تشريح وعزل عقد الجذر الظهرية للفأر

ملخص

تحتوي العقد الجذرية الظهرية (DRG) على أجسام خلايا عصبية حسية أولية وتنقل إشارات حسية محيطية إلى الحبل الشوكي. يصف هذا البروتوكول طريقة لتشريح DRG للفأر تدعم العزل الموحد للعقد السليمة هيكليا، والتعرف التشريحي على المقطعات، والتوجيه الحدسي للمستخدمين المبتدئين، وتقليل إصابات الأنسجة الإجرائية.

الملخص

تعمل عقد الجذر الظهري (DRG)، التي تحتوي على أجسام خلايا الخلايا العصبية الحسية الأولية، كهياكل ترحيل حيوية لنقل الإشارات الحسية من الأنسجة الطرفية إلى الحبل الشوكي. تلعب أدوارا أساسية في دراسات الألم وإصابات الأعصاب والأمراض التنكسية العصبية. اكتساب نسيج DRG سليم أمر بالغ الأهمية للتحقيق في الخصائص الوظيفية، والتعبير الجزيئي، والتغيرات المرضية للخلايا الحسية. ومع ذلك، وبسبب صغر حجمها وموقعها العميق داخل القناة الفقرية، فإن التعرف الدقيق على DRG وعزله يشكل تحديات تقنية كبيرة. في هذه الدراسة، طورنا بروتوكولا موحدا لعزل DRG للفأر. توفر هذه الطريقة وصفا مفصلا لتحديد الموقع التشريحي ل DRG، وتعرض قناة الفقرات، والخطوات الرئيسية في عزل العقدة. يتم توضيح العملية بأكملها بصور تمثيلية وتسجيلات فيديو. يدعم هذا النهج اقتناء DRG سليم هيكليا مع توجيه تشريحي للتعرف على المقطعات، وهو مناسب للتلوين H&E وتحليل التألق المناعي. مقارنة بطرق التشريح السابقة باستخدام DRG، تتيح هذه الطريقة استعادة موحدة للعقد المحددة بشكل مقطعي، وتوفر إرشادات تشريحية بديهية للمستخدمين المبتدئين، وتقلل من إصابات الأنسجة الإجرائية.

المقدمة

العقد الجذرية الظهرية (DRG)، التي تحتوي على أجسام الخلايا العصبية الحسية الأولية، هي هياكل أساسية لنقل الإشارات الحسية الطرفية—بما في ذلك المحفزات الميكانيكية والحارية والمؤثرة للألم—إلى الحبل الشوكي ^1,2,3. على الرغم من توفر موارد عالية الجودة تصف DRG حاليا، إلا أن هناك حاجة إلى إرشادات إجرائية مفصلة لدعم التعرف الدقيق وعزل DRG من الأجزاء الصدرية إلى العجزية داخل عينة واحدة، مع تقليل خطر تلف DRG أثناء جمع الأنسجة.

تعد خلايا DRG مكونات رئيسية للمسار الحسي المحيطي. تقسم محاور عصبيها، حيث يمتد فرع إلى الأنسجة الطرفية والآخر يبرز إلى القرن الظهري للحبل الشوكي، مما يلعب أدوارا حاسمة في انتقال الألم، وإصابة الأعصاب، والاستجابات الالتهابية، وتسبب اضطرابات عصبية^{مختلفة.} بالإضافة إلى ذلك، جذب DRG اهتماما كبيرا في مجالات بحثية مثل إصلاح إصابات الأعصاب، وآليات الألم المزمن، ولدونة الخلايا العصبية الحسية، وتنظيم المناعة العصبية ^5,6. تتطلب مجموعة واسعة من الدراسات التجريبية أنسجة DRG سليمة لتطبيقات مثل التلوين الكيميائي المناعي، وتحليل تسلسل الحمض النووي الريبي، والزراعة العصبية الأولية، والدراسات الفيزيولوجية الكهربائية⁷. لذلك، فإن اكتساب نسيج DRG السليم بنيويا ومحدد بدقة الأجزاء هو أمر أساسي لدراسة الدوائر العصبية الحسية، والخصائص الجزيئية العصبية، والتغيرات المرضية.

تقع DRG بالقرب من الفتحات بين الفقرات وتتصل بالحبل الشوكي عبر الجذور الظهرية. نظرا لصغر حجمها، واحتواؤها داخل الهياكل العظمية، وتعقيد التشريح المحيط، فإن العزل السليم يشكل تحديات تقنية كبيرة. بالإضافة إلى ذلك، فإن نقص المعالم التشريحية الواضحة والإجراءات الموحدة يزيد من خطر التلف الهيكلي أو الخطأ في تحديد الأجزاء أثناء جمع الأنسجة.

مقارنة بطرق تشريح DRG الحالية للفئران، فإن الطريقة التي تم تأسيسها في هذه الدراسة لها عدة مزايا. أولا، طرق عزل DRG التي تم الإبلاغ عنها سابقا في الفئران تتطلب عادة إزالة العمود الفقري من الحيوان، تليها تقسيم وفتح منتصف العمود الفقري المعزول، وبعد ذلك يتم تشريح DRG من الفتحة بين الفقرات. خلال هذه العملية، يمكن أن يتسبب قطع العمود الفقري والقطع المتكرر في أضرار ميكانيكية لجهاز DRG بسهولة وقد يؤدي أيضا إلى حذف بعض الأجزاء أو عدم وضوح تحديد المقطع⁸. على النقيض من ذلك، يتم إجراء طريقتنا مباشرة في الموقع داخل الفأر، دون عزل أو قطع مسبق للعمود الفقري، مما يقلل من خطر فقدان DRG أثناء جمع الأنسجة. خلال الإجراء، تطبق الأدوات بشكل أساسي على الهياكل العظمية والأنسجة الضامة المحيطة ب DRG بدلا من الإمساك المباشر أو سحب العقدة نفسها، مما يحافظ على سلامتها.

ثانيا، غالبا ما تفتقر الطرق الحالية إلى معالم تشريحية واضحة ومستقرة لتحديد مقاطع DRG المختلفة. نظرا لأن الأعصاب المتصلة ب DRG غالبا ما تقطع أثناء إزالة العمود الفقري، يصبح من الصعب تحديد أصل DRG الفردي بدقة بناء على مسار العصب وأنماط التفرع. على النقيض من ذلك، يتم تنفيذ طريقتنا مباشرة في الموقع في الفأر، وبالتالي تحافظ على العلاقات التشريحية الطبيعية بين DRG والأعصاب المتصلة والهياكل المحيطة، مما يسمح بتحديد أجزاء DRG المختلفة وفقا للاتصالات العصبية والرموز التشريحية المحلية. نقترح استخدام الخصائص الشكلية للغتين L2 و L3 كنقاط مرجعية تشريحية رئيسية، إلى جانب العلاقة التشريحية بين L3–L5 والعصب الوركي، تليها تحديد متسلسل للأجزاء المجاورة في كل من الاتجاهين الأخيري والذيلي.

علاوة على ذلك، توفر هذه الطريقة وصفا منهجيا نسبيا للخطوات الرئيسية، بما في ذلك تعريض العمود الفقري والقناة الفقرية، وفتح القناة الفقرية مع التعرض اللاحق للحبل الشوكي، وتعرض DRG، وتحديد الموقع والتشريح الموجه بالميكروسكوب. سير العمل واضح والمعالم التشريحية محددة جيدا، مما قد يحسن التوحيد الإجرائي وقابلية التكرار، خاصة للمبتدئين. تحافظ DRG التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة على سلامة الأنسجة الجيدة، وبالتالي فهي مناسبة جدا للتحليلات اللاحقة، بما في ذلك التألق المناعي وتلوين H&E.

في هذه الدراسة، أنشأنا طريقة موحدة للتشريح والعزل ل DRG للفأر وقدمنا رسومات تخطيطية لتحديد المواقع التشريحي، إلى جانب صور تمثيلية وتوثيق فيديو لإجراء أخذ العينات. تدعم هذه الطريقة عزل DRG من مستوى الصدر إلى العجز في عينة واحدة مع تقليل خطر تلف DRG أثناء جمع الأنسجة.

البروتوكول

أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للبروتوكول المعتمد من لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في مستشفى شنغهاي إيست. تم إجراء إجراءات التشريح الموضحة في هذه الدراسة باستخدام فئران بالغة C57BL/6 (ذكور أو إناث، عمرها 12 أسبوعا، وزنها 25–30 جرام). يوضح الشكل 1 أدوات التشريح المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. التحضير

ملاحظة: بالنسبة للعينات المثبتة بالتروية، اعتمد تدابير الحماية المناسبة لتجنب التعرض للمثبت. قم بالتشريح باستخدام غطاء بخار أو على مقعد جيد التهوية، وارتد معدات الحماية الشخصية المناسبة طوال الإجراء، بما في ذلك القفازات والملابس الواقية ونظارات السلامة.

1. حافظ على الفئران تحت دورة ضوء 12 ساعة و12 ساعة مظلمة عند درجة حرارة محيطة تقارب 24 درجة مئوية ورطوبة نسبية 55٪، مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء بشكل مرضي .
2. قبل بدء التشريح، قم بقتل الفأر في غرفة ثاني أكسيد الكربون حتى يتوقف التنفس تماما. تأكيد الوفاة، ثم ضع الحيوان في وضعية الاستلقاء على لوح التشريح وثبت الأطراف بدبابيس للحفاظ على وضعية مستقرة.
3. رش الفراء فوق منطقة الصدر البطني بنسبة 70٪ إيثانول لتقليل تلوث الشعر والحفاظ على مجال عمل نظيف.
4. استخدم المقص لفتح الجلد على طول منتصف الصدر والبطن. قم بتمديد الشق من الناحية الجمجمية على طول الخط الأوسط البطني لكشف القفص الصدري بالكامل. ارفع الطرف السفلي من عظمة القص واقطع الجدار الصدري على جانبي القوس الشمالي لفتح التجويف الصدري وكشف القلب. قم بإزالة جزء من عظمة القص والأضلاع إذا لزم الأمر للحصول على رؤية واضحة للقلب.
5. قم بعمل شق صغير في الأذين الأيمن بالمقص لإيجاد مخرج للدم والبيرفوسايت. املأ حقنة بسعة 20 مل بمتلازمة PBS مبردة مسبقا (4 درجات مئوية)، وأدخل الإبرة ببطء في البطين الأيسر بالقرب من قمة القلب. ثبت الإبرة وتجنب اختراق جدار البطين.
6. PBS المبرد مسبقا ببطء وبشكل متساو حتى يصبح الكبد شاحبا، ويخرج التدفق نظيفا ويتم غسل معظم الدم. ثم استبدل PBS ب 20 مل من بارافورمالديهايد مبرد مسبقا بنسبة 4٪ (4 درجات مئوية) واستمر في التفريغ بمعدل بطيء وثابت حتى تصبح الأطراف صلبة، وينحني الذيل، وتتغير الأنسجة من الأحمر إلى الشاحب، مما يشير إلى أن التثبيت قد اكتمل إلى حد كبير.
7. بعد التروية، اسحب الإبرة، وأخرج أي سائل متبقي من تجويف الصدر، ثم انتقل فورا إلى جمع الأنسجة. إذا كان هناك حاجة لتركيب نسيج غير مثبت للتحليلات اللاحقة، استخدم التغذية فقط مع PBS المبرد مسبقا وتجنب خطوة تثبيت البارافورمالديهايد بنسبة 4٪.
   ملاحظة: حافظ على معدل تروية بطيء وثابت ومتساو طوال العملية لتجنب تمزق القلب أو تورم الأنسجة الناتج عن الضغط الزائد. قم بتنفيذ جميع الإجراءات السابقة في درجة حرارة الغرفة.

2. DRG والأعصاب المجاورة (الشكل 2)

1. تعرض العمود الفقري والقناة الفقرية (3–5 دقائق)
   1. ضع الفأر في وضعية الاستلقاء وثبته على لوح التشريح. قم بعمل شق طولي على طول منتصف الجلد الظهري باستخدام المقص، لتمديد الشق من الذيل نحو الرقبة.
   2. استخدم المقص لفصل الجلد الظهري عن النسيج الضام الأساسي، وعكس الجلد جانبيا على كلا الجانبين لكشف العضلات الظهرية بالكامل. امسح الشعر المرتبط بسطح النسيج الضام بورق ماص، أو اشطف منطقة الجراحة بالمحلول الملحي للحفاظ على نظافة منطقة العمليات.
   3. قم بشق العضلات الظهرية والأنسجة الضامة طوليا على جانبي العمود الفقري لكشف الهياكل الفقرية بالكامل.
      ملاحظة: منع المقص من الاختراق بعمق شديد في تجويف الصدر أو البطن أثناء شق الأنسجة الظهرية، لأن ذلك قد يؤثر على إجراءات التشريح اللاحقة.
   4. نظف بعناية النسيج الضام والعضلة المتبقية التي تغطي العمود الفقري باستخدام جهاز الرونجر العظمي. إذا تداخل النسيج المتبقي مع التصور، قم بقصه بالمقص حسب الحاجة لتحقيق التعرض الكامل للعمود الفقري. بعد ذلك، اقطع الفقرات العنقية من الجانب الظهري بالمقص لفصل نهاية الجمجمة الشوكية عن الرأس وتسهيل الخطوات التالية.
2. افتح القناة الفقرية واكشف الحبل الشوكي (الشكل 3؛ 8–10 دقائق).
   1. أدخل مقصا منحنيا دقيقا في القناة الفقرية على مستوى عنق الرحم، واقطع على جانبي الصفائح لفتح القناة.
      ملاحظة: حرص على تجنب إصابة الحبل الشوكي أثناء الإجراء.
   2. إزالة الصفيحة الظهرية لكشف الجانب الظهري من الحبل الشوكي تدريجيا.
   3. استمر في قطع الصفيحة الظهرية على طول المحور الطولي للعمود الفقري باستخدام مقص منحني دقيق، ممتدة تدريجيا من الصدر إلى منطقة العجز لكشف الجانب الظهري للحبل الشوكي بالكامل.
3. تعريض DRG (الشكل 4؛ 8–10 دقائق)
   1. بعد كشف السطح الظهري للحبل الشوكي بالكامل، استخدم جهاز الرونجر العظمي لفتح بلطف هياكل القناة الفقرية جانبيا من كلا الجانبين، وتبادل التلاعب بين الجانبين الأيسر والأيمن.
   2. بمجرد أن يتم فصل القناة الفقرية بالكامل من كلا الجانبين، لاحظ DRG الموجود داخل الثقبة بين الفقرات تحت ميكروسكوب تدريجي.
4. تحديد DRG (الشكل 5؛ 8–10 دقائق)
   1. بمجرد أن تنعكس القناة الفقرية بالكامل من الجانبين ويتم كشف الحبل الشوكي بالكامل، افحص حزم الأعصاب الجذرية الظهرية الناتجة عن السطح الظهري للحبل الشوكي تحت المجهر المجسم. اتبع الجذور الظهرية جانبيا وحدد DRG بالقرب من الثقبة بين الفقرات كهياكل بيضاوية أو بيضاوية الشكل.
   2. تأكد أثناء التعرف على أن DRG يقع عند الواجهة بين الجذر الظهري للعصب الشوكي والثقبة بين الفقرات، ولاحظ أنه مرتبة كزوج ثنائي عند كل جزء من العمود الفقري. حدد DRG كعقدة تتكون من أجسام خلايا الخلايا العصبية الحسية، حيث يدخل أحد الجانبين القرن الظهري للحبل الشوكي والجانب الآخر يمتد إلى الأنسجة الطرفية.
   3. استخدم المجهر المجسم لتحديد DRG كهيكل أصفر باهت أو رمادي-أبيض، متورم قليلا مع شكل أكثر اكتمالا وحدود مميزة نسبيا.
5. إجراء تحديد وتشريح مقطعي لمجموعة DRG (الشكل 6؛ 8–10 دقائق)
   1. استخدم الملقط الجراحي المجهري تحت المجهر المجسم لرفع حزمة العصب الجذري الظهري بلطف وبالتالي تحقيق التعرض الكامل للعصب الجذري المرفق.
   2. استخدم الميزات التالية لتحديد الهوية القطاعية ل DRG: عين DRG المتصلة بألياف عصبية متفرعة متعددة (>فرعين) كDRG للغة الثانية وأكثر من DRG القمجمية، وحدد DRG المتصلة بألياف عصبية متفرعة (فرعين فقط) كDRG ذيلية L3 وأكثر. بعد ذلك، حدد مقاطع DRG المتبقية بشكل متسلسل فوق وأسفل وفقا لمواقع الثقوب بين الفقرات.
      ملاحظة: تندمج الألياف العصبية الناتجة عن DRG في L3–L5 لتشكيل العصب الوركي.
   3. استخدم المقص الجراحي المنحني أو الملقط الجراحي المجهري لفصل الأنسجة الضامة والألياف العصبية المحيطة ب DRG بعناية، وتحرير العقدة تدريجيا من ارتباطاتها بالأنسجة حول الثقوب بين الفقرات.
   4. اقطع ألياف العصب الجذري الظهري التي تربط DRG بالحبل الشوكي، وفي الوقت نفسه اقطع حزمة الأعصاب الممتدة نحو الأطراف لعزل العقدة.
   5. عزل DRG بعناية باستخدام ملقط جراحي دقيق. إذا كان هناك حاجة إلى حفظ طويل الأمد وتحليل الفلورة المناعية لاحقا، ضع DRG المعزول فورا في أنبوب طرد مركزي بسعة 0.5 مل يحتوي على 4٪ بارافورمالديهيد وثبت النسيج لمدة 3 ساعات. بعد التثبيت، اغسل النسيج لمدة 3 × 5 دقائق بكمية 0.1 M PBS (المكونات الرئيسية: NaCl، KCl، Na2HPO4، وKH2PO4)، وانقل النسيج إلى محلول السكروز بنسبة 30٪ للجفاف حتى يغوص في القاع. وأخيرا، قم بإدخال النسيج في OCT وخزنها عند −80 درجة مئوية للحفاظ على المدى الطويل.

3. تأكيد مكونات العقدة.

1. نتائج تلوين H&E (الشكل 7)
   1. ثبت DRG المعزول فورا في مثبت نسيجي تقليدي، مثل 4٪ بارافورمالديهيد. بعد التثبيت، يتم شطف النسيج في حاجز فوسفات بعمق 0.1 متر، وإجراء الجفاف، والتطهير، ودمج البارافين وفقا للإجراءات النسيجية القياسية، وتحضير مقاطع نسيج بطول 4–6 ميكرومتر لتحليل التلوين في المراحل اللاحقة.
   2. إجراء صبغ بالهيماتوكسيلين والإيوسين (H&E) على المقاطع لتقييم البنية العامة وشكل الخلية لل DRG. استخدم المقاطع المصبوغة لتحديد المكونات الخلوية وتنظيم الأنسجة للعقدة ولتحديد جودة ال DRG المحصود.
   3. افحص الأقسام الملونة ب H&E تحت المجهر، وتأكد من أن DRG يتكون بشكل رئيسي من العديد من أجسام الخلايا العصبية الحسية. حدد الخلايا العصبية ذات السوماتا الكبيرة والدائرية إلى البيضاوية الشكل، وملاحظة نوى نواتها المرئية بوضوح بالإضافة إلى النوى البارزة الموجودة في بعض الخلايا العصبية. كما أكد وجود خلايا دبقية قمرية متعارضة حول الخلايا العصبية في ترتيب حلقي مميز.
   4. فحص داخل العقدة وتحديد حزم ألياف الأعصاب وحاجز الأنسجة الضامة للتأكد من أن البنية النسيجية العامة سليمة ومنظمة بوضوح. تحقق من أن الحدود الخلوية محددة جيدا وأنه لا يوجد اضطراب واضح في الأنسجة أو خلل هيكلي.
   5. تأكيد العزل الناجح لإزالة DRG على صبغة H&E من خلال وجود بنية عامة محفوظة، وشكل خلوي محدد جيدا، وعدم وجود إصابة ميكانيكية واضحة. اكتشاف تلف العينة من خلال ملاحظة اضطراب البنية الخلوية، أو هوامش الأنسجة غير الواضحة، أو تدمير الأنسجة الموضعي أثناء التشريح أو المعالجة. استخدم هذه النتائج من H&E كأساس عملي لتقييم جودة جمع DRG وسلامة الأنسجة.
2. نتائج تلوين التوهج المناعي TUBB3 (الشكل 8)
   1. ثبت DRG المعزول فورا في بارافورمالديهيد بنسبة 4٪ لمدة 3 ساعات. بعد اكتمال التثبيت، اشطف النسيج ثلاث مرات بمقدار 0.1 مليون زبدة زبدة زبدة (PBS)، مع السماح ب 5 دقائق لكل غسل. بعد ذلك، ضع النسيج في محلول السكروز بنسبة 30٪ حتى يستقر في القاع، ثم غمسه في OCT، وقطع الأجزاء المجمدة بعمق 8–12 ميكرومتر لصبغ الفلورة المناعية في الأسفل البعدي.
   2. سخن الأقسام إلى درجة حرارة الغرفة، اشطفها لمدة 3 × 5 دقائق في PBS، وقم بسحب المستضدات باستخدام محلول استرجاع المستضدات Tris-EDTA. دع الأقسام تبرد طبيعيا إلى درجة حرارة الغرفة، ثم اغسلها مرة أخرى 3 × 5 دقائق باستخدام PBS، ثم اترك القطع ب 5٪ BSA لمدة 30–60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد خطوة الحجب، قم بتطبيق الجسم المضاد الأساسي الموسوم بالفلوروفور TUBB3 وحضن الأقسام طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. في اليوم التالي، اغسل المقاطع ثلاث مرات باستخدام PBS، وصبغ النوى ب DAPI، وركب الأقسام، والتقط الصور باستخدام مجهر فلوري.
   3. افحص أقسام DRG وتحقق من أن العينات المحفوظة جيدا تظهر خطوط عقدة مميزة، وبنية نسيج سليمة، وترتيب خلوي منظم. راقب التألق المناعي لتقنية TUBB3 بشكل رئيسي في أجسام الخلايا العصبية الحسية والألياف العصبية لتحديد التوزيع العصبي الكلي داخل العقدة. استخدم التلوين المضاد ل DAPI لتحديد الخلايا الأكبر إيجابية ل TUBB3 كخلايا عصبية حسية، ولاحظ أن النوى الصغيرة الموجبة ل DAPI المنتشرة حول هذه الخلايا تظهر نمطا شكليا متوافقا مع نوى الخلايا الدبقية الأقمائية. تحديد الضرر المرتبط بالتشريح أو المعالجة بسبب اضطراب استمرارية الأنسجة، أو تحديد موقع إشارة TUBB3 غير المنتظم، أو عدم تحديد شكل الخلايا العصبية، أو زيادة بؤرية في الإشارة الخلفية.
   4. استخدم صبغة TUBB3 المناعية الفلورية كمؤشر تكميلي لسلامة أنسجة DRG. التعرف على العزل الناجح ل DRG من خلال وجود مخطط عقدة محفوظة، وإشارات فلورية مميزة في أجسام الخلايا العصبية الحسية والألياف العصبية، ووضوح شكل الخلية، وتقليل التلوين الخلفي.

النتائج

يتطلب العزل الناجح ل DRG الحفاظ على سلامة العقدة، دون ضغط أو سحق أو تمزق واضح. ارفع الألياف العصبية المتصلة جانبيا برفق، وأطلق العقدة تدريجيا من الأنسجة المحيطة، واقطع الألياف العصبية المتصلة فقط بعد تحريك العقدة بالكامل، بحيث يمكن إزالتها سليمة. تجنب السحب المباشر على جسم العقدة باستخدام الأدوات أثناء الإجراء. بعد العزل، حافظ على الشكل الطبيعي ل DRG داخل الثقبة بين الفقرات قدر الإمكان. بعد إزالة الأنسجة المحيطة الملتصقة، يجب أن تبدو العقدة المعزولة مسطحة، بيضاوية وشبه شفافة. يمكن اعتبار...

المناقشة

يلعب DRG، باعتباره مكونات رئيسية للجهاز العصبي الحسي الطرفي، دورا حاسما في نقل المعلومات الحسية الميكانيكية والحرارية وحساسية الألم إلى الجهاز العصبي المركزي ^9,10,11. تظهر خلايا DRG شكلا زائفا أحادي القطب مميزا، حيث تمتد إحدى العمليات إلى الأنسجة الطرفية والأخرى تمتد إلى القرن الظهري للحبل الشوكي، مما يلعب أدوارا حاسمة في نقل الإشارات الحسية، وإصلاح إصابات الأعصاب، والألم...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أنبوب طرد مركزي سعة 0.5 مل	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتخزين DRG الثابت
محقنة سعة 20 مل	غير محدد	غير محدد	يستخدم لعمليات التروية القلبية
محلول سكروز 30٪	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتجفيف الأنسجة قبل تضميتها في OCT
فورمالدهايد 4٪	Servicebio	G1101
BSA 5٪	Solarbio	SW3015
كحول إيثيل 70٪	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتقليل تلوث الشعر قبل التشريح
ورق ماص	غير محدد	غير محدد	يستخدم لإزالة الشعر من الأنسجة الضامة
فئران C57BL/6 البالغة	Vital River	غير محدد	ذكر أو أنثى؛ عمر 12 أسبوعًا؛ وزن 25 - 30 جم
Alexa Fluor 488 المرتبط بالأجسام المضادة للماعز ضد IgG الأرنبي	Servicebio	GB25303
الجسم المضاد لـ TUBB3	Proteintech	CL488-66375	يستخدم في المناعة المجسمة لـ TUBB3
غرفة ثاني أكسيد الكربون	غير محدد	غير محدد	يستخدم للتخدير
DAPI	Servicebio	G1012
لوح التشريح	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتثبيت الفأر أثناء التشريح
مجهر فلوري	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتصوير الأقسام المصبوغة بالمناعة المجسمة
ملقط عظام Friedman-Pearson	RWD	S21022-14	مستخرج من المخطوطة: ملقط عظام (RWD, S21022-14)
مجموعة مواد تلوين H&E	Servicebio	G1005
مقص منحني جراحي	ASSI	SDCT16R8	مستخرج من المخطوطة: مقص منحني جراحي (ASSI, SDCT16R8)
ملقط جراحي	Fine Science Tools	11254-20	مستخرج من المخطوطة: ملقط جراحي (FST, 11254-20)
مركب OCT	Sakura Finetek	No. 4583
PBS	Servicebio	G2156
دبابيس	غير محدد	غير محدد	يستخدم لتثبيت الأطراف على لوح التشريح
محلول ملحي	غير محدد	غير محدد	يستخدم لشطف ساحة العمليات
مقص	Fine Science Tools	14060-09	مستخرج من المخطوطة: مقص (FST, 14060-09)
مجهر ستريو	Leica Microsystems, Wetzlar, Germany	10447197	مستخرج من المخطوطة: مجهر ستريو (Leica, 10447197)
محلول استرجاع مستضد Tris-EDTA	Solarbio	C1038