يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج لالتهاب الأمعاء المعجل بالبيروكسيكام في فئران إنترلوكين-10 لدراسة التغيرات الأيضية الناتجة عن الالتهاب

74 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/71448

⸱

أغسطس 11, 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

يستخدم هذا البروتوكول البيروكسيكام لتسريع تطور التهاب القولون في نموذج فأر الإنترلوكين (IL-10) - الضربة القاضية. يضمن البروتوكول تزامن التهاب القولون، مما يؤدي إلى نتائج صارمة وقابلة للتكرار مستقلة عن الجنس أو الإجهاد الخلفي أو حالات الحي الحيوي. يعد نموذجا مفيدا لدراسة التغيرات الأيضية أثناء التهاب الأمعاء.

الملخص

مرض الأمعاء الالتهابي (IBD) هو اضطراب التهابي مزمن في الجهاز الهضمي يصيب أكثر من 10 ملايين شخص حول العالم. بينما ركزت أبحاث كبيرة على الآليات المناعية والعواقب التي تكمن وراء التهاب الأمعاء، لم يفهم الكثير عن كيفية مساهمة التهاب الغشاء المخاطي في اختلال الأيض، بما في ذلك فقدان الوزن وانخفاض الشهية. هنا، يصف المؤلفون نموذج فأر لالتهاب الأمعاء المعوي المسرع بالبيروكسيكام في فئران الإنترلوكين-10-نوكاوت (IL-10-KO) لدراسة اختلال الأيض الناتج عن الالتهاب. من المعروف أن فئران IL-10-KO تصاب بالتهاب الأمعاء القولوني التلقائي ولديها زيادة في التعرض لالتهاب الأمعاء القولوني الناتج عن العدوى أو الأدوية. ومع ذلك، تم الإبلاغ عن ظروف الهيكل الحيوي وخلفية الإجهاد كعوامل محيرة في تطور التهاب القولون في هذا النموذج. البيروكسيكام، وهو دواء مضاد للالتهابات غير ستيرويدي (NSAID)، ثبت أنه يسبب أو يسرع التهاب الأمعاء القولوني في النماذج الحيوانية من خلال زيادة تعرض المخاط للبكتيريا اللومنالية. في هذا البروتوكول، تم إطعام ذكور وإناث فئران IL-10-KO بنظام غذائي مدعم بالبيروكسيكام بدلا من النظام الغذائي العادي للتشاو. تم قياس كمية الطعام ووزن الجسم يوميا لتعكس التغيرات الأيضية في الجسم بالكامل، إلى جانب المظاهر السريرية لالتهاب الأمعاء مثل الإسهال والنزيف الشرجي. البروتوكول فعال وقابل للتكرار، حيث يسبب التهاب الأمعاء القولوني في نفس الوقت لدى عدة فئران، ويسمح بتقييم اختلال الأيض في نموذج مرض الأمعاء الالتهابي. قد تبحث الدراسات الإضافية باستخدام هذا البروتوكول في تأثيرات التهاب الأمعاء على مكونات أخرى من خلل الأيض، مثل استهلاك الطاقة وتركيب الجسم، مما يكشف عن روابط أوسع بين مرض الأمعاء الالتهابي واستقلاب المضيف.

المقدمة

مرض كرون والتهاب القولون التقرحي، والمعروفان مجتمعان باسم مرض الأمعاء الالتهابي (IBD)، هما اضطرابات مناعية ذاتية مزمنة في الجهاز الهضمي تتميز بالتهاب مخاطي مع مظاهر سريرية تشمل ألم البطن، فقدان الوزن، الهيماتوشوزيا، والإسهال. يصيب مرض التهاب الأمعاء الالتهابي ملايين الأفراد حول العالم، مع أعلى معدل انتشار في المجتمعات الغربية1. في الولايات المتحدة، يقدر أن أكثر من 3 ملايين شخص مصابون 2,3، مع ارتفاع معدل الإصابة والانتشار، خاصة بين الأطفال والشباب 4.5.

لا تزال الآليات الدقيقة وراء مسببات مرض التهاب الأمعاء غير مفهومة بشكل كامل، لكن يعتقد على نطاق واسع أن المرض ناتج عن استجابة مناعية مبالغ فيها تجاه ميكروبيوتا الأمعاء لدى الأفراد المعرضين للوراثة. تلعب السيتوكينات التي تعدل الاستجابات الالتهابية أدوارا حاسمة في الحفاظ على توازن الأمعاء وفي تطور مرض التهاب الأمعاء الالتهابي. من بين هذه السيتوكين، الإنترلوكين-10 (IL-10) هو سيتوكين مضاد للالتهابات مدروس جيدا يساعد في الحفاظ على التوازن المناعي لدى البشر من خلال تنظيم الأذرع الفطرية والتكيفية للاستجابة المناعية 6,7. ومن الجدير بالذكر أن تعدد أشكال IL-10 ومستقبله (IL-10RA/B) تم تحديده لدى الرضع الذين لديهم التهاب الأمعاء الالتهابي المبكر جدا (VEO-IBD)، الذين ظهروا كلاسيكيا مع مرض حول الشرج خلال الأشهر الأولىمن الحياة. ويدعم هذا الارتباط أيضا تسلسل الإكسوم واسع النطاق للمرضى البالغين المصابين بمرض كرون، والذي حدد IL-10RA كموقع للحساسية للمرض في التهاب الأمعاء9 غير أحادي الجين. علاوة على ذلك، تم وصف مسار غير وراثي يتضمن الأجسام المضادة المعادلة ل IL-10 لدى مرضى مرض التهاب الأمعاء الالتهابي الداخلي (VEO-IBD)، مما يبرز أهمية هذا المسار في الحفاظ على التوازن المناعي المخاطي10.

استنادا إلى دراسات بشرية تربط IL-10 بمرض التهاب الأمعاء الالتهابي، تم تطوير فئران إنترلوكين-10-نوكاوت (IL-10-KO) كنموذج لدراسة دور IL-10 في التهاب الأمعاء الالتهابي. من المعروف أن فئران IL-10-KO تطور التهاب الأمعاء القولوني التلقائي مع استجابة مبالغ فيها ل CD4+ Th1 للمحفزات، وعادة ما تبدأ في الأسبوع الثامن إلى الثاني عشر من عمر11 عاما. ومع ذلك، يمكن أن يكون تطور التهاب الأمعاء القولوني التلقائي في فئران IL-10-KO غير متوقع في غياب عامل مسرع 12,13,14، وذلك حسب السلالة الوراثية، وتركيب الميكروبيوتا، وظروف السكن 15,16. يعد استخدام بروتوكول موثوق لتحفيز التهاب القولون أمرا بالغ الأهمية ليكون نموذج IL-10-KO مفيدا عمليا. استخدمت دراسات سابقة أدوية مضادة للالتهابات غير ستيرويدية مثل البيروكسيكام لتحفيز التهاب الأمعاء في فئران IL-10-KO17,18. ومع ذلك، ركزت هذه الدراسات بشكل أساسي على التغيرات المناعية، مع تركيز قليل نسبيا على تأثيرات التهاب الأمعاء القولوني على الأيض أو على دور الجنس في شدة التهاب القولون19. يصف المؤلفون هنا استخدام نظام غذائي مدعم بالبيروكسيكام لتحفيز التهاب الأمعاء في فئران IL-10-KO ويصففون اضطرابات الأيض والاستجابات الالتهابية المخاطية في هذا النموذج باستخدام كل من الفئران الذكور والإناث. يقيس هذا البروتوكول وزن الجسم وكمية الطعام ليعكس التغيرات الأيضية في الجسم بالكامل، بالإضافة إلى المظاهر السريرية لالتهاب القولون والتغيرات النسيجة والنسخية التي تعكس الالتهاب المخاطي. يوفر هذا النموذج الفعال والقابل للتكرار أداة قيمة للتحقيق في العلاقة بين التهاب الأمعاء الالتهابي واستقلاب المضيف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا للبروتوكول الذي أقره لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في مركز جامعة تكساس ساوثويسترن الطبي، وفقا ل "دليل العناية واستخدام الحيوانات المختبرية" [رقم الموافقة: 2017-102011]. تم تنفيذ القتل الرحيم وفقا للإرشادات المؤسسية. لم تكن هناك حاجة للتخدير أثناء الإجراءات. التفاصيل المحددة للمواد موصوفة في جدول المواد.

1. تأسيس نموذج التهاب الأمعاء المعجل بالبيروكسيكام في فئران IL-10-KO

  1. الحفاظ على فئران IL-10-KO في منشأة خالية من مسببات الأمراض (SPF) على دورة ضوء مدتها 12 ساعة مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء.
  2. يؤوون بشكل فردي فئران تتراوح أعمارها بين 7 و8 أسابيع، ومتطابقة مع الجنس في أقفاص العوازل الدقيقة. اسمح للفئران بالتأقلم مع السكن الفردي والتعامل اليومي لمدة أسبوع على الأقل قبل بدء التجربة.
    ملاحظة: تأكد من أن أوزان الجسم هي >20 جرام للذكور أو >17 جرام للإناث، وأن الفئران خالية من جروح القتال.
  3. تعيين الفئران لمجموعة تجريبية ومجموعة ضابطة. بالنسبة للمجموعة التجريبية، استبدل الطعام القياسي بطعام محصن بالبيروكسيكام. بالنسبة للمجموعة الضابطة، قدم طعاما عاديا جديدا. أضف 50 جرام طعام إلى كل قادوس قفص.
    ملاحظة: خصص على الأقل خمسة فئران لكل جنس لكل مجموعة. تم تحضير تشاو المدعم بالبيروكسيكام (200 جزء في المليون) بواسطة تيكلاد باستخدام البيروكسيكام الذي زوده الباحثون لإنتاج نظام غذائي مخصص للحيوانات المختبرية. لتقليل التفاوت بين الدفعات، يوصى بأن تتلقى جميع الحيوانات في التجربة الطعام من نفس دفعة الإنتاج. عندما يكون ذلك ممكنا، يجب أيضا استخدام نفس الدفعة عبر التجارب لتحسين قابلية التكرار.

2. مراقبة وزن الجسم وسلوك التغذية

  1. باستخدام مقياس تحليلي، سجل وزن جسم كل فأر. قم بوزن كل فأر بشكل فردي في نفس الوقت يوميا، يوميا لمدة 7 أيام متتالية. أبلغ عن وزن الجسم اليومي كنسبة مئوية من الوزن الأساسي في اليوم 0 (تم تحديده 100٪).
    ملاحظة: فقدان الوزن الذي يزيد عن 20٪ يشير إلى التوتر المفرط وخطر الوفاة الوشيكة. يجب قتل الفئران إذا تم الوصول إلى هذا القدر.
  2. باستخدام مقياس تحليلي، سجل الوزن الأولي للطعام المحصن بالبيروكسيكام والطعام القياسي في كل قفص.
  3. ثم قس الطعام المتبقي في كل قفص في نفس الوقت يوميا، يوميا لمدة 7 أيام متتالية.
  4. احسب استهلاك الطعام اليومي بطرح وزن الطعام اليومي من الكمية المتبقية من اليوم السابق.
    ملاحظة: تحقق من كمية الطعام وإعادة ملئها بشكل روتيني إذا كانت أقل من 10 جرام. لا تؤثر مقبولية طعام البيروكسيكام على تناول الطعام ويجب أن تشبه إلى حد كبير طعام الطهي العادي.

3. مراقبة نشاط الأمراض

  1. في اليومين 0 و7، افحص بصريا حبيبات البراز من فئران فردية وحدد وجود دم في البراز.
  2. إذا لم يكن هناك دم مرئي، قم بإجراء اختبار دم خفي في البراز عن طريق دهن حبة على بطاقة الاختبار، ثم إضافة مادة المعالجة المتوفرة. نتائج النتائج وفقا للجدول 1.
  3. في اليومين 0 و7، افحص بصريا حبيبات البراز التي تم إفراغها حديثا لتقييم قوام البراز. استخدم ملقط مسطح للمساعدة في تحديد الاتساق. نتائج النتائج وفقا للجدول 1.
  4. في اليومين 0 و7، حدد درجة الهبوط الشرجي عن طريق فحص المنطقة حول الشرج. نتائج النتائج وفقا للجدول 1.
  5. قس وزن الجسم كما هو موضح أعلاه. نتائج النتائج وفقا للجدول 1.
    ملاحظة: يجب إجراء تقييم مؤشر نشاط المرض (DAI) بطريقة عمياء من قبل نفس الباحث طوال فترة التجربة لضمان الاتساق، وتقليل تحيز المراقب، وتحسين موثوقية التقييم.

4. جمع الأنسجة القولونية

  1. قتل الفئران بالاختناقبثاني أكسيد الكربون وانخلاع عنق الرحم كما تم الإبلاغ عنه في أماكن أخرى20.
  2. ضع الفأر في وضعية الاستلقاء على الخلف ورش 70٪ إيثانول على البطن البطني.
  3. ارفع الجلد بالملاقط واستخدم المقص الجراحي للقطع على طول خط المنتصف. كشف التجويف البريتوني وحدد موقع القولون.
  4. كشف القولون والسيمور باستخدام تشريح غير حاد. أزل القولون على شكل كتلة، بما في ذلك السيكوم والكفة الشرجية.
  5. ضع القولون على سطح مستو وأزل أي نسيج ضام.
  6. قم بقياس وتسجيل طول القولون.
  7. بعد قياس طول القولون، قم بإزالة الساق عن طريق القطع عند نقطة التقاء السيكو-القولون.
  8. جهز حقنة بسعة 10 مل مملوءة بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مع إبرة جافاج فولاذية قابلة لإعادة الاستخدام برأس كرة 22 قياس مرفقة. أدخل الإبرة في القولون وطف محتويات الأمعاء.
  9. ضع القولون المغسول في طبق بتري يحتوي على PBS وشطفه لإزالة المحتويات المتبقية. بعد الموافقة، استخدمها للاختبارات اللاحقة.

5. تحليل الأنسجة

  1. ضع القولون بشكل مسطح على شريحة زجاجية. استخدم الملقط للف النسيج حول نفسه، بدءا من الطرف البعيد، لتشكيل "لفة سويسرية". بهذه الطريقة، يبقى الطرف البعيد/الشرجي في اللفة الداخلية مع امتداد المناطق القريبة إلى اللفة الخارجية.
  2. باستخدام إبرة عيار 27، ثبت القولون الملفوف للحفاظ على اللفة وضعها داخل شريط نسيج مدمج (نسيج).
  3. لتثبيت الأنسجة، يغمر أشرطة الأنسجة في محلول فورمالين مخزن بنسبة 10٪ لمدة 16 ساعة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
    تحذير: 10٪ فورمالين ضار إذا لامس الجلد وقد يسبب حروقا شديدة في الجلد وتلف العين. تعامل بحذر مع قفازات واقية ونظارات علمية. يجب التخلص من الفورمالين المتبقي بشكل صحيح وفقا للإرشادات المؤسسية.
  4. بعد تثبيت الفورمالين، قم بمعالجة الأنسجة لتثبيت البارافين وقطعها لتركيبها على شرائح زجاجية.
    ملاحظة: يجب تقديم العينات إلى مختبر الأنسجة مع المعدات اللازمة لمعالجة أشرطة الأنسجة باستخدام البارافين، وتقسيم التمرير، وتركيب الشريحة، وتلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين.
  5. نسيج الصبغة يمتلئ بالهيماتوكسيلين والإيوسين (HE)، وفقا للبروتوكولاتالمعتمدة 21.
  6. باستخدام نظام التقييم النسيجي الموضح في الجدول 2، قيم السمات النسيجية التالية في كل قسم: تلف الأنسجة الناتج عن التهاب الأمعاء، تسلل الخلايا الالتهابية في الصفيحة الطبيعية، ونسبة المساحة المعنية. اجمع الدرجات في كل قسم لتكوين مجموع نقاط (الجدول 2).
    الدرجة الكلية = السمات × التورط (تلف الأنسجة) + السمات × التورط (ترشيح الخلايا الالتهابية في اللامينا بروبريا) (1)
  7. يمكن العثور على صور نسيجية ممثلة لتلف الأنسجة وتسلل الخلايا في منشور Erben وآخرون22.
    ملاحظة: يجب إجراء التقييم النسيجي بطريقة أعمى، ويفضل أن يكون من قبل أخصائي علم شرعي مدرب، لضمان اتساق وموثوقية التقييم.

6. التلوين المناعي الفلوري للأنسجة المثبتة بالبارافين

  1. ضع شرائح المناديل في رف منزلق وفي مجفف شرائح بدرجة حرارة 55 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لإذابة البارافين.
  2. ضع الشرائح في رف التلوين واغمره بشكل متسلسل لمدة 3 دقائق في برطمانات التلوين بالزيلين. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
  3. اغمر رف التلوين لمدة 3 دقائق في برطمانات التلوين بإيثانول 100٪. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
  4. اغمر رف التلوين لمدة 3 دقائق في جرة التلوين بنسبة 95٪ إيثانول.
  5. اغمر رف التلوين لمدة 3 دقائق في جرة التلوين بنسبة 80٪ إيثانول.
  6. اغمر رف التلوين لمدة 5 دقائق في برطمانات التلوين بماء منزوع الأيونات (DI).
    ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الخطوات السابقة في غطاء مهوى بسبب أبخرة الإكسيلين. تعامل بحذر مع قفازات واقية ونظارات علمية. يجب التخلص من البقايا من الزيلين بشكل صحيح وفقا للإرشادات المؤسسية.
  7. انقل الشرائح إلى رف منزلقات واغمرها في جرة التلوين بمحلول سحب 1× سترات.
  8. ضع جرة التلوين في دعامة طبق التلوين.
  9. ضع دعامة طبق التلوين في قدر الضغط.
  10. اطبخ لمدة 15 دقيقة في قدر الضغط.
  11. استرجع الشرائح من قدر الضغط ودعها تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.
  12. حضانة الشرائح باستخدام محلول حاجز 300 ميكرولتر (3.5٪ مصل ماعز مخفف ب PBS) لمدة ساعة واحدة في غرفة رطبة. تأكد من تغطية الأنسجة بالكامل بحاجز الحاجز.
  13. تعرض الشرائح ل 300 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية المخففة في حاجز العزل لمدة 16 ساعة عند 4 درجات مئوية، داخل غرفة رطبة. تأكد من تغطية الأنسجة بالكامل بالجسم المضاد الأساسي. تم استخدام الجسم المضاد الأساسي التالي: مضاد S100A8/S100A9 (1:500).
    ملاحظة: تخفيفات الأجسام المضادة ستكون مخصصة للواشاف ويجب أن تتبع توصيات المورد.
  14. قم بغمر الأقراص بشكل تسلسلي في PBS لمدة 5 دقائق في ثلاث مرات في جرة تلوين.
  15. تعرض الشرائح ل 300 ميكرولتر من جسم مضاد ثانوي فلوري مخفف في حاجز حجب لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، في غرفة رطبة. تأكد من تغطية الأنسجة بالكامل بالجسم المضاد الثانوي. تم استخدام الجسم المضاد الثانوي الفلوري التالي: أليكسا فلور 555 المضاد للأرانب (تخفيف 1:150).
    ملاحظة: من هذه النقطة فصاعدا، يجب حماية الشرائح من الضوء لمنع تبييض الفلوريدات الضوئية. تخفيف الأجسام المضادة الثانوية سيكون خاصا بالمواد الكيميائية ويجب أن يتبع توصيات المورد.
  16. قم بغمر الأقراص بشكل تسلسلي في PBS لمدة 5 دقائق في ثلاث مرات في جرة تلوين.
  17. تعرض الشرائح للتلوين النووي عن طريق غمرها في محلول هوشت مخفف بمقدار 1:5000 في PBS لمدة 20 دقيقة في جرة صبغ.
  18. قم بغمر الأقراص بشكل تسلسلي في PBS لمدة 5 دقائق في ثلاث مرات في جرة تلوين.
  19. امسح بعناية أي PBS من الشرائح باستخدام منديل غير كاشط. أضف 50 ميكرولتر من وسط تركيب مضاد التصبغ وغطاء داخلي.

7. استخراج الحمض النووي الريبي

  1. قم بتجميد القولون بالكامل أو قطعة منها في النيتروجين السائل ثم خزنها عند -80 درجة مئوية. بدلا من ذلك، اغمر في محلول حفظ RNALater سعة 1.5 مل وتخزينه وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  2. قم بإذابة القولون المتجمد سابقا وضعه على سطح مستو. قم بتعطيل وتجانس الأنسجة باستخدام جهاز تجانس يدوي.
  3. عزل الحمض النووي الريبي باستخدام الطقم، باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
  4. قياس تركيز الحمض النووي الريبي باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تشير نسبA 260/A 280 > 1.8 ونسب A260/A 230 من 2.0–2.2 إلى نقاء RNA مقبول.
  5. تابع عملية النسخ العكسي، تليها qPCR مع صبغة SYBR الخضراء المتداخلة.
  6. حلل النتائج باستخدام منصة القياس أو أداة مشابهة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يصاب الذكور والإناث بفئران IL-10-KO بالتهاب الأمعاء بعد تعرض قصير لنظام غذائي مدعم بالبيروكسيكام (الشكل 1A–E). بحلول اليوم الثاني، أظهرت الفئران المعرضة للبيروكسيكام فقدانا أكبر إحصائيا ملحوظا مقارنة بفئران السائدة التي تناولت الطعام بانتظام من نفس الجنس، ولوحظ فقدان وزن مماثل بين الجنسين (الشكل 1B). ظل تناول الطعام اليومي الظاهر دون تغيير طوال فترة التعرض للبيروكسيكام وتطور التهاب الأمعاء القولون، وكان يشبه تنا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مرض الأمعاء الالتهابي هو اضطراب متعدد الجينات معقد حيث تستخدم النماذج ما قبل السريرية كأدوات لا تقدر بثمن لتحليل المسارات التي تسهم في نشوء أمراض الأمعاء الالتهابية وتطوير استراتيجيات تشخيصية وعلاجية جديدة. حاليا، تعتمد العديد من نماذج التهاب الأمعاء قبل السريرية على التعرض للمواد الكيميائية، مثل كبريتات الدكستران الصوديوم (DSS)، الأوكسازولون، وحمض السلفونيك الترينيتروبنزين (TNBS)، وذلك بسبب سهولة استخدامها. كما تتوفر نماذج جينية تطور التهاب القولون التلقائي. من بين هذه العوامل، يعد نموذ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود إفصاحات ذات صلة.

شكر وتقدير

نود أن نشكر المرافق الأساسية في UTSW التي ساهمت في العمل المقدم هنا. وقد دعم هذا العمل مصادر التمويل التالية: NIH حتى K08DK127197 (LS-D)، T32DK007745 (JW)، وجائزة مؤسسة ساوثويسترن من خلال Docstars (LS-D).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

المراجع

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.