مقالة منهجية

نموذج تمزق الكبد الفأري لتبسيط قياس تخثر الدم الناجم عن الصدمات، والالتهاب، والبقاء على قيد الحياة

0 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72215

⸱

سبتمبر 25, 2026

 ,  ,  , 
1Division of Hematology and Cellular Therapy, Department of Medicine, University of California San Diego

في هذه المقالة

ملخص

نقدم نموذجاً قابلاً للتكرار لتمزق كبد الفئران مسببًا لنزيف حاد، يدمج بين فقدان الدم، واعتلال التخثر الناجم عن الصدمات، ونتائج البقاء على قيد الحياة. يتيح هذا النموذج تقييم التدخلات المرقئة، بما في ذلك العامل السابع الموُلف recombinant factor VIIa وحمض الترانيكساميك، إلى جانب تقييمات التخثر، وانحلال الفيبرين، ومعدلات الوفيات، مما يوفر منصة فعالة من حيث التكلفة وقابلة للتوسع لأبحاث النزيف الميكانيكية والترجمية.

الملخص

لا يزال النزيف غير المسيطر عليه سببًا رئيسيًا للوفيات التي يمكن الوقاية منها لدى مرضى الصدمات، كما يعد اعتلال التخثر الناجم عن الصدمة (TIC) محددًا رئيسيًا للوفيات المبكرة. وتعتبر النماذج التجريبية التي تحاكي بدقة النزيف واستجابات اعتلال التخثر المرتبطة به ضرورية للدراسات الميكانيكية وتقييم التدخلات المستهدفة. نصف هنا نموذجًا فأريًا معياريًا للنزيف الحاد باستخدام تمزق الكبد (LL) القابل للتكرار المسبب للنزيف، والذي يمكن قياسه بدقة، مع تتبع اعتلال التخثر الجهازي، والعلامات الالتهابية، ومعدلات الوفيات في آن واحد.

تخضع الفئران لعملية فتح بطن قياسية في الخط الناصف تليها عملية LL، ويتم قياس كمية فقدان الدم باستخدام إسفنجات مشبعة بالدم. تُجمع المؤشرات الجهازية للتخثر، وانحلال الفيبرين، ومؤشرات الالتهاب عن طريق سحب الدم من خلف المحجر قبل الإجراء وفي فواصل زمنية متسلسلة ومحددة مسبقاً بعد الإجراء. يؤدي LL مع فقدان الدم بشكل موثوق إلى حدوث TIC (الذي يتميز بطول زمن الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (aPTT)، وزيادة معقد الثرومبين-أنتيثرومبين (TAT)، والاستنزاف الانتقائي لعوامل التخثر (F) V وVIII مع تنشيط انحلال الفيبرين). وبالتوازي، يتضح التنشيط الالتهابي من خلال زيادة إنترلوكين-6 (IL-6). علاوة على ذلك، يسمح هذا النموذج بإجراء تحليلات البقاء على قيد الحياة بعد إصلاح الشق في الخط الناصف.

كتطبيق انتقالي، يُستخدم rhFVIIa و TXA لإثبات أن النموذج حساس لإنقاذ النزيف من خلال التعديل الدوائي لمعايير التخثر وانحلال الفيبرين. وبالمقارنة مع نماذج الحيوانات الكبيرة، يوفر هذا النظام الفأري فرصة اقتصادية ومتعددة الاستخدامات وقابلة للتوسع بسهولة لدراسة التدخلات المبتكرة والمستهدفة للنزيف الرضحي.

المقدمة

تعد الإصابات الرضحية سبباً رئيسياً للوفاة والعجز لدى البالغين الشباب (العمر < 45 سنة)1,2، حيث يمثل النزيف غير المسيطر عليه سبباً رئيسياً للوفيات المبكرة3. ومن العوامل الحاسمة في سوء النتائج لدى المرضى المصابين بجروح خطيرة تطور اعتلال التخثر الناجم عن الرضح (TIC)4,5. ويعتبر اعتلال التخثر الناجم عن الرضح خللاً معقداً ومتعدد العوامل في تنظيم الإرقاء، يتميز بنضوب عوامل التخثر V وVIII6,7، واضطراب في عملية تحلل الفيبرين7,8,9، وتنشيط التهابي جهازي10. ويساهم اعتلال التخثر الناجم عن الرضح في استمرار النزيف ويرتبط بزيادة الاحتياجات من نقل الدم11، وفشل الأعضاء5، والوفاة على الرغم من التقدم في إنعاش السيطرة على الأضرار والتدخلات العلاجية5.

لذلك، تعد النماذج التجريبية التي تعيد إنتاج الصدمة النزفية بدقة مع التغيرات المصاحبة لاعتلال التخثر ضرورية لإجراء الاستقصاءات الميكانيكية وتقييم التدخلات الموجهة لوقف النزيف. تستخدم نماذج النزيف المتحكم به سحبًا معياريًا للدم، وهو ما قد لا يسبب إصابة نسيجية، مما قد يؤثر على استجابة اعتلال التخثر الجهازية الملاحظة في حالات الرضى السريرية12. وبناءً على ذلك، فإن نماذج النزيف التي تدمج إصابة الأعضاء الصلبة من شأنها أن توفر صلة سريرية أكبر، شريطة أن يكون من الممكن تقييم النزيف المستمر والاستجابات الجهازية كميًا13,14,15,16. وتدمج نماذج الإصابات الرضية المتعددة (TIC) الأكثر تعقيدًا مزيجًا من إصابات الدماغ الرضية، أو كسور العظام الطويلة أو الأطراف، أو إصابة الأنسجة الرخوة، أو فتح البطن، والصدمة النزفية المتحكم بها لإعادة إنتاج المكونات المتعددة للصدمات الشديدة17,18. ورغم أن هذه المنهجيات توفر تمثيلًا أكثر شمولاً للإصابات المتعددة، إلا أن إجراءات الإصابة المتعددة والتلاعبات الفسيولوجية قد تزيد من التعقيد التقني والتباين التجريبي.

على الرغم من عقود من البحث، لا تزال النماذج التجريبية ذات الصلة سريريًا والقابلة للتكرار لاضطرابات التخثر الناجمة عن الصدمات (TIC) محدودة وغير متجانسة. وقد أكدت المراجعات العلمية الحاجة إلى نماذج قوية تعيد إنتاج التسلسل السريري لإصابة الأنسجة والصدمة النزفية بدقة أكبر، وتدعم تقييم التدخلات العلاجية17,19. يمكن للنماذج المعقدة التي تتطلب أجهزة قياس مكثفة، بما في ذلك قسطرة القلب والمراقبة الديناميكية الدموية المستمرة، أن توفر معلومات فسيولوجية مفصلة ولكنها تتطلب أيضًا معدات متخصصة ومعالجات إجرائية إضافية. ولإزالة العوائق أمام أبحاث الصدمات، يبدو من الضروري تبسيط النهج التجريبي مع الاحتفاظ بالميزات الرئيسية لـ TIC. هنا، نصف نموذجًا معياريًا للفئران يؤدي إلى صدمة نزفية غير منضبطة14 باستخدام ربط شرياني (LL) قابل للتكرار يتسبب في نزيف حاد ويعيد إنتاج السمات الرئيسية لـ TIC. يتيح هذا النموذج تقييم استجابات التخثر والالتهاب، بما في ذلك مقاييس التخثر العامة (aPTT وتوليد الثرومبين)، والاستنفاد الانتقائي لعوامل التخثر (FV و FVIII) كعلامة مميزة لـ TIC، وعلامات تحلل الفبرين، وتحديد ملف السيتوكينات. ولإثبات حساسية هذا النموذج وصلته بالصدمات البشرية، نقوم بتقييم آثار rhFVIIa (عامل مساعد على الإرقاء) و TXA (عامل مضاد لتحلل الفبرين)، المستخدمين في إنعاش المصابين بالصدمات، على شدة النزيف، وتطور اعتلال التخثر، ونتائج البقاء على قيد الحياة.

علاوة على ذلك، يدعم النموذج سحب عينات الدم بشكل متسلسل ونهائي، مما يتيح التقييم الطولي لمسارات التخثر والالتهاب فيما يتعلق بشدة الإصابة والتدخل العلاجي. وبذلك، يوفر النموذج نظاماً فأرياً قابلاً للتكرار والتطوير لدراسة الإصابات الرضحية المرافقة للتخثر (TIC) في حالات النزيف الحاد، ولتقييم التدخلات الدوائية الموجهة والمرقئة باستخدام نقاط نهاية ذات صلة سريرياً، بما في ذلك فقدان الدم، واعتلال التخثر، وانحلال الفيبرين، والالتهاب، والبقاء على قيد الحياة.

بالمقارنة مع نماذج تمزق الكبد الفأرية المنشورة سابقاً، بما في ذلك البروتوكول الموصوف من قبل Dyer et al.13، تقدم هذه الطريقة عدة تطورات منهجية رئيسية. وتشمل هذه التطورات القياس الوزني الكمي لفقدان الدم، وتوحيد شدة الإصابة من خلال تطبيع كتلة الكبد الممزقة بالنسبة لوزن الجسم، والتوصيف الشامل لـ TIC وانحلال الفبرين والالتهاب. علاوة على ذلك، يتيح هذا النموذج أخذ عينات متسلسلة، والتعديل الدوائي، وتحليلات البقاء على قيد الحياة التي تفصل تقنيات إغلاق البطن، مما يسمح بالتعافي الجسدي بدلاً من القتل الرحيم. ويمكن تنفيذ جميع الإجراءات ضمن نهج تجريبي واحد، مما يوفر منصة قابلة للتوسع وللتطبيق السريري لدراسة النزيف وتدخلات الإرقاء المستهدفة.

البروتوكول

وافقت لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسي للحيوان بجامعة كاليفورنيا سان دييغو (UCSD) على جميع بروتوكولات الحيوانات. تم تربية فئران C57BL/6J والحفاظ عليها في مرفق التربية الداخلي بجامعة UCSD. استُخدمت في التجارب فئران من كلا الجنسين (ذكور وإناث)، تتراوح أعمارها بين 8 إلى 10 أسابيع. ويظهر مخطط عام لسير العمل التجريبي والجدول الزمني في الشكل التكميلي 1.

ملاحظة: تم تحديد أحجام العينات بناءً على التجارب الأولية، والتباين المتوقع لنقاط النهاية الفردية، والخبرة السابقة في نموذج تمزق الكبد لدى الفئران. تتوفر أحجام العينات النهائية لنقاط النهاية التجريبية والمجموعات التجريبية الفردية في تسميات الأشكال المقابلة. وبالنسبة لقياسات وزن الكبد، تم تجميع البيانات من تجارب مستقلة متعددة لتقييم الاتساق عبر المجموعات التجريبية. أما بالنسبة لمقايسات التجلط التي أجريت في دورات تجريبية منفصلة، فقد تم إدراج عينات تم تحليلها مسبقاً عبر الدورات لمراقبة الاتساق وقابلية التكرار بين المقايسات.

1. التحضير ما قبل التجربة

  1. جمع عينات خط الأساس (اليوم -1)
    1. جمع حوالي 200 µL من الدم عبر الوصول خلف الحجاج من كل فأر (بعمر 8–10 أسابيع) قبل 24 ساعة من التجربة لتحديد معاملات خط الأساس.
    2. حقن حوالي 200 µL من محلول ملحي معقم مخصص للحقن تحت الجلد بعد جمع الدم.
    3. إيواء الفئران في أقفاص نظيفة تحت ظروف مختبرية قياسية، مع درجة حرارة مضبوطة بين 20–24 °C، ورطوبة نسبية تتراوح بين 30%–70%، ودورة إضاءة وإظلام مدتها 12 ساعة/12 ساعة، مع توفير الغذاء والماء بحرية حتى يوم التجربة.
  2. تجهيز القفص (اليوم 0)
    1. نقل الفأر إلى قفص نظيف مبطن بمناشف ورقية جديدة في يوم التجربة.
    2. إزالة الغذاء والماء قبل 15 دقيقة من التجربة ومنعهما حتى يتم إزالة إسفنج الامتصاص بعد الجراحة.

2. تحضير الأدوات والمجال الجراحي

  1. تعقيم الأدوات
    1. يتم تعقيم الأدوات الجراحية، والقطن، والمساحات، وأوراق الترشيح بواسطة جهاز التعقيم البخاري (autoclave).
    2. تطهير السطح الجراحي باستخدام 70% ethanol.
  2. تجهيز طاولة الجراحة
    1. ترتيب الأدوات المعقمة على غطاء جراحي معقم.
    2. تحضير حاوية من الفولاذ المقاوم للصدأ تحتوي على 70% ethanol وقطن معقم لتنظيف الأدوات بين الخطوات.
    3. تشغيل جهاز تعقيم بالخرز الزجاجي (microbead sterilizer) وتركه حتى يصل إلى 150 °C للتعقيم بين حيوان وآخر.

3. تحضير الحفاظ على درجة الحرارة

  1. تحضير وسادة التسخين متساوية الحرارة
    1. قم بتنشيط وسادة التسخين متساوية الحرارة مباشرة قبل الجراحة وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.
    2. اضبط وسادة التسخين متساوية الحرارة للحفاظ على درجة حرارة جسم الفأر ضمن النطاق المستهدف من 36–37 °C طوال فترة التخدير والجراحة.
    3. تأكد من توزيع الحرارة بشكل متساوٍ عبر سطح الوسادة.
    4. ضع الوسادة على المنصة الجراحية وغطها بغطاء معقم.
    5. قم بتوصيل اللوح الجراحي بنظام التخدير بـ isoflurane.

4. التخدير وإجراءات ما قبل الجراحة

  1. تحريض التخدير
    1. يتم تحريض التخدير بوضع الفأر في غرفة تحريض تحتوي على 2% isoflurane في 2 L/min من الأكسجين.
    2. يتم التأكد من كفاية التخدير عبر اختبار منعكس قرص الإصبع.
    3. يتم تسجيل وزن الجسم قبل الجراحة.
  2. إعطاء المسكنات والعلاج
    1. يتم إعطاء buprenorphine (بجرعة 3.25 mg/kg، تحت الجلد) لتسكين الألم.
    2. يتم تحضير عوامل إيقاف النزيف حسب الحاجة.
    3. بالنسبة لمجموعات العلاج، يتم إعطاء recombinant human activated factor VII (rhFVIIa؛ بجرعة 3 mg/kg) أو tranexamic acid (بجرعة 10 mg/kg) عبر حقن وريدي خلف الحجاج قبل الإصابة بـ 5 min.
    4. يتم إعطاء الحيوانات الضابطة حجماً مكافئاً (~100 µL) من محلول ملحي معقم صالح للحقن.

5. التحضير الجراحي

  1. تحضير موقع الجراحة
    1. انقل الفأر المخدر إلى لوح الجراحة الموضوع على الوسادة المتساوية الحرارة.
    2. حافظ على التخدير عبر القمع الأنفي باستخدام 1.5%–2% isoflurane في 2 L/min من الأكسجين طوال الإجراء الجراحي.
    3. ضع الفأر في وضعية الاستلقاء على الظهر وثبّت جميع الأطراف الأربعة باستخدام الشريط اللاصق.
    4. احلق منطقة البطن.
    5. قم بإجراء التحضير العقيم باستخدام povidone-iodine والإيثانول 70% بالتناوب (ثلاث دورات).

6. إجراء تمزق الكبد

  1. الوزن المسبق للمواد
    1. قم بوزن أنبوبين سعة 1.5 mL مسبقاً، بحيث يحتوي أحدهما على 0.5 mL من المحلول الملحي ويكون الآخر فارغاً.
    2. قم بوزن ثلاثة مثلثات امتصاص أولية ومثلثين ثانويين لكل حيوان وسجل كتلتهم الإجمالية.
    3. قم بوزن وعاء وزن واحد لكل حيوان لاستخدامه لاحقاً في وزن أنسجة الكبد المستأصلة.
  2. تحفيز إصابة الكبد
    1. أجرِ شقاً جراحياً في خط منتصف البطن بطول 0.5 inch (12.7 mm) تقريباً للكشف عن الكبد.
    2. ضع مثلثي امتصاص على طول جدران البطن اليمنى واليسرى، مع تجنب ملامسة الكبد.
    3. قم بإخراج فص الكبد الأيسر وحدد حواف الفص لتوحيد مدى إزالة الأنسجة، وتجنب إحداث إصابة غير مقصودة في الأنسجة.
    4. باستخدام مقص حاد، قم بتمزيق 75% تقريباً من الفص بحركة واحدة محكومة لضمان الاتساق بين الحيوانات.
    5. انقل الأنسجة الممزقة المستأصلة إلى الأنبوب الفارغ الموزون مسبقاً للقياس الكمي لاحقاً لشدة الإصابة.
    6. أدخل مثلث امتصاص ثالثاً في تجويف البطن لتسهيل جمع الدم بشكل موحد خلال مرحلة النزيف.
  3. الإغلاق السريع للبطن للحفاظ على النزيف الداخلي (خطوة حرجة)
    1. أغلق جدار البطن فوراً خلال ~10–15 s باستخدام مشبكين جراحيين (autoclips).
    2. تأكد من المحاذاة الدقيقة لحواف الشق لتحقيق إغلاق تام دون وجود فجوات؛ حيث قد يؤدي الإغلاق غير المكتمل إلى تسرب الدم خارجياً وتقدير كمية فقدان الدم بأقل من قيمتها الحقيقية.
    3. طبق شداً متسقاً ولكن رقيقاً أثناء الإغلاق، مع تجنب ضغط محتويات البطن، مما قد يغير ديناميكيات النزيف.
    4. عزز الإغلاق باستخدام لاصق أنسجة (2–3 قطرات) لضمان إحكام غلق حجرة البطن تماماً.
  4. المراقبة بعد الإصابة
    1. زن أنسجة الكبد المستأصلة وقم بتعيير القياس بالنسبة لوزن الجسم لتحديد وتأكيد مدى إصابة الكبد.
    2. أعد الفأر إلى القفص الموضوع على منصة متساوية الحرارة (isothermal pad).
    3. اترك النزيف يستمر لمدة 60 min لمجموعة نقطة النهاية ومجموعة البقاء على قيد الحياة.

7. جمع الدم وتقدير كمية الدم المفقود

  1. جمع عينات الدم ومعالجتها
    1. بالنسبة لمجموعة نقطة النهاية، يتم تخدير الفأر مرة أخرى باستخدام الإيزوفلوران بعد 60 دقيقة من تمزيق الكبد.
    2. بالنسبة لمجموعة البقاء على قيد الحياة، يتم تخدير الفأر مرة أخرى باستخدام الإيزوفلوران بعد 6 ساعات و7 أيام من تمزيق الكبد لجمع عينات الدم.
    3. يُجمع الدم عن طريق الوخز خلف العين في أنابيب تحتوي على محلول سترات الصوديوم (نسبة الدم إلى مضاد التخثر: 9:1) لتحضير البلازما.
    4. تُوضع العينات في جهاز الطرد المركزي بسرعة 2,000 × g لمدة 10 دقائق، يتبع ذلك عملية طرد مركزي ثانية بسرعة 12,000 × g لمدة 5 دقائق، للحصول على بلازما فقيرة بالصفائح الدموية لاستخدامها في مقاييس التجلط وانحلال الفيبرين اللاحقة.
  2. قياس فقدان الدم
    1. يُعاد فتح البطن بعد 60 دقيقة من تمزيق الكبد لكل من مجموعتي نقطة النهاية والبقاء على قيد الحياة، وتُزال إسفنجات الامتصاص التي تحتوي على الدم.
    2. تُنقل جميع الإسفنجات المشبعة بالدم إلى أنبوب موزون مسبقاً يحتوي على محلول ملحي معقم.
    3. تُستخدم إسفنجات امتصاص إضافية موزونة مسبقاً لجمع الدم المتبقي داخل التجويف البطني.
    4. يُوزن أنبوب الجمع بعد جمع الدم للحصول على الوزن النهائي للأنبوب.
    5. يُحسب فقدان الدم باستخدام المعادلة الوزنية التالية:
      فقدان الدم (µL/g) = [(الوزن النهائي للأنبوب − الوزن الأولي للأنبوب – وزن إسفنجة الامتصاص) / وزن جسم الفأر] × 1000.
      ملاحظة: يتم التعبير عن جميع الأوزان بالجرامات. يقوم عامل الضرب 1,000 بتحويل جرامات الدم إلى ميكرولترات، بافتراض أن كثافة الدم تبلغ تقريباً 1 g/mL.
  3. مجموعة البقاء على قيد الحياة والنتائج الطولية
    1. بعد قياس فقدان الدم عند الدقيقة 60، يتم إغلاق الشق فوراً باستخدام الدباسات الجراحية ولاصق الأنسجة لضمان إغلاق تجويف البطن بشكل تام.
    2. يتم حقن 400 µL من المحلول الملحي المعقم تحت الجلد قبل الإفاقة.
    3. يُعاد الفأر إلى مسكنه القياسي ويتم مراقبته باستمرار أثناء الإفاقة من التخدير، ويُقيم بعد ساعتين و6 ساعات و24 ساعة من الجراحة، تليها مراقبة يومية حتى اليوم السابع.

8. الرعاية ما بعد الجراحة

  1. المراقبة بعد الجراحة
    1. مراقبة الحيوانات باستمرار خلال مرحلة التعافي المبكر من التخدير لرصد أي علامات ضيق أو اعتلال.
    2. تسجيل حالة البقاء على قيد الحياة والملاحظات السريرية عند كل تقييم مقرر.
  2. الرعاية الداعمة
    1. إعطاء 400 µL من المحلول الملحي المعقم عن طريق الحقن تحت الجلد يومياً لمدة 3 أيام.
    2. توفير مسكنات الألم (buprenorphine، بجرعة 3.25 mg/kg، تحت الجلد) كل 72 h وفقاً لبروتوكول رعاية الحيوان المعتمد.
    3. إبقاء الفئران في مساكن قياسية مع إتاحة الغذاء والماء بشكل حر (ad libitum).
  3. النهايات الإنسانية
    1. مراقبة الحيوانات لرصد النهايات الإنسانية المحددة مسبقاً، بما في ذلك الخمول الشديد أو المستمر، أو عدم القدرة على الحركة أو الحصول على الغذاء أو الماء، أو الضيق التنفسي الشديد، أو فقدان الاستجابة، أو أي علامات أخرى للضيق الشديد كما هو محدد في بروتوكول رعاية الحيوان المؤسسي المعتمد.
    2. قتل الحيوانات التي تصل إلى النهايات الإنسانية المحددة مسبقاً رحمانياً وفقاً للإرشادات المؤسسية.
    3. الاستمرار في مراقبة البقاء على قيد الحياة حتى اليوم 7 أو حتى الوصول إلى نهاية إنسانية.

9. إجراءات نقطة النهاية وجمع الأنسجة

  1. عند نقاط النهاية التجريبية المحددة مسبقاً، يتم تخدير الفئران وجمع الدم عن طريق الوخز خلف الحجاج.
  2. يتم القتل الرحيم باستخدام استنشاق CO₂ وفقاً للإرشادات المؤسسية.
  3. يتم استئصال الأعضاء ومعالجة الأنسجة للتحليل النسيجي وفقاً للإجراءات اللاحقة المحددة.

10. فحوصات التخثر وانحلال الفيبرين والسايتوكينات

ملاحظة: الكواشف، وأطقم المقايسة، والمعدات المستخدمة في هذه الإجراءات مدرجة في جدول المواد.

  1. قياس زمن تخثر البلازما الجزئي المنشط (aPTT)
    1. سجّل جميع أزمنة التخثر باستخدام جهاز قياس التخثر (coagulometer) المدرج في جدول المواد.
    2. امزج 25 µL من بلازما الفئران مع 25 µL من كاشف aPTT واحضن المزيج لمدة 3 min عند 37 °C. ابدأ عملية التخثر بإضافة 25 µL من CaCl₂ (25 mM) المحضر في HBS (20 mM HEPES, 147 mM NaCl, 3 mM KCl, pH 7.4)، ثم سجّل زمن التخثر.
  2. قياس نشاط FV وFII وFX
    1. امزج 5 µL من بلازما الفئران مع 20 µL من البلازما المقابلة والناقصة للعامل (factor-deficient plasma) و25 µL من HBS الذي يحتوي على 0.5% bovine serum albumin.
    2. احضن المزيج لمدة 1 min عند 37 °C، وابدأ عملية التخثر بإضافة كاشف Innovin المدرج في جدول المواد.
    3. حدد نشاط العامل بالنسبة لنظام المعايرة/المرجع المقابل.
  3. قياس FVIII
    1. حدد مستوى FVIII باستخدام مقايسة FVIII اللونية (chromogenic FVIII assay) وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.
  4. قياس الفيبرينوجين (fibrinogen)
    1. حدد تركيز الفيبرينوجين باستخدام طريقة Clauss. أضف 10 µL من بلازما الفئران إلى 40 µL من محلول ملحي منظم بـ HEPES يحتوي على 0.01% bovine serum albumin واحضن المزيج لمدة 3 min عند 37 °C.
    2. ابدأ تكوين الجلطة بإضافة 25 µL من الثرومبين (thrombin) بتركيز (25 U/mL)، وحدد تركيز الفيبرينوجين باستخدام معايرة المقايسة.
  5. قياس المؤشرات الحيوية في البلازما
    1. قس معقدات TAT ومعقدات PAP والـ D-dimer في البلازما باستخدام أطقم المقايسة المتاحة تجارياً والمدرجة في جدول المواد. أجْرِ كل مقايسة وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.
    2. استخدم المعايير والمعايرات والضوابط الخاصة بكل مقايسة كما حددتها الشركات المصنعة، واحسب تركيزات المواد المحللة من منحنيات المعايرة المقابلة.
  6. قياس IL-6 في البلازما
    1. قس تركيزات IL-6 في البلازما عند المستوى الأساسي وبعد 60 min و6 h من تمزق الكبد باستخدام مقايسة السيتوكينات المتعددة (multiplex cytokine assay) المدرجة في جدول المواد.
    2. أجْرِ المقايسة وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة وحلل البيانات باستخدام برنامج Q-View الخاص بالشركة المصنعة.

النتائج

ينتج عن نموذج LL إصابة ذات شدة قابلة للتكرار ومعيارية في الفئران. يوضح الشكل 1A اتساق وزن الكبد المتمزق عند تطبيعه مع وزن الجسم (%BW)، بمتوسط إصابة قدره 1.4% BW عبر المجموعات التجريبية. ويؤكد هذا الاتساق موثوقية الحث الجراحي ويسمح بالتكرار بين الحيوانات وعبر الظروف التجريبية المختلفة. وتعد القدرة على توحيد شدة الإصابة أمراً بالغ الأهمية لتقييم الاستجابات الفسيولوجية اللاحقة بشكل مستقل عن التباين في تلف الأنسجة.

تم توضيح التحقق من استجابة النزيف والتعديل العلاجي ضمن النموذج في الشكل 1B. عولجت الفئران مسبقاً بالمحلول الملحي، أو عامل وقف النزيف rhFVIIa، أو العامل المضاد لتحلل الفبرين TXA، ثم تم قياس كمية فقدان الدم وتوحيدها وفقاً لوزن الجسم (µL/g). أظهرت الفئران التي عولجت بالمحلول الملحي نزيفاً كبيراً بعد LL، بينما أظهرت الفئران المعالجة بـ rhFVIIa أو TXA انخفاضاً في فقدان الدم. وتثبت هذه النتائج قدرة هذا النموذج على الكشف عن التعديل الدوائي للنزيف وتقييم التدخلات المرقئة في حالات النزيف غير المنضبط.

يعيد النموذج أيضاً إنتاج السمات الرئيسية لاعتلال التخثر الناجم عن الصدمات. وكما هو موضح في الشكل 1C، أدى LL إلى إطالة زمن aPTT، مما يشير إلى ضعف التخثر بعد الإصابة. وقد خفف العلاج بـ rhFVIIa أو TXA من هذا الإطالة، مما يشير إلى استعادة وظيفة التخثر. وبالمثل، زاد توليد الثرومبين، الذي تم تقييمه بواسطة معقدات TAT، بعد LL وانخفض مع العلاج بـ TXA، بينما لم يقلل rhFVIIa من مستويات TAT (الشكل 1D)، مما يشير إلى تعديل تنشيط التخثر.

يوضح الشكل 2 مزيداً من التوصيف لاعتلال التخثر. أدى LL إلى استنزاف انتقائي لعوامل التخثر V وVIII، وهو ما يتفق مع TIC، وقد استُعيدت هذه التغيرات عند العلاج بـ rhFVIIa أو TXA (الشكل 2A،B). وفي المقابل، لم تتغير العوامل II وX بشكل ملحوظ (الشكل 2C،D)، مما يشير إلى أن هذه التغيرات تحدث في سياق الحفاظ على العوامل II وX، وهو ما يدعم وجود نمط ظاهري سائد من TIC بدلاً من نمط يشبه التخثر المنتشر داخل الأوعية (DIC).

يوضح الشكل 3 تطور عملية تحلل الفبرين بعد الإصابة بـ LL. وقد انخفضت مستويات الفبرينوجين بعد الإصابة، مما يشير إلى استهلاكه، ولم يتم استعادتها بالكامل باستخدام rhFVIIa أو TXA (الشكل 3A). وفي المقابل، ارتفعت مؤشرات تحلل الفبرين، بما في ذلك معقدات البلازمين-أنتي بلازمين (PAP) وD-dimer، بعد الإصابة بـ LL. وقد خفّض rhFVIIa مستويات معقد PAP ولكن لم يغير مستويات D-dimer بشكل ملحوظ. بينما خفّض TXA مستويات كل من معقد PAP وD-dimer بعد الإصابة بـ LL (الشكل 3B،C).

أخيرًا، يتم تقييم الاستجابة الالتهابية الجهازية ونتائج البقاء على قيد الحياة في الشكل 4. يتم قياس مستويات إنترلوكين-6 (IL-6) في البلازما بعد 60 دقيقة و6 ساعات من حدوث إصابة الرباط المتقاطع (LL) في جميع مجموعات العلاج. ترتفع مستويات IL-6 في النقاط الزمنية المبكرة عبر جميع المجموعات (الشكل 4A). يتم تقييم البقاء على قيد الحياة على مدى فترة 7 أيام باستخدام تحليل كابلان-ماير. بلغت نسبة البقاء على قيد الحياة لمدة سبعة أيام 75% في مجموعة المحلول الملحي، و55% في مجموعة rhFVIIa، و80% في المجموعة المعالجة بـ TXA. لم يُلاحظ وجود فرق معنوي بين مجموعتي المحلول الملحي وTXA، بينما انخفض معدل البقاء على قيد الحياة بشكل معنوي في مجموعة rhFVIIa مقارنة بمجموعتي المحلول الملحي وTXA (الشكل 4B).

figure-results-1
الشكل 1: التحقق من صحة نموذج تمزق الكبد (LL): قابلية تكرار شدة الإصابة، وفقدان الدم الكمي، وتحفيز اعتلال التخثر. يتم تحفيز نزيف داخلي حاد عن طريق فتح البطن في الخط الناصف يليه تمزق كبدي (LL) معياري. تُعالج الفئران مسبقاً بمحلول ملحي (~100 µL) أو العامل السابع المنشط البشري المؤتلف (rhFVIIa؛ 3 mg/kg)، أو حمض الترانيكساميك (TXA؛ 10 mg/kg) قبل الإصابة لتقييم التعديل الدوائي للنزيف واعتلال التخثر. (A) يتم قياس شدة الإصابة كوزن الكبد المتمزق بالنسبة لوزن الجسم (%BW)، مما يظهر تحفيزاً قابلاً للتكرار للإصابة المعيارية عبر الحيوانات. (B) يتم قياس فقدان الدم باستخدام طريقة قياس الوزن ومعايرته بالنسبة لوزن الجسم (µL/g)، مما يظهر نزيفاً قابلاً للقياس ينخفض مع العلاج بـ TXA. (C) زمن التخثر الجزئي المنشط (aPTT) و (D) معقدات الثرومبين-أنثيتيرومبين (TAT) تظهر تحفيزاً قابلاً للتكرار لاعتلال التخثر بعد تمزق الكبد (LL)، مع ملاحظة تعديل بعد العلاج بـ rhFVIIa أو TXA. البيانات معروضة كقيم فردية مع الوسيط والمدى الربيعي؛ أُجريت المقارنات باستخدام اختبار Mann–Whitney U غير المعلمي (n = 5–21). ****P ≤ 0.0001. مقتبس بإذن من Joseph et al.16. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-2
الشكل 2التحقق من صحة اعتلال التخثر الناجم عن الصدمات (TIC) following تمزق الكبد (LL): الاستنفاد الانتقائي لعوامل التخثر. يتم تحفيز النزيف الداخلي الشديد عن طريق فتح البطن في الخط المتوسط يليه استئصال الرئة اليسرى (LL) الموحد. تُعالج الفئران مسبقاً بالمحلول الملحـي (~100 µL) أو العامل السابع البشري المنشط المعاد تركيبُه (rhFVIIa؛ 3 مجم/كجم)، أو حمض الترانيكساميك (TXA؛ 10 مجم/كجم) قبل الإصابة لتقييم التعديل الدوائي لاعتلال التخثر. يتم تقييم معاملات التخثر بعد 60 دقيقة من إحداث إصابة الكبد (LL). (Aالعامل الخامس و(Bتظهر مستويات العامل الثامن (Factor VIII) استنفاداً قابلاً للتكرار بعد عملية غسيل الدم المختار (LL)، وهو ما يتفق مع تطهير تكرار التداخل (TIC).كربون) العامل الثاني و(دظل العامل X محفوظاً نسبياً، مما يشير إلى استنفاد انتقائي لعوامل التخثر بدلاً من الاستهلاك الشامل. عُرضت البيانات كقيم فردية مع الوسيط والمدى الربيعي (n = 7–10). أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام اختبار "مان-ويتني يو" (Mann-Whitney U) غير المعلمي. ***P ≤ 0.001؛ ****P ≤ 0.0001. مُقتبس بإذن من Joseph et al.16. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-3
الشكل 3: التحقق من تنشيط تحلل الفيبرين بعد تمزق الكبد (LL). يتم تحفيز نزيف داخلي شديد عن طريق فتح البطن في الخط المتوسط يليه تمزق كبدي (LL) معياري. تُعالج الفئران مسبقاً بمحلول ملحي (~100 µL)، أو العامل السابع البشري المنشط المؤتلف (rhFVIIa؛ 3 mg/kg)، أو حمض الترانيكساميك (TXA؛ 10 mg/kg) قبل الإصابة لتقييم التعديل الدوائي لتحلل الفيبرين. يتم تقييم معاملات تحلل الفيبرين بعد 60 دقيقة من تمزق الكبد. (أ) تُظهر مستويات الفيبرينوجين استهلاكاً بعد الإصابة، مما يتفق مع تنشيط تحلل الفيبرين ونضوب عوامل التخثر. (ب) تزداد معقدات البلازمين-مضاد البلازمين (PAP) و(ج) مستويات D-dimer بعد تمزق الكبد، مما يشير إلى تحلل الفيبرين النشط وتنشيط تحلل الفيبرين الجهازِي. البيانات معروضة كقيم فردية مع الوسيط والمدى الربيعي (n = 8–13). أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام اختبار Mann-Whitney U غير المعلمي. **P ≤ 0.01; ***P ≤ 0.001; ****P ≤ 0.0001. مقتبس بإذن من Joseph et al.16. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-4
الشكل 4: التحقق من الاستجابة الالتهابية الجهازية وتقييم البقاء على قيد الحياة بعد تمزق الكبد (LL). يتم تحفيز نزيف داخلي حاد عن طريق عملية فتح البطن في الخط الناصف متبوعة بعملية LL معيارية. تُعالج الفئران مسبقاً بمحلول ملحي (100 µL)، أو العامل السابع البشري المؤتلف المنشط (rhFVIIa؛ 3 mg/kg)، أو حمض الترانيكساميك (TXA؛ 10 mg/kg) قبل الإصابة. بعد الإصابة، يتم إغلاق الشق البطني باستخدام مشابك الجروح ولاصق الأنسجة، وتُعاد الحيوانات إلى أقفاصها. تتكون الرعاية الداعمة من إعطاء يومي تحت الجلد لمحلول ملحي (400 µL) خلال الأيام الثلاثة الأولى بعد الإصابة. تُجمع عينات البلازما بعد 60 min و 6 h من عملية LL لتقييم التنشيط الالتهابي الجهازي. (A) تُظهر مستويات إنترلوكين-6 (IL-6) استجابة التهابية جهازية مستمرة بعد الإصابة. يتم عرض البيانات كقيم فردية مع الوسيط والمدى الربيعي. أُجريت المقارنات الإحصائية باستخدام اختبار Mann–Whitney U غير المعلمي (n = 9–13). (B) يتم تقييم البقاء على قيد الحياة لمدة سبعة أيام باستخدام تحليل Kaplan-Meier، مما يثبت قدرة النموذج على دعم نقاط النهاية الطولية القائمة على النتائج (n = 20). ****P ≤ 0.0001. مقتبس بإذن من Joseph et al.16. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل التكميلي 1: نظرة عامة تخطيطية لنموذج تمزق الكبد والجدول الزمني التجريبي. يلخص هذا الشكل سير العمل التجريبي لنموذج تمزق الكبد (LL) القياسي في الفئران لمحاكاة النزيف غير المنضبط. تخضع الفئران لعملية فتح بطن في الخط الناصف، يليه إحداث تمزق كبدي (LL) قابل للتكرار بنسبة 75% تقريباً من الفص الأيسر للكبد. قبل الإصابة، تتلقى الفئران إما محلولاً ملحياً (~100 µL، كمجموعة ضابطة) أو عامل التجلط البشري المؤتلف السابع المنشط (rhFVIIa؛ 3 mg/kg)، أو حمض الترانيكساميك (TXA؛ 10 mg/kg)، حيث يتم إعطاؤها عن طريق الحقن الوريدي عبر الطريق خلف الحجاج قبل 5 min من إحداث تمزق الكبد. يتم تقدير كمية فقدان الدم باستخدام إسفنجات بطنية موزونة مسبقاً توضع داخل التجويف البطني وقت الإصابة، ثم تُستخرج بعد 60 min من تمزق الكبد وتوزن لتحديد إجمالي النزيف. بعد ذلك، يتم إغلاق البطن باستخدام مشابك الجروح مع لاصق الأنسجة. تُجمع عينات الدم عبر الطريق خلف الحجاج عند 60 min في مجموعة نقطة النهاية، وعند 6 h و 7 d في مجموعة البقاء على قيد الحياة. يُحلل البلازما لقياس معاملات التجلط، بما في ذلك زمن الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (aPTT)، ونشاط عوامل التجلط، ومعقدات الثرومبين-أنتيثرومبين (TAT)، ومعقدات البلازمين-α2-أنتيبلازمين (PAP)، والـ D-dimer عند 60 min. يتم إجراء تحليل لبروفيل السيتوكينات عند 60 min و 6 h. وتتم مراقبة البقاء على قيد الحياة على مدار فترة 7 أيام. مقتبس بإذن من Joseph et al.16. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

نقدم في هذه الدراسة نموذجاً فأرياً قابلاً للتكرار للنزيف الحاد باستخدام تقنية LL الموحدة التي تدمج بين التقييم الكمي لفقدان الدم، وتوصيف TIC والالتهاب، وتحليل البقاء على قيد الحياة ضمن تجربة واحدة. ينتج هذا النموذج شدة إصابة متسقة، كما يتضح من تماثل وزن الكبد الممزق بعد تسويته مع وزن الجسم، بينما يتيح تقييماً قابلاً للتكرار للنزيف واستجابات الإرقاء الجهازية عبر المجموعات التجريبية. إن استخدام نموذج للقوارض الصغيرة مع إصابة موحدة ومقاييس نتائج كمية يتيح تقييماً فعالاً لنقاط نهاية تجريبية متعددة ضمن إطار تجريبي واحد، مما يدعم الاستقصاء القابل للتكرار والقابل للتوسع لـ TIC، دون الحاجة إلى إجراءات معقدة تقنياً.

من المهم ملاحظة أن هذا النموذج يحاكي السمات الرئيسية لـ TIC، بما في ذلك إطالة معايير التخثر العامة (aPTT)، وزيادة توليد الثرومبين كما تعكسها معقدات TAT، والاستنفاد الانتقائي لعوامل التخثر V وVIII، وتنشيط تحلل الفبرين الذي يستدل عليه بارتفاع معقدات PAP وتكون D-dimer. تحدث هذه التغييرات في سياق الحفاظ على العاملين II وX، مما يدعم نمط ظاهري سائد لـ TIC بدلاً من التخثر المنتشر داخل الأوعية. وتوفر القدرة على القياس الكمي لهذه المعايير في آن واحد إطاراً ذا صلة انتقالياً لتقييم خلل التنظيم الإرقائي بعد الإصابة الرضحية.

تتمثل إحدى نقاط القوة الرئيسية لهذا النموذج في دمج البقاء على قيد الحياة كنقطة نهاية للنتائج في سياق النزيف الرضحي. ولاختبار استراتيجيات الإنقاذ ذات الصلة سريرياً، قمنا بتقييم كل من rhFVIIa و TXA، وهما عاملان يُستخدمان أو يتم البحث فيهما لإنعاش حالات الرضى لدى البشر. وقد أظهر TXA تأثيرات ثابتة في تقليل فقدان الدم، وتطبيع اعتلال التخثر وتنشيط تحلل الفيبرين، مما انعكس في إنقاذ البقاء على قيد الحياة. وعلى العكس من ذلك، أدى rhFVIIa إلى وفيات ملحوظة مرتبطة بالتصحيح المفرط لمعايير الإرقاء والتحكم غير الكامل في تحلل الفيبرين16.

تسلط هذه النتائج الضوء على جانب مهم من النموذج: فالبقاء على قيد الحياة مدفوع بتفاعل معقد بين شدة النزيف، واعتلال التخثر، والاستجابة الجهازية، بدلاً من التصحيح المنعزل لمسارات إرقاء فردية. ويبدو أن نموذج النزيف هذا حساس لتكامل معايير الإرقاء الكيميائية الحيوية مع معدلات البقاء، حيث يُعد الأخير محدداً حاسماً للنتائج في الممارسة السريرية. ورغم أن النزيف الرضحي الشديد هو الإصابة الأولية التي تمت نمذجتها في هذا النظام، إلا أن إصابة الأعضاء الثانوية قد تساهم أيضاً في النتيجة النهائية. وفي دراستنا السابقة باستخدام هذا النموذج، لوحظ وجود خثرات مجهرية رئوية وترسب للفبرين في الفئران المعالجة بـ rhFVIIa، وارتبط ذلك بزيادة معدلات الوفيات، مما يشير إلى مساهمة محتملة لإصابة الأعضاء الناجمة عن الالتهاب الخثري في النتيجة النهائية16.

على الرغم من عدم إدراج مجموعة ضابطة خضعت لعملية وهمية متزامنة في الدراسة الحالية، فقد أثبتنا سابقاً أن عملية فتح البطن دون استئصال الرباط العريض (LL) لم تؤدِ إلى حدوث التخثر داخل البطن (TIC)، مما يوضح الحاجة إلى فقدان دم سريع إضافي (صدمة) لإحداث اختلالات التخثر المميزة التي لوحظت في حالات TIC14.

هناك عدة اعتبارات تقنية مهمة لضمان إمكانية تكرار هذا النموذج. يجب توحيد مدى وموقع LL، حيث أن التباين في كمية الكبد المستأصلة يمكن أن يؤثر بشكل كبير على شدة النزيف والاستجابة للاعتلال التخثري الناتجة عن ذلك. في البروتوكول الخاص بنا، يتم استئصال ~75% من الفص الكبدي الأيسر، مع تطبيع وزن الكبد الممزق بالنسبة لوزن الجسم، مما يوفر مقياساً موضوعياً لاتساق الإصابة. كما يعد الإغلاق السريع والمحكم للبطن أمراً بالغ الأهمية لمنع فقدان الدم الخارجي والحفاظ على بيئة نزيف داخل البطن محتواة خلال فترة الملاحظة. وللقياس الدقيق لفقدان الدم، يجب استعادة الإسفنج الموزون مسبقاً بشكل ثابت، باستخدام نفس إجراء وتوقيت الجمع عبر المجموعات التجريبية. تقلل هذه الخطوات من التباين المعتمد على المشغل، وهي مهمة بشكل خاص لأن الاختلافات في فقدان الدم الأولي يمكن أن تؤثر على الاعتلال التخثري والبقاء على قيد الحياة لاحقاً. وفي حال حدوث نزيف مفرط قبل الإغلاق أو فقدان الدم خارجياً، يجب استبعاد الحيوان.

تتمثل إحدى محدوديات هذا النموذج في تركيزه على إصابة عضو واحد، وهو ما لا يعكس تباين الإصابات المتعددة (polytrauma)، والتي قد تشمل كسور العظام الطويلة، وإصابات سحق الأنسجة الرخوة، وحالات الصدمة المعقدة الأخرى. ومع ذلك، فإن هذا التركيز على إصابة محددة هو ميزة مقصودة في النموذج، مما يسمح بدراسة آثار النزيف الشديد و TIC دون التعقيدات الإجرائية الإضافية والتغيرات الناتجة عن تعدد أنماط الإصابة. وفي الختام، يوفر نموذج LL الفأري هذا نهجاً فعالاً من حيث التكلفة (مقارنة بالدراسات على الحيوانات الكبيرة)، وقوياً، وقابلاً للتوسع لدراسة TIC والوفيات المرتبطة بالنزيف الناتج عن الصدمات. ومن خلال الجمع بين منصة تجريبية بسيطة للقوارض الصغيرة مع إصابة معيارية، وقياس كمي لفقدان الدم، وتوصيف شامل للارتشاح الدموي، وتقييم البقاء على قيد الحياة، يقدم هذا النموذج بديلاً عملياً لنماذج الصدمات الأكثر تعقيداً من حيث التجهيزات. فهو يتيح تقييماً متكاملاً لفقدان حجم الدم، وتخثر الدم (aPTT, FII, FV, FVIII, FX, TAT)، وتحلل الفيبرين (Fibrinogen, PAP, D-dimer)، ونقاط النهاية الخاصة بالبقاء على قيد الحياة في سياق ذي صلة سريرياً، وهو مناسب تماماً لتقييم التدخلات المضادة لتحلل الفيبرين والتدخلات الموجهة لوقف النزيف.

الإفصاحات

تلقى A.v.D. مكافآت مقابل المشاركة في مجالس استشارية علمية، وعمليات استشارات، ومشاركات في إلقاء محاضرات من BioMarin وRegeneron وPfizer وBioverativ/Sanofi وCSL Behring وNovo Nordisk وSpark Therapeutics وGenentech وuniQure. كما أن A.v.D. هو شريك مؤسس في شركة Hematherix LLC، وهي شركة للتكنولوجيا الحيوية تعمل على تطوير علاج superFVa للمضاعفات النزفية. أما B.C.J. وM.L.C. وR.M. فليس لديهم أي تضارب مصالح للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

نتقدم بالشكر إلى الدكتور لوران موسنييه (Laurent Mosnier, PhD) على مشورته التقنية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إبرة 25 GBD Diagnostics305124
إبرة 30 GBD Diagnostics305106
نظام تخديرPatterson Scientific78915712
كاشف aPTT - STA-C.K. Prest. 5Stago597
مشبك AutoclipFine Science Tools12022-19
أداة وضع مشبك AutoclipFine Science Tools12020-09
أداة إزالة مشبك AutoclipFine Science Tools12023-00
ألبومين المصل البقريSigma Aldrich10735078001
كلوريد الكالسيومFisher scientificC79-500
أنبوب شعري – سادةFisher Scientific22-260943
مسحة قطنيةMedique19-090-701
كرات قطنيةFisher Scientific22-456-103
طقم مقايسة ELISA لـ D-dimerInvitrogenEEL094
وسادة Delta Phase متساوية الحرارةBraintree Scientific50-195-4663
إيثانولFisher scientificBP28184
EthiqaFidelisSKU 072117
بلازما ناقصة للعامل IIAffinity BiologicalsFII-DP
بلازما ناقصة للعامل VAffinity BiologicalsFV-DP
بلازما ناقصة للعامل VIIIAffinity BiologicalsFVIII-DP
بلازما ناقصة للعامل XAffinity BiologicalsFX-DP
ورق ترشيح، سميك جداً، 7 cm × 8.4 cmFisher ScientificPI88605
ملقط GraefeFine Science Tools11049-10
غرفة تحريضPatterson Scientific78933385
محلول ملحي درجة حقنHospira0409-4888-02
InnovinSiemens Healthineers23-044-778
إيزوفلورانMed Vet International50-304-2993
K824086 Chromogenix Coatest SP Factor VIIIDiapharma K822585
لاصق أنسجة سريع Liqui VetWorld Precision Instrument50-253-9340
معقم حبيبات دقيقةFisher scientific14-955-342
أنابيب طرد مركزي دقيقة – 1.5 mLFisher ScientificAM12400
طقم قياس متعدد للسيتوكينات للفئرانQuansys Biosciences 111049MS-13P
طقم مقايسة معقد PAPBiotechneNBP3-06903
بوفيدون-يودMed Vet International50-283-2277
العامل VII البشري المنشط مأشوبNovo Nordisk0169-7001
سترات الصوديومFisher ScientificS279-500
غطاء جراحيStoelting10-000-695
منصة جراحية equaflow للفئران 5 مجمع تخديرPatterson Scientific78919268
مقص جراحيFine Science Tools91405-11
شريط لاصقFisher scientific15-901-5R
طقم مقايسة معقد TATSiemens Healthineers23-044-704
ثرومبينInvitrogenPIRP43100
حمض الترانيكساميكAuromedics55150-0188-10
أداة تشذيبStoelting10-000-792
نظام ترشيح بالفحم المنشط WAGPatterson Scientific78909457
وعاء وزنFisher Scientific01-549-752

المراجع

  1. Rhee P, et al. Increasing trauma deaths in the United States. Ann Surg. 2014;260(1):13-21.
  2. Kauvar DS, Lefering R, Wade CE. Impact of hemorrhage on trauma outcome: an overview of epidemiology, clinical presentations, and therapeutic considerations. J Trauma. 2006;60(6):S3-S11.
  3. Bernhardt IM, et al. Timing of trauma deaths due to uncontrolled bleeding have not changed in three decades: a multicenter study of patients in hemorrhagic shock. Am J Surg. 2025;250.
  4. Cohen MJ, Christie SA. Coagulopathy of trauma. Crit Care Clin. 2017;33(1):101-18.
  5. Kornblith LZ, Moore HB, Cohen MJ. Trauma-induced coagulopathy: the past, present, and future. J Thromb Haemost. 2019;17(6):852-62.
  6. Brohi K, et al. Acute traumatic coagulopathy: initiated by hypoperfusion: modulated through the protein C pathway? Ann Surg. 2007;245(5):812-8.
  7. Cohen MJ, et al. Early coagulopathy after traumatic brain injury: the role of hypoperfusion and the protein C pathway. J Trauma. 2007;63(6):1254-61; discussion 1261-2.
  8. Davenport RA, et al. Activated protein C drives the hyperfibrinolysis of acute traumatic coagulopathy. Anesthesiology. 2017;126(1):115-27.
  9. Moore HB, et al. Hyperfibrinolysis, physiologic fibrinolysis, and fibrinolysis shutdown: the spectrum of postinjury fibrinolysis and relevance to antifibrinolytic therapy. J Trauma Acute Care Surg. 2014;77(6):811-7; discussion 817.
  10. Johansson PI, et al. Traumatic endotheliopathy: a prospective observational study of 424 severely injured patients. Ann Surg. 2017;265(3):597-603.
  11. Vernon T, Morgan M, Morrison C. Bad blood: a coagulopathy associated with trauma and massive transfusion review. Acute Med Surg. 2019;6(3):215-22.
  12. Lie SL, Rognes IN. Human and animal models for studying hemorrhagic shock. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 2025;33(1):124.
  13. Dyer M, et al. Uncontrolled hemorrhagic shock modeled via liver laceration in mice with real time hemodynamic monitoring. J Vis Exp. 2017;(123).
  14. Joseph BC, et al. An engineered activated factor V for the prevention and treatment of acute traumatic coagulopathy and bleeding in mice. Blood Adv. 2022;6(3):959-69.
  15. Joseph BC, et al. Traumatic bleeding and mortality in mice are intensified by iron deficiency anemia and can be rescued with tranexamic acid. Res Pract Thromb Haemost. 2024;8(6):102543.
  16. Chumappumkal Joseph B, et al. The effects of recombinant human activated factor VII and tranexamic acid on traumatic bleeding and mortality in mice. Res Pract Thromb Haemost. 2026;10(3):103436.
  17. Ask A, et al. Spotlight on animal models of acute traumatic coagulopathy: an update. Transfus Apher Sci. 2022;61(2):103412.
  18. Mayer AR, et al. A systematic review of large animal models of combined traumatic brain injury and hemorrhagic shock. Neurosci Biobehav Rev. 2019;104:160-77.
  19. Frith D, Cohen MJ, Brohi K. Animal models of trauma-induced coagulopathy. Thromb Res. 2012;129(5):551-6.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

اعتلال التخثر الناجم عن الصدماتتقدير كمية النزفمؤشرات الالتهابتحليل البقاءقياس فقدان الدمعوامل التخثرتنشيط تحلل الفيبرينالتنشيط الالتهابيالتعديل الدوائي

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.