ارتباط تعدد أشكال MIR30C rs928508 مع نتائج تخفيف ألم الولادة فوق الجافية لدى النساء البدائيات: دراسة رصدية

ملخص

بحثت هذه الدراسة الرصدية في العلاقة بين تعدد أشكال MIR30C rs928508 ونتائج مسكنات المخاض فوق الجافية، ودرجات الألم، ومدة المخاض، وردود الفعل السلبية لدى النساء اللواتي يلودن بالولادة الطبيعية.

الملخص

قد تؤثر التعددات الجينية على التفاوت الفردي في إدراك ألم الولادة وفعالية المسكنات. يلعب MicroRNA-30c (MIR30C) دورا في تعديل الألم، لكن ارتباطه بمسكنات الألم لا تزال غير واضحة. بحثت هذه الدراسة في العلاقة بين تعدد أشكال MIR30C rs928508 وتخفيف ألم المخاض فوق الجافية لدى النساء الأوليات. تم تسجيل ما مجموعه 202 امرأة صينية من نوع هان الأولية السليمة تلقين أنجرا فوق الجافية الموحد باستخدام روبيفاكائين وسوفنتانيل. تم اكتشاف الأنماط الجينية rs928508 (GG، GA، وAA) باستخدام اختبارات TaqMan، وأجري تحليل توازن هاردي–وينبرغ لتقييم توزيع الجينات السكانية. تم تقييم شدة الألم باستخدام مقياس الرؤية التناظرية (VAS) في البداية قبل المسكن، و30 دقيقة بعد المسكن، وساعة بعد المسكن، وبعد توقف عن العلاج. تم تقييم العوامل المؤثرة على نتائج مسكنات ألم العمل باستخدام تحليل الانحدار متعدد المتغيرات. أظهر حاملو النمط الجيني ل GG درجات VAS أعلى بشكل ملحوظ قبل المسكن، وبعد 30 دقيقة من المسكن، وبعد التوقف عن التسكين، إلى جانب مدة الولادة في المرحلة الأولى طويلة مقارنة بحاملي GA وAA. حدد تحليل الانحدار متعدد المتغيرات النمط الجيني ل GG كعامل مستقل مرتبط بدرجات VAS الأعلى بعد التخدير. كانت نتائج حديثي الولادة ومعظم التفاعلات السلبية قابلة للمقارنة بين الأنماط الجينية، باستثناء زيادة معدل حدوث ألم في مواقع الثقب لدى حاملي GG. ارتبط أليل G في MIR30C rs928508 بزيادة الألم في القاعدة الأساسية، وانخفاض محتمل في فعالية تخفيف ألم المخاض فوق الجافية، وزيادة مدة الولادة في المرحلة الأولى لدى النساء الملودات بالبدائية. تدعم هذه النتائج المزيد من التحقيق في الأهمية المحتملة للتغيرات الجينية الدوائية في MIR30C في مسكنات ألم الولادة.

المقدمة

ألم المخاض، الذي يعتبر من أكثر أشكال الألم شدة في الإنسان، لا يسبب فقط ضغوطا فسيولوجيا شديدا لدى الأمهات بل قد يؤثر سلبا على نتائج الأمهات وحديثي الولادة من خلال آليات الغدد الصماء العصبية. وهذا قد يؤدي إلى مضاعفات مثل انقباضات الرحم غير الطبيعية، وضيق الجنين، واكتئاب ما بعد الولادة ^1,2. يخفف مسكنات ألم الولادة بشكل فعال من استجابة الألم والتوتر لدى الأم، وتحسن تجربة الولادة، وتظهر ملف أمان إيجابي لكل من الأم والرضيع عند إعطاؤه بشكل مناسب³. لقد ثبت أن تخفيف الألم فوق الجافية، وهو الطريقة المفضلة لتخفيف ألم المخاض في الممارسة السريرية، يقلل بشكل فعال من درجات الألم على مقياس الرؤية التناظرية (VAS). علاوة على ذلك، فإن استكشاف أنظمة الأدوية المركبة حسن فعالية المسكنات مع تقليل الآثار الجانبية⁴.

تشير الأدلة القوية إلى أن التعدديات الجينية، كشكل رئيسي من التنوع الجيني، قد تؤثر على نتائج تسكين ألم الولادة. أظهرت إحدى الدراسات أن الأموات الحاملة للأليل G من تعدد أشكال جين مستقبلات الأفيون μ (OPRM1) rs1799971 احتاجت إلى جرعات أعلى بشكل ملحوظ من الأفيونات لتخفيف ألم الولادة مقارنة بالأفراد الذين لديهم النمط الجيني AA وأبلغوا عن رضا أقل عن مسكنات. قد تقلل الطفرات في هذا الموقع من تعبير غشاء المستقبل، مما يخفف من فعالية مسكنات الأفيون⁵. علاوة على ذلك، قد تؤثر التعدديات في جين كاتيكول-أو-ميثيل ترانسفيراز (COMT) على درجة التحسس المركزي للألم من خلال تعديل استقلاب الدوبامين، مما يغير عتبة الألم لدى الأم والاستجابة للأدوية المسكنة^{أثناء الولادة.} كما أبلغ عن تعدد أشكال جين السيتوكروم P450 3A4 (CYP3A4) على تعديل نتائج المسكنات من خلال التأثير على معدلات أيض الأدوية ^7,8. بالإضافة إلى ذلك، أفاد تشانغ وآخرون أن المرضى الذين لديهم النمط الجيني MDR1 1236C>T TT كانوا بحاجة إلى كمية أكبر بشكل ملحوظ من الفنتانيل بعد العملية القيصرية مقارنة بمن لديهم النمط الجيني CC^{أو CT 9}. معا، توفر هذه النتائج نظرة على الأساس الجيني الكامن وراء التباين بين الأفراد في إدراك الألم¹⁰.

مع التقدم في أبحاث اللاجينية، أصبح دور تعدد أشكال جينات الحمض النووي الريبي غير المشفرة في تعديل الألم معروفا بشكل متزايد. تقوم الميكروRNA (miRNAs)، باعتبارها منظمات رئيسية لعلم الوراثة فوق الوراثي، بتعديل التعبير الجيني عن طريق استهداف الحمض النووي الريبي الرسول (mRNA) للكبت أو التحلل الانتقالي، مما يلعب دورا حاسما في نقل إشارة الألم وتطور تحسس الألم¹¹. أظهرت العديد من الدراسات أن ال miRNA يعبر عنه بشكل مختلف في الألم العصبي، والألم الالتهابي، وحالات الألم الأخرى، ويشارك في تحسس الألم المركزي من خلال تنظيم مسارات الإشارة المتعددة^12,13. قد تؤثر التعددات في الميكرو الريبي على مستويات التعبير أو كفاءة الارتباط بالجينات المستهدفة، مما يضبط سلسلة الإشارات المرتبطة بالألم¹⁴. ربطت أبحاث سابقة تعدد أشكال ال miRNA بالتغاير الظاهري لمتلازمة الألم الإقليمي المعقد (CRPS) والألم المرضي في سرطان الثدي^15,16. من بين العديد من ال miRNA المرتبطة بالألم، حظيت عائلة miR-30 باهتمام متزايد بسبب مشاركتها في تنظيم الألم العصبي ^17,18. على وجه الخصوص، تم التحقيق بشكل موسع في الدور التنظيمي ل miR-30c-5p. أظهرت الدراسات الحيوانية أن تعبير miR-30c-5p كان مرتفعا بشكل ملحوظ في البنى العصبية المرتبطة بالألم بعد إصابة العصب الوركي، بينما أدى إعطاء مثبط صناعي إلى عكس فرط حساسية الألم العصبي في الفئران بشكل مستمر. كشفت دراسات ميكانيكية إضافية أن miR-30c-5p يستهدف الحمض النووي الريبي الرسول لإزيم الميثيل ترانسفيراز 3a (DNMT3a) وDNMT3b، مما يؤثر على مستويات مثيلة الحمض النووي في الخلايا العصبية من خلال التنظيم اللاجيني ويساهم في الحفاظ طويل الأمد للألم^. أشارت الدراسات السريرية أيضا إلى وجود علاقة بين مستويات miR-30c-5p وشدة الألم العصبي لدى المرضى^20,21. ومن الجدير بالذكر أن الأبحاث الحديثة أفادت بأن أليل G في miR-30c rs928508 زاد من خطر الألم لدى الأفراد المعرضين للتنمر في مكان^العمل. أظهرت دراسة أخرى أن أليل G يقلل من تعبير miR-30c من خلال التأثير على معالجة miR-30c الأولي (pri-miR-30c) إلى miR-30c ناضج. ومع ذلك، لا يزال ما إذا كانت تعدد أشكال miR-30c يؤثر على حساسية ألم المخاض أو نتائج مسكنات الألم فوق الجافية غير واضح.

على الرغم من تحسين تقنيات مسكنات ألم المخاض باستمرار، إلا أن آليات تنظيم ال miRNA في تعديل الألم أصبحت أكثر وضوحا. بالإضافة إلى ذلك، تم تحديد miR-30c-5p كعامل تنظيمي مهم في الألم العصبي، وقد ارتبطت تعدد الأشكال بأنماط متعلقة بالألم. ومع ذلك، لا يزال ما إذا كانت تعدد أشكال miR-30c تشارك في تنظيم تسكنات ألم العمل أم لا. لذلك، ركزت الدراسة الحالية على تعدد أشكال MIR30C rs928508 للتحقيق في علاقته بنتائج مسكنات ألم الولادة لدى النساء اللواتي يتلقين مسكنات فوق الجافية. قد توفر النتائج دعما نظريا للتحقيقات المستقبلية حول الدور المحتمل للتنوع الجيني في استراتيجيات تخفيف ألم الولادة الفردية.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة وفقا للمعايير الأخلاقية للجنة الأخلاقيات الطبية في مستشفى شيجياتشوانغ السادس، وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة بموجب الرقم 2022111709. تم الحصول على موافقة مكتوبة مستنيرة من جميع المشاركين قبل التسجيل. يتم عرض نظرة عامة تخطيطية لتصميم الدراسة وسير العمل التجريبي في الشكل 1.

الشكل 1. مخطط سير العمل لتصميم الدراسة والنتائج الرئيسية. يلخص الشكل سير العمل العام للدراسة التي تحقق في العلاقة بين تعدد أشكال MIR30C rs928508 ونتائج مسكنات الألم فوق الجافية لدى النساء اللولد الأوليات. يشمل سير العمل استقطاب المشاركين، وتحديد النمط الجيني لمعيار MIR30C rs928508، وتصنيف الأنماط الجينية، وإعطاء مسكنات مؤخرة للعمل فوق الجافية، وتقييم النتائج، والتحليل الإحصائي. شملت النتائج المقيمة درجات الألم على مقياس التناظري البصري (VAS)، ومدة مرحلة المخاض، ونتائج حديثي الولادة، وردود الفعل السلبية المرتبطة بالمسكن. يسلط المخطط الضوء أيضا على النتائج الرئيسية، بما في ذلك أعلى درجات الألم، وطول فترة المخاض الأولى، وزيادة حدوث ألم مواقع الثقب بين حاملي النمط الجيني GG. VAS، مقياس التناظري البصري؛ SNP، تعدد أشكال النيوكليوتيد الأحادي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

البيانات السريرية
في مستشفى شيجياتشوانغ السادس، تم تسجيل النساء اللاتي ولدن بين يناير 2022 ويناير 2025 بشكل متتالي كمشاركات دراسة عبر نظام السجلات الطبية الإلكترونية للمستشفى، مع تضمين 202 حالة. خلال زيارات ما قبل الولادة بين الأسبوع 28 و36 من الحمل، تم تقديم النساء المؤهلات اللامولدات للولادة إلى الدراسة وقدمن موافقة مكتوبة مستنيرة مسبقا. المرضى الذين شملوا في التحليل كانوا أولئك الذين ولدوا في الأسبوع 37–41 من الحمل، وخضوا لحمل أحادي الطفل، وظهروا بعرض دماغي.

كانت معايير الإدراج كما يلي: 1) نساء أوليات سليمات تتراوح أعمارهن بين 20 و35 سنة؛ 2) العرق الصيني الهان؛ 3) حمل أحادي الظهر في الرأس مع عمر الحمل بين 37 و41 أسبوعا؛ و4) الولادة الطبيعية العفوية أو المدعومة مع مؤشرات على تخفيف الألم فوق الجافية. كانت مؤشرات تخفيف الألم فوق الجافية هي: (أ) طلب الأم مع موافقة مستنيرة موقعة؛ (ب) المخاض النشط (توسع عنق الرحم ≥2 سم مع انقباضات رحمية منتظمة)؛ و(ج) تقييم توليد يؤكد ملاءمة الولادة المهبلية.

شملت معايير الاستثناء: 1) الأمراض المصاحبة للحمل مثل ارتفاع ضغط الدم أثناء الحمل، داء السكري، أو أمراض القلب والأوعية الدموية الشديدة؛ 2) حمل متعدد؛ 3) التحويل إلى عملية قيصرية بعد بدء مسكنات الألم في المخاض؛ 4) الشذوذات الهيكلية في العمود الفقري؛ و5) موانع تناول مسكنات الولادة. شملت موانع تخفيف ألم المخاض: (أ) رفض الأم أو عدم القدرة على التعاون؛ (ب) زيادة الضغط داخل الجمجمة، أو تشوه العمود الفقري، أو العدوى الموضعية في موقع الثقب؛ (ج) اضطرابات التجلط (عدد الصفائح الدموية <70 × 10⁹/لتر أو اضطرابات معروفة في عامل التخثر); (د) نقص حجم الدم أو الصدمة غير المصححة؛ (ه) الحساسية تجاه المخدرات الموضعية أو الأفيونات؛ و(و) حالات الطوارئ التولدية (مثل ضيق الجنين الذي يتطلب ولادة قيصرية فورية، هبوط الحبل السري، أو المشيمة المنزاحة مع نزيف نشط).

تم حساب القوة الإحصائية بعد الحدث بمقدار 0.91، مما يشير إلى أن حجم العينة كان كافيا لاكتشاف الفروقات في النمط الجيني وتكرار الأليل بين السكان المعنيين والسكان المرجعيين.

المسكنات والتخدير
قبل التخدير فوق الجافية، كانت جميع النساء الأوليات يخضعن لمراقبة مستمرة للعلامات الحيوية. تم تعريف تثبيط الجهاز التنفسي بأنه معدل تنفس <10 أنفاس/دقيقة أو تشبع الأكسجين (SpO₂) <90٪، وانخفاض ضغط الدم كضغط دم انقباضي <90 ملم زئبق أو انخفاض بنسبة >20٪ عن الوضع الأساسي، واحتباس البول بأنه عدم القدرة على الإفراغ تلقائيا خلال 6 ساعات بعد الولادة يتطلب القسطرة. تم تقييم توسع عنق الرحم من خلال الفحص المهبلي الرقمي الذي أجريه طبيب التوليد المعالج أو قابلة معتمدة في المناوبة. خضع جميع الفاحصين لتدريب موحد في تقييم توسع عنق الرحم باستخدام محاكي فحص عنق الرحم، مع تقييمات منتظمة لمراقبة الجودة لضمان الاتساق بين المقيمين. كانت الفحوصات العنقية تجرى بشكل روتيني كل ساعتين أثناء المخاض النشط أو بشكل أكثر تكرارا عند الاشتباه في وجود تشوهات في تقدم المخاض. بدأ تخفيف الألم فوق الجافية عندما وصل توسع عنق الرحم الموثق إلى ≥2 سم، كما سجل مقدم الرعاية النسائي المعالج.

تم اتباع بروتوكول موحد لتخفيف الألم فوق الجافية. مع وضع الولادة في وضعية ديكوبيتوس الجانبية اليسرى، تم الوصول إلى المساحة فوق الجافية عبر المساحة بين الفقرات L3–L4 باستخدام تقنية فقدان المقاومة للمحلول الملحي. تم دفع قسطرة فوق الجافية لمسافة 3–4 سم إلى داخل مساحة فوق الجافية. قبل إعطاء أي دواء، كان يتم إجراء شفط لطيف عبر القسطرة. عدم وجود سائل دماغي شوكي أو دم أكد صحة وضع القسطرة واستبعد التموضع داخل السرع أو داخل الأوعية الدموية. ثم تم إعطاء جرعة اختبار قدرها 5 مل من 1٪ ليدوكائين هيدروكلوريد فوق الجافية.

تبع ذلك فترة مراقبة لمدة 10 دقائق، يتم خلالها مراقبة الطفل عن كثب وفقا لمعايير السلامة المحددة مسبقا. شملت هذه المعايير غياب علامات السمية الجهازية بالتخدير الموضعي (مثل الخدر حول الفم، طعم معدني، طنين الأذن، أو الاضطراب)، وغياب علامات ارتفاع أو انسداد العمود الفقري الكلي (مثل التقدم السريع في انسداد الحركة، أو ضيق التنفس، أو اضطراب الصوت، أو تغير الحالة الذهنية)، والحفاظ على الاستقرار الديناميكي الدموي، المعروف بأنه معدل ضربات القلب وضغط الدم بقاء ضمن 20٪ من القيم الأساسية. بعد التأكد من استيفاء جميع معايير السلامة، تم إعطاء جرعة تحميل قدرها 10 مل تحتوي على 0.1٪ روبيفاكين هيدروكلوريد و0.4 ميكروغرام/مل من سترات السوفنتانيل.

مقاييس النتائج
تم تسجيل الخصائص الديموغرافية والتولدية الأساسية للنساء الأوليات، بما في ذلك العمر، مؤشر كتلة الجسم (BMI)، عمر الحمل، درجة حرارة الجسم عند توقف المسكن، مدة المراحل الأولى والثانية والثالثة، وإجمالي مدة المخاض. تم قياس درجة حرارة الجسم باستخدام مقياس حرارة إبطي رقمي موحد وضع في الإبط الأيمن لمدة 5 دقائق من قبل طاقم التمريض المدرب عند إيقاف تخفيف الألم. تم تسجيل مدة مرحلة الولادة بشكل استباقي من قبل القابلة أو طبيب التوليد المعالج وفقا لمعايير التوليد المعيارية المحددة مسبقا. تم تعريف المرحلة الأولى من المخاض بأنها الفترة من الانقباضات الرحمية المنتظمة مع توسع عنق الرحم ≥4 سم إلى التوسع الكامل لعنق الرحم (10 سم)؛ المرحلة الثانية امتدت من توسع عنق الرحم بالكامل إلى الولادة الجنينية؛ وامتدت المرحلة الثالثة من الولادة الجنينية إلى الولادة الكاملة من المشيمة. تم حساب إجمالي مدة العمل كمجموع المراحل الثلاث. تم تسجيل جميع القياسات في الوقت الحقيقي في المخطط الجزئي والسجل الطبي الإلكتروني. تلقى جميع العاملين السريريين المشاركين في إدارة العمل تدريبا موحدا على هذه التعريفات قبل بدء الدراسة.

تم تقييم شدة الألم باستخدام مقياس الرؤية التناظرية (VAS). كان كل طفل يبلغ عن مستوى الألم بنفسه عن طريق وضع علامة على خط 10 سم، وبعد ذلك قام الباحثون المدربون بقياس وتسجيل الدرجة. تم تعمية التقييمات لمعلومات النمط الجيني لأن التصنيف الجيني تم بعد جمع جميع بيانات النتائج السريرية، بما في ذلك درجات VAS. تم تسجيل درجات الألم في أربع نقاط زمنية: قبل بدء المسكنات (عندما يصل توسع عنق الرحم إلى 2 سم)، 30 دقيقة بعد بدء المسكن، ساعة واحدة بعد بدء المسكن، و30 دقيقة بعد الولادة (تتوافق مع وقت إيقاف المسكن). لأخذ الارتباطات داخل الموضوع الناشئة من تكرار قياسات VAS، تم إجراء تحليل مقياس تكراري ثنائي الاتجاه للتباين (ANOVA) عبر نقاط التقييم الأربع. تراوحت درجات VAS بين 0 و10، حيث تشير درجات 0–3 إلى ألم خفيف، و4–6 تشير إلى ألم متوسط، و7–10 تشير إلى ألم شديد²³.

تم تقييم نتيجة المسكنات الأساسية بعد 30 دقيقة من بدء المسكن. تم قياس شدة الألم باستخدام فحص VAS، حيث 0 أدل على عدم وجود ألم و10 أدل على أسوأ ألم يمكن تخيله. استنادا إلى تعريف مسبق، تم تصنيف درجة VAS >3 كتأثير مسكن ضعيف (متغير ثنائي يعتمد على الرمز 1)، بينما تم تصنيف درجة VAS ≤3 كتأثير مسكن كاف (مرمز ب 0). تم تطبيق هذا التعريف باستمرار طوال التحليل، واستخدم نموذج الانحدار اللوجستي الأساسي هذه النتيجة الثنائية كمتغير تابع.

تم تقييم نتائج حديثي الولادة باستخدام درجات أبغار بعد دقيقة و5 دقائق من الولادة. اعتبرت الدرجات من 8 إلى 10 طبيعية، ودرجات 5 إلى 7 أشارت إلى اختناق خفيف، ودرجات 0 إلى 4 أشارت إلى اختناق شديد²⁴. تم إجراء تقييمات أبغار وفقا لبرنامج الإنعاش لحديثي الولادة (الطبعة السابعة) الذي نشرته الأكاديمية الأمريكية لطب الأطفال والكلية الأمريكية لأطباء النساء والتوليد، بالإضافة إلى إرشادات التقييم الموحدة التي وضعتها إدارة طب حديثي الولادة في المستشفى. تم إجراء جميع التقييمات بواسطة ممرضات حديثي الولادة المدربات أو الأطباء المقيمين الذين كانوا عميان عن تخصيص مجموعات الدراسة.

تم تسجيل حدوث الآثار الجانبية بعد بدء تناول المسكن. شملت ردود الفعل السلبية اكتئاب التنفس، انخفاض ضغط الدم، احتباس البول، ألم في مواقع الثقب، الدوار، الغثيان أو القيء، والحكة. تم تعريف اكتئاب التنفس بأنه معدل تنفس يبلغ <10 أنفاس/دقيقة أو SpO₂ بنسبة <90٪؛ انخفاض ضغط الدم كضغط دم انقباضي <90 ملم زئبق أو انخفاض بنسبة >20٪ من الوضع الأساسي؛ احتباس البول كفشل في الإفراغ التلقائي خلال 6 ساعات بعد الولادة يتطلب قسطرة؛ ألم موقع الثقب كألم أبلغ عنه المريض في موقع الثقب مع درجة مقياس التقييم العددي (NRS) ≥4؛ الغثيان والقيء كغيان أو على الأقل نوبة واحدة من القيء؛ والحكة هي حكة جلدية أبلغت عنها المريض دون سبب آخر محدد. تمت مراقبة الأحداث السلبية من بدء تخفيف الألم فوق الجافية حتى خروجه من المستشفى، وتم تسجيلها بشكل مستقبلي من قبل الفريق السريري المعالج.

جمع عينات الدم وتحديد الجينات
خلال الفحوصات قبل الولادة، تم جمع دم الأوردة الطرفية (2 مل) من كل امرأة أولية الولادة تم تجنيدها تحت ظروف صيام (فترة صيام دنيا 8 ساعات) وفي وقت جمع موحد بين الساعة 08:00 و10:00 في أنابيب مضادات تخثر حمض الإيثيلين ديامين رباعي أسيتيك (EDTA) لاستخلاص حمض النووي لاحقا. تم تخزين جميع العينات فورا عند −80°C حتى التحليل. كانت فترة التخزين قبل استخراج الحمض النووي تتراوح بين شهر إلى ستة أشهر. لتقليل تحلل الحمض النووي، تم جمع العينات قبل التخزين، وتم تقليل دورات التجميد والذوبان طوال الدراسة. تم إذابة العينات المجمدة ببطء على الثلج قبل المعالجة.

تم استخراج الحمض النووي من الدم الكامل باستخدام مجموعة تنقية الحمض النووي الجينومية. قبل التصنيف الجيني، تم تقييم تركيز ونقاء الحمض النووي بواسطة القياس الطيفي فوق البنفسجي باستخدام نسبة A260/A280، وتم تقييم سلامة الحمض النووي بواسطة الرحلان الكهربائي الهلام الأغاروزي. تم تضمين عينات فقط استوفت معايير مراقبة الجودة المحددة مسبقا في التحليلات اللاحقة.

تم إجراء التصنيف الجيني لتعدد أشكال rs928508 باستخدام اختبارات التصنيف الجيني لتعدد الأشكال الأحادي النيوكليوتيد (SNP) من TaqMan (Cat. لا 4351379). تم استخدام مجسات مصنفة من قبل VIC للكشف عن الأليل A (5′-CAGGCCTGAGAGGCATGATGTGTGG-3′)، واستخدمت مجسات موسومة ب FAM للكشف عن الأليل G (5′-TAGCATCTTCCCAACACTTGCAATT-3′). كان حجم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكلي (PCR) 10 ميكرولتر ويتكون من 5.0 ميكرولتر من 2× خليط TaqMan Genotyping Master، و0.25 ميكرولتر من اختبار TaqMan SNP للتصنيف الجيني المصمم مسبقا (خليط البرايمر-المسبار)، و10–20 نانوغرام من قالب الحمض النووي الجيني، وماء خال من النوكلياز إلى حجم التفاعل النهائي.

تم إجراء التضخيم باستخدام جهاز PCR كمي وفقا لإجراءات اختبار TaqMan القياسية. تكونت ظروف الدورة الحرارية من خطوة أولية لتنشيط الإنزيم عند 95°م لمدة 10 دقائق، تليها 40 دورة إزالة الطبيعة عند 95°م لمدة 15 ثانية، وتلدين/تمديد عند 60°C لمدة 60 ثانية. بعد التضخيم، تم إجراء تحليل اكتساب إشارات الفلورة والتمييز الأليلي تلقائيا باستخدام برنامج الأدوات لتحديد الأنماط الجينية للعينات.

تم تحليل جميع العينات بشكل مكرر. بالنسبة للنتائج المتنافرة، تم إجراء تحليل مستقل ثالث، وتم اعتماد النتيجة المتوافقة. كان معدل المكالمات في SNP ≥95٪، وأظهرت 10٪ من العينات المختارة عشوائيا توافقا بنسبة 100٪ عند إعادة الاختبار. تم تضمين عناصر تحكم إيجابية، وضبطات سلبية، وضوابط بدون قوالب على كل لوحة اختبار. تم إجراء تعيين النمط الجيني بطريقة عمياء، وظل جميع العاملين في المختبر المشاركين في التصنيف الجيني غير معينين لبيانات النتائج السريرية طوال الدراسة.

التحليل الإحصائي
تم تقييم توازن هاردي–وينبرغ (HWE) للأليل rs928508 في مجموعة الدراسة. تم تقييم طبيعية المتغيرات المستمرة باستخدام اختبار شابيرو-ويلك. تم تقديم البيانات الموزعة عادة كمتوسط ± انحراف معياري (SD)، بينما تم الإبلاغ عن البيانات غير الموزعة بشكل طبيعي كنطاق متوسط وبين الرباعي (IQR).

للمقارنات بين ثلاث مجموعات، تم تطبيق تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) أو تحليل التباين المتكرر ذو القياس ثنائي الاتجاه عند تحقق افتراضات الطبيعية، تلاه اختبار توكي للفرق ذي الدلالة الصدق (HSD) للمقارنات اللاحقة المتعددة بعد الواقع. عندما لم تتحقق افتراضات الطبيعية، تم استخدام اختبار كروسكال–واليس H، تلاه اختبار دن بعد الاختبار مع تصحيح بونفيروني. تم تلخيص المتغيرات التصنيفية كترددات ونسب مئوية وتحليلها باستخدام اختبار كاي-تربيع (χ²). تم تقييم عدد الخلايا المتوقع قبل التحليل، واستخدم اختبار فيشر الدقيق عندما يكون أي تردد متوقع للخلية <5.

تم تحليل قياسات VAS المتكررة التي جمعت في نقاط زمنية متعددة باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه بمقاييس متكررة لأخذ الارتباطات داخل الشخص في الاعتبار. أجريت مقارنات بعد الحدث باستخدام اختبارات معدلة ببونفيروني للتحكم في المقارنات المتعددة.

تم إجراء تحليل الانحدار اللوجستي الثنائي لتحديد العوامل المرتبطة بنتائج ضعف تسكنات ألم العمل. تم تعريف المتغير الأساسي للنتيجة بأنه فعالية المسكنات بعد 30 دقيقة من بدء تخفيف الألم فوق الجافية. تم تقسيم درجات VAS باستخدام عتبة محددة مسبقا وهي 3، حيث تم تصنيف VAS >3 كتأثير مسكن ضعيف وVAS ≤3 كتأثير مسكن كاف. تم إدخال المتغيرات في نموذج متعدد المتغيرات بناء على الصلة السريرية. تم تقييم التعدد التعاوني باستخدام عامل التباين للتضخم (VIF)، وتم فحص التفاعلات المحتملة بين المتغيرات. تم توفير قيم VIF لجميع المتغيرات المدرجة في نموذج متعدد المتغيرات في الجدول التكميلي 1. تم تقييم معايرة النموذج باستخدام اختبار هوسمر-ليمشو لجودة الملاءمة.

تم اعتبار قيمة P ثنائية الجانب <0.05 ذات دلالة إحصائية. أجريت التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج SPSS (الإصدار 23.0).

النتائج

البيانات السريرية

كشف تحليل تعدد أشكال MIR30C rs928508 بين 202 امرأة أولية مسجلة أن النمط الجيني لحمض الورم كان الأكثر انتشارا (49.51٪ ، n = 100)، يليه GG (26.73٪ ، n = 54) وAA (23.76٪ ، n = 48). كانت ترددات الأليل المقابلة 51.49٪ ل G و48.51٪ ل A. كما هو موضح في الجدول 1، كانت توزيعات النمط الجيني والأليل متوافقة عموما مع التكرارات المبلغ عنها لسكان شرق آسيا في قاعدة بيانات Ensembl (إصدار Ensembl 116...

المناقشة

بحثت هذه الدراسة في العلاقة بين تعدد أشكال rs928508 ب miR-30c ونتائج تسكين الألم فوق الجافية في مجموعة مكونة من 202 امرأة صينية من الهان السليمات. أظهرت النتائج أن النمط الجيني للأم rs928508 مرتبط باختلافات في إدراك الألم أثناء تخفيف ألم المخاض ومدة المرحلة الأولى من المخاض. بالإضافة إلى ذلك، أظهر نظام تخفيف الألم فوق الجافية المستخدم في هذه الدراسة ملف أمان قابل للمقارنة عموما عبر مجموعات النمط الجيني فيما يتعلق بنتائج حديثي الولادة ومعظم ردود الفعل السلبية للأمه. توزيع النمط الجيني في ...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Agarose	Sigma-Aldrich	A2929-250G	تقييم سلامة الحمض النووي
محاكاة فحص عنق الرحم	Erler-Zimmer	R16160	تدريب الفاحص والتحكم في الجودة
مقياس حرارة إبط رقمي	Terumo	ETC207S	قياس درجة حرارة الجسم
صبغة هلام الحمض النووي	Biotium	41020	تصور الأحماض النووية
أنابيب جمع الدم EDTA	Greiner Bio-One	22040161	جمع الدم الوريدي المحيطي
نظام السجل الطبي الإلكتروني	مستشفى شيجياتشوانغ السادس	N/A	جمع البيانات السريرية
مجموعة قسطرة فوق الجافية	Teleflex (Arrow)	FlexTip Plus	وضع القسطرة فوق الجافية
جهاز التسريب فوق الجافية / مضخة PCEA	Eitan Medical	17000-031-0035	إدارة التخدير فوق الجافية
إبرة فوق الجافية (Tuohy)	Medline	N/A	إبرة Tuohy 17G × 3.5 بوصة المستخدمة للوصول فوق الجافية عند L3-L4
نظام تصوير الهلام	Thermo Fisher Scientific	iBright FL1500	تصور نطاقات الحمض النووي
مجموعة تنقية الحمض النووي الجيني	Thermo Fisher Scientific	K0512	استخراج الحمض النووي من عينات الدم الكامل المحيطي
نظام الرحلان الكهربائي للهلام الأفقي	Labmate	LMHES-A201	التحكم في جودة الحمض النووي
دلو الثلج والثلج المكسر	Corning	N/A	إذابة العينات ومعالجتها
محلول ليدوكايين هيدروكلوريد للحقن (1%)	Pfizer	0409-4713-65	جرعة اختبار فوق الجافية
أنابيب الميكروسنتيفوج (1.5 مل / 2 مل)	Corning	430909 (1.5 مل)؛ 430915 (2 مل)	تخزين العينات ومعالجتها
ماصات مجهرية (متغيرة الحجم)	Eppendorf	3125000044	PCR وتحضير العينة
مقياس مراقبة المريض متعدد المعلمات	Lepu Creative Medical	PC-3000	مراقبة ضغط الدم ومعدل ضربات القلب وتشبع الأكسجين
ماء خالٍ من النيوكلياز	Promega	P1195	إعداد كواشف PCR
نماذج البارتوجرام أو نظام البارتوجرام الإلكتروني	GrowthXP (PC PAL)	N/A	توثيق مراحل المخاض
محطة عمل الكمبيوتر الشخصية	Lenovo (ThinkStation)	P2	معالجة البيانات والتحليل
برنامج PLINK	مختبر بورسل	الإصدار 1.9	تحليل توازن هاردي-واينبرغ
مقياس التأكسج النبضي	Microlife	OXY 500 BT	مراقبة تشبع الأكسجين
جهاز PCR الكمي	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	QuantStudio Dx (4470660)	التمييز الأليلي واكتشاف الفلورسنت
ثلاجة الميكروسنتيفوج المبردة	Thermo Fisher Scientific (Heraeus)	Fresco 21 (75002425)	تحضير العينة
محلول روبيفاكايين هيدروكلوريد للحقن	Hikma Pharmaceuticals (Naropin)	0143-9265-10	عامل التخدير فوق الجافية
برنامج الإحصاء SPSS	IBM Corp.	الإصدار 23.0	التحليل الإحصائي
أنابيب ماصات مقاومة للأيروسول المعقمة	Thermo Fisher Scientific (ART)	2149P-05	تطبيقات البيولوجيا الجزيئية
محلول ملحي معقم	Baxter Healthcare Corporation	2B1301X	تقنية فقدان المقاومة
محقنات معقمة (5 مل، 10 مل)	Becton, Dickinson and Company (BD)	309646؛ 309695	تحضير الدواء وإدارته
محلول سوفينتانيل سترات للحقن	Hospira, Inc. (Pfizer)	0409-3382-11	مكون مسكن أفيوني
خليط Master Mix لتنميط TaqMan (2×)	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	4371353	كواشف تضخيم PCR
اختبار TaqMan SNP لتنميط (rs928508)	Thermo Fisher Scientific	4351379	تنميط MIR30C rs928508 متعدد الأشكال
مجمد درجة حرارة منخفضة للغاية (-80 درجة مئوية)	Thermo Fisher Scientific	FDE30086FV	التخزين الطويل الأمد للعينات
مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية / مقياس الطيف الضوئي NanoDrop	Thermo Fisher Scientific (NanoDrop)	ND-1000	تقييم تركيز الحمض النووي ونقاءه
نموذج تقييم المقياس المرئي التماثلي (VAS)	N/A	N/A	نموذج المقياس المرئي التماثلي القياسي 10 سم المستخدم لتقييم الألم