مقالة بحثية

تنظيم عملية الوخز الإبري الجراحي لمحور RIC8A/P38 MAPK استناداً إلى السقالة البروتينية لـ CircRNA لتعزيز إصلاح الغضروف في حالات الفصال العظمي في الركبة

80 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/71422

⸱

أغسطس 18, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Tuina, Shuguang Anhui Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of First Clinical Medical College, Anhui University of Chinese Medicine, 3Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

بحثت هذه الدراسة فيما إذا كان الوخز الإبري الجراحي (acupotomy) يعزز إصلاح الغضاريف في نموذج أرانب مصابة بفصال الركبة العظمي. تم توزيع خمسين أرنباً على خمس مجموعات، حيث تم إجراء الوخز الإبري الجراحي أسبوعياً لمدة 4 أسابيع. وتم تقييم تورم المفاصل، والفحص النسيجي المرضي، والسيتوكينات الالتهابية، والمؤشرات المرتبطة بمحور circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK لاستكشاف الآلية الكامنة.

الملخص

يتميز فصال الركبة العظمي (KOA) بتدهور تدريجي في الغضاريف والتهابات. بحثت هذه الدراسة في التأثيرات العلاجية للوخز الإبري الجراحي (acupotomy) في نموذج أرنب مصاب بفصال الركبة العظمي وعلاقته بمحور إشارات RNA الدائري phosphodiesterase 4B (circPDE4B)/مقاومة مثبطات كولين استريز 8A (RIC8A)/بروتين كيناز p38 المنشط بالميتوجين (MAPK). تم توزيع خمسين أرنباً من سلالة نيوزيلندا البيضاء عشوائياً على خمس مجموعات (العدد = 10 لكل مجموعة): المجموعة الضابطة، ومجموعة نموذج KOA، ومجموعة celecoxib، ومجموعة الوخز الإبري الجراحي، ومجموعة الوخز الإبري الجراحي الوهمي. تم تحفيز KOA باستخدام طريقة Videman المعدلة. وبدءاً من 6 أسابيع بعد إنشاء النموذج، تم إجراء الوخز الإبري الجراحي مرة واحدة أسبوعياً لمدة 4 أسابيع، بينما تم إعطاء celecoxib يومياً عن طريق التغذية القسرية بجرعة 24 mg/kg لمدة 4 أسابيع. تم تقييم تورم الركبة والتشريح المرضي النسيجي للغضروف. وقِيست مستويات interleukin-1β (IL-1β) وtumor necrosis factor-α (TNF-α) وinterleukin-6 (IL-6) في متجانسات أنسجة الغضروف باستخدام المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA). كما تم تقييم التعبير الجيني والبروتيني المرتبط باستقلاب الغضاريف ومحور circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي بالنسخ العكسي (qRT-PCR) ولطخة ويسترن (Western blotting). وبالمقارنة مع مجموعة نموذج KOA، قلل الوخز الإبري الجراحي من تورم الركبة، وحسّن درجات التشريح المرضي النسيجي، وخفض مستويات السيتوكينات الالتهابية، وأدى إلى تثبيط تعبير matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) وmatrix metalloproteinase-13 (MMP-13) وRIC8A وp38 MAPK المفسفر، بينما حفز تعبير SRY-box transcription factor 9 (SOX9) وaggrecan وcircPDE4B النسبي. كانت تأثيراته مماثلة لتأثيرات celecoxib، في حين لم يؤدِ الوخز الإبري الجراحي الوهمي إلى أي تحسن ملحوظ. تشير هذه النتائج إلى أن الوخز الإبري الجراحي يخفف من الالتهاب وتدهور الغضاريف في حالات KOA لدى الأرانب، ويرتبط ذلك بتعديل محور circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK.

المقدمة

يُعد فصال الركبة العظمي (KOA) مرضًا مفصليًا تنكسيًا شائعًا يتميز بالتدهور التدريجي للغضاريف، والتهاب الغشاء الزليلي، وتصلب العظم تحت الغضروفي، وتكون النوابت العظمية1,2,3. ومع شيخوخة السكان على مستوى العالم، يستمر معدل الإصابة بفصال الركبة العظمي في الارتفاع، مما يجعله سببًا رئيسيًا لخلل وظائف المفاصل والألم المزمن بين البالغين في منتصف العمر وكبار السن في جميع أنحاء العالم4,5,6. وتركز العلاجات السريرية الحالية بشكل أساسي على تخفيف الأعراض من خلال العوامل الدوائية، مثل مضادات الالتهاب غير الستيرويدية (NSAIDs) وحقن الكورتيكوستيرويدات داخل المفصل. ومع ذلك، لا تزال العلاجات المعدلة للمرض والقادرة على وقف تطور المرض أو تعزيز إصلاح الغضاريف محدودة7,8.

سلطت الأدلة الناشئة الضوء على الأدوار التنظيمية الهامة للحمض النووي الريبوزي غير المشفر (ncRNAs) في إمراضية وتطور فصال الركبة العظمي (KOA)9,10,11. ومن بين هذه الـ ncRNAs، جذبت الحموض النووية الريبوزية الدائرية (circRNAs) اهتماماً متزايداً بسبب بنيتها الفريدة ذات الحلقة المغلقة تساهمياً، والتي تمنحها استقراراً أكبر من الحموض النووية الريبوزية الخطية، فضلاً عن وظائفها البيولوجية المتنوعة12,13. وقد ذكر Shen وآخرون أن circPDE4B يعمل كسقالة جزيئية تنظم المقاومة لمثبطات مسار تأشير RIC8A (resistance to cholinesterase 8A)/p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK)، مما يؤثر بالتالي على استقلاب المصفوفة خارج الخلية في الخلايا الغضروفية والاستجابات الالتهابية14. ويلعب مسار RIC8A/p38 MAPK دوراً هاماً في تنظيم الالتهاب، والهدم، والموت الخلوي المبرمج، والشيخوخة في الخلايا الغضروفية، والتي تساهم جميعها في إمراضية الفصال العظمي15.

يُعد الوخز بالإبر الجراحية (Acupotomy) نهجاً علاجياً طفيف التوغل يدمج بين نظرية الطب الصيني التقليدي والمبادئ التشريحية الحديثة، وقد أظهر فعالية واعدة في الإدارة السريرية لفصال الركبة العظمي (KOA)16,17. وتستخدم هذه التقنية جهاز إبرة-سكين متخصصاً لتحرير التصاقات الأنسجة الرخوة، وتحسين الدورة الدموية المحلية، واستعادة التوازن الميكانيكي الحيوي حول المفاصل المصابة، مما يؤدي إلى تخفيف الألم وتحسين الوظيفة لدى المرضى الذين يعانون من فصال الركبة العظمي (KOA)18. وعلى الرغم من هذه الفوائد السريرية المسجلة، فإن الآليات الجزيئية الكامنة وراء التأثيرات العلاجية للوخز بالإبر الجراحية، لا سيما تنظيمه المحتمل لمسارات التأشير التي تتوسطها الـ circRNA والمشاركة في إصلاح الغضاريف، لا تزال غير مستكشفة إلى حد كبير.

من الناحية الميكانيكية، يولد الوخز الإبري الجراحي (acupotomy) محفزات ميكانيكية موضعية من خلال تحرير الأنسجة الرخوة المحيطة بالمفاصل. وتعد الخلايا الغضروفية خلايا حساسة ميكانيكياً تستجيب للإشارات الميكانيكية الحيوية، وقد ثبت أن الحمض النووي الريبي الدائري (circRNAs) يشارك في استجابات التحويل الميكانيكي للخلايا الغضروفية19,20. وعلى الرغم من نقص الأدلة المباشرة التي تربط الوخز الإبري الجراحي بتنظيم الـ circRNAs الخاصة بالغضروف المفصلي، إلا أنه من المعقول بيولوجياً أن تؤدي الإشارات الميكانيكية الناتجة عن الوخز الإبري الجراحي إلى تعديل الـ circRNAs الحساسة ميكانيكياً مثل circPDE4B. وقد شكل هذا الاحتمال أساس البحث الحالي.

بناءً على النتائج السابقة المتعلقة بالدور التنظيمي لـ circPDE4B في محور إشارات RIC8A/p38 MAPK، استخدمت الدراسة الحالية نموذج أرنب لمرض KOA المستحث بواسطة طريقة Videman المعدلة لاختبار فرضية أن الوخز الإبري الجراحي (acupotomy) يعزز إصلاح الغضروف عن طريق تعديل مسار إشارات circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK. تم اختيار الوخز الإبري الجراحي لهذه الدراسة بدلاً من التدخلات الأخرى لـ KOA لعدة أسباب. أولاً، مقارنة بالعوامل الدوائية مثل مضادات الالتهاب غير الستيرويدية (NSAIDs) والسليكوكسيب، التي توفر في المقام الأول تخفيفاً للأعراض وارتبطت بتأثيرات محدودة في تعديل المرض وآثار جانبية محتملة على المدى الطويل7,8، يقدم الوخز الإبري الجراحي نهجاً غير دوائي يعالج كلاً من العوامل الميكانيكية المحلية ومسارات الإشارات البيولوجية. ثانياً، على عكس حقن الكورتيكوستيرويد أو حمض الهيالورونيك داخل المفصل، والتي تتطلب إعطاءً متكرراً داخل المفصل وتحمل مخاطر العدوى وتلف المفصل، يستهدف الوخز الإبري الجراحي الأنسجة الرخوة المحيطة بالمفصل وقد يمارس تأثيرات ميكانيكية حيوية وكيميائية حيوية مستدامة21. ثالثاً، أظهرت الأدلة السريرية أن الوخز الإبري الجراحي يحقق نتائج مماثلة أو متفوقة على العلاجات التقليدية في تقليل الألم وتحسين وظيفة المفصل لدى المرضى المصابين بـ KOA، واقترحت الدراسات التجريبية أن الوخز الإبري الجراحي يعدل الاستجابات الالتهابية واستقلاب الخلايا الغضروفية21,22. ومع ذلك، لا تزال المسارات الجزيئية المحددة التي يمارس من خلالها الوخز الإبري الجراحي تأثيراته الواقية للغضروف غير محددة بدقة، خاصة فيما يتعلق بالإشارات التي يتوسطها circRNA. وبالتالي، فإن استقصاء العلاقة بين الوخز الإبري الجراحي ومحور circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK قد يوفر رؤى ميكانيكية جديدة ويدعم استخدام الوخز الإبري الجراحي كتدخل معدل للمرض في حالات KOA16,18. كانت النقاط النهائية الأولية هي تورم مفصل الركبة، وتدهور الغضروف النسيجي المرضي (درجات Mankin و Moran)، ومستويات السيتوكينات الالتهابية (interleukin-1β و tumor necrosis factor-α و interleukin-6)، وتعبير المؤشرات المرتبطة باستقلاب الغضروف (matrix metalloproteinase-3 و matrix metalloproteinase-13 و SRY-box transcription factor 9 و aggrecan)، وتعبير circPDE4B و RIC8A، بالإضافة إلى فسفرة p38 MAPK. تم إجراء الوخز الإبري الجراحي مرة واحدة أسبوعياً لمدة 4 أسابيع في نقاط مختارة حول المفصل باستخدام تقنية الخطوات الأربع (التحرير الطولي، والفصل المستعرض، وشق العقد). واستُخدم التقييم النسيجي المرضي، وقياس السيتوكينات الالتهابية، وتحليلات تعبير الجينات والبروتينات لتوصيف تأثيرات الوخز الإبري الجراحي واستكشاف أساسه الجزيئي المحتمل في KOA.

البروتوكول

تم إجراء جميع الإجراءات الحيوانية وفقاً للإرشادات المؤسسية لرعاية واستخدام حيوانات المختبر، وقد تمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة آنهوي للطب الصيني (رقم الموافقة AHUCM-rabbits-2023195). الكواشف والمواد الكيميائية والبرمجيات والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في جدول المواد.

1. الحيوانات التجريبية والتقسيم إلى مجموعات
تم الحصول على خمسين أرنباً ذكراً بالغاً وسليماً من سلالة New Zealand White (بعمر 6 أشهر، ووزن يتراوح بين 2.0–2.5 kg) من مزرعة Laifu Breeding Farm في منطقة Pukou بنانجينغ (رخصة إنتاج الحيوانات رقم: SCXK (Su) 2024-07). خضعت جميع الحيوانات لفترة تغذية للتأقلم لمدة أسبوع واحد قبل بدء التجربة. تم تخصيص الركبة اليمنى لتقييم التورم والركبة اليسرى لجمع أنسجة الغضروف وفقاً لاتفاقية إجرائية ثابتة، وليس بناءً على فرضية تجريبية محددة. بعد التأقلم، وُزعت الأرانب عشوائياً على خمس مجموعات (n = 10 لكل مجموعة): مجموعة ضابطة، لم تخضع لأي إجراء نمذجة أو علاج؛ ومجموعة نموذج KOA، حيث تم تحفيز KOA باستخدام طريقة Videman المعدلة؛ ومجموعة celecoxib، حيث بدأ العلاج الدوائي بعد 6 أسابيع من النمذجة؛ ومجموعة acupotomy، حيث بدأ علاج الـ acupotomy بعد 6 أسابيع من النمذجة؛ ومجموعة acupotomy وهمية، حيث بدأ إدخال الإبر دون قطع أو إرخاء بعد 6 أسابيع من النمذجة.

2. إنشاء نموذج التهاب المفاصل العظمي (KOA)
خضعت جميع الأرانب، باستثناء تلك الموجودة في مجموعة الضبط، لإجراء "فيدمان" المعدل لتحفيز الإصابة بالتهاب المفاصل العظمي. صِيّمت الحيوانات لمدة 12 h قبل الجراحة. تم إجراء التخدير عن طريق الحقن الوريدي لـ 3% pentobarbital sodium بجرعة 30 mg/kg عبر الوريد الهامشي للأذن. وبعد التحضير الروتيني لموقع الجراحة والتطهير والتغطية بالستائر المعقمة، تم إجراء شق طولي على طول الجانب الإنسي لمفصل الركبة. ثم قُطع الرباط الجانبي الإنسي والرباط الصليبي الأمامي بالتتابع، وأُزيل الغضروف الهلالي الإنسي بالكامل. بعد ذلك، أُغلق الشق الجراحي على شكل طبقات.

لتقليل مخاطر حدوث عدوى بعد الجراحة، تم إعطاء البنسلين عن طريق الحقن العضلي بجرعة 40,00 U/kg/day لمدة 3 أيام متتالية. وبعد الجراحة، أُعيدت الأرانب إلى أقفاصها وسُمح لها بالحركة دون قيود وبدون تثبيت المفاصل.

3. علاج الوخز الإبري الوهمي
بعد 6 أسابيع من نمذجة التهاب مفاصل الركبة (KOA)، خضعت الأرانب في مجموعة الوخز الإبري الوهمي لنفس إجراءات الجس وتحديد النقاط المستخدمة في علاج الوخز الإبري الفعال. تم إدخال إبرة وخز إبري معقمة تستخدم لمرة واحدة بمقاس 0.35 mm × 25 mm بشكل عمودي عبر الجلد عند كل نقطة محددة حتى الوصول إلى الأنسجة تحت الجلد. لم يتم إجراء أي قطع أو إرخاء أو تحريك عرضي أو أي مناورة تحرير ميكانيكية أخرى. سُحبت الإبرة فور إدخالها دون التلاعب بالأنسجة. تم تقديم العلاج الوهمي مرة واحدة أسبوعياً لمدة 4 أسابيع متتالية.

4. علاج الوخز الإبري الجراحي (Acupotomy)
بعد 6 أسابيع من نمذجة التهاب مفاصل الركبة (KOA)، تم تثبيت الأرانب في مجموعة العلاج بالوخز الإبري الجراحي على طاولة العلاج. تم جس الأنسجة المحيطة بالمفصل حول الركبة المصابة، خاصة حول الرضفة والمساحات المفصلية الإنسية والوحشية، لتحديد البنى الشبيهة بالحبال أو العقد الصلبة. تم اختيار من أربع إلى ست نقاط علاجية بناءً على نتائج الجس وتم تحديدها على الجلد.

تم حلق منطقة العلاج وتطهيرها باستخدام الإجراءات التعقيمية الروتينية. أُدخلت إبرة وخز إبرية (acupotomy) معقمة المرة الواحدة بقياس 0.35 mm × 25 mm ببطء وبشكل عمودي عند كل نقطة محددة حتى الوصول إلى سطح العظم. نُفذ الإجراء وفقاً لتقنية الوخز الإبري المكونة من أربع خطوات؛ حيث تم إجراء التحرير الطولي أولاً، يليه الفصل العرضي. وعند مواجهة عقدة صلبة، يتم شقها حتى الشعور بإحساس تحرر واضح من خلال الإبرة القاطعة. بعد انتهاء الإجراء، سُحبت الإبرة، وضُغط على كل موقع إدخال لفترة وجيزة بقطعة شاش معقمة ثم غُطي بضمادة لاصقة. قُدم العلاج مرة واحدة أسبوعياً لمدة 4 أسابيع متتالية.

5. العلاج الدوائي
بعد 6 أسابيع من نمذجة الفصال العظمي في الركبة (KOA)، تلقت الأرانب في مجموعة سيليكوكسيب (celecoxib) معلق سيليكوكسيب عن طريق التغذية القسرية الفموية بجرعة 24 mg/kg مرة واحدة يومياً لمدة 4 أسابيع متتالية. تم تحضير المعلق طازجاً كل يوم في محلول ملحي فسيولوجي. تتوفر معلومات المورد والكتالوج في جدول المواد.

6. تقييم تورم مفصل الركبة
في نهاية فترة التدخل، والتي تقابل 10 أسابيع بعد نمذجة فصال الركبة العظمي (KOA)، تم تقييم تورم مفصل الركبة. تم لف خيط حريري ناعم حول المنطقة الأكثر تورماً في مفصل الركبة اليمنى، وعادة ما يكون ذلك عند مستوى الهضبة الظنبوبية. أزيل الخيط وقيس لأقرب مليمتر باستخدام مسطرة، وعُرِّف الطول المسجل على أنه محيط الركبة.

تم حساب نسبة الانتفاخ النسبية باستخدام المعادلة التالية:

صيغة نسبة الانتفاخ النسبية، ومعادلة مقارنة محيط الركبة في دراسة تجريبية على الأرانب.

7. جمع العينات
في نهاية فترة التدخل، تم تخدير الأرانب عن طريق الحق الوريدي لـ 3% pentobarbital sodium بجرعة 30 mg/kg عبر الوريد الهامشي للأذن. ثم فُتح مفصل الركبة اليسرى باستخدام شفرة مشرط رقم 23 للكشف عن الأسطح المفصلية للهضبة الظنبوبية واللقيمات الفخذية، وجُمعت أنسجة الغضروف المفصلي من هذه المناطق.

قُسمت كل عينة من الغضروف إلى جزأين؛ ثُبّت الجزء الأول في 4% paraformaldehyde لإجراء الفحص الهيستوباثولوجي، بينما وُضع الجزء الثاني في أنابيب تجميد، وجُمّد سريعاً في النيتروجين السائل، ثم حُفظ في درجة حرارة −80 °C حتى إجراء التحاليل الجزيئية. وفور الانتهاء من جميع إجراءات جمع الأنسجة، تم قتل الأرانب عن طريق الانصمام الهوائي عبر حقن الهواء وريدياً وبسرعة من خلال الوريد الهامشي للأذن.

أُجري الصبغ النسيجي وتقييم Mankin وMoran باستخدام عينات غضروفية من جميع الأرانب العشرة لكل مجموعة (n = 10). واختيرت صور تمثيلية لصبغة الهيماتوكسيلين والإيوسين وصبغة Safranin O–Fast Green من ثلاثة أرانب اختيرت عشوائياً من كل مجموعة. كما أُجري الفحص الكيميائي النسيجي المناعي واللطخة الغربية باستخدام عينات من ثلاثة أرانب اختيرت عشوائياً من كل مجموعة (n = 3). وأُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مع النسخ العكسي والمقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم باستخدام عينات من ستة أرانب اختيرت عشوائياً من كل مجموعة (n = 6). وقد تم إجراء جميع عمليات اختيار المجموعات الفرعية عشوائياً دون معرفة مسبقة بتوزيعات المجموعات.

8. صبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين
تم إزالة الكالسيوم من أنسجة الغضاريف المثبتة في 4% paraformaldehyde باستخدام محلول حمض إيثيلين ديامين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA) بتركيز 10% وبدرجة pH 7.4 لمدة تتراوح بين 4 و6 أسابيع. تم استبدال محلول إزالة الكالسيوم كل 3 أيام. وبعد التأكد من إزالة الكالسيوم عن طريق اختراق الإبرة، تم تجفيف الأنسجة عبر سلسلة متدرجة من الإيثانول بتركيزات 70%، 80%، 90%، 95%، و10%، ثم جرى ترويقها في xylene، وطمرها في البارافين. تم تقطيع الأنسجة المطرومة بسمك 5 µm باستخدام الميكروتوم، ثم وُضعت المقاطع على شرائح زجاجية.

لإجراء صبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين، تم تسخين المقاطع عند 60 °C لمدة 60 min، وإزالة البارافين باستخدام الزيلين من خلال ثلاث تغييرات مدة كل منها 5 min، ثم إعادة الترطيب بالتتابع في إيثانول بتركيزات 10% و95% و80% و70%، يليه الماء المقطر. صُبغت المقاطع بالهيماتوكسيلين لمدة 5 min، ثم غُسلت تحت مياه الصنبور الجارية لمدة 10 min، وأجري التمايز في حمض الهيدروكلوريك بتركيز 1% مُحضّر في إيثانول 70% لمدة 2–3 s، ثم غُسلت بالماء المقطر. بعد ذلك، صُبغت المقاطع بالإيوسين لمدة 2 min، وغُسلت بالماء المقطر، ثم جُففت عبر إيثانول بتركيزات 70% و80% و90% و95% و10%، ونُقيت في الزيلين، وثُبتت باستخدام راتنج محايد. تم فحص مورفولوجيا الغضروف، والتقاط صور ممثلة باستخدام المجهر الضوئي.

9. صبغ Safranin O–Fast Green
تمت إزالة البارافين من مقاطع الغضروف المدمجة في البارافين وإعادة ترطيبها كما هو موضح في القسم 8. صبغت المقاطع بـ Weigert iron hematoxylin لمدة 5 min وشُطفت بالماء المقطر. بعد ذلك، صبغت المقاطع بمحلول Fast Green بتركيز 0.05% لمدة 3 min، وشُطفت لفترة وجيزة في حمض الخليك بتركيز 1% لمدة 10–15 s، ثم صبغت بمحلول Safranin O بتركيز 0.1% لمدة 5 min.

بعد الصبغ، جُففت المقاطع سريعاً في إيثانول بتركيز 95% و10%، ثم شُففت باستخدام الزايلين، وثُبتت باستخدام راتنج متعادل. وفُحصت المقاطع المصبوغة باستخدام مجهر ضوئي. وحُللت كثافة صبغ Safranin O، والتي تعكس محتوى البروتيوغليكان، تحليلاً شبه كمي باستخدام برنامج لتحليل الصور.

10. التقييم النسيجي
قام طبيبان متخصصان في علم الأمراض، لم يكن لديهما علم بتوزيع المجموعات التجريبية، بتقييم المقاطع المصبوغة بشكل مستقل باستخدام نظامي "مانكين" (Mankin) و"موران" (Moran) للتقييم من أجل تقدير درجة تنكس الغضروف. وقبل عملية التقييم، تم تعيين رموز تعريف عشوائية لجميع المقاطع. ولم يتم الكشف عن توزيعات العلاج لأطباء علم الأمراض إلا بعد اكتمال جميع عمليات التقييم23.

1. المقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بالإنزيم
تم وزن أنسجة الغضروف المجمدة، وخلطها مع محلول ملحي منظم بالفوسفات عند pH 7.4، ثم تجنيسها جيداً على الثلج. تم إجراء طرد مركزي للمجانس عند 3,0 × g لمدة 20 min عند 4 °C، وجُمع السائل العلوي للتحليل. تم قياس تركيزات interleukin-1β (IL-1β) وtumor necrosis factor-α (TNF-α) وinterleukin-6 (IL-6) في السائل العلوي للأنسجة باستخدام أطقم المقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بالإنزيم الخاصة بالأرانب وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.

12. تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي مع النسخ العكسي
تم استخلاص RNA الكلي من نسيج الغضروف باستخدام طريقة تعتمد على الفينول والكلوروفورم. وباختصار، تم تحلل النسيج في كاشف استخلاص RNA، وأضيف الكلوروفورم لفصل الطورين المائي والعضوي. جُمع الطور المائي، ورُسب RNA باستخدام الإيزوبروبانول، ثم غُسل بالإيثانول بتركيز 75%، وجُف في الهواء، وأذيب في ماء معالج بـ diethyl pyrocarbonate. وقِيست تركيزات ونقاوة RNA باستخدام مقياس الطيف الضوئي.

قبل عملية النسخ العكسي، تمت إزالة الحمض النووي الجينومي المتبقي باستخدام كاشف للتخلص من الحمض النووي الجينومي. ثم تم تخليق الحمض النووي المكمل باستخدام طقم النسخ العكسي وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. وأجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي باستخدام طريقة كشف تعتمد على SYBR Green على نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي. وكانت ظروف الدورات كما يلي: مسخ أولي عند 95 °C لمدة 1 min، يليه 40 دورة من المسخ عند 95 °C لمدة 20 s، والارتباط والاستطالة عند 60 °C لمدة 1 min. كما أُجري تحليل منحنى التفكك لتقييم خصوصية التضخيم.

تم قياس مستويات تعبير كل من البروتينات المعدنية المصفوفية-3 (MMP-3)، والبروتينات المعدنية المصفوفية-13 (MMP-13)، وعامل النسخ SRY-box 9 (SOX9)، والأغريكان، و RIC8A، و circPDE4B. وقد استُخدم β-actin كجين مرجعي داخلي. حُسب التعبير النسبي باستخدام هذه الطريقة. تتوفر تسلسلات البادئات في الجدول 1.

13. تحليل لطخة ويسترن
تم تحلل نسيج الغضروف في محلول منظم لمقايسة الترسيب المناعي الإشعاعي (radioimmunoprecipitation assay buffer) مضافاً إليه فينيل ميثيل سلفونيل فلوريد. تم طرد lysate مركزياً عند 12,0 × g لمدة 15 دقيقة عند 4 °C، وجُمع الرائق ككسر بروتيني كلي. تم تحديد تركيز البروتين باستخدام مقايسة حمض البيسينكونينيك.

فُصلت كميات متساوية من البروتين (30 µg لكل مسار) باستخدام الفصل الكهربائي الهلامي بـ 10% sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis، ثم نُقلت إلى أغشية polyvinylidene fluoride التي تم تنشيطها مسبقاً في الميثانول. أُجريت عملية النقل عند 30 mA وبدرجة حرارة 4 °C. وكانت أوقات النقل كما يلي: aggrecan (250 kDa) لمدة 90 min؛ وMMP-3 (60 kDa)، وRIC8A (59 kDa)، وSOX9 (56 kDa)، وMMP-13 (52 kDa) لمدة 50 min؛ وp38 MAPK (41 kDa) وGAPDH (36 kDa) لمدة 40 min. تم حجب الأغشية باستخدام 5% من الحليب الجاف خالي الدسم في محلول Tris-buffered saline يحتوي على Tween 20 لمدة 2 h في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، حُضنت الأغشية طوال الليل عند 4 °C مع الأجسام المضادة الأولية ضد MMP-3 (1:2,0)، وMMP-13 (1:1,0)، وSOX9 (1:1,0)، وaggrecan (1:1,00)، وRIC8A (1:1,50)، وphosphorylated p38 MAPK (1:1,00)، وtotal p38 MAPK (1:2,00). واستُخدم GAPDH (1:2,0) كضابط للتحميل (loading control). وبعد ثلاث غسلات بمحلول Tris-buffered saline يحتوي على Tween 20 (لمدة 10 min لكل غسلة)، حُضنت الأغشية مع أجسام مضادة ثانوية مقترنة بـ horseradish peroxidase بتركيز (1:20,0) لمدة 1.2 h في درجة حرارة الغرفة. وبعد ثلاث غسلات إضافية، تم تصور حزم البروتين باستخدام ركيزة التلألؤ الكيميائي المعززة (enhanced chemiluminescence substrate) وتصويرها باستخدام نظام توثيق الهلام (gel documentation system). كُمّمت شدة الحزم باستخدام برنامج ImageJ ومعايرتها بالنسبة لـ GAPDH.

14. الكيمياء النسيجية المناعية
تمت إزالة البارافين من مقاطع الغضروف المدمجة في البارافين وإعادة ترطيبها من خلال سلسلة متدرجة من الإيثانول (ثلاث تغييرات من الزيلين، لمدة 5 min لكل منها؛ تليها إيثانول بتركيز 100% و 95% و 80%، لمدة 3 min لكل منها). تم إجراء استعادة المستضد عن طريق تسخين المقاطع في محلول EDTA المنظم (pH 9.0) في قدر ضغط. سُخن المحلول المنظم حتى الغليان، وبعد الوصول إلى الضغط المطلوب، استمرت عملية الاستعادة لمدة 2 min، ثم تلتها عملية التبريد حتى درجة حرارة الغرفة. تم حجب نشاط البيروكسيديز الداخلي باستخدام بيروكسيد الهيدروجين بتركيز 3% لمدة 10 min في درجة حرارة الغرفة. وبعد الغسل، تم حجب الارتباط غير النوعي باستخدام مصل الماعز لمدة 20 min في درجة حرارة الغرفة وفي الظلام.

حُضنت المقاطع مع أجسام مضادة أولية ضد phosphorylated p38 MAPK بنسبة (1:80) وphosphorylated nuclear factor kappa B (NF-κB) بنسبة (1:30) لمدة 60 min عند 37 °C. وبعد ثلاث غسلات بمحلول phosphate-buffered saline يحتوي على Tween 20، حُضنت المقاطع مع أجسام مضادة ثانوية مناسبة مقترنة بإنزيم horseradish peroxidase لمدة 30 min عند 37 °C. وبعد ثلاث غسلات إضافية، استُخدم diaminobenzidine لإظهار اللون (تحت تحكم المجهر)، متبوعاً بالصبغ الطباقي بـ hematoxylin لمدة (2 min)، ثم التمايز في 1% hydrochloric acid في 70% ethanol، والتزريق في محلول lithium carbonate لمدة (30 s). بعد ذلك، جُففت المقاطع، ثم نُقيت، وثُبتت، وفُحصت باستخدام المجهر الضوئي. قُيم التلوين باستخدام برنامج ImageJ، وحُسبت الكثافة الضوئية المتكاملة لإجراء تحليل شبه كمي.

15. التحليل الإحصائي
يتم عرض البيانات في شكل المتوسط ± الخطأ المعياري للمتوسط (SEM). وقد أُجريت المقارنات بين المجموعات المتعددة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way analysis of variance) متبوعًا باختبار توكي البعدي (Tukey’s post hoc test). واعتُبرت القيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

يُخفف الوخز بالإبر الدقيقة من التغيرات النسيجية في الغضروف المفصلي
كما هو موضح في الشكل 1A و1B، زاد محيط الركبة ونسبة التورم النسبية بشكل ملحوظ في مجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة مقارنةً بمجموعة الضبط. وقد انخفض كلا المقياسين بشكل ملحوظ بعد العلاج بالوخز بالإبر الدقيقة أو السيلوكسيب، في حين لم يُنتج الوخز الوهمي تحسنًا ذا دلالة إحصائية مقارنةً بمجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة.

كما هو موضح في الشكلين 1C و1D، كان مجموع مانكين أعلى بشكل كبير في مجموعة نموذج KOA مقارنةً بمجموعة الضبط، وانخفض بشكل كبير بعد العلاج بالوخز بالإبر أو السيلوكوكسيب. لم يُلاحظ انخفاض كبير في مجموعة الوخز بالإبر الوهمية. وأظهر مجموع موران نمطًا عكسيًا.

أظهر تلوين الهيماتوكسيلين واليوزين وصبغة سافرانين أو – الأخضر السريع ترققًا وانقطاعًا في سطح الغضروف المفصلي، مع تآكل موضعي، في مجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة مقارنةً بمجموعة الضبط (الشكل 1E، F). وحسّن كل من العلاج بالإبر الجراحية والسيليكوكسيب هذه التغيرات المرضية، كما يدل على ذلك وضوح حدود الغضروف وتقلص الضرر البنيوي. على النقيض، أظهرت مجموعة الإبر الوهمية مظاهر مرضية مشابهة لتلك الموجودة في مجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة. تشير هذه النتائج إلى أن العلاج بالإبر الجراحية أنتج تأثيرات تُعادل تأثيرات السيليكوكسيب في تقليل تورم المفصل وتنكس الغضروف وتحسين الدرجات النسيجية في نموذج التهاب المفاصل الركبة.

يقلل الوخز الجراحي من مستويات السيتوكينات الالتهابية
كما هو موضح في الشكل 2A–C، كانت تركيزات إنترلوكين-1β (IL-1β) وعامل نخر الورم-α (TNF-α) وإنترلوكين-6 (IL-6) في مستحلبات نسيج الغضروف أعلى بشكل كبير في مجموعة نموذج OA المفصلية مقارنةً بمجموعة الضبط. وقد قلل العلاج بالوخز الجراحي أو السيلوكوكسيب بشكل كبير من مستويات السيتوكينات الالتهابية الثلاثة. على النقيض من ذلك، لم تُظهر مجموعة الوخز الجراحي الوهمي أي انخفاض كبير مقارنةً بمجموعة نموذج OA المفصلية.

يُعدل الوخز بالإبرة المقطوعة مسار إشارة RIC8A/p38 MAPK على مستوى البروتين
أظهر التحليل المناعي النسيجي أن تعبير بروتين كيناز الميتوجين النشط المُفسفر (p-p38 MAPK) وعامل النسخ النووي كابا بي المُفسفر (NF-κB) كان أقل بشكل ملحوظ في مجموعتي الوخز بالإبرة المقطوعة والسيليكوكسيب مقارنةً بمجموعة النموذج KOA (الشكل 3A). ولم يُلاحظ أي فرق كبير بين مجموعة الوخز الزائفة بالإبرة المقطوعة ومجموعة نموذج KOA.

أظهر تحليل الوسترن بلوت أن مستويات البروتينات الخاصة بإنزيم مصفوفة معدنية بروتيناز-3 (MMP-3)، وإنزيم مصفوفة معدنية بروتيناز-13 (MMP-13)، ومقاومة مثبطات الكولينستيراز 8A (RIC8A)، وp-p38 MAPK كانت أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة نموذج التهاب المفاصل التنكسي الركبة مقارنةً بمجموعة الضبط، في حين كانت مستويات البروتينات المرتبطة بتكوين الغضروف، مثل عامل النسخ SRY-box 9 (SOX9) والأججريكان، أقل بشكل ملحوظ. بالمقارنة مع مجموعة نموذج التهاب المفاصل التنكسي الركبة، أظهرت مجموعتا العلاج بالإبر الجراحية والسيليكوكسيب انخفاضاً في التعبير عن MMP-3 وMMP-13 وRIC8A وp-p38 MAPK، وزيادة في التعبير عن SOX9 والأججريكان. أما مجموعة العلاج الوهمي بالإبر الجراحية فقد أظهرت أنماطاً تعبيرية بروتينية مشابهة لتلك الموجودة في مجموعة نموذج التهاب المفاصل التنكسي الركبة، دون تغيرات كبيرة في البروتينات المقاسة (الشكل 3B–I). تشير هذه النتائج إلى أن تأثيرات العلاج بالإبر الجراحية والسيليكوكسيب في التهاب المفاصل التنكسي الركبة ترتبط بتعديل مسار إشارات RIC8A/p38 MAPK.

يُعدِّل الإبر القاطع مسار إشارة RIC8A/p38 MAPK على مستوى النسخ الجيني
كما هو موضح في الشكل 4A–G، كانت مستويات التعبير عن MMP-3 وMMP-13 وRIC8A أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة مقارنةً بمجموعة التحكم، في حين كان التعبير عن SOX9 والأجريكان أقل بشكل ملحوظ. مقارنةً بمجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة، خفضت العلاجات بالإبر القاطع والسيليكوكسيب من التعبير عن MMP-3 وMMP-13 وRIC8A وزيادة التعبير عن SOX9 والأجريكان. ولم تُظهر مجموعة الإبر القاطع الوهمية أي فروق كبيرة مقارنةً بمجموعة نموذج التهاب المفاصل الركبة في مستويات النسخ المقاسة.

كما زاد العلاج بالإبرة المقطوعة من التعبير النسبي لـ circPDE4B، مما يشير إلى أن آثاره العلاجية كانت مرتبطة بالتعديل في محور إشارات circPDE4B/RIC8A/p38 MAPK، وبانخفاض الإشارات الالتهابية والتحللية.

توافر البيانات:
البيانات الأولية التي تدعم نتائج هذه الدراسة، بما في ذلك ELISA، H&تُتاح بيانات التلوين بالهيماتوكسيلين والإيوزين، والمناعَة النسيجية، وتحليل RT-qPCR، والتلوين بسافرانين O-فاست جرين، وتحليل الوسترن بلوت بشكل مفتوح في مستودع Figshare على الرابط https://doi.org/10.6084/m9.figshare.33090935.

مقارنة علاجات التهاب المفاصل التنكسي في الركبة؛ رسوم بيانية شريطية، صور نسيجية؛ تحليل تأثيرات العلاج.
الشكل 1. يقلل الإبر القاطعة من تورم الركبة وتنكّر الغضروف المفصلي في أرانب تعاني من التهاب المفاصل التنكسي في الركبة. (أ) محيط الركبة. (ب) نسبة تورم الركبة النسبية. (ج) درجة التقييم النسيجي حسب مانكين. (د) درجة التقييم النسيجي حسب موران. (هـ) مقاطع نسيجية نموذجية مصبوغة بالهيماتوكسيلين واليوزين من المجموعة الضابطة، ومجموعة نموذج التهاب المفاصل التنكسي في الركبة (KOA)، ومجموعة السيلوكوسيب، ومجموعة الإبر القاطعة، ومجموعة التحكم الوهمية بالإبر القاطعة. (و) مقاطع نسيجية نموذجية مصبوغة بصبغة السافرانين أورانج – الأخضر السريع من المجموعات التجريبية الخمس. أُجري التقييم النسيجي (حسب مانكين وموران) باستخدام عينات من جميع الأرانب العشرة في كل مجموعة (ن = 10)، في حين تم الحصول على الصور النسيجية النموذجية للتلوين بالهيماتوكسيلين واليوزين (H&E) والسافرانين أورانج – الأخضر السريع من 3 أرانب تم اختيارها عشوائيًا من كل مجموعة. تُعرض البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري للوسط (SEM). أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام تحليل التباين الأحادي الاتجاه متبوعًا باختبار تيكي اللاحق. تشير القضبان الأفقية إلى المجموعات التي تمت مقارنتها. P < 0.05، P < 0.01، و P < 0.001. مقاييس الطول: 100 µm. الاختصارات: KOA = التهاب المفاصل التنكسي في الركبة؛ SEM = الخطأ المعياري للوسط. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط شريطي يقارن مستويات IL-1β وIL-6 وTNF-α في مجموعات علاج التهاب مفصل الركبة وضوابطه.
الشكل 2. يقلل العلاج بالإبر الدقيقة من مستويات السيتوكينات الالتهابية في أرانب مصابة بالتهاب مفصل الركبة. (أ) تركيز إنترلوكين-1β. (ب) تركيز إنترلوكين-6. (ج) تركيز عامل نخر الورم-α. قُيست مستويات السيتوكينات باستخدام تحليل المناعة المرتبط بالإنزيم في عينات من ستة أرانب لكل مجموعة (ن = 6). تُعرض البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري للمتوسط. أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام تحليل التباين الأحادي الاتجاه متبوعًا باختبار توكي اللاحق. تشير الأشرطة الأفقية إلى المجموعات التي تمت مقارنتها. ف < 0.05، ف < 0.01، وف < 0.001. الاختصارات: IL-1β = إنترلوكين-1β؛ IL-6 = إنترلوكين-6؛ KOA = التهاب مفصل الركبة؛ SEM = الخطأ المعياري للمتوسط؛ TNF-α = عامل نخر الورم-α. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

صور النسيج، تحليل التعبير البروتيني، المخططات الشريطية؛ نتائج علاج هشاشة مفصل الركبة.
الشكل 3. يُعدّل الإبر القاطعة التعبير البروتيني المرتبط بالالتهاب وتمثيل الغضروف في أرانب مصابة بهشاشة مفصل الركبة. (أ) صور تمثيلية للفحص المناعي النسيجي تُظهر تعبير عامل النسخ النووي كابا بي المُفسفر وعامل بروتين كيناز مُنشط بالمنشط الخلوي p38 المُفسفر في الغضروف المفصلي من مجموعات السيطرة، ونموذج هشاشة مفصل الركبة، والسيليكوكسيب، والإبر القاطعة، والإبر القاطعة الوهمية. شرائح القياس، 100 µم. (ب) نتائج تمثيلية لفحص وسترن بلوت تُظهر تعبير بروتينات SOX9، RIC8A، MMP-13، p38 MAPK المُفسفر، p38 MAPK الكلي، MMP-3، الأجريكان، وGAPDH. (ج) قياس كثافات الأجريكان بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (د) قياس كثافات MMP-13 بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (هـ) قياس كثافات MMP-3 بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (و) قياس كثافات p38 MAPK الكلي بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (ز) قياس كثافات p38 MAPK المُفسفر بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (ح) قياس كثافات SOX9 بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. (ط) قياس كثافات RIC8A بعد توحيد قيمها إلى GAPDH. أُجري تحليل وسترن بلوت باستخدام عينات من ثلاث أرانب لكل مجموعة (n = 3). تُعرض البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري للوسط الحسابي (SEM). أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام تحليل التباين الأحادي الاتجاه متبوعًا باختبار توكي للتحليل اللاحق. تشير القضبان الأفقية إلى المجموعات التي تمت مقارنتها. P < 0,05، P < 0,01، وP < 0,001. الاختصارات: GAPDH = ديهيدروجيناز الجليسرالديهيد-3-فوسفات؛ KOA = هشاشة مفصل الركبة؛ MAPK = كيناز بروتين مُنشط بالمنشط الخلوي؛ MMP-3 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-3؛ MMP-13 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-13؛ NF-κB = عامل النسخ النووي كابا بي؛ p-NF-κB = عامل النسخ النووي كابا بي المُفسفر؛ p-p38 MAPK = p38 MAPK المُفسفر؛ RIC8A = مقاومة مثبطات الكولينستيراز 8A؛ SEM = الخطأ المعياري للوسط الحسابي؛ SOX9 = عامل النسخ SRY-box 9. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخططات الأعمدة لمستويات التعبير البروتيني (أججريكان، MMPs، p38 MAPK، SOX9) مقابل β-actin، وتأثيرات العلاج بالدواء.
الشكل 4. يُعدّل الإبر الدقيقة (أكوبوتومي) التعبير عن النصوص المرتبطة باستقلاب الغضروف والتعبير عن circPDE4B لدى الأرانب المصابة بالتهاب المفاصل الركبة. (أ) التعبير النسبي لأججريكان. (ب) التعبير النسبي لـ MMP-3. (ج) التعبير النسبي لـ MMP-13. (د) التعبير النسبي لـ p38 MAPK. (هـ) التعبير النسبي لـ SOX9. (و) التعبير النسبي لـ circPDE4B. (ز) التعبير النسبي لـ RIC8A. تم قياس التعبير باستخدام تفاعل البلمرة العكسي الكمي (qRT-PCR) وتم تطبيعه بالنسبة للجين المرجعي. أُجريت التحليلات باستخدام عينات من ستة أرانب لكل مجموعة (n = 6). تُعرض البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري للوسط الحسابي (SEM). أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام تحليل التباين الأحادي الاتجاه متبوعًا باختبار تيكي للتحليل اللاحق (post hoc test). تشير القضبان الأفقية إلى المجموعات التي تمت مقارنتها. P < 0,05، P < 0,01، وP < 0,001. الاختصارات: circPDE4B = RNA الدائري للفوسفودايستيراز 4B؛ KOA = التهاب مفاصل الركبة؛ MAPK = كيناز البروتين المُنشَّط بالمنشط الخلوي؛ MMP-3 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-3؛ MMP-13 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-13؛ RIC8A = المقاومة لمثبطات الكولينستيراز 8A؛ SEM = الخطأ المعياري للوسط الحسابي؛ SOX9 = عامل النسخ SRY-box 9. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

جينحجم المنتج التضخيميالبادئ الأماميالبادئ العكسي
(ز.ب)（5'→3'）（5'→3'）
β-أكتين113CAGCCCTCCTTCATCGGTATGACATGACGTTGTTGGCGTA
MMP-3108TGTGAGTTGAAGTGGCTCATCCTGTTTGAACACCCGTAAC
MMP-13119ج-ج-ج-ت-ج-ت-أ-ج-ج-ك-أ-أ-ت-ك-أ-تGTGTACGCCCATCAGGATAA
SOX985GGAGGAAGTCGGTGAAGAATGCCTTGAAGATGGCGTTG
أجكرين70TTGATGAGTGCCTTTCAAGCCATGTGAAAGAGTCGATGGC
RIC8A100ATAAACTTTCCAGAGAGGAGTTGCTCGATGACAGAGTACTGGTTG
p38 MAPK103TGTTCAAGGTCTCCCACAAGTGCAGCTCCCTTATGATCTG
CircPDE4B174جـ تـ كـ أ تـ تـ تـ جـ سـ سـ جـ أ أ نـ تـ سـ سـكاتاتكاتكتجكغتكترثت

الجدول 1: تسلسلات البوادئ المستخدمة في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي المبني على النسخ العكسي. يسرد الجدول الجينات المستهدفة، وأحجام القطع الناتجة المتوقعة، وتسلسلات البوادئ الأمامية والعكسية بالاتجاه من 5′ إلى 3′. الاختصارات: bp = أزواج القواعد؛ circPDE4B = الحمض النووي الريبي الدائري لإنزيم الفوسفودايستريز 4B؛ MAPK = كيناز البروتين المنشَّط بالمنشِّط الخلوي؛ MMP-3 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-3؛ MMP-13 = ميتالوبروتيناز المصفوفة-13؛ RIC8A = المقاومة لمثبطات كولينستيراز 8A؛ SOX9 = عامل النسخ SRY-box 9.

المناقشة

قيمت هذه الدراسة التأثيرات العلاجية لتقنية الوخز الإبري الجراحي (acupotomy) في نموذج أرنب مصاب بفصال الركبة العظمي (KOA)، وحددت وجود ارتباط بين تعبير circPDE4B ومحور إشارات RIC8A/p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK). أدى الوخز الإبري الجراحي إلى تحسين تورم المفاصل والتغيرات الهيستوباثولوجية، كما غيّر المؤشرات المرتبطة بالالتهاب واستقلاب الغضاريف على مستويي النسخ والبروتين.

اتسق الانخفاض في مستويات interleukin-1β وtumor necrosis factor-α وinterleukin-6 بعد العلاج بالـ acupotomy مع التأثيرات المعدلة للمناعة التي تم الإبلاغ عنها سابقاً للـ acupotomy21. تساهم هذه السيتوكينات في تنكس الغضروف عن طريق تحفيز الإنزيمات المفككة للمصفوفة وتثبيط تخليق المصفوفة خارج الخلوية22,24,25. كما يشير الانخفاض المتزامن في matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) وmatrix metalloproteinase-13 (MMP-13) على مستويي النسخ والبروتين إلى أن الـ acupotomy يثبط النشاط الهدمي المرتبط بـ KOA.

كانت إحدى النتائج البارزة هي الارتباط بين التغيرات التي أحدثها التشريط الإبري في تعبير circPDE4B وتنظيم مسار RIC8A/p38 MAPK. ويرتبط التنشيط غير الطبيعي لهذا المسار بالالتهاب والإجهاد التأكسدي وتدهور المصفوفة خارج الخلية. وتشير انخفاضات تعبير RIC8A وفسفرة p38 MAPK بعد التشريط الإبري إلى أن العلاج قد يساعد في استعادة توازن الإشارات داخل هذا المسار. وتتوافق التغيرات المنسقة في المؤشرات النسبية لـ circPDE4B و RIC8A/p38 MAPK مع الفرضية القائلة بأن circPDE4B قد يعمل كدعامة جزيئية، كما اقتُرح سابقاً26,27. ومع ذلك، فإن النتائج الحالية هي نتائج ارتباطية ولا تثبت أن circPDE4B يتوسط التأثيرات العلاجية للتشريط الإبري، حيث يلزم إجراء دراسات فقدان الوظيفة واكتساب الوظيفة لتحديد العلاقة السببية.

يعد الارتباط المحتمل بين العلاج بالوخز الجراحي (acupotomy) وتنظيم الـ circRNA جانباً هاماً من هذه الدراسة. فقد ثبت أن التحفيز الميكانيكي يؤثر على تعبير circRNA في عدة أنسجة28,29,30,31. ومع ذلك، لا تزال الأدلة المباشرة التي تربط التحفيز الميكانيكي الناجم عن الوخز الجراحي بتنظيم circRNAs الخاصة بالغضروف المفصلي محدودة. وقد يعكس التغير الملحوظ في التعبير النسبي لـ circPDE4B بعد العلاج إما استجابة مباشرة للتحفيز الميكانيكي أو استجابة غير مباشرة لانخفاض الالتهاب. ومن شأن الدراسات المستقبلية التي تجمع بين التحفيز الميكانيكي المضبوط والتحكم النوعي في circPDE4B داخل الخلايا الغضروفية أن تساعد في التمييز بين هذه الاحتمالات.

أظهر كل من الوخز الإبري الجراحي (Acupotomy) وعقار السيلوكسيب (celecoxib) اتجاهات مماثلة عبر العديد من النتائج المقاسة على الرغم من تباين آليات عملهما. وقد تُعزى هذه التقاربات إلى عدة تفسيرات؛ أولاً، قد يعمل كلا العلاجين على مسارات مشتركة في المراحل النهائية، بما في ذلك محور RIC8A/p38 MAPK ومسارات إشارات العامل النووي كابا ب (nuclear factor kappa B). ثانياً، قد تعكس التشابهات الملحوظة سمات عامة لحماية الغضروف بدلاً من تأثيرات خاصة بمسار معين. ثالثاً، قد تمثل المؤشرات المختارة نقاط نهاية مشتركة للالتهاب واستقلاب الغضروف، وبالتالي قد تكون غير كافية للتمييز بين الآليات المختلفة في المراحل الأولية. لا تعني الفعالية المتماثلة وجود آليات متطابقة، بل تشير إلى أن كلا التدخلين قد يؤثران على مكونات مشتركة في الشبكة المرضية لفصال العظام (osteoarthritis)26,32,33. وقد تساعد النهج غير المنحازة، مثل التوصيف الترانسكريبتومي أو البروتومي، في تحديد البصمات الجزيئية الخاصة بكل علاج.

قد تكون التأثيرات المتماثلة لكل من الوخز الإبري الجراحي وعقار celecoxib ذات صلة سريرية. فقد يوفر الوخز الإبري الجراحي خيارًا علاجيًا غير دوائي يعالج العوامل الميكانيكية المحيطة بالمفصل مع تجنب بعض الآثار الضارة المرتبطة باستخدام الأدوية لفترات طويلة. ومع ذلك، يجب التعامل مع هذا التفسير بحذر لأن نموذج الأرنب لا يجسد بشكل كامل تعقيدات فصال الركبة العظمي (KOA) لدى البشر. وهناك حاجة إلى مزيد من الدراسات الانتقالية والسريرية قبل أن تتمكن هذه النتائج قبل السريرية من دعم تطبيق سريري أوسع.

يجب الإقرار بوجود عدة قيود في هذه الدراسة. أولاً، لم يتم اختبار الارتباط بين circPDE4B ومحور RIC8A/p38 MAPK باستخدام تجارب فقدان الوظيفة أو اكتساب الوظيفة. ثانياً، يحد نموذج الأرانب وفترة العلاج التي استمرت 4 أسابيع من الاستنتاجات المتعلقة بالمرض البشري والنتائج طويلة المدى. ثالثاً، استخدمت المقاييس الجزيئية مجموعات فرعية صغيرة نسبياً من الحيوانات، مما قد يكون قد حد من اكتشاف الفروق الدقيقة بين المجموعات. رابعاً، قد لا تميز مجموعة المؤشرات المختارة الآليات العلوية الخاصة بالعلاج. وأخيراً، تتطلب الاستجابات المتشابهة لعمليتي الـ acupotomy واستخدام celecoxib مزيداً من البحث لتحديد ما إذا كان التدخلان يعملان من خلال مسارات متقاربة أو مستقلة.

الخلاصة
أدى العلاج بالوخز الإبري الجراحي (Acupotomy) إلى تقليل تورم المفاصل، ومستويات السيتوكينات الالتهابية، وتنكس الغضاريف، وتعبير العلامات التقويضية في نموذج أرنب مصاب بفصال العظام العظمي (KOA). وقد ارتبطت هذه التأثيرات بتغيرات في التعبير النسبي لـ circPDE4B وتعديل محور إشارات RIC8A/p38 MAPK. ونظرًا لأن النتائج الحالية هي نتائج ارتباطية، فإن الأمر يتطلب مزيدًا من الدراسات الميكانيكية لتحديد ما إذا كان circPDE4B يتوسط بشكل مباشر التأثيرات العلاجية للوخز الإبري الجراحي.

الإفصاحات

يصرح المؤلفون بأنه ليس لديهم أي مصالح مالية متضاربة أو علاقات شخصية كان من الممكن أن تؤثر على العمل الوارد في هذا المقال.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (منحة رقم 81774436)، ومشروع تحويل الأبحاث الطبية السريرية بمقاطعة آنهوي (منحة رقم 202427b10020136)، ومشروع البحث العلمي التابع لإدارة التعليم بمقاطعة آنهوي (منحة رقم 2023AH050824)، وبرنامج الأبحاث الصحية في آنهوي (منحة رقم AHWJ2023A30123)، ومشروع أبحاث التوريث والابتكار التابع لجمعية الطب الصيني التقليدي في آنهوي (منحة رقم 2024ZYYXH153).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
بيروكسيد الهيدروجين 3%Fuzhou Maixin BiotechSP kit-A3يحجب نشاط البيروكسيداز الداخلي أثناء الكيمياء النسيجية المناعية.
بارافورمالدهيد 4%BiosharpBL539Aيثبت نسيج الغضروف قبل إزالة الكالسيوم والمعالجة النسيجية.
حمض الأسيتيكMerckA6283يستخدم لتحضير حمض الهيدروكلوريك 1% في 70%
ضمادات لاصقةZhejiang RenkangRK-8802تستخدم بعد الوخز الإبري الجراحي.
جسم مضاد لـ AggrecanProteintech13880-1-APجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن aggrecan في مستخلصات بروتين الغضروف.
إيثانول لامائيSinopharm Chemical Reagent10009228يستخدم لتجفيف الأنسجة وإعادة ترطيب القطاعات أثناء المعالجة النسيجية.
طقم مقايسة BCA للبروتينThermo Fisher ScientificA55860يستخدم لتحديد تركيز البروتين.
CelecoxibBiochempartnerBCP02156العلاج الدوائي المرجعي الذي يتم إعطاؤه عن طريق التغذية الأنبوبية الفموية.
جهاز طرد مركزيAnhui Jiawen InstrumentsJW-3021HRيستخدم لتنقية نواتج تحلل الأنسجة والمجانسات عن طريق الفصل المركزي.
كلوروفورمNanjing Reagent67-66-3يستخدم لفصل الطور أثناء استخلاص RNA الكلي.
محلول منظم السترات، pH 6.0ZSGB-BIOZLI-9065يستخدم لاستعادة المستضد المحفزة حرارياً قبل الكيمياء النسيجية المناعية.
أنابيب تجميدNEST Biotechnology607001تستخدم لتخزين العينات المجمدة
ركيزة DABFuzhou Maixin BiotechKit-5230ركيزة لونية تستخدم لتصور إشارات الكيمياء النسيجية المناعية المسمى بـ HRP.
ماء معالج بـ DEPCGeneray BiotechD1007ماء خالٍ من RNase يستخدم لإذابة RNA وإجراءات البيولوجيا الجزيئية.
إبرة وخز إبري جراحي تستخدم لمرة واحدة، 0.35 mm × 25 mmMa'anshan Bond Medical EquipmentGB3525Rإبرة-سكين معقمة تستخدم لإجراءات الوخز الإبري الجراحي والوخز الإبري الوهمي.
EDTAbiosharpBL617Aيستخدم لتحضير محلول إزالة الكالسيوم للأنسجة التي تحتوي على غضاريف.
ركيزة التألق الكيميائي المعززThermo 340958340958تستخدم لتصور حزم لطخة ويسترن.
محلول الإيوسينZhuhai BesoBA4022صبغة مضادة تستخدم في صبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين.
محلول Fast GreenSolarbioG1371صبغة مضادة تستخدم في صبغ Safranin O–Fast Green.
جسم مضاد لـ GAPDHZsbioTA-08يستخدم كعنصر تحكم في تحميل لطخة ويسترن ولكن لم يتم إدراجه حالياً.
نظام تصوير الجلShanghai Peiqing TechnologyJS-1070Pيلتقط صور التألق الكيميائي للطخة ويسترن.
شرائح مجهرية زجاجيةCITOTEST‌188105تستخدم لتثبيت القطاعات
Goat anti-mouse IgG، مقترن بـ HRPZSGB-BIOZB-2305جسم مضاد ثانوي مقترن بـ HRP للأجسام المضادة الأولية للفئران.
Goat anti-rabbit IgG، مقترن بـ HRPZSGB-BIOZB-2301جسم مضاد ثانوي مقترن بـ HRP للأجسام المضادة الأولية للأرانب.
مصل الماعزZSGB-BIOZLI-9056يحجب الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة أثناء الكيمياء النسيجية المناعية.
GraphPad Prism، الإصدار 10GraphPad SoftwareNot applicableيستخدم للتحليل الإحصائي وإعداد الرسوم البيانية.
محلول الهيماتوكسيلينZhuhai BesoBA4041صبغة نووية تستخدم لصبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين والصبغ المضاد في الكيمياء النسيجية المناعية.
مجانسWitegSGCR-5-553-722يجنس نسيج الغضروف من أجل مقايسات ELISA والمقايسات الجزيئية.
حمض الهيدروكلوريكMerck7607يستخدم لتحضير حمض الهيدروكلوريك 1% في 70%
برنامج Image LabBio-RadNot applicableيستخدم للتحليل القياسي الكثافي لحزم لطخة ويسترن.
Image-Pro Plus، الإصدار 6.0Media CyberneticsNot applicableيستخدم للتحليل شبه الكمي لكثافة صبغ Safranin O.
إيزوبروبانولSinopharm Chemical ReagentSCR40007960يستخدم لترسيب RNA أثناء استخلاص RNA الكلي.
مجهر ضوئيOlympusCX41يستخدم لفحص وتصوير قطاعات الغضروف المصبوغة.
علامة طبيةedding497985تستخدم لتحديد نقاط العلاج
ميثانولShanghai Suyi20180427يستخدم لتنشيط غشاء PVDF
ميكروتومLeicaRM2016يقطع الأنسجة المدمجة في البارافين إلى قطاعات بسمك 5 µm.
جسم مضاد لـ MMP-13Biossbs-0575Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن ميتالوبروتينيز المصفوفة-13.
جسم مضاد لـ MMP-3Biossbs-43017Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن ميتالوبروتينيز المصفوفة-3.
راتنج متعادلWuxi JiangyuanZLI-9516وسط تثبيت يستخدم للتحضير الدائم لقطاعات الأنسجة المصبوغة.
أرانب نيوزيلندية بيضاء (ذكور، عمر 6 أشهر، بوزن 2.0–2.5 kg)Nanjing Pukou District Laifu Breeding FarmSCXK (Su) 2024-0007حيوانات تجريبية تستخدم لنمذجة التهاب مفصل الركبة العظمي وتقييم العلاج.
شفرة مشرط رقم 23CaissonSCX08-100PCتستخدم أثناء جمع العينات.
حليب جاف خالي الدسمGene9999Sيستخدم ككاشف حجب.
جسم مضاد لـ p38 MAPKBiossbs-0637Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن p38 MAPK الكلي.
شمع البارافينThermo8330يستخدم لدمج الأنسجة
PBSZSGB-BIOZLI-9062يستخدم لتجنيس الأنسجة، والغسل، وتحضير الكواشف.
بنسلينJilin Huamu Animal Health ProductsNot applicableيستخدم بعد الجراحة بجرعة 40,000 U/kg/day
بنتوباربيتال الصوديومBeijing Chemical Reagents61222يستخدم للتخدير بنسبة 3%، وبجرعة 30 mg/kg.
محلول ملحي منظم بالفوسفاتbeyotimeST448يستخدم لتجنيس الأنسجة والغسل أثناء الكيمياء النسيجية المناعية.
محلول ملحي فسيولوجيservicevioG4702يستخدم لتحضير معلق celecoxib
PMSFBeyotimeST506مثبط للبروتياز يضاف إلى محلول التحلل أثناء استخلاص البروتين.
جسم مضاد لـ p-NF-κBSantasc-136548جسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن p- NF-κB في التحليل الكيميائي النسيجي المناعي.
جسم مضاد لـ p-p38 MAPKBiossbs-5476Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن p38 MAPK المفسفر.
طقم كاشف PrimeScript RT مع gDNA EraserTaKaRaRR047Aيستخدم لإزالة DNA الجينومي والنسخ العكسي لـ RNA إلى cDNA.
غشاء PVDFMilliporeIPVH00010غشاء يستخدم لنقل البروتين أثناء لطخة ويسترن.
طقم ELISA لـ Rabbit IL-1βJiyinmeiJYM0011Rbيقيس كمية إنترلوكين-1β للأرانب في العينة المحللة.
طقم ELISA لـ Rabbit IL-6JiyinmeiJYM0006Rbيقيس كمية إنترلوكين-6 للأرانب في العينة المحللة.
طقم ELISA لـ Rabbit TNF-αJiyinmeiJYM0003Rbيقيس كمية عامل نخر الورم-α للأرانب في العينة المحللة.
نظام PCR في الوقت الحقيقيThermo Fisher ScientificPIKOREAL 96يجري تضخيم PCR الكمي القائم على التألق.
جسم مضاد لـ RIC8ABiossbs-11355Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن RIC8A.
محلول تحلل RIPABeyotimeP0013Bيستخلص البروتين الكلي من نسيج الغضروف.
محلول Safranin OSolarbioG1371يصبغ بروتيوغليكانات الغضروف في نسيج Safranin O–Fast Green.
كواشف SDS-PAGE أو هلامات مسبقة الصبSolarbioS8010تشمل النسبة المئوية للهلام أو المنتج.
جسم مضاد لـ SOX9Biossbs-4177Rجسم مضاد أولي يستخدم للكشف عن SOX9.
جهاز مطياف ضوئيNanjing Wuyi TechnologyOD1000+يقيس تركيز ونقاء RNA.
شاش معقمZhendeV505463يستخدم للضغط بعد سحب الإبرة.
SYBR Green Master MixNovoproteinE096-01Bكاشف فلوري يستخدم لـ PCR الكمي.
محلول ملحي منظم بـ TrisSolarbioT8060يستخدم لتحضير محلول الغسل والحجب للطخة ويسترن.
كاشف TRIzolLife Technologies15596018كاشف فينول–غوانيدينيوم يستخدم لاستخلاص RNA الكلي.
Tween 20SolarbioT8220منظف غير أيوني يضاف إلى محاليل غسل Tris-buffered saline و phosphate-buffered saline.
محلول هيماتوكسيلين الحديد ويغرتMerck1.15973يستخدم في صبغ Safranin O–Fast Green.
زايلينSinopharm Chemical Reagent10023428يستخدم لإزالة البارافين وتصفية الأنسجة.

المراجع

  1. Mobasheri A, Batt M. An update on the pathophysiology of osteoarthritis. Ann Phys Rehabil Med. 2016;59(5):333-339.
  2. Forestier R, et al. Prevalence of generalized osteoarthritis in a population with knee osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2011;78(3):275-278.
  3. Motta F, Barone E, Sica A, Selmi C. Inflammaging and osteoarthritis. Clin Rev Allergy Immunol. 2023;64(2):222-238.
  4. Ghouri A, Conaghan PG. Prospects for therapies in osteoarthritis. Calcif Tissue Int. 2021;109(3):339-350.
  5. Roseti L, et al. Articular cartilage regeneration in osteoarthritis. Cells. 2019;8(11):1305. https://doi.org/10.3390/cells8111305
  6. Fujii Y, et al. Cartilage homeostasis and osteoarthritis. Int J Mol Sci. 2022;23(12):6330. https://doi.org/10.3390/ijms23126330
  7. Kreutzinger V, et al. Limited effects of non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) on imaging outcomes in osteoarthritis: observational data from the osteoarthritis initiative (OAI). BMC Musculoskelet Disord. 2025;26. https://doi.org/10.1186/s12891-025-08245-0
  8. Migliore A, et al. Low dose NSAIDs and sysadoas in the management of knee osteoarthritis. Aging Clin Exp Res. 2025;37(1):121. https://doi.org/10.1007/s40520-025-03015-6
  9. Fu M, et al. Expression profile of long noncoding RNAs in cartilage from knee osteoarthritis patients. Osteoarthritis Cartilage. 2015;23(3):423-432.
  10. Jiang SD, et al. Long noncoding RNAs in osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2017;84(5):553-556.
  11. Xing D, et al. Identification of long noncoding RNA associated with osteoarthritis in humans. Orthop Surg. 2014;6(4):288-293.
  12. Wu W, Zou J, Yang Y. Studies on the role of circRNAs in osteoarthritis. BioMed Res Int. 2021;2021:6672322. https://doi.org/10.1155/2021/6672322
  13. Liu X, et al. Identification and comprehensive analysis of circRNA–miRNA–mRNA regulatory networks in osteoarthritis. Front Immunol. 2022;13:1018820. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.1018820
  14. Shen S, et al. circPDE4B prevents articular cartilage degeneration and promotes repair by acting as a scaffold for RIC8A and MID1. Ann Rheum Dis. 2021;80(9):1209-1219.
  15. Cao M, et al. A peroxiredoxin-P38 MAPK scaffold increases MAPK activity by MAP3K-independent mechanisms. Mol Cell. 2023;83(17):3140-3154.
  16. Lu M, et al. Promotion and mechanism of acupotomy on chondrocyte autophagy in knee osteoarthritis rabbits. Chin J Integr Med. 2024;30(9):809-817.
  17. Chen C, et al. Clinical effects of ultrasound-guided acupotomy in knee osteoarthritis treatment. J Vis Exp. 2024;(208):e66587. https://doi.org/10.3791/66587
  18. Wang Y, et al. Effect of acupotomy modulation of NLRP3/Caspase-1/GSDMD pathway on chondrocyte pyroptosis in knee osteoarthritis. J Pain Res. 2025;18:4935-4945.
  19. Zhang J, et al. Whole transcriptome mapping identifies an immune- and metabolism-related non-coding RNA landscape remodeled by mechanical stress in IL-1β-induced rat OA-like chondrocytes. Front Genet. 2022;13:843187. https://doi.org/10.3389/fgene.2022.843187
  20. Liu Q, et al. Emerging roles of circRNA related to the mechanical stress in human cartilage degradation of osteoarthritis. Mol Ther Nucleic Acids. 2017;7:223-230.
  21. Guo Y, et al. Acupotomy improves synovial hypoxia, synovitis and angiogenesis in KOA rabbits. J Pain Res. 2023;16:749-760.
  22. Ma Y, et al. Acupotomy ameliorates KOA related chondrocyte premature senescence through YAP/FOXD1 pathway. J Pain Res. 2025;18:2011-2023.
  23. Wang Z,et al. Electroacupuncture ameliorates cartilage damage in a rat model of knee osteoarthritis and regulates expression of miRNAs and the TLR4/NF-κB pathway, Acupuncture in Medicine. 2025, 43(2025), 164-173.
  24. Feng S, Cong H, Ji L. Salvianolic acid A exhibits anti-inflammatory and antiarthritic effects via inhibiting NF-κB and p38/MAPK pathways. Drug Des Devel Ther. 2020;14:1771-1778.
  25. Abdallah AM, et al. Pyrazole derivatives ameliorate synovial inflammation in collagen-induced arthritis mice model via targeting p38 MAPK and COX-2. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 2025;398(1):819-832.
  26. Alaaeldin E, et al. Topical nano-vesicular spanlastics of celecoxib: enhanced anti-inflammatory effect and down-regulation of TNF-α, NF-кB and COX-2 in complete Freund's adjuvant-induced arthritis model in rats. Int J Nanomedicine. 2021;16:133-145.
  27. Pamudurti NR, et al. Translation of CircRNAs. Mol Cell. 2017;66(1):9-21.
  28. Wang Z, et al. Electroacupuncture ameliorates cartilage damage in a rat model of knee osteoarthritis and regulates expression of miRNAs and the TLR4/NF-κB pathway. Acupunct Med. 2025;43(3):164-173.
  29. Shen J, et al. Circular RNA sequencing reveals the molecular mechanism of the effects of acupuncture and moxibustion on endometrial receptivity in patients undergoing infertility treatment. Mol Med Rep. 2019;20(2):1623-1633. https://doi.org/10.3892/mmr.2019.10386
  30. Wang Y, et al. Electroacupuncture alleviates perioperative hypothalamus-pituitary-adrenal axis dysfunction via circRNA-miRNA-mRNA networks. Front Mol Neurosci. 2023;16:1152861. https://doi.org/10.3389/fnmol.2023.1152861
  31. Xiao X, et al. Transcription profiling of a revealed the potential molecular mechanism of Governor Vessel electroacupuncture for spinal cord injury in rats. Neurospine. 2022;19(3):757-769.
  32. Xu C, Gu K, Yasen Y, Hou Y. Efficacy and safety of celecoxib therapy in osteoarthritis: a meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2016;95(20):e3585. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000003585
  33. 33. Jiang D, et al. Efficacy of intra-articular injection of celecoxib in a rabbit model of osteoarthritis. Int J Mol Sci. 2010;11(10):4106-4113.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Immunology and InfectionAcupotomyKnee OsteoarthritisCircular RNAcircPDE4BRIC8A p38 MAPK signaling pathway
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.