يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

تحليل المجموعة السريرية ل miR-215-5p كمؤشر حيوي تشخيصي لالتهاب المفاصل العظمي وآلياته عبر EREG في نموذج الغضروفية المستحثة بواسطة IL-1β

94 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72124

⸱

يوليو 31, 2026

 ,  ,  , 
1Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Orthopedics, Xianyou County General Hospital, 3Department of Rehabilitation, Xianyou County General Hospital, 4Department of Orthopedics, Putian 95th Hospital

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تهدف هذه الدراسة إلى تقييم miR-215-5p في المصل كمؤشر حيوي تشخيصي لالتهاب المفاصل العظمي ودراسة آلياته التنظيمية في الخلايا الغضروفية الناتجة عن IL-1β.

الملخص

التهاب المفاصل العظمي (OA) هو مرض تنكسي في المفاصل يتميز بتدهور غضروف المفصل وتسلل التهابي في الزلال. تهدف هذه الدراسة إلى تقييم miR-215-5p في المصل كمؤشر حيوي تشخيصي للالتهاب الدهمي الدهري ودراسة آلياته التنظيمية في الخلايا الغضروفية الناتجة عن IL-1β. تم تجنيد 110 مرضى التهاب المفاصل الدهري و105 من الضوابط الأصحاء. تم تحديد تعبير miR-215-5p وEREG في المصل بواسطة تفاعل متسلسل بوليميراز النسخ العكسي الكمي. تم تقييم القيمة التشخيصية ل miR-215-5p لالتهاب المفعول الهوائي باستخدام منحنى خصائص تشغيل المستقبل. تم تحفيز الخلايا الغضروفية C28/I2 باستخدام IL-1β لبناء نموذج خلية OA. تم تقييم قدرة الخلايا، وقدرتها على الهجرة، ومستويات السيتوكينات الالتهابية باستخدام مجموعة عد الخلايا 8، واختبار ترانسويل، واختبار منشط المناعة المرتبط بالإنزيم (ELISA). تم التحقق من الارتباط بين miR-215-5p وEREG باستخدام اختبار تقرير مزدوج لوسيفيراز واختبار التقرب المناعي للحمض النووي الريبي (RIP). في مرضى التهاب المفاصل الطلقي، تم رفع تنظيم miR-215-5p في المصل، بينما تم تقليل تنظيم EREG. أظهر MiR-215-5p أداء تشخيصيا جيدا لالتهاب الفصى (المساحة تحت المنحنى، AUC = 0.883). في خلايا C28/I2 المعالجة بالإنترلوكين-1β (IL-1β)، أدى تثبيط miR-215-5p إلى تعزيز حيوية وهجرة الخلايا، وخفض مستويات IL-1β وIL-6 وعامل نخر الورم α (TNF-α). تم تأكيد أن EREG كان هدفا مباشرا ل miR-215-5p. أدى إلغاء EREG جزئيا إلى عكس التأثير الترويجي لخفض تنظيم miR-215-5p على قابلية وقدرة هجرة خلايا C28/I2 المعالجة ب IL-1β وضعف تأثيرها المثبط على العوامل الالتهابية. يساهم miR-215-5p في مسببات الالتهاب الدهمي من خلال تنظيم EREG ويمثل علامة تشخيصية وواعدة وهدفا علاجيا محتملا للالتهاب المفاصل الدهني.

المقدمة

التهاب المفاصل العظمي (OA) هو مرض تنكسي للمفاصل، ويتميز مرضه بتنكس الغضاريف مع التهاب زليلي 1,2. على مستوى العالم، لا تزال نسبة الإصابة بالفصام الدهري مرتفعة، وأبلغت الدراسات ذات الصلة عن اتجاه زيادة الحدوث عاما بعد عام 3,4. لقد ثبت أن عوامل مثل السمنة، والشيخوخة، والقابلية الوراثية، وكثافة العظام مرتبطة بتطور الحمض الدهوي5. من حيث الأعراض السريرية، غالبا ما يظهر المرضى المصابون بالتهاب المفاصل مع آلام في المفاصل، وتورم، وضعف في الحركة، وتيبس، مما يقلل بشكل كبير من جودة حياة المرضى 6,7. ومن الجدير بالذكر أن هناك أنماط ظاهرية مختلفة لالتهاب المفعول الدهني، وتعكس هذه الأنماط بشكل مناسب تنوع مسببات المرض8. حاليا، لا يزال علاج التهاب المفاصل الدهري يركز على تحسين الأعراض، وتشمل الأدوية السريرية الشائعة المسكنات والأدوية المضادة للالتهاب غير الستيرويدية، والتي لا تستطيع إلا تخفيف الألم ولا يمكنها عكس تقدمالمرض بفعالية. لذا، أصبح استكشاف مؤشرات الحمض النووي الجديدة حاجة ملحة للأبحاث الحالية.

الميكروRNA (miRNAs) هي فئة من جزيئات الحمض النووي الريبي قصيرة السلسلة التي لا تشارك في ترميز البروتين10. تعمل كجزيئات تنظيمية جينية مهمة في الكائنات متعددة الخلايا ويمكنها التأثير على إنتاج إنتاج العديد منالجينات المشفرة للبروتين. أكدت العديد من الدراسات أن الميكرو RNA له تأثير ملحوظ على تطور OA12. أظهرت دراسة سابقة أن miR-215-5p كان مفرطا في التعبير في تسمم الحمل وقلل من هجرة وقدرة الخلايا الغازية للتروفوبسيكس من خلال تنظيم تعبير CDC613. الإفراط في التعبير عن miR-215-5p أدى إلى تخفيف الإصابة الالتهابية في خلايا H9c2 في تعفن الدم14. يمكن أن يمارس miR-215-5p تأثيرا وقائيا في مسببات هشاشة العظام من خلال تثبيط تعبير XIAP وتعزيز تمايز hBMSCs15. ومن الجدير بالذكر أنه وجد أن miR-215-5p قد تم تحسن تنظيمه عند تحليل ملفات تعبير miRNA للأنسجة الزللية لدى مرضى التهاب الفصىالدهني 16. ومع ذلك، لم يتم استكشاف تعبير miR-215-5p في المصل وإمكاناته كمؤشر حيوي تشخيصي لالتهاب الدهوية الدهينية بعد. دور miR-215-5p في خلايا الغضروض العظمية، وخاصة تأثيراته على بقاء الخلية والهجرة والاستجابة الالتهابية، لا يزال غير واضح. لم تسجل أي دراسات ما إذا كان miR-215-5p يمارس وظيفته التنظيمية في التسمع الهوائي من خلال أهداف محددة في المراحل النهائية. سيوفر سد هذه الفجوات رؤى جديدة حول آليات الجزيئات الجزيئية للحمض الدهري ويحدد أهدافا علاجية مرشحة جديدة.

EREG عضو في عائلة عوامل نمو البشرة وقد ثبت مشاركته في إصلاح الأنسجة والاستجابات الالتهابية17،18. أفادت الدراسة التي أجراها تشين وآخرون أن تعبير EREG كان منخفضا بشكل ملحوظ في الغضاريف والأنسجة الزليزية لدى مرضى التهاب المفاصل الفوضوي مقارنة بمجموعةالضابطة 19. ومع ذلك، لا يزال ما إذا كان EREG هدفا لاحقا ل miR-215-5p في خلايا الغضروض الصبغية ودور هذا المحور التنظيمي في تكوين الالتهاب الصبغي الدهري غير واضح حتى الآن.

استنادا إلى الخلفية السابقة، نفترض أن تعبير miR-215-5p في المصل يتحسن في مرضى التهاب الغضروف الصبغي ويدفع إلى خلل التهاب الخلايا الغضروفية من خلال استهداف EREG مباشرة، بينما يخفف تثبيط miR-215-5p إصابة الخلايا الغضروفية الناتجة عن الإنترلوكين-1β (IL-1β). اعتمدت هذه الدراسة نقاط نهاية موحدة قابلة للقياس ومعايير حكم للتحقق السريري والخلوي: سريريا، تم تسجيل 110 مرضى التهاب المفاصل الدهني و105 من الأشخاص الأصحاء الضابطين؛ تم قياس مستويات miR-215-5p وEREG في المصل باستخدام qRT-PCR، وتم تطبيق منحنيات ROC لتقييم الأداء التشخيصي (صحيح إذا كان AUC ≥ 0.7، P < 0.05). تم تحليل الارتباطات عبر اختبارات كاي تربيع بين miR-215-5p وخصائص OA السريرية، وحدد الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات عوامل خطر مستقلة لالتهاب العين البصري (معدل P < 0.05). في المختبر، عولجت خلايا الغضروف C28/I2 ب 10 نانوغرام/مل من IL-1β لمدة 24 ساعة لتأسيس نموذج OA، تلاها النقل باستخدام مثبط/mimic miR-215-5p وSi-EREG. تم استخدام اختبارات CCK-8 وTranswell وELISA لتقييم مدى بقاء الخلايا وهجرتها ومستويات السيتوكينات الالتهابية. معايير تجربة الإنقاذ: أعاد مثبط miR-215-5p حيوية الخلايا الغضروفية وهجرتها (P < 0.05)، وأدى إكتم EREG جزئيا إلى إلغاء هذا التأثير الوقائي (P < 0.05). وقد أكدت توقعات TargetScan المعلوماتية الحيوية، واختبارات تقرير اللوسيفيراز، واختبارات RIP أيضا تأكيد ارتباطها المباشر: حيث تم تحديد انخفاض كبير في نشاط لوسيفيراز WT-EREG بعد تقليد miR-215-5p، وزيادة ملحوظة في تخصيب miR-215-5p/EREG في ترسبات Ago2 مقابل التحكم في IgG (كلاهما P < 0.05) كمعايير للتفاعل مع الهدف. بشكل عام، أوضح هذا العمل بشكل منهجي القيمة التشخيصية والآلية الجزيئية ل miR-215-5p في الأكسيوم الدهني، مما حدد بذلك مرشحين علاجيين جدد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت الدراسة وفقا لمبادئ إعلان هلسنكي. وافقت لجنة الأخلاقيات في مستشفى شيانيو العام على الدراسة قبل بدئها (الموافقة رقم 202514، في 18 يونيو 2025).

ملخص البروتوكول مقدم في الشكل التكميلي 1.

العينة

تم تجنيد ما مجموعه 110 مرضى التهاب المفاصل الدهني في هذا المستشفى و105 من الأشخاص الأصحاء الضابطين لهذا البحث. كانت معايير الإدراج في مجموعة التهاب المفاصل كالتالي: تم تأكيد تشخيص الالتهاب الفاصلي وفقا لمعايير التصنيف التي وضعتها الكلية الأمريكية للروماتيزم20. خضع جميع المرضى لفحص الأشعة السينية وتقييم تصوير كيلغرين-لورانس (K-L)؛ لا علاج بالمضادات الحيوية خلال 3 أشهر قبل القبول؛ بيانات سريرية كاملة؛ وتم الحصول على موافقة مكتوبة ومستنيرة من جميع المرضى. شملت معايير الاستبعاد لمجموعة فقدان العين المرضى الذين تلقوا علاجا مناسبا أو كانوا في المراحل النهائية للمرض؛ الذين يعانون من أنواع أخرى من أمراض المفاصل مثل النقرس، التهاب المفاصل الروماتويدي، وغيرها؛ الذين يعانون من مزيج من الأورام، وقصور الكبد والكلى الشديد، وأمراض المناعة الذاتية، والأمراض المعدية، والأمراض العصبية، أو أمراض القلب والجهاز التنفسي الشديد؛ وأولئك الذين يعانون من ظروف إعاقة جسدية تمنعهم من الاعتناء بأنفسهم. عند التسجيل، تم تسجيل بيانات أساسية لجميع المشاركين، بما في ذلك العمر، الجنس، مؤشر كتلة الجسم (BMI)، التدخين، الشرب، التاريخ العائلي، مسار المرض، درجة K-L، درجة مقياس التناظري البصري (VAS)، درجة مؤشر التهاب المفاصل العظمي (WOMAC) في جامعة ويسترن أونتاريو وماكماستر، وموقع الآفات. تم تحليل وتلخيص البيانات ذات الصلة في الجدول 1. تم سحب 8 مل من الدم الوريدي لجميع المشاركين في حالة الصيام، وتركوا للوقوف لمدة 3 ساعات عند 4 درجات مئوية، ثم تم تمركزهم في الطرد المركزي عند 3000 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية لعزل المصل. تم جمع المصل بلطف والحفاظ على درجة حرارة −80 درجة مئوية حتى إجراء المزيد من الفحوصات.

يحتوي الدم/المصل البشري (المادة البيولوجية المعدية من الفئة B) على سوائل جسم الإنسان قد تحمل مسببات عدوى غير معروفة وقد تسبب التهابات عبر الجلد أو المخاط من خلال الرش، وخز الإبر، أو ملامسة الجلد التالف. يجب ارتداء قفازات نيتريل ذات الاستخدام الواحد، وأردية العزل الطبي القابلة للاستخدام، والنظارات أو الكمامات الجراحية، وأقنعة الجراحة. بعد تعريضها للتعقيم عالي الضغط، يتم جمعها وحرقها مركزيا من قبل مؤسسات التخلص من النفايات الطبية المعتمدة.

بناء نموذج الخلايا في زراعة الخلايا وOA

تم الحفاظ على خلايا غضروفية C28/I2 البشرية في وسط DMEM/F12 يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) عند 37 درجة مئوية داخل حاضنة رطبة مليئة ب 5٪ CO₂. أجريت جميع التجارب باستخدام الخلايا في الممرات 3–6 للحفاظ على نمط خلوي مستقر. أجريت تلاعبات تجريبية لاحقة عندما وصلت التقاءات الخلوية إلى 80٪. تمت معالجة الخلايا في المجموعة التجريبية بجرعة 10 نانوغرام/مل من IL-1β عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة لتأسيس نموذج OA في المختبر21، بينما تركت خلايا المجموعة الضابطة دون معالجة.

النقل الخلوي

تم تصنيع مثبط التحكم السلبي (مثبط-NC)، مثبط miR-215-5p، mimic-NC، miR-215-5p مقلد، RNA صغير متداخل سالب (si-NC)، وsi-EREG تجاريا. أجريت اختبارات النقل في صفائح ذات 6 آبار باستخدام كاشف النقل خلال مرحلة النمو اللوغاريتمي للخلايا. تحديدا، تم تخفيف 50 نانومول من المثبط/المقلد أو الضوابط السلبية في 125 ميكرولتر من وسط أوبتي-MEM لكل بئر، مع 5 ميكرولتر من كاشف النقل المذاب في 125 ميكرولتر من أوبتي-ميم، وتم الاحتفاظ به في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة لتشكيل مركب. ثم يضاف الخليط إلى الخلايا. تم جمع الخلايا بعد 48 ساعة من النقل للتجارب اللاحقة.

تفاعل بوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي الكمي (اختبار qRT-PCR)

تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام كاشف تريزول وفقا لبروتوكولات الشركة المصنعة، وشملت العينات المصل والخلايا. للنسخ العكسي، تم استخدام 1 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي في كل تفاعل، وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة لبرايم سكريبت العكسي للنسخ. بعد الانتهاء من النسخ العكسي، تم إجراء تفاعلات تضخيم على جهاز PCR في الوقت الحقيقي باستخدام خليط SYBR-Green Real Master كمادة تفاعل. كانت معايير الدورة الحرارية كما يلي: إزالة الطبيعة الأولية عند 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، ثم 40 دورة بزاوية 95 درجة مئوية لمدة 5 ثوان و60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. تم إجراء qRT-PCR بتقنية ثلاثية لجميع العينات. للكشف الكمي عن مستويات miRNA وmRNA، تم تطبيع قيم عتبة الدورة (Ct) باستخدام U6 و β-Actin كمراجع داخلية، وتم قياس تحليل البيانات النهائي باستخدام طريقة 2-ΔΔCT . يتم عرض تسلسلات البادئية المستخدمة في qRT-PCR في الجدول التكميلي 1.

كاشف ترايزول هو مادة كيميائية خطيرة. إنه شديد التآكل؛ يمكن أن يسبب الاتصال المباشر حروقا شديدة للجلد والعينين، كما أن أبخراته المتطايرة قد تهيج الجهاز التنفسي. من الضروري ارتداء قفازات نيتريل مقاومة للمواد الكيميائية، ومعاطف مختبر، ونظارات واقية مقاومة للرذاذ الكيميائي؛ يمكن استخدامه فقط في غطاء البخار. يتم تخزين سائل النفايات في حاويات نفايات كيميائية بلاستيكية محكمة الإغلاق مع ملصقات ويتم التخلص منها بشكل صحيح وفقا للوائح المحلية.

اختبار بقاء الخلايا

تم تقييم بقاء الخلايا باستخدام مجموعة عد الخلايا 8 (CCK-8). تم طلاء الخلايا في صفائح بسعة 96 بئر عند 5 × 103 خلايا/بئر. عند 0 و24 و48 و72 ساعة من الحضانة، أضيف 10 ميكرولتر من محلول CCK-8 إلى كل بئر. بعد حضانة الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة، تم قياس الكثافة البصرية لكل بئر عند 450 نانومتر.

اختبار ترانسويل

تم تقييم قدرة هجرة الخلايا باستخدام غرفة ترانسويل ذات أغشية بحجم 8 ميكرومتر. باختصار، تم إدخال 5 × 104 خلايا/بئر في الأماكن العلوية التي تحتوي على وسط خال من المصل، بينما تم إضافة الإدخال السفلي بعد ذلك إلى وسط كامل. تم حضن الغرف عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. الخلايا التي لم تهاجر، وبقيت على سطح الغشاء العلوي، كانت تمسح بلطف بمسحة قطنية. الخلايا التي انتقلت إلى السطح السفلي كانت مثبتة ب 4٪ فورمالديهيد لمدة 10 دقائق وصبغت بلون بنفسجي بلوري 0.1٪ لمدة 20 دقيقة. وأخيرا، تم ملاحظة وعدد الخلايا التي تخترق الغشاء باستخدام المجهر البصري (×200). لكل نموذج، تم اختيار خمسة مجالات رؤية غير متداخلة عشوائيا للعد. تم حساب وتسجيل متوسط عدد الخلايا المهاجرة في كل مجموعة تجريبية.

الفورمالديهايد (مادة مسرطنة، مهيج للجلد/الجهاز التنفسي، مركب عضوي سام متطاير). يمكن أن يسبب غازاته المتطاير تهيج الغشاء المخاطي، والتهاب الجلد، وردود الفعل التحسسية. يجب تنفيذ جميع العمليات في غطاء بخار جيد التهوية. ارتد قفازات مقاومة للمواد الكيميائية، ومعطف مختبر، ونظارات واقية للضباب، وجهاز تنفس كربوني نشط. يجب معالجة النفايات التي تحتوي على PFA وفقا للوائح النفايات الخطرة. يجب التخلص من النفايات وفقا للوائح المحلية.

البنفسج الشفاف هو صبغة بيولوجية. إنه سام عند امتصاصه عبر الجلد؛ له آثار ضارة طويلة الأمد على البيئة. تجنب التلامس المباشر مع الجلد والإفرازات العشوائية. ارتد قفازات نيتريل ذات استخدام مرة واحدة ومعطف مختبر.

اختبار التغذية المناعية المرتبطة بالإنزيمات (ELISA)

تم قياس مستويات IL-1β وIL-6 وعامل نخر الورم α (TNF-α) عبر مجموعات ELISA البشرية وفقا لإرشادات التشغيل المحددة في دليل المنتج.

اختبار جين لوسيفيراز مزدوج

تم استخدام قاعدة بيانات TargetScan للتنبؤ بجينات الأهداف المرشحة ل miR-215-5p. تم تحليل تفاعل miR-215-5p مع الجين المستهدف EREG عبر مجموعة اختبار اللوسيفيراز: حيث تم تضخيم التسلسلات البرية والمتحولة ل EREG واستنساخها إلى ناقل pGL3. لاحقا، تم تحويل البلازميدات المؤتلفة المبنية بشكل مشترك إلى خلايا C28/I2 مع محاكاة mimic-NC أو miR-215-5p على التوالي. تم اكتشاف نشاط اللوسيفراز بعد 48 ساعة من الحضانة.

التكرار المناعي للحمض النووي الريبي (رحمه الله)

تم التحقق من التفاعل بين miR-215-5p وEREG عبر مجموعة RIP EZ-Magna. كانت الخطوات كما يلي: تم تحلل الخلايا أولا باستخدام RIP LYSATE. لاحقا، تم حضن محللات الخلايا مع خرزات مغناطيسية مرتبطة بأجسام مضادة للأرجونوت 2 (Ago2) أو مضادة لغلوبولين المناعة G (IgG) (البشرية) في مخزن RIP. ثم تم معالجة الحمض النووي الريبي بإنزيم البروتيناز K ونقيه. وأخيرا، تم قياس مستويات miR-215-5p وEREG باستخدام qRT-PCR.

الإحصائيات

تم إجراء تحليل البيانات ورسم الصور باستخدام SPSS ومنشور GraphPad. تم تطبيق اختبار شابيرو-ويلك لتقييم طبيعية التوزيع قبل التحليل الإحصائي. تم التعبير عن القياسات التي تتبع التوزيع الطبيعي كمتوسط ± انحراف معياري (SD). تم استخدام اختبار t للطالب في مقارنات مجموعتين، بينما استخدم تحليل التباين (ANOVA) يليه اختبار توكي بعد الاختبار لتحليلات مجموعات متعددة. تم الإبلاغ عن المتغيرات المستمرة غير الموزعة بشكل طبيعي كوسطيات ونطاقات رباعية (IQR) ومقارنتها باستخدام اختبار مان-ويتني U. تم التعبير عن المتغيرات التصنيفية كنسب مئوية (n (٪))، وتم فحص الفروق بين المجموعات عبر اختبار كاي تربيع. تم تقييم فعالية التشخيص لميكروفوني miR-215-5p باستخدام منحنيات خصائص تشغيل المستقبل (ROC). تم تقييم العلاقة بين miR-215-5p والخصائص السريرية لمرضى التهاب المفاصل الدهني من خلال اختبار كاي-تربيع. تم استكشاف عوامل الخطر لتطور الأكسيم البصري باستخدام الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات. تم تقييم العلاقة بين miR-215-5p وEREG من خلال تحليل الارتباط من سبيرمان. تم اعتبار P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الخصائص الأساسية

تم تضمين 105 مرضى في مجموعة الضابطة، منهم 58 (55.24٪) ذكور و47 (44.76٪) إناث، بمتوسط عمر 52.81 ± 12.57 سنة ومؤشر كتلة جسم 24.25 ± 2.71 كجم/م2. احتوت مجموعة فقدان العين على 110 مرضى، منهم 69 (62.73٪) ذكور و41 (37.27٪) إناث، بمتوسط عمر 54.42 ± 12.33 سنة ومؤشر كتلة الجسم 24.88 ± 3.51 كجم/م2. تم تقديم معلومات أساسية إضافية لمجموعة OA في الجدول 1.

خصائص التع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

التهاب المفاصل الفوضوي، وهو اضطراب مفاصل شائع في البيئات السريرية، أصبح ثالث أهم سبب للإعاقة العضوية بعد السكري والخرف22,23. ومع ذلك، فإن سبب التهاب المفاصل الدهري معقد، وغالبا ما يتطلب تشخيصه مزيجا من الأعراض السريرية، وفحوصات التصوير، ووسائل أخرى، كما أن دورة التشخيص الطويلة تؤخر بشكل كبير علاج المرضى في الوقت المناسب24. لذا، من المهم سريريا استكشاف العلامات الحيوية التي يمكن استخدامها لتشخيص التهاب المف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يملك المؤلفون أي مصالح مالية أو ملكية في أي مادة نوقشت في هذا المقال.

شكر وتقدير

لم يتلق المؤلفون أي تمويل محدد لهذا العمل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
96-well platesCorning/USA3903
Anti-Ago2Abcam/USAAB_867543
RRID: ab186733
Anti-IgGAbcam/USAAB_10673832
RRID: ab133470
C28/I2 chondrocytesMerck Millipore/USASCC043
CCK-8 KitBeyotime/ChinaC0038مجموعة تقييم حيوية الخلايا
Crystal violetSigma-Aldrich/USAV5265
DMEM/F12 mediumGibco/USA11320033
Dual-Luciferase Reporter Assay KitPromega/USAE1910
EZ-Magna RIP KitMerck Millipore/USA17701
FBSThermo Fisher Scientific/USA26010074
FormaldehydeSigma-Aldrich/USAF8775
Graphpad Prism 9.0GraphPad Software Inc. /USAhttps://www.graphpad.com/features
IL-1βSigma-Aldrich/USASRP3083
IL-1β  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH002-1-2
IL-6  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH007-1-2
IncubatorThermo Fisher Scientific/USABB150-2TCS-L
Inhibitor-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Light Cycler 480Roche/Switzerlandhttps://lifescience.roche.com/global/en/article-listing/article/lightcycler-480-system-technology.htmlجهاز PCR في الوقت الحقيقي
Lipofectamine 3000Invitrogen/USAL3000015عامل النواقل المستخدم في نقل الخلايا
Microplate readerThermo Fisher Scientific/USAVA000010C
MicroscopyNikon/Japanhttps://www.nikon.com.cn/sc_CN/
Mimic-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p inhibitorGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p mimicGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Opti-MEMGibco/USA31985070
pGL3 vectorPromega/USAE1751
PrimeScript Reverse TranscriptaseTakara/Japan2680مجموعة النسخ العكسي
Si-EREGGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Si-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
SPSS 24.0IBM Corp/USAhttps://spssau.com/index.html
SYBR Green SupermixBio-Rad/USA1725121
TNF-α  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH052-1-2
Transwell chamberCorning/USA3422
TRIzol reagentThermo Fisher Scientific/USA15596026عامل عزل RNA

المراجع

  1. Jiang Y. Osteoarthritis year in review 2021: biology. Osteoarthritis Cartilage. 2022;30(2):207–215.
  2. Choi WS, et al. The CH25H-CYP7B1-RORalpha axis of cholesterol metabolism regulates osteoarthritis. Nature. 2019;566(7743):254–258.
  3. Lankhorst NE, et al. Incidence, prevalence, natural course, and prognosis of patellofemoral osteoarthritis: the Cohort Hip and Cohort Knee study. Osteoarthritis Cartilage. 2017;25(5):647–653.
  4. Nelson AE. Osteoarthritis year in review 2017: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2018;26(3):319–325.
  5. Herrero-Beaumont G, et al. Systemic osteoarthritis: the difficulty of categorically naming a continuous condition. Aging Clin Exp Res. 2024;36(1):45.
  6. Abramoff B, Caldera FE. Osteoarthritis: Pathology, Diagnosis, and Treatment Options. Med Clin North Am. 2020;104(2):293–311.
  7. Han D, et al. The emerging role of fibroblast-like synoviocytes-mediated synovitis in osteoarthritis: An update. J Cell Mol Med. 2020;24(17):9518–9532.
  8. Maroun G, Fissoun C, Villaverde M, Brondello JM, Pers YM. Senescence-regulatory factors as novel circulating biomarkers and therapeutic targets in regenerative medicine for osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2024;91(2):105640.
  9. Zhang Y, Zhao P, Li S, Mu X, Wang H. CircSCAPER knockdown attenuates IL-1beta-induced chondrocyte injury by miR-127-5p/TLR4 axis in osteoarthritis. Autoimmunity. 2022;55(8):577–586.
  10. Song AF, Kang L, Wang YF, Wang M. MiR-34a-5p inhibits fibroblast‑like synoviocytes proliferation via XBP1. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(22):11675–11682.
  11. Lu X, Lin J, Jin J, Qian W, Weng X. Hsa-miR-15a exerts protective effects against osteoarthritis by targeting aggrecanase-2 (ADAMTS5) in human chondrocytes. Int J Mol Med. 2016;37(2):509–16.
  12. Yin CM, et al. Dysregulation of both miR-140-3p and miR-140-5p in synovial fluid correlates with osteoarthritis severity. Bone Joint Res. 2017;6(11):612–618.
  13. Yang X, Meng T. miR-215-5p decreases migration and invasion of trophoblast cells through regulating CDC6 in preeclampsia. Cell Biochem Funct. 2020;38(4):472–479.
  14. Yao Y, et al. MiR-215-5p inhibits the inflammation injury in septic H9c2 by regulating ILF3 and LRRFIP1. Int Immunopharmacol. 2020;78:106000.
  15. Yin Z, et al. miR-215-5p regulates osteoporosis development and osteogenic differentiation by targeting XIAP. BMC Musculoskelet Disord. 2022;23(1):789.
  16. Zhou Y, et al. Identification of differentially expressed miRNAs and mRNAs in synovial of osteoarthritis via RNA-sequencing. BMC Med Genet. 2020;21(1):46.
  17. Zhao YC, et al. Epiregulin enhances periodontal tissue regeneration by promoting bone marrow mesenchymal stem cell functions under inflammatory niches. World J Stem Cells. 2026;18(2):114032.
  18. Li PL, et al. Multiomic identification of senescent stem cell populations critical for osteoarthritis progression and therapy in subchondral bones. Sci Adv. 2025;11(29):eadu2294.
  19. Chen YJ, et al. Systematic Analysis of Transcriptomic Profile of Chondrocytes in Osteoarthritic Knee Using Next-Generation Sequencing and Bioinformatics. J Clin Med. 2018;7(12):535.
  20. Altman R, et al. Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum. 1986;29(8):1039–49.
  21. Gan K, et al. Positive feedback loop of lncRNA FAM201A/miR‑146a‑5p/POU2F1 regulates IL‑1beta‑induced chondrocyte injury in vitro. Mol Med Rep. 2022;25(1):20.
  22. GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 2017;390(10100):1211–1259.
  23. Mandl LA. Osteoarthritis year in review 2018: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(3):359–364.
  24. Mobasheri A, et al. The role of metabolism in the pathogenesis of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13(5):302–311.
  25. Xiong X, et al. MicroRNA miR-215-5p Regulates Doxorubicin-induced Cardiomyocyte Injury by Targeting ZEB2. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):622-629.
  26. Cai C, Zhang R, Xu X, Li G, Gou H. Diagnostic values of NLR and miR-141 in patients with osteoarthritis and their association with severity of knee osteoarthritis. Exp Ther Med. 2021;21(1):74.
  27. Lai Z, Cao Y. Plasma miR-200c-3p, miR-100-5p, and miR-1826 serve as potential diagnostic biomarkers for knee osteoarthritis: Randomized controlled trials. Medicine (Baltimore). 2019;98(51):e18110.
  28. Qi K, et al. Long Non-Coding RNA (LncRNA) CAIF is Downregulated in Osteoarthritis and Inhibits LPS-Induced Interleukin 6 (IL-6) Upregulation by Downregulation of MiR-1246. Med Sci Monit. 2019;25:8019–8024.
  29. Platzer H, et al. The Impact of 45S5-Bioactive Glass on Synovial Cells in Knee Osteoarthritis-An In Vitro Study. Materials (Basel). 2023;16(24):7594.
  30. Ren T, et al. MiR-140-3p Ameliorates the Progression of Osteoarthritis via Targeting CXCR4. Biol Pharm Bull. 2020;43(5):810–816.
  31. Ying P, et al. Analysis of the regulatory role of miR-34a-5p/PLCD3 in the progression of osteoarthritis. Funct Integr Genomics. 2023;23(2):131.
  32. Fields JK, Gunther S, Sundberg EJ. Structural Basis of IL-1 Family Cytokine Signaling. Front Immunol. 2019;10:1412.
  33. Pratama DGK, Suyasa IK, Astawa P, Lestari AAW. High IL-6 level as a marker of lumbar osteoarthritis in patients older than 55 years with low back pain. Orthop Res Rev. 2019;11:17–21.
  34. Molnar V, et al. Cytokines and Chemokines Involved in Osteoarthritis Pathogenesis. Int J Mol Sci. 2021;22(17):9208.
  35. Ji W, Sun B, Su C. Targeting MicroRNAs in Cancer Gene Therapy. Genes (Basel). 2017;8(1):21.
  36. Chen X, et al. Cell membrane-camouflaged nanomedicines for enhanced thrombolysis and blood-brain barrier penetration in ischemic stroke therapy. Int J Pharm X. 2025;10:100404.
  37. Gupta T, et al. Enhancing Bioavailability and Stability of Curcumin Using Solid Lipid Nanoparticles (CLEN): A Covenant for Its Effectiveness. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:879.
  38. Liang Q, Cheng Z, Qin L. Advanced nanoparticles in osteoarthritis treatment. Biomater Transl. 2024;5(2):95–113.
  39. Shi Z, et al. Micro-nano integrated platforms for osteoarthritis therapy: From spatial manipulation to cellular reprogramming. Mater Today Bio. 2026;37:102963.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

علم المناعة والعدوىالعدد 233العدد 233قيمة فارغةعددتشخيص
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.