يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج فأر خارج الجسم الحي لالتهاب الأنسجة الدهنية المشابهة للنظام الغذائي عالي الدهون

292 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/71651

⸱

يوليو 14, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Anatomy, Leipzig University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

باستخدام نموذج ex vivo explant، يتم زراعة أجزاء صغيرة من الجزء الخلفي من نسيج الدهون البيضاء الحشوية من فئران نحيلة لمدة 7–10 أيام، مما يمكن من تحفيز ودراسة التهاب الأنسجة الدهنية أثناء التغذية عالية الدهون.

الملخص

يصف هذا البروتوكول نموذج فأر خارج الجسم الحي يعيد تلخيص بعض السمات الخلوية والالتهابية التي لوحظت في نسيج الدهون الحشوية (VAT) بعد التغذية ذات النظام الغذائي عالي الدهون، دون تدخل غذائي داخل الجسم الحي. يتم تربية النباتات الصغيرة من ضريبة القيمة المضافة من فئران نحيفة لمدة 7–10 أيام، وخلالها تتطور بشكل تلقائي نمط ظاهري التهابي يشبه إلى حد كبير نمط VAT من الحيوانات التي تتغذى على HFD. ومن المهم أن يحافظ النموذج على بنية الأنسجة الدهنية (AT)، مما يمكن من دراسة العمليات الالتهابية في سياق فسيولوجي ذي صلة. خلال الزراعة، تظهر علامات رئيسية للالتهاب المرتبط بالسمنة، بما في ذلك تكوين هياكل شبيهة بالتاج (CLS)، وتراكم البلعم المنشطة أيضيا (MMes)، وزيادة إنتاج السيتوكين الالتهابي. على الرغم من موت الخلايا الدهنية، يمكن تمثيل عوامل أخرى للالتهاب المرتبط بالسمنة، بما في ذلك الضغوط الأيضية مثل الأحماض الدهنية المشبعة، تغير التعامل مع الدهون، فرط الجلوكوز، الإجهاد التأكسدي، نقص الأكسجة، اختلال توازن الأديبوكين، وإشارات الخلايا الدهنية الباراكرينية إلى الخلايا المناعية، في النموذج. يدعم النظام مجموعة واسعة من التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك التصوير الحي، وقياس تدفق الخلايا، وPCR الكمي، وELISA، والتلوين المناعي، وتسلسل الحمض النووي الريبي السائل أو الخلوي الواحد. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تطبيق العلاجات الدوائية والمعتمدة على السيتوكينات لدراسة مسارات الإشارات والاستجابات الخاصة بنوع الخلية. يتماشى هذا النموذج السهل التخصيص مع مبادئ 3R من خلال تقليل استخدام الحيوانات في دراسات النظام الغذائي الحي . النموذج قابل للتكرار، وفعال من حيث التكلفة، وسهل التنفيذ، ويوفر منصة متعددة الاستخدامات لدراسة موت الخلايا الدهنية، وديناميكيات الخلايا المناعية، والاستراتيجيات العلاجية في التهاب التنبيه.

المقدمة

النسيج الدهني (AT) هو عضو نشط أيضيا يتكون من حوالي 20٪ من الخلايا الدهنية ومزيج غير متجانس من الخلايا المناعية، والأرومات الليفية، والخلايا المؤسسة، والخلايا الوعائية في البشر1. يصنف AT إلى نسيج دهني أبيض أحادي الحق (WAT)، ونسيج دهني بني متعدد الحضيض (BAT)، وأنسجة دهنية بيج متوسطة، مما يعكس التباينات في التركيب والوظيفة والموقع التشريحي. يتوزع WAT بين مستودعات الدهون تحت الجلد (SCAT)، والحشوية (VAT)، وحول الأوعية الدموية، ومستودعات دهنية في نخاع العظم، والتي تختلف في أصل النمو، وملفات التعبير الجيني، والوظيفة الأيضية. بعيدا عن دوره في تخزين الدهون، يعمل AT كعضو غدد صماء من خلال إفراز السيتوكينات والهرمونات والدهون2. مقارنة ب SCAT، فإن VAT أكثر نشاطا أيضيا وغنيا بالخلايا الالتهابية، مما يجعله ذا صلة خاصة في دراسات التهاب الالتهاب المقاوم للكهرباء والأمراض الأيضية مثل السكري من النوعالثاني 3,4,5.

يعد التهاب الجلوس منظما رئيسيا للصحة الأيضية ويلعب دورا مركزيا في السمنة، والتي ترتبط بالعديد من الأمراض المصاحبة. السمنة تعزز تضخم الخلايا الدهنية، وتضخم التنسج والتكاثر،بينما يرتبط تمدد والتهاب التربينات بقوة بفرط سكر الدم، فرط الإنسولينميا، فرط الدهون الثلاثية، وضعف تحمل الجلوكوز3. يفترض أن تمدد ال AT يصاحبه زيادة في موت الخلايا الدهنية، مع حوالي 10٪ من دوران الخلاياسنويا، مما يحفز تجنيد البلعم وهو أمر ضروري لتنظيف الأنسجة وإعادة تشكيل8. نظرا لأن الخلايا الدهنية أكبر بكثير (100–200 ميكرومتر) من البلعميات، فإن البلعمة الفعالة من قبل هذه الخلايا الصغيرة التي تتكون من خمسة أضعاف تقريبا يمثل تحديا، مما يعيق توازن الأنسجة ويعزز التهاب ال AT المزمن9. تقوم البلعم النسيجية الدهنية (ATMs) بالتوسط في تطهير الخلايا الدهنية الكبيرة الحجم المحتضرة إما من خلال الاندماج في خلايا عملاقة متعددة النوى (MGCs) أو عن طريق تشكيل هياكل تشبه التاج (CLS) حول الخلايا الدهنية الميتة وتحطيلها من خلال إخراج الخلايا الليسوسومية 10,11,12. وفرة CLS ترتبط بالالتهاب المرتبط بالسمنة11,13.

في ال ATs السليمة، تكون أجهزة ATM في الغالب بلاعم شبيهة ب M2 مضادة للالتهابات، بينما تعزز السمنة التحول نحو نمط ظاهري مشابه ل M1 المضاد للالتهابات 14,15. تظهر مجموعات فرعية إضافية من البلعم المميزة ميكانيكيا، بما في ذلك البلعم المنشطة أيضيا (MMes) والبلاعم المرتبطة بالدهون (LAMs)، والتي تلعب أدوارا مهمة في تطهير الخلايا الدهنية الميتة من خلال الإخراج الخلوي الليسوزومي 16,17,18.

لدراسة التهاب التراتوبوكيت في بيئة متعددة الخلايا ذات صلة فسيولوجية، أنشأ البروتوكول نموذج فأر خارج الجسم الحيوي يعتمد على الزراعة العضوية النموذجية لمضادات القيمة المضافة المضافة المستخرجة من فئران نحيلة. النباتات المستزرعة من VAT التي تم زراعتها لمدة 7–10 أيام تطور نمطا التهابيا مماثلا لما لوحظ بعد 12 أسبوعا على الأقل من التغذية عالية الدهون (HFD) فيما يتعلق بتكوين CLS، ونمط البلاعمية، وإنتاج السيتوكين الالتهابي 9,19. ومن المهم أن هذا النهج يقلل من استخدام الحيوانات، ويلغي الحاجة إلى الموافقات على التدخل الغذائي، ويساهم في مبادئ 3R من خلال تقليل الاعتماد على دراسات التدخل الغذائي طويلة الأمد. مقارنة بأنظمة زراعة الخلايا التقليدية ثنائية الأبعاد (ثنائية الأبعاد)، مثل نماذج الزراعة أحادية الخلية (مثل خلايا 3T3-L1 أو زراعة الخلايا الدهنية الأولية)، تحافظ هذه الطريقة على تعقيد الأنسجة وتنوع الخلايا، مما يمكن من دراسة التفاعلات الفسيولوجية بين الخلايا والخلية، بما في ذلك تلك بين الخلايا المناعية والخلايا الدهنية.

النباتات السابقة للزنادات المضادة المزروعة متوافقة مع مجموعة واسعة من الأساليب التحليلية. يتيح التصوير الحي للكونفوكال مراقبة تراكم ال ATM، وتكوين CLS، وتكوين MGC 9,19. يسمح هضم الكولاجيناز بعزل الجزء الوعائي البترومي (SVF) لإجراء تحليلات تدفق الخلايا القياسية، بما في ذلك اختبارات التكاثر وتحديد الأنماط الظاهرية الشبيهة ب M1 أو M2 أو MMe12. يمكن إجراء تحليلات التعبير الجيني بما في ذلك تحليل PCR الكمي (qPCR) وتسلسل الحمض النووي الريبي، على النباتات الخارجية الكاملة، أو خلايا SVF، أو البلاعم الفرزة9. يمكن تقييم تعبير البروتين والنشاط الإنزيمي بواسطة البلتينغ الغربي أو ELISA12,20,21، بينما يمكن رؤية بنية الأنسجة وتعبير العلامات من خلال التلوين الكامل والفلورية المناعية 9,22. بالإضافة إلى ذلك، فإن التدخلات الدوائية والجينية، بما في ذلك استنزاف التيار الملكي والعلاج بالسيتوكينات، ممكنة بسهولة 21,23,24.

باختصار، يتيح هذا النموذج الفأر خارج الجسم لالتهاب الترتيل الحساس المشابه لحمض الدم العالي التحقيق في موت الخلايا الدهنية، والمراقبة المباشرة في الموقع لسلوك الخلية، والتلاعبات الدوائية أو الجينية ذات الصلة بمناعة التربينات (الشكل 1).

figure-introduction-1
الشكل 1: ملخص رسومي لسير العمل. يتم عزل النسيج الدهني الحشوي (AT) من الفئران، وقطعه إلى نباتات صغيرة خارجية، وزراعة لمدة 7–10 أيام. خلال فترة الزراعة، تطور النباتات المستخرجة نمطا التهابيا، مما يمكن من دراسة التهاب الأنسجة الدهنية تحت ظروف خارج الجسم الخاضع للتحكم بها. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للإرشادات المؤسسية والوطنية وتمت الموافقة عليها من قبل السلطات التنظيمية المختصة. تم استخدام فئران الطماطم Csf1r-eGFP-Adipoq-ERT2-Cre-CAG-tdفئران الطماطم ("MacFat"، RRID: Csf1r-eGFP: RRID:IMSR_JAX:018549، Adipoq-iCreERT2: RRID:IMSR_JAX:025124، CAG-tdTomato: RRID:IMSR_JAX:007914)27,28 لتجارب المجهر التمثيلية. يتيح هذا الخط الإعلامي تصور البلاعم من خلال تعبير GFP والخلايا الدهنية عبر تعبير tdTomato (tdTomato Expression). نظرا لأن تعبير tdTomato يفقد بعد موت الخلايا الدهنية، يمكن مراقبة فعالية الخلايا الدهنية أثناء الزراعة. تم استخدام فئران تقرير Csf1r-eGFP ("ماكغرين"، RRID:IMSR_JAX:018549)28 لتصوير البلاعم وتحليل تدفق الخلية. تم استخدام فئران C57BL/6J (RRID:IMSR_JAX:000664) في تجارب غير تصويرية، بما في ذلك تحليلات scRNA-seq وqPCR. تم الحفاظ على جميع الخطوط المعدلة وراثيا كفئران متغايرة الزيجوت على خلفية C57BL/6J.

اتبعت التجارب الحيوانية 'مبادئ رعاية الحيوانات المختبرية' (منشور NIH رقم 85e23، معدل 1985) والقوانين الوطنية المحددة وتمت الموافقة عليها من قبل السلطات المحلية في ولاية ساكسونيا: إدارة الأراضي في لايبزيغ، ألمانيا (تطبيق تجريبي على الحيوانات: TV11-21-MEZ). وفقا للسلطات المحلية، فإن التجارب الموصوفة لا تشكل اختبارا على الحيوانات، حيث ينص "إذا قتل فقاريات فقط لغرض استخدام أعضائها أو أنسجتها لأغراض علمية، فإن ذلك لا يعتبر اختبارا على الحيوانات بموجب المادة 7(2) من قانون رعاية الحيوان (TierSchG)، بل يعتبر القتل بموجب المادة 4(3) من قانون رعاية الحيوان (TierSchG)." يجب الإبلاغ عن قتل الحيوانات في 'تقرير الحيوانات'. هذا التقرير مدرج في طلب التجارب على الحيوانات. كما وافقت لجنة الأخلاقيات في كلية الطب بجامعة لايبزيغ على مشاريع البحث. وفقا لإرشادات التطبيق التجريبي الحيواني TV11-21-MEZ، يتم القتل الرحيم للفئران بجرعة زائدة من الإيزوفلوران المخدر الاستنشاقي. يتم توصيل تركيز غاز فعال (5٪ في غاز الحامل للأكسجين) عبر جهاز تبخير إيزوفلوران. يكتمل إجراء القتل الرحيم عند تأكيد توقف الدورة الدموية النهائي (غياب التنفس [اختبار الريش] ونبض القلب [تحسس]).

تم إيواء الفئران في منشأة محددة خالية من مسببات الأمراض (22 ± 2 درجة مئوية) في جامعة لايبزيغ ضمن مجموعات شقيقة من 3 إلى 5 حيوانات تحت دورة ضوء/ظلام مدتها 12 ساعة. كان لدى الحيوانات إمكانية الوصول إلى الماء ونظام غذائي قياسي للطعام (9٪ دهون سعرية حرارية؛ Sniff GmbH، ألمانيا). أجريت تجارب تمثيلية باستخدام فئران ذكور وإناث. المواد الكيميائية والمواد الكيميائية والمجموعات المستخدمة في البروتوكول مدرجة في جدول المواد.

1. التحضيرات

  1. جهز المواد الكيميائية والمعدات
    1. جهز وسط الزراعة في ظروف معقمة عن طريق إضافة RPMI-1640 بنسبة 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و1٪ محلول مضاد حيوي.
    2. سخن الوسط النباتي وPBS المعقم إلى 37 درجة مئوية.
    3. نظف جميع المعدات ومنطقة العمل داخل غطاء زراعة الأنسجة بنسبة 70٪ إيثانول.
  2. جهز الحيوانات
    1. التضحية بالفئران وفقا للإرشادات المؤسسية. اختياريا وزن الحيوانات.
    2. ضع الحيوانات في كأس زجاجي يحتوي على 70٪ إيثانول.
    3. امسح الجزء الخارجي من الكأس الزجاجي بالإيثانول وانقله إلى غطاء زراعة الأنسجة.

2. عزل الأنسجة الدهنية (الشكل 2)

  1. جهز الفأر
    1. ضع الفأر في وضع الاستلقاء على الظهر في طبق زجاجي باستخدام ملقط حاد، أو ثبته على لوح تشريح.
    2. أضف طبقة رقيقة من PBS المسخن مسبقا إلى طبق بتري.
    3. غيري إلى زوج جديد من القفازات.
    4. ارفع الجلد السفلي للبطن باستخدام الملقط وقم بعمل شق أفقي صغير باستخدام المقص لفتح تجويف البطن.
    5. قم بعمل شق عمودي (~2 سم من الذيل إلى الروسترال) يمتد من القطع الأولي لكشف الأعضاء الداخلية.
  2. عزل وسادة الدهون
    1. باستخدام مقص صغير حاد وملقط مدبب، يتم تحديد وإزالة نسيج الدهون الأبيض. استخدم مجموعة منفصلة من الأدوات لمنع التلوث.
    2. الفئران الذكورية: الدهون في الغدد التناسلية مرتبطة فقط بالبربخ والخصية. ارفع وسادة الدهون بحذر واقطع فوق البربخ، أو قم بإزالة البربخ والخصية مع الدهون التناسلية وإزالتهما بعد ذلك.
    3. الفئران الإناث: الدهون التناسلية مرتبطة بقرن الرحم والمبايض وهي أكثر وضوحا من الذكور. ارفعي وسادة الدهون بحذر واستئصال الوسادة على طول قرن الرحم والمبايض.
    4. ضع وسادات الدهون المعزولة في طبق بتري المحشو ب PBS.
    5. قم بإزالة البربخ المتبقي أو الخصية أو المبايض أو الأوعية الدموية باستخدام شفرة حلاقة.
    6. انقل وسادة الدهون النظيفة إلى طبق بتري ثاني يحتوي على PBS المسخن مسبقا. اختياريا، وزن الوسادات الدهنية.
      ملاحظة: وزن وسادات الدهون قبل الزراعة يسمح بتطبيع كتلة الأنسجة بين الظروف التجريبية.

figure-protocol-1
الشكل 2: عزل وزراعة إزالة الأنسجة الدهنية الحشوية. (A,B) فتح تجويف البطن وكشف الأنسجة الدهنية الحشوية. (C, D) عزل نسيج دهني البربخ من الفئران الذكورية، حيث ترتبط الدهون بالبربخ (الدوائر الحمراء) والخصية (الدوائر الزرقاء). (E, F) عزل نسيج الدهون الغددية التناسلية عن إناث الفئران، ويتم تثبيت الدهون على قرن الرحم (دوائر خضراء) والمبايض. (G, H) تحضير وتقليم فتحات الأنسجة الدهنية. (I, J) نقل النباتات المستخرجة إلى آبار الزراعة ووضع إدخالات زراعة الخلايا. (ك، ل) صور تمثيلية للنباتات الخارجة أثناء الزراعة في صفائح ذات 6 آبار. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

3. تحضير النباتات وزراعتها

  1. جهز النباتات الخارجية
    تحذير: شفرات الحلاقة حادة وقد تسبب إصابات. تعامل مع الشفرات بعناية وتخلص منها وفقا لإجراءات السلامة المؤسسية.
    1. اقطع وسادة الدهون إلى شرائط ثم إلى مكعبات بحجم حوالي 10 مم3 (~10 ملغ لكل نبتة) باستخدام شفرة حلاقة.
  2. تأسيس زراعة النباتات الخارجة
    1. أضف 1–1.5 مل من وسط الزراعة إلى كل بئر من صفيحة مكونة من 6 آبار.
      ملاحظة: لتطبيع الجسم، استخدم حوالي 50 ملغ من نسيج دهني لكل 1 مل من وسط الزراعة.
    2. انقل خمس نباتات مقروعة إلى كل بئر باستخدام ملعقة أو ملعقة معقمة.
    3. رتب النباتات الخارجية بشكل متساو في نمط دائري.
    4. غط الفتحات بإدخال مزرعة الخلايا باستخدام ملقط معقم.
      ملاحظة: تجنب إدخال فقاعات الهواء عند وضع الإدخالات، وتأكد من أن القطع الخارجية مركزة داخلها.
    5. حضن النباتات الخارجية عند حرارة 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون، و21٪ أكسجين لمدة 7–10 أيام.
      ملاحظة: استخدم PBS المسخن مسبقا ووسط الزراعة لتعزيز بقاء الأنسجة. اعمل بسرعة لتقليل الوقت الذي تبقى فيه وسادات الدهون خارج الحاضنة. تجنب التلوث بفراء الفئران. إذا التصق الشعر بالأنسجة، أزله وشطف النسيج بزيت زبدة الفول السوداني الدافئ.

4. تحليلات لاحقة

  1. بعد فترة الزراعة التي تستمر من 7 إلى 10 أيام، اجمع النباتات الخارجية، أو خلايا الكسر الوعائية العضلية، أو المواد الفائقة للزراعة لإجراء تحليلات لاحقة، بما في ذلك المجهر، قياس تدفق الخلية، qPCR، ELISA، أو تسلسل RNA، حسب الحاجة لنقطة النهاية التجريبية.

5. التحليل الإحصائي

  1. قم بإجراء تحليلات إحصائية باستخدام GraphPad Prism 10.2. افحص مجموعات البيانات للحالات الشاذة باستخدام اختبار ROUT (Q = 1٪) وقيم الطبيعية باستخدام اختبار شابيرو-ويلك (α = 0.05).
  2. قارن مجموعتين باستخدام اختبارات t المزدوجة للطالب أو اختبارات ويلكوكسون الزوجية المتطابقة، حسب الحاجة. قارن مجموعات متعددة باستخدام تحليل أنوفاي أحادي الاتجاه متبوعا باختبار دنيت بعد الاختبار. اعتبر الفروق ذات الدلالة الإحصائية عند p < 0.05.
  3. قدم البيانات كمتوسط ± SEM. ما لم يذكر خلاف ذلك، عرف n كعدد النسخ البيولوجية (الفئران الفردية).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم الحفاظ على صلاحية الأنسجة العامة طوال فترة الزراعة وتمت مراقبتها باستخدام عدة طرق تكميلية. يمكن تقييم بقاء الأنسجة بواسطة المجهر الكونفوكالي باستخدام أصباغ القابلية للحياة مثل كالسين25، أو صبغ الأجسام المضادة ضد بيريليبين لتقييم سلامة غشاء الخلايا الدهنية17،26، أو تعبير البروتين المصحفي المعدل وراثيا في الخلايا الدهنية. تم الحفاظ على حيوية وسلامة الأنسجة لمدة تصل إلى 14 يوما في الزرعة، رغم أن فترات الزر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نظرا لتزايد انتشار الأمراض الأيضية والسكري على مستوى العالم، يظل فهم الآليات الكامنة وراء التهاب الأنسجة الدهنية (AT) هدفا بحثيا مهما. لتلبية هذه الحاجة، تم تطوير نظام زراعة خارج الجسم الحي ، مما يتيح تحفيز وتحليل التهاب التربيث المضاد تحت ظروف تجريبية مضبوطة.

من المتطلبات الأساسية لهذه الطريقة الحفاظ على صلاحية الأنسجة طوال فترة الزراعة. باستخدام عدة أساليب تكميلية، ثبت أن نزاهة الزراعة المبكرة تحافظ على ما يصل إلى 14 يوما في الثقافة. بالمقارنة، تظهر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

يشكر المؤلفان كونستانس هوبوش وفلوريان كيرمز على المساعدة الفنية الممتازة. تم إجراء تحليلات التدفق الخلوي في تقنيات الفلورة الأساسية بجامعة لايبزيغ، بدعم فني من كاثرين ييغر وبيا غلوكنر. وقد دعم هذا العمل المؤسسة الألمانية للأبحاث الألمانية (Deutsche Forschungsgemeinschaft)، رقم المشروع 209933838 – SFB 1052 (مشروع B09).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

```html
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
BD OptEIA Mouse TNF ELISA KitBD Biosciences560478
Bodipy 558/568 C12Flow cytometry: 1:10000; Staining: 1:2000InvitrogenD3835
Bovine Serum Albumin3%SigmaA9647
CD107a (LAMP1) – AF647Staining: 1:100; Flow cytometry: 1:200BioLegend121610
CD11c – BV605Flow cytometry: 1:100BioLegend117334
CD16/32Flow cytometry: 1:100Invitrogen14-0161-82
CD301 – AF647Flow cytometry: 1:50Bio-RadMCA2392A647
CD36 – PEFlow cytometry: 1:400BioLegend102606
CD45 – PEFlow cytometry: 1:100BD Pharmingen555483
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 Flow Cytometry Assay KitEdU: 5 µMInvitrogenC10632
Clodronate Liposomes500 µg/ml clodronateLiposoma
Collagenase Type 21 mg/ml, 315 U/mgWorthingtonLS004176
CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay KitInvitrogenC20301
DAPIFlow cytometry: 0.2 µg/mlThermo Fisher62248
Ethanol70%Carl RothT913.1
F4/80 – AF647Flow cytometry: 1:100InvitrogenMF48021
F4/80 – PE-Cy7Flow cytometry: 1:200Invitrogen25-4801-82
Fetal Calf Serum1.10Gibco10270106
Fetal Calf Serum1.20Gibco10270106
HBSS (-Mg, -Ca)Gibco14170138
HEPES13 mMRothHN77.2
Hoechst 333421:10,000Life TechnologiesH3570
LysoTracker – AF647Flow cytometry: 1:20000; Staining: 1:10000InvitrogenH34477
MAC-2Staining: 1:1000CedarlaneCL8942AP
Millicell Cell Culture Insert, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µmMerck MilliporePICM0RG50
PBS (-Mg, -Ca)Gibco14190169
PBS (-Mg, -Ca)Gibco14190169
Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)0.111111111Gibco11548876
Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)0.111111111Gibco11548876
Perilipin2 µg/mlAbcamab3526
Plexxicon 562240 µMPlexxicon Inc.HY-114153
RPMI-Media 1640with 11 mM glucoseSigma AldrichR8758
RPMI-Media 1640SigmaR8758
TC-Insert for 6-well platesSarstedt83.3930.040
TPP tissue culture test plate 6TPP92006
Triton X-1001%Carl Roth3051.2
Zinc chloride0.8 mMSigmaZ0152
Zinc formalinePolyscience21516-3.75
```

المراجع

  1. Massier L, et al. An integrated single cell and spatial transcriptomic map of human white adipose tissue. Nat Commun. 2023;14(1):1438. doi:10.1038/s41467-023-36983-2.
  2. Rosen ED, Spiegelman BM. What We Talk About When We Talk About Fat. Cell. 2014;156(1-2):20-44. doi:10.1016/j.cell.2013.12.012.
  3. Ibrahim MM. Subcutaneous and visceral adipose tissue: structural and functional differences. Obes Rev. 2010;11(1):11-18. doi:10.1111/j.1467-789X.2009.00623.x.
  4. Bruun JM, Lihn AS, Pedersen SB, Richelsen B. Monocyte chemoattractant protein-1 release is higher in visceral than subcutaneous human adipose tissue: implication of macrophages resident in adipose tissue. J Clin Endocrinol Metab. 2005;90(4):2282-2289. doi:10.1210/jc.2004-1696.
  5. Curat CA, et al. Macrophages in human visceral adipose tissue: increased accumulation in obesity and a source of resistin and visfatin. Diabetologia. 2006;49(4):744-747. doi:10.1007/s00125-006-0173-z.
  6. Wang QA, Tao C, Gupta RK, Scherer PE. Tracking adipogenesis during white adipose tissue development, expansion and regeneration. Nat Med. 2013;19(10):1338-1344. doi:10.1038/nm.3324.
  7. Spalding KL, et al. Dynamics of fat cell turnover in humans. Nature. 2008;453(7196):783-787. doi:10.1038/nature06902.
  8. Weisberg SP, McCann D, Desai M, Rosenbaum M, Leibel RL, Ferrante AW. Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue. J Clin Invest. 2003;112(12):1796-1808. doi:10.1172/JCI200319246.
  9. Lindhorst A, et al. Adipocyte death triggers a pro-inflammatory response and induces metabolic activation of resident macrophages. Cell Death Dis. 2021;12(6):579. doi:10.1038/s41419-021-03872-9.
  10. Braune J, et al. Multinucleated giant cells in adipose tissue are specialized in adipocyte degradation. Diabetes. 2021;70(2):538-548. doi:10.2337/db20-0293.
  11. Cinti S, et al. Adipocyte death defines macrophage localization and function in adipose tissue of obese mice and humans. J Lipid Res. 2005;46(11):2347-2355. doi:10.1194/jlr.M500294-JLR200.
  12. Wehr R, Lindhorst A, Arndt L, Krueger M, Raulien N, Gericke M. Lysosomal exocytosis by macrophages as a druggable mechanism for anti-inflammatory clearance of dead adipocytes in adipose tissue. Cell Death Dis. 2025. doi:10.1038/s41419-025-08334-0.
  13. Altintas MM, et al. Apoptosis, mastocytosis, and diminished adipocytokine gene expression accompany reduced epididymal fat mass in long-standing diet-induced obese mice. Lipids Health Dis. 2011;10(1):198. doi:10.1186/1476-511X-10-198.
  14. Lumeng CN, Bodzin JL, Saltiel AR. Obesity induces a phenotypic switch in adipose tissue macrophage polarization. J Clin Invest. 2007;117(1):175-184. doi:10.1172/JCI29881.
  15. Lumeng CN, DelProposto JB, Westcott DJ, Saltiel AR. Phenotypic switching of adipose tissue macrophages with obesity is generated by spatiotemporal differences in macrophage subtypes. Diabetes. 2008;57(12):3239-3246. doi:10.2337/db08-0872.
  16. Haka AS, et al. Exocytosis of macrophage lysosomes leads to digestion of apoptotic adipocytes and foam cell formation. J Lipid Res. 2016;57(6):980-992. doi:10.1194/jlr.M064089.
  17. Strissel KJ, et al. Adipocyte death, adipose tissue remodeling, and obesity complications. Diabetes. 2007;56(12):2910-2918. doi:10.2337/db07-0767.
  18. Xu R, et al. Lipid-associated macrophages between aggravation and alleviation of metabolic diseases. Trends Endocrinol Metab. 2024. doi:10.1016/j.tem.2024.04.009.
  19. Gericke M, Weyer U, Braune J, Bechmann I, Eilers J. A method for long-term live imaging of tissue macrophages in adipose tissue explants. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2015;308(11). doi:10.1152/ajpendo.00075.2015.
  20. Gericke MT, et al. Receptors for NPY and PACAP differ in expression and activity during adipogenesis in the murine 3T3-L1 fibroblast cell line. Br J Pharmacol. 2009;157(4):620-632. doi:10.1111/j.1476-5381.2009.00164.x.
  21. Arndt L, et al. The role of IL-13 and IL-4 in adipose tissue fibrosis. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5672. doi:10.3390/ijms24065672.
  22. Haase J, et al. Local proliferation of macrophages in adipose tissue during obesity-induced inflammation. Diabetologia. 2014;57(3):562-571. doi:10.1007/s00125-013-3139-y.
  23. Braune J, et al. IL-6 regulates M2 polarization and local proliferation of adipose tissue macrophages in obesity. J Immunol. 2017;198(7):2927-2934. doi:10.4049/jimmunol.1600476.
  24. Neugebauer J, et al. The Impact of Resident Adipose Tissue Macrophages on Adipocyte Homeostasis and Dedifferentiation. Int J Mol Sci. 2024;25(23):13019. doi:10.3390/ijms252313019.
  25. Schopow N, et al. Examination of ex vivo viability of human adipose tissue slice culture. PLoS One. 2020;15(5). doi:10.1371/journal.pone.0233152.
  26. Braune J, et al. Hedgehog signalling in myeloid cells impacts on body weight, adipose tissue inflammation and glucose metabolism. Diabetologia. 2017;60(5):889-899. doi:10.1007/s00125-017-4223-5.
  27. Van Rooijen N, Van Nieuwmegen R. Elimination of phagocytic cells in the spleen after intravenous injection of liposome-encapsulated dichloromethylene diphosphonate: an enzyme-histochemical study. Cell Tissue Res. 1984;238(2):355-358. doi:10.1007/BF00217308.
  28. Sasmono RT, et al. A macrophage colony-stimulating factor receptor-green fluorescent protein transgene is expressed throughout the mononuclear phagocyte system of the mouse. Blood. 2003;101(3):1155-1163. doi:10.1182/blood-2002-02-0569.
  29. Blüher M. Adipose tissue dysfunction in obesity. Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2009;117(6):241-250. doi:10.1055/s-0029-1192044.
  30. Hotamisligil GS, Shargill NS, Spiegelman BM. Adipose expression of tumor necrosis factor-alpha: direct role in obesity-linked insulin resistance. Science. 1993;259(5091):87-91. doi:10.1126/science.7678183.
  31. Cohen M, et al. Adipose tissue explant culture using PDMS flow chambers: an alternative to static explant culture. Adipocyte. 2025;14(1):2578286. doi:10.1080/21623945.2025.2578286.
  32. Du ZY, et al. Depot-dependent effects of adipose tissue explants on co-cultured hepatocytes. PLoS One. 2011;6(6). doi:10.1371/journal.pone.0020917.
  33. Murano I, et al. Dead adipocytes, detected as crown-like structures, are prevalent in visceral fat depots of genetically obese mice. J Lipid Res. 2008;49(7):1562-1568. doi:10.1194/jlr.M800019-JLR200.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

علم المناعة والعدوىالعدد 233العدد 233قيمة فارغةعددالسمنةالبلاعمالخلايا الدهنيةتقنيات خارج الجسم الحيتقنيات زراعة الأعضاءالتفاعل الخلويقياس التدفق الخلويالسيتوكيناتتسلسل الحمض النووي الريبينقل الإشارة
نموذج فأر خارج الجسم الحي لالتهاب الأنسجة الدهنية المشابهة للنظام الغذائي عالي الدهون
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.