مقالة منهجية

استئصال الصفيحة الفقرية القطنية الخامسة (L5) في فئران C57BL/6J المسنة لنمذجة الخلل المعرفي التالي للجراحة

48 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/71733

⸱

سبتمبر 22, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacology, Zhejiang University School of Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول عملية استئصال صفيحة فقارية معيارية من الفقرة القطنية الخامسة (L5) في فئران C57BL/6J المسنة، وذلك لإنشاء نموذج للخلل المعرفي التالي للجراحة مع تقليل ضعف الحركة إلى أدنى حد، مما يدعم الدراسات السلوكية والنسيجية والميكانيكية للاضطرابات المعرفية العصبية المحيطة بالجراحة.

الملخص

يعد الخلل المعرفي بعد الجراحة (POCD) مضاعفة عصبية شائعة تلي العمليات الجراحية والتخدير، لا سيما لدى كبار السن، ويرتبط بتأخر التعافي، وطول فترة الإقامة في المستشفى، وانخفاض جودة الحياة. وترتبط الإجراءات الجراحية للعظام والعمود الفقري بمخاطر مرتفعة نسبياً للإصابة بالخلل المعرفي بعد الجراحة؛ ومع ذلك، لا تزال النماذج قبل السريرية التي تعكس بدقة الخصائص المحيطة بالجراحة في عمليات العمود الفقري محدودة. وقد تؤدي النماذج الشائعة الاستخدام، بما في ذلك فتح البطن وكسر القصبة، إلى ضعف حركي مستمر والتهاب محيطي ممتد، مما قد يؤدي إلى تضليل تفسير النتائج السلوكية المعرفية. يصف هذا البروتوكول هنا بروتوكولاً معيارياً ومنخفض التكلفة لنمذجة الخلل المعرفي بعد الجراحة باستخدام عملية استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5 تحت تخدير sevoflurane في ذكور فئران C57BL/6J بعمر 18 شهراً. يتم تنفيذ الإجراء باستخدام أدوات جراحية روتينية ويحدث إصابة جراحية محكومة مع تقليل العجز الحركي المستمر. يتم تقييم الوظيفة المعرفية باستخدام اختبار التعرف على الأشياء الجديدة، ومتاهة Y ذات الذراع الجديد، ومتاهة Barnes، بينما يتم تقييم الإصابة العصبية في الحصين والتغيرات الالتهابية العصبية عن طريق صبغ Nissl والفلورة المناعية لـ Iba1 على التوالي. وتظهر النتائج النموذجية الحفاظ على النشاط الحركي، وضعف الأداء المعرفي، وانخفاض سلامة الخلايا العصبية في الحصين، وزيادة الالتهاب العصبي في الحصين بعد الجراحة. يوفر هذا النموذج المعياري والمتاح منصة ذات صلة سريرياً لاستقصاء الآليات الكامنة وراء الخلل المعرفي المرتبط بجراحة العمود الفقري ولتقييم التدخلات المرشحة للحماية العصبية في الفترة المحيطة بالجراحة.

المقدمة

يُعرَّف الخلل المعرفي بعد الجراحة (POCD) بأنه تدهور في التعلم والذاكرة، والانتباه، وسرعة المعالجة، والوظائف التنفيذية بعد التخدير والجراحة1، وهو يؤثر بشكل أساسي على المرضى المسنين، ويبدو أن معدل حدوثه المبلغ عنه يختلف باختلاف السياق الجراحي ومجتمع المرضى2,3. وقد أُفيد بحدوث POCD بشكل متكرر بين كبار السن الذين يخضعون لجراحات العظام الاختيارية4. ومن الناحية السريرية، قد يستمر POCD لأسابيع أو أشهر بعد الجراحة، وقد ارتبط بطول فترة الإقامة في المستشفى وزيادة معدلات الوفيات5,6,7. ومع استمرار شيخوخة السكان وارتفاع حجم العمليات الجراحية في جميع أنحاء العالم، أصبح POCD قضية مهمة من قضايا الصحة العامة والرعاية المحيطة بالجراحة.

من الناحية الفسيولوجية المرضية، يُعتبر الخرف بعد الجراحة (POCD) متلازمة متعددة العوامل تحفزها الصدمات الجراحية والتعرض للتخدير، حيث يُعد الالتهاب العصبي، والإجهاد التأكسدي، واختلال تنظيم الالتهام الذاتي، والخلل الوظيفي التشابكي من بين الآليات المقترحة التي تؤدي إلى خلل في وظائف الخلايا العصبية في المناطق ذات الصلة بالإدراك مثل الحصين8. ولتحليل هذه الآليات وتقييم التدخلات المرشحة، تم تطوير مجموعة من النماذج قبل السريرية لمرض POCD. وتشمل النماذج قبل السريرية نماذج التخدير فقط، والنماذج القائمة على جراحة البطن، ونماذج الإصابات التقويمية مثل كسر الظنبوب9. وبالرغم من أن هذه النماذج قد ساهمت في تطوير هذا المجال، إلا أنها قد لا تحاكي بشكل كامل السمات المحيطة بالجراحة ذات الصلة بجراحة العمود الفقري، وقد يؤدي بعضها إلى ظهور عوامل مربكة مثل العجز الحركي المستمر والالتهاب النسيجي المطول، مما يعقد قراءات الإدراك والتفسير الميكانيكي.

من بين الاستراتيجيات الجراحية المتاحة، اخترنا نموذج استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5 لاستقصاء القصور المعرفي المبكر بعد الجراحة في سياق جراحي معياري ومرتبط بالعمود الفقري. يوفر هذا الإجراء إصابة جراحية موضعية محكومة تحت التخدير الاستنشاقي، مما يسمح بدراسة الاستجابات الالتهابية العصبية والخلل المعرفي بعد الجراحة دون التسبب في ضعف حركي ظاهر. ومع تحسين الخطوات الجراحية الرئيسية، يوفر هذا البروتوكول طريقة معيارية وعملية وفعالة من حيث التكلفة لاستقصاء القصور المعرفي المرتبط بجراحة العمود الفقري وتقييم استراتيجيات الحماية العصبية في الفترة المحيطة بالجراحة.

البروتوكول

أُجريت جميع التجارب الحيوانية وفقاً لدليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر، وبموافقة لجنة رعاية واستخدام الحيوانات بجامعة Zhejiang (رقم الموافقة الأخلاقية: ZJU20260153).

1. التحضير قبل الجراحة

  1. الحيوانات التجريبية، وتوزيع المجموعات، وتسكين الآلام، والتعمية
    1. استخدم فئران C57BL/6J ذكور بعمر 18 شهراً وتزن 30–34 g. يتم إيواء الفئران في دورة ضوئية/مظلمة مدتها 12 h مع إتاحة الوصول الحر إلى الطعام والماء.
    2. اترك الفئران تتكيف مع ظروف الإيواء لمدة 7 أيام على الأقل قبل الجراحة. وزع الفئران عشوائياً على مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5 (L5 laminectomy) أو المجموعة الضابطة بعد فترة التكيف.
    3. خصص لكل فأر رقم تعريف مشفر قبل البدء في الإجراءات التجريبية. احتفظ برمز توزيع المجموعات لضمان إجراء التقييمات السلوكية بطريقة التعمية فيما يتعلق بالعلاج.
    4. أخضع الفئران في مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5 للتخدير باستخدام sevoflurane يليه استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5. لا تعرّض الفئران في المجموعة الضابطة للتخدير بـ sevoflurane، أو تحضير موقع الجراحة، أو أي تدخل جراحي.
    5. أعطِ meloxicam عن طريق الحقن تحت الجلد بجرعة 2 mg/kg للفئران في كلتا المجموعتين. يتم إعطاء الجرعة الأولى بعد تحريض التخدير في مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5، وفي الوقت المقابل لنهاية الجراحة في المجموعة الضابطة.
    6. أعطِ جرعات لاحقة من meloxicam تحت الجلد بجرعة 2 mg/kg كل 24 h لمدة 48 h للفئران في كلتا المجموعتين. يتم إيواء المجموعتين والتعامل معهما ومراقبتهما تحت الظروف نفسها طوال الفترة التجريبية.
    7. أجرِ جميع التقييمات السلوكية وفقاً لنفس الجدول التجريبي لكلتا المجموعتين. تأكد من بقاء الباحث الذي يجري التقييمات السلوكية مُعمّى عن توزيع المجموعات.
  2. عقّم جميع الأدوات الجراحية وطهّر مساحة العمل الجراحية. قم بتسخين وسادة تدفئة مسبقاً للحفاظ على درجة حرارة الجسم أثناء التخدير. جهّز meloxicam للإعطاء خلال الفترة المحيطة بالجراحة.
  3. قم بتشغيل جهاز التخدير الغازي وضع الفأر في غرفة التحريض. حثّ التخدير العام باستخدام 3–5% sevoflurane لمدة 3–5 min مع الحفاظ على معدل تدفق أكسجين قدره 1 L/min.
  4. انقل الفأر المخدر إلى منصة الجراحة. حافظ على التخدير باستخدام 1.5–3% sevoflurane يتم إيصاله عبر قناع تخدير بمعدل تدفق أكسجين 0.5–0.8 L/min. أعطِ meloxicam تحت الجلد بجرعة 2 mg/kg. تبلغ المدة الإجمالية للتخدير، مقاسة من بداية تحريض sevoflurane، حوالي 4 h. اضبط تركيز sevoflurane حسب الحاجة للحفاظ على مستوى تخدير جراحي مستقر.
  5. ضع الفأر في وضعية الانكباب مع توجيه العمود الفقري القطني للأعلى. ثبت الأطراف الأمامية بلطف باستخدام شريط لاصق لتثبيت الحيوان وتوفير وصول غير عائق إلى المجال الجراحي L5.
  6. تأكد من وصول التخدير إلى العمق المناسب من خلال التحقق من غياب منعكس سحب الطرف. ضع مرهم العين لمنع جفاف القرنية.
  7. أزل الشعر من المنطقة القطنية الوسطى (تقريباً L3–S1) باستخدام آلة تشذيب للحيوانات الصغيرة. طهّر الجلد المكشوف باستخدام 75% ethanol، ثم povidone-iodine، مع تكرار الإجراء 2–3 مرات لضمان الظروف المعقمة.

2. جراحة استئصال الصفيحة الفقرية للفقرة القطنية الخامسة L5

ملاحظة: في البروتوكول الحالي، تم تنفيذ جميع الخطوات الجراحية تحت الرؤية المباشرة دون استخدام مجهر ستيريو أو عدسات مكبرة.

  1. ضع الفأر المخدر في وضعية الانكفاء على منصة جراحية مسخنة مسبقاً. قم بتثبيت الأطراف الأمامية باستخدام شريط لاصق لتثبيت الجسم وكشف المنطقة القطنية بالكامل (الشكل 1).
  2. حدد مستوى الفقرة L5 باستخدام المعالم السطحية. قم بجس العرفين الحرقفيين على الجانبين وارسم خطاً عرضياً وهمياً يربط بين أعلى نقطتين فيهما.
  3. استخدم الخط العرضي كعلامة تقريبية للمسافة بين الفقرتين L5 وL6. اجعل مركز الشق الجلدي المخطط له أمام هذا الخط قليلاً لاستهداف صفيحة L5.
  4. قم بتطهير الموقع الجراحي. أجرِ شقاً جلدياً طولياً في خط المنتصف بطول 1.5–2.0 cm تقريباً فوق مستوى L5 المحدد مسبقاً لكشف المنطقة L4–L6.
  5. أبعد حواف الجلد باستخدام ملاقط معقمة. اكشف اللفافة الظهرية وحدد خط التماس اللفافي في المنتصف.
  6. تأكد من المستوى الفقري بعد كشف العمود الفقري. حدد الوصل القطني العجزي والفقرة القطنية الأكثر ذيلاً.
  7. حدد L5 على أنها الفقرة التي تسبق L6 مباشرة، لأن فئران C57BL/6 تمتلك عادةً ست فقرات قطنية. تأكد من المستوى بعد عد فقرتين باتجاه الرأس من الوصل القطني العجزي.
  8. اصنع فتحة صغيرة على طول خط التماس اللفافي في المنتصف. أبعد العضلات المجاورة للعمود الفقري على الجانبين تحت الرؤية المباشرة.
  9. افصل العضلات المجاورة للنتوء الشوكي L5 لكشف الصفيحة الكامنة أسفلها. وسع نطاق الكشف باتجاه الرأس وصولاً إلى النتوء الشوكي L4 وباتجاه الذيل وصولاً إلى النتوء الشوكي L6 حتى تصبح النتوءات الشوكية الثلاثة مرئية بوضوح.
  10. أجرِ تشريحاً غير حاد بشكل أساسي بمحاذاة العظم باستخدام مسحات قطنية أو ملاقط دقيقة. استخدم التشريح الحاد فقط عند الضرورة لتحرير الالتصاقات اللفافية وتقليل النزيف.
  11. حافظ على الإبعاد الجانبي باستخدام مسحات قطنية لكشف صفيحة L5 والمسافة بين الصفيحتين L5–L6 بالكامل. أعِد التأكد من المستوى الفقري قبل المتابعة.
  12. أمسك النتوء الشوكي L5 بلطف باستخدام الملاقط وارفع النتوء الشوكي والعمود الفقري القطني المجاور بزاوية 30° تقريباً بالنسبة للمنصة الجراحية لتوسيع المسافة بين صفيحتي L5–L6.
  13. أدخل أطراف مقصات العيون المغلقة في المسافة بين صفيحتي L5–L6 تحت الرؤية المباشرة. حرك المقصات على طول مستوى ضحل مباشرة أسفل الحافة الذيلية لصفيحة L5.
  14. افتح المقصات قليلاً لعمل الفتحة العظمية الأولية. وسع نافذة استئصال الصفيحة عن طريق إزالة قطع عظمية صغيرة بالتتابع على طول حواف الصفيحة. اقتصر في إزالة العظم على صفيحة L5 الظهرية وتجنب توسيع النافذة العظمية جانبياً وصولاً إلى المفاصل الوجيهية على الجانبين.
  15. تجنب عمق الإدخال المفرط وقوة القطع الزائدة لمنع إصابة الأم الجافية.
  16. استمر في إزالة الصفيحة بطريقة تدريجية حتى تصبح الأم الجافية مرئية بوضوح من خلال النافذة العظمية.
  17. افحص المجال الجراحي بعناية. تأكد من عدم وجود نزيف نشط وتحقق من بقاء الأم الجافية سليمة.
  18. اغسل الموقع الجراحي بمحلول ملحي معقم دافئ. حقق الإرقاء باستخدام ضغط لطيف.
  19. أغلق الجرح على شكل طبقات. أغلق الجلد باستخدام خيوط نايلون 6-0 وقم بتطهير موقع الشق.
  20. بعد إغلاق الجرح، استمر في تخدير السيفوفلوران حتى تصل المدة الإجمالية للتخدير إلى 4 h تقريباً. بعد ذلك، أوقف إعطاء السيفوفلوران وانتقل إلى الرعاية ما بعد الجراحة.

3. الرعاية بعد العملية الجراحية

  1. عند النقطة الزمنية المقابلة لنهاية الجراحة في مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية، يتم إعطاء meloxicam عن طريق الحقن تحت الجلد بجرعة 2 mg/kg للفئران في مجموعة الضبط. توضع كل فأرة من مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية على وسادة تدفئة يتم التحكم في درجة حرارتها، ويتم الحفاظ على درجة حرارة الجسم حتى تستعيد الفأرة وعيها وتظهر تنفساً تلقائياً مستقراً ونشاطاً حركياً.
  2. تُعاد كل فأرة من مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية إلى قفصها الخاص بعد التعافي التام من التخدير. بعد ذلك، يتم مراقبة الحيوان حتى لوحظت القدرة الطبيعية على المشي. تُعطى جرعات لاحقة من meloxicam عن طريق الحقن تحت الجلد بجرعة 2 mg/kg كل 24 h لمدة 48 h للفئران في كلتا المجموعتين.
  3. يتم فحص الشق الجراحي وسلامة الغرز يومياً حتى اليوم الثالث بعد الجراحة. يُعاد تخدير الفأرة واستبدال أي غرز مرتخية أو مقطوعة إذا لزم الأمر.
  4. يُفحص الشق يومياً للتأكد من عدم وجود تورم، أو نزيف، أو إفرازات، أو علامات التهاب موضعي.
  5. يتم مراقبة وزن الجسم، وسلوك التنظيف، والنشاط التلقائي، وتناول الطعام والماء طوال فترة ما بعد الجراحة.
  6. يتم القتل الرحيم لأي فأرة بطريقة إنسانية قبل الموعد المحدد لنهاية التجربة إذا استوفت أي من معايير النهاية الإنسانية المحددة مسبقاً التالية: فقدان ≥20% من وزن الجسم قبل الجراحة؛ أو فقدان الشهية التام لمدة 24 h أو تناول طعام أقل من 50% من الكمية الطبيعية لمدة 3 أيام متتالية؛ أو عدم القدرة أو الإحجام الشديد عن الوقوف أو الوصول إلى الطعام أو الماء لمدة تستمر 24 h بعد التعافي من التخدير؛ أو حالة احتضار تتميز بخمول شديد مصحوب بدرجة حرارة جسم أقل من 37 °C.

4. التقييم السلوكي لضعف الإدراك بعد الجراحة (POCD)

  1. اختبار الحقل المفتوح (التحكم الحركي؛ اليوم الثالث بعد الجراحة)
    1. أجرِ اختبار الحقل المفتوح في ساحة بمقاس 45 cm × 45 cm ذات جدران بارتفاع 40 cm تحت مستوى إضاءة يبلغ 20 lux. ضع الكاميرا المرئية مباشرة فوق مركز الساحة بحيث تكون منطقة الاختبار بأكملها ضمن مجال الرؤية.
    2. ضع الفأر في مركز الساحة وابدأ التتبع المرئي فور وضعه. اترك الفأر يستكشف بحرية لمدة 5 min. قم بتحليل جلسة الـ 5 min كاملة واحسب إجمالي المسافة المقطوعة ومتوسط سرعة الحركة باستخدام نظام التتبع المرئي.
  2. تحليل المشية
    1. أجرِ تحليل المشية في اليوم الثالث بعد الجراحة باستخدام نظام آلي لتحليل المشية.
    2. ضع كل فأر عند أحد طرفي ممر المشي واسمح له بعبور الممر بحرية. سجل بصمات المخالب أثناء الحركة باستخدام الكاميرا عالية السرعة المدمجة في نظام تحليل المشية.
    3. سجل تجارب المشية لكل فأر واجمع ثلاث جولات صالحة تتضمن حركة أمامية مستمرة عبر الممر للتحليل اللاحق.
    4. حلل بيانات بصمات المخالب المسجلة باستخدام برنامج تحليل المشية. راجع بصمات المخالب التي تم تحديدها آلياً وصحح يدوياً تصنيف المخالب الأمامية اليمنى، والأمامية اليسرى، والخلفية اليمنى، والخلفية اليسرى عند الضرورة قبل استخراج معايير المشية.
    5. قم بقياس طول الخطوة، ووقت الوقوف، وسرعة التأرجح، ومساحة البصمة، واحسب القيمة المتوسطة من الجولات الثلاث الصالحة لكل فأر لإجراء التحليل الإحصائي.
  3. متاهة بارنز (التعلم والذاكرة المكانية؛ الأيام 4-6 بعد الجراحة)
    ​ملاحظة: أجرِ اختبار متاهة بارنز مرة واحدة يومياً لمدة ثلاثة أيام متتالية بدءاً من اليوم الرابع بعد الجراحة. أجرِ الاختبار خلال نفس النافذة الزمنية اليومية لتقليل التباين اليوماوي.
    1. ضع صندوق الهروب أسفل الثقب المستهدف المحدد. حافظ على نفس موقع الهدف طوال التجربة.
    2. ضع الفأر في مركز المتاهة لبدء كل تجربة. اسمح للفأر بالبحث عن صندوق الهروب لمدة تصل إلى 3 min. أنهِ التجربة عندما يدخل الفأر إلى صندوق الهروب.
    3. وجِّه الفأر بلطف إلى الثقب المستهدف إذا فشل في تحديد موقع صندوق الهروب خلال 3 min. اسمح للفأر بالبقاء لفترة وجيزة في صندوق الهروب لتعزيز تعلم المهمة.
    4. سجل زمن وصول الهروب ومسافة التنقل باستخدام نظام التتبع المرئي. بالنسبة للتجارب التي يفشل فيها الفأر في دخول صندوق الهروب خلال 3 min، خصص زمن وصول للهروب قدره 180 s. قم بتضمين زمن وصول الهروب ومسافة التنقل المسجلة خلال الجلسة النهائية في اليوم الثالث فقط في التحليل الإحصائي.
  4. التعرف على الأشياء الجديدة (ذاكرة التعرف؛ الأيام 3-4 بعد الجراحة)
    ​ملاحظة: استخدم نفس الساحة ونظام التتبع المرئي الموصوفين في اختبار الحقل المفتوح. استخدم جلسة الحقل المفتوح في اليوم الثالث بعد الجراحة لتعويد الفئران على ساحة الاختبار قبل التدريب على التعرف على الأشياء الجديدة.
    1. ضع جسمين أسطوانيين متطابقين في مواقع متماثلة في الساحة خلال جلسة التدريب. اسمح للفأر بالاستكشاف بحرية لمدة 5 min.
    2. بعد فاصل زمني للاحتفاظ قدره 1 h، استبدل أحد الأجسام الأسطوانية المألوفة بجسم جديد على شكل مكعب. قم بموازنة موقع الجسم الجديد بين الفئران لتقليل التفضيل المحتمل لجانب معين. اسمح للفأر بالاستكشاف لمدة 5 min.
    3. سجل وقت الاستكشاف للأجسام المألوفة والجديدة باستخدام نظام التتبع المرئي. قم بتضمين الفئران التي بلغ إجمالي وقت استكشاف الأشياء لديها 3 s على الأقل في التحليل.
    4. احسب مؤشر التفضيل (PI) كالتالي:
      صيغة مؤشر التفضيل: PI = T_novel / (T_novel + T_familiar) × 100%.
      حدد Tnovel و Tfamiliar على أنهما الوقتان المقضيان في استكشاف الأجسام الجديدة والمألوفة، على التوالي، خلال جلسة الاختبار.
  5. متاهة Y ذات الذراع الجديدة (ذاكرة التعرف المكانية؛ اليوم الخامس بعد الجراحة)
    1. أجرِ الاختبار في متاهة على شكل Y تتكون من ثلاثة أذرع متطابقة تفصل بينها زاوية 120°. أغلق ذراعاً واحدة عشوائياً بباب معتم وحدد هذه الذراع كذراع جديدة.
    2. اختر عشوائياً واحدة من الذراعين المفتوحتين كذراع بداية. حدد الذراع المفتوحة المتبقية كذراع مألوفة. ضع الفأر عند نهاية ذراع البداية واسمح له باستكشاف الذراعين المتاحتين بحرية لمدة 5 min.
    3. بعد فاصل زمني بين التجارب قدره 1 h، أزل الباب المعتم وأعد الفأر إلى نهاية ذراع البداية نفسها.
    4. اسمح للفأر باستكشاف جميع الأذرع الثلاثة بحرية لمدة 5 min.
    5. حدد دخول الذراع على أنه دخول مركز الجسم المتتبع إلى منطقة ذراع محددة مسبقاً من المنطقة المركزية. سجل عدد مرات الدخول والوقت المقضي في كل ذراع باستخدام نظام التتبع المرئي.
    6. احسب مؤشر تفضيل الذراع الجديدة القائم على الوقت كالتالي:
      صيغة حساب الوقت للدراسة السلوكية؛ معادلة توضح النسبة المئوية للوقت في الذراع الجديدة.
      حدد Tnovel و Tstart و Tfamiliar على أنها الوقت المقضي في الأذرع الجديدة وذراع البداية والمألوفة، على التوالي.
    7. احسب مؤشر التفضيل القائم على عدد مرات الدخول كالتالي:
      صيغة الدخول إلى الذراع الجديدة، E_novel/E_total، معادلة تحليل التجربة السلوكية.
      حدد Enovel على أنه عدد مرات الدخول إلى الذراع الجديدة، و Etotal على أنه العدد الإجمالي لمرات الدخول إلى جميع الأذرع الثلاثة خلال تجربة الاختبار.

5. معالجة الأنسجة، وتصبيغ نيسل، والتصبيغ المناعي الفلوري

  1. معالجة الأنسجة
    1. عند نقطة النهاية التجريبية المحددة، يتم تخدير الفأر تخديراً عميقاً باستخدام 3% sevoflurane بمعدل تدفق أكسجين يبلغ 2 L/min.
    2. يتم التأكد من وصول التخدير إلى العمق الكافي من خلال غياب منعكس سحب الطرف. وأثناء الحفاظ على التخدير العميق وقبل التوقف القلبي، يتم إجراء تروية عبر القلب باستخدام 20 mL من المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS) لإزالة الدم من داخل الأوعية.
    3. يتم تروية الفأر فوراً بـ 20 mL من 4% paraformaldehyde (PFA).
    4. يُشرَح الدماغ كاملاً بعناية، ثم يُغمر في 4% PFA لمدة 24 h عند 4 °C للتثبيت اللاحق.
    5. يُنقل الدماغ إلى محلول 30% sucrose حتى تغوص الأنسجة تماماً.
    6. يُطمر الدماغ في مركب درجة حرارة القطع المثالية (OCT).
    7. يتم تجميد الأنسجة المطعمة بسرعة وتُحفظ عند −80 °C حتى إجراء القطع بالتجميد.
  2. تلوين نيسل (Nissl staining)
    1. تُترك مقاطع القطع بالتجميد بسماكة 16 µm لتصل إلى درجة حرارة الغرفة، ثم تُجفف الشرائح بالهواء لمدة 20 min.
    2. تُشطف الشرائح في PBS لمدة 2 min.
      ملاحظة: تأكد من بقاء مقاطع الأنسجة ملتصقة بإحكام بالشرائح قبل التلوين.
    3. تُغطى المقاطع بالكامل بمحلول تلوين toluidine blue. وتُحضن لمدة 30 min عند 55 °C.
      ملاحظة: يتم تحسين وقت التلوين تجريبياً للمقاطع بسماكة 16 µm لمنع التلوين المفرط.
    4. تُشطف الشرائح لفترة وجيزة في ماء مقطر لمدة 10–30 s.
    5. يتم تمييز المقاطع بالتتابع في إيثانول بتركيزات 95% و85% و75% لمدة 2 min لكل تركيز.
      ملاحظة: يتم تعديل وقت التمييز إذا لزم الأمر لتحسين كثافة التلوين.
    6. تتم عملية الترويق (Clearing) للشرائح مرتين في xylene طازج لمدة 5 min في كل مرة.
      ملاحظة: تُجرى جميع خطوات xylene داخل خزانة استخراج الأبخرة الكيميائية.
    7. تُثبت المقاطع باستخدام البلسم المتعادل (neutral balsam)، ثم توضع شريحة غطاء برفق فوق كل مقطع.
    8. يتم تصوير المقاطع الملونة باستخدام مجهر ضوئي بعدسة شيئية 20×. يتم تحديد منطقة CA1 بناءً على طبقة الخلايا الهرمية المدمجة المميزة لها في المقطع الإكليلي للحصين. ولكل فأر، يتم تحليل مقطع إكليلي واحد والتقاط حقلين غير متداخلين من منطقة CA1 في كل نصف كرة من الحصين.
    9. يتم عد العصبونات الموجبة لنيسل والسليمة مورفولوجياً وأجسام نيسل يدوياً باستخدام ملحق عد الخلايا في برنامج تحليل الصور. وتُعرف العصبونات السليمة بوجود جسم خلوي سليم، ونواة مستديرة مع نوية مرئية، ومادة نيسل سيتوبلازمية وفيرة؛ وتُعرف أجسام نيسل بأنها تراكيب حبيبية أو متكتلة ذات ألفة قاعدية شديدة داخل سيتوبلازم العصبون.
    10. يتم حساب متوسط القيم التي تم الحصول عليها من جميع الحقول التي تم تحليلها لاستخراج قيمة واحدة لكل حيوان. ويجب التأكد من أن الفاحص الذي يقوم بالعد يظل معميًا عن توزيع المجموعات.
  3. تلوين Iba1 بالفلورة المناعية
    1. تُترك مقاطع الدماغ لتتوازن مع درجة حرارة الغرفة قبل التلوين.
    2. تُغمر الشرائح في محلول استعادة المستضد بسيترات الصوديوم وتُجرى عملية استعادة المستضد في حمام مائي عند 80 °C لمدة 25 min. وبعد ذلك، تُترك الشرائح ومحلول استعادة المستضد ليبردا طبيعياً حتى درجة حرارة الغرفة.
    3. تُغسل المقاطع ثلاث مرات باستخدام المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS) لمدة 3 min في كل مرة.
    4. تتم نفاذية المقاطع باستخدام 0.2% Triton X-100 في PBS لمدة 30 min عند درجة حرارة الغرفة، يتبع ذلك ثلاث غسلات بـ PBS لمدة 3 min لكل منها.
    5. يتم حجب الارتباط غير النوعي عن طريق تحضين المقاطع مع 3% bovine serum albumin (BSA) في PBS لمدة 1 h عند درجة حرارة الغرفة في غرفة رطبة.
    6. تُغسل المقاطع ثلاث مرات بـ PBS لمدة 3 min في كل مرة.
    7. يُخفف الجسم المضاد الأولي ضد ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1; 1:100) في محلول الحجب (3% BSA في PBS)، وتُحضن المقاطع مع الجسم المضاد الأولي المخفف طوال الليل عند 4 °C في غرفة رطبة.
    8. تُغسل المقاطع ثلاث مرات بـ PBS لمدة 3 min في كل مرة.
    9. تُحضن المقاطع مع 488-conjugated goat anti-rabbit IgG (H+L) (1:1000) لمدة 90 min عند درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    10. تُغسل المقاطع ثلاث مرات بـ PBS لمدة 3 min في كل مرة في الظلام.
    11. تُصبغ النوى تلويناً مضاداً باستخدام DAPI (1:8000) لمدة 5 min في الظلام.
    12. تُغسل المقاطع ثلاث مرات بـ PBS لمدة 3 min في كل مرة في الظلام.
    13. تُثبت المقاطع باستخدام وسط تثبيت مضاد للتلاشي (antifade mounting medium)، وتوضع شرائح الغطاء، وتُحمى المقاطع من الضوء حتى التصوير.
    14. يتم التقاط صور الفلورة لمنطقة CA1 في الحصين باستخدام مجهر فلورة بؤري (confocal) بعدسة شيئية 20×. تُستخدم إعدادات التقاط صور متطابقة لجميع المقاطع المدرجة في المقارنات الكمية. ولكل فأر، يتم تحليل مقطع إكليلي واحد والتقاط حقلين غير متداخلين من منطقة CA1 في كل نصف كرة من الحصين.
    15. يتم قياس متوسط شدة فلورة Iba1 في منطقة CA1 في الحصين باستخدام إعدادات عتبة متطابقة في جميع الصور. ثم يتم حساب متوسط القيم من جميع الحقول للحصول على قيمة واحدة لكل حيوان.

6. التحليل الإحصائي

  1. إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج للتحليل الإحصائي. عرض البيانات في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (SD).
  2. تقييم طبيعية البيانات باستخدام اختبار Shapiro–Wilk. تقييم تساوي التباينات باستخدام اختبار F.
  3. مقارنة مجموعتي الضبط واستئصال الصفيحة الفقرية L5 باستخدام اختبار t لـ Student غير المقترن وذي الذيلين عند استيفاء افتراض التباين. استخدام اختبار Welch's t عندما لا يتم استيفاء افتراض التباين.
  4. تعريف n بأنها عدد الحيوانات المشمولة في كل تحليل. اعتبار قيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

نجت جميع الفئران حتى نقطة النهاية التجريبية المقررة، ولم تستوفِ أي منها معايير نقطة النهاية الإنسانية المحددة مسبقاً، وأُدرجت جميعها في التحليلات النهائية. تم تقييم الوظيفة الحركية في اليوم الثالث بعد الجراحة باستخدام تحليلات المجال المفتوح والمشية. لم يختلف إجمالي المسافة المقطوعة ولا متوسط السرعة في اختبار المجال المفتوح بين المجموعات، مما يشير إلى نشاط حركي تلقائي مماثل (الشكل 2A). وبالمثل، لم يظهر تحليل المشية أي فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في طول الخطوة، أو وقت الوقوف، أو سرعة التأرجح، أو مساحة البصمة (الشكل 2B). وتشير هذه النتائج مجتمعة إلى أن إجراء استئصال الصفيحة الفقرية في الفقرة القطنية الخامسة L5 لم يتسبب في ضعف حركي ظاهر يكفي لتفسير الاختلافات اللاحقة في الأداء المعرفي السلوكي.

تم تقييم الأداء المعرفي باستخدام اختبار التعرف على الأشياء الجديدة (NOR)، ومتاهة Y ذات الذراع الجديدة، ومتاهة Barnes. في اختبار NOR، أظهرت مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5 مؤشر تفضيل للأشياء الجديدة (PI) أقل بكثير من المجموعة الضابطة (الشكل 3A). وفي متاهة Y ذات الذراع الجديدة، أظهرت مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5 مؤشرات تفضيل (PIs) أقل بكثير لكل من الوقت الذي قضته وعدد مرات الدخول إلى الذراع الجديدة (الشكل 3B). أما في متاهة Barnes، فقد أظهرت مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5 فترة كمون هروب أطول ومسافة مقطوعة أكبر في اليوم الثالث من اختبار متاهة Barnes (الشكل 3C). وتشير هذه النتائج السلوكية مجتمعة إلى ضعف الأداء المعرفي بعد الجراحة عقب عملية استئصال الصفيحة الفقرية L5.

في منطقة CA1 في الحصين، أظهرت مجموعة استئصال الصفيحة الفقارية L5 عدداً أقل بشكل ملحوظ من العصبونات الموجبة لصبغة نيسل وأعداداً أقل بشكل ملحوظ من أجسام نيسل مقارنة بمجموعة التحكم، مما يشير إلى حدوث ضرر هيكلي عصبي (الشكل 4A، B). بالإضافة إلى ذلك، زاد متوسط شدة الفلورسنت لبروتين Iba1 بشكل ملحوظ في مجموعة استئصال الصفيحة الفقارية L5، وهو ما يتفق مع زيادة تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة (الشكل 4C، D).

مخطط وعملية تشريح العمود الفقري القطني للفأر يوضح تحديد الفقرات L4 وL5 وL6.
الشكل 1: إجراء استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5 لنمذجة الخلل المعرفي التالي للجراحة (POCD) في الفئران. (A) توضيح للهدف الجراحي عند الصفيحة الفقرية L5 ونطاق الكشف الذي يمتد ليشمل المستويات الفقرية المجاورة (L4–L6). (B) صور أثناء العملية توضح الخطوات الرئيسية لإجراء استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5. (أ) المنطقة القطنية بعد الحلاقة، مع تحديد خط منتصف العمود الفقري؛ تشير الأسهم إلى اتجاه الشق الجلدي المخطط له. (ب) شق جلدي في خط المنتصف فوق العمود الفقري القطني. (ج) شق اللفافة مع فصل تدريجي للعضلات المجاورة للعمود الفقري للكشف عن النتوءات الشوكية ومزيد من تنظيف الأنسجة حول النتوء الشوكي والصفيحة الفقرية L5 للكشف الكامل عن الصفيحة الفقرية L5. (د) استئصال الصفيحة الفقرية L5 بعد إزالة الصفيحة الفقرية L5. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

دراسة استئصال الصفيحة الفقرية مقابل المجموعة الضابطة؛ مسار الحركة، مخطط شريطي، مقارنة بيانات المشية، نتائج التجربة.
الشكل 2: تقييم النشاط الحركي والمشية بعد استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5. (A) اختبار المجال المفتوح الذي يوضح إجمالي المسافة المقطوعة ومتوسط السرعة (n = 10). (B) تحليل المشية الذي يوضح طول الخطوة، ووقت الوقوف، وسرعة التأرجح، ومساحة البصمة (n = 6). تمثل البيانات المتوسط ± SD. يُشار إلى الدلالة الإحصائية بـ ns، أي غير دالة إحصائياً. الاختصارات: Control = المجموعة الضابطة؛ Laminectomy = مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تُحلل مخططات المتاهة والمخططات الشريطية تأثيرات استئصال الصفيحة الفقرية مقابل مجموعة الضبط في أداء المهام المعرفية.
الشكل 3: تقييمات السلوك المعرفي بعد عملية استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5. (A) اختبار التعرف على الأشياء الجديدة (n = 10). (B) اختبار متاهة Y ذات الذراع الجديد (n = 10). (C) اختبار متاهة Barnes (n = 10). تمثل البيانات المتوسط ± SD. يُشار إلى الدلالة الإحصائية بـ *P < 0.05، و**P < 0.01، و***P < 0.001. الاختصارات: Control = مجموعة الضبط؛ Laminectomy = مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

نتائج استئصال الصفيحة الفقرية؛ صور نسيجية ومخططات بيانية لكثافة Iba1 في مجموعتي الضبط واستئصال الصفيحة الفقرية.
الشكل 4: التقييم النسيجي لمنطقة CA1 في الحصين بعد عملية استئصال الصفيحة الفقرية القطنية L5. (A) صور ممثلة لصبغة Nissl في منطقة CA1 في الحصين. (B) قياس كمي للعصبونات الموجبة لصبغة Nissl (يساراً) وأجسام Nissl (يميناً) (n = 5). (C) صور ممثلة للتألق المناعي لـ Iba1 في منطقة CA1 في الحصين. شريط المقياس = 100 µm. (D) قياس كمي لمتوسط كثافة تألق Iba1 (n = 6). تمثل البيانات المتوسط ± SD. يُشار إلى الدلالة الإحصائية بـ **P < 0.01، و ***P < 0.001. الاختصارات: Control = مجموعة الضبط؛ Laminectomy = مجموعة استئصال الصفيحة الفقرية L5. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

المناقشة

تم الإبلاغ عن حدوث خلل معرفي بعد الجراحة لدى كبار السن الذين يخضعون لجراحة العمود الفقري10. وتشير الأدلة التجريبية علاوة على ذلك إلى أن الشيخوخة تزيد من القابلية للإصابة بالضعف المعرفي المرتبط بالجراحة والاستجابات الالتهابية العصبية11,12. يدمج البروتوكول الحالي ما يقرب من 4 h من التخدير باستخدام sevoflurane مع عملية استئصال الصفيحة الفقرية L5 في الفئران المسنة لنمذجة الضعف المعرفي المبكر بعد الجراحة. تكمن قيمته المنهجية الرئيسية في توفير إجراء عملي ومتاح لاستقصاء التغيرات السلوكية والنسيجية في الحصين بعد جراحة العمود الفقري.

تشمل نماذج ضعف الإدراك بعد الجراحة (POCD) قبل السريرية التعرض للتخدير فقط، والجراحة البطنية، ونماذج الإصابة التقويمية13. وتسمح نماذج التخدير فقط بتقييم آثار التخدير في غياب الصدمات الجراحية14، ولكنها لا تحاكي التعرض المشترك للتخدير وإصابة الأنسجة. وتتضمن نماذج الجراحة البطنية وكسر عظمة الظنبوب الإصابة الجراحية، وقد استُخدمت لاستقصاء القصور المعرفي المرتبط بالجراحة15,16. ومع ذلك، فإن مواقع العمليات وأنماط إصابة الأنسجة في هذه النماذج تختلف عن تلك الموجودة في إجراءات العمود الفقري. ونظراً لأن نوع وكثافة الصدمة الجراحية يمكن أن يؤثرا على النتائج المعرفية بعد الجراحة والاستجابات الالتهابية المركزية9، فيجب مراعاة السياق الجراحي عند اختيار النموذج قبل السريري. وبناءً على ذلك، يوفر بروتوكول استئصال الصفيحة الفقرية L5 الحالي نموذجاً تجريبياً مرتبطاً بجراحة العمود الفقري لفحص القصور المعرفي المبكر بعد الجراحة في الفئران المسنة.

يتمثل التحدي التقني الرئيسي في هذا البروتوكول في إزالة قدر كافٍ من عظم صفيحة الفقرة L5 لكشف الأم الجافية بوضوح مع تجنب إصابتها. يتطلب إجراء استئصال الصفيحة تحت الرؤية المباشرة تحكماً دقيقاً في عمق الأداة، وقوة القطع، وزاوية إدخال مقصات جراحة العيون. يجب إزالة العظم تدريجياً باستخدام قطعات صغيرة ومتحكم بها على طول حواف الصفيحة. ويؤدي الإمساك بالنتوء الشوكي للفقرة L5 باستخدام الملقط ورفع القطاع القطني الجراحي بزاوية تقارب 30° بالنسبة للمنصة الجراحية إلى توسيع المسافة بين الصفيحتين L5–L6. تسمح هذه المناورة بإدخال أطراف المقص بشكل سطحي تحت الحافة العظمية وتقلل من خطر ملامسة الأم الجافية. قد يؤدي عدم إزالة العظم بشكل كامل إلى تقييد الرؤية الجراحية، بينما قد يتسبب القطع العنيف للغاية أو عمق الإدخال المفرط في إصابة الأم الجافية. كما يمكن أن يؤدي النزيف غير المسيطر عليه إلى حجب المجال الجراحي، وإعاقة التعافي بعد العملية، وزيادة التباين في النتائج السلوكية. عندما تكون المسافة بين الصفيحتين غير كافية للإدخال الآمن لأطراف المقص، يجب إعادة ضبط موضع وزاوية رفع القطاع القطني الجراحي بدلاً من زيادة عمق الإدخال. وفي حال حجب النزيف للمجال الجراحي، يجب إيقاف إزالة العظم مؤقتاً حتى يتم استعادة الرؤية الكافية، وبعد ذلك تتم إزالة أي عظم متبقٍ بشكل تدريجي.

قد يساهم فصل العضلات المجاورة للفقرات وعملية استئصال الصفيحة الفقرية في الفقرة L5 في حدوث ألم عابر بعد الجراحة، وقد تم توثيق وجود فرط حساسية ميكانيكية بعد استئصال الصفيحة الفقرية تجريبياً في الفئران17. تم إعطاء عقار Meloxicam وفقاً لنظام تسكين آلام محدد مسبقاً. وقد أفادت التقارير بأن تعابير الوجه المرتبطة بألم ما بعد الجراحة في الفئران تستمر لمدة تتراوح تقريباً بين 36–48 h18. وكان الهدف من نظام تسكين الآلام لمدة 48 h هو تغطية هذه الفترة المبكرة التي تلي الجراحة، وبدأت اختبارات السلوك المعرفي في اليوم الثالث بعد الجراحة، بعد الانتهاء من نظام تسكين الآلام، لتقليل التأثير المحتمل للألم المباشر الذي يلي الجراحة. استُخدم اختبار الحقل المفتوح في دراسات التدهور المعرفي بعد الجراحة (POCD) التجريبية لتقييم النشاط الحركي العفوي وتحديد ما إذا كان انخفاض الحركة قد يؤثر على الأداء السلوكي المعرفي19,20. وبناءً على ذلك، تم إجراء اختبار الحقل المفتوح وتحليل المشية في اليوم الثالث بعد الجراحة، وذلك قبل التقييم المعرفي. لم تُلاحظ فروق ذات دالة إحصائية بين المجموعات في النشاط الحركي في الحقل المفتوح أو في معاملات المشية، مما يشير إلى أنه من غير المرجح أن تكون الاختلافات السلوكية المعرفية اللاحقة مفسرة بشكل أساسي بضعف حركي ظاهر. ومع ذلك، وبما أنه لم يتم تقييم الألم العفوي بعد الجراحة وعدم ارتياح الجرح بشكل مباشر، فلا يمكن استبعاد آثارهما المتبقية على الأداء السلوكي تماماً. ويمكن أن تتضمن الدراسات المستقبلية تقييمات مباشرة للألم العفوي بعد الجراحة.

بشكل عام، يوفر هذا البروتوكول نهجاً تجريبياً عملياً لاستقصاء القصور المعرفي المبكر بعد الجراحة في الفئران المسنة بعد عملية استئصال الصفيحة الفقرية من الفقرة L5. ويمكن استخدامه لبحث النتائج السلوكية والآليات الكامنة وراء القصور المعرفي المرتبط بجراحة العمود الفقري، بالإضافة إلى تقييم التدخلات التي تهدف إلى منع القصور المعرفي بعد الجراحة أو الحد منه. ومن شأن التحقق من صحة النموذج في مجموعات أكبر وفي مختبرات مستقلة أن يعزز من استقرار النموذج وقابلية تكراره.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عن عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نتوجه بالشكر إلى Sanhua Fang من منصة المرافق المركزية في كلية الطب بجامعة Zhejiang، وإلى Yanhong Chen وXuliang Zhang من مركز الحيوانات بجامعة Zhejiang على دعمهم الفني. تم تمويل هذه الدراسة من خلال الأموال التالية: المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (الأرقام: 82575196 و82074535 وU23A20508).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
فئران ذكر من سلالة C57BL/6Jشركة سوزو الصناعية بارك آير ميت للتكنولوجيا المحدودة (Suzhou Industrial Park Ai'er Maite Technology Co., Ltd.)SYXK2023-0005النموذج الحيواني
برنامج ANY-maze لتتبع الفيديوStoelting Co.، الولايات المتحدة الأمريكية6000تتبع وتحليل السلوك عبر الفيديو
مرهم إريثروميسين للعينشركة بكين توين لوك للصيدلة المحدودة (Beijing Twinluck Pharmaceutical Co,. Ltd.)H11021270الوقاية من جفاف العين
ملقط دقيقغير متوفرلا ينطبققص الجلد
وسادة تدفئةغير متوفريرجى تزويدي بالنص المراد ترجمته.خاضع للتحكم الحراري
جسم مضاد أحادي النسيلة للأرنب Iba1/AIF-1 (E4O4W)تكنولوجيا إشارات الخلايا17198صبغ المناعة الفلورية لبروتين Iba1
معدات التخدير الاستنشاقيشركة RWD Life Science Co., Ltd.R581Sالتخدير
MGT-PRشركة أنهوي جينغهوا للمعدات والأجهزة البيولوجية المحدودة، الصينMJY2025112704تحليل المشية
مقصات جراحة العيون الدقيقةلا يوجد نص متاح للترجمة. يرجى تزويد النص المصدر باللغة الإنجليزية لنتمكن من ترجمته إلى اللغة العربية وفقاً للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة.لا يوجد نص للترجمة.إزالة العظم
محلول صبغ نيسلشركة هاوكي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة (Haoke Biotechnology Co., Ltd.)HK2033صبغة نيسل
مقصشركة شانغ شو جين تشونغ للأدوات الجراحية جيانغسو آي تي دي. (Shang Shou Jin Zhong Surgical Instruments Jiangsu ITD.,Corp)Y00030شق الجلد
سيفوفلورانشركة شنغهاي هنغروي للأدوية المحدودة (Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co,. Ltd.)25062331التخدير
غطاء جراحي أحادي الاستخدامشركة جيانغشي تشيزينغ للمعدات الطبية المحدودة (Jiangxi Zhizheng Medical Equipment Co., Ltd.)20212140221منصة للعمليات الجراحية
آلة تهذيب شعر الحيوانات الصغيرةشركة Yiwu Leiben Trading المحدودة2504KFZB3592-03310إزالة الشعر
إبر الخياطة الجراحية مع الخيوطشركة شنغهاي بودونغ جينهوان للمنتجات الطبية المحدودة (Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LTD.)F603خياطة الجلد
كريم فيت لإزالة الشعرشركة ريكيت بنكيزر (الهند) المحدودةلا يوجد نص للمصدر. يرجى تقديم النص الذي ترغب في ترجمته.إزالة الشعر

المراجع

  1. Zhao Q, Wan H, Pan H, Xu Y. Postoperative cognitive dysfunction-current research progress. Front Behav Neurosci. 2024;18:1328790.
  2. Kong H, Xu LM, Wang DX. Perioperative neurocognitive disorders: A narrative review focusing on diagnosis, prevention, and treatment. CNS Neurosci Ther. 2022;28(8):1147-1167.
  3. Monk TG, et al. Predictors of cognitive dysfunction after major noncardiac surgery. Anesthesiology. 2008;108(1):18-30.
  4. Li X, et al. Risk factors for postoperative cognitive decline after orthopedic surgery in elderly Chinese patients: A retrospective cohort study. Clin Interv Aging. 2024;19:491-502.
  5. Krenk L, et al. Cognitive dysfunction after fast-track hip and knee replacement. Anesth Analg. 2014;118(5):1034-1040.
  6. Yang X, et al. Identification of individuals at risk for postoperative cognitive dysfunction (POCD). Ther Adv Neurol Disord. 2022;15:17562864221114356.
  7. Suraarunsumrit P, et al. Outcomes associated with postoperative cognitive dysfunction: A systematic review and meta-analysis. Age Ageing. 2024;53(7):afae160.
  8. Lin X, et al. The potential mechanism of postoperative cognitive dysfunction in older people. Exp Gerontol. 2020;130:110791.
  9. Lu B, et al. Effects of different types of non-cardiac surgical trauma on hippocampus-dependent memory and neuroinflammation. Front Behav Neurosci. 2022;16:950093.
  10. Park S, et al. Preoperative mild cognitive impairment as a risk factor of postoperative cognitive dysfunction in elderly patients undergoing spine surgery. Front Aging Neurosci. 2024;16:1292942.
  11. Xu Z, et al. Age-dependent postoperative cognitive impairment and Alzheimer-related neuropathology in mice. Sci Rep. 2014;4:3766.
  12. Zhang ZJ, et al. Aging alters Hv1-mediated microglial polarization and enhances neuroinflammation after peripheral surgery. CNS Neurosci Ther. 2020;26(3):374-384.
  13. Eckenhoff RG, et al. Perioperative neurocognitive disorder: State of the preclinical science. Anesthesiology. 2020;132(1):55-68.
  14. Guo LY, et al. Cognitive deficits after general anaesthesia in animal models: A scoping review. Br J Anaesth. 2023;130(2):e351-e360.
  15. Qiu LL, et al. NADPH oxidase 2-derived reactive oxygen species in the hippocampus might contribute to microglial activation in postoperative cognitive dysfunction in aged mice. Brain Behav Immun. 2016;51:109-118.
  16. Cibelli M, et al. Role of interleukin-1beta in postoperative cognitive dysfunction. Ann Neurol. 2010;68(3):360-368.
  17. Yamamoto S, et al. Intraoperative spinal cord stimulation mitigates central sensitization after spine surgery in mice. Spine (Phila Pa 1976). 2023;48(11):E169-E176.
  18. Matsumiya LC, et al. Using the mouse grimace scale to reevaluate the efficacy of postoperative analgesics in laboratory mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 2012;51(1):42-49.
  19. Sun L, et al. Activation of cannabinoid receptor type 2 attenuates surgery-induced cognitive impairment in mice through anti-inflammatory activity. J Neuroinflammation. 2017;14(1):138.
  20. Zhan G, et al. Anesthesia and surgery induce cognitive dysfunction in elderly male mice: The role of gut microbiota. Aging (Albany NY). 2019;11(6):1778-1790.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

نموذج جراحة العمود الفقريتخدير السيفوفلوراناختبار الوظيفة المعرفيةالإصابة العصبونية في الحصينالتغيرات الالتهابية العصبيةصبغ نيسلالتألق المناعي لـ Iba1

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.