يصف هذا البروتوكول طريقة LAMP تعتمد على شريحة مائعية دقيقة متكاملة تماماً، تتيح الكشف في نقطة الرعاية عن 15 مسبباً للأمراض المسببة لعدوى الجهاز التنفسي السفلي لدى مرضى وحدة العناية المركزة في غضون ساعة واحدة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الكشف السريع في نقطة الرعاية عن مسببات الأمراض الخاصة بعدوى الجهاز التنفسي السفلي لدى مرضى وحدة العناية المركزة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تعد عدوى الجهاز التنفسي السفلي (LRTIs) من الأسباب الرئيسية للتدهور السريري والوفاة لدى المرضى في الحالات الحرجة. وفي وحدة العناية المركزة (ICU)، يعد التعرف السريع على المسبب المرضي أمراً ضرورياً لتحديد العلاج المناسب بمضادات الميكروبات؛ ومع ذلك، تستغرق طرق المزرعة التقليدية من 3 إلى 5 أيام وتتميز بمعدلات إيجابية دون المستوى الأمثل، لا سيما بالنسبة للفطريات. وبالرغم من أن النهج الجزيئية مثل PCR تقلل من وقت الحصول على النتائج، إلا أنها لا تزال تعتمد على الاستخلاص اليدوي للأحماض النووية والدورات الحرارية، مما يحد من ملاءمتها للاستخدام بجانب سرير المريض. يصف هذا البروتوكول سير عمل لنقطة الرعاية يعتمد على شريحة مائعية دقيقة مدمجة بالكامل على شكل قرص (CD chip) تجمع بين تنقية الأحماض النووية القائمة على الخرز المغناطيسي والتضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP). فبعد خطوة مبسطة من الإسالة والتحلل اليدوي، يتم تحميل العينة المعالجة على الشريحة جنباً إلى جنب مع قارورتين من الكواشف المعبأة مسبقاً. ومن ثم يقوم الجهاز ذاتياً بعمليات الاستخلاص، والتضخيم عند 65 °C، وقراءة الفلورة في الوقت الفعلي، ليعطي نتائج نوعية لـ 15 هدفاً، وهي 1 نوعاً من البكتيريا، و3 أنواع من الفطريات، ومسبب مرضي غير نمطي واحد، وذلك في غضون 45 min من وقت تشغيل الجهاز (حوالي 1 h لسير العمل الكامل من العينة إلى النتيجة، بما في ذلك خطوة المعالجة المسبقة اليدوية). ونقدم هنا بيانات الكشف من 10 عينات من وحدة العناية المركزة، بما في ذلك البلغم، والشفاطات الشعبية، وسوائل غسيل القصبات والأسناخ، والتي شملت عدوى بمسبب مرضي واحد وعدوى مشتركة متعددة الميكروبات تضم ما يصل إلى 7 كائنات حية على شريحة واحدة. ويقلل تصميم الخرطوشة المغلق من خطر التلوث بالرذاذ، كما أن خطوة التحميل الواحدة لا تتطلب تدريباً متخصصاً، مما يجعل هذا النظام أداة تشخيصية عملية بجانب السرير لفرق العمل في وحدة العناية المركزة.
المقدمة
تظل عدوى الجهاز التنفسي السفلي بين المرضى الذين يعانون من حالات حرجة في وحدة العناية المركزة، وعلى رأسها الالتهاب الرئوي المرتبط بجهاز التنفس الاصطناعي (VAP)، محركًا مستمرًا للمراضة، وإطالة مدة التهوية الميكانيكية، وزيادة معدلات الوفيات1,2. ويختلف المشهد الميكروبيولوجي لعدوى الجهاز التنفسي السفلي (LRTIs) المكتسبة في وحدة العناية المركزة بشكل ملحوظ عن الأمراض المكتسبة من المجتمع؛ حيث تسود البكتيريا سالبة الجرام المقاومة للأدوية المتعددة (Klebsiella pneumoniae، وPseudomonas aeruginosa، وAcinetobacter baumannii)، وغالبًا ما تظهر في مجموعات متعددة الميكروبات مما يربك الأنظمة العلاجية التجريبية3,4. كما تضيف الفطريات الانتهازية طبقة أخرى من التعقيد، إذ أصبح داء الرشاشيات الرئوي الغازي، الذي كان يُعتبر سابقًا سمة مميزة للتثبيط المناعي الشديد، يُشخص الآن بوتيرة متزايدة لدى مرضى وحدة العناية المركزة غير المصابين بنقص العدلات، ولا سيما بعد الإصابة بالإنفلونزا الشديدة وكوفيد-195. وتجمع خوارزميات التشخيص الحالية لداء الرشاشيات بين المزارع ذات العائد المنخفض واختبار مستضد الجالاكتومانان (GM)، ومع ذلك، فإن فحص GM مقيد بنوافذ تشخيصية موثقة جيدًا وحساسية متغيرة في المضيفين غير المصابين بنقص العدلات6. وترتبط كل ساعة تأخير في بدء العلاج المناسب بمضادات الميكروبات لحالات تسمم الدم بزيادة ملموسة في معدل الوفيات7. وبناءً على ذلك، فإن سرعة وتعقيد عدوى وحدة العناية المركزة تتطلب أدوات تشخيصية يمكنها مواكبة الاستعجال السريري.
تعد المزارع الميكروبيولوجية القياسية، رغم أنها لا غنى عنها لاختبارات الحساسية، محدودة السرعة بشكل أساسي؛ حيث تتراوح فترة ظهور النتائج من 3 إلى 5 أيام، وتُفقد الكائنات الدقيقة صعبة النمو، كما تظل نسبة إيجابية المزارع الفطرية منخفضة8. ويوفر تسلسل الجيل التالي الميتاجينومي (mNGS) بديلاً غير متحيز، إلا أن اعتماده السريري يحده التكلفة، وأوقات المعالجة التي تتراوح من 24 إلى 48 ساعة، والاعتماد على خطوط تحليل المعلوماتية الحيوية، ومحدودية الجدوى عند نقطة الرعاية9. وقد ساهمت اللوحات المعتمدة على تقنية PCR في تقليص الفجوة الزمنية، ولكنها لا تزال تتطلب استخلاصاً للأحماض النووية متعدد الخطوات، وأجهزة للدورات الحرارية، وبالنسبة للتنسيقات التقليدية، تتطلب الفصل الكهربائي بعد التضخيم10. ولا يلبي أي من هذه الأنظمة المتطلبات المتلازمة لوحدة العناية المركزة (ICU): سرعة تقل عن ساعة واحدة، وأقل قدر من الوقت للتنفيذ اليدوي، وتغطية متعددة لمسببات الأمراض بما في ذلك الفطريات، وبساطة تشغيلية كافية لغير المتخصصين في المختبرات.
يعالج التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) العديد من هذه القيود. تضخم هذه الطريقة، التي وصفها Notomi وزملاؤه لأول مرة، الحمض النووي المستهدف عند درجة حرارة ثابتة تبلغ 65 °C باستخدام مجموعة من أربعة إلى ستة بادئات تتعرف على ست مناطق متميزة، بدفع من بوليميراز إزاحة السلاسل1. ويولد التفاعل تراكيب تضخيم مميزة على شكل حلقة ساقية وأخرى تشبه القرنبيط يمكن الكشف عنها عبر الفلورة في الوقت الحقيقي، مما ينتج منحنيات على شكل حرف S في غضون دقائق من تجاوز العتبة. وتكون الحساسية عالية عند التركيزات المنخفضة للقالب، كما يمنح تصميم البادئات المتعددة انتقائية تحد من النتائج الإيجابية الكاذبة12,13. وعند ربطها بمنصات شرائح الموائع الدقيقة، يمكن تنفيذ تقنية LAMP بشكل متوازٍ عبر أهداف متعددة من حمولة عينة واحدة14. وقد أظهرت أعمال سابقة أنظمة شرائح LAMP تكشف عن الممرضات التنفسية في وقت استجابة يقل بكثير عن ثلاث ساعات15. ومع ذلك، فإن القيد الرئيسي لهذه الأنظمة هو اعتمادها على استخلاص يدوي ومنفصل للحمض النووي، مما يزيد من الوقت والتعقيد التشغيلي وخطر التلوث.
يقضي النظام الموصوف هنا على تلك العقبة. حيث يعتمد النظام على شريحة مائعية دقيقة (microfluidic chip) قرصية الشكل تستخدم لمرة واحدة (بقطر 86 mm)، وهي تدمج عمليات تحميل العينة، وتنقية الأحماض النووية القائمة على الحبيبات المغناطيسية، وتضخيم LAMP متعدد (16-plex) في خرطوشة واحدة محكمة الإغلاق (الشكل 1). يقوم المشغل فقط بخطوة يدوية وجيزة للإسالة والتحلل باستخدام أنبوب معالجة مصمم لهذا الغرض، ثم يقوم بتحميل ناتج التحلل (lysate) وقارورتين من الكواشف على الشريحة (الشكل 2). ومن تلك النقطة فصاعداً، يتولى الجهاز عمليات الاستخلاص، والتضخيم المتساوي الحرارة عند 65 °C، واكتساب الفلورية بشكل ذاتي، مما يقدم نتائج نوعية لـ 15 هدفاً ذات صلة سريرياً، وهي 1 نوعاً من البكتيريا، و3 أنواع من الفطريات (Aspergillus spp.، وCandida albicans، وPneumocystis jirovecii)، وممرض غير نمطي واحد (Mycoplasma pneumoniae)، وذلك في غضون 45 min. ويُستخدم جين عائلة نقطة انكسار الورم الأرومي العصبي (NBPF) كضابط داخلي للتحقق من كفاية العينة وسلامة التفاعل في كل مقايسة. يوفر هذا البروتوكول تعليمات خطوة بخطوة لسير العمل الكامل، بدءاً من جمع العينات من وحدة العناية المركزة (ICU) مروراً بالمعالجة المسبقة، وتحميل الشريحة، والكشف الآلي، وتفسير النتائج، وهو موجه لكل من كوادر المختبرات السريرية وفرق العمل بجانب سرير المريض في وحدة العناية المركزة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جُمعت جميع العينات وفقاً لبروتوكول معتمد من لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى كلية بكين الطبية المتحدة التابعة للأكاديمية الصينية للعلوم الطبية (رقم الموافقة I-24PJ178). وتم الحصول على موافقة كتابية مستنيرة من كل مشارك أو ممثله القانوني المفوض قبل جمع العينات. وتظهر قائمة مسببات الأمراض المستهدفة وتوزيعات آبار التفاعل في الجدول 1، بينما تظهر المواد الاستهلاكية المستخدمة أثناء المعالجة الأولية للعينات في الجدول 2.
1. جمع العينات السريرية من الجهاز التنفسي السفلي في وحدة العناية المركزة
- جمع البلغم
- مضمضة تجويف الفم بالماء النظيف أو بالمحلول الملحي الفسيولوجي المعقم ثلاث مرات لإزالة بقايا الطعام والنبيت الجرثومي الفموي المتعايش.
- توجيه المريض لأخذ نفسين إلى ثلاثة أنفاس عميقة، ثم السعال بقوة لطرد البلغم التنفسي العميق مباشرة في كوب جمع معقم.
ملاحظة: تكون العينة المقبولة من مادة لزجة أو قيحية أو مخططة بالدم من أسفل الرغامي؛ أما اللعاب الشفاف أو التنقيط الأنفي الخلفي فلا يعد كافياً وقد يؤثر سلباً على دقة الكشف لاحقاً.
- جمع نضحة القصبات (BAS)
- بالنسبة للمرضى غير الخاضعين للتنبيب، يتم إدخال قسطرة شفط معقمة (قسطرة 10–12 Fr، مع ضبط مصدر الشفط على ضغط −0.0267 MPa، وهو ما يعادل −20 mmHg) عبر الطريق الأنفي أو الفموي إلى عمق 30 cm تقريباً.
- يتم تطبيق الشفط مع تدوير القسطرة وسحبها ببطء. تُجمع الإفرازات المشفوطة في مصيدة عينات معقمة.
ملاحظة: إذا كانت الإفرازات شحيحة، يتم غرس حوالي 5 mL من المحلول الملحي المعقم عبر القسطرة قبل عملية الشفط. - بالنسبة للمرضى الذين يخضعون للتهوية الميكانيكية، يتم اختيار قسطرة الشفط وفقاً لحجم الأنبوب الرغامي: تُستخدم قسطرة 10 Fr للأنبوب بحجم 7.0–7.5 mm وقسطرة 12 Fr للأنبوب بحجم 8.0 mm.
- يتم إعطاء المريض أكسجين مسبق بنسبة 10% لمدة 30–60 s قبل الشفط. يتم فصل دائرة جهاز التنفس الصناعي وإدخال القسطرة المختارة عبر المجرى التنفسي الاصطناعي حتى يتم مواجهة مقاومة.
- يتم تطبيق ضغط سلبي قدره −0.0267 MPa (ما يعادل −20 mmHg)، مع تحديد كل عملية شفط، وبالتالي وقت فصل جهاز التنفس، بما لا يزيد عن 15 s لتقليل فقدان تهوية الحويصلات (derecruitment) ونقص أكسجة الدم، ثم إعادة أكسجة المريض بنسبة 100% لمدة 30–60 s بعد الشفط.
- يتم غرس 1–2 mL من المحلول الملحي المعقم عبر القسطرة والانتظار لمدة 3 s.
- يتم تطبيق الشفط وسحب القسطرة. تُجمع الإفرازات المشفوطة في مصيدة عينات معقمة. يتم إعادة توصيل دائرة جهاز التنفس الصناعي فوراً بعد جمع العينة.
ملاحظة: يعد الالتزام الصارم بتقنيات التعقيم أمراً ضرورياً طوال العملية لتجنب التلوث المكتسب في المستشفى للعينة.
- جمع سائل غسيل القصبات والأسناخ (BALF)
- تحديد الجزء المستهدف عبر تصوير الصدر. يتم دفع المنظار القصبوي وتثبيته في الشعبة القصبية القطعية أو تحت القطعية المناسبة.
- يتم غرس كميات من 20–50 mL من المحلول الملحي المعقم بسرعة، لعدد 3–5 كميات (بإجمالي 60–120 mL). يُطبق شفط خفيف بعد كل كمية، ثم يُجمع السائل المسترجع في وعاء معقم ومحكم الغلق.
تنبيه: يعد الرصد المستمر للديناميكا الدموية والتهوية إلزامياً أثناء عملية غسيل القصبات والأسناخ (BAL) لمرضى وحدة العناية المركزة (ICU). يتم ضبط إعدادات جهاز التنفس الصناعي حسب الحاجة للحالات الخاضعة للتهوية الميكانيكية.
ملاحظة: يتراوح الاسترجاع النموذجي بين 40–60% من الحجم المغرس. قد يتطلب الاسترجاع الضعيف إعادة وضع طرف المنظار القصبوي.
2. الإسالة وتحلل الممرضات
- باستخدام الماصة disposable pipette رقم 2، اسحب العينة حتى الخط المحدد (حوالي 1 mL) ثم فرغها في أنبوب الإسالة. اضغط على بصلة الماصة بشكل متكرر لنقل جميع المواد اللزجة، ثم أغلق الأنبوب بالغطاء.
ملاحظة: بالنسبة لسائل غسيل القصبات والأسناخ (BALF) أو البلغم المائي، يتم تحميل حجمين من الماصة لضمان إدخال كمية كافية من الممرضات. - رج أنبوب الإسالة بقوة يدويًا لمدة 1 min. افحص العينة بصريًا واستمر في الرج حتى تختفي جميع تكتلات المخاط المرئية وتتدفق العينة بحرية عبر الماصة disposable pipette رقم 1 دون مقاومة (قوام متجانس يشبه الماء). استمر في الرج لمدة 1 min على الأقل، مع تمديد الوقت حسب الحاجة للعينات شديدة اللزوجة حتى تتحقق هذه المعايير.
- افتح غطاء الإغلاق الخاص بأنبوب التحلل.
- اسحب حوالي 0.5 mL من العينة المتجانسة باستخدام الماصة disposable pipette رقم 1 ثم فرغ العينة في أنبوب التحلل.
- أغلق غطاء الإغلاق وتأكد من إحكام ربط غطاء الطرف.
- ضع أنبوب التحلل في جهاز المعالجة المسبقة للعينة (SP device)، مع الضغط لأسفل حتى يستقر بإحكام. اضغط على Start.
- اترك جهاز SP device ليكمل دورة الإسالة والتحلل الآلية (المعاملات موضحة في Table 3) والتي تستغرق حوالي 15 min.
ملاحظة: لا تفتح الأنبوب أو تنزعه أثناء المعالجة.
3. تحميل الشريحة والكشف الآلي
- تحميل الكواشف والعينة
- أخرج شريحة الـ CD من التخزين في درجة حرارة 4 °C واتركها لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (حوالي 25 °C) لمدة 10 min.
ملاحظة: تُستخدم قوارير الكواشف O و B والمحلل المسبق المعالجة في درجة حرارة الغرفة؛ بينما يتم إجراء تضخيم LAMP على الشريحة عند 65 °C (راجع الخطوة 3.2.3 والجدول 3). - افتح الكيس الرقائقي وضع الشريحة على سطح مستوٍ.
- أدر الغطاء عكس اتجاه عقارب الساعة لفتح الشريحة.
- هز القارورة O لتجميع السائل في قاع القارورة.
- افتح غطاء القارورة O، وأدخل الفوهة في المنفذ O، ثم فرغ المحتويات بالكامل في المنفذ.
- تخلص من القارورة O. كرر الإجراء باستخدام القارورة B والمنفذ B.
- أخرج أنبوب التحلل المعالج من جهاز SP وأزل غطاء الطرف.
- قم بمحاذاة طرف الأنبوب مع المنفذ S وفرغ حجم المحلل بالكامل في الشريحة.
- تخلص من أنبوب التحلل المستخدم.
- أدر غطاء الشريحة في اتجاه عقارب الساعة حتى تسمع طقتين تؤكدان الإغلاق التام.
ملاحظة: قد يؤدي التحميل غير المكتمل لأي منفذ إلى فشل القنوات الفردية. تأكد من التفريغ الكامل قبل الإغلاق. لتجنب الإغلاق غير المكتمل ومخاطر التلوث، لا ترتدِ قفازات PE عند إغلاق الغطاء؛ ويُنصح بدلاً من ذلك باستخدام قفازات اللاتكس أو النيتريل.
- أخرج شريحة الـ CD من التخزين في درجة حرارة 4 °C واتركها لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (حوالي 25 °C) لمدة 10 min.
- تشغيل الجهاز
- قم بتشغيل محلل الحمض النووي الآلي. اضغط على Detect، وامسح الرمز الشريطي الموجود على الكيس الرقائقي للشريحة، وأدخل البيانات الديموغرافية للمريض ومعرف العينة.
- ثبت الشريحة على المغزل الدوار واضغط للأسفل حتى تؤكد طقة واحدة إتمام التثبيت.
- اضغط على Start. يقوم الجهاز بشكل ذاتي بتوزيع الكواشف بالطرد المركزي، واستخلاص الخرز المغناطيسي، وتضخيم LAMP عند 65 °C، والالتقاط الفلوري. تستغرق مدة التشغيل حوالي 45 min (يتم تلخيص عملية تحميل الكواشف/العينات وسير عمل الجهاز في الشكل 3).
ملاحظة: لا تفتح الغطاء أثناء التشغيل.
- تفسير النتائج
- يحدد البرنامج نقطة الانقلاب لكل منحنى تضخيم على شكل حرف S عن طريق تحليل الحد الأقصى للمشتقة الثانية، ويبلغ عن قيمة TP المقابلة (الوقت اللازم للإيجابية).
- قارن كل قيمة TP بالعتبة المقابلة المدرجة في الجدول 4. تُصنف القنوات التي تكون قيم TP فيها عند العتبة أو أقل منها كإيجابية، والقنوات التي تكون قيم TP فيها أعلى من العتبة كسلبية.
- تحقق من أن قناة التحكم الداخلية (البئر 16) تظهر منحنى تضخيم على شكل حرف S مع قيمة TP أقل من 12 min.
- ارفض نتيجة التشغيل في حال فشل التحكم الداخلي. كرر الاختبار باستخدام شريحة جديدة أو أعد جمع العينة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بعد اكتمال تشغيلة صالحة، عرض الجهاز منحنيات الفلورة في الزمن الحقيقي لجميع القنوات الـ 16. أظهرت القنوات الإيجابية ديناميكية التضخيم على شكل حرف S كما هو متوقع، مع قيم TP المحددة تلقائيًا، في حين بقيت القنوات السلبية عند مستوى القاعدة. أعطت قناة IC (الحفرة 16) منحنى على شكل حرف S مع قيمة TP < 12 دقيقة في جميع التشغيلات الصالحة.
كاختبار تجريبي أولي لإثبات مفهوم البروتوكول، تم اختيار 10 عينات تمثيلية لتوضيح نطاق السيناريوهات السريرية التي تُصادف في ممارسة وحدة العناية المركزة، بما في ذلك 6 ع...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يُعد التعرف السريع على المسببات المرضية أمراً بالغ الأهمية في إدارة العدوى داخل وحدة العناية المركزة (ICU). يقلل النظام الموصوف هنا الوقت اللازم للتعرف على المسبب المرضي من 3 إلى 5 أيام، وهي المدة المطلوبة عادةً للمزرعة، إلى أقل من ساعة واحدة، وهو الإطار الزمني الذي تُتخذ خلاله غالباً قرارات استخدام مضادات الميكروبات كخط علاج أول7. ومن خلال دمج عمليات استخلاص الحمض النووي وتنقيته وتضخيمه باستخدام تقنية LAMP بـ 16 تفاعلاً متعدداً (16-plex) داخل شريحة واحدة محكمة الإغلاق، يلغي مسار العمل هذا خطوة اس...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يصرح المؤلفون بعدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
المشروع الوطني الرئيسي للعلوم والتكنولوجيا للأمراض المزمنة غير المعدية (رقم 2023ZD051650)، وتمويل البحوث السريرية في المستشفيات ذات المستوى العالي الوطني (2026-PUMCH-A-103)، وبرنامج المنافسة المفتوحة لـ CMB (24-561)، وبرنامج تنمية المواهب في مستشفى كلية بكين الطبية المتحدة (رقم UGG1571).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلل أحماض نووية آلي | Beijing Taihao Biotechnology Co., Ltd | THE-T80-01 | TurboFlow T؛ يقوم بتوزيع الكواشف عن طريق الطرد المركزي، والاستخلاص بالخرز المغناطيسي، وتفاعل LAMP عند 65 °C، والكشف عن الفلورة في الوقت الحقيقي (زمن التشغيل ~45 min) |
| ماصة باستور رقم #1 تستخدم لمرة واحدة | Zhongtai Experimental Equipment Factory (Haimen) | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ 0.5 mL؛ لنقل العينة المتجانسة إلى أنبوب التحلل |
| ماصة باستور رقم #2 تستخدم لمرة واحدة | Zhongtai Experimental Equipment Factory (Haimen) | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ 2 mL; لسحب العينة حتى الخط المحدد إلى أنبوب الإسالة |
| قرص CD | Beijing Hongyang Chensheng Technology Co., Ltd | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ قرص بقطر 86 mm يحتوي على منطقة تحميل مركزية (المنافذ O وB وS)، ومنطقة تنقية بالخرز المغناطيسي، وحلقة خارجية بها 16 بئراً للتفاعل (15 هدفاً لمسببات الأمراض + ضابط داخلي NBPF) |
| كواشف تفاعل LAMP | Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd | 16730ES80 | كواشف تفاعل LAMP مخزنة مسبقاً في قرص CD على شكل خرز مجف بالتجميد |
| أنبوب إسالة | Beijing Taihao Biotechnology Co., Ltd | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ 2 mL/tube؛ يستقبل العينة من أجل التجانس اليدوي |
| أنبوب تحلل | Beijing Taihao Biotechnology Co., Ltd | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ 0.5 mL/tube؛ جسم من السيليكون قابل للضغط مع غشاء ترشيح 20 µm؛ يحتوي مسبقاً على كواشف التحلل |
| بادئات | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd | Custom-made | خليط بادئات مدمج في غرفة تفاعل قرص CD |
| جهاز المعالجة المسبقة للعينات | Beijing Taihao Biotechnology Co., Ltd | THE-R10-02 | TS-20؛ دورة آلية من الإسالة–التحلل (زمن التشغيل ~15 min) |
| قارورة جرعة واحدة “B” | Ruifu Biotechnology (Guangzhou) Co., Ltd | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ كاشف معبأ مسبقاً على الشريحة؛ قارورة واحدة لكل اختبار؛ تُخزن عند 4 °C وتُترك لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (~25 °C) قبل التحميل |
| قارورة جرعة واحدة “O” | Ruifu Biotechnology (Guangzhou) Co., Ltd | Custom-made | مستهلك يستخدم لمرة واحدة؛ كاشف معبأ مسبقاً على الشريحة؛ قارورة واحدة لكل اختبار؛ تُخزن عند 4 °C وتُترك لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (~25 °C) قبل التحميل |
المراجع
- GBD 2016 Lower Respiratory Infections Collaborators. Estimates of the global, regional, and national morbidity, mortality, and aetiologies of lower respiratory infections in 195 countries, 1990–2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet Infect Dis. 2018;18(11):1191-1210.
- Niederman MS, Torres A. Respiratory infections. Eur Respir Rev. 2022;31(166):220150.
- Weiser JN, Ferreira DM, Paton JC. Streptococcus pneumoniae: transmission, colonization and invasion. Nat Rev Microbiol. 2018;16(6):355-367.
- Reynolds D et al. The threat of multidrug-resistant/extensively drug-resistant gram-negative respiratory infections: another pandemic. Eur Respir Rev. 2022;31(166):220068.
- Schauwvlieghe AFAD et al. Invasive aspergillosis in patients admitted to the intensive care unit with severe influenza: a retrospective cohort study. Lancet Respir Med. 2018;6(10):782-792.
- Meersseman W et al. Galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid: a tool for diagnosing aspergillosis in intensive care unit patients. Am J Respir Crit Care Med. 2008;177(1):27-34.
- Seymour CW et al. Time to treatment and mortality during mandated emergency care for sepsis. N Engl J Med. 2017;376(23):2235-2244.
- Noviello S, Huang DB. The basics and the advancements in diagnosis of bacterial lower respiratory tract infections. Diagnostics (Basel). 2019;9(2):37.
- Chiu CY, Miller SA. Clinical metagenomics. Nat Rev Genet. 2019;20(6):341-355.
- Hanson KE et al. Molecular testing for acute respiratory tract infections: clinical and diagnostic recommendations from the IDSA's diagnostics committee. Clin Infect Dis. 2020;71(10):2744-2751.
- Notomi T et al. Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res. 2000;28(12):E63.
- Soroka M, Wasowicz B, Rymaszewska A. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): the better sibling of PCR? Cells. 2021;10(8):1931.
- Parida M et al. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): a new generation of innovative gene amplification technique; perspectives in clinical diagnosis of infectious diseases. Rev Med Virol. 2008;18(6):407-421.
- Ou H et al. Rapid detection of multiple pathogens by the combined loop-mediated isothermal amplification technology and microfluidic chip technology. Ann Palliat Med. 2021;10(10):11053-11066.
- Lai JX et al. Rapid detection of bacterial pathogens causing lower respiratory tract infections via microfluidic-chip-based loop-mediated isothermal amplification. J Vis Exp. 2024;(205):e66677.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
