مقالة منهجية

بروتوكول قياس تدفق الخلايا متعدد الألوان الموحد لتقييم الأمراض المتبقية القابلة للقياس في سرطان الدم الحاد

DOI:

10.3791/71756

⸱

أغسطس 7, 2026

1Department of Clinical Laboratory, The Second People's Hospital of Neijiang

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول سير عمل قياسي متعدد الألوان لقياس التدفق الخلوي لتقييم الأمراض المتبقية القابلة للقياس في سرطان الدم الحاد، مع دمج معالجة العينات المحكمة، ومعايير الاكتساب الموحدة، واستراتيجيات البوابات المتسلسلة، والتفسير المعدل حسب المقام لتحسين قابلية التكرار التحليلي في المختبرات السريرية الروتينية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد مرض البقي القابل للقياس (MRD) مؤشرا تنبؤيا مهما في إدارة سرطان الدم الحاد. ومع ذلك، يظل التقييم الروتيني لقياس تدفق الخلايا متعدد الألوان (MFC) عرضة للتغيرات التحليلية والتحليلية المسبقة، بما في ذلك التخفيف الدموي، وعمق الاستحواذ غير المتسق، والتفسير الذاتي. تقدم هذه المقالة سير عمل تشغيلي موحد لتقييم المرض المغناطيسي المغناطيسي المنتظم في سرطان الدم اللمفاوي الحاد للخلايا B-ALL وسرطان الدم النخاعي الحاد (AML). يدمج البروتوكول معايير قبول صارمة للعينة مع تقييم متكامل للتخفيف الدموي، ويستخدم طريقة تحليل خلايا الدم الحمراء الجماعية لعينات نخاع العظم والدم المحيطي. يتم تحقيق التوحيد التحليلي من خلال لوحات أجسام مضادة ذات أنبوبين وثمانية ألوان خاصة بالأمراض، وأهداف اكتساب متناسقة تتطلب ما لا يقل عن 500,000 حدث إيجابي ل CD45، واستراتيجيات بوابات متسلسلة ثابتة. بالإضافة إلى ذلك، يطبق سير العمل حدود الكشف المعدلة حسب المقام (LOD) والقياس الكمي (LOQ) لدعم نظام تقارير موضوعي من ثلاث مستويات. أظهر التحقق عبر 197 عينة سريرية قابلية تكرار قوية، وخطية تخفيف قوية، وتوافق عالي مع اختبارات جزيئية متعامدة متزوجة. بشكل جماعي، يوفر هذا البروتوكول إطارا عمليا لمراقبة MRD الموحدة. لمراقبة MRD الموحدة في المختبرات السريرية الروتينية من خلال دمج التعامل المسبق التحليلي المسيطر عليه والمعايير التحليلية الموحدة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حتى بعد تحقيق الهدوء الشكلي، يحتاج مرضى اللوكيميا الحادة إلى مراقبة مستمرة للمرض المتبقي القابل للقياس (MRD) لتقييم خطر الانتكاس بدقة. تفتقر الفحوصات المورفولوجية والخلايا المرضية التقليدية إلى الحساسية المطلوبة لاكتشاف تجمعات اللوكيميا المتبقية منخفضة المستوى. وبالتالي، أصبح تقييم MRD عنصرا أساسيا في مراقبة الأمراض في كل من سرطان الدم النخاعي الحاد (AML) وسرطان الدم اللمفاوي الحاد بالخلايا B. تؤكد التوصيات الحديثة من شبكة اللوكيميا الأوروبية أن التقييم الموثوق للاضطراب المغناطيسي في AML يعتمد على التوحيد التقني وقابلية تكرار التفاعل بين المراقبين بدلا من توفر الاختبارات البسيطة 1,2. في B-ALL، يظل قياس تدفق الخلايا متعدد الألوان (MFC) مهما بشكل خاص للمرضى الذين لا يملكون أهدافا جزيئية مستقرة. أظهرت دراسات سابقة أن الأساليب الموحدة متعددة الألوان لقياس تدفق الخلايا باستخدام تصاميم لوحات الأجسام المضادة المنظمة يمكن أن توفر اكتشافا متبقيا للأمراض القابلة للتكراروحساسة 3. يستخدم قياس التدفق الخلوي على نطاق واسع بسبب قابليته الواسعة للتطبيق، وسرعة الاستجابة، وفعاليته من حيث التكلفة. لا يزال أداء الاختبار يعتمد بشكل كبير على إعداد العينة الموحد، ومعايير الاقتناء، وتفسير البيانات4.

أحد التحديات التقنية الرئيسية في تقييم تدفق التدفق الخلوي MRD هو اكتشاف الأحداث النادرة، والذي يتأثر بشدة بعمق الاكتساب وإجمالي عدد الأحداث. قد تنتج لوحات الأجسام المضادة المتطابقة حساسية تحليلية مختلفة إذا تم الحصول على عينات بأحجام المقام غير المتسقة5. لذلك، يتجاوز التوحيد القياسي اختيار الأجسام المضادة ويتطلب معالجة عينات متناسقة، وتحليل خلايا الدم الحمراء الجماعية، وتعويض الأجهزة، وأهداف الاكتساب، واستراتيجيات البوابة. في عينات نخاع العظم، يمثل التخفيف الدموي أيضا متغيرا مهما قبل التحليل لأن تلوث الدم المحيطي قد يقلل بشكل مصطنع من العبء المتبقي الظاهري لللوكيميا 6,7. بالإضافة إلى ذلك، يتطلب تفسير الأحداث منخفضة التردد عتبات تقارير محددة بوضوح بناء على عمق الاستحواذ الخاص بالعينة. أكدت الدراسات الحديثة على أهمية حدود الكشف المعدلة حسب المقام (LOD) والقياس الكمي (LOQ) لتحسين اتساق تفسير MRD بقياس تدفق الخلايا8.

الهدف العام لهذا البروتوكول هو توفير سير عمل موحد لتقييم MRD الروتيني القائم على MFC في B-ALL وAML. يدمج البروتوكول معايير قبول العينة، وتقييم تخفيف الدم، وتصميم لوحات الأجسام المضادة الخاصة بالمرض، وتحضير عينات التحلل الجماعي، وأهداف الاستحواذ المتناسقة، واستراتيجيات البوابات المتسلسلة الثابتة، ومعايير التقارير المعدلة حسب المقام في إطار تشغيلي واحد 9,10. من خلال الجمع بين الإجراءات التحليلية قبل التحليلية والموحدة، توفر هذه الطريقة نهجا عمليا وقابلا للتكرار لتنفيذ مراقبة MRD الروتينية في المختبرات السريرية. يوضح الشكل 1 سير العمل القياسي العام للتحليل وما قبل التحليل الذي تم تنفيذه في هذه الدراسة. يلخص الجدول 1 خصائص المجموعة والعينة للمرضى المصابين بسرطان الدم اللمفاوي الحاد B-ALL (B-ALL) وسرطان الدم النخاعي الحاد (AML) المسجلين خلال فترة التحقق عبر نوافذ المراقبة المحددة مسبقا (نهاية الحث، التماسك، وقبل التصوير الهوكي الدماغي).

figure-introduction-1
الشكل 1: سير العمل الموحد لتقييم التدفق الخلوي متعدد الألوان الروتيني. (أ) سير عمل تحليلي مسبق يظهر فحص العينات وتقييم الجودة عبر فترات مراقبة محددة مسبقا. (ب) سير العمل التحليلي من تحليل الخلايا الحمراء الجماعية وتلوين الأجسام المضادة من خلال التقسيم التسلسلي، والتفسير المعدل حسب المقام، والإبلاغ النهائي عن MRD. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الجدول 1: التركيبة السكانية الموحدة للمرضى، وخصائص العينات السريرية، ومقاييس الاكتساب الروتينية. يلخص هذا الجدول المعدل واحدا السمات السريرية الأساسية للمجموعة المسجلة التي تتكون من حالات سرطان الدم اللمفاوي الحاد لخلايا B (B-ALL) وسرطان الدم النخاعي الحاد (AML)، ويجمع بين التركيبة السكانية على مستوى المريض وخصائص العينة، وفترات مراقبة العلاج، وقابلية البقاء، ودرجات التخفيف، وعمق الاستحواذ، وتصنيفات الأمراض المتبقية القابلة للقياس المعدلة حسب المقام. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الجدول.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع الإجراءات التي تشمل عينات بشرية وفقا للإرشادات المؤسسية وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى الشعب الثاني في نيجيانغ (رقم الموافقة: PXTS887192). استخدمت الدراسة عينات سريرية متبقية غير محددة تم الحصول عليها بعد الفحوصات التشخيصية الروتينية. تم التنازل عن الموافقة المستنيرة لأن الدراسة لم تؤثر على رعاية المرضى أو تخصيص العلاج أو إجراءات جمع العينات. المواد الكيميائية والكواشف والمعدات المستخدمة في البروتوكول مدرجة في جدول المواد.

1. جمع العينات والتقييم التحليلي المسبق

  1. جمع شفاطات نخاع العظم كنوع العينة المفضل لتقييم الأمراض المتبقية القابلة للقياس (MRD). استخدم عينات الدم المحيطية فقط عندما يكون استنشاق نخاع العظم ممنوعا سريريا أو أثناء المراقبة المختارة وتحليلات المقارنة.
  2. اجمع عينة نخاع العظم أثناء أول سحب للسحب كلما أمكن ذلك. تجنب سحب السحب اللاحق لتقليل تلوث الدم المحيطي والتقليل من تقدير الأمراض المتبقية منخفضة المستوى.
  3. نقل العينات إلى أنابيب مضادات تخثر ثنائي البوتاسيوم إيثيلين ديامين رباعي أسيتيك (K2-EDTA) أو الصوديوم-هيبارين مباشرة بعد الجمع. تخزين ونقل العينات في درجة حرارة الغرفة (18–25 درجة مئوية) وحميتها من أشعة الشمس المباشرة.
    تحذير: لا تضع العينات في الثلاجة.
  4. عالج جميع العينات خلال 24 ساعة من الجمع. لدراسات الاستقرار، احتفظ بالمعادلات لإعادة التحليل عند 24 ساعة و48 ساعة مع الحفاظ على ظروف التخزين في درجة حرارة الغرفة.
  5. تحقق من معرف المريض، ونوع مضاد التخثر، وسلامة العينة، ووقت الجمع عند استلام العينة. العينات المرفوضة التي تظهر تجلطا واسعا، تحلل دموي شديد، أو تدهور خلوي ملحوظ
  6. تقييم عينات نخاع العظم للتخفيف الدموي قبل التفسير النهائي. احسب درجة تخفيف الدم شبه الكمية تتراوح من 0.00 إلى 1.00 لتقدير تلوث الدم المحيطي.
  7. حدد هذه القيمة بقسمة نسبة الخلايا اللمفاوية الناضجة على مجموع الخلايا المولدة ل CD34، والخلايا الحبيبية غير الناضجة، والخلايا اللمفاوية الناضجة، حيث يشير الحاصل الأعلى إلى تأثير تخفيف أكبر.
    ملاحظة: احسب النتيجة باستخدام الصيغة التالية:
      figure-protocol-1
    حيث تشير الدرجة الأعلى إلى تلوث أكبر للدم المحيطي.
  8. تصنيف درجات التخفيف كالتالي: <0.20، مقبول؛ 0.20–0.39، خفيفة في التوتر الدموي؛ و≥0.40، بحجم كبير من الهيموديلوت.
    ملاحظة: لا تمنح تفسيرات نهائية سلبية لل MRD للعينات ذات الهيموديلويت الواضح إلا إذا تم تأكيد حجم المقام المناسب وبنية السلف المحفوظ لنخاع النخاع.

2. تحضير لوحة الأجسام المضادة الخاصة بالأمراض

  1. تحضير لوحات أجسام مضادة موحدة بأنبوبين وثمانية ألوان لتحليل B-ALL وAML. تحقيق توحيد اللوحات من خلال الالتزام الصارم بمؤشرات العمود الفقري الثابتة عبر جميع الأنابيب لتحقيق توازن سكان مستقر.
  2. استخدم التركيبات الفلوروكرومية المتسقة لمستضدات السلسلة المقابلة واتبع بدقة أحجام المعايرة الموصى بها من المصنع لتقليل تباين الفلورة بين دفعة إلى أخرى.
  3. راجع الجدول التكميلي 1 لتركيبات العلامات، وتعيينات الفلوروكروم، ونسخ الأجسام المضادة، وأحجام التلوين، ومعايير الاكتساب.
  4. لتقييم B-ALL، استخدم CD19 وCD45 وCD34 وCD10 وCD20 كمؤشرات عمودية فقرية في كلا الأنبوبين لتحديد تجمعات المواد الأولية وأنماط النضج. أضف CD38 وCD58 وCD81 إلى الأنبوب 1.
  5. أضف CD66c وCD123 وإما CD73 أو CD304 إلى الأنبوب 2 وفقا لنموذج المناعة التشخيصي المرتبط باللوكيميا الذي تم تحديده عند التقييم الأساسي.
  6. لتقييم AML، استخدم CD45 وCD34 وCD117 وCD13 وCD33 وHLA-DR كمؤشرات فقرية في كلا الأنبوبين لتحديد تجمعات النخاع النخاعي وغير الناضجة.
  7. أضف CD7 وCD56 إلى الأنبوب 1 لتقييم تعبير المستضد عبر السلالات. أضف CD11b وCD15 إلى الأنبوب 2 لتقييم اضطرابات نضج الميلويد.

3. تحضير وصبغة التحليل الضخم

  1. انقل 2.0 مل من نخاع العظم أو عينة دم محيطية مختلطة جيدا إلى أنبوب بولي بروبيلين بحجم 15 مل. إذا كان حجم العينة محدودا، استخدم حجم إدخال أدنى يبلغ 1.0 مل.
  2. أضف 10 مل من محلول تحلل كلوريد الأمونيوم المسخن مسبقا إلى العينة. حضن التعليق لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتحليل خلايا الدم الحمراء.
  3. قم بجهاز الطرد المركزي للعينة عند 500 × جرام لمدة 5 دقائق. تخلص من المادة الفائقة بعناية دون إزعاج الحبيبات الخلوية المكونة من النواة.
  4. أعد تعليق الحبيبة في 2 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) يحتوي على 0.5٪ ألبومين مصل البقري (BSA) و2 ملليمولار إيثيلين ديامين رباعي أسيتيك حمض (EDTA). كرر خطوة الغسل مرة واحدة إذا بقي تلوث الهيموغلوبين ظاهرا.
  5. تحديد تركيز الخلايا النووية باستخدام محلل أمراض الدم الآلي أو عد يدوي لقياس الخلايا الدموية مع استبعاد تريبان بلو. اعتبر تركيز خلوي نووي أدنى 5 × 106 خلايا/مل كأفضل للاكتساب القياسي.
    ملاحظة: إذا انخفض العائد الخلوي عن هذا العتبة، ركز العينة عن طريق طرد مركزي إضافي عند 500 × جرام لمدة 5 دقائق، وقم بتقليل حجم مخزن التعليق المعاد تعليقها بحذر لتعظيم كثافة الخلية.
  6. Aliquot 5 × 10 6 خلايانووية لكل أنبوب للتلوين الروتيني. زيادة المدخلات إلى حد أقصى 1 ×10 7 خلايا لكل أنبوب لتحليل الحساسية العالية عندما يسمح استرداد العينةب 6,7.
  7. أضف مزيج الأجسام المضادة المعدلة بشكل فردي وصبغة قابلية للتثبيت المحددة في جدول المواد إلى كل أنبوب وفقا لتكوين لوحة التلوين المعتمدة. تستخدم اللوحة المعتمدة روتينيا 5 ميكرولتر لكل جسم مضاد مقترق بالفلوروكروم ما لم يشير التعديل الموصى به من الشركة المصنعة إلى حجم مختلف خاص بالأجسام المضادة.
  8. تأكد من الحفاظ على حجم تفاعل التلوين النهائي عند 100 ميكرولتر لكل اختبار للحفاظ على القياس الأمثل للأجسام المضادة إلى المستضد. حضن العينات لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  9. اغسل الخلايا الملونة مرة واحدة باستخدام مخزن الغسيل وأعد تعليق الحبيبة النهائية في 500 ميكرولتر من مخزن الاستحواذ.
  10. جهز ضوابط تعويض ملونة واحدة باستخدام خرزات تعويض في نفس يوم استلام العينة.

4. إعداد الأجهزة وجمع البيانات

  1. قم بإجراء مراقبة جودة يومية لبدء التشغيل على جهاز قياس تدفق الخلايا قبل الحصول على عينات المرضى. تحقق من قيم المياه، ومحاذاة الليزر، وأداء الكاشف، وقيم أهداف الفلورة باستخدام حبيبات معايرة، باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
  2. تحضير ضوابط تعويض ملونة واحدة باستخدام نفس الفلوروكروم الموجودة في لوحات الأجسام المضادة. قم بضبط مصفوفة التعويض قبل اكتساب المريض وتأكد من أن علامات العمود الفقري تبقى ضمن نطاقات الفلورة المحددة مسبقا.
  3. استخدم نفس قالب الاستحواذ، وإعدادات الكاشف، واستراتيجية التعويض، والتسلسل الهرمي لجميع العينات التي تم تحليلها خلال فترة التحقق.
    ملاحظة: ضمان التوافق الصحيح بين الأجهزة من خلال تحديد قيم شدة فلورية متوسطة مستهدفة موحدة لجميع الكواشف التي تستخدم خرز معايرة متخصصة، وتأكد من أن العينات المتطابقة تعطي ملفات فلورية مماثلة عبر المنصات قبل جمع البيانات السريرية.
  4. جمع البيانات بمعدل تدفق منخفض إلى متوسط لتقليل الأحداث المتزامنة والحفاظ على دقة اكتشاف الأحداث النادرة. راقب معدل الأحداث باستمرار أثناء الاستحواذ.
  5. احصل على ما لا يقل عن 500,000 حدث نووي إيجابي ل CD45 لكل نتيجة MRD قابلة للإبلاغ عنها. عندما تسمح جودة العينة واستقرار الأحداث بذلك، قم بتوسيع الجمع إلى 1.0–1.5 مليون حدث إجمالي، خاصة عندما يشتبه في وجود مرض متبقي منخفض المستوى.
  6. توقف أو توقف الاكتساب إذا حدث عدم استقرار سوائلي، أو انسداد العينة، أو تغيرات مفاجئة في معدل الأحداث، أو تدهور واضح في جودة التشتت. أعد تصفية أو إعادة خلط العينة عند الحاجة، واستعاد العينة فقط بعد استعادة التدفق المستقر.

5. البوابة التسلسلية والتفسير المعدل حسب المقام

  1. تحليل بيانات قياس التدفق الخلوي باستخدام برنامج تحليل قياس التدفق الخلوي المعتمد. استخدم نفس استراتيجية البوابات التسلسلية لجميع العينات لتقليل التباين بين المشغلين.
  2. تحديد أنماط نضج طبيعية ومتجددة من خلال الحصول على بنك مرجعي لا يقل عن 20 عينة نخاع عظم طبيعية أو متجددة بشكل مستقل وتحليلها لتكون قوالب تعبير أساسية.
  3. استبعد الحطام باستخدام معاملات التبعثر الأمامي والتشتت الجانبي. عزل الخلايا المفردة عن طريق تطبيق مساحة التشتت الأمامية مقابل المسافة الأمامية لارتفاع التشتت.
  4. استبعد الخلايا غير القابلة للحياة باستخدام بوابة صبغة البقاء المدرجة في جدول المواد. قم بالقضاء على هذه الخلايا غير الحية بشكل روتيني لأنها تظهر ارتباطا بالأجسام المضادة غير المحددة وقد تزيد من الضوضاء الخلفية بشكل مصطنع أو تحاكي مجموعات نادرة شاذة.
    ملاحظة: يتطلب حد أدنى من القابلية للبقاء بنسبة 75٪ للتحليل الأمثل في المراحل النهائية، مع الإشارة إلى أن العينات التي تقل عن هذه القيمة تستحق تفسيرا حذرا فيما يتعلق بالتشويشات النادرة المحتملة. حدد مقام الكريات البيضاء عن طريق تحديد الأحداث الإيجابية ل CD45 القابلة للحياة مع خصائص تشتت جانبية مناسبة.
  5. بالنسبة لعينات B-ALL، اقتصر التحليل على حجرة السلف الموجبة ل CD19. تنفيذ إطار عمل بديل للبوابة للمرضى الذين يتلقون علاجات موجهة لمضادات CD19.
  6. نقل التقييم الأولي إلى أقسام إيجابية للجزء 22 أو 24 أو 34 لالتقاط مجموعة اللوكيميا بشكل مستقل عن تعبير CD19. تقييم أنماط نضج CD34 وCD10 وCD20 وتحديد التجمعات الشاذة باستخدام أنماط تعبير CD38، CD58، CD81، CD66c، CD123، وCD73 أو CD304.
  7. بالنسبة لعينات AML، حدد منطقة الانفجار أو المنطقة السلفية باستخدام CD45، والتشتت الجانبي، وCD34، وCD117.
  8. تقييم التعبير الشاذ أو غير المتزامن لعلامات النخاع وعلامات السلالات المتقاطعة، بما في ذلك CD13، CD33، HLA-DR، CD7، CD56، CD11b، وCD15.
  9. احسب حد الكشف الخاص بالعينة (LOD) وحد القياس (LOQ) باستخدام العدد الكلي للأحداث الإيجابية القابلة للحياة المكتسبة ل CD45 كمقام:
     figure-protocol-2
      figure-protocol-3
  10. صنف التفسير النهائي لاضطراب الاندثرة المغناطيسية إلى واحدة من ثلاث فئات: إيجابية لاضطراب التصوير المفرط، أو أقل من مستوى الرؤية المنخفضة، أو محدودة تحليليا.
    1. اعتبر النتيجة إيجابية لاضطراب الدماغ النفسي عندما يتجاوز تجمع واضح ومتجاورة من الأحداث الشاذة نسبة LOD الخاصة بالعينة، ويظهر وجود نمط مناعي متسق داخليا يختلف عن التجمعات الطبيعية أو المتجددة المسببة لتكوين الدم.
      ملاحظة: لا تصنف الأحداث المتفرقة وغير المجمعة على أنها إيجابية لاضطراب الدماغ المغناطيسي. استخدم نهج تحليل متكامل يجمع بين كل من نموذج المناعة المرتبط باللوكيميا (LAIP) المتتبع من عينة التشخيص الأساسية واستراتيجيات التعرف على أنماط الفرق عن الطبيعي (DfN).
    2. تعيين النتيجة كما هي تحت LOD عندما تكون هناك أحداث نادرة مشبوهة لكنها لا تصل إلى الحد المطلوب للعينة المحددة.
    3. يعتبرون النتيجة محدودة تحليليا عندما يكون حجم المقام غير كاف، أو يكون التخفيف الدموي كبيرا، أو جودة العينة سيئة، أو تمنع القيود التحليلية أو التحليلية التفسيرية السلبية الواثقة.
  11. راجع جميع الحالات الإيجابية لاضطراب الدماغ المغناطيسي والحدية منخفضة المستوى بشكل مستقل بواسطة محلل مؤهل ثان.
  12. إنهاء تفسير قياس خلية التدفق قبل مراجعة بيانات المقارنات الجزيئية المزدوجة، بما في ذلك تفاعل التسلسل الكمي للبوليميراز أو نتائج التسلسل من الجيل القادم.

6. منهجية التحقق التحليلي

  1. تقييم التكرار التحليلي من خلال إعداد أليكوات مكررة من نفس تعليق خلية ما بعد التحلل. احصل على 30 عينة مزدوجة على الأقل وحللها بشكل مستقل.
  2. تقييم الخطية التخفيفية من خلال إعداد التخفيف التسلسلي عبر ستة مستويات ضمن النطاق المتوقع منخفض العبء. قارن القيم المرصودة مع القيم المتوقعة عبر سلسلة التخفيف.
  3. تقييم قابلية تكرار التفاعل بين المشغلات والأجهزة من خلال تحليل عينات مرجعية عبر عدة مشغلين مؤهلين ومقاييس تدفق متناغمة.
  4. تحويل نسب تدفق القياس الخلوي ونسبة MRD الجزيئية المزدوجة باستخدام تحويل log10 قبل المقارنة الإحصائية. تقييم التوافق الكمي باستخدام تحليل الارتباط وتحليل بلاند-ألتمن.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خصائص مجموعة بيانات التنفيذ الروتيني

خلال فترة الدراسة، اجتازت 197 عينة متتالية فحص الأهلية وتقييم الجودة قبل التحليل ودخلت سير العمل القابل للإبلاغ عنها. شملت مجموعة الدراسة 98 مريضا، 62 (63.3٪) مصابين بسرطان الدم اللمفاوي الحاد في الخلايا البائية (B-ALL) و36 (36.7٪) يعانون من سرطان الدم النخاعي الحاد (AML). تكونت المجموعة من 64 ذكرا (65.3٪) و34 أنثى (34.7٪)، مع متوسط عمر 32 سنة (النطاق الربعي [IQR]، 13–49 سنة؛ النطاق 2–73 سنة). كانت نسبة الانفجار الوسيطة 67.2٪ (معدل الذكاء الداخلي، 56.9٪ – 80.2٪).

كانت معظم العينات التي تم تحليلها عبارة عن استنشاق نخاع العظم (174/197، 88.3٪)، في حين شكلت عينات الدم المحيطية 23 من أصل 197 (11.7٪). وفقا لفترات المراقبة المحددة مسبقا، تم جمع 86 عينة (43.7٪) في نهاية العلاج التحريضي، و65 (33.0٪) أثناء علاج التوحيد، و46 (23.4٪) قبل زراعة الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCT) (الجدول 1).

كان متوسط قابلية العينة للبقاء 88.3٪ (معدل الذكاء، 84.4٪ – 92.6٪). حقق سير عمل الاستحواذ متوسط 1,116,901 حدث إجمالي (IQR، 908,521–1,258,946) قبل تنظيف البيانات. بعد الاستبعاد التحليلي المتسلسل للحطام، والخلايا المتزامنة والخلايا غير القابلة للحياة، حققت استراتيجية البوابة متوسط 907,325 حدثا مستهدفا مفردا إيجابيا ليوم CD45 (معدل الذكاء، 690,112–1,095,836)، مع متوسط وقت اكتساب يبلغ 11.9 دقيقة. كان متوسط درجة التخفيف الدموي 0.20 (معدل الذكاء الرجلي، 0.14–0.28). وبعد التفسير المعدل حسب المقام، تم تصنيف 41 عينة (20.8٪) على أنها إيجابية لاضطراب الدماغ المغناطيسي، و156 عينة (79.2٪) على أنها أقل من الحد المحدد-للكشف (LOD) الخاص بالعينة (الجدول 1).

التحقق التحليلي: التكرار، الخطية، والاستقرار

تم تقييم الأداء التحليلي لسير العمل الموحد من خلال التكرار، والخطية التخفيفية، ودراسات الاستقرار قصيرة المدى (الشكل 2). أظهرت التحليلات المكررة المأخوذة من نفس العينات المفصلة بالكتلة قابلية تكرار قوية، مع معامل تباين مكرر وسيط 0.101٪ ومعامل تباين مكرر بنسبة 0.222٪.

figure-results-1
الشكل 2: التحقق التحليلي لسير عمل MRD القياسي متعدد الألوان لقياس تدفق الخلايا الخلوي. (أ) توزيع قابلية العينة للبقاء عبر العينات المحللة. (ب) الارتباط بين القيم المتوقعة والملاحظة للتحليل اللوغاريتمي عبر تجارب التخفيف التسلسلي. (ج) الاتفاق بين تحليلات التكرار المستقلة أثناء تقييم التكرار. (د) استقرار قياسات MRD بعد تخزين درجة حرارة الغرفة عند 0 ساعة، 24 ساعة، و48 ساعة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

لتقييم سلوك الكشف منخفض المستوى، تم تحليل 12 تجربة تخفيف تسلسلي تضم 72 ملاحظة إجمالية عبر النطاق المتوقع لانخفاض الرؤية المغناطيسية. أظهرت القيم الملحوظة للحد والرؤية توافقا قويا مع القيم المتوقعة في التحليل اللوغاريتمي (r = 0.999، معدل R2 = 0.998، ميل = 1.009، تقاطع = 0.018)، مما يشير إلى الحفاظ على الخطية عبر نطاقات الأحداث منخفضة التردد.

أظهرت اختبارات الاستقرار قصيرة المدى انخفاضا تدريجيا في قابلية العينة للبقاء مع مرور الوقت، حيث انخفضت القابلية الوسيطة من 89.1٪ عند 0 ساعة إلى 84.9٪ عند 24 ساعة و80.6٪ عند 48 ساعة. في المقابل، ظل التغير النسبي المطلق الوسيط في عبء MRD محدودا عند 24 ساعة (6.2٪) و48 ساعة (12.0٪)، مما يدعم المعالجة الروتينية خلال فترة 24 ساعة بعد الجمع.

قابلية التكرار بين المشغلات وبين الأجهزة

تم تقييم قابلية تكرار التفاعل بين المشغلات وبين الأجهزة باستخدام 24 عينة مرجعية تم تحليلها عبر عدة مشغلات وأجهزة قياس تدفق متناغمة، مما أنتج 96 تقييما إجماليا. كان الانحراف المطلق النسبي الوسيط عن القيم المرجعية 13.7٪. تظهر هذه النتائج أداء تحليليا متسقا بعد توحيد تجهيز العينة، وإعدادات الاقتناء، واستراتيجيات البوابات المتسلسلة (الجدول 2).

الجدول 2: مؤشرات التحقق التحليلي وأداء مقارنة الطرق لسير العمل المعياري القابل للقياس للمرض المتبقي. يقتصر هذا الجدول على نتائج التحقق، بما في ذلك تكرار الاختبار داخل الاختبار، الخطية التخفيفية، الاستقرار قصير المدى، قابلية التكرار بين المشغلات والأجهزة، ومقاييس مقارنة الطرق الجزيئية المتعامدة؛ ولا يكرر التركيبة السكانية للمرضى أو خصائص العينات المبلغ عنها في الجدول 1. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الجدول.

التطبيق السريري ومقارنة الطرق المتعامدة

تم إجراء مقارنة متعامدة باستخدام 117 عينة مزدوجة، منها 75 تم تحليلها بواسطة تفاعل بوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) و42 بواسطة التسلسل من الجيل التالي (NGS). راقبت تقييمات qPCR بشكل أساسي نصوص الدمج الخاصة بالأمراض التي تم إعدادها عند التشخيص، بما في ذلك BCR::ABL1 وRUNX1::RUNX1T1 وPML::RARA. قامت طرق NGS بتقييم إعادة ترتيب جينات الغلوبولين المناعي المستنسخ أو مستقبلات الخلايا التائية لسرطان الدم اللمفاوي وتتبعت الطفرات الجسدية المتكررة باستخدام لوحات مستهدفة لسرطان الدم النخاعي الحاد. أظهرت قيم MRD في تدفق الخلايا ارتباطا قويا مع نتائج جزيئية مزدوجة عبر مستويات الأمراض القابلة للقياس (r = 0.893 في التحليل اللوغاريتمي).

أظهر تحليل بلاند-ألتمان فارقا لوغاريتميا متوسطا قدره −0.093 مع حدود توافق تتراوح من −0.848 إلى 0.663 (الشكل 3). من بين الحالات المتنافرة، تم تحديد نتيجة سلبية كاذبة واحدة بين 25 عينة إيجابية جزيئيا. أظهر سير العمل نسبة موافقة إيجابية بنسبة 78.1٪، وتوافق بنسبة سلبية بنسبة 97.6٪، ومعدل توافق إجمالي بلغ 92.3٪.

figure-results-2
الشكل 3: التطبيق السريري والتحقق المتعامد لتقييم MRD المعياري. (أ) توزيع حالات MRD الإيجابية عبر مجموعات الأمراض وفترات الرصد. (ب) الارتباط بين قيم MRD الجريان الخلوي ونتائج المقارن الجزيئي المزدوج في التحليل اللوغاريتمي. (ج) تحليل بلاند-ألتمن يقارن بين قياسات تدفق الخلايا والقياس الجزئي المزدوج، مع خطوط أفقية تدل على الانحياز المتوسط وحدود التوافق بنسبة 95٪ عبر النطاق التحليلي. (د) توزيع النتائج الإيجابية ل MRD عبر فترات مراقبة العلاج. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تظهر هذه النتائج أن سير عمل قياس تدفق الخلايا متعدد الألوان الموحد حقق توافقا قويا مع اختبارات MRD الجزيئي المتعامد عبر العينات السريرية الروتينية.

الجدول الإضافي 1: معايير تشغيلية شاملة لسير عمل الأمراض المتبقية القابل للقياس في قياس تدفق الخلايا متعدد الألوان. يحدد هذا الجدول الموحد المكونات المنهجية الأساسية المقسمة إلى أقسام مميزة. القسم أ يوضح تكوينات لوحات الأجسام المضادة الخاصة بالمرض، حيث يعتمد اختيار CD73 أو CD304 على التشخيص الأساسي التشخيصي المرتبط بسرطان الدم. يوضح القسم ب أهداف معالجة العينات قبل التحليلية الموحدة واستحواذ التدفق الخلوي. يحدد القسم ج عتبات التقارير المعدلة حسب المقام إلى جانب معايير التفسير النهائي. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان الهدف الأساسي من هذه الدراسة هو إنشاء سير عمل موحد لتقييم تدفق الخلايا متعدد الألوان للمرض المتبقي القابل للقياس (MRD) في سرطان الدم الحاد. يعتمد التقييم الموثوق للعينات المغناطيسية ليس فقط على اختيار لوحة الأجسام المضادة، بل أيضا على التعامل المتسق مع العينة، ومعايير الاكتساب، وتفسير البيانات11. تظهر نتائج هذه الدراسة أن معالجة العينات المتناسقة، وعمق الاستحواذ المسيطر عليه، ومعايير التقارير المعدلة حسب المقام يمكن أن تحسن قابلية التحليل في البيئات المختبرية السريرية الروتينية. تتوافق هذه النتائج مع الجهود الأخيرة لتوحيد تقييم تدفق الخلايا والديناميكية المغناطيسية عبر مؤسسات ومشغلينمختلفين.

مكون مهم في هذا السير هو إجراء تحلل خلايا الدم الحمراء الجماعية المعتمد على كلوريد الأمونيوم. يتطلب اكتشاف MRD النادر اكتساب المقامات الخلوية الكبيرة لتحقيق حساسية تحليلية كافية. مكن تحضير التحلل الجماعي المعياري من استعادة مستمرة لعدد كاف من الخلايا النوية، وغالبا ما تجاوزت 1.0–1.5 مليون حدث مكتسب، مع الحفاظ على صلاحية العينات المقبولة. وكما أكدت الدراسات السابقة من اتحاد يوروفلو أن اكتساب الأحداث العالية ضروري لدعم الكشف الحساس والقابل للتكرار في MRD13. في العينات ذات الحساسية التحليلية دون المستوى الأمثل، يجب أن يشمل استكشاف الأخطاء تقييم حجم العينة، واستعادة الخلية، وعمق الاستحواذ.

يشمل هذا البروتوكول أيضا تقييما روتينيا للتخفيف الدموي قبل تفسير نتائج انخفاض مستوى التخفيف. يظل التخفيف يمثل قيدا رئيسيا قبل التحليل في اختبارات MRD المعتمدة على نخاع العظم، حيث يمكن أن يقلل تلوث الدم المحيطي بشكل مصطنع العبء الظاهري للسرطان الدموي. دمج درجة تخفيف الدم شبه الكمية مباشرة في سير عمل التقارير يوفر حماية إضافية ضد سوء التفسير على أنه سلبي كاذب. أفادت دراسات سابقة أن التخفيف الدموي يؤثر بشكل كبير على موثوقية تحليل التدفق الخلوي MRD في سرطان الدم النخاعي الحاد7. لذا يجب تفسير العينات التي تظهر تخفيفا دمويا كبيرا (≥0.40) بحذر، خاصة عندما يكون عمق الاستحواذ أو حفظ السلف في النخاع غير كاف.

أظهرت المقارنة المتعامدة التي أجريت في هذه الدراسة توافقا قويا بشكل عام بين طرق تقييم التدفق الخلوي والجزيئي لتقييم MRD. ومع ذلك، تؤكد الحالات المتنافرة أيضا أن قياس تدفق الخلايا والاختبارات الجزيئية تقيم الجوانب البيولوجية المميزة للمرض المتبقي. أظهرت دراسات سابقة أن التحولات الظاهرية، وتطور الاستنساخ، وتجمع الدم التجديدي قد تسهم في التناقضات بين المنصات التحليلية14. في B-ALL، يبقى التمييز بين السلف المتبقي لللوكيميا عن الهيماتوجون الطبيعية تحديا خاصا عند أعباء الأمراض المنخفضة ويتطلب تفسيرا متكاملا لأنماط الحمض المناعي متعددة الأبعاد بدلا من تشوهات المستضدات المعزولة15. لهذا السبب، تمت مراجعة جميع حالات اضطراب التفكك الحدي والمنخفض المستوى في هذا السير بشكل مستقل من قبل محلل ثان.

لهذه الدراسة عدة قيود. أولا، تم إجراء التحقق في مؤسسة واحدة باستخدام عدد محدود من الأدوات المتناغمة. ثانيا، تم تضمين عينات الدم المحيطية فقط في حالات سريرية مختارة لأنها لا تستطيع استبدال نخاع العظم في تقييم MRD الروتيني بعد العلاج في معظم بيئات اللوكيميا الحادة. بالإضافة إلى ذلك، لا تزال بعض المعايير التحليلية، بما في ذلك تقييم التخفيف الدموي وتفسير الأحداث على المستوى المنخفض، تتطلب مراجعة من المشغل ذو الخبرة رغم سير العمل الموحد. ومع ذلك، يوفر البروتوكول إطارا عمليا للتنفيذ السريري الروتيني لتقييم MRD متعدد الألوان الموحد16,17. من خلال دمج تقييم الجودة قبل التحليل، واستراتيجيات الاستحواذ الموحدة، ومعايير التفسير المعدلة حسب المقام، يدعم هذا السير في تقارير MRD أكثر قابلية للتكرار والاتساق سريريا عبر الممارسات المختبرية الروتينية.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلف قسم المختبرات السريرية في مستشفى الشعب الثاني في نيجيانغ على توفير مرافق مختبرية ودعم فني لهذه الدراسة. كما يشكر المؤلف طاقم المختبر والطاقم السريري على مساعدتهم في معالجة العينات وجمع البيانات. وأخيرا، يشكر المؤلف المرضى الذين ساهمت عيناتهم السريرية المتبقية في هذا العمل. لم يتلق هذا البحث أي تمويل محدد من وكالات التمويل العامة أو التجارية أو غير الربحية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Acquisition bufferLaboratory-preparedPBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA; final resuspension volume 500 µLFinal resuspension before flow cytometric acquisition
AML Tube 1 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsEarly myeloid/blast identification
AML Tube 1 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 1 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsImmaturity marker
AML Tube 1 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsLeukocyte backbone marker and denominator definition
AML Tube 1 anti-CD56-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: NCAM16.2; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsAberrant blast-associated phenotyping
AML Tube 1 anti-CD7-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: M-T701; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsCross-lineage aberrancy detection
AML Tube 1 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation and subtype discrimination
AML Tube 2 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsEarly myeloid/blast identification
AML Tube 2 anti-CD11b-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: ICRF44; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation-discordance assessment
AML Tube 2 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 2 anti-CD15-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI98; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsDifferent-from-normal myeloid pattern assessment
AML Tube 2 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 2 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsImmaturity marker
AML Tube 2 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsLeukocyte backbone marker and denominator definition
AML Tube 2 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation and subtype discrimination
Ammonium chloride-based red blood cell lysis bufferLaboratory-prepared / commercial supplierAmmonium chloride-based lysis buffer; 10 mL/test; 10 min at room temperatureBulk red blood cell lysis
Analysis softwareBeckman Coulter (Brea, CA, USA)Kaluza 2.1Data analysis and sequential gating
Automated hematology analyzerCommercial supplierAutomated hematology analyzer used for nucleated cell concentration and viability assessmentNucleated cell concentration and viability assessment
B-ALL Tube 1 anti-CD10-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI10a; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsPrecursor B-cell definition
B-ALL Tube 1 anti-CD19-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: SJ25C1; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsB-lineage identification and entry into precursor compartment
B-ALL Tube 1 anti-CD20-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L27; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation pattern assessment
B-ALL Tube 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Heuser M, et al. 2021 update on measurable residual disease in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2021;138(26):2753–67.
  2. Cloos J, Heuser M, Freeman SD. 2025 update on MRD in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2025;147(11):1147–64.
  3. Verbeek MWC, Lucio P, Szczepański T. Minimal residual disease assessment in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia by standardized next-generation flow cytometry. eJHaem. 2024;5(2):110–20.
  4. Virk H, Jain P, Sengar M. Flow cytometric MRD assessment in acute lymphoblastic leukemia: Practical advantages and interpretive considerations. Indian J Hematol Blood Transfus. 2023;39(3):350–62.
  5. Brando B. Rules in rare event acquisition: An overview. Cytometry B Clin Cytom. 2019;96(6):448–53.
  6. EuroFlow Consortium. Standardized EuroFlow Protocols [Internet]. EuroFlow; 2025. Available from: https://euroflow.org/protocols/ (accessed 2026 Jan 15).
  7. Tettero JM, Heidinga ME, Mocking TR. Impact of hemodilution on flow cytometry-based measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2024;38(2):297–305.
  8. Buccisano F, et al. Prognostic and therapeutic implications of measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Blood. 2012;119(2):332–41.
  9. Schuurhuis GJ, Heuser M, Freeman S. Minimal/measurable residual disease in AML: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2018;131(12):1275–91.
  10. Terwijn M, van Putten WLJ, Kelder A. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: Data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 2013;31(31):3889–97.
  11. Smith AB, Jones CD. Computational models, and tools for future development in flow cytometry. Cancer Metastasis Rev. 2026;45(1):88–102.
  12. Jum’ah HA, Ali S, Hwang Y. Measurable residual disease analysis by flow cytometry: Assay validation and characterization of 385 consecutive cases of acute myeloid leukemia. Cancers. 2025;17(7):1155.
  13. Theunissen P, et al. Standardized EuroFlow flow cytometric method for B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) MRD assessment. Blood. 2017;129(3):347–57.
  14. Haaksma LH, Mocking TR, Kelder A. Flow cytometric and molecular measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2025;66(1):45–55.
  15. Das N, Yadav P, Seth T. Analytical appraisal of hematogones in B-ALL MRD assessment using multidimensional dot-plots by multiparametric flow cytometry: A critical review and update. Indian J Hematol Blood Transfus. 2024;40(1):12–24.
  16. Korkina YS, Popov AM, Tserenov DG. False-positive flow cytometric measurable residual disease in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2024;106(2):120–31.
  17. Mocking TR, et al. Computational measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia: a retrospective validation in the HOVON-SAKK-132 trial. Leukemia. 2025;39(10):2559–62.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة