مقالة بحثية

تركيبة Bushen Jianpi Qingchang تعمل على تحسين التهاب القولون في الجرذان من خلال تنظيم استقلاب الأحماض الصفراوية والميكروبيوم المعوي

29 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72117

⸱

أغسطس 28, 2026

 ,  , 
1Department of Gastroenterology, Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine (Jiangsu Province Hospital of Chinese Medicine)

في هذه المقالة

ملخص

تبحث هذه الدراسة في التأثيرات العلاجية لتركيبة Bushen-Jianpi-Qingchang وتركيباتها الفرعية على التهاب القولون لدى الجرذان، وتكشف عن آليات تنظيمها التي تستهدف محور استقلاب حمض الصفراء والميكروبات المعوية من خلال تحليل الأوميكس المتعدد.

الملخص

يُستخدم الطب الصيني التقليدي (TCM) على نطاق واسع في علاج التهاب القولون التقرحي (UC) نظرًا لفعاليته المثبتة ومستوى سلامته المرتفع. يتضمن المسار المرضي الأساسي لالتهاب القولون التقرحي المزمن والمقاوم للعلاج قصورًا في الطحال والكلى مصحوبًا بتراكم الرطوبة والحرارة في الأمعاء، وتعد تركيبة Bushen-Jianpi-Qingchang (BJQF) وصفة مركبة مثبتة سريريًا لهذه الحالة. هدفت هذه الدراسة إلى استقصاء التأثيرات العلاجية لتركيبة BJQF وثلاث تركيبات فرعية مفككة منها (تركيبة Bushen، BSF؛ تركيبة Jianpi، JPF؛ تركيبة Qingchang، QCF) على التهاب القولون المستحث بواسطة ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS) في الجرذان، وتوصيف تأثيراتها التنظيمية على ملفات أحماض الصفراء (BA) في البراز والمجتمعات الميكروبية المعوية. تم قياس تكوين البكتيريا المعوية وتركيزات أحماض الصفراء في جرذان التهاب القولون التقرحي المستحث بـ DSS عبر تسلسل جين 16S rRNA وكروماتوغرافيا السائل المقترنة بمطياف الكتلة المتوالي (LC-MS/MS)، كما تم تحليل الارتباط المحتمل بين الميكروبات المعوية واستقلاب أحماض الصفراء. أدت تركيبة BJQF إلى تحسن ملحوظ في التهاب القولون والتقرح في نموذج التهاب القولون التقرحي. تم تحديد تغيرات متميزة في تنوع البكتيريا وتكوينها بين جرذان التهاب القولون والمجموعة الضابطة السليمة. وتركز الارتباط بين البكتيريا المتمايزة وأحماض الصفراء على حمض 23-deoxycholic (23-DCA) كعقدة استقلابية رئيسية. والجدير بالذكر أن حمض taurolithocholic acid-3-sulfate (TLCA-3S) وحمض lithocholic acid-3-sulfate (LCA-3S) قد يعملان كمؤشرات حيوية محتملة للفعالية. وأظهرت التركيبة الفرعية JPF فعالية هي الأكثر تشابهًا مع تركيبة BJQF الكاملة. إن إعطاء BJQF وتركيباتها المفككة يخفف بشكل فعال من الضرر النسيجي المرضي، والالتهاب، واختلال التوازن الميكروبي المعوي، واضطراب استقلاب أحماض الصفراء في جرذان التهاب القولون التقرحي، مما يوفر أساسًا ميكانيكيًا للعلاج المركب بالطب الصيني التقليدي.

المقدمة

يتميز التهاب القولون التقرحي (UC)، وهو شكل رئيسي من أشكال أمراض الأمعاء الالتهابية (IBD)، بالتهاب مزمن ومستمر غير محدد يقتصر على مخاطية القولون والمستقيم. يعاني المرضى المصابون بالتهاب القولون التقرحي من أعراض سريرية تشمل الإسهال، وآلام البطن، وفقدان الوزن غير المقصود، وبرازاً دموياً أو صديدياً، مما يؤدي إلى تدهور شديد في جودة الحياة. يتضمن التسبب المرضي لالتهاب القولون التقرحي عوامل بيئية وجينية وميكروبية ومناعية. يتطور التهاب القولون التقرحي عادةً عقب حدوث خلل في توازن ميكروبيوم الأمعاء، ويمكن لهذا الخلل التوازني (dysbiosis) أن يسرع بشكل ملحوظ من تطور المرض1. وقد حددت الأدلة المتراكمة المحور الاستقلابي بين ميكروبيوم الأمعاء وأحماض الصفراء (BA) كوحدة تنظيمية أساسية في التسبب المرضي لالتهاب القولون التقرحي. ويعد خلل استقلاب أحماض الصفراء علامة معروفة على تلف المخاطية المعوية في أمراض الأمعاء الالتهابية. يتم التخليق الحيوي لأحماض الصفراء الثانوية حصرياً من أحماض الصفراء الأولية المشتقة من المضيف بواسطة ميكروبيوم الأمعاء، والذي يعبر عن إنزيمات رئيسية مثل 7α-dehydroxylase لإتمام هذا التحول الحيوي. وبذلك، يمثل مجمع أحماض الصفراء في البراز مؤشراً وظيفياً مثالياً يعكس إعادة تشكيل الميكروبيوم الناجمة عن العلاج بالطب الصيني التقليدي (TCM).

تعمل هذه الأحماض الصفراوية (BAs) الثانوية كجزيئات إشارات حاسمة للحفاظ على التوازن المناعي المعوي، وسلامة الحاجز المخاطي، وبقاء الخلايا الظهارية2. وتؤدي الاختلالات في هذا المحور، بما في ذلك نقص الأحماض الصفراوية الثانوية الناجم عن خلل التوازن الميكروبي واضطراب إشارات الأحماض الصفراوية، إلى تحفيز الاستجابات المسببة للالتهابات في الأمعاء واختلال وظائف الحاجز بشكل مباشر، مما يجعل هذا المحور هدفًا علاجيًا واعدًا للتدخل في حالات التهاب القولون التقرحي (UC). تلعب الميكروبات المعوية دورًا حاسمًا في تطور التهاب القولون التقرحي وتؤثر على المضيف من خلال المنتجات الأيضية، مثل الأحماض الصفراوية الناتجة عن تفاعلات التخمر. وترتبط التغيرات غير الطبيعية في الميكروبات المعوية وأيض الأحماض الصفراوية ارتباطًا وثيقًا بالتهاب القولون التقرحي3. وبما أن الميكروبات المعوية تتوسط إنتاج الأحماض الصفراوية الثانوية، فإن التغيرات في التركيبة الميكروبية ووفرتها يمكن أن تؤدي إلى اضطراب أيض الأحماض الصفراوية والمساهمة في تطور أمراض الأمعاء الالتهابية (IBD)4.

تم اعتماد الطب الصيني التقليدي (TCM) على نطاق واسع في إدارة التهاب القولون التقرحي (UC) نظراً لفعاليته وسلامته في العلاج طويل الأمد، وذلك كبديل أو مكمل للعوامل المضادة للالتهابات أو المثبطة للمناعة5. وتعد عمليات تدفئة وتقوية الطحال والكلى، وتنظيف الأمعاء، وطرد الرطوبة من المبادئ العلاجية الأساسية لالتهاب القولون التقرحي6. ووفقاً لنظرية الطب الصيني التقليدي، فإن المسبب الرئيسي للمرض في حالات التهاب القولون التقرحي المزمنة هو نقص الطحال والكلى (Fu-Zheng، تعزيز تشي الحيوي) مقترناً بتراكم الرطوبة والحرارة في الأمعاء (Qu-Xie، إزالة العامل الممرض)، ويعد التطبيق التآزري لهاتين الاستراتيجيتين ضرورياً لعلاج التهاب القولون التقرحي بشكل فعال.

أكدت الدراسات التجريبية السابقة أن كل من JPF وQCF، وهما صيغتان فرعيتان أساسيتان من BJQF، تظهران تأثيرات علاجية ضد التهاب القولون التقرحي UC. حيث تعمل JPF على تحسين التهاب المخاطية وخلل وظيفة الحاجز الظهاري المعوي عبر مسار إشارات NF-κB/HIF-1α7، بينما تعمل QCF على استعادة التوازن الاستقلابي للميكروبات المعوية، وحماية الحاجز الظهاري المعوي، وتنظيم مسار NLRP3/IL-1β8. ومن أجل تحليل المساهمات البيولوجية المحددة للوحدات الوظيفية Fu-Zheng وQu-Xie في محور الميكروبات المعوية-BA، صُممت هذه الدراسة لتشمل صيغة BJQF الكاملة وثلاث صيغ فرعية مفككة: BSF (صيغة Bushen، لتقوية الطحال والكلى، Fu-Zheng نقية)، وJPF (صيغة Jianpi، لتنشيط الطحال، Fu-Zheng أساسية)، وQCF (صيغة Qingchang، لتخليص الأمعاء من الرطوبة والحرارة، Qu-Xie نقية). يتيح هذا التصميم التجريبي تحليل التأثيرات التآزرية والمستقلة لكل وحدة وظيفية في علاج UC، وهو أمر بالغ الأهمية لتحويل الوصفات المركبة في الطب الصيني التقليدي TCM إلى علاج قائم على الأدلة.

تتمثل الفرضية العمليّة في أن BJQF يحسّن من التهاب القولون الناجم عن DSS من خلال إعادة تشكيل تركيبة الميكروبات المعوية وتطبيع استقلاب الأحماض الصفراوية، وأن وحدة Jianpi تعمل كمكون وظيفي أساسي يقود التأثيرات التنظيمية على محور الميكروبات المعوية-الأحماض الصفراوية (BA). صُممت هذه الدراسة لتحليل آلية "المركب-إلى-الوحدة" لـ BJQF بشكل منهجي. ومن خلال تقييم التركيبة الكاملة والوحدات الوظيفية الفسيولوجية المستهدفة المقابلة لها، تسعى الدراسة إلى فك شفرة التآزر البيولوجي لهذا المركب من الطب الصيني التقليدي (TCM) وتوفير أساس فارماكولوجي حديث لعلاج أمراض الأمعاء الالتهابية (IBD) عن طريق تنظيم محور استقلاب الميكروبات المعوية-الأحماض الصفراوية. وفي هذا السياق، تتم مقارنة الفعالية العلاجية لـ BJQF الكامل وثلاث تركيبات وظيفية مفككة منه بشكل منهجي ضد التهاب القولون التقرحي (UC) الناجم عن DSS. ونظراً للدور المحوري لمحور استقلاب الميكروبات المعوية-الأحماض الصفراوية في إمراضية UC، يحلل هذا العمل آلية التآزر من المركب إلى الوحدة لـ BJQF، ويوضح المساهمات التنظيمية المحددة لوحدات Bushen وJianpi وQingchang، ويحدد آثار إعادة التشكيل لكل وحدة على تركيبة الميكروبات المعوية وملفات الأحماض الصفراوية في البراز. وتتمثل الأهداف الأساسية في الكشف عن الأساس البيولوجي الحديث لـ BJQF في تخفيف UC، وتحديد الأهداف الميكروبية-الاستقلابية الرئيسية لتدخلات الطب الصيني التقليدي، وتوفير مرجع ميكانيكي للتطبيق العقلاني والبحوث الانتقالية لوصفات الطب الصيني التقليدي المركبة في علاج IBD.

البروتوكول

تم استخدام أربعة وأربعين من ذكور جرذان Sprague-Dawley السليمة التي تزن 200 ± 20 g في هذه الدراسة. وُضعت جميع الحيوانات في ظروف خالية من مسببات أمراض محددة مع إتاحة الوصول الحر إلى نظام غذائي قياسي من الكريات والماء، وتم تعويدها لمدة أسبوع واحد قبل بدء التجربة. وقد نُفذت جميع إجراءات رعاية الحيوان والتجارب وفقاً لدليل رعاية واستخدام حيوانات المختبر الصادر عن وزارة العلوم والتكنولوجيا في الصين. كما حظيت الدراسة بموافقة لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة نانجينغ للطب الصيني تحت رقم الموافقة 2023DW-029-01. وتتوفر التفاصيل الكاملة حول مصدر الحيوانات ومستلزمات التربية في جدول المواد.

تحضير تركيبة الطب الصيني التقليدي (TCM)
تم تحضير تركيبة Bushen-Jianpi-Qingchang الكاملة (BJQF) باستخدام تسعة مكونات عشبية بجرعات محددة مسبقاً: 15 g من Astragali Radix، و10 g من Atractylodis Macrocephalae Rhizoma المحمص، و10 g من Scutellariae Radix، و4 g من Coptidis Rhizoma، و10 g من Sanguisorbae Radix، و6 g من Aucklandiae Radix، و5 g من Glycyrrhizae Radix، و15 g من Psoraleae Fructus، و15 g من Alpiniae Oxyphyllae Fructus. نُقعت جميع المواد العشبية الخام في محلول ملحي طبيعي لمدة 1 h، ثم تلا ذلك غليها لمدة 1 h للحصول على حجم نهائي قدره 1500 mL. كما تم تحضير ثلاث تركيبات فرعية مجزأة باستخدام بروتوكول غلي متماثل؛ حيث احتوت تركيبة Bushen (BSF) على 15 g من Psoraleae Fructus و15 g من Alpiniae Oxyphyllae Fructus، وغُليت حتى وصل الحجم النهائي إلى 500 mL. وتكونت تركيبة Jianpi (JPF) من 15 g من Astragali Radix، و10 g من Atractylodis Macrocephalae Rhizoma المحمص، و5 g من Glycyrrhizae Radix، بحجم غلي نهائي قدره 500 mL. أما تركيبة Qingchang (QCF) فقد تكونت من 10 g من Scutellariae Radix، و4 g من Coptidis Rhizoma، و10 g من Sanguisorbae Radix، و6 g من Aucklandiae Radix، وضُبطت أيضاً لتصل إلى حجم نهائي قدره 500 mL. تتوفر مواصفات الشركة المصنعة الكاملة وأرقام التشغيلات لجميع المواد العشبية في جدول المواد. وقد استُخدمت التسميات العشبية العامة باستمرار في النص الرئيسي، مع قصر التفاصيل الخاصة بالشركة المصنعة حصرياً على جدول المواد.

تحفيز التهاب القولون والتقسيم التجريبي
وُزعت الجرذان عشوائيًا على ست مجموعات تجريبية: مجموعة الضبط (n = 6): ماء شرب عادي + محلول ملحي طبيعي عن طريق المعدة. مجموعة نموذج التهاب القولون التقرحي (n = 6): ماء شرب يحتوي على DSS بنسبة 3.5% (وزن/حجم) + محلول ملحي طبيعي عن طريق المعدة. مجموعة العلاج بـ BJQF (n = 8): ماء شرب يحتوي على 3.5% DSS + عقار BJQF عن طريق المعدة (0.6 g/kg من وزن الجسم). مجموعة العلاج بـ BSF (n = 8): ماء شرب يحتوي على 3.5% DSS + عقار BSF عن طريق المعدة (0.6 g/kg من وزن الجسم). مجموعة العلاج بـ JPF (n = 8): ماء شرب يحتوي على 3.5% DSS + عقار JPF عن طريق المعدة (0.6 g/kg من وزن الجسم). مجموعة العلاج بـ QCF (n = 8): ماء شرب يحتوي على 3.5% DSS + عقار QCF عن طريق المعدة (0.6 g/kg من وزن الجسم).

تم استحثاث التهاب القولون التجريبي باستخدام DSS بنسبة 3.5% في مياه الشرب لمدة 10 أيام متتالية؛ بينما تلقت مجموعة التحكم مياهًا مقطرة بدون DSS. تم تحويل جرعة كل تركيبة من الطب الصيني التقليدي (TCM) بمقدار (0.6 g/kg) من الجرعة الفعالة سريريًا للبالغين إلى الجرعة المكافئة للجرذان باستخدام طريقة تطبيع مساحة سطح الجسم (معادلة Meeh-Rubner). وبما أنها دراسة في مرحلة الاكتشاف تركز على مقارنة التركيبات، فقد تم اعتماد جرعة مكافئة سريرية واحدة. وبدءًا من اليوم الأول، تم إعطاء كل تركيبة من الطب الصيني التقليدي (TCM) عن طريق التغذية الأنفية مرة واحدة يوميًا. وتلقت مجموعتا التحكم والنموذج نفس الحجم من المحلول الملحي العادي (10 mL/kg). وفي اليوم 11، تم التضحية بالجرذان عن طريق خلع الفقرات العنقية، وجُمعت عينات المصل والبراز وأنسجة القولون للتحليل. كما تم قياس وزن الجسم يوميًا. صُممت جميع المجموعات في البداية بحيث تكون n = 8. وخلال فترة الاستحثاث بـ DSS، نفق جرذان من مجموعة التحكم ومجموعتين من مجموعة النموذج بسبب التهاب القولون الشديد، مما أدى إلى أن يصبح العدد النهائي n = 6 لهاتين المجموعتين. وأكد تحليل القوة اللاحق (Post-hoc power analysis) أن حجم العينة النهائي يحقق قوة إحصائية ≥ 0.8 لجميع النتائج الأولية (الدرجة النسيجية، والسيتوكينات الرئيسية، ووزن الجسم)، مما يلبي المتطلبات الإحصائية القياسية.

قياس تركيزات السيتوكينات الالتهابية
تم تقدير مستويات IL-1β وIL-10 وTNF-α في المصل باستخدام أطقم ELISA تجارية، مع اتباع بروتوكولات الشركة المصنعة بدقة. وقُرئت قيم الكثافة الضوئية باستخدام قارئ أطباق ميكروي آلي. التحليل الإحصائي: استُخدم اختبار ANOVA أحادي الاتجاه لتحديد الفروق العامة بين المجموعات، متبوعاً بتصحيح Benjamini-Hochberg FDR للمقارنات الزوجية البعدية، بما يتوافق مع تحليل بيانات الأوميكس (omics).

التقييم النسيجي المرضي
ثُبِّتت عينات أنسجة القولون في فورمالين بنسبة 10%، ثم جُففت، وغُمِّرت في البارافين، وقُطِّعت، وصُبغت بالهيماتوكسيلين والإيوزين (HE). أُجري التقييم النسيجي باستخدام نظام "كوبر" المعدل لتقييم التهاب القولون، وهو معيار شبه كمي معتمد لالتهاب القولون التجريبي9. ويشمل التقييم أربعة أبعاد: الارتشاح الالتهابي، والتلف البنيوي للخبيات، ووذمة الغشاء المخاطي، ومدى القرحة (بإجمالي درجات من 0 إلى 12). بيان التعمية: جرى إلغاء تحديد هوية جميع الشرائح باستخدام رموز عددية قبل عملية التقييم. وقام طبيبان متخصصان في علم الأمراض، دون معرفة بتوزيع المجموعات، بتقييم كل شريحة بشكل مستقل. وكانت الدرجة النهائية هي متوسط الدرجتين؛ بينما حُلَّت الخلافات التي بلغت 2 نقطة أو أكثر بواسطة طبيب ثالث أقدم في علم الأمراض. استُخدم تحليل التباين أحادي الاتجاه (One-way ANOVA) مع تصحيح Benjamini-Hochberg FDR للمقارنات الزوجية، بما يتسق مع البيانات المظهرية الأخرى.

جمع العينات واستخلاص الحمض النووي (DNA)
جُمعت عينات براز جرذان طازجة في أنابيب طرد مركزي معقمة سعة 1 mL، وجُمِّدت فوراً عند درجة حرارة −80 °C، ونُقلت على الثلج الجاف. استُخلص الحمض النووي الجينومي للبكتيريا البرازية من 250 mg من البراز باستخدام DNA Isolation Kit وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. تم تحديد تركيز الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف الضوئي، والتحقق من سلامته عبر الرحلان الكهربائي لهلام الأجاروز بتركيز 0.8%. كما شملت عملية الاستخلاص والتقدير الكمي ضابطاً سالباً من المحلول المنظم. حُفظت المستخلصات عند درجة حرارة -20 °C قبل الاستخدام.

تسلسل جين 16S rRNA والتحليل المعلوماتي الحيوي
استهدف تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المناطق شديدة التباين V3-V4 (338F-806R) من جين 16S rRNA. نُقيت نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل وتم تسلسلها باستخدام منصة Illumina MiSeq مع 2 × تسلسل الطرفين المزدوج بطول 300 زوج قاعدي. وبعد تصفية الجودة، بلغ المتوسط 68,450 ± تم الحصول على 28,297 قراءة نظيفة عالية الجودة لكل عينة (الحد الأقصى 158,361، والحد الأدنى 28,294). وجُمعت التسلسلات في وحدات تصنيفية تشغيلية (OTUs) عند نسبة تشابه 97%. كما حُسبت منحنيات التخفيف، ومؤشرات الغنى، ومؤشرات التنوع. وأُجري التعليق التصنيفي باستخدام مصنف RDP. كما أُجري تحليل الإحداثيات الرئيسية (PCoA) بناءً على مسافات UniFrac والتجميع الهرمي في برنامج R لتقييم تشابه المجتمع. ونُفذ تحليل LEfSe على منصة Galaxy لتحديد الأصناف ذات الوفرة المتباينة (العتبات: LDA > 3، اختبار كروكسال-واليس p < 0.05، اختبار ويلكوكسون البعدي (post-hoc Wilcoxon) p < (0.05). ولإجراء المقارنات المتعددة لوفرة الميكروبات، تم تطبيق تصحيح بنجاميني-هوشبرج لمعدل الاكتشاف الخاطئ (Benjamini-Hochberg FDR)؛ p(معدل الاكتشاف الخاطئ (FDR)) < اعتُبرت القيمة 0.05 دالة إحصائياً.

تحليل أحماض الصفراء في البراز باستخدام LC-MS/MS
تم تجانس عينة براز بوزن 20 mg مع 200 µL من الميثانول. وبعد عملية الطرد المركزي، تم تركيز الراشح، ثم إعادة تشكيله في 100 µL من الميثانول المائي بنسبة 50%، وتحليله بواسطة LC-MS/MS. تضمن نظام الكشف نظام Shimadzu UPLC ونظام Applied Biosystems 6500 QTRAP MS/MS. وأجريت التحليلات النوعية والكمية باستخدام منحنيات معايرة قياسية لأحماض الصفراء. واستُخدم تحليل PCA لتقييم فصل الملف الأيضي. وعُرِّفت أحماض الصفراء المتمايزة بأن تكون VIP ≥ 1 ومعدل التغير (fold change) ≥ 2 أو ≤ 0.5. واستُخدمت مخططات الكمان (Violin plots) لتصور توزيعات أحماض الصفراء المتمايزة. وبالنسبة للمقارنات المتعددة، تم تطبيق تصحيح Benjamini-Hochberg FDR، بما يتوافق مع تحليل البيانات الميكروبية.

التحليل الإحصائي
تم حساب ارتباط سبيرمان (Spearman correlation) باستخدام دالة cor في برنامج R. واختُبرت دلالة الارتباط باستخدام دالة corPvalueStudent من حزمة WGCNA في برنامج R. تم التعبير عن البيانات المظهرية كمتوسط ± الانحراف المعياري (Mean ± SD). وبالنسبة لجميع المقارنات متعددة المجموعات (المظهرية، والميكروبية، والأيضية)، تم تطبيق تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) مع تصحيح Benjamini-Hochberg FDR للاختبارات البعدية. واعتُبرت قيمة p المصححة < 0.05 ذات دلالة إحصائية. أجريت جميع التحليلات باستخدام GraphPad Prism 7.00 و R 4.2.0. كما أُجري حساب قوة حجم العينة البعدي باستخدام G*Power 3.1.

النتائج

تساهم تركيبات الطب الصيني التقليدي (TCM) في تخفيف الالتهاب وتلف القولون في التهاب القولون المستحث بواسطة DSS
تم تقييم الفعالية الوقائية لتركيبات الطب الصيني التقليدي أولاً من خلال التغيرات في وزن الجسم. وبالمقارنة مع المجموعات الضابطة، أظهرت مجموعة نموذج التهاب القولون التقرحي (UC) فقدانًا مستمرًا في الوزن. وقد أدى كل من BJQF وBSF وJPF وQCF إلى تخفيف فقدان الوزن المستحث بواسطة DSS بشكل ملحوظ (الشكل 1A). وكشف صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE) عن وجود مخاطية قولونية سليمة وعدم وجود التهاب في المجموعات الضابطة. وفي المقابل، أظهرت أنسجة القولون في مجموعة النموذج تشوهاً شديداً في الظهارة، وتدميراً في الخبايا، وتسللاً واسع النطاق للخلايا الالتهابية في المخاطية وتحت المخاطية. وقد عززت جميع علاجات الطب الصيني التقليدي تعافي الأنسجة وقللت من الالتهاب، حيث أظهر BJQF التحسن الأكثر وضوحاً (الشكل 1B–C). وأكد التقييم النسيجي الكمي أن الطب الصيني التقليدي خفف بشكل ملحوظ من التلف النسيجي المرضي (p < 0.05).

أدت كل من BJQF وBSF وJPF وQCF إلى خفض مستويات IL-1β (الشكل 1D) وTNF-α (الشكل 1F) في المصل بدرجات متفاوتة. ولم تصل مستويات IL-10 في مجموعات العلاج إلى مستويات المجموعة الضابطة، ولكنها كانت أعلى بكثير مقارنة بمجموعة النموذج (الشكل 1E). وتشير هذه النتائج إلى أن تركيبات TCM تثبط الالتهاب المعوي الناجم عن DSS.

figure-results-1
الشكل 1: التأثيرات العلاجية لـ BJQF وصيغه الفرعية المفككة على التهاب القولون المستحث بـ DSS في الجرذان. (A) التغيرات الديناميكية في نسبة وزن الجسم إلى الوزن الأساسي في كل مجموعة على مدار فترة التجربة التي استمرت 10 أيام؛ (B) درجات التقييم النسيجي الكمي لأنسجة القولون في جميع المجموعات التجريبية؛ (C) مقاطع ممثلة لأنسجة القولون المصبوغة بالهيماتوكسيلين والإيوسين (HE) من كل مجموعة (شريط المقياس = 200 µm)؛ (D–F) تركيزات السيتوكينات الالتهابية في المصل في كل مجموعة: (D) IL-1β، (E) IL-10، (F) TNF-α. البيانات معبر عنها كمتوسط ± SD. *p < 0.05, **p < 0.01, ****p < 0.0001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

علاج TCM يعيد تشكيل بنية المجتمع الميكروبي المعوي في جرذان مصابة بالتهاب القولون التقرحي (UC)
بعد عملية تصفية الجودة، تم الحصول على متوسط 68,450 ± 28,297 من القراءات النظيفة عالية الجودة لكل عينة. أدى علاج TCM إلى تغيير التنوع البكتيري α (مؤشر Chao1، الشكل 2A). حيث قلل BJQF بشكل ملحوظ من التنوع α المرتفع في جرذان UC (p(FDR) < 0.05). ومن بين الصيغ الفرعية، قلل JPF التنوع بشكل ملحوظ (p(FDR) < 0.05)، بينما لم يظهر BSF و QCF أي تأثير معنوي. أما بالنسبة للتنوع β، فقد أظهر تحليل PCoA غير الموزون لمسافات UniFrac انفصالاً واضحاً بين المجموعات، مما يشير إلى أن TCM أعاد تشكيل التركيب الميكروبي العام (الشكل 2B). كما أظهر التجميع الهرمي تجمعات متميزة بين مجموعات النموذج ومجموعات العلاج (الشكل 2C).

تم الكشف عن إجمالي 13 شعبة، و22 طائفة، و36 رتبة، و65 فصيلة، و158 جنساً. على مستوى الشعبة، سادت Firmicutes وBacteroidetes وActinobacteria وVerrucomicrobia وProteobacteria (>99% من الوفرة الإجمالية، الشكل 2D). كانت Firmicutes سائدة في مجموعات الضبط (86.98%)، وانخفضت بشكل ملحوظ في حالات التهاب القولون التقرحي UC (p(FDR) < 0.05)، واستعادتها TCM (p(FDR) < 0.05)، حيث أظهر BJQF التأثير الأقوى. بينما زادت Bacteroidetes وProteobacteria بشكل ملحوظ في حالات UC وعكست جميع تركيبات TCM هذا الارتفاع. أما على مستوى الجنس (وفرة >1%، الشكل 2E)، فقد كان Lactobacillus سائداً في مجموعات الضبط (59.77%)، وانخفض بشكل ملحوظ في حالات UC (3.57%، p(FDR) < 0.05)، واستعادتها TCM (p(FDR) < 0.05). وأظهر كل من BJQF وJPF تأثيرات أقوى في استعادة Lactobacillus. كما أدى UC إلى زيادة Bacteroides وRuminococcus_2 وBifidobacterium وBlautia، وخفض Enterorhabdus وCorynebacterium_1 — وقد تم عكس معظم هذه التغيرات بواسطة TCM. وبشكل عام، أدت جميع التركيبات إلى تحسين خلل التوازن الميكروبي المرتبط بـ UC، حيث أظهر BJQF وJPF التأثيرات الأكثر وضوحاً.

figure-results-2
الشكل 2: تكوين ميكروبيوتا الأمعاء في المجموعات. (أ) مؤشر التنوع البكتيري α الذي تم تقييمه باستخدام Chao 1 (p(FDR) < 0.05 مقابل Model)؛ (ب) تحليل الإحداثيات الرئيسية (PCoA) لمسافات UniFrac بناءً على تكوين ووفرة وحدات التصنيف التشغيلية (OTU) في المجموعات المختلفة؛ (ج) تحليل التجميع الهرمي بناءً على مصفوفة المسافات؛ (د) الوفرة النسبية على مستوى الشعبة (p(FDR) < 0.05 مقابل Model)؛ و (هـ) الوفرة النسبية على مستوى الجنس (p(FDR) < 0.05 مقابل Model). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تحديد LEfSe للأصناف الميكروبية المتباينة المرتبطة بـ UC والمرتبطة بـ TCM
أُجري تحليل LEfSe لتحديد الأصناف الميكروبية التي أظهرت إثراءً متبايناً عبر المجموعات (LDA > 3, p < 0.05, الشكل 3). شملت الأصناف المثرىة في مجموعة UC كلاً من Bacteroidaceae, Bacteroides, Clostridiales, Clostridia, Bacteroidia, Bacteroidales, Bacteroidetes, Faecalibaculum, and Ruminococcaceae, والتي تنتمي بشكل أساسي إلى Bacteroidetes و Firmicutes. بعد العلاج بـ TCM، كانت معظم الأصناف المثرىة بـ BJQF تنتمي إلى Firmicutes، باستثناء Bifidobacteriaceae و Bifidobacteriales و Bifidobacterium التي تنتمي إلى Actinobacteria. كما كانت الأصناف المثرىة بـ BSF تنتمي بشكل أساسي إلى Firmicutes. أما الأصناف المثرىة بـ JPF، مثل Turicibacter و Dorea، فقد انتمت إلى Firmicutes. وأظهر QCF أقوى إثراء لـ Verrucomicrobia (بما في ذلك Akkermansia)، مما يشير إلى الحساسية العالية لهذه الشعبة تجاه تدخل QCF. وبشكل عام، كانت Firmicutes هي الشعبة الأكثر استجابة لـ BJQF و BSF و JPF.

figure-results-3
الشكل 3: حدد تحليل LEfSe الوحدات التصنيفية التشغيلية (OTUs) الأكثر تباينًا في الوفرة بين المجموعات المختلفة. فروق ذات دلالة إحصائية في درجات تحليل التمييز الخطي (LDA) (p < 0.05) بين الفئات (اختبار كروكسال-واليس) وبين الفئات الفرعية (اختبار ويلكوكسون). وقد تم تحديد الأصناف المتباينة بناءً على درجة عتبة تحليل التمييز الخطي (LDA) البالغة > 3 ومستوى دلالة إحصائية 0.05. (p: شعبة c: طائفة o: رتبة f: فصيلة g: جنس). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تدخل الطب الصيني التقليدي يعمل على تطبيع ملفات أحماض الصفراء في براز جرذان التهاب القولون التقرحي
نظرًا لسوء امتصاص أحماض الصفراء في مرض التهاب الأمعاء، استخدم المؤلفون تقنية LC-MS/MS لتقدير كمية أحماض الصفراء في البراز. وأظهر تحليل PCA انفصالاً واضحًا بين مجموعتي الضبط والنموذج، بينما تجمعت جميع مجموعات العلاج بشكل أقرب إلى مجموعات الضبط، مما يشير إلى تطبيع جزئي لاستقلاب أحماض الصفراء (الشكل 4A). كانت أحماض الصفراء الأكثر تغيرًا في مجموعة النموذج هي ارتفاع LCA-3S وانخفاض GDCA (الشكل 4B). وبعد العلاج، كانت أحماض الصفراء الأكثر تنظيمًا للأعلى هي ILCA (BJQF) وGCDCA (BSF) وDLCA (JPF) وGCDCA (QCF)؛ بينما كانت أحماض الصفراء الأكثر تنظيمًا للأسفل هي TLCA-3S (BJQF) وLCA-3S (BSF) وLCA-3S (JPF) وTLCA-3S (QCF) (الشكل 4C–F). وبصّرت مخططات الكمان أحماض الصفراء التفاضلية الشائعة عبر المجموعات (الشكل 5). ومن الملاحظ أن جميع تركيبات الطب الصيني التقليدي زادت من 23-DCA و3-oxo-DCA وDLCA، وخفضت HCA وLCA-3S وTCA وTLCA-3S.

figure-results-4
الشكل 4: عملت تركيبات الطب الصيني التقليدي (TCM) على تنظيم اضطراب الأحماض الصفراوية الناجم عن DSS في نموذج التهاب القولون التقرحي (UC). (A) مخطط تحليل المكونات الرئيسية (PCA) للأحماض الصفراوية في مجموعات السيطرة (Control)، والنموذج (Model)، وBJQF، وBSF، وJPF، وQCF. (B) مخطط أعمدة يوضح التغير النسبي (fold change) في مجموعة النموذج مقابل مجموعة السيطرة. (C) مخطط أعمدة يوضح التغير النسبي في مجموعة BJQF مقابل مجموعة النموذج. (D) مخطط أعمدة يوضح التغير النسبي في مجموعة BSF مقابل مجموعة النموذج. (E) مخطط أعمدة يوضح التغير النسبي في مجموعة JPF مقابل مجموعة النموذج، و(F) مخطط أعمدة يوضح التغير النسبي في مجموعة QCF مقابل مجموعة النموذج. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-5
الشكل 5: مخطط الكمان للتحليلات البيومترية (BAs) التفاضلية في كل مجموعة مقارنة. (A) الأحماض الأمينية المختلفة في BJQF مقابل النموذج. (B) تباين مجموعات الحمض الأميني (BAs) في ذبابة الفاكهة (BSF) مقارنة بالنموذج. (كربون) الأحماض الأمينية المتميزة في JPF مقابل النموذج (دمجموعات التحليل (BAs) التفاضلية في مجموعة التحكم في الجودة (QCF) مقابل النموذج. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الارتباط بين أحماض الصفراء في البراز ووفرة الميكروبات المعوية
أُجري تحليل ارتباط سبيرمان بين الشعب الميكروبية المتباينة وأحماض الصفراء (BAs) المتباينة (الشكل 6A–F، الشكل 7A–D). وتوضح المخططات الوترية (Chord charts) الارتباطات التي بلغت قيمتها المطلقة |r| ≥ 0.8 (الشكل 6B، 6D، 6F). وفي المقارنة بين مجموعة النموذج والمجموعة الضابطة، ارتبط 23-DCA إيجابياً مع Saccharibacteria وFirmicutes، وارتبط سلبياً مع Proteobacteria وBacteroidetes (الشكل 6B). أما في المقارنة بين مجموعة BJQF ومجموعة النموذج، فقد ارتبطت Proteobacteria بكل من TLCA-3S وLCA-3S وTCA وα-MCA و6,7-DKLCA وHCA وCDCA وTHCA (الشكل 6D). وفي المقارنة بين مجموعة BSF ومجموعة النموذج، ارتبطت Proteobacteria إيجابياً مع TDCA و6,7-DKLCA وLCA-3S؛ بينما ارتبطت Saccharibacteria إيجابياً مع GUDCA و23-DCA (الشكل 6F).

figure-results-6
الشكل 6: الارتباطات بين أحماض الصفراء (BAs) التفاضلية في البراز ووفرة البكتيريا التفاضلية على مستوى الشعبة. (A, C, E) تحليلات ارتباط سبيرمان لمجموعات الضبط مقابل النموذج، و BJQF مقابل النموذج، و BSF مقابل النموذج، على التوالي. (B, D, F) مخططات وترية مقابلة توضح الارتباطات القوية (|r| ≥ 0.8) لمجموعات الضبط مقابل النموذج، و BJQF مقابل النموذج، و BSF مقابل النموذج، على التوالي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تُظهر مخططات الأوتار (Chord charts) ارتباطات بقيمة |r| ≥ 0.8 (الشكل 7B، 7D). وفي مقارنة JPF مقابل النموذج، ارتبطت Saccharibacteria ارتباطاً سلبياً بـ TLCA-3S وLCA-3S وHCA، وارتبطت ارتباطاً إيجابياً بـ 23-DCA (الشكل 7B). وفي مقارنة QCF مقابل النموذج، ارتبطت Saccharibacteria ارتباطاً سلبياً بـ HCA وCA وLCA-3S وTHCA وTLCA-3S، وارتبطت ارتباطاً إيجابياً بـ 23-DCA (الشكل 7D). وتشير هذه النتائج إلى أن تركيبات TCM المختلفة تعدل شبكة التفاعل بين البكتيريا والأحماض الصفراوية (BA) من خلال أنماط متميزة.

figure-results-7
الشكل 7: الارتباطات بين أحماض الصفراء (BAs) التفاضلية في البراز ووفرة البكتيريا التفاضلية. (A, C) تحليلات ارتباط سبيرمان لمجموعتي JPF مقابل Model وQCF مقابل Model على التوالي. (B, D) المخططات الوترية المقابلة التي توضح الارتباطات القوية (|r| ≥ 0.8) لمجموعتي JPF مقابل Model وQCF مقابل Model على التوالي. يشير اللون الأحمر إلى الارتباطات الإيجابية، بينما يشير اللون الأزرق إلى الارتباطات السلبية. p < 0.05, p < 0.01. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

توافر البيانات:
تم رفع جميع البيانات الخام إلى قاعدة بيانات أرشيف قراءات التسلسلات (SRA) التابعة لـ NCBI (رقم الوصول: PRJNA749732). https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA749732

المناقشة

تبحث هذه الدراسة في الآلية العلاجية لتركيبة BJQF والتركيبات الفرعية المفككة منها في تخفيف التهاب القولون التقرحي (UC) المستحث بواسطة DSS عبر محور استقلاب حمض الصفراء والميكروبات المعوية. ويشير هذا التحليل متعدد الأوميكات إلى أن BJQF يمارس تأثيرات مضادة لالتهاب القولون عن طريق استعادة التوازن الميكروبي المختل المرتبط بالتهاب القولون التقرحي وتطبيع تجمع أحماض الصفراء (BA) في البراز. وتظهر تركيباتها الفرعية تأثيرات تنظيمية متميزة خاصة بكل وحدة، حيث أظهرت JPF فاعلية هي الأكثر تشابهًا مع التركيبة الكاملة، مما يكشف عن الدور الجوهري لاستراتيجية Jianpi. كما حدد المؤلفون 23-DCA كعقدة رئيسية في أحماض الصفراء تربط بين إعادة تشكيل الميكروبات وتحسن التهاب القولون التقرحي، واعتبروا TLCA-3S/LCA-3S كعلامات بيولوجية محتملة للفاعلية.

يرتبط استعادة التوازن الميكروبي بوساطة BJQF احتماليًا بتطبيع مجموعة BA وتقليل الالتهاب. يتأثر UC بخلل في شبكة المناعة-الميكروبيوتا-التمثيل الغذائي، ويعد عدم توازن الشعب الأساسية سمة نموذجية في كل من المرضى والنماذج الحيوانية10. وتؤكد هذه النتائج أن جرذان UC المستحثة بـ DSS تظهر انخفاضًا في Firmicutes وLactobacillus، وزيادة في Bacteroidetes وProteobacteria — بما يتفق مع السمات السريرية لـ UC11. وقد عكس BJQF وJPF هذه التشوهات بشكل أكثر فعالية، بينما أظهر BSF وQCF تأثيرات متوسطة. ونظرًا لأن تصنيفات Firmicutes مثل Lactobacillus وClostridium موثقة جيدًا بأنها تحمل الآلية الإنزيمية الأساسية للتخليق الحيوي لـ BA الثانوية12، فإن هذا يشير إلى وجود صلة ارتباطية محتملة: حيث يقوم BJQF، وخاصة وحدة Jianpi فيه، باستعادة Firmicutes ذات القدرة على التخليق الحيوي لـ BA، مما قد يعزز التحول الحيوي لـ BA الثانوية ويصحح الاضطراب الأيضي. أما على مستوى الجنس، فقد عكس BJQF وJPF أيضًا التغيرات التي أحدثها UC في Bacteroides وRuminococcus_2 وEnterorhabdus وCorynebacterium_1، مما أدى إلى مزيد من الإصلاح لخلل التوازن والوظائف المرتبطة بتخليق BA.

قد يساهم استعادة التوازن الميكروبي (microbial dysbiosis) في تطبيع تجمع الأحماض الصفراوية (BA pool)، وهو آلية أيضية رئيسية للتأثيرات المضادة لالتهاب القولون. يعتمد أيض الأحماض الصفراوية بشكل كبير على النشاط الميكروبي، وتعد الأحماض الصفراوية الثانوية ضرورية للتوازن المناعي وسلامة الحاجز المعوي13. وتظهر بيانات LC-MS/MS أن جرذان التهاب القولون التقرحي (UC) تعاني من انخفاض في الأحماض الصفراوية الثانوية الواقية (23-DCA, 3-oxo-DCA, DLCA) وتراكم في الأحماض الصفراوية المكتنفة بالكبريتات (TLCA-3S, LCA-3S) — وهو ما يتفق مع التقارير السابقة حول خلل تنظيم الأحماض الصفراوية المرتبط بالتهاب القولون التقرحي14. وتتميز الأحماض الصفراوية المكتنفة بالكبريتات بضعف الامتصاص المعوي ولا يمكنها الدخول في الدورة الكبدية المعوية15، حيث يعكس تراكمها ضعف أيض الأحماض الصفراوية ويرتبط بتنشيط مسارات مسببة للالتهاب16. وقد نجحت جميع التركيبات في عكس هذا الاضطراب، حيث أظهرت BJQF و JPF أقوى التأثيرات.

يؤكد تحليل الارتباط أن 23-DCA هو العقدة الرئيسية لأحماض الصفراء (BA) المرتبطة بتغيرات الشعب الأساسية: حيث يرتبط ارتباطاً إيجابياً مع Firmicutes وارتباطاً سلبياً مع Proteobacteria. وباعتباره حمض صفراء ثانوياً له تأثيرات مضادة للالتهابات وواقية للحواجز المعوية17، فإن زيادة تنظيم 23-DCA بواسطة BJQF/JPF تُعزى احتماليةً إلى إثراء Firmicutes وتعزيز الاصطناع الحيوي، وترتبط بانخفاض السيتوكينات وتحسن النسيج. وبناءً على هذه النتائج الارتباطية، يقترح المؤلفون نموذجاً ميكانيكياً افتراضياً: يقوم BJQF باستعادة وفرة Firmicutes > مما يعزز الاصطناع الحيوي الميكروبي لأحماض الصفراء الثانوية > مما يؤدي إلى زيادة تنظيم 23-DCA الواقي > وبالتالي تثبيط الالتهاب المعوي. ولا يزال هذا النموذج بحاجة إلى التحقق منه من خلال تجارب وظيفية.

تربط هذه الدراسة بين نظرية الطب الصيني التقليدي (TCM) والبيولوجيا الجزيئية الحديثة من خلال ربط الوحدات الوظيفية لتركيبة BJQF بتغيرات ميكروبية وأيضية محددة. ويعد مفهوم Jianpi هو الرابط الجوهري هنا. وتماشياً مع نظرية الطب الصيني التقليدي حول "التعزيز المتبادل بين الطحال والكلى"18، أظهر BSF إثراءً متوسطاً لبكتيريا Firmicutes وارتفاعاً في تنظيم 23-DCA. أما QCF فقد أثرى بشكل أساسي Verrucomicrobia (Akkermansia) ونظم استقلاب المواد الغريبة عن الجسم (xenobiotic metabolism)، مما يعكس تأثير "تطهير الرطوبة والحرارة". وتحدث التركيبة الكاملة تأثيرات تآزرية تتفوق على أي وحدة منفردة، مما يؤكد عقلانية تصميم المركبات في الطب الصيني التقليدي بناءً على تمايز المتلازمات.

يكشف تحليل الارتباط كذلك عن شبكات تفاعل متميزة بين البكتيريا والأحماض الصفراوية (BA) شكلتها كل تركيبة. وتعكس هذه الاختلافات خصائص تنظيمية محددة للوحدات الوظيفية وتوفر أساساً للتطبيق السريري الفردي: تركيبة JPF لحالات التهاب القولون التقرحي (UC) التي يهيمن عليها نقص الطحال مع خلل توازن بكتيري متمحور حول Firmicutes، وتركيبة QCF لحالات التهاب القولون التقرحي التي يهيمن عليها الحرارة والرطوبة مع تضرر الحاجز المخاطي، وتركيبة BJQF الكاملة للمتلازمة المركبة الكلاسيكية. وتماشياً مع هذه النتائج، تدعم الدراسات الحديثة أيضاً محور الميكروبيوتا المعوية-الأحماض الصفراوية كهدف علاجي أساسي لالتهاب القولون التقرحي والتدخلات القائمة على الطب الصيني التقليدي (TCM)19,20,21,22. ويعد نقص الأحماض الصفراوية الثانوية الناتج عن خلل التوازن الميكروبي سمة جوهرية في حالات التهاب القولون التقرحي النشط، ومن شأن استعادة التوازن الداخلي للأحماض الصفراوية أن يخفف بشكل فعال من الالتهاب وتضرر الغشاء المخاطي23.

تنطوي هذه الدراسة على عدة قيود. أولاً، تعتمد جميع الارتباطات بين إعادة التشكيل الميكروبي وتنظيم الأحماض الصفراوية (BA) على تحليل أوميكس المتعدد الارتباطي؛ ولم يتم التحقق من العلاقات السببية من خلال تجارب وظيفية مثل زراعة الميكروبيوتا البرازية. ثانياً، يعتبر حجم العينة متوسطاً نسبياً، مما قد يحد من القوة الإحصائية وإمكانية تعميم النتائج. ثالثاً، تم قياس الأحماض الصفراوية في البراز فقط؛ ولم يتم قياس ملامح الأحماض الصفراوية في المصل والمخاطية، والتي تعكس الدورة المعوية الكبدية. رابعاً، لم يتم تحديد المواد الكيميائية النباتية النشطة المحددة المسؤولة عن تنظيم الميكروبيوتا والأحماض الصفراوية. سيعمل البحث المستقبلي على التحقق من العلاقات السببية عبر زراعة الميكروبيوتا البرازية وتجارب الحيوانات الخالية من الجراثيم، وتحديد المكونات النشطة الرئيسية في BJQF، وإجراء دراسات سريرية تجريبية للتحقق من القيمة الانتقالية.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب مصالح للإفصاح عنه.

مساهمة المؤلفين:
ساهم Hongyu Chen في التصور، والمنهجية، والتحقق من الصحة، والتحليل الرسمي، والتقصي، والتصور المرئي، وكتابة المسودة الأصلية للمخطوطة. وساهم Song Zhao في المنهجية، وإدارة المشروع، والتقصي، والتصور المرئي، والحصول على التمويل، وكتابة المسودة الأصلية. وساهم Luzhou Xu في التصور، وتوفير الموارد، ومراجعة المخطوطة وتحريرها، وإدارة المشروع، والإشراف العام على الدراسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81774243).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) سعة 0.2 ملAxygenPCR-02-Cلتفاعلات تضخيم جين 16S rRNA باستخدام تقنية PCR
أنابيب طرد مركزي معقمة سعة 1.5 ملAxygenMCT-150-Cحاويات معقمة لجمع العينات وتخزينها وطردها مركزياً
فورمالين منظم متعادل بنسبة 10%سولاربيو ساينس (Solarbio Science) & التكنولوجيا1008128لتثبيت عينات أنسجة القولون
نظام 6500 QTRAP MS/MSSciex5009065لإجراء التوصيف الكمي لأحماض الصفراء في البراز استناداً إلى مراقبة التفاعلات المتعددة (MRM)
-80 ºمجمد ذو درجة حرارة فائقة الانخفاضThermo Fisher Scientific702-URللحفظ بالتجميد للعينات البرازية والعينات البيولوجية
أجاروزSigma-AldrichA9539للكشف عن سلامة الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) عبر الرحلان الكهربائي للهلام
ثمرة Alpiniae Oxyphyllaeشركة نانجينج للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230321المواد العشبية الخام، بمقدار 15 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وBSF
جذر Astragalusشركة نانجينج للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230312المواد العشبية الخام، 15 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وJPF
Aucklandiae Radixشركة نانجينج للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230217المواد العشبية الخام، 6 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF و QCF
مزيج قياسي من أحماض الصفراءSigma-AldrichB4893للمعايرة النوعية والكمية لأحماض الصفراء في البراز
جذمور الكوبتدس (Coptidis Rhizoma)شركة نانجينغ للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)الدفعة 20230118المواد العشبية الخام، 4 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وQCF
كبريتات ديكستران الصوديوم (DSS, 36–٥٠ كيلو دالتون)MP Biomedicals160110لتحفيز التهاب القولون التقرحي في الجرذان، يتم تحضيره كمحلول شرب بتركيز 3.5% (وزن/حجم) لمدة 10 أيام متتالية.
جذر عرق السوسشركة نانجينغ للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)الدفعة 20230411مادة عشبية خام، 5 جم لكل جرعة، تُستخدم في BJQF وJPF
GraphPad Prismبرمجيات GraphPadv7.00للتحليل الإحصائي، واختبار الدلالة، ورسم الرسوم البيانية العلمية
صبغة الهيماتوكسيلين والإيوزين (H&E)&هـ) طقم صبغBeyotime BiotechnologyC0105Sلصبغ قطاعات أنسجة القولون، والملاحظة الهيستوباثولوجية، وتقدير درجة الالتهاب
جهاز طرد مركزي مبرد عالي السرعةEppendorf5810Rلطرد العينات مركزياً في استخلاص الأحماض النووية وتحضير الميتابولوميات
ميثانول بدرجة HPLCMerck KGaA1.06007.4008لتحضير عينات الـ LC-MS/MS وتحضير الطور المتحرك
منصة تسلسل Illumina MiSeqIllumina Inc.SY-410-1003لتسلسل جين 16S rRNA عالي الإنتاجية وتوصيف ميكروبيوم الأمعاء
قاعدة بيانات KEGGمختبرات كانيهيساالإصدار 107.0لتوصيف المسارات الوظيفية الميكروبية
جرذان SD ذكر من درجة SPFشركة شنغهاي شيبو-بيكاي للحيوانات التجريبية المحدودة (Shanghai Xipu-Bikai Experimental Animal Co., Ltd.)/44 جرذاً تزن كل منها 200 ± ٢٠ جم، لبناء نموذج التهاب القولون التقرحي (UC) والتجارب اللاحقة
Multiskan™ قارئ الأطباق الدقيقة GOThermo Fisher Scientific Oy51119080لقراءة امتصاصية مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) وتقدير كمية السيتوكينات
جهاز مطياف NanoDrop 2000 الضوئيThermo Fisher ScientificND-2000لتقدير كمية ونقاء الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (gDNA) البكتيري المستخلص من البراز
كاسيتات الطمر في البارافينLeica Biosystems3801520لتجفيف أنسجة القولون وطمرها في البارافين
PowerFecal® طقم استخلاص الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)MoBio (Qiagen)12830-50لاستخلاص وتنقية الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) الجينومي للبكتيريا البرازية
ثمار البسورايا (Psoraleae Fructus)شركة نانجينج للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230129مادة عشبية خام، بمقدار 15 جم لكل جرعة، مستخدمة في BJQF وBSF
البيئة الإحصائية Rمؤسسة R للحوسبة الإحصائيةv4.2.0لتحليل المعلوماتية الحيوية والحوسبة الإحصائية
طقم مقايسة الممتز المائي للإنترلوكين 10 (IL-10) في الجرذانلون تشانغ شو بيوتك (Lun Chang Shuo Biotech)YD-30194للكشف الكمي عن تركيز IL-10 في المصل
إنترلوكين-1 في الجرذان (Rat IL-1)β طقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA Kit)لون تشانغ شو بيوتيكYD-30206للكشف الكمي عن إنترلوكين-1 (IL-1) في المصلβ التركيز
عامل نخر الورم في الجرذان (Rat TNF-α)α طقم مقايسة الممتز المائية المرتبط بالإنزيم (ELISA)Lun Chang Shuo BiotechYD-31063للكشف الكمي عن عامل نخر الورم (TNF-α) في المصلα تركيز
Sanguisorbae Radixشركة نانجينغ للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)الدفعة 20230309المواد العشبية الخام، بمقدار 10 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وQCF
جذر السكوتيلاريا (Scutellariae Radix)شركة نانجينغ للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230407المواد العشبية الخام، بمقدار 10 غرام لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وQCF
نظام Shim-pack UFLC UPLCشركة شيمادزو (Shimadzu Corporation)CBM-20Aللفصل الكروماتوغرافي لعينات أحماض الصفراء البرازية
جذر Atractylodis Macrocephalae المقليشركة نانجينغ للطب الصيني التقليدي المحدودة (Nanjing TCM Co., Ltd.)دفعة 20230225المادة العشبية الخام، بمقدار 10 جم لكل جرعة، المستخدمة في BJQF وJPF

المراجع

  1. Gilbert JA, et al. Current understanding of the human microbiome. Nat Med. 2018;24(4):392-400.
  2. Fiorucci S, et al. Bile acid signaling in inflammatory bowel diseases. Dig Dis Sci. 2021;66(3):674-693.
  3. Sinha SR, et al. Dysbiosis-induced secondary bile acid deficiency promotes intestinal inflammation. Cell Host Microbe. 2020;27(4):659-670.e5.
  4. Zhan K, et al. Gut microbiota-bile acid crosstalk in diarrhea-irritable bowel syndrome. Biomed Res Int. 2020;2020:3828249.
  5. Zhang C, Jiang M, Lu A. Considerations of traditional Chinese medicine as adjunct therapy in the management of ulcerative colitis. Clin Rev Allergy Immunol. 2013;44(3):274-283.
  6. Zhang S, et al. Consensus on Chinese medical diagnosis and treatment of ulcerative colitis (2009). Chin J Integr Tradit West Med. 2010;30(5):527-532.
  7. Chen YL, et al. Systems pharmacology approach reveals protective mechanisms of Jian-Pi Qing-Chang decoction on ulcerative colitis. World J Gastroenterol. 2019;25(21):2603-2622.
  8. Hu J, et al. Qingchang Huashi Formula attenuates DSS-induced colitis in mice by restoring gut microbiota-metabolism homeostasis and goblet cell function. J Ethnopharmacol. 2021;266:113394.
  9. Cooper HS, et al. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis. Lab Invest. 1993;69(2):238-249.
  10. Zuo T, Ng SC. The gut microbiota in the pathogenesis and therapeutics of inflammatory bowel disease. Front Microbiol. 2018;9:2247.
  11. Kobayashi T, et al. Ulcerative colitis. Nat Rev Dis Primers. 2020;6(1):74.
  12. Wahlström A, Sayin SI, Marschall HU, Bäckhed F. Intestinal crosstalk between bile acids and microbiota and its impact on host metabolism. Cell Metab. 2016;24(1):41-50.
  13. Joyce SA, Gahan CGM. Bile acid-microbiota crosstalk in inflammatory bowel disease. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2020;17(11):694-707.
  14. Duboc H, et al. Connecting dysbiosis, bile-acid dysmetabolism and gut inflammation in inflammatory bowel diseases. Gut. 2013;62(4):531-539.
  15. Alnouti Y. Bile acid sulfation: A pathway of bile acid elimination and detoxification. Toxicol Sci. 2009;108(2):225-246.
  16. Ungaro R, et al. Ulcerative colitis. Lancet. 2017;389(10080):1756-1770.
  17. Tang Y, Li Y, Zhang L, et al. 23-Deoxycholic acid ameliorates colitis by regulating gut microbiota and activating FXR signaling. J Ethnopharmacol. 2022;298:115463.
  18. Lu YH, Cong LL, Zhang Y. TCM syndrome classification and its correlation with gut microbiota in ulcerative colitis. Chin J Integr Tradit West Med. 2020;40(7):867-871.
  19. Zhang Y, Li X, Wang H. Traditional Chinese medicine for inflammatory bowel disease: From empirical therapy to mechanism-based treatment. J Ethnopharmacol. 2022;296:115347.
  20. Li J, Wang Y, Zhang L, et al. Targeting the gut microbiota-bile acid axis: a novel strategy for TCM compound prescriptions in treating chronic inflammatory diseases. Pharmacol Res. 2023;192:106589.
  21. Abdo W, et al. Gut Microbiota and Bile Acid Metabolism in Inflammatory Bowel Disease: Pathophysiological Links and Therapeutic Implications. Arch Med Res. 2023;54(8):789-801.
  22. Liu M, et al. Traditional Chinese Medicine Targeting Gut Microbiota-Bile Acid Axis for Ulcerative Colitis: A Systematic Review. Arch Med Res. 2022;53(6):542-553.
  23. Chen L, et al. Secondary Bile Acids as Key Mediators of Intestinal Mucosal Barrier Protection in Inflammatory Bowel Disease. Arch Med Res. 2023;54(2):189-200.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

DSS 16S rRNA LC MS MS
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.