يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

دراسة الارتباط بين تعدد الأشكال rs2910164 في mir-146a والقابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي

54 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72136

⸱

سبتمبر 15, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Otolaryngological, Longyan First Affiliated Hospital of Fujian Medical University

في هذه المقالة

ملخص

تهدف الدراسة الحالية إلى توضيح العلاقة بين تعدد الأشكال rs2910164 في miR-146a والقابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي (AR). وترتبط مستويات miR-146a المنخفضة في البلازما والنمط الجيني rs2910164 GG بزيادة خطر الإصابة بالتهاب الأنف التحسسي، وتعزيز الاستجابات الالتهابية، وظهور مظاهر سريرية أكثر شدة لدى مرضى التهاب الأنف التحسسي.

الملخص

لا يشكل التهاب الأنف التحسسي (AR) تهديداً لحياة المرضى، ولكنه يضعف جودة حياتهم بشكل كبير. ويعد MicroRNA-146a (miR-146a) ضرورياً للتنظيم المناعي والاستجابات الالتهابية؛ ومع ذلك، لا تزال العلاقة بين تعدد الأشكال rs2910164 في miR-146a والقابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي غير مفهومة بشكل كامل. صُممت هذه الدراسة الحالة-الشاهدة لاستقصاء تأثير تعدد الأشكال miR-146a rs2910164 على القابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي. شملت هذه الدراسة إجمالي 180 متطوعاً غير مصابين بالتهاب الأنف التحسسي و211 مريضاً بالتهاب الأنف التحسسي. تم قياس تعبير miR-146a في البلازما بواسطة RT-qPCR؛ بينما تم الكشف عن النمط الجيني rs2910164 باستخدام طريقة TaqMan-qPCR. واستُخدم مقايسة ELISA للكشف عن مستويات IgE وIL-4 وIL-6 وIL-10 في المصل. وقيم تحليل ارتباط بيرسون الارتباطات الخطية بين تعبير miR-146a ودرجة TNSS ودرجة RQLQ، بالإضافة إلى تركيز العوامل المصلية. تم تحديد عوامل الخطر للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي من خلال الانحدار اللوجستي. كان النمط الجيني GG والأليل G لـ miR-146a rs2910164 أكثر تكراراً بشكل ملحوظ لدى مرضى التهاب الأنف التحسسي مقارنة بالمجموعات الضابطة السليمة. وانخفض مستوى miR-146a في البلازما لدى مرضى التهاب الأنف التحسسي. كما كان مستوى miR-146a في البلازما أقل لدى مرضى التهاب الأنف التحسسي الذين يحملون النمط الجيني GG، مما أظهر استجابات تحسسية والتهابية أكثر نشاطاً. ارتبط تعبير miR-146a ارتباطاً وثيقاً بالأعراض التحسسية وشدة المظاهر السريرية. ويشير الانحدار اللوجستي إلى أن مستويات IgE وIL-4 في المصل كانت عوامل خطر مستقلة للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي، بينما كان IL-10 وتعبير miR-146a عوامل حماية مستقلة. لوحظ انخفاض مستويات miR-146a في البلازما لدى مرضى التهاب الأنف التحسسي، كما أن النمط الجيني GG لـ miR-146a rs2910164 يزيد من القابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي.

المقدمة

يُعد التهاب الأنف التحسسي (AR) اضطرابًا التهابيًا غير معدٍ في مخاطية الأنف يتوسطه مسبب الحساسية. وتشمل الأعراض السريرية النموذجية لالتهاب الأنف التحسسي حكة في الأنف، واحتقان الأنف، وإفرازات أنفية شفافة، وعطاس متكرر1. وفي الحالات الأكثر شدة، قد يعاني المرضى أيضًا من ضعف في حاسة الشم، بل وقد يؤثر ذلك على جودة النوم. وتشير البيانات الوبائية إلى أن معدل الانتشار العالمي لالتهاب الأنف التحسسي في تزايد عامًا بعد عام، حيث يتراوح بين 10% و25%2. ورغم أن التهاب الأنف التحسسي لا يشكل خطرًا على حياة المرضى، إلا أنه يعيق النوم والتعلم والعمل بشكل خطير، ويقلل بشكل ملحوظ من جودة الحياة، ويفرض عبئًا اقتصاديًا ثقيلًا على الأفراد والمجتمع3. وقد أثبتت الدراسات أن التهاب الأنف التحسسي يعمل كعامل خطر للإصابة بالربو، ومع تطور المرض، يصبح المرضى أكثر عرضة للإصابة بالتهاب الجيوب الأنفية أو السلائل الأنفية، مما يزيد من عبء المرض4,5. وبناءً على ذلك، تصبح الوقاية من التهاب الأنف التحسسي والسيطرة عليه مهمة رئيسية في مجال أمراض الجهاز التنفسي. ومع ذلك، فإن الآلية المرضية لالتهاب الأنف التحسسي لم يتم توضيحها بالكامل. لذا، فإن الاستكشاف المتعمق للآلية الفسيولوجية المرضية لالتهاب الأنف التحسسي وتطوير استراتيجيات علاجية مستهدفة يحظى بأهمية قصوى، وهي أيضًا من القضايا العلمية الحالية التي تتطلب معالجة عاجلة.

يرتبط ظهور التهاب الأنف التحسسي (AR) بعوامل بيئية وجينية6. وتذهب الأبحاث الحالية بشكل عام إلى أن التأثير التآزري بين القابلية الجينية الفردية وبيئة التعرض للمستسرات هو العامل المحرك الأساسي لظهور AR. وقد أكد فريق Brozek كذلك أن التفاعل بين القابلية الجينية للجسم والتعرضات البيئية هو السبب الجوهري لـ AR2. وفي مجال أبحاث الآلية الجينية لـ AR، أصبح تعدد الأشكال الجيني تدريجياً محور اهتمام الباحثين. وتعد تعددات أشكال النيوكليوتيدات المفردة (SNPs)، بصفتها الشكل السائد من تعدد الأشكال الجينية، السبب الرئيسي لتنوع المعلومات الجينية في الكائنات الحية7. وتشير الأدلة المتراكمة إلى أن النمط الجيني TT في IL-33 rs7044343 قد يكون هدفاً محتملاً للوقاية من AR وعلاجه8. بالإضافة إلى ذلك، يعمل النمط الجيني TT في موقع C-159T بمحفز CD14 كعلامة تنبؤية لخطر الإصابة بـ AR9. ويشير هذا إلى أن الـ SNPs في الجينات الرئيسية يمكن أن تعمل كأهداف جزيئية هامة لتقييم خطر الإصابة بـ AR، وتقديم تحذيرات مبكرة، وتحقيق وقاية وعلاج دقيقين. وهذا يوفر أدلة حاسمة لفهم أعمق لآلية القابلية الجينية لـ AR.

كشفت دراسات عديدة أن التعبير غير الطبيعي للحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNAs) يعد أحد العوامل الدافعة الأساسية لحدوث وتطور مجموعة واسعة من الأمراض10. وتتميز miRNAs بوجودها المستقر في سوائل الجسم، مما يجعلها علامات جزيئية عالية الحساسية لتشخيص الأمراض. ويعد miR-146a نوعاً من جزيئات الـ RNA غير المشفرة ذات وظائف بيولوجية واسعة11. يقع تعدد الأشكال rs2910164 ضمن منطقة الحلقة الساقية (stem-loop) في تسلسل pre-miR-146a. ويمكن أن يؤثر التباين في هذا الموقع على كفاءة معالجة ونضج pre-miR-146a، مما يؤدي بالتالي إلى تغيير مستوى تعبير miR-146a الناضج والتأثير على الاستجابات المناعية والالتهابية اللاحقة. وقد أكدت الدراسات السابقة أن الإفراط في تعبير miR-146a يمكن أن يقلل بشكل كبير من فرط استجابة الممرات الهوائية في نماذج الفئران المصابة بالربو ويثبط تنشيط الخلايا اللمفاوية المحسسة12. ومن خلال استهداف وتثبيط نشاط مستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)، يمكن لـ miR-146a تخفيف الضرر الالتهابي لالتهاب الجيوب الأنفية بشكل فعال13. علاوة على ذلك، يمكن أن يؤدي الإفراط في تعبير miR-146a أيضاً إلى تخفيف الأعراض المرضية في نموذج الفئران المصابة بالتهاب الأنف التحسسي (AR) عن طريق حصر مسار إشارات مستقبل Toll-like 4 (TLR4)14. وتبرز هذه الملاحظات الدور الحيوي لـ miR-146a في تنظيم أمراض الجهاز التنفسي.

تشير الأدلة الحالية المستمدة من دراسات تعدد الأشكال الجيني إلى أن تردد الأليل G في موقع miR-146a rs2910164 يرتبط ارتباطًا وثيقًا بفرط استجابة الممرات الهوائية15. كما يُعتبر تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP) هذا علامة بيولوجية محتملة لخطر الإصابة بالربو لدى السكان الكوريين15. بالإضافة إلى ذلك، كشف فريق Jimenez-Morales أن النمط الجيني CC في موقع miR-146a rs2910164 يوفر حماية ضد الربو16. ومع ذلك، لم تكن هناك دراسات ذات صلة تتناول الارتباط بين تعدد أشكال miR-146a rs2910164 والقابلية للإصابة بالتهاب الأنف التحسسي (AR). وبناءً على ذلك، تهدف هذه الدراسة إلى التحقق من تأثير تعدد أشكال miR-146a rs2910164 على التهاب الأنف التحسسي، مما يوفر أساسًا نظريًا جديدًا لنشوء المرض، والتشخيص السريري، وعلاج التهاب الأنف التحسسي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

بيان أخلاقي:
تم إطلاع جميع المشاركين بشكل كامل على الغرض من تجربتنا وقاموا بالتوقيع على نموذج الموافقة المستنيرة. تمت الموافقة على هذا البحث من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى لونغيان الأول التابع لجامعة فوجيان الطبية (رقم الموافقة LYREC2023-k007-01). نُفذت جميع الإجراءات وفقاً للإرشادات واللوائح ذات الصلة وإعلان هلسنكي.

تجنيد المشاركين، ومعايير الأهلية، وجمع العينات
تم تجنيد ما مجموعه 211 شخصاً تم تشخيص إصابتهم بالتهاب الأنف التحسسي (AR) و180 مشاركاً سليماً (غير مصابين بـ AR) من قسم العيادات الخارجية لأمراض الأنف والأذن والحنجرة في مستشفى لونجيان الأول التابع لجامعة فوجيان الطبية في الفترة ما بين يناير 2023 ومايو 2025. تم اعتماد معايير تشخيص التهاب الأنف التحسسي من إرشادات الجمعية الصينية للحساسية لتشخيص وعلاج التهاب الأنف التحسسي17. وكان يُشترط في المرضى ظهور ما لا يقل عن عرضين سريريين من أعراض التهاب الأنف التحسسي، بما في ذلك حكة الأنف، أو العطس، أو احتقان الأنف، أو سيلان الأنف. بالإضافة إلى ذلك، كان من الضروري أن يُظهر فحص مخاطية الأنف شحوباً ووذمة، وأن تكون نتيجة اختبار وخز الجلد (SPT) أو نتيجة اختبار IgE في المصل إيجابية. وقد أجري اختبار SPT بواسطة موظفين مختصين في غرفة اختبار مسببات الحساسية بالعيادات الخارجية لضمان دقة واتساق النتائج. خضع جميع مرضى التهاب الأنف التحسسي لتقييمات استبيان جودة الحياة لالتهاب الأنف والملتحمة (RQLQ) ومقياس إجمالي أعراض الأنف (TNSS) بمساعدة الطاقم الطبي، وتم تسجيل الدرجات للتحليل اللاحق.

تم استقطاب متطوعين أصحاء يخضعون لفحوصات بدنية روتينية في المستشفى ليكونوا بمثابة مجموعة غير المصابين بالتهاب الأنف (non-AR). وكان المشاركون المؤهلون ممن ليس لديهم تاريخ شخصي أو عائلي للإصابة بالتهاب الأنف، ولا تاريخ للإصابة بالربو أو غيره من الأمراض التحسسية، ولا يعانون من التهاب الجيوب الأنفية المزمن أو غيره من الأمراض الالتهابية في التجويف الأنفي، ولم يصابوا بعدوى في الجهاز التنفسي خلال الشهر السابق. بالإضافة إلى ذلك، تم استبعاد الأشخاص الذين لديهم تاريخ من أمراض القلب أو الكبد أو الرئة أو الكلى الخطيرة، أو أي أورام خبيثة من الدراسة.

تم جمع عينات الدم الوريدي الطرفي من مجموعتي المتطوعين. واستُخدم جزء من الدم الوريدي المانع للتخثر لاستخلاص DNA واستخلاص RNA البلازمي. وفُصل جزء آخر من الدم الوريدي للحصول على المصل، والذي استُخدم للكشف عن العوامل المرتبطة بالمصل (الغلوبولين المناعي E (IgE)، والإنترلوكين-4 (IL-4)، وIL-6، وIL-10).

استخلاص الحمض النووي (DNA):
تم استخلاص الحمض النووي DNA من عينات دم وريدي محيطي بحجم 200 µL باستخدام طقم استخلاص الحمض النووي الجينومي من الدم الكامل (راجع جدول المواد). جُمعت عينات الدم في أنابيب مضادة للتخثر تحتوي على ليثيوم هيبارين، ثم وُزعت إلى حصص مجمدة عند -20 °C للتخزين. ويجب أن تتبع إجراءات التشغيل المحددة تعليمات الطقم بدقة. وفي النهاية، استُخدم 100 µL من محلول الاستخلاص (elution buffer) لاستخلاص الـ DNA. تم تحديد نقاء عينة الـ DNA المستخلصة بواسطة محلل الحمض النووي/البروتين (المطياف الضوئي Spectrophotometer) (حيث كانت نسبة OD₂₆₀/OD₂₈₀ بين 1.8 و 2.0). وخُزنت عينات الـ DNA بعد الفحص عند -20 °C لاستخدامها لاحقاً في تجارب التنميط الجيني اللاحقة.

الكشف عن النمط الجيني
توفّرت مجموعة TaqMan SNP genotyping للكشف عن توزيع الأنماط الجينية لـ miR-146a rs2910164. وقد أُدرجت معلومات المجموعة في قائمة المواد المستهلكة. بلغ الحجم الإجمالي لتفاعل PCR مقدار 10 µL، حيث احتوى على 5 µL من Master Mix، و0.5 µL من خليط بادئ مسبار تحديد النوع، و10 ng من DNA القالب، وماء خالٍ من RNase. أُجري تضخيم DNA باستخدام جهاز Roche LightCycler 480 II real-time fluorescence quantitative PCR. وكانت ظروف التفاعل كما يلي: مرحلة ما قبل المسخ عند 95 °C لمدة 10 min؛ و40 دورة (95 °C لمدة 15 ثانية، و60 °C لمدة 1 min)، وتمت قراءة فلورة FAM/VIC عند 60 °C. وبعد اكتمال التضخيم، حُللت إشارات الفلورة المزدوجة FAM/VIC التي تم جمعها باستخدام برنامج LightCycler 480، وعولجت بيانات النمط الجيني إحصائياً. تمثل إشارة FAM واحدة نمطاً جينياً متماثل الزيجوت، وتمثل إشارة VIC واحدة نمطاً جينياً متماثل الزيجوت آخر، بينما يشير وجود كلتا الإشارتين إلى نمط جيني متغاير الزيجوت. ستتم إعادة اختبار العينات ذات الإشارات غير الطبيعية أو النتائج غير المتسقة عند التكرار. وقد أُجريت كل تجربة باستخدام كل من ضابط خالٍ من القالب وضابط إيجابي لضمان مراقبة الجودة. كما خضعت جميع العينات لثلاث مكررات تقنية.

تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي بنسخ عكسي (RT-qPCR)
تم إجراء استخلاص إجمالي لـ miRNA من 100 µL من البلازما باستخدام طقم استخلاص miRNA مخصص. تم إدراج معلومات الطقم في قائمة المستهلكات. تم تحديد تركيز RNA باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تراوحت نسبة OD₂₆₀/OD₂₈₀ لعينات miRNA المستخلصة والمؤهلة بين 1.8 و 2.0. استُخدم 200 ng من RNA في عملية النسخ العكسي لتخليق cDNA، واتبع إجراء التفاعل التعليمات القياسية للطقم. أُجري النسخ العكسي في حجم إجمالي قدره 20 µL، بما في ذلك الحضانة عند 42 °C لمدة 60 min والتعطيل عند 85 °C لمدة 5 min. تم تحضير تفاعل qPCR وفقاً للبروتوكول المعتمد، بحجم إجمالي 20 µL. تم تكوين خليط التفاعل كما يلي: 10 µL من خليط qPCR الجاهز (pre-mix)، و 0.4 µL من البادئ الأمامي، و 0.4 µL من البادئ العكسي، و 1 µL من قالب cDNA، و 8.2 µL من الماء الخالي من RNase. استُخدمت بادئات محددة لـ miR-146a ولجين المرجع الداخلي U6. اكتمل التضخيم باستخدام جهاز Roche LightCycler 480 II لقياس تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الفلوري في الوقت الحقيقي. كانت ظروف الدورات الحرارية لـ qPCR كما يلي: 95 °C للمسخ المسبق لمدة 30 s، تلتها 40 دورة من المسخ عند 95 °C لمدة 5 s، والارتباط والاستطالة عند 60 °C لمدة 30 s. خضعت جميع العينات لثلاث مكررات تقنية. تم تحليل البيانات التجريبية باستخدام برنامج LightCycler 480 Software. وباستخدام U6 كمرجع داخلي لتصحيح التباين بين العينات، يتم أولاً حساب ΔCt (قيمة Ct لـ miR-146a - قيمة Ct لـ U6)، ثم حساب ΔΔCt (قيمة ΔCt للمجموعة التجريبية - قيمة ΔCt للمجموعة الضابطة)، وفي النهاية تم الحصول على مستوى التعبير النسبي لـ miR-146a من خلال 2⁻ΔΔCt.

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
تم قياس مستويات IgE وIL-4 وIL-6 وIL-10 في المصل باستخدام أطقم ELISA. استُند في الإجراءات التجريبية إلى دليل التعليمات. وكانت الخطوات المحددة كما يلي: أولاً، تم تخفيف محلول الغسيل المركز، وتخفيف المعايير تدريجياً لتحضير محاليل العمل الخاصة بمنحنى القياس المعياري. ثانياً، أُضيف 50 µL من محلول التخفيف والمحلول المعياري والعينة المراد اختبارها إلى الآبار، ثم حُضنت عند 37 °C لمدة 60 min. وبعد الحضانة، غُسلت الآبار ثلاث مرات بمحلول الغسيل المنظم. لاحقاً، أُضيف 50 µL من محلول عمل الأجسام المضادة المقترنة بالإنزيم، وحُضنت الأطباق عند 37 °C لمدة 30 min. وبعد اكتمال الحضانة، تم التخلص من السائل وغُسلت الآبار مرة أخرى، ثم أُضيف محلول توليد اللون للحضنة لمدة 15-min عند 37 °C في الظلام. بعد إضافة محلول الإيقاف، قيست الامتصاصية عند 450 nm باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة. حُسبت تركيزات العينات وفقاً لمنحنى القياس المعياري. واختُبرت كل عينة ثلاث مرات، واعتُبرت البيانات التي يقل معامل تباينها عن 10% صالحة. كما تم إعداد آبار فارغة وآبار ضابطة أثناء التجربة لغرض مراقبة الجودة. وقد توافق نطاق الكشف وحساسية الطقم مع اللوائح المحددة في دليل الشركة المصنعة.

إحصائيات البيانات
تم تحليل البيانات التجريبية باستخدام برنامجي SPSS و GraphPad Prism 9. وعُرضت البيانات في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (mean ± SD). استُخدم اختبار Shapiro-Wilk لتقييم التوزيع الطبيعي للمتغيرات المستمرة، وطُبق اختبار Levene لتقييم تجانس التباين. كما تم تحليل مقارنة المتغيرات المستمرة بين المجموعتين باستخدام اختبار t للعينات المستقلة. وأُجري تحليل التباين أحادي الاتجاه (One-way ANOVA) متبوعاً باختبار Tukey للمقارنات البعدية لإجراء مقارنات بين مجموعات متعددة، بينما طُبق تحليل التباين ثنائي الاتجاه (Two-way ANOVA) لتقييم التأثيرات الرئيسية لعاملين مستقلين وتأثير التفاعل بينهما. تم تحديد القيم المتطرفة واستبعادها بناءً على قاعدة 3-انحرافات معيارية. ولم يتم اكتشاف أي بيانات مفقودة في هذه الدراسة. واستُخدم منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لتحليل الكفاءة التشخيصية لـ miR-146a في حالات AR. كما حُسبت معاملات ROC ذات الصلة وفواصل الثقة 95% باستخدام خوارزميات إحصائية مدمجة. واستُخدم تحليل ارتباط Pearson لقياس الارتباط الخطي بين تعبير miR-146a ومستويات العوامل المرتبطة بالمصل. وأُجريت تحليلات الانحدار اللوجستي أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات لفحص عوامل الخطر لـ AR. وقد أُدرجت المتغيرات التي كانت قيمة p < 0.05 في التحليل أحادي المتغير ضمن نموذج الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات. واعتُبرت القيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

خصائص المشاركين وتوزيع الأنماط الجينية
تم تحليل البيانات السريرية الأساسية لمجموعتي الخاضعين للدراسة إحصائيًا. وأشارت النتائج إلى وجود فروق ذات دلالة إحصائية في مستويات مصل IgE وIL-4 وIL-6 وIL-10. فبالمقارنة مع مجموعة المتطوعين غير المصابين بالتهاب الأنف التحسسي (non-AR)، ارتفعت تركيزات مصل IgE وIL-4 وIL-6 في مجموعة المرضى المصابين بالتهاب الأنف التحسسي (AR)، بينما انخفض مستوى IL-10 (الجدول 1). كما تم الكشف عن توزيع الأنماط الجينية لـ miR-146a rs2910164 باستخدام طريقة TaqMan-qPCR. وأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يُعد التهاب الأنف التحسسي (AR) مرضاً التهابياً تحسسياً مزمناً يصيب الجهاز التنفسي. وتتمثل الآلية الجوهرية للتهاب الأنف التحسسي في أن التعرض للمواد المسببة للحساسية يؤدي إلى حدوث آفات التهابية في المخاطية الأنفية بوساطة IgE17,18. وتشمل الأعراض السريرية بشكل أساسي الحكة الأنفية، واحتقان الأنف، والعطاس، وإفرازات أنفية شفافة، مما يؤثر سلباً وبشكل كبير على جودة حياة المرضى. وقد أكدت الدراسات الوبائية والجينية أن القابلية الوراثية تلعب دوراً حيوياً ولا غنى عنه في ظهور ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يوجد أي إفصاح في هذه الورقة.

توافر البيانات:
جميع البيانات التي تم إنتاجها أو تحليلها خلال هذه الدراسة مدرجة في هذا المقال كملف تكميلي. ويمكن توجيه المزيد من الاستفسارات إلى المؤلف المسؤول.

مساهمة المؤلفين:
قدم YMY مساهمات جوهرية في التصميم والتصور، أو الحصول على البيانات أو تحليلها وتفسيرها، وشارك في صياغة المخطوطة. وساعد YYH في الحصول على البيانات وتحليلها والتحليل الإحصائي. وساهم كل من GML و JCW في تفسير النتائج ومراجعة المخطوطة مراجعة نقدية. وقد قرأ جميع المؤلفين المخطوطة النهائية ووافقوا عليها.

شكر وتقدير

غير قابل للتطبيق.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنبوب طرد مركزي سعة 15 مللترCorning430791لفصل البلازما، وتجزئة العينات إلى عبوات فرعية، وعملية استخلاص الحمض النووي
Applied Biosystems TaqMan Genotyping Master MixThermo Fisher Scientific43713552× مزيج رئيسي (master mix) مركز ومُحسَّن لتحديد الأنماط الجينية لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP)، يحتوي على إنزيم Taq polymerase ببدء ساخن، وديوكسينوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، وأيونات المغنيسيوم، ومحلول منظم للتفاعل، وصبغة ROX المرجعية. لا يتطلب النظام تحضيراً يدوياً. يتوافق هذا المزيج مع مقايسة TaqMan لتحديد الأنماط الجينية لـ SNP المذكورة أعلاه، ويوفر نظام تفاعل إنزيمي مستقر لتضخيم SNP وتحديد الأنماط الجينية الفلورية مع قابلية جيدة للتكرار ونتائج تجميع (clustering) واضحة.
مقايسة TaqMan لتحديد الأنماط الجينية لتعدد أشكال النيوكليوتيدات المفردة من Applied Biosystems (rs2910164, miR-146a)Thermo Fisher ScientificC__15946974_10مزيج بادئات ومجسات مُصمم مسبقاً لتنميط النوكليوتيدات المفردة (SNP) لموقع rs2910164 في miR-146a البشري. يحتوي المزيج على بادئات PCR محددة ومجسين فلوروسنتيين من نوع MGB. تُميز صبغة VIC الأليل C، بينما تُميز صبغة FAM الأليل G. ويمكن لهذا المزيج التمييز بدقة بين ثلاثة أنماط جينية (CC، CG، GG) في أنبوب تفاعل واحد، وهو مناسب للتمييز الأليلي عند نقطة النهاية باستخدام أجهزة qPCR.
أنابيب جمع الدم المانعة للتخثر بليثيوم هيبارين من BDBD Vacutainer367884الكيمياء الحيوية السريرية، واختبارات الطوارئ، وأبحاث علم الدم
Graphpad الولايات المتحدة الأمريكية/التمثيل البياني العلمي الاحترافي & برمجيات إحصائية، معيارية لمجالات البيولوجيا والطب، لا تتطلب برمجة. نقاط القوة الرئيسية: اختبارات t، وتحليل التباين (ANOVA)، وتحليل البقاء، والانحدار غير الخطي (مثل منحنيات الاستجابة للجرعة)؛ وتعمل على إنشاء رسوم بيانية جاهزة للنشر (أعمدة بيانية، مخططات تشتت، ومنحنيات البقاء) لنتائج qPCR، وبصمة ويسترن (Western Blot)، والمقايسات الخلوية.
طقم مقايسة الممتز المجهري المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للغلوبولين المناعي E (IgE)جيان تشنغH108-1-2التطبيق: الاستجابة المناعية، وأبحاث الأمراض التحسسية
طقم مقايسة الممتز المائي للارتباط المناعي لإنترلوكين-10 (IL-10)جيان تشنغH010-1-2التطبيق: الالتهاب، والتنظيم المناعي، وأبحاث المؤشرات الحيوية السريرية
طقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لإنترلوكين-4 (IL-4)جيان تشنغH005-1-2مجال البحث: الالتهاب، والاستجابة المناعية من النوع Th2، والتفاعل التحسسي
طقم مقايسة الممتز adsorbable enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) للإنترلوكين-6 (IL-6)جيان تشنغH007-1-2التطبيق: الالتهاب، والتنظيم المناعي، وأبحاث المؤشرات الحيوية السريرية
برنامج LightCycler 480 (الإصدار 1.5 / 1.6)Roche Diagnostics/برنامج Roche الرسمي الذي يتيح الحصول على بيانات qPCR بنقرة واحدة، والتحليل الكمي، وتحليل منحنى الانصهار، وتحديد الأنماط الجينية لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة SNP (طريقة TaqMan للنقطة النهائية + تحليل درجة الانصهار العالية HRM).
طقم miRcute لتحسين تخليق الشريط الأول من الحمض النووي المتمم (cDNA) للحمض النووي الريبي الميكروي (miRNA)TIANGENKR211-02مناسب لعملية النسخ العكسي لجميع جزيئات الـ miRNA الناضجة
طقم استخلاص وعزل الـ miRNA من المصل/البلازما miRcuteتياجين (TIANGEN)DP503العينة القابلة للتطبيق: المصل البشري، والبلازما، والرائق الخلوي
جهاز Roche LightCycler 480 Instrument II (نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي)Roche Diagnostics05015278001التقدير الكمي بواسطة qPCR + تحديد الأنماط الجينية لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP) (بما في ذلك تقنية TaqMan) + تحليل منحنى الانصهار عالي الدقة (HRM)
SPSS 27.0الولايات المتحدة الأمريكية/برنامج متكامل للإحصاءات الاجتماعية والطبية، يعمل بنظام القوائم (بدون برمجة)، ومثالي للعينات الكبيرة & تصاميم معقدة. الميزات الأساسية: الإحصاءات الوصفية، وتحليل التباين (ANOVA)، والانحدار، واختبار مربع كاي، وتحليل البقاء، والموثوقية، وحساب حجم العينة؛ ويدعم تنقية البيانات. & استيراد متعدد التنسيقات (Excel/CSV) للبيانات السريرية والمسحية والوبائية.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGENFP205-02مزيج رئيسي محسن عالي النوعية؛ محلول منظم مُحسَّن مع عامل الرابطة الهيدروجينية (H-Bond) لتقليل تكوّن ثنائيات البادئات & غير محددة؛ Taq ذو البداية الساخنة + ROX لجهاز LightCycler 480 II؛ حساسية عالية & قابلية التكرار؛ مثالية للجينات ذات الوفرة المنخفضة، والعينات المعقدة، والتنميط الجيني عالي الإنتاجية.
جهاز قياس الضوء للأطباق الدقيقة Thermo Scientific Multiskan FCثيرمو (Thermo)51119180جهاز قارئ أطباق متعدد الأنماط عالي الأداء؛ قياس الامتصاص (بما في ذلك 450 نانومتر) + التألق + التلألؤ البيولوجي؛ الخطية 0–4 امتصاصات (±(2%) عند 450 نانومتر، الانحراف المعياري للدقة (SD)&امتصاصية < 0.001؛ متوافق مع الأطباق ذات 96/384 بئراً، نطاق ديناميكي تلقائي؛ مثالي لاختبارات ELISA، وحيوية الخلايا، والمقاييس المناعية، والتفاعلات الجزيئية.
مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية والمرئية Thermo Scientific NanoDrop Oneثيرمو (Thermo)/مقياس طيف الضوء المرئي وفوق البنفسجي للأحجام الدقيقة والمعياري؛ 1–2 μL العينة، لا حاجة لاستخدام خلية قياس (cuvette)؛ يقيس مباشرة الأحماض النووية (260 نانومتر)، والبروتينات (280 نانومتر)، والكثافة الضوئية عند 600 نانومتر (OD600) مع التركيز. & نسب النقاء (A260/A280، A260/A230)؛ مسح الطيف الكامل 190–٨٥٠ نانومتر، معايرة ذاتية، شاشة تعمل باللمس؛ مثالي لـ qPCR، وNGS، ومراقبة جودة تنقية البروتين.
طقم استخلاص الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الجينومي من الدم الكاملتيانجين (TIANGEN)DP304-03العينات القابلة للتطبيق: الدم المحيطي الكامل، خلايا الدم، عينات الأنسجة

المراجع

  1. Bernstein, J. A., Bernstein, J. S., Makol, R. & Ward, S. Allergic Rhinitis: A Review. JAMA. 331 (10), 866-877, (2024).
  2. Brozek, J. L. et al. Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma (ARIA) guidelines-2016 revision. J Allergy Clin Immunol. 140 (4), 950-958, (2017).
  3. Pagel, J. M. L. & Mattos, J. L. Allergic Rhinitis and Its Effect on Sleep. Otolaryngol Clin North Am. 57 (2), 319-328, (2024).
  4. Nappi, E. et al. Comorbid allergic rhinitis and asthma: important clinical considerations. Expert Rev Clin Immunol. 18 (7), 747-758, (2022).
  5. Grimm, D., Hwang, P. H. & Lin, Y. T. The link between allergic rhinitis and chronic rhinosinusitis. Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 31 (1), 3-10, (2023).
  6. Wise, S. K. et al. International consensus statement on allergy and rhinology: Allergic rhinitis - 2023. Int Forum Allergy Rhinol. 13 (4), 293-859, (2023).
  7. Vignal, A., Milan, D., SanCristobal, M. & Eggen, A. A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics. Genet Sel Evol. 34 (3), 275-305, (2002).
  8. Falahi, S. et al. Association between IL-33 Gene Polymorphism (Rs7044343) and Risk of Allergic Rhinitis. Immunol Invest. 51 (1), 29-39, (2022).
  9. Kamel, M. A. et al. Association of serum CD14 level and functional polymorphism C-159T in the promoter region of CD14 gene with allergic rhinitis. Clin Exp Med. 23 (8), 4861-4869, (2023).
  10. Vishnoi, A. & Rani, S. miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Updated Overview. Methods Mol Biol. 2595 1-12, (2023).
  11. Vijayakumar, S., Yesudhason, B. V., Anandharaj, J. L., Kalaivanan, L. & Selvan Christyraj, J. R. S. Exosomes and Their miRNA as a Potential Biomarker in the Diagnosis of Parkinson's Disease. ACS Chem Neurosci. 16 (15), 2756-2766, (2025).
  12. Han, S., Ma, C., Bao, L., Lv, L. & Huang, M. miR-146a Mimics Attenuate Allergic Airway Inflammation by Impacted Group 2 Innate Lymphoid Cells in an Ovalbumin-Induced Asthma Mouse Model. Int Arch Allergy Immunol. 177 (4), 302-310, (2018).
  13. Yan, D. et al. Human Neutrophil Elastase Induces MUC5AC Overexpression in Chronic Rhinosinusitis Through miR-146a. Am J Rhinol Allergy. 34 (1), 59-69, (2020).
  14. Wang, J. et al. MiR-146a mimic attenuates murine allergic rhinitis by downregulating TLR4/TRAF6/NF-kappaB pathway. Immunotherapy. 11 (13), 1095-1105, (2019).
  15. Trinh, H. K. T. et al. Association of the miR-196a2, miR-146a, and miR-499 Polymorphisms with Asthma Phenotypes in a Korean Population. Mol Diagn Ther. 21 (5), 547-554, (2017).
  16. Jimenez-Morales, S. et al. MiR-146a polymorphism is associated with asthma but not with systemic lupus erythematosus and juvenile rheumatoid arthritis in Mexican patients. Tissue Antigens. 80 (4), 317-321, (2012).
  17. Bayar Muluk, N., Bafaqeeh, S. A. & Cingi, C. Anti-IgE treatment in allergic rhinitis. Int J Pediatr Otorhinolaryngol. 127 109674, (2019).
  18. Lv, R. et al. Research progress of anti-IGE treatment for allergic rhinitis. Am J Otolaryngol. 46 (3), 104646, (2025).
  19. Davila, I. et al. Genetic aspects of allergic rhinitis. J Investig Allergol Clin Immunol. 19 Suppl 1 25-31, (2009).
  20. Bogunia-Kubik, K. et al. Significance of Polymorphism and Expression of miR-146a and NFkB1 Genetic Variants in Patients with Rheumatoid Arthritis. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 64 (Suppl 1), 131-136, (2016).
  21. El-Akhras, B. A. et al. mir-146a genetic polymorphisms in systemic lupus erythematosus patients: Correlation with disease manifestations. Noncoding RNA Res. 7 (3), 142-149, (2022).
  22. Ghorab, R. A. et al. MiR-146a (rs2910164) Gene Polymorphism and Its Impact on Circulating MiR-146a Levels in Patients with Inflammatory Bowel Diseases. Inflammation. 48 (3), 1193-1205, (2025).
  23. Gong, H. B., Zhang, S. L., Wu, X. J., Pu, X. M. & Kang, X. J. Association of rs2910164 polymorphism in MiR-146a gene with psoriasis susceptibility: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 98 (6), e14401, (2019).
  24. Dong, J., Sun, D. & Lu, F. Association of two polymorphisms of miRNA-146a rs2910164 (G > C) and miRNA-499 rs3746444 (T > C) with asthma: a meta-analysis. J Asthma. 58 (8), 995-1002, (2021).
  25. Zhou, Z., Zhu, Y., Gao, G. & Zhang, Y. Long noncoding RNA SNHG16 targets miR-146a-5p/CCL5 to regulate LPS-induced WI-38 cell apoptosis and inflammation in acute pneumonia. Life Sci. 228 189-197, (2019).
  26. Olivieri, F. et al. miR-21 and miR-146a: The microRNAs of inflammaging and age-related diseases. Ageing Res Rev. 70 101374, (2021).
  27. Xiong, J. R. et al. miR-146a Regulates Neuroinflammation and Immune Cell Function in Neurodegenerative Diseases. Curr Med Sci. 45 (4), 725-744, (2025).
  28. Guo, H. et al. MiR-146a upregulates FOXP3 and suppresses inflammation by targeting HIPK3/STAT3 in allergic conjunctivitis. Ann Transl Med. 10 (6), 344, (2022).
  29. Yoshikawa, H. et al. miR-146a regulates emphysema formation and abnormal inflammation in the lungs of two mouse models. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 326 (1), L98-L110, (2024).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

تعدد الأشكال في miR-146aالنمط الجيني rs2910164التنظيم المناعيالاستجابة الالتهابيةتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)تقنية TaqMan-qPCRIgE المصليةالانحدار اللوجستيمستويات السيتوكينات
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.