بطريقة إنسانية عن طريق استنشاق جرعة زائدة من الإيزوفلوران.
النمذجة التجريبية
تم تخدير الفئران بالأيزوفلوران المستنشق ووضعها مستلقيا. تم تحديد مواقع الود الخلفية لثاني أكسيد الكربون 6/7 و7/8 وثاني أكسيد الكربون تحت توجيه فلوروسكوبي بالأشعة السينية. تم دفع إبرة 21G عموديا إلى الورع حتى وصلت إلى الجانب المقابل من الجلد، ثم سحب طرف الإبرة نحو مركز الذيل. كانت الإبرة الثانية تستخدم كمرجع وضعي. لتحفيز تنكس IVD المستمر، تم تدوير الإبرة 360°، وتم إبقاؤها في مكانها لمدة 30 ثانية، ثم إزالتها. في مجموعة الشام، كان عمق الثقب عبر الجلد والعضلات حوالي 2 مم، دون أن يضر ال IVD. في المجموعات الأخرى، تم إدخال الإبرة 5 مم نحو مركز الالتهاب الصناعي، لتجنب الأوعية الدموية. بعد الإدخال، تم تدوير الإبرة 360° وتركها في مكانها لمدة 30 ثانية. تم تعقيم موقع الثقب، ووضع علامات، وحمايته بشاش معقم. بعد أسبوع من النمذجة، أظهر التصوير بالأشعة السينية للعمود الفقري الذنبي انخفاضا في ارتفاع ال IVD. أظهر التلوين العالي انخفاضا كبيرا في الخلايا النوتوكوردية NP وخلل في بنية الصفيحة الحلقية، مما أكد نجاح تكوين النموذج. بعد النمذجة الناجحة، تم إعطاء الجرعات المناسبة للمجموعات التي تلقت علاجات الطب الصيني التقليدي ومجموعة الضابطين الإيجابيين (PC)، والتي تم حسابها بناء على نسبة مساحة سطح الجسم بين البشر والفئران.
التجميع والتدخل
تم استخدام ما مجموعه 70 ذكرا من جرذ SD تتراوح أعمارهم بين 3 و8 أسابيع في هذه التجربة وتم تقسيمها إلى سبع مجموعات:
(1) مجموعة التحكم (Ctrl): تم توزيع الفئران في هذه المجموعة عشوائيا في نفس الوقت وتحت نفس الظروف التي كانت عليها المجموعات التجريبية. تم إقامتهم في أقفاص فردية في منشأة حيوانية بمستوى SPF، مع إمكانية الوصول المجاني إلى الطعام ومياه الشرب العادية.
(2) مجموعة الشام: تم تخدير الفئران عن طريق استنشاق الإيزوفلوران. بعد تأسيس التخدير، تم تعقيم جلد الذيل بالبوفيدون-يودين، ووضعت الفئران مستلقية. تم تحديد مواقع أقراص CO6/7 وCO7/8 تحت توجيه فلوروسكوبي بالأشعة السينية. تم دفع الإبرة حوالي 2 مم عبر الجلد والعضلة دون أن تؤذي الالتهاب الصناعي. تم إعطاء الماء المقطر (10 مل/كغ) مرة واحدة يوميا بواسطة الجافاج لمدة 8 أسابيع.
(3) مجموعة النموذج: تم تخدير الفئران باستنشاق الإيزوفلوران. بعد تأسيس التخدير، تم تعقيم جلد الذيل بالبوفيدون-يودين، ووضعت الفئران مستلقية. تحت توجيه الأشعة السينية الفلوروسكوبية، تم تحديد مشابك التغذية الوريدية CO6/7 وCO7/8 وCO8/9. تم دفع إبرة 21G عموديا إلى الورع حتى وصلت إلى الجانب المقابل من الجلد، ثم سحب طرف الإبرة نحو مركز الذيل.
تم استخدام إبرة ثانية كمرجع موقعي. تم تدوير الإبرة 360° وتثبيت مكانها لمدة 30 ثانية لتحفيز التنكس المستمر للورع الوريدي قبل إزالتها. تم إعطاء الماء المقطر (10 مل/كجم) يوميا بواسطة الجرعة لمدة 8 أسابيع، وتمت مراقبة تعافي الفئران عن كثب بعد الجراحة.
(4) مجموعة PC: خضعت مجموعة الضابط الإيجابية لنفس إجراء النمذجة مثل مجموعة النموذج، ثم تلقت كمية فموية من السيليوكسيب (20 ملغ/كغ/يوم)، تم تحضيرها كتعليق ب 0.5٪ كربوكسي ميثيل سلولز الصوديوم (CMC-Na)، لمدة 8 أسابيع متتالية، بحجم جافاج 10 مل/كغ وزن الجسم.
(5) مجموعة الجرعات المنخفضة YQHXD [YQHXD(L)]: تم إجراء النمذجة كما في مجموعة النماذج. تلقت الفئران YQHXD بمعدل 3.87 جرام/كغ/يوم عن طريق الغافاج لمدة 8 أسابيع، مع حجم جافاج 10 مل/كجم وتركيز عمل 0.387 جم/مل.
(6) مجموعة الجرعة المتوسطة YQHXD [YQHXD(M)]: تم إجراء النمذجة كما في مجموعة النماذج. تلقت الفئران YQHXD عند 7.74 جرام/كغ/يوم عن طريق الغافاج لمدة 8 أسابيع، مع حجم غافاج 10 مل/كغ وتركيز عمل 0.774 ج/مل.
(7) مجموعة الجرعات العالية YQHXD [YQHXD(H)]: تم إجراء النمذجة كما في مجموعة النموذج. تلقت الفئران YQHXD بمعدل 15.48 جم/كغ/يوم بواسطة الغافاج لمدة 8 أسابيع، مع حجم جافاج 10 مل/كجم وتركيز عمل 1.548 ج/مل.
التغيرات المرضية
تم عزل نسيج IVD الذيلية للجرذ جراحيا، ولوحظت تغييرات في الورد الصناعي وأنسجة العضلات المحيطة. ثم تمت معالجة الأنسجة المجمعة إلى أقسام مرضية، مع تحضير العينات في مقاطع طولية للملاحظة الشكلية (مورفولوجي). تم إزالة الكلس بسرعة في محلول إزالة الكلسين من خلال محلول إزالة الكلس، وتم تجفيفه عبر سلسلة كحول متدرجة، وتطهير بالزيلين. بعد التضمين في البارافين، تم تجهيز أقسام بارافين بحجم 5 ميكرومتر. بعد إزالة البارافين بالزيلين والجفاف عبر سلسلة من تدرجات الكحول، تم تلوين الأقسام بالهيماتوكسيلين والإيوزين. ثم تم تجفيفها، وإزالتها، وتركيبها. تمت ملاحظة العينات تحت المجهر البصري لفحص التغيرات الشكلية في بنية IVD الذيلية عبر المجموعات. لاحقا، تم إجراء صبغة ثلاثية الألوان لماسون. تم صبغ الأقسام بشكل متسلسل بمحلول ثنائي كرومات البوتاسيوم والهيماتوكسيلين لمدة 3 دقائق لكل منهما، تلاها التمايز بالإيثانول الحمضي، ثم صبغها ب Picrosirius Red لمدة 10 دقائق. بعد العلاج بحمض الفوسفوتونغستيك لمدة 10 دقائق، تم صبغ الأقسام باللون الأزرق التولويديني لمدة 5 دقائق. بعد الجفاف، تم تنظيف الأقسام بالزيلين، وتركيبها، ومراقبتها تحت المجهر لفحص التغيرات في الورع الذيلي.
كشف ELISA للبروتينات المستهدفة في المصل
بعد ثمانية أسابيع من الجراحة، تم تخدير الفئران باستخدام استنشاق الإيزوفلوران، وجمع دم الأبهر البطني. تم الاحتفاظ بعينات الدم المحيطية في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة وتم طردها المركزي عند 1400 × جرام لمدة 10 دقائق. تم فصل المصل وتخزينه عند −80 درجة مئوية حتى الاستخدام. تم قياس مستويات AKT1 وSTAT3 وBcl-2 في المصل بواسطة اختبار المقاومة المناعية المرتبط بالإنزيمات (ELISA). تم إجراء الفحوصات وفقا لبروتوكولات الشركات المصنعة. تمت قراءة الامتصاص عند 450 نانومتر، وتم تحديد التركيزات من منحنيات قياسية. كانت نطاقات الكشف ل AKT1 وSTAT3 وBCL-2 هي 0.625–40 نانوغرام/مل، 31.25–1000 بيغم/مل، و0.16–10 نانوغرام/مل على التوالي، مع حساسية 0.1 نانوغرام/مل، 10 بيغرام/مل، و0.1 نانوغرام/مل. تم تحليل جميع عينات المصل دون تخفيف، وكانت جميع النتائج ضمن نطاقات المنحنى القياسية المقابلة. تم اختبار جميع العينات والمعايير بشكل مكرر، وتم إجراء التطبيع بناء على حجم مصل متساو.
كشف مستويات التعبير الجيني بواسطة PCR
تم تشريح أنسجة القرص بين الفقرات من فقرات ذيل الفئران، وتم جمع حوالي 20 ملغ من كل عينة. تم سحق الأنسجة في النيتروجين السائل وتحللها في 500 ميكرولتر من محلول التحلل غير الإنزيمي لمدة 15 دقيقة. ثم تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي، وتم قياس تركيزه ونقائته باستخدام مقياس طياف. تم قبول عينات بقيمA 260/A 280 من 1.8–2.0 للتحليل، وتم تعديل تركيزات الحمض النووي الريبي إلى 500 نانوغرام/ميكرولتر. تم إجراء النسخ العكسي وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. تم إجراء PCR الكمي (qPCR) على نظام PCR في الوقت الحقيقي لقياس تعبير mRNA في Akt1 وBcl-2 وStat3 . تم توفير تسلسلات التمهيد في الجدول 1. تكون برنامج PCR من إزالة الطبيعة الأولية عند 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، تلتها 40 دورة من 95 درجة مئوية لمدة 5 ثوان و60 دورة لمدة 30 ثانية. تم إجراء تحليل منحنى الانصهار بعد التضخيم للتحقق من خصوصية المنتج. تم استخدام Gapdh كجين مرجعي، وتم تحليل جميع العينات على شكل ثلاث نسخ. كانت كفاءة تضخيم البرايمر بين 90٪–110٪. تم حساب التعبير الجيني النسبي باستخدام طريقة 2−ΔΔCt .
الطلاء الغربي لمستويات تعبير البروتين
تم عزل البروتين الكلي من أنسجة القرص بين الفقرات الذيلية للفئران من كل مجموعة. تم تحلل الأنسجة في محلول RIPA مع مكمل مثبطات للبروتيزا. تم قياس تركيز البروتين باستخدام مجموعة اختبار بروتين BCA وتم تعديله إلى 2 ميكروغرام/ميكرولتر. تم فصل كميات البروتين المتساوية (15 ميكروغرام لكل عينة) بواسطة 10٪ من SDS-PAGE ونقلها إلى أغشية ثنائي فلوريد البوليفينيليدين (PVDF) عند تيار ثابت 300 مللي أمبير لمدة 90 دقيقة باستخدام نظام نقل رطب. ثم تم حجب الأغشية بحليب خالي من الدهون بنسبة 5٪ لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة وحضنتها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد AKT1 (1:5,000)، STAT3 (1:6,000)، Bcl-2 (1:1,500)، و β-أكتين (1:4,000). بعد غسل TBST، تم حضن الأغشية بأجسام مضادة ثانوية مرافق من بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) بتخفيف 1:5,000 لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم اكتشاف أشرطة البروتين باستخدام كاشف التلويض الكيميائي المعزز (ECL)، وتم التقاط الصور باستخدام نظام تصوير هلام تحت ظروف تعريض متطابقة. تم قياس شدة الشريط باستخدام ImageJ وتم تطبيعه إلى β-أكتين لتحديد التعبير النسبي عن البروتين. تم إجراء كل تجربة بشكل مستقل في ثلاث نسخ، حيث تم الحصول على كل عينة من حيوان مختلف.
الإحصائيات
تعبر النتائج كمتوسط ± انحراف معياري (SD). تم تقييم الفروقات بين المجموعات من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA)، تلاه اختبار الفرق الأقل دلالة (LSD) بعد الاختبار. تم تعريف الدلالة الإحصائية بأنها P < 0.05.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الاستنتاجات المستخلصة من الدراسة
دمجت هذه الدراسة علم الأدوية الشبكي، والالتحام الجزيئي، ومحاكاة الديناميكا الجزيئية، والتجارب في الجسم للتحقيق في التأثيرات الوقائية المحتملة ل YQHXD ضد LDD. تشير النتائج إلى أن YQHXD قد يعمل، على الأقل جزئيا، من خلال تنظيم محور الإشارة AKT1/STAT3/BCL-2، الذي يتميز بانخفاض تعبير STAT3 وزيادة تعبير AKT1 و Bcl-2. أظهرت التحليلات النسيجة والجزيئية أن علاج YQHXD كان مرتبطا بتحسن سلامة نواة اللب الريفي، وبنية الحلقة الليفية، وتنظيم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم الإبلاغ عن أن الأدوية العشبية الصينية التقليدية لها تأثيرات دوائية تشمل مضادات الالتهاب، ومسكنات الألم، وأنشطة تعزز الدورة الدموية19. أشارت دراسات سابقة إلى أن شياوسوي هواهي ديكوشن، وهو الصيغة السلفية ل YQHXD، قد يعزز امتصاص الانزلاق الضخم في IVD عن طريق التأثير على امتصاص النواة البلبوسية (NP) وامتصاص IVD20؛ ومع ذلك، لا تزال الآليات الجزيئية الأساسية غير واضحة. في هذه الدراسة، تم استخدام علم الأدوية الشبكي لدراسة التفاعلات المحتملة بين ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.
نحن ممتنون للدكتور جينتاو ليو من مستشفى سوزهو التابع لمستشفى طب الصينيين الصيني التابع لجامعة نانجينغ للطب الصيني في سوتشو على مساعدتهم في جميع مراحل هذه الدراسة. وقد تم دعم هذا العمل بمنحة من مشروع المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82474529)؛ ليو 2024، مشروع المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82374220)؛ جيانغ 2023، مؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة جيانغسو (رقم. BK20250396); مشروع خطة تطوير علوم وتكنولوجيا الطب الصيني التقليدي في مقاطعة جيانغسو (رقم QN202419)؛ مشروع الابتكار في العلوم والتكنولوجيا التطبيقية التطبيقية (الطبية والصحية) في سوتشو (رقم). SYWD2024154); مشروع تطوير تكنولوجيا الطب الصيني التقليدي في مقاطعة جيانغسو (MS2022080)؛ الدفعة الثالثة من المواهب الرائدة في الطب الصيني التقليدي في مقاطعة جيانغسو (قسم العلوم والتعليم في سو تي سي إم [2023] رقم 17)؛ مشروع تعزيز قدرات العلوم والتعليم في مقاطعة جيانغسو: مشروع بناء التخصص الطبي الرئيسي ومختبر المفاتيح الطبية في مقاطعة جيانغسو (سووي للعلوم والتعليم [2022] رقم 17)؛ مشروع مؤسسة العلوم الطبيعية الإقليمية لمقاطعة جيانغسو (رقم: BK20241802)؛ الدفعة التاسعة والعشرون من خطة تطوير العلوم والتكنولوجيا في سوتشو لعام 2022 (مشروع بناء مختبر رئيسي جديد) (SZS2022019)؛ مشروع تحسين القدرات البحثية الأساسية للمعلمين الشباب ومتوسطي العمر في جامعات قوانغشي إلى يوان تشاي (2024KY0300)؛ مشروع البحث العلمي الممول ذاتيا لإدارة الطب الصيني التقليدي في منطقة قوانغشي تشوانغ ذاتية الحكم (GXZYA20240113); منحة من مشروع البحث الجامعي في جامعة قوانغشي للطب الصيني التقليدي إلى يوان تشاي (2023QN010)؛ منحة من مشروع تدريب الابتكار لطلاب الجامعات في منطقة قوانغشي زوانغ ذاتية الحكم إلى يونغيوان لي (202410600022)؛ منحة من مشروع تدريب الابتكار لطلاب جامعة قوانغشي للطب الصيني إلى سوجي ليو (X202410600062)؛ منحة من مشروع تدريب الابتكار لطلاب جامعة قوانغشي للطب الصيني إلى منغفي لين (S202410600084)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5٪ الصوديوم كربوكسي ميثيل سيلولوز (CMC-Na) | غير محدد | المركبة المستخدمة لتحضير نظام تعليق السيليوكسيب للتفريغ. | |
| إبرة 21 G | غير محدد | يستخدم لثقب القرص بين الفقرات الذيلي. | |
| 2×؛ Universal Blue SYBR Green qPCR Master Mix | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | G3326 | كالم تضخيم qPCR. |
| محلول جل أكريلاميد/بيس-أكريلاميد بنسبة 30٪ (29:1) | شركة سولاربيو المحدودة | محلول تحضير الجل ل SDS-PAGE؛ مذكور في جدول المواد الأصلية كمحلول جل بنسبة 30٪/29:1. | |
| آلة طحن مجمدة ثلاثية الأبعاد | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | يستخدم لتوحيد الأنسجة/الطحن. | |
| 4×؛ مخزن جل مركزي SDS-PAGE (pH 6.8) | شركة سولاربيو المحدودة | مادة تحضير جل البلوط الغربي. | |
| الإيثانول الحمضي | غير محدد | يستخدم في التمييز بين التلوين النسيجي. | |
| ACPYPE | مشروع ACPYPE | يستخدم لتحويل ملفات طوبولوجيا الليغاند إلى صيغة متوافقة مع GROMACS. | |
| مجموعة AKT1 ELISA | شركة هانغتشو أبينغ للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | SYP-R1928 | يستخدم لقياس مستويات AKT1 في المصل؛ نطاق الكشف 0.625– 40 نانوغرام/مل. |
| طريقة شحن AM1-BCC | أدوات الغرفة الأمية/الكهرمان | يستخدم لحساب شحنة الليغاند الذرية. | |
| حقل قوة Amber14SB | حقل القوة الكهرماني | حقل قوة البروتين المستخدم في محاكاة الديناميكا الجزيئية. | |
| جذر أنجيليكا سينينسيس | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 20250503 | المكون النباتي YQHXD؛ 20 جرام لكل وصفة طبية. |
| الإيثانول اللامائي | شركة تيانجين أوبوشنغ للكيماويات المحدودة. | يستخدم في معالجة الأنسجة/الجفاف. | |
| الغرفة الأمامية | أدوات AMBER | يستخدم لحساب شحنة الليجاند وتصنيف الذرات. | |
| الأجسام المضادة المضادة ل-AKT1 | شركة ووهان سانينغ المحدودة. | الجسم المضاد الأساسي لإزالة البلوتينغ الغربي؛ التخفيف 1:5,000. | |
| الأجسام المضادة المضادة Bcl-2 | شركة ووهان سانينغ المحدودة. | الجسم المضاد الأساسي لإزالة البلوتينغ الغربي؛ التخفيف 1:1,500. | |
| الأجسام المضادة المضادة لمضاد STAT3 | شركة ووهان سانينغ المحدودة. | 10253-2-AP | الجسم المضاد الأساسي لإزالة البلوتينغ الغربي؛ التخفيف 1:6,000. |
| مادة APS | شركة بيوتايم/بيونتيان | مادة بلمرة جل البلوت الغربي. | |
| جذر أستراجالوس غشاني | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 20250405 | المكون النباتي YQHXD؛ 20 جرام لكل وصفة طبية. |
| الأوتوكلاف | سانيو، اليابان | معدات التعقيم. | |
| محرك أوتودوك فينا | مشروع أوتودوك/فينا | محرك الإرساء المستخدم في CB-Dock2. | |
| مجموعة اختبار بروتين BCA | شركة سولاربيو المحدودة | يستخدم لتحديد تركيز البروتين قبل البلل الغربي. | |
| مجموعة BCL-2 ELISA | شركة ووهان فاين للتكنولوجيا الحيوية المحدودة | PMK1545 | يستخدم لقياس مستويات Bcl-2 في المصل؛ نطاق الكشف 0.16 وNDASH; 10 نانوغرام/مل. |
| بوبيفاكين | غير محدد | مخدر موضعي يستخدم قبل العملية. | |
| CB-Dock2 | خادم الويب CB-Dock2 | منصة الالتحام الجزيئية العمياء الآلية. | |
| سيليكوسيب | شركة سيتشوان نيو ستون للأدوية، المحدودة. | H20233911 | دواء السيطرة الإيجابية؛ 20 ملغ/كغ/يوميا حسب الحصان. |
| ثمرة Chaenomeles speciosa | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 231001 | المكون النباتي YQHXD؛ 15 جرام لكل وصفة طبية. |
| سيتوسكيب | اتحاد سايتوسكيب | الإصدار 3.9.0 | يستخدم لبناء وتحليل مخططات الشبكة. |
| مجموعة الكواشف الكروموجيني DAB (20&00;) | شركة بكين تشونغشان للجسر الذهبي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | مدرج في جدول المواد الموجودة. | |
| ديفيد | المعهد الوطني للسرطان | الإصدار 6.8 | قاعدة بيانات للتعليق والتصوير والاكتشاف المتكامل؛ يستخدم لتحليل إثراء GO وKEGG. |
| محلول إزالة الكالسية | شركة بكين تشونغشان للجسر الذهبي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | يستخدم لإزالة الكلب في نسيج IVD الفقري الذيلي. | |
| هزاز إزالة اللون | شركة ليو يي للتكنولوجيا الحيوية، المحدودة، بكين | هزة مختبر. | |
| مياه DEPC | شركة ووهان سانينغ المحدودة. | عمل RNA/تحضير المواد الكيميائية. | |
| نظام التصوير الشعاعي الرقمي | غير محدد | يستخدم للتحقق من صحة نموذج الأشعة بعد العملية. | |
| الماء المقطر | غير محدد | تجويف المركبة/التحكم وتحضير الرياح YQHXD. | |
| ركيزة كيميائية مضيئة ECL | شركة Biosharp | كاشف كشف إشارة البقعة الغربية. | |
| محلول استرجاع المستضدات EDTA (درجة الحموضة 8.0) | شركة بكين تشونغشان للجسر الذهبي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | مدرج في جدول المواد الموجودة. | |
| جهاز الرحلان الكهربائي | غير محدد | يستخدم في الرحلان الكهربائي SDS-PAGE. | |
| مخزن الرحلان الكهربائي | شركة سيرفيبيو | محلول الرحلان الكهربائي للبقعة الغربية. | |
| صانع الثلج FM40 | شركة تشانغليو للأدوات العلمية المحدودة، بكين | صانع الثلج. | |
| الفورمالديهايد | غير محدد | المثبت المستخدم في نسيج IVD الفقري الذيلي. | |
| أنواع ذرات GAFF2 | أدوات AMBER | أنواع ذرات الليغاند المستخدمة في محاكاة الديناميكا الجزيئية. | |
| نظام التصوير الهلامي | تيانين ساينتفيك، شنغهاي | يستخدم لالتقاط صور البقعة الغربية. | |
| بطاقات الجين | معهد وايزمان للعلوم | الإصدار 5.26 | قاعدة بيانات جينات بشرية تستخدم لاسترجاع الأهداف المرتبطة بالمرض. |
| gmx_MMPBSA | مشروع gmx_MMPBSA | يستخدم لتقدير ربط MM-PBSA بالطاقة الحرة حيثما ينطبق ذلك. | |
| منشور جراف باد | برنامج جراف باد | الإصدار 8.0 | برامج الإحصائيات/الرسوم البيانية المدرجة في نسخة المخطوطة السابقة للمؤلفين. |
| خرز الطحن | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | يستخدم لطحن الأنسجة/التجانس. | |
| جروماكس | فريق تطوير جروماكس | الإصدار 2022.2 | يستخدم في محاكاة الديناميكا الجزيئية. |
| كواشف تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين | غير محدد | يستخدم لتلطيع الالتهاب الداخلي في أقسام الالتهاب الصناعي الذيلي. | |
| جهاز الطرد المركزي عالي السرعة | إبندورف، ألمانيا | جهاز الطرد المركزي المختبري. | |
| مطحنة أنسجة عالية السرعة منخفضة الحرارة | سيرفسبيو، الصين | يستخدم لطحن الأنسجة بدرجة حرارة منخفضة. | |
| الهزاز الأفقي | شركة تشيرينبيل | هزة مختبر. | |
| الأجسام المضادة للأرانب المميزة من قبل HRP | شركة سيرفيبيو | الأجسام المضادة الثانوية لعلاج الطلاء الغربي؛ التخفيف 1:5,000. | |
| HyperScript III RT SuperMix لعلاج qPCR مع مزيل gDNA | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | مادة الكاشف العكسي للنسخ مدرجة في جدول المواد الحالية. | |
| صانع الثلج | سيماج، الصين | صانع الثلج. | |
| ImageJ | المعاهد الوطنية للصحة | يستخدم لقياس شدة نطاق النقطة الغربية. | |
| المجهر البيولوجي المقلوب | أوليمبوس، اليابان | يستخدم في مجهر الأقسام الملطخة. | |
| إيزوفلوران | غير محدد | عامل تخدير استنشاقي/قتل رحيم. | |
| كاشف الإيزوبروبانول | مجموعة الصين الوطنية للأدوية للكاشف الكيميائي المحدودة. | مادة استخراج RNA. | |
| معلمات أيونات جونغ-تشيثام | غير قابل للتطبيق | مجموعة معلمات الأيونات المستخدمة في محاكاة الديناميكا الجزيئية. | |
| الجذور الليغوستيكوم تشوانشيونغ | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 20250301 | المكون النباتي YQHXD؛ 15 جرام لكل وصفة طبية. |
| النيتروجين السائل | غير محدد | يستخدم لطحن الأنسجة قبل استخراج الحمض النووي الريبي. | |
| جهاز الطرد المركزي منخفض السرعة | إبندورف، ألمانيا | يستخدم لفصل المصل وخطوات الطرد المركزي منخفضة السرعة الأخرى. | |
| محلول التلوين ثلاثي الألوان من ماسون | غير محدد | يستخدم في تلوين ماسون لأقسام الالتهاب الصناعي الذيلي. | |
| قارئ الميكروبليت (TECAN) | تيكان، سويسرا | يستخدم لقياس الامتصاص عند 450 نانومتر؛ مدرج في جدول المواد الموجودة. | |
| قارئ الألواح الدقيقة (ثيرمو فيشر ساينتيفيك) | ثيرمو فيشر ساينتفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | قارئ الميكروبليت متعدد الوظائف مدرج في جدول المواد الحالية. | |
| برنامج Microsoft Excel/جداول البيانات | مايكروسوفت | يستخدم لإزالة مدخلات الهدف المكررة وإدارة البيانات الجدولية. | |
| مطياف نانوسدروب 2000 | ثيرمو فيشر ساينتفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | يستخدم لقياس تركيز الحمض النووي الريبي ونقائه. | |
| مخزن التحلل غير الإنزيمي | غير محدد | يستخدم لتحلل الأنسجة قبل استخراج الحمض النووي الريبي. | |
| OMIM | كلية الطب بجامعة جونز هوبكنز | الميراث المندلي على الإنترنت في الإنسان؛ يستخدم لاسترجاع الأهداف المرتبطة بالأمراض. | |
| منصة تخطيط المعلوماتية الحيوية عبر الإنترنت | غير محدد | يستخدم لإنشاء مخططات شريط GO وKEGG. | |
| عامل بلمرة هلام PAGE | شركة سولاربيو المحدودة | مادة تحضير جل البلوط الغربي. | |
| البارافين | غير محدد | وسط دمج للأقسام النسيجة. | |
| مقدمات PCR ل Akt1 وBcl-2 وStat3 وGapdh | شركة ووهان سيرفيسبيو تكنولوجي المحدودة. | تم سرد تسلسلات البادئات في الجدول 1. | |
| PDB | RCSB PDB | بنك بيانات البروتين؛ يستخدم للحصول على هياكل ثلاثية الأبعاد للبروتينات المستهدفة. | |
| مثبطات الفسفرة/البروتيازات | شركة سيرفيبيو | أضيف إلى مخزن تحليل RIPA لاستخراج البروتين. | |
| حمض الفوسفوتونغستيك | غير محدد | يستخدم في تلوين ماسون. | |
| بيكروسيريوس ريد | غير محدد | يستخدم في تلوين ماسون. | |
| غشاء ثنائي فلوريد البولي فينيليدين (0.45 & mu; m) | شركة سيرفيبيو | غشاء PVDF المستخدم لنقل البقع الغربية. | |
| مركبة دواء السيطرة الإيجابية | غير محدد | مركبة تعليق CMC-Na بنسبة 0.5٪ للسيلوكسيب. | |
| البوفيدون-يودين | غير محدد | يستخدم لتعقيم موقع العمليات الجراحية. | |
| علامة البروتين | ثيرمو فيشر ساينتفيك، الولايات المتحدة الأمريكية | مؤشر وزن جزيئي للوتات الغربية. | |
| جهاز نقل البروتين | بيو-راد، الولايات المتحدة الأمريكية | معدات النقل الرطب لاستخدام الطلاء الغربي. | |
| وحدة نقل البروتين (النقل الرطب) | بيو-راد، الولايات المتحدة الأمريكية | وحدة النقل الرطب من البقعة الغربية. | |
| بوبكيمياء | المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (NCBI) | يستخدم للحصول على ملفات SMILES/SDF للهياكل المركبة. | |
| نظام تحضير المياه النقية | شركة لو فنغ للتكنولوجيا الحيوية المحدودة، شنغهاي | يستخدم لتحضير الماء النقي. | |
| باي مول | شرö دينجر، ذ.م.م | يستخدم لتصوير وتحليل الديناميكا الجزيئية/مخرجات الإرساء. | |
| نظام qPCR اللحظي | Applied BioSystems QuantStudio، الولايات المتحدة الأمريكية | يستخدم لتضخيم PCR الكمي. | |
| حاجز تحلل الأنسجة/الخلايا في RIPA | شركة سولاربيو المحدودة | يستخدم لاستخراج البروتين بالكامل. | |
| حل ذوبان الحمض النووي الريبي | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | مادة معالجة RNA. | |
| المبخر الدوار | غير محدد | يستخدم لتركيز ترشيحات YQHXD المجمعة تحت ضغط منخفض. | |
| بذور سينابيس ألبا الناضجة | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 20240801 | المكون النباتي YQHXD؛ 10 جرام لكل وصفة طبية. |
| فئران سبراج-داولي | شركة شنغهاي سلاك للحيوانات التجريبية المحدودة. | SCXK (شنغهاي) 2022-0004 | سبعون فأرا ذكرا، أعمارهم 3 سنوات؛ 8 أسابيع، استخدم لنموذج ثقب القرص الذيلي. |
| SPSS | آي بي إم، الولايات المتحدة الأمريكية | الإصدار 21.0 | البرامج الإحصائية المدرجة في نسخة المخطوطة السابقة للمؤلفين. |
| مجموعة STAT3 ELISA | شركة هانغتشو أبينغ للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | SYP-R1555 | يستخدم لقياس مستويات STAT3 في المصل؛ نطاق الكشف 31.25– 1000 بيغم/مل. |
| جذر ستيفانيا تيتراندرا | صيدلية جيانشو، نانينغ، قوانغشي، الصين | الدفعة رقم 230301 | المكون النباتي YQHXD؛ 6 جرام لكل وصفة طبية. |
| الشاش المعقم | غير محدد | يستخدم لحماية موقع الثقب بعد النمذجة. | |
| الوتر | اتحاد STRING | الإصدار 12.0 | منصة شبكة تفاعل البروتين مع البروتين. |
| سوبرميكس RT الشامل SweScript لجهاز qPCR | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | G3337 | مادة الكاشف العكسي للنسخ مدرجة في جدول المواد الحالية. |
| توقعات الأهداف السويسرية | معهد SIB السويسري للمعلوماتية الحيوية | يستخدم للتنبؤ بالأهداف المحتملة للمركبات. | |
| مخزن TBST | غير محدد | يستخدم لغسل الغشاء أثناء الغسل الغربي. | |
| TCMSP | مركز المعلوماتية الحيوية، كلية علوم الحياة، جامعة نورث ويست إيه آند جامعة ف | الإصدار 2.3 | قاعدة بيانات أنظمة الأدوية للطب الصيني التقليدي؛ يستخدم للحصول على المكونات الفعالة من المركبات العشبية الصينية. |
| نموذج المياه TIP3P | غير قابل للتطبيق | نموذج الماء المستخدم في محاكاة الديناميكا الجزيئية. | |
| تولويدين بلو | غير محدد | يستخدم في تلوين ماسون. | |
| مخزن النقل | شركة سيرفيبيو | مخزن نقل البقعة الغربية. | |
| واشف TriQuick | شركة سيرفسبيو تكنولوجي المحدودة، ووهان | مادة استخراج RNA. | |
| كاشف ترايزول | غير محدد | كاشف استخراج الحمض النووي الريبي الكلي المذكور في المخطوطة. | |
| TTD | الجامعة الصينية في هونغ كونغ (IDRBLab) | قاعدة بيانات الأهداف العلاجية؛ يستخدم لاسترجاع الأهداف المرتبطة بالأمراض. | |
| فيني | BioinfoGP، CNB-CSIC | الإصدار 2.1.0 | يستخدم لتحديد الأهداف المتداخلة بين YQHXD وLDD. |
| مخطط القطع السريع | جروماكس | مخطط التفاعل غير المرتبط المستخدم في محاكاة الديناميكا الجزيئية. | |
| جهاز الرحلان الكهربائي الرأسي | بيو-راد، الولايات المتحدة الأمريكية | يستخدم لصالة SDS-PAGE. | |
| VMD | جامعة إلينوي في أوربانا-شامبين | يستخدم لتصوير وتحليل مخرجات ديناميكا جزيئية. | |
| نظام النقل الرطب | بيو-راد، الولايات المتحدة الأمريكية | يستخدم لنقل البروتين في البلوتينغ الغربي. | |
| نظام الفلوروسكوب بالأشعة السينية | غير محدد | يستخدم لتحديد مستويات IVD الذيلية أثناء نمذجة الثقب. | |
| زيلين | غير محدد | يستخدم لإزالة البارافين/التنظيف أثناء علم الأنسجة. | |
| β-actin الجسم المضاد الأولي | شركة ووهان سانينغ المحدودة. | الأجسام المضادة الأساسية للتحكم في التحميل لعلاج Western Blutting; التخفيف 1:4,000. |