دور سانكي بايجي سان في التخفيف من إصابة خلايا الظهارة المعدة الناتجة عن الإيثانول عبر الإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT

ملخص

تصف هذه الدراسة نموذجا في المختبر لتقييم التأثيرات الوقائية لسانكي بايجي سان ضد إصابة الخلايا الظهارية المعدية الناتجة عن الإيثانول ودورها في الإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT.

الملخص

هدف هذا العمل إلى توضيح آلية الحماية لسانكي بايجي سان (SQBJ) ضد إصابة الخلايا الطهارية المعدة الناتجة عن الإيثانول واستكشاف مدى أهميتها المحتملة لقرح المعدة (GU). تم استخدام علم الأدوية الشبكي لفحص المكونات النشطة ل SQBJ (قاعدة بيانات وتحليل أنظمة الطب الصيني التقليدية [TCMSP]، التوافر البيولوجي الفموي [OB] ≥ 20٪، التشابه الدوائي [DL] ≥ 0.1)، ورسم خريطة أهدافها (Universal Protein Resource [UniProt])، وجمع الأهداف المتعلقة ب GU (بطاقات الجينات/OMIM/DrugBank)، وتحليل الأهداف المتداخلة عبر إثراء وربط الجزيئات من خلال أنطولوجيا الجينات (GO)/موسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG). تم علاج خلايا خط خلايا الظهارة المعدة المصابة بالإيثانول (GES-1) ب SQBJ أو مثبط PI3K LY294002. تم استخدام CCK-8 لتحديد التركيز الأمثل ل SQBJ. حددت تحليلات علم الأدوية الشبكي 126 هدفا شائعا مغذيا ضمن سلاسل PI3K/AKT/MAPK، وأشارت إلى تفاعلات محتملة بين مكونات SQBJ الرئيسية والبروتينات المرتبطة ب PI3K/AKT. في الخلايا التي تواجه تحديات الإيثانول، خفف SQBJ من إصابة الخلايا من خلال تقليل إطلاق الوسيط الالتهابي والإجهاد التأكسدي، كما يتضح من انخفاض أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا ومستويات المالونديالديهايد. استعاد SQBJ إمكانات غشاء الميتوكوندريا ومحتوى ATP وقلل من التغيرات المرتبطة بالموت المبرمج في مستويات بروتين X المرتبط بالخلايا B-2، والكاسباز-3 المشقوق، ومستويات بروتين X المرتبطة ب Bcl-2. كما قام SQBJ بتعديل علامات الإشارة المرتبطة ب PI3K/AKT وMAPK. وقد أضعفت هذه التأثيرات الوقائية إلى حد كبير بسبب LY294002، مما يشير إلى أن الإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT تشارك في حماية الخلايا التي توسطها SQBJ. توفر هذه النتائج أساسا ميكانيكيا في المختبر لتطبيق SQBJ المحتمل في GU، رغم الحاجة إلى مزيد من التحقق في نماذج الحيوانات لقرح المعدة الناتج عن الإيثانول.

المقدمة

قرحة المعدة (GU) هي اضطراب هضمي منتشر جدا في جميع أنحاء العالم، ويتميز بالتهاب موضعي، وتعرية، وتقرحات في الغشاء المخاطي المعدي. وفقا للتقديرات التي أظهرتها تحليل العبء العالمي للأمراض لعام 2021 (GBD 2021)، لا يزال مرض قرحة المعدة (PUD) يفرض عبئا سريريا واقتصاديا كبيرا على ملايين المرضى حول العالم. على الرغم من أن انتشار PUD قد انخفض مع الاعتماد السريري الواسع والمكثف على أنظمة مكافحة العدوى ومثبطات مضخة البروتون المثبطة للأحماض (PPIs)، إلا أن هذا الاتجاه التنازلي قد استقر، مع لوحظ انتعاش حتى في بعض المناطق¹. ومن الجدير بالذكر أن استهلاك الكحول (الإيثانول) عامل ممرض حاسم مستقل عن عدوى هيليكوباكتر بيلوري (H. pylori) واستخدام الأدوية المضادة للالتهابات غير الستيرويدية (NSAID). يؤدي تناول الكحول المفرط لفترة طويلة إلى تلف الحاجز المخاطي المعدي، ويسرع تطور القرحة، بل ويزيد من قابلية الإصابة بالأورام الخبيثة المعدية—مما يجعل هذه الحالة أزمة صحية دولية حرجة². في الدول النامية، يزداد معدل إصابة المخاط المعدة المرتبطة بالكحول بسبب عوامل متعددة، منها زيادة استهلاك الكحول وتغييرات نمط الحياة، مما يخلق حاجة ملحة لاستراتيجيات الوقاية والعلاج الفعالة والآمنة.

الآلية المرضية الكامنة وراء إصابة الغشاء المخاطي المعدة الناتجة عن الإيثانول متعددة العوامل ومتعددة الطبقات. عند ملامسة مباشرة مع الغشاء المخاطي المعدي، يقوم الإيثانول بسرعة باضطراب حاجز المخاط وبيكربونات ويؤدي إلى زيادة غير منضبطة في أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا (ROS). يؤدي هذا الانفجار التأكسدي لاحقا إلى تحفيز تأكسد الدهون (يتسم بارتفاع المالونديالديهايد، MDA)، ويستنزف مضادات الأكسدة الداخلية داخل بطانة المعدة، بما في ذلك إزياز الأكسجين الفائق (SOD)، بالإضافة إلى الجلوتاثيون (GSH)، وفي النهاية يسبب خللا في وظيفة الميتوكوندريا³. تشير الأدلة المتراكمة إلى أن ROS داخل الخلية الناتج عن الإيثانول مشتق أساسا من الميتوكوندريا ويرتبط ارتباطا وثيقا بانهيار جهد الغشاء الميتوكوندري الداخلي (Δψm) وتثبيط تخليق الأدينوزين ثلاثي الفوسفات (ATP)⁴. وفي الوقت نفسه، ينشط الإجهاد التأكسدي السلاسل الالتهابية تحت قيادة العامل النووي-كابا B (NF-κB). يؤدي هذا التنشيط لاحقا إلى تعزيز الإفراز الضخم للوسطاء الالتهابيين، وخاصة عامل نخر الورم-α (TNF-α)، والإنترلوكين-6 (IL-6)، والبروتين التفاعلي C (CRP)، مما يشكل دورة مفرغة من "الاستجابة الالتهابية الإجهادية التأكسدية"⁵. وبناء على ذلك، يتم تحفيز التسلسل الماستي الداخلي الذي تحركه الميتوكوندريا، كما يتضح من اضطراب نسبة Bcl-2 إلى Bax إلى جانب الانقسام الإنزيمي المتسلسل للبروتيناز الخاص بالسيستينيل الأسبارتات 3 (كاسباز-3)، مما يؤدي في النهاية إلى موت جماعي لخلايا الظهارة المخاطية في المعدة^وتكوين القرحة6. وبناء عليه، فإن الاستهداف المتزامن للروابط المرضية الثلاثة الأساسية: الإجهاد التأكسدي، والاستجابة الالتهابية، والموت المبرمج يمثل استراتيجية رئيسية للتدخل الفعال في إصابة مخاطية المعدة الكحولية.

يشكل مسار الإشارة من الفوسفينوسيتيد 3-كيناز/كيناز البروتين B (PI3K/AKT) محورا تنظيميا مركزيا يتحكم في طول عمر الخلية والتكاثر والموت المبرمج، ويؤدي دورا حيويا في الحفاظ على توازن الغشاء المخاطي المعدي. بعد التفعيل، يقوم إشارة PI3K/AKT بفسفوريلة عدة ركائز في الأسفل المائي، وتثبط نشاط العامل المؤدي للاستماتة Bad، مما يعيق هروب السيتوكروم c المدمر للخلايا إلى الميتوكوندريا، ويحافظ على توازن ΔΨm، ويعزز بقاء الخلية⁷. علاوة على ذلك، هناك تداخل معاد معقد بين سلسلة PI3K/AKT وشبكتي كيناز البروتين المنشط بالميتوجين (MAPK): يمكن أن يؤدي التنشيط المنظم العالي ل PI3K/AKT إلى تخفيف ردود فعل نقل الإشارات الالتهابية وتفاعلات التسلسل المبوتج عن طريق تثبيط تنشيط الكينازات الإجهادية، بما في ذلك p38، وكيناز C-Jun N-terminal (JNK)، والكيناز البروتيني المنظم خارج الخلوي (ERK)⁸. أشارت العديد من الدراسات إلى أن انخفاض نشاط مسار PI3K/AKT مرتبط ارتباطا وثيقا بتفاقم الالتهاب وزيادة الاستماتة المبرمجة في نماذج إصابات الغشاء المخاطي المعدي، بينما يمكن لاستعادة نشاط هذا المسار أن يخفف بشكل كبير من إصابة الغشاء المخاطي⁹. ومع ذلك، هناك حاليا نقص في التحقق النظامي التجريبي السببي حول الآلية التنظيمية الدقيقة ل PI3K/AKT في إصابة الغشاء المخاطي المعدة الناتجة عن الإيثانول، لا سيما علاقتها التآزرية مع مسار MAPK.

فيما يتعلق بالعلاج الدوائي الحديث، تعتبر مثبطات مضخة البروتون الخيار الأول للإدارة السريرية للغسيل المزمن، ومع ذلك فإن إدخالها طويل الأمد أثارت مخاوف متزايدة بشأن السلامة. وقد ربطت الدراسات المتراكمة استخدام مثبطات مضخة البروتون المزمن بمجموعة متنوعة من النتائج السلبية، بما في ذلك أمراض الكلى، والأحداث القلبية الوعائية، والكسور العظمية، ونقص العناصر الغذائية (الحديد، المغنيسيوم، وفيتامين ب12)، وكلوستريدويديس ديفيسيل. العدوى، وحتى ارتفاع خطر الإصابة بسرطان المعدة¹⁰. علاوة على ذلك، تم تأكيد ظاهرة فرط إفراز حمض المعدة المرتدة بعد توقف مثبطات مضخة البروتون (PPI) من خلال بيانات اليقظة الدوائية واسعة النطاق¹¹. دفعت هذه المخاطر الأمنية مجتمعات السرير والبحث الأساسي إلى استكشاف علاجات بديلة ذات آليات حماية متعددة الأهداف، وأقل آثار جانبية، وملاءمة للاستخدام طويل الأمد. على وجه الخصوص، جذبت التحضيرات الطبيعية من الطب الصيني التقليدي (TCM) اهتماما واسعا بسبب مفهومها العلاجي الشامل ل "متعدد المكونات، متعدد الأهداف، ومتعدد المسارات"¹².

مسحوق سانكي بايجي (SQBJ) هو تركيبة مركبة كلاسيكية من الطب الصيني التقليدي تتكون من نوتوجينسينغ باناكس وبلتيلا سترياتا بنسبة كتلة 1:1. يشتهر باناكس نوتوجينسنج بفعاليته في تعزيز الدورة الدموية ووقف النزيف، بالإضافة إلى تخفيف التورم المؤلم. مكوناته الحيوية النشطة الأساسية، بما في ذلك نوتوجينسينوسيد R1 إلى جانب الجينسينوسيدات (Rg1، Rb1)، تمارس تأثيرات مضادة للالتهابات ومضادات أكسدة وإصلاح الغشاء المخاطي بشكل كبير. تتميز بليتيلا سترياتا بتأثيراتها القابضة التي توقف النزيف، وتقلل التورم، وتعزز تجديد الأنسجة التالفة. في الوقت نفسه، وثق Bletilla striata polysaccharide (BSP)، الذي يعد مستخلص النشط الأساسي له، فعاليته في كبح سلسلة JNK/p38 MAPK، مما يقلل من تعبير الإنترلوكين-1β (IL-1β)، TNF-α، وIL-6، ويعزز قدرة الدفاع المضادة للأكسدة في الغشاء المخاطي¹³ في المعدة. أكدت الأدلة الأدبية المتراكمة أن الإعطاء المشترك لسابونينات Panax notogens. (PNS) وBSP يمارس تأثيرا تآزريا في نماذج قرحة المعدة الكحولية¹⁴، وأظهرت التحضيرات المرتبطة ب SQBJ تأثيرات حماية مخاطية كبيرة في الدراسات ما قبل السريرية لالتهاب المريء والقرحة المعدية¹⁵. ومع ذلك، لا يوجد حاليا تحقق منهجي من التجارب المخبرية لآلية مسار الإشارة التي تكمن وراء التأثير الوقائي المخاطي المعدة ل SQBJ، خاصة الدور الأساسي لمسار PI3K/AKT وعلاقته التنظيمية مع MAPK. وفي الوقت نفسه، لم يتم بعد توضيح العلاقة السببية بين المواد الكيميائية المحورية والمستقبلات الوظيفية ل SQBJ بشكل كامل.

ولمعالجة هذه الفجوات، اعتمدت هذه الدراسة استراتيجية بحثية متكاملة تجمع بين علم الأدوية الشبكي والتحقق التجريبي في المختبر ، مستخدمة خط الخلايا GES-1 الذي يواجه تحديات الإيثانول كمنصة تجريبية لدراسة الآلية الجزيئية المحتملة الكامنة وراء التأثيرات الوقائية للظهارة المعدة ل SQBJ، مع التركيز على الإجهاد التأكسدي، الاستجابات الالتهابية، العمليات المبوية، والإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT. والتغييرات المرتبطة ب MAPK. أولا، استخدمنا LY294002 مثبط PI3K لتقييم تورط إشارات PI3K/AKT بشكل أولي ووجدنا أن تثبيط هذا المسار يقلل من تأثير الحماية ل SQBJ، مما يشير إلى أن الإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT تساهم في الحماية الخلوية التي يوسطها SQBJ. ثانيا، استكشفنا العلاقة بين التغيرات المتعلقة ب PI3K/AKT وتنظيم مسار MAPK، مقدمين أدلة أولية على أن تغييرات إشارات MAPK قد تكون مرتبطة بتعديل SQBJ للاستجابة الوظيفية لمحور PI3K/AKT. يضع هذا العمل إطارا جزيئيامختبيا لتقييم كيفية تخفيف SQBJ من إصابة ظهارة المعدة الناتجة عن الإيثانول ويوفر أدلة أولية لمزيد من الاستكشاف لصيغ مركبات الطب الصيني التقليدي في إصابات مخاطية المعدة الكحولية. ومع ذلك، لا تزال هناك حاجة إلى تجارب حيوانية لتأكيد ما إذا كان يمكن ترجمة هذه التأثيرات الوقائية الخلوية إلى فعالية علاجية داخل الجسم الحي ضمن النماذج التجريبية لتقرحات المعدة الناتجة عن الكحول (الشكل التكميلي S1).

البروتوكول

لم تشمل هذه الدراسة مشاركين بشريين، أو عينات من الأنسجة البشرية، أو عينات سريرية، أو تجارب حيوانية. تم استخدام موارد قواعد بيانات متاحة للجمهور ومجهولة الهوية لتحليل علم الأدوية الشبكي، واستخدمت خلايا GES-1 المتاحة تجاريا في تجارب المختبر. لذلك، لم تكن هناك حاجة للموافقة الأخلاقية الرسمية والموافقة المستنيرة. يتم تلخيص المعلومات التفصيلية حول المواد الكيميائية الرئيسية، والأجسام المضادة، ومجموعات الاختبار، والأجهزة، والمصنعين، وأرقام الكتالوج، ومعرفات موارد البحث (RRIDs)، حيثما ينطبق، في جدول المواد.

تحضير ومراقبة جودة مستخلص SQBJ المائي

المواد العشبية
المواد الخام لفطر Panax notoginseng (Burk)، F. H. Chen (الجذر والجذمور) وBletilla striata.(Thunb. ex A. Murray) تم الحصول على Rchb. f. (درنة) من مورد تجاري للطب الصيني التقليدي وتم التحقق منه لاحقا من قبل صيدلي كبير في طب الصيني الصيني بعد الدواء الصيني (طبعة 2025). عينات القسائم (رقم. SQBJ-20240301، رقم PN-20240301، رقم BS-20240301) تم إيداعهم في معشبة مؤسستنا. تم سحق وخلط العشبتين بنسبة كتلة 1:1 لتحضير مسحوق SQBJ.

تحضير مستخلص SQBJ المائي
خضع مسحوق SQBJ لاستخلاص مرتين متتاليتين من الارتجاع باستخدام ماء منزوع الأيونات بنسبة صلبة إلى سائل 1:10 (g/mL) لمدة ساعة في كل جلسة. بعد ذلك، تم دمج المستخلصات المجمعة وتمريرها عبر أربع طبقات من الشاش الطبي لإزالة المواد المتبقية. تم تركيز الترشيح الناتج تحت ضغط منخفض عند 60 درجة مئوية حتى وصل إلى كثافة نسبية بين 1.05–1.10، تليها تجفيف بالتجميد بفراغ للحصول على مسحوق مستخلص مائي SQBJ، مع عائد استخراج نهائي 18.2٪ ± 0.6٪. تم ختم مسحوق المستخلص وتخزينه عند −20 درجة مئوية، وذوبه في وسط DMEM خال من المصل، ثم مرر عبر مرشح غشاء بحجم 0.22 ميكرومتر للتعقيم قبل تجارب الخلية.

مراقبة جودة مستخلص SQBJ المائي
لتقييم اتساق الدفعة إلى الدفعة وتوحيد مستخلصات SQBJ المائية، أجرينا التحديد الكمي إلى جانب تحليل بصمة البصمات بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). يسرد جدول المواد المعايير الفنية الشاملة المتعلقة بنظام HPLC. استنادا إلى الملفات الكيميائية لكلا العشبتين المكونتين، استهدفنا أربعة مؤشرات تمثيلية: نوتوجينسينوسيد R1، جينسينوسيد Rg1، جينسينوسيد Rb1، وميليتارين. ومع ذلك، فإن استراتيجية مراقبة الجودة القائمة على HPLC عكست بشكل رئيسي عدة مكونات ممثلة ولم توفر ملفا كيميائيا شاملا لجميع المركبات الفعالة في SQBJ.

تم تحقيق الفصل الكروماتوغرافي عبر عمود C18 معكوس الطور (4.6 مم × 250 مم، 5 ميكرومتر). تم الحفاظ على العملية عند درجة حرارة عمود 30 درجة مئوية، مع معدل تدفق 1.0 مل/دقيقة، وحجم حقن 10 ميكرولتر، وطول موجة كشف 203 نانومتر. تكون تركيب الطور المتحرك من أسيتونونتريل (A) ومحلول مائي بحمض الفوسفوريك 0.1٪ (B)، باستخدام المسافة التدرجية التالية: 0–15 دقيقة، 19٪ أم؛ 15–35 دقيقة، 19٪–35٪ A; 35–55 دقيقة، 35٪–55٪ A; و55–60 دقيقة، 55٪–19٪ A. معلومات مفصلة عن الأدوات والعمود متوفرة في جدول المواد.

تحضير المادة المرجعية
لإجراء التحليل الكمي، حصلنا على معايير تجارية لنوتوجينسينوسيد R1، جينسينوسيد Rg1، جينسينوسيد Rb1، والعسكري، جميعها بنقاء ≥ 98٪. تم قياس المواد الكيميائية المرجعية الفردية بدقة وإذابتها في مخزون ميثانول واحد لتحقيق محلول مرجعي مختلط موحد بتركيز نهائي يبلغ 50 ميكروغرام/مل لكل مكون.

تحضير العلبة:
تم قياس مسحوق مستخلص الماء الجاف SQBJ بدقة (50 ملغ)، تلاها إذابة باستخدام 25 مل من الميثانول التحليلي. خضع هذا الخليط لمعالجة حمام فوق صوتي لمدة 30 دقيقة تحت معايير أجهزة مراقبة (القدرة: 250 واط؛ التردد: 40 كيلوهرتز). بعد التوازن مرة أخرى إلى درجة حرارة الغرفة المحيطة، تم تمرير السائل عبر غشاء مرشح عضوي بحجم 0.22 ميكرومتر للحصول على محلول تحليلي نهائي.

نتائج تحديد المحتوى:
كان متوسط محتوى المكونات الأساسية المميزة في ثلاث دفعات متتالية من مستخلص SQBJ المائي كما يلي: نوتوجينسينوسيد R1 3.12 ± 0.11 ملغ/غ، جينسينوسيد Rg1 8.45 ± 0.23 ملغ/غ، جينسينوسيد Rb1 5.26 ± 0.18 ملغ/غ، وميليتارين 2.78 ± 0.09 ملغ/غ، مع < نسبة RSD لكل مكون 5٪ بين الدفعات، مما يؤكد اتساقا جيدا من دفعة إلى دفعة للمستخلص.

بيان الأخلاقيات والامتثال
لم تشارك الدراسة في أي من التجارب على الحيوانات أو تضمين عينات سريرية بشرية أو خزعات أنسجة أو مواضيع حية طوال هذه الدراسة. تم إجراء تحليل علم الأدوية الشبكي باستخدام قواعد بيانات متاحة للجمهور، بما في ذلك TCMSP، UniProt، GeneCards، OMIM، DrugBank، STRING، Metascape، PubChem، وRCSB PDB. جميع البيانات التي تم استرجاعها من هذه قواعد البيانات كانت متاحة للجمهور وتم إخفاء هويتها؛ لذلك، كان تصنيف المعلوماتية الحيوية معفى تماما من طلب موافقة رسمية مستنيرة أو رقابة أخلاقية إضافية.

أجريت التجارب الحالية في المختبرات باستخدام خط الخلايا الظهارية المخاطية المعدية المتوفر تجاريا في البشر GES-1. لم تستخدم أي خلايا بشرية أولية أو مواد بيولوجية مشتقة من المرضى. تم الحصول على خط الخلية من مستودع خلوي موثق وتم التعامل معه وفقا لإرشادات السلامة البيولوجية وزراعة الخلايا المؤسسية. ونظرا لأن هذه الدراسة شملت فقط خطوط خلوية قائمة وقواعد بيانات متاحة للجمهور، فقد تم استثناءها من الموافقة الرسمية من لجنة الأخلاقيات المؤسسية. تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية وفقا لمتطلبات السلامة والامتثال البحثي المؤسسي المؤسسي.

دراسات علم الأدوية الشبكي

تحديد وفحص أهداف المكونات الفعالة
تم استرجاع المكونات الفعالة ل Panax notoginseng وBletilla striata.، وهما العشبان المكونان ل SQBJ، من قواعد بيانات متاحة للجمهور. جميع المعلومات المشتقة من قواعد البيانات المستخدمة في هذه الدراسة كانت متاحة للجمهور ولم تحتوي على معلومات شخصية قابلة للتعريف. باستخدام الأسماء النباتية كاستعلامات، حددنا المواد الكيميائية النباتية المرشحة من قاعدة بيانات وتحليل أنظمة الأدوية التقليدية للطب الصيني (TCMSP). لتحديد الجزيئات النشطة الحيوية المؤهلة، طبق بروتوكول الفحص عتبات التوافر البيولوجي الفموي (OB) ≥ 20٪ ونسبة الشبه الدوائي (DL) ≥ 0.1. بعد ذلك، حددنا الأهداف الجينية المحتملة لاحقا المرتبطة بهذه المكونات المرشحة، مع استبعاد أي مكونات لا تحتوي على أهداف جينية صحيحة مطابقة. تم توضيح وتوحيد جميع الجينات المستهدفة عبر مورد البروتين العالمي (UniProt)، مما قيد البحث في قاعدة البيانات المرجعية حصريا على الإنسان العاقل، مما أدى إلى توليد قائمة الجينات المستهدفة النهائية للمكونات النشطة الوظيفية في SQBJ.

استرجاع الأهداف المتعلقة بعلم الأمراض
لتجميع الجينات المرتبطة بالحالة، استعلامنا في ثلاث قواعد بيانات عامة: GeneCards، وMortation Mendelian Online in Man (OMIM)، وDrugBank، حيث استخدم مصطلح البحث "قرحة المعدة". تم دمج مجموعة البيانات متعددة المنصات لاحقا، تلاها إزالة الإدخالات الزائدة لإنشاء قائمة موحدة بالجينات المستهدفة المرتبطة بقرحة المعدة.

بناء الشبكة للمكونات، والأهداف، والأمراض
حددنا الجينات المستهدفة المتداخلة بين المكونات النشطة لSQBJ وقرح المعدة. لاحقا، تم إنشاء شبكة تفاعل متعددة الطبقات باستخدام برنامج تصور الشبكة. لتقييم أهمية العقدة، قامت خوارزمية التقييم الطوبولوجي المتكاملة بحساب المعلمات الطوبولوجية لكل عقدة، بما في ذلك مركزية الدرجة والوسط. استنادا إلى هذه القيم المحسوبة، حددنا المكونات الفعالة والأهداف الوظيفية الرئيسية ل SQBJ في علاج قرحة المعدة.

رسم خرائط شبكات تفاعل البروتين والبروتين (PPI)
تم مقارنة الأهداف المتفق عليها المحددة بين SQBJ وقرح المعدة مع قاعدة بيانات STRING. حدد استعلامنا قالب تحليل البروتينات المتعددة مع تقييد الخلفية التحليلية على الإنسان العاقل. تم تصفية مثبطات مضخة البروتون مع حد أدنى لثقة التفاعل وهو متوسط الثقة (> 0.4).

تم تصدير سجلات الاتصال الوظيفي الناتجة كملف TSV، والذي تم دمجه لاحقا في برنامج مخصص لعرض الشبكة لتحليل PPI. استنادا إلى الطبوغرافيا المحسوبة للاتصال، قمنا بتقييم العقد الأساسية الوظيفية في الشبكة من خلال ترتيب القيمة الدرجة المحددة لكل عقدة.

التعليق الوظيفي اللاحق ورسم المسارات
لتوضيح الأدوار البيولوجية لعقد التقاطع المشتركة، أجرينا تحليل الإثراء الوظيفي لعلم الجينات (GO) وتحليل مسار إثراء مسار موسوعة كيوتو للجينات والجينوم (KEGG) باستخدام أداة توضيح معلوماتية حيوية متاحة عبر الإنترنت. يصنف التصنيف الوظيفي الجينات إلى ثلاث فئات كلاسيكية: العملية البيولوجية (BP)، والمكون الخلوي (CC)، والوظيفة الجزيئية (MF). تم إنشاء مخططات فقاعية ومخططات شريطية لنتائج الإثراء باستخدام منصة تخطيط معلوماتية حيوية عبر الإنترنت لرسم خريطة العمليات البيولوجية الأساسية ومسارات الإشارات المرتبطة بالتأثير العلاجي ل SQBJ على قرحة المعدة.

محاكاة الالتحام الجزيئي الحاسوبي
تم تنزيل ملفات الهندسة المكانية للمكونات النشطة الأساسية ل SQBJ من قواعد بيانات مركبة عامة وحفظها لاحقا كملفات MOL2 باستخدام برامج معالجة الملفات. كما حصلنا على البنى البلورية ثلاثية الأبعاد للبروتينات المستهدفة الأساسية من خلال الاستعلام عن بنك بيانات البروتين. تمت معالجة هذه البنى الجزيئية الكبيرة مسبقا عن طريق إزالة الروابط الأصلية وجزيئات الماء، وتم حفظ النماذج النظيفة الناتجة بصيغة PDB. لمحاكاة طاقة ربط المستقبلات والليجاند، تم تنفيذ التحقق من الالتحام الذي يشمل المكونات النشطة الأساسية والبروتينات المستهدفة عبر برنامج الالتحام الجزيئي الحاسوبي القياسي. تم تحسين نتائج الإرساء وعرضها باستخدام برنامج التصور الجزيئي.

زراعة الخلايا
تم زراعة خلايا الظهارة المعدية المشتقة من الإنسان باستخدام وسط RPMI-1640 المدمج مع 10٪ مصل أبقار جنيني و1٪ بنسلين-ستربتوميسين عند 37 درجة مئوية تحت جو رطب يحتوي على 5٪ CO. حددنا مزرعة المصدر كخط خلوي معتمد، حيث حصلنا على المخزون الأولي من مستودع خلوي موثق. عند التقاء ملحوظ بين 80–90٪، تم شطف الطبقات الأحادية مرتين باستخدام PBS تلتها فصل باستخدام 0.25٪ تريبسين-EDTA لمدة دقيقتين عند 37 درجة مئوية. لإنهاء تفاعل الانقسام الإنزيمي، قدمنا حجما مساويا من الوسط الكامل. تم طرد القرص الخلوي الناتج عند 1000 × جرام لمدة 5 دقائق، وبعدها تم إعادة تعليق الحبيبة في وسط جديد كامل، وإعادة زراعتها بالكثافة المناسبة. تمت إعادة المزارع إلى ظروف حضانة متطابقة. خلال فترة التكاثر، تم استخدام مجهر تباين الطور المقلوب لتقييم قدرة الخلية على البقاء، والشكل، وحالة النمو، وكانت الخلايا في مرحلة النمو اللوغاريتمي تجمع بشكل روتيني للتحليلات اللاحقة.

تأسيس وعلاج نموذج إصابة خلايا GES-1 المستحثة بالإيثانول
تم زرع خلايا GES-1 ذات الطور اللوغاريتمي في 5 × 10^{أو 5} خلايا/بئر في صفائح ب 6 آبار أو 1 × 10^{إلى 4} خلايا/بئر في صفائح ب 96 بئر وحضنها طوال الليل للالتصاق. تم إثبات الإصابة الناتجة عن الإيثانول من خلال تعريض الخلايا لإيثانول بسعة 500 ملليمول/لتر في RPMI-1640 غير المكملة لمدة 4 ساعات. تم اختيار هذا الشرط بناء على تجارب أولية في التركيز والاستجابة الزمنية. في الفحص الأولي، تسبب 250 مل/لتر إيثانول لمدة 4 ساعات في إصابة طفيفة فقط، مع بقاء قدرة الخلايا على قيد الحياة عند حوالي 78.6 ± 5.4٪، في حين قللت 750 ملليمول/لتر الإيثانول إلى 32.8 ± 4.7٪، مما يشير إلى السمية الزائدة للخلايا. أدى التعرض لإيثانول 500 مل/لتر لمدة 4 ساعات إلى تقليل قدرة الخلايا على البقاء إلى 54.7 ± 4.9٪، مما أدى إلى إصابة متوسطة إلى شديدة قابلة للتكرار مع الاحتفاظ بما يكفي من الخلايا الحية للتدخل اللاحق والاختبارات الميكانيكية. لذلك، تم اختيار 500 م.ل/لتر إيثانول لمدة 4 ساعات لتركيب النماذج. تم استخدام هذه الحالة لمحاكاة إصابة الظهارة الحادة الناتجة عن الإيثانول في المختبر ، ولا تعيد إنتاج نمط التعرض الفسيولوجي للمخاط المعدة في الجسم الحي.

للتدخل الدوائي، تم اختيار ثلاث تركيزات من مستخلص SQBJ المائي (5، 10، و50 ميكروغرام/مل) وتم إعطاؤها مباشرة بعد تحدي الإيثانول. في ذراع التثبيط PI3K، تم حضان الخلايا مسبقا ب 20 ميكرومول/لتر LY294002 لمدة 30 دقيقة قبل المعالجة المشتركة بالإيثانول والتركيز الأمثل لSQBJ. تلقت مجموعة ضابطة إيجابية 20 ميكرومول/لتر أوميبرازول فور التعرض للإيثانول. استخدم أوميبرازول كعامل مرجعي للحماية من الجهاز الهضمي بدلا من مقارنة الجرعة المكافئة. تم اختيار التركيز بناء على تقييم أولي للسمية الخلوية وعلى نطاقات التدخل الصناعي الشائعة الاستخدام، وكان الهدف منه توفير مرجع دوائي لحماية الخلايا. تم الحفاظ على خلايا التحكم في وسط كامل بدون الإيثانول أو عوامل إضافية. أجريت جميع الحضانات في غلاف جوي رطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. تكونت كل مجموعة تجريبية من ثلاثة آبار مكررة على الأقل، وتم تنفيذ البروتوكول بالكامل بشكل مستقل ثلاث مرات فقط.

تحديد التركيز الأمثل ل SQBJ باستخدام طريقة CCK-8
تم طلاء عناصر HGE/GES-1 ذات الطور اللوغاريتمي في 96 متجهة بئر بكثافة 1 ×^{10 4} خلايا/بئر، وحضنتها طوال الليل في وسط RPMI-1640 كامل تحت ظروف قياسية (37 درجة مئوية، 5٪ CO₂) لضمان الالتصاقها. تم توزيع الزرعات عشوائيا إلى أربع مجموعات: الضابط المركبي (متوسط كامل فقط)، تدخل SQBJ بجرعة منخفضة (5 ميكروغرام/مل)، تدخل SQBJ بجرعة متوسطة (10 ميكروغرام/مل)، وتدخل SQBJ بجرعة عالية (50 ميكروغرام/مل)؛ تم استخدام هذه التمركزات الثلاثة للفحص العلاجي وتم إعدادها بإذابة SQBJ في PBS. تم اختبار جميع الشروط في ثلاثة آبار متوازية على الأقل، وتم تكرار البروتوكول الكلي في ثلاث دفعات تجريبية مميزة. بعد فترة المعالجة المحددة، تلقى كل بئر 10 ميكرولتر من مادة CCK-8، تلتها فترة حضانة لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. تم قياس الكثافة البصرية (OD) عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوح. تم حساب نسبة صلاحية الخلية على أنها (absorbance_treatment / absorbance_control) × 100٪، مما سمح بتحديد أكثر تركيز SQBJ فعالية للتجارب اللاحقة.

qPCR
تم زراعة عناصر GES-1 في مراحل لوغاريتمية في صفائح ذات 6 آبار (5 × 10 أو⁵ خلايا/بئر) وحافظت عليها طوال الليل عند حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة رطبة تحتوي على 5٪ CO₂ للسماح بالالتصاق. بعد ذلك، تعرضت الخلايا للتركيز الأمثل المحدد مسبقا من SQBJ وتم جمعها عند البداية (0 ساعة) وبعد 6 و12 و24 و48 ساعة بعد المعالجة لتحديد الاستجابة الديناميكية لجزيئات الإشارة. استنادا إلى نتائج المسار الزمني، تم اختيار فترة 24 ساعة للاختبارات الميكانيكية اللاحقة لأنها أظهرت أقوى استجابة إشارة مع الحفاظ على استقرار بقاء الخلية. تم تمثيل كل نقطة زمنية بثلاثة آبار ثلاثية، وتم تكرار التجربة بالكامل بشكل مستقل 3 مرات.

قمنا بعزل الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام مادة استخراج متخصصة، وتقييمنا تركيز وجودة العائد باستخدام مقياس طيفي. أظهرت جميع العينات نسبة امتصاص A₂₆₀/A₂₈₀ ضمن نطاق 1.8 و2.0. تم استخدام مجموعة نسخ عكسي باستخدام ممسحة gDNA لعكس نسخ cDNA من 1 ميكروغرام من إجمالي RNA. تم تنفيذ تحليل PCR في الوقت الحقيقي عبر نظام PCR كمي مع تمهيدات ل PI3K وAKT وp38 وJNK وERK والجين المرجعي GAPDH. تفاصيل نظام PCR، والكواشف، وخدمة تخليق البرايمر مفصلة في جدول المواد. تم تصميم البرايمرات لمناطق محددة من الجينات البشرية المقابلة. بروتوكول qPCR: التفعيل الساخن عند 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، يليه 40 دورة إزالة الطبيعة عند 95 درجة مئوية لمدة 5 ثوان والتلدين/التمديد عند 60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. اعتمد حساب تعبير mRNA للجين المستهدف على طريقة PCR الكمية النسبية مع طريقة ^2-ΔΔCt .

إليسا
تم جمع السوبرناتسيجات وإزالتها عبر الطرد المركزي عند 1,200 × جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة الحطام الخلوي. تم تقييم مستويات الوسطاء الالتهابيين (CRP، IL-6، TNF-α) ومؤشرات الإجهاد التأكسدي (SOD، MDA، GSH) باستخدام مجموعات ELISA التجارية وفقا لتوجيهات المصنعين المحددة. تم التحقق من ملفات تركيز هذه الأهداف باستخدام تركيبات التحليل التجارية وفقا لتعليمات الموردين. تكونت كل مجموعة تجريبية من ثلاثة آبار مكررة، وتم تنفيذ الإجراء عبر ثلاث دفعات منفصلة من زراعة الخلايا لتأكيد قابلية تكرار البيانات التجريبية. باختصار، تم صرف 100 ميكرولتر من المواد القياسية أو الفائقات المصفية في ألواح تفاعل مطلية مسبقا وحضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة. بعد ثلاث دورات غسل متتالية، تلقى كل تجويف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الخاص للكشف لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تلتها ثلاث دورات غسيل أخرى. بعد ذلك، تم إدخال محلول الركيزة (100 ميكرولتر)، وتم حماية العينات من الضوء لمدة 15 دقيقة قبل حجب التفاعل الإنزيمي بمحلول توقف 50 ميكرولتر. تم اكتشاف الكثافة الضوئية عند 450 نانومتر عبر قارئ الميكرولوتين. تم استيفاء التكثفات من المنحنيات القياسية المقابلة. لتقليل التحيز الناتج عن الاختلافات في عدد الخلايا أو التغيرات الناتجة عن العلاج، تم معايرة ملفات MDA وSOD وGSH وCRP وTNF-α وIL-6 مقابل محتويات البروتين في كل عينة تحليلية، كما حددها اختبار BCA، وتم التعبير عنها كقيم نسبية مقارنة بمجموعة الضابطة.

الكشف عن ROS داخل الخلايا في خلايا GES-1 باستخدام مسبار فلوري DCFH-DA
لقياس مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية داخل الخلايا (ROS)، استخدمنا مؤشر الفلوروجين النافذ للغشاء DCFH-DA. تم إعادة تعليق الخلايا المحجوزة في RPMI-1640 غير المكملة التي تحتوي على 10 ميكرومول/لتر DCFH-DA وحافظت عليها لمدة 20 دقيقة تحت ظروف الزراعة القياسية (37 درجة مئوية، 5٪ CO₂) في الظلام. بعد ثلاث غسلات متتالية باستخدام وسط خال من المصل إلى مسح المجس غير المرتبط، تم مراقبة شدة الفلورة بواسطة قياس تدفق الخلايا بإثارة 488 نانومتر وانبعاث 525 نانومتر. تم الإبلاغ عن مستويات ROS النسبية كمتوسط شدة الفلورة لكل مجموعة معالجة، وتم تطبيعه إلى عدد الخلايا القابل للحياة الذي تم تحديده في الآبار المتوازية باستخدام اختبار CCK-8، والتعبير عنها بالنسبة لمجموعة الضابطين المقابلة.

تحديد جهد الغشاء الميتوكوندري (ΔΨm)
قمنا بتقييم التغيرات في جهد غشاء الميتوكوندريا (ΔΨm) باستخدام مجموعة اختبار تجارية JC-1. باختصار، تم إعادة تعليق الخلايا المحصودة في محلول JC-1 الجاهز حديثا—وهو خليط متساوي الحجم من صبغة JC-1 ومحلول التلوين الذي توفره الطقم—إلى تركيز نهائي للخلايا يبلغ 1 × 10⁶ خلايا/مل. بعد الحضانة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية في بيئة رطبة تحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون، محمية من الضوء لتجنب التبييض، تم جمع العينة بالطرد المركزي (800 × جرام، 5 دقائق) وشطفها مرة واحدة ب 1 مل من محلول التلوين المبرد بالجليد. تم اكتساب الفلورة لاحقا بواسطة قياس تدفق الخلية.

تمت مراقبة تجمعات JC-1 (التي تدل على سلامة ΔΨm) عبر قناة FL2 باستخدام أطوال موجية إثارة 488 نانومتر و590 نانومتر، بينما تم تتبع مونومرات JC-1 (التي تدل على تبديد ΔΨm) عبر قناة FL1 باستخدام إعدادات إثارة 488 نانومتر و525 نانومتر. تم التعبير عن ΔΨm بنسبة إشارة الفلورة من الأحمر إلى الأخضر؛ تشير القيم المتساقطة إلى إزالة استقطاب الميتوكوندريا.

تحديد مستوى ATP داخل الخلية
تم تقييم وظيفة الميتوكوندريا من خلال قياس ATP داخل الخلايا باستخدام مجموعة اختبار ATP. تم استخدام تفاعل لوسيفيرين-لوسيفيراز الحيوي المضيء لتحديد محتوى ATP، والذي يتناسب طرديا مع نشاط الميتوكوندريا. لفترة وجيزة، أعيد تعليق الخلايا المحصودة في مخزن تحلل ATP البارد جدا وتم الاحتفاظ بها لمدة 5 دقائق على الثلج. ثم تم إجراء الطرد المركزي عند 12,000 × جرام لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية، وبعد ذلك تم نقل 20 ميكرولتر من المادة الفائقة المصفحة إلى صفائح دقيقة بيضاء معتمة ب 96 بئرا. بعد ذلك، تم إدخال 100 ميكرولتر من محلول الكشف ATP الجاهز حديثا — وهو مزيج من كاشف اللوسيفيراز وركيزة لوسيفيرين محضرة وفقا للبروتوكول المرفق — في كل تجويف. تم التقاط إشارة التوهج الناتجة بسرعة بواسطة قارئ لوحة دقيقة متوهجة. للحصول على مستويات ATP النسبية، تم تطبيع قيم التلميع الخام إلى تركيزات البروتين الفائق الفردية التي تم قياسها بواسطة مجموعة اختبار بروتين BCA التجارية، مما يصحح التغيرات في عدد الخلايا.

اكتشاف موت الخلايا المبرمج من خلال التلوين المزدوج ب Annexin V/PI
تم إجراء كشف الخلايا المائية باستخدام تكوين اختبار موت الخلايا التجاري Annexin V-FITC/PI كما حددته الشركة المصنعة. بعد الغسيل، تم إعادة تعليق الحبيبات في مخزن ربط Annexin V-FITC بكثافة خلية تبلغ 1 ×^{10 6} خلايا/مل (195 ميكرولتر لكل عينة). بعد ذلك، حصل كل أنبوب مستقل على 5 ميكرولتر من محلول Annexin V-FITC تليها 10 ميكرولتر من محلول التلوين PI. تم تدوير العينة بلطف وحضانها في الظلام على درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. بعد هذه العملية، تم مراقبة الخلايا الموتمة بواسطة جهاز قياس تدفق الخلايا الخلوي. سهلت القنوات الفلورية المعنية التمايز بين الخلايا الحية (Annexin V⁻/PI⁻)، والخلايا المبكرة في مرحلة الاستماتة (Annexin V⁺/PI⁻)، والخلايا المتأخرة في المايتة/النخرية (Annexin V⁺/PI⁺). تم قياس نسبة الخلايا المبوتجة في كل مجموعة وفقا لمعايير البوابات هذه.

البقعة الغربية
تم حضان الأغشية طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد Bcl-2، Bax، كاسباز-3 المشقوق، AKT، p38 MAPK، JNK، ERK1/2، وGAPDH. تم اختيار الأجسام المضادة بناء على معلومات التحقق من صحة العينات البشرية وتطبيقات ويسترن بلوت. تمت إضافة RRID لجميع الأجسام المضادة التي لديها سجلات متاحة في سجل الأجسام المضادة أو بوابة RRID. تم تطبيع مستويات البروتين المستهدف إلى GAPDH. بعد بروتوكولات الغسل القياسية، تعرضت البقع لأجسام مضادة ثانوية متقاربة ب HRP لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم اكتشاف النطاقات باستخدام محلول ركيزة ECL. تم تقييم قيم نطاق البقع الغربية الرمادية باستخدام برنامج تحليل الصور الرقمي.

التلوين بالفلورة المناعية
تم تأسيس طبقات أحادية GES-1 على ألواح زجاجية داخل ألواح بسعة 24 بئرا قبل المعالجات الموصى بها. بعد العلاج، تم تنفيذ التثبيت باستخدام 4٪ بارافورمالديهيد لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، تليها نفاذية الغشاء باستخدام 0.3٪ ترايتون X-100 في PBS لمدة 10 دقائق، ومنع باستخدام ألبومين مصل البقري بنسبة 5٪ لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. ثم تم نقل الغطاءات للحضانة الليلية عند درجة حرارة 4 درجات مئوية مع استهداف الأجسام المضادة الأولية إلى AKT وp38 وJNK وERK. بعد ثلاث غسلات متتالية من PBS، تم حضن العينات لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة باستخدام جسم مضاد ثانوي مضاد للأرنب مرتبط بالفلورة محمي من الضوء. تم تطبيق التلوين المضاد بتقنية DAPI لمدة 5 دقائق لرؤية النوى. تم تركيب الغطاءات لاحقا مع كاشف مضاد للتلاشي، واستخدم جمع البيانات مجهر ليزر كونفوكلي لتحديد توزيع البروتينات المستهدفة تحت الخلية. تم التقاط جميع صور الفلورة المناعية تحت نفس معايير التصوير باستخدام عدسة موضوعية بحجم 20×. تمت إضافة أشرطة مقياس تتوافق مع 50 ميكرومتر إلى جميع الصور الممثلة للفلورة المناعية.

التحليل الإحصائي
يتم توضيح القيم الكمية كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD)، الذي ينتج عن ثلاث تجارب مستقلة على الأقل مع التحقق من كل عينة في ثلاث نسخ. تم إجراء التحليلات الإحصائية عبر أدوات تحليل عددي متخصصة. لتحديد الفروقات المميزة عبر عدة مجموعات، استخدمنا تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) إلى جانب اختبار توكي اللاحق للمقارنات بين المجموعات. عتبة ذات ذيلين من P < 0.05 تحدد دلالة إحصائية.

النتائج

التشريح الحيوي للمعلوماتية للآليات التي يبوطها SQBJ في قرحة المعدة
لاستكشاف كيف يمكن ل SQBJ أن يمارس تأثيراته الدوائية على GU، توقعنا في البداية الأهداف المقابلة لمكوناته الحيوية النشطة الأساسية. باستخدام برمجة R، استخرجنا وأزلنا الإدخالات الزائدة بين هذه المكونات النشطة الحيوية، مما أدى في النهاية إلى 411 هدفا مرشحا. لاحقا، تم جمع الأهداف المرضية المرتبطة ب GU من خلال الاستعلام في بطاقات الجين ومنصات OMIM، مما أدى إلى عزل 1,643 موقعا مميزا لحالة معينة (الملف التكميلي...

المناقشة

كان الهدف الأساسي من هذا البحث هو تقييم ما إذا كان SQBJ، وهو تركيبة مركبة كلاسيكية من طب الطب الصيني التقليدي تتكون من Panax notogenseng وBletilla striata، يتمتع بنشاط حماية للخلايا ضد تلف ظهارة الغشاء المخاطي المعدة المحفز بالإيثانول ضمن نموذج خلية GES-1، مع تورط الإشارات المرتبطة ب PI3K/AKT والانخفاضات المرتبطة بالوسطاء الالتهابيين، ومؤشرات الإجهاد التأكسدي، وخلل وظائف الميتوكوندريا، والأحداث المماتية. النتائج الرئيسية للعمل الحالي هي كما يلي: تحليل علم الأدوية الشبكي...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اختبار الاستماتة	مجموعة كشف الاستماتة Annexin V-FITC/PI	Beyotime	C1062L
اختبار ATP	مجموعة ATP المحسنة	Beyotime	S0027
المحلول	PBS	Solarbio	—
عامل هضم الخلايا	تريبسين-EDTA 0.25٪	Gibco	25200072
سلالة الخلية	خلايا الظهارة المخاطية للمعدة البشرية GES-1	بنك الخلايا، الأكاديمية الصينية للعلوم	SCSP-533
اختبار حيوية الخلية	عامل CCK-8	—	—
مجهر معين	مجهر LSM 880 معين	Zeiss	LSM 880
وسط الثقافة	RPMI-1640	Gibco	—
مجموعة ELISA	مجموعة ELISA لـ CRP البشري	R&D Systems	DCPR00
مجموعة ELISA	مجموعة ELISA لـ IL-6 البشري	R&D Systems	DTAM00D
مجموعة ELISA	مجموعة ELISA لـ TNF-α البشري	R&D Systems	—
عداد الخلايا المتدفقة	FACSCalibur / FACSCanto II	BD Biosciences	—
المادة العشبية	Bletilla striata (Thunb. ex A. Murray) Rchb. f. (درنة)	سوق أنغو العشبية الصينية التقليدية	رقم القسيمة BS-20240301
المادة العشبية	Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen (الجذر والجذر)	سوق أنغو العشبية الصينية التقليدية	رقم القسيمة PN-20240301
المادة العشبية	مسحوق Sanqi Baiji San	تحضير داخلي	رقم القسيمة SQBJ-20240301
عمود HPLC	عمود ZORBAX SB-C18	Agilent Technologies	4.6 مم × 250 مم، 5 ميكرون
نظام HPLC	نظام HPLC 1260 Infinity II	Agilent Technologies	1260 Infinity II
جسم مضاد ثانوي IF	جسم مضاد مقترن بـ Alexa Fluor 594 –ضد IgG الأرانب	Invitrogen	A11012
مجهر مقلوب	مجهر متناقض الطور CKX41	Olympus	CKX41
قارئ التألق	قارئ الألواح النانوية Infinite 200 PRO	Tecan	Infinite 200 PRO
الغشاء	غشاء PVDF	Millipore	IPVH00010
قارئ الألواح	قارئ الألواح iMark	Bio-Rad	iMark
مجموعة إمكانات الغشاء الميتوكوندري	مجموعة اختبار JC-1	Beyotime	C2006
صبغة نووية	DAPI	Beyotime	C1002
منصة عبر الإنترنت	منصة الرسم الحيوي عبر الإنترنت	منصة التحليل الحيوي عبر الإنترنت	منصة عبر الإنترنت
منصة عبر الإنترنت	منصة تحليل الإثراء المستندة إلى الويب	Metascape	منصة عبر الإنترنت
اختبار الإجهاد التأكسدي	مجموعة اختبار GSH	Beyotime	S0052
اختبار الإجهاد التأكسدي	مجموعة اختبار MDA	Beyotime	S0131
اختبار الإجهاد التأكسدي	مجموعة اختبار SOD	Beyotime	S0109
مثبط PI3K	LY294002	MCE	S1105
الدواء المتحكم الإيجابي	أوميبرازول	MCE	HY-B0053
الجسم المضاد الأولي	AKT	Cell Signaling Technology	4691
الجسم المضاد الأولي	Bax	Cell Signaling Technology	5023
الجسم المضاد الأولي	Bcl-2	Cell Signaling Technology	15071
الجسم المضاد الأولي	Cleaved Caspase-3 Asp175	Cell Signaling Technology	9664
الجسم المضاد الأولي	ERK1/2	Cell Signaling Technology	4695
الجسم المضاد الأولي	GAPDH	Abcam	ab8245
الجسم المضاد الأولي	JNK / SAPK-JNK	Cell Signaling Technology	9252
الجسم المضاد الأولي	p-AKT Ser473	Cell Signaling Technology	4060
الجسم المضاد الأولي	p-ERK1/2 Thr202/Tyr204	Cell Signaling Technology	4370
الجسم المضاد الأولي	p-JNK Thr183/Tyr185	Cell Signaling Technology	4668
الجسم المضاد الأولي	p-p38 MAPK Thr180/Tyr182	Cell Signaling Technology	4511
الجسم المضاد الأولي	p-PI3K p85 Tyr458 / p55 Tyr199	Cell Signaling Technology	4228
الجسم المضاد الأولي	p38 MAPK	Cell Signaling Technology	8690
الجسم المضاد الأولي	PI3K p85	Cell Signaling Technology	4257
البريم	AKT الأمامي	—	—
البريم	AKT العكسي	—	—
البريم	ERK الأمامي	—	—
البريم	ERK العكسي	—	—
البريم	GAPDH الأمامي	—	—
البريم	GAPDH العكسي	—	—
البريم	JNK الأمامي	—	—
البريم	JNK العكسي	—	—
البريم	p38 الأمامي	—	—
البريم	p38 العكسي	—	—
البريم	PI3K الأمامي:	—	—
البريم	PI3K العكسي	—	—
مثبط البروتياز	PMSF	Beyotime	ST506
اختبار البروتين	مجموعة اختبار البروتين BCA	Beyotime	P0010
محلول تحلیل البروتين	محلول RIPA	Beyotime	P0013B
قاعدة البيانات العامة	DrugBank	DrugBank Online	قاعدة البيانات عبر الإنترنت
قاعدة البيانات العامة	GeneCards	معهد Weizmann للعلوم	قاعدة البيانات عبر الإنترنت
قاعدة البيانات العامة	الميراث المندليّ عبر الإنترنت في الإنسان	جامعة جونز هوبكنز	قاعدة البيانات عبر الإنترنت
قاعدة البيانات العامة	قاعدة بيانات مركب PubChem	المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية	قاعدة البيانات عبر الإنترنت
قاعدة البيانات العامة	بنك بيانات بروتين RCSB	RCSB PDB