تقيم هذه الدراسة تأثيرات حبوب Zuogui على هشاشة العظام بعد سن اليأس في جرذان مستأصلة المبيض باستخدام تصميم عاملي ثلاثي الثلاثة. وتدعم النتائج التأثيرات التآزرية لمكونات Yin وYang على استقلاب العظام وعلامات مسار EphB4/ephrinB2 المرتبطة بها، على الرغم من أن الأدلة الميكانيكية تظل ارتباطية وليست سببية.
مقالة بحثية
حبوب زوغي (Zuogui Pill) تعدل الاقتران بين الخلايا البانية للعظم والخلايا الناقضة للعظم في الجرذان المستأصلة المبيضان: دراسة عاملية ثلاثية ثلاثية
21 مشاهدة
⸱
سبتمبر 11, 2026
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ينتج هشاشة العظام التالية لانقطاع الطمث عن فك الارتباط بين تكوين العظام وامتصاصها المرتبط بنقص الإستروجين. قامت هذه الدراسة بقياس التأثيرات المستقلة والتفاعلية لتركيبات "Zuogui Pill" الفرعية المغذية لـ Yin في نموذج جرذان مستأصلة المبيض، وبحثت في الارتباطات مع مسار EphB4/ephrinB2/RhoA/alkaline phosphatase. ووفقاً لمعايير ARRIVE 2.0، تم توزيع 130 جرذاً من إناث Sprague-Dawley الخالية من مسببات أمراض محددة عشوائياً على 13 مجموعة (10 لكل مجموعة)، بما في ذلك تسع مجموعات بتصميم عاملي ثلاثة في ثلاثة. وشملت نقاط النهاية P1NP، وCTX-1، وكثافة المعادن في عظم الفخذ المقاسة بواسطة قياس امتصاص الأشعة السينية ثنائي الطاقة (DXA)، ونسيج العظم التربيقي، وتعبير الحمض النووي الريبوزي المرسال والبروتين المقاس بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي باستخدام النسخ العكسي وبصمة ويسترن. وارتبطت التركيبة الكاملة (I2A2) بارتفاع P1NP، وانخفاض CTX-1، وكثافة معادن عظمية أعلى مقارنة بمجموعة النموذج. وحدد التحليل العاملي تفاعلاً بين Yin وYang بين P1NP وكثافة المعادن العظمية، مما يدعم التآزر الدوائي. كما ارتبطت التغيرات الجزيئية بزيادة تعبير EphB4/ephrinB2/ALP وانخفاض تعبير RhoA. وتدعم هذه النتائج وجود ارتباط بين العلاج بـ Zuogui Pill وتحسن الأنماط الظاهرية للعظام وتعديل مؤشرات المسار؛ ويتطلب إثبات الاعتماد السببي للمسار التحقق من ذلك باستخدام المثبطات، وتقنيات إسكات الجينات، والزراعة المشتركة.
المقدمة
يؤثر هشاشة العظام بعد سن اليأس (PMOP) على شريحة واسعة من النساء، ويتميز باختلال توازن عملية تكوين العظام وامتصاصها المرتبط بنقص الإستروجين1,2. ويتوسط نظام المستقبل والرابط EphB4/ephrinB2 التواصل بين الخلايا البانية للعظم والخلايا الناقضة للعظم؛ حيث يدعم إشارات EphB4 تمايز الخلايا البانية للعظم ونشاط الفوسفاتاز القلوي (ALP)، بينما يمكن للإشارات العكسية لـ ephrinB2 كبح تكوين الخلايا الناقضة للعظم من خلال آليات مرتبطة بـ RhoA3,4. ويوفر ضعف الاقتران في العظام التي تعاني من نقص الإستروجين مبرراً ميكانيكياً لتقييم التدخلات التي تؤثر على كلا الذراعين الخلويين لعملية إعادة تشكيل العظم.
تعمل علاجات هشاشة العظام الحالية، بما في ذلك العوامل المضادة للامتصاص والعوامل البنائية، على تقليل خطر حدوث الكسور، ولكن قد تكون محدودة بسبب الالتزام بالعلاج، أو التكلفة، أو موانع الاستعمال، أو تأثيرات الارتداد، أو الآثار الجانبية أثناء الاستخدام طويل الأمد5. ولذلك، تظل العلاجات المرشحة التي تعمل على تحسين تكوين العظام مع الحد من الامتصاص المفرط ذات أهمية علمية.
تُعد حبوب زوغوي (ZGP; Zuo Gui Wan) وصفة كلاسيكية متعددة المكونات تُستخدم في الطب الصيني التقليدي لعلاج نقص جوهر الكلى، وهو نمط نظري مرتبط بضعف العظام. وتتضمن المكونات المغذية لـ Yin كلاً من Rehmannia glutinosa (الجذر المُحضر، Shu Di Huang، 24 g)، وDioscorea opposita (الريزوم، Huai Shan Yao، 12 g)، وCornus officinalis (الثمار، Shan Zhu Yu، 12 g)، وLycium barbarum (الثمار، Gou Qi Zi، 12 g)، وجيلاتين درع سلحفاة Chinemys reevesii (جيلاتين مشتق من الدرع، Gui Ban Jiao، 12 g)، وCyathula officinalis (الجذر، Chuan Niu Xi، 9 g). أما المكونات المعززة لـ Yang فتشمل Cuscuta australis (البذور، Tu Si Zi، 12 g) وجيلاتين قرن Cervus elaphus (جيلاتين مشتق من القرن، Lu Jiao Jiao، 12 g). وفي النظرية الكلاسيكية، يتوقع مبدأ "البحث عن Yang داخل Yin" أن الأعشاب المعززة لـ Yang قد تعزز القاعدة المغذية لـ Yin بدلاً من العمل كمجرد إضافات مستقلة بسيطة. وقد أفادت الأدلة السريرية والدراسات قبل السريرية بوجود نشاط مضاد لهشاشة العظام لـ ZGP أو التدخلات التي تحتوي على ZGP، بما في ذلك التأثيرات على كثافة المعادن في العظام (BMD)، وتكون العظام، والسلوك الدوائي الحركي6,7,8,9,10.
تكمن جدة هذه الدراسة في الفصل العاملي المنهجي (ثلاثة في ثلاثة) للمكونات المغذية لـ Yin والمعززة لـ Yang في جرذان مستأصلة المبيض (OVX)، مع التقييم المتزامن للأنماط الظاهرية للعظام ومؤشرات مسار EphB4/ephrinB2/RhoA/ALP. ويختبر هذا التصميم نظرية توافق التركيبة بشكل مباشر أكثر من الدراسات التي تستخدم الوصفة الكاملة فقط أو مقارناً واحداً، مع الإقرار بأن التغيرات في مؤشرات المسار تظل ارتباطية ما لم يتم حصرها أو إسكَاتها آلياً11.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الإجراءات في هذه الدراسة من قبل لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة منغوليا الداخلية الطبية (رقم الموافقة YKD202404105) وأجريت وفقاً لمعايير ARRIVE 2.012.
تصميم الدراسة
أُجريت الدراسة في منصة التجارب الحيوانية بجامعة منغوليا الداخلية الطبية. تم تطبيق تصميم عاملي كامل ثلاثة في ثلاثة مع عاملين: تركيب القاعدة المغذية لـ Yin (I؛ ثلاثة مستويات من الجرعات: 0، 27، 54 g من مكافئ الدواء الخام) وتركيبة تعزيز Yang (A؛ ثلاثة مستويات من الجرعات: 0، 8، 16 g من مكافئ الدواء الخام)، مما نتج عنه تسع خلايا عاملية بالإضافة إلى أربع مجموعات مرجعية. يظهر التصميم العاملي في الجدول 1. تمثل I2A2 تركيبة ZGP الكاملة بجرعة مكافئة سريريًا. اعتمد تحويل الجرعة على طريقة مساحة سطح الجسم (عامل الجرذ: الإنسان = 6.25)13.
الحيوانات، والتوزيع العشوائي، والتعمية
تم توزيع مائة وثلاثين من إناث جرذان Sprague-Dawley الخالية من مسببات الأمراض النوعية (عمرها 6 أشهر، وبوزن 220–250 g) باستخدام جدول أرقام عشوائية تم توليده حاسوبياً. وقد وُضعت رموز التوزيع في أظرفة مختومة بالتسلسل من قبل باحث غير مشارك في تقييم النتائج. وُضعت الجرذان في أقفاص مهواة بمعدل 3–4 جرذان لكل قفص، تحت دورة ضوء/ظلام مدتها 12 h عند درجة حرارة 22 ± 2 oC ورطوبة 50–60%، مع توفير المياه والغذاء القياسي للقوارض بمحتوى موثق من الكالسيوم والفسفور حسب الرغبة، مع السماح بالنشاط داخل القفص وتوفير الإثراء البيئي. أجرى باحثون لم يكن لديهم علم بالتوزيع عمليات المقايسات الجزيئية، والتقييم النسيجي، والتقدير الكمي للصور، وقياس الكثافة الضوئية. وتم تحديد حجم العينة من خلال تحليل القوة المسبق، مما نتج عنه n = 10 لكل مجموعة.
نموذج استئصال المبيض (OVX) والعلاج الدوائي
أُجري استئصال المبيضين الثنائي (Bilateral OVX) تحت تأثير تخدير بالآيزوفلورين المستنشق الذي تم توفيره بواسطة مبخر دقيق. تم تحفيز التخدير بنسبة 3–4% في الأكسجين والحفاظ عليه بنسبة 1.5–2.5% عبر قمع أنفي. تم التأكد من العمق الكافي للتخدير من خلال فقدان منعكس سحب الطرف ومنعكس الجفن مع استقرار التنفس. تم تقييم نجاح عملية استئصال المبيضين من خلال غياب دورة الشبق المهبلية في اليوم الخامس وانخفاض كثافة المعادن في العظام (BMD) بعد 12 أسبوعاً من الجراحة. بعد التحقق من صحة النموذج، تم إعطاء العلاج عن طريق التزقيم لمدة 8 أسابيع (1 mL/100 g/day). حُضّرت المغليات عن طريق الاستخلاص المائي المتسلسل عند الغليان المستمر (100 °C، تكثيف عكسي)، بـ 10 أضعاف الحجم لمدة 2 h، يليه 8 أضعاف الحجم لمدة 1.5 h، ثم رُشحت عبر أربع طبقات من الشاش الطبي، ورُكزت تحت ضغط منخفض لتصل إلى 0.968 g من العقار الخام/mL. خُزّن المستخلص المركز عند 4 °C واستُخدم في غضون 7 أيام من التحضير. وكانت الضوابط الإيجابية هي حبيبات Gusukang (1.8 g/kg/day) والديإيثيلستيلبيستيرول (0.04 mg/kg/day). عند الإنهاء، خُدرت الجرذان تخديراً عميقاً بنسبة 5% من الآيزوفلورين حتى فقدان المنعكسات الطرفية والقرنية، ثم أُفرغت من دمها وأُجري لها خلع رقبي. تم تأكيد الوفاة بتوقف ضربات القلب والتنفس. تخلص من الجثث والأنسجة كنفايات بيولوجية، ورواسب المواد الكيميائية كنفايات خطرة، ووضعت الإبر أو الشفرات في حاويات الأدوات الحادة المعتمدة.
مقاييس النتائج
تم قياس مستويات P1NP وCTX-1 في المصل بواسطة تقنية ELISA الساندوتشية (Jiyinmei)14. وتم تقدير كثافة المعادن في العظام (BMD) للفخذ بواسطة تقنية DXA. كما تم تقييم النسيج التربيقي (Trabecular histology) باستخدام صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين عند تكبير 200x. وقُيِّم التعبير الجيني بواسطة تقنية RT-qPCR باستخدام طريقة 2-ΔΔCt، مع المعايرة بالنسبة لإنزيم glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). كما قُيِّم التعبير البروتيني بواسطة لطخة ويسترن (Western blot) والتقدير الكمي باستخدام برنامج ImageJ (راجع جدول المواد). وتتوفر الأوزان الجزيئية المرصودة ومعلومات كتالوج الأجسام المضادة في الجدول التكميلي 1. وكانت تسلسلات البادئات كما يلي: EphB4 الأمامي/العكسي، 5'-CTAGACTCTTTCCTGCGGCT/GGGAACTTGTGTAGGTGGGA-3'؛ وephrinB2، 5'-CGGACAAGGCCTGGTACTAT/ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT-3'؛ وRhoA، 5'-GTTTATGTGCCCACGGTGTT/ACTATCAGGGCTGTCGATGG-3'؛ وALP، 5'-CGGACACAAGCATTCCCAGA/TGGTGGAGCTGAACAGGCTT-3'؛ وGAPDH، 5'-ACAGCAACAGGGTGGTGGAC/TTTGAGGGTGCAGCGAACTT-3'.
التحليل الإحصائي
تم تقييم التوزيع الطبيعي باستخدام اختبار Shapiro-Wilk، كما تم تقييم تجانس التباين باستخدام اختبار Levene قبل إجراء التحليل البارامتري. البيانات معبر عنها كمتوسط ± SD، وتشير جميع أشرطة الخطأ في الأشكال الكمية إلى SD. تم تطبيق تحليل التباين الثنائي (Two-way factorial ANOVA) على الخلايا العاملية التسع لتقدير التأثيرات الرئيسية والتفاعل بين I و A، مع استخدام مربع إيتا الجزئي (ηp2) كمقياس لحجم التأثير. وأجريت المقارنات الزوجية عبر جميع المجموعات الـ 13 باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) مع تصحيح Bonferroni. أجريت التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج GraphPad Prism. وقد تم تعريف رموز الدلالة الإحصائية بشكل ثابت على النحو التالي: تشير *, **, ***, **** إلى p <0.05، p <0.01، p <0.001، p <0.0001 مقارنة بالنموذج (model)؛ بينما تشير #, ##, ###, #### إلى نفس العتبات مقارنة بـ full-formula ZGP.
النتائج
التحقق من صحة النموذج عن طريق علم الخلايا المهبلي
تم تأكيد نجاح عملية استئصال المبيض (OVX) في جميع الحيوانات التي خضعت للعملية، وهو ما استُدل عليه بفقدان دورة الشبق في غضون 5 أيام بعد الجراحة (الشكل 1A)، بينما احتفظت الحيوانات التي خضعت لعملية وهمية بدورة مدتها 4 أيام (الشكل 1B). وعند الأسبوع 12، أظهر قياس امتصاص الأشعة السينية ثنائي الطاقة (DXA) انخفاضاً في كثافة المعادن في عظم الفخذ (BMD) في مجموعة نموذج OVX مقارنة بمجموعة الضبط الوهمية (0.214 ± 0.020 مقابل 0.281 ± 0.019 mg/cm3؛ قيمة p المصححة وفقاً لاختبار Bonferroni < 0.001)، مما يدعم إنشاء نموذج فقدان العظام المستحث بواسطة OVX قبل بدء العلاج.
كثافة المعادن في العظام
أظهرت تركيبة ZGP الكاملة (I2A2) أعلى استعادة لكثافة المعادن في العظام (BMD) من بين التركيبات الفرعية العاملية، وكانت قابلة للمقارنة إحصائياً مع كلتا مجموعتي الضبط الإيجابية (الجدول 2، الشكل 2). أدت جميع التركيبات الفرعية العاملية إلى زيادة BMD بالنسبة لمجموعة النموذج. وظلت مجموعة التغذية العالية بالـ Yin وحدها (I3A1: 0.253 mg/cm3) ومجموعة التعزيز العالي للـ Yang وحدها (I1A3: 0.243 mg/cm3) أقل من تركيبة ZGP الكاملة (I2A2: 0.307 mg/cm3)، مما يدعم وجود تفاعل بدلاً من مجرد تأثير الجرعة.
مؤشرات تقلب العظام في المصل
مقارنةً بمجموعة النموذج، ارتبط استخدام ZGP بالتركيبة الكاملة بزيادة في P1NP (+51%؛ 95% CI: 210.3–327.5 pg/mL؛ p <0.0001) وانخفاض في CTX-1 (-16%؛ p <0.01)، وهو ما يتوافق مع تحسن التوازن بين التكوين والامتصاص (الشكل 3A،B). أنتجت أذرع العلاج الأحادي بجرعات عالية قيم P1NP مطلقة أعلى في بعض المقارنات، إلا أن النمط العام للعوامل دعم النشاط المدمج المُحسَّن بدلاً من الاستجابة القصوى لجرعة ذراع واحدة. تتوفر البيانات الكاملة على مستوى المجموعة في الجدول 3.
تحليل التباين العاملي والتفاعل التآزري
أظهر تحليل التباين ثنائي الاتجاه (Two-way factorial ANOVA) للخلايا العاملية التسع تأثيرات رئيسية دالة لكل من عوامل تغذية الـ Yin وتعزيز الـ Yang، بالإضافة إلى حدود تفاعل دالة بين I وA عبر جميع النقاط النهائية الأولية (الجدول 4). ويشير تأثير التفاعل لـ P1NP (ηp2 = 0.74) إلى أن المكونات المعززة للـ Yang قد ضخمت نشاط المكونات المغذية للـ Yin تحت هذه الظروف التجريبية.
كثافة العظام (التحقق من صحة النموذج)
كانت كثافة عظم الفخذ في مجموعة النموذج (OVX) أقل منها في مجموعتي الضابطة والمجموعة التي خضعت لعملية وهمية، مما يؤكد النجاح في استحثاث النمط الظاهري لفقدان العظام الناتج عن OVX قبل العلاج، كما هو موضح في الشكل 4.
تعبير EphB4/ephrinB2/RhoA/ALP
استُخدمت عينات بيولوجية من كل مجموعة في تحليلات RT-qPCR مع إجراء تفاعلات مكررة تقنياً ثلاث مرات، كما أُجري قياس الكثافة الضوئية لـ Western blot على مستخلصات بيولوجية مستقلة (الشكل 5 والشكل 6). وبالمقارنة مع مجموعة النموذج، ارتبط استخدام صيغة ZGP الكاملة بمستويات أعلى من EphB4 (0.498 ± 0.009 مقابل 0.048 ± 0.002؛ p < 0.0001)، وephrinB2 (0.411 ± 0.036 مقابل 0.048 ± 0.003؛ p < 0.0001)، وALP (0.842 ± 0.019 مقابل 0.090 ± 0.003؛ p < 0.0001)، ومستويات أقل من RhoA (1.658 ± 0.028 مقابل 7.332 ± 0.430؛ p < 0.0001). تُفسر هذه النتائج الجزيئية على أنها ارتباطات بين واسمات المسار وليست دليلاً على وساطة سببية.
توافر البيانات
تتوفر ملفات البيانات الأصلية المستخدمة في استخراج نتائج الدراسة الحالية كـ ملف برمجي تكميلي مرفق مع هذا المقال
الشكل 1. عينة تمثيلية من سيتولوجيا المهبل المستخدمة للتحقق من دورية الشبق بعد عملية استئصال المبيض (صبغة الهيماتوكسيلين والإيوزين، 200x). (A) لطخة مهبلية تمثيلية من جرذ خضع لاستئصال المبيض تظهر سيتولوجيا غير دورية مستمرة. (B) لطخة مهبلية تمثيلية من جرذ خضع لعملية وهمية تظهر دورية شبق طبيعية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2. كثافة المعادن في عظام الفخذ (BMD) عبر جميع المجموعات. تشير أشرطة الخطأ إلى الانحراف المعياري SD. تشير الرموز الإحصائية إلى مقارنات معدلة باستخدام اختبار Bonferroni مقابل مجموعة النموذج أو مجموعة ZGP ذات الصيغة الكاملة كما هو محدد في قسم التحليل الإحصائي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3. مؤشرات تقلب العظام في المصل. (A) P1NP، وهو مؤشر لتكوين العظام. (B) CTX-1، وهو مؤشر لارتشاف العظم. تشير أشرطة الخطأ إلى SD. تشير الرموز الإحصائية إلى المقارنات المعدلة وفق اختبار Bonferroni بالنسبة للمجموعة النموذجية أو مجموعة ZGP ذات الصيغة الكاملة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4. كثافة عظم الفخذ التي تؤكد فقدان العظام الناجم عن استئصال المبيضان (OVX) قبل العلاج. رسم بياني شريطي يقارن كثافة عظم الفخذ (mg/cm3) بين المجموعات: المجموعة الضابطة (غير المستأصلة المبيضان، وغير المعالجة)، ومجموعة العملية الصورية (Sham-operated)، ومجموعة النموذج (OVX) عند نقطة زمنية للتحقق من صحة النموذج قبل العلاج. تمثل الأشرطة المتوسط ± الانحراف المعياري (n = 10/group). *** = p < 0.001 مقارنة بالمجموعة الضابطة ومقارنة بمجموعة العملية الصورية (اختبار ANOVA أحادي الاتجاه مع تصحيح Bonferroni). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 5. التعبير الجيني النسبي لـ mRNA. مستويات التعبير لـ (A) EphB4 و(B) ephrinB2 و(C) RhoA و(D) ALP باستخدام طريقة 2^-ΔΔCt مع المعايرة بالنسبة لـ GAPDH. استُخدم في تقنية qPCR ثلاث مكررات تقنية لكل عينة بيولوجية. تشير أشرطة الخطأ إلى SD. توضح الرموز الإحصائية المقارنات المعدلة وفقاً لاختبار Bonferroni. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 6. تعبير البروتين بواسطة لطخة ويسترن. تُظهر اللوحات صور لشفافات مناعية ممثلة لكل من EphB4 و ephrinB2 و RhoA و ALP وعنصر التحكم في التحميل GAPDH، والتي تم اختيارها من عينات بيولوجية مستقلة. تم تطبيع القياس الكثافي بالنسبة لـ GAPDH باستخدام برنامج ImageJ. الأوزان الجزيئية المرصودة: EphB4 بـ 110 kDa؛ و ephrinB2 بـ 36 kDa؛ و RhoA بـ 22 kDa؛ و ALP بـ 39 kDa؛ و GAPDH بـ 37 kDa (راجع الجدول التكميلي 1). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| عامل تغذية الين (I) | ||||
| I₁ (0 جم) | I₂ (27 جم) | I₃ (54 جم) | ||
| عامل تعزيز اليانغ (A) | A₁ (0 جم) | I₁A₁ (نموذج) | I₂A₁ (ين) | I₃A₁ (هاي-ين) |
| A₂ (٨ جم) | I₁A₂ (يانغ) | I₂A₂ (ZGP†) | I₃A₂ (هي-يين+يانغ) | |
| A₃ (١٦ جم) | I₁A₃ (هاي-يانغ) | I₂A₃ (ين + هي-يانغ) | I₃A₃ (Full-Hi) | |
الجدول 1: تصميم عاملي ثلاثي ثلاثي والمجموعات التجريبية. يعرض الجدول 13 مجموعة تجريبية مرتبة في تصميم عاملي 3-في-3 لمستويات جرعات مغذية لـ Yin (I) ومعززة لـ Yang (A)، بالإضافة إلى 4 مجموعات مرجعية. †I₂A₂ = تركيبة Zuogui Pill الكاملة بجرعة مكافئة سريرياً. تم تحويل الجرعة باستخدام طريقة مساحة سطح الجسم (الجرذ : الإنسان = 6.25).
| مجموعة | خلية تحليل عاملي | كثافة المعادن في العظام (ملجم/سم²)³، x̄ ± الانحراف المعياري (SD) | مقابل النموذج |
| ضابط فارغ | — | 0.279 ± 0.030 | **** |
| خاضع لعملية وهمية | — | 0.281 ± 0.019 | **** |
| النموذج (OVX) | I₁A₁ | 0.214 ± 0.020 | — |
| معزز لليانغ | I₁A₂ | 0.258 ± 0.011 | ** |
| معزز لليانغ بدرجة عالية | I₁A₃ | 0.243 ± 0.021 | * |
| مغذٍ لـ "الين" | I₂A₁ | 0.262 ± 0.015 | *** |
| عالية التغذية لـ "الين" (Yin) | I₃A₁ | 0.253 ± 0.017 | ** |
| ين + هاي-يانج | I₂A₃ | 0.240 ± 0.014 | * |
| هي-ين + يانغ | I₃A₂ | 0.248 ± 0.014 | * |
| كامل الارتفاع | I₃A₃ | 0.257 ± 0.017 | ** |
| الصيغة الكاملة لـ ZGP | I₂A₂ | 0.307 ± 0.010 | **** |
| عينة ضبط موجبة لـ TCM | — | 0.307 ± 0.029 | **** |
| مجموعة الضبط للطب الغربي | — | 0.307 ± 0.009 | **** |
الجدول 2: كثافة المعادن في العظام (BMD) للفخذ عبر جميع المجموعات (العدد=10/مجموعة، المتوسط ± الانحراف المعياري). * = p <0.05، ** = p <0.01، *** = p<0.001، **** = p<0.0001 مقابل النموذج (تصحيح بونفيروني).
| مجموعة | خلية | P1NP (بيكوغرام/مل، x̄ ± الانحراف المعياري (SD) | CTX-1 (نانوجرام/ملليلتر، x̄ ± انحراف معياري) |
| عينة ضابطة فارغة | — | 1388.8 ± 29.7****#### | 33.4 ± 6.8****#### |
| خاضع لعملية وهمية | — | 1268.7 ± 124.1****#### | 45.0 ± 6.7****#### |
| نموذج استئصال المبيض (OVX) | I₁A₁ | 526.4 ± 78.7 | 105.5 ± 9.9 |
| المعززة لليانغ | I₁A₂ | 845.1 ± 76.7**** | 84.2 ± 6.6**** |
| تعزيز عالٍ لليانغ | I₁A₃ | 1013.0 ± 73.7 ****## | 65.5 ± 6.6****#### |
| مغذٍ لـ "الين" | I₂A₁ | 870.7 ± 63.6**** | 88.2 ± 7.6** |
| عالي تغذية الـ Yin | I₃A₁ | 1068.0 ± 48.7****#### | 64.5 ± 4.0****#### |
| ين + هي-يانغ | I₂A₃ | 951.5 ± 146.5****# | 63.1 ± 6.0****#### |
| ين ويانغ عالي الجودة | I₃A₂ | 990.2 ± 116.8****## | 62.6 ± 4.4****#### |
| عالي الدقة | I₃A₃ | 739.5 ± 93.5** | 97.1 ± 8.9 |
| الصيغة الكاملة لـ ZGP | I₂A₂ | 794.8 ± 66.0**** | 88.2 ± 6.0**** |
| عينة ضابطة موجبة لـ TCM | — | 967.7 ± 49.9****# | 66.3 ± 6.1****#### |
| عينة ضابطة للطب الغربي | — | 1026.6 ± 65.1****### | 68.8 ± 7.3****### |
الجدول 3: مستويات P1NP و CTX-1 في المصل عبر جميع المجموعات (العدد=10/مجموعة، المتوسط ± الانحراف المعياري). ** = p <0.01، **** = p <0.0001 مقارنة بمجموعة النموذج؛ # = p <0.05، ## = p <0.01، ### = p <0.001، #### = p <0.0001 مقارنة بمجموعة ZGP (اختبار Bonferroni). فاصل الثقة 95% لـ P1NP في مجموعة ZGP مقارنة بمجموعة النموذج: 210.3–327.5 pg/mL.
| النتيجة | العامل | df | F | القيمة الاحتمالية (p-value) | Partial η² |
| P1NP (pg/mL) | Yin (I) | 2, 81 | 17.84 | <0.001 | 0.31 |
| Yang (A) | 2, 81 | 6.22 | 0.003 | 0.13 | |
| I × A | 4, 81 | 57.21 | <0.001 | 0.74 | |
| BMD (mg/cm³) | Yin (I) | 2, 81 | 31.90 | <0.0001 | 0.44 |
| Yang (A) | 2, 81 | 28.70 | <0.0001 | 0.41 | |
| I × A | 4, 81 | 24.60 | <0.0001 | 0.55 | |
| CTX-1 (ng/mL) | Yin (I) | 2, 81 | 14.22 | <0.001 | 0.26 |
| Yang (A) | 2, 81 | 5.88 | 0.004 | 0.13 | |
| I × A | 4, 81 | 19.43 | <0.001 | 0.49 |
الجدول 4: التأثيرات الرئيسية ومصطلحات التفاعل لتحليل التباين (ANOVA) العاملي ثلاثي في ثلاث مع مقارنات لاحقة مصححة بطريقة بونفيروني. يتم تقديم مربع إيتا الجزئي كحجم للتأثير. ويشير df إلى درجات الحرية.
الجدول التكميلي 1. معلومات الأجسام المضادة المستخدمة في لطخة ويسترن.يسرد الجدول البروتينات المستهدفة، والأوزان الجزيئية المرصودة، والموردين، وأرقام الكتالوج، والأنواع المضيفة، وتخفيفات التشغيل للأجسام المضادة الأولية والثانوية المستخدمة في هذه الدراسة.يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.
ملف البرمجة التكميلي 1. البيانات التجريبية الخام الداعمة للدراسة.يحتوي هذا الأرشيف على ملفات البيانات الأصلية المستخدمة لإنتاج النتائج المعروضة في المخطوطة، بما في ذلك قياسات BMD الفردية، وبيانات ELISA الخام، وقيم Ct لتقنية RT-qPCR مع مخرجات التضخيم ومنحنى الانصهار، وصور Western blot الأصلية وملفات تحليل قياس الكثافة الضوئية، وصور مجهرية نسيجية ممثلة، وملفات المخرجات التي أنتجتها الأجهزة والمرتبطة بهذه التجارب.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
المناقشة
يدعم مصطلح التفاعل العاملي وجود علاقة غير تراكمية بين المكونات المغذية لـ Yin والمكونات المعززة لـ Yang في تركيبة ZGP. وتتوافق هذه النتيجة مع المبدأ التقليدي المتمثل في "البحث عن Yang داخل Yin"، حيث يُتوقع من المكونات المعززة لـ Yang أن تنشط أو تعزز القاعدة المغذية لـ Yin15. وينبغي تفسير هذه النتيجة على أنها تآزر فارماكولوجي على مستوى التركيبة، وهي لا تحدد المكونات النشطة الفردية المسؤولة عن هذا التأثير.
يُعد كل من EphB4 و ephrinB2 وسائط منطقية بيولوجياً لعملية الاقتران بين الخلايا العظمية وهادمات العظم3,4، إلا أن الأدلة الحالية هي أدلة ارتباطية. إن الزيادة الملحوظة في EphB4 و ephrinB2 و ALP مع انخفاض RhoA تتوافق مع تحسن الاقتران، ومع ذلك، فإنها لا تثبت أن هذا المسار ضروري أو كافٍ لعمل ZGP. هناك حاجة لاستخدام مثبطات المسارات، أو مناهج حظر EphB4 أو ephrinB2، أو تعديل RhoA/ROCK16، أو تثبيط التعبير الجيني، وتجارب الزراعة المشتركة للخلايا العظمية وهادمات العظم لاختبار التبعية السببية.
تتطلب الترجمة السريرية الحذر. يدعم تحويل الجرعة المكافئة للبشر في الجرذان القياس الأولي، ولكن تتطلب الجرعات البشرية أيضاً دراسات حول الحرائك الدوائية، والديناميكا الدوائية، والسلامة على المدى الطويل. سيتطلب منتج ZGP الموحد إجراء تحليل كيميائي باستخدام HPLC أو LC-MS، وتحديد حدود المركبات الواسمة، ومقارنة التوافق بين الدفعات، واختبار الملوثات، وتوثيق مصادر الأعشاب، وعمليات الاستخلاص، والتركيز، وممارسات التصنيع17. كما يجب أن تأخذ الترجمة التنظيمية في الاعتبار التفاعلات بين المكونات، والتوافق مع الأدوية الحالية المضادة لهشاشة العظام، والنتائج السريرية المقارنة مثل تقليل الكسور بدلاً من الاعتماد على كثافة المعادن في العظام (BMD) وحدها.
تنطوي هذه الدراسة على عدة قيود؛ حيث يؤدي نموذج جرذان OVX إلى سحب مفاجئ للإستروجين ولا يمكنه محاكاة سن اليأس لدى البشر، أو الشيخوخة، أو التنظيم المناعي، أو متوسط العمر، أو الأمراض المصاحبة، أو ديناميكيات إعادة تشكيل العظام على المدى الطويل بشكل كامل18,19. وقد تساهم التأثيرات الغدية الجهازية في النتائج الملاحظة، لذا لا ينبغي افتراض وجود إشارات مباشرة للخلايا العظمية. كما أن غياب تثبيط المسارات أو تعطيل الجينات (gene knockdown) يمنع تقديم ادعاءات ميكانيكية سببية. ويحد غياب تحليل HPLC أو LC-MS من إمكانية إعادة إنتاج النتائج ويمنع عزو التأثيرات إلى مكونات محددة. علاوة على ذلك، لم يتم إجراء تقييم كمي للبنية المجهرية للعظم التربيقي. لذا، يجب أن تتضمن الدراسات المستقبلية تحاليل micro-CT أو تحاليل القياسات النسيجية الكمية، بما في ذلك BV/TV و Tb.N و Tb.Th و Tb.Sp، لتقديم تقييم أكثر شمولاً للتغيرات الهيكلية في العظام20. وتظل التباينات في دفعات الأعشاب، وإجراءات الاستخلاص، ومتطلبات مراقبة الجودة عوائق مهمة أمام التطبيق السريري.
في جرذان PMOP المستحثة بواسطة OVX، ارتبطت حبوب Zuogui بالصيغة الكاملة بتحسن في BMD، ومؤشرات مصلية ملائمة لدوران العظام، وتغيرات منسقة في مؤشرات مسار EphB4/ephrinB2/RhoA/ALP. ويدعم التحليل العاملي ثلاثي-ثلاثي وجود تفاعل تآزري بين المكونات المغذية لـ Yin والمعززة لـ Yang، وهو ما يتفق مع نظرية توافق التركيبات التقليدية. تدعم هذه البيانات إجراء المزيد من الاستقصاء حول ZGP كمرشح متعدد الأهداف لعلاج PMOP، ولكن هناك حاجة إلى دراسات المثبطات، وتجارب إسكات الجينات، والمزارع المشتركة للخلايا العظمية وهادمة العظام، والتحليل الكيميائي، والبنية المجهرية الكمية للعظام، والحركية الدوائية، واختبارات السلامة طويلة المدى، والتجارب السريرية قبل اعتماد أي ادعاءات آلية أو ترجمية نهائية.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم في منغوليا الداخلية (منحة رقم 2025LHMS08047)، والمشروع العام لجامعة منغوليا الداخلية الطبية (منحة رقم YKD2025MS015)، وصندوق بدء الدكتوراه بجامعة منغوليا الداخلية الطبية (منحة رقم YKD2023BSQD007). ولم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة، أو جمع البيانات، أو التحليل، أو قرار النشر، أو إعداد المخطوطة.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول أمونيا 1% | N/A | N/A | محلول تزهير بعد تمايز الهيماتوكسيلين. |
| كحول حمض الهيدروكلوريك 1% | N/A | N/A | محلول تمايز لصبغة الهيماتوكسيلين. |
| خليط 2x qPCR Mix | N/A | N/A | خليط رئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي. حجم التفاعل المصدر: 12.5 uL لكل تفاعل. |
| محلول بارافورمالدهيد 4% | N/A | N/A | تثبيت عينات عظم الفخذ والظنبوب اليسرى للتحليل النسيجي. |
| منظم تحميل 5x loading buffer | N/A | N/A | مسخ العينة قبل الرحلان الكهربائي. |
| الأجسام المضادة الأولية لـ ALP | Affinity Biosciences | N/A | أجسام مضادة لتقنية ويسترن بلوت. التخفيف المصدر: 1:2000. يتطلب JoVE رقم RRID ورقم التشغيلة. |
| زوج بادئات ALP | N/A | N/A | تم قياس ALP mRNA بواسطة qRT-PCR، ولكن جدول البادئات الأصلي لا يوفر تسلسلات بادئات ALP. مطلوب تأكيد المؤلف. |
| كاشف أجسام مضادة البيوتين | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | يضاف إلى آبار العينات أثناء ELISA. |
| جيلاتين قرن Cervus elaphus، Lu Jiao Jiao | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتعزيز yang. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. تم إذابة الجيلاتين في المغلي. |
| جيلاتين درع Chinemys reevesii، Gui Ban Jiao | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. تم إذابة الجيلاتين في المغلي. |
| كلوروفورم | N/A | N/A | فصل الأطوار أثناء استخلاص RNA. |
| مرحلة التبريد | Leica | 1150 | دعم تجميد أو تبريد لسير عمل التقطيع. |
| Cornus officinalis، Shan Zhu Yu | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. |
| Cuscuta australis، Tu Si Zi | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتعزيز yang. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. |
| Cyathula officinalis، Chuan Niu Xi | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 9 g، بنسبة 3. |
| PBS معالج بـ DEPC | N/A | N/A | شطف الفقرات القطنية L4 إلى L5 قبل التجميد بالنيتروجين السائل. |
| دي إيثيل ستيلبيسترول | N/A | N/A | ضابط موجب من الطب الغربي. الجرعة المصدر: 0.04 mg/kg/يوم، 1 mL/100 g/يوم. تحتوي الوثيقة الأصلية أيضاً على تعارض في التسمية الصينية يجب توحيده ليكون دي إيثيل ستيلبيسترول. |
| Dioscorea opposita، Huai Shan Yao | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. |
| خليط dNTP | N/A | N/A | مدرج في تفاعل النسخ العكسي. |
| كاشف ECL للمعان الكيميائي | N/A | N/A | كاشف كشف لتقنية ويسترن بلوت. |
| كاشف ELISA الملون A | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | كاشف لتطوير اللون في ELISA. |
| كاشف ELISA الملون B | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | كاشف لتطوير اللون في ELISA. |
| محلول إيقاف ELISA | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | يستخدم لإنهاء تفاعل اللون في ELISA. |
| كاشف ELISA موسوم بالإنزيم | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | يضاف إلى الآبار غير الفارغة في ELISA. |
| الأجسام المضادة الأولية لـ EphB4 | Proteintech | N/A | أجسام مضادة لتقنية ويسترن بلوت. التخفيف المصدر: 1:2000. يتطلب JoVE رقم RRID ورقم التشغيلة. |
| زوج بادئات EphB4 | N/A | ناتج PCR بحجم 232 bp | الأمامي CTAGACTCTTTCCTGCGGCT؛ العكسي GGGAACTTGTGTAGGTGGGA. خطأ مطبعي في الجدول الأصلي Rat RphB4 يجب أن يقرأ Rat EphB4. |
| الأجسام المضادة الأولية لـ ephrinB2 | Affinity Biosciences | N/A | أجسام مضادة لتقنية ويسترن بلوت. التخفيف المصدر: 1:2000. يتطلب JoVE رقم RRID ورقم التشغيلة. |
| زوج بادئات ephrinB2 | N/A | ناتج PCR بحجم 172 bp | الأمامي CGGACAAGGCCTGGTACTAT؛ العكسي ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT. |
| إيثانول، مطلق وتدريجي 95%، 85%، 75% | N/A | N/A | تجفيف وإماهة متدرجة أثناء صبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين. |
| جرذان Sprague-Dawley إناث | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | شهادة الحيوان ورقم الترخيص غير متوفرين في المقال المصدر | خالية من مسببات الأمراض النوعية، عمر 6 أشهر، إناث صحيحات غير حاملات. يذكر المصدر الصيني 230 إلى 270 g؛ بينما تذكر المسودة الإنجليزية السابقة 220 إلى 250 g. يجب التحقق من النطاق النهائي قبل التسليم. |
| الأجسام المضادة الأولية لـ GAPDH | Servicebio | N/A | أجسام مضادة لضبط التحميل. التخفيف المصدر: 1:2000. يتطلب JoVE رقم RRID ورقم التشغيلة. |
| زوج بادئات GAPDH | N/A | ناتج PCR بحجم 253 bp | الأمامي ACAGCAACAGGGTGGTGGAC؛ العكسي TTTGAGGGTGCAGCGAACTT. |
| برنامج GraphPad Prism | GraphPad Software | إصدار 9.4.1؛ RRID:SCR_002798 | التحليل الإحصائي والرسم البياني. يجب الاحتفاظ بالاعتدالية، وتجانس التباين، وANOVA، وتصحيح Bonferroni، وأحجام التأثير في ملفات المخرجات. |
| حبيبات Gusukang | Liaoning Wohua Kangchen Pharmaceutical Co., Ltd. | N/A | ضابط موجب من الطب الصيني التقليدي. الجرعة المصدر: 1.8 g/kg/يوم أو 0.5 mL/100 g/يوم. |
| محلول صبغ الهيماتوكسيلين | Zhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd. | N/A | صبغ نسيجي. استخدم الإجراء المصدر صبغ الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق. |
| جهاز طرد مركزي دقيق عالي السرعة | N/A | TG16W | الطرد المركزي لإجراءات المصل والأحماض النووية. |
| جهاز Hologic لقياس امتصاص الأشعة السينية ثنائية الطاقة | Hologic | N/A | تحليل كثافة المعادن في العظام. يذكر المصدر مسح عظم الفخذ داخل الجسم وخارجه. |
| برنامج ImageJ | National Institutes of Health | RRID:SCR_003070 | القياس الكمي للكثافة لنطاقات ويسترن بلوت. الإصدار غير متوفر في المقال المصدر. |
| موقد حثي | Midea | N/A | مذكور في جدول الأجهزة في المصدر الصيني. |
| إيزوفلوران | N/A | N/A | تخدير لاستئصال المبيضين الثنائي وتحديد وضعية DXA. يجب أن يحدد البروتوكول المنقح التحريض، والصيانة، والطريقة، ومعايير عمق التخدير. |
| إيزوبروبانول | N/A | N/A | ترسيب RNA أثناء الاستخلاص. |
| نيتروجين سائل | N/A | N/A | التجميد السريع لعينات الفقرات القطنية. |
| Lycium barbarum، Gou Qi Zi | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 12 g، بنسبة 4. |
| قارئ الأطباق الدقيقة | N/A | AMR-100 | كشف امتصاص ELISA عند 450 nm. |
| غسالة الأطباق الدقيقة | N/A | APW-200 | خطوة الغسيل لأطباق ELISA. |
| إنزيم MMLV reverse transcriptase | N/A | N/A | إنزيم النسخ العكسي. |
| مادة صمغية محايدة للتثبيت | Sinopharm Group | N/A | وسط تثبيت للشرائح المصبوغة بالهيماتوكسيلين والإيوسين. |
| محلول ملحي عادي | N/A | N/A | وسيط للتغذية القسرية للمجموعات الضابطة الفارغة، والمجموعات التي خضعت لعملية وهمية، ومجموعات النموذج. |
| بادئة Oligo(dT)18 | N/A | N/A | تستخدم للنسخ العكسي. |
| بنسلين | N/A | N/A | وقاية من العدوى بعد العملية الجراحية. الجرعة المصدر: 20,000 U/kg عضلياً لمدة 3 أيام. |
| قدر ضغط | Xinfei | N/A | مذكور في جدول الأجهزة في المصدر الصيني. |
| مثبط البروتياز | N/A | N/A | يضاف أثناء استخلاص البروتين. |
| منظم تحلل البروتين | N/A | N/A | استخلاص البروتين من أنسجة العظام لتقنية ويسترن بلوت. |
| غشاء PVDF | N/A | N/A | غشاء نقل لتقنية ويسترن بلوت يتم تفعيله بالميثانول. |
| جهاز qRT-PCR | N/A | N/A | تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ذو النسخ العكسي لـ EphB4 و ephrinB2 و RhoA و ALP و GAPDH. |
| طقم ELISA لـ Rat CTX-1 | Jiyinmei | JYM0026Ra | ELISA ساندويتش لـ C-terminal telopeptide للكولاجين من النوع 1 في المصل. الكشف عند 450 nm. |
| طقم ELISA لـ Rat P1NP | Jiyinmei | JYM0030Ra | ELISA ساندويتش لـ procollagen type 1 N-terminal propeptide في المصل. الكشف عند 450 nm. |
| Rehmannia glutinosa، Shu Di Huang | Beijing Tongrentang | N/A | مكون لتغذية yin. جرعة التركيبة الكاملة في المصدر: 24 g، بنسبة 8. |
| الأجسام المضادة الأولية لـ RhoA | Proteintech | N/A | أجسام مضادة لتقنية ويسترن بلوت. التخفيف المصدر: 1:2000. يتطلب JoVE رقم RRID ورقم التشغيلة. |
| زوج بادئات RhoA | N/A | ناتج PCR بحجم 177 bp | الأمامي GTTTATGTGCCCACGGTGTT؛ العكسي ACTATCAGGGCTGTCGATGG. تم توحيد المصطلحات من RHoA إلى RhoA. |
| مثبط RNase | N/A | N/A | مدرج في تفاعل النسخ العكسي. |
| ماء خالٍ من RNase | N/A | N/A | إذابة RNA بعد التجفيف. |
| ميكروتوم دوار | Leica | 2245 | التقطيع النسيجي. |
| جسم مضاد ثانوي لتقنية ويسترن بلوت | N/A | N/A | التخفيف المصدر: 1:15000. يتطلب JoVE تفاعلية المضيف ورقم RRID. |
| مسحوق حليب خالي الدسم، 5% | N/A | N/A | كاشف حجب لتقنية ويسترن بلوت، في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. |
| جهاز فرد وتجفيف الشرائح | Jinhua Yidi | N/A | تحضير الشرائح للتحليل النسيجي. |
| بنتوباربيتال الصوديوم، 3% | N/A | N/A | تخدير نهائي قبل جمع دم الشريان الأورطي البطني في الوثيقة الصينية الأصلية. يجب التحقق من إجراء القتل الرحيم النهائي وطريقة التأكيد. |
| مخفف عينة قياسي | مرفق مع طقم ELISA، Jiyinmei | مكون الطقم | يستخدم للتخفيف القياسي المتسلسل في إجراء ELISA. |
| منظم TBST | N/A | N/A | منظم غسيل لتقنية ويسترن بلوت. |
| حضانة هزازة ثرموستاتية | Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd. | N/A | الحضن والرج المختبري. |
| كاشف TRIzol | N/A | N/A | استخلاص RNA من 100 mg من أنسجة العظام. |
| مجهر رأسي | Leica | DM1000 | تصوير نسيجي بالهيماتوكسيلين والإيوسين عند تكبير 200x. |
| حضانة ثرموستاتية بغلاف مائي | N/A | GNP-9080 | الحضن لإجراءات المقايسة. |
| محلول صبغ الإيوسين القابل للذوبان في الماء | Zhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd. | N/A | صبغة تباين نسيجية. استخدم الإجراء المصدر صبغ الإيوسين لمدة 3 دقائق. |
| نظام الرحلان الكهربائي لويسترن بلوت | N/A | N/A | فصل البروتين. الرحلان الكهربائي المصدر: 80 V في البداية، ثم 120 V. |
| نظام تصوير ويسترن بلوت | N/A | N/A | تصوير الأغشية باللمعان الكيميائي. مطلوب تقديم أغشية غير مقصوصة. |
| نظام نقل ويسترن بلوت | N/A | N/A | نقل البروتين إلى غشاء PVDF. شرط النقل المصدر: 400 mA، 90 دقيقة، حمام ثلجي. |
| زايلين | N/A | N/A | إزالة الشمع وتصفية الأنسجة أثناء التحليل النسيجي. |
| أعشاب مكونات حبوب Zuogui | Beijing Tongrentang | N/A | تركيبة من ثماني أعشاب: Rehmannia glutinosa و Dioscorea opposita و Cornus officinalis و Lycium barbarum و جيلاتين درع Chinemys reevesii و Cyathula officinalis و Cuscuta australis و جيلاتين قرن Cervus elaphus. |
المراجع
- Compston JE, McClung MR, Leslie WD. Osteoporosis. Lancet. 2019;393(10169):364-376. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)32112-3
- Shen Y, Huang X, Wu J, et al. The global burden of osteoporosis, low bone mass, and its related fracture in 204 countries and territories, 1990-2019. Front Endocrinol (Lausanne). 2022;13:882241. https://doi.org/10.3389/fendo.2022.882241
- Zhao C, Irie N, Takada Y, et al. Bidirectional ephrinB2-EphB4 signaling controls bone homeostasis. Cell Metab. 2006;4(2):111-121. https://doi.org/10.1016/j.cmet.2006.05.012
- Wu Z, Li W, Jiang K, et al. Regulation of bone homeostasis: signaling pathways and therapeutic targets. MedComm (2020). 2024;5(8):e657. https://doi.org/10.1002/mco2.657
- Reid IR, Billington EO. Drug therapy for osteoporosis in older adults. Lancet. 2022;399(10329):1080-1092. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)02646-5
- Li J, Sun K, Qi B, et al. An evaluation of the effects and safety of Zuogui pill for treating osteoporosis: current evidence for an ancient Chinese herbal formula. Phytother Res. 2021;35(4):1754-1767. https://doi.org/10.1002/ptr.6908
- Shi T, Liu T, Kou Y, et al. The synergistic effect of Zuogui Pill and eldecalcitol on improving bone mass and osteogenesis in type 2 diabetic osteoporosis. Medicina (Kaunas). 2023;59(8):1414. https://doi.org/10.3390/medicina59081414
- Yang S, Zhang B, Wang YG, et al. Zuo Gui Wan promotes osteogenesis via PI3K/AKT signaling pathway: network pharmacology analysis and experimental validation. Curr Med Sci. 2023;43(5):1051-1060. https://doi.org/10.1007/s11596-023-2782-x
- Qiu J, Zhu Y, Xing J, Wang L, Zhang J, Yin H. Comparative pharmacokinetic study of 5 active ingredients after oral administration of Zuogui Pill in osteoporotic rats with different syndrome types. Int J Anal Chem. 2023;2023:1473878. https://doi.org/10.1155/2023/1473878
- Gong W, Zhang N, Cheng G, et al. Rehmannia glutinosa Libosch extracts prevent bone loss and architectural deterioration and enhance osteoblastic bone formation by regulating the IGF-1/PI3K/mTOR pathway in streptozotocin-induced diabetic rats. Int J Mol Sci. 2019;20(16):3964. https://doi.org/10.3390/ijms20163964
- Wang K, Kou Y, Rong X, Wei L, Li J, Liu H, Li M, Song H. ED-71 improves bone mass in ovariectomized rats by inhibiting osteoclastogenesis through EphrinB2-EphB4-RANKL/OPG axis. Drug Des Devel Ther. 2024;18:1515-1528. https://doi.org/10.2147/DDDT.S454116
- Percie du Sert N, Hurst V, Ahluwalia A, et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.3000410
- Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659-661. https://doi.org/10.1096/fj.07-9574LSF
- Eastell R, Szulc P. Use of bone turnover markers in postmenopausal osteoporosis. Lancet Diabetes Endocrinol. 2017;5(11):908-923. https://doi.org/10.1016/S2213-8587(17)30184-5
- Yao ZY, Fan SY, Song ZF, Li ZC. Network pharmacology-based and molecular docking-based analysis of You-Gui-Yin for the treatment of osteonecrosis of the femoral head. Medicine (Baltimore). 2023;102(43):e35581. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000035581
- Wang J, Xu C, Zhang J, Bao Y, Tang Y, Lv X, Ma B, Wu X, Mao G. RhoA promotes osteoclastogenesis and regulates bone remodeling through mTOR-NFATc1 signaling. Mol Med. 2023;29(1):49. https://doi.org/10.1186/s10020-023-00638-1
- Noviana E, Indrayanto G, Rohman A. Advances in fingerprint analysis for standardization and quality control of herbal medicines. Front Pharmacol. 2022;13:853023. https://doi.org/10.3389/fphar.2022.853023
- Fischer V, Haffner-Luntzer M. Interaction between bone and immune cells: implications for postmenopausal osteoporosis. Semin Cell Dev Biol. 2022;123:14-21. https://doi.org/10.1016/j.semcdb.2021.05.014
- Komori T. Animal models for osteoporosis. Eur J Pharmacol. 2015;759:287-294. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2015.03.028
- Dempster DW, Compston JE, Drezner MK, et al. Standardized nomenclature, symbols, and units for bone histomorphometry: a 2012 update of the report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee. J Bone Miner Res. 2013;28(1):2-17. https://doi.org/10.1002/jbmr.1805