مقالة بحثية

تقييم دور miR-93-5p لدى الأطفال المصابين بـ الميكوبلازما الرئوية (Mycoplasma pneumoniae) مع إصابة في الجهاز الهضمي

38 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72281

⸱

أكتوبر 9, 2026

 ,  ,  , 
1Child Health Department, Department of Pediatrics, Shounan Community Health Service, 2Longyan First Hospital, 3Department of Pediatrics, Affiliated Hospital of Yangzhou University, 4Department of Pediatrics, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

في هذه المقالة

ملخص

يستهدف MiR-93-5p بشكل مباشر مستقبل Toll-like receptor 4 (TLR4) في حالات الالتهاب الرئوي الناتج عن Mycoplasma pneumoniae لدى الأطفال (MPP). وقد يساهم انخفاض تعبيره في تطور المرض وإصابة الجهاز الهضمي المرتبطة به. وتشير هذه النتائج إلى أن miR-93-5p قد يعمل كمؤشر تشخيصي محتمل لحالات MPP وحالات MPP المصحوبة بإصابة في الجهاز الهضمي.

الملخص

لقد ثبت تورط MiR-93-5p في تعديل إصابة الرئة الحادة، إلا أن دوره وقيمته التشخيصية في حالات الالتهاب الرئوي الناجم عن Mycoplasma pneumoniae (MPP) لدى الأطفال المصحوب بإصابة في الجهاز الهضمي لا تزال غير واضحة. قيمت هذه الدراسة دور miR-93-5p كعلامة حيوية تشخيصية محتملة لمرض MPP والمضاعفات الهضمية المصاحبة له عند الأطفال. جُمعت عينات سريرية من مرضى الأطفال المصابين بـ MPP ومجموعات ضابطة من الأصحاء. وتم قياس تعبير MiR-93-5p كمياً باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي بالنسخ العكسي (RT-qPCR). واستُخدمت خلايا A549 المصابة بـ Mycoplasma pneumoniae (MP) لإنشاء نموذج خلوي لمرض MPP لتقييم التغيرات في حيوية الخلايا والسيتوكينات المحفزة للالتهاب. كما تم تقييم استهداف miR-93-5p لمستقبل Toll-like receptor 4 (TLR4) باستخدام مقايسة مراسل اللوسيفيراز. وقُيم الأداء التشخيصي باستخدام تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC). انخفضت مستويات MiR-93-5p بشكل ملحوظ لدى المرضى المصابين بـ MPP مقارنة بالمجموعات الضابطة من الأصحاء (P < 0.001)، وانخفضت بشكل أكبر لدى المرضى المصابين بـ MPP مع إصابة في الجهاز الهضمي مقارنة بأولئك المصابين بـ MPP وحده. أدت العدوى بـ MP إلى تقليل حيوية الخلايا وزيادة مستويات IL-6 وTNF-α، بينما خفف التعبير المفرط لـ miR-93-5p من هذه التأثيرات. وزاد تعبير TLR4 عقب العدوى بـ MP وتم تنظيمه سلبياً بواسطة miR-93-5p. سريرياً، ارتبطت إصابة الجهاز الهضمي لدى مرضى MPP بانخفاض مستويات miR-93-5p. وأظهرت تحليلات منحنى ROC أداءً تشخيصياً جيداً للتمييز بين المرضى المصابين بـ MPP والأصحاء، وبين المرضى المصابين بـ MPP مع إصابة في الجهاز الهضمي وأولئك المصابين بـ MPP وحده. يستهدف MiR-93-5p بشكل مباشر TLR4 في حالات MPP لدى الأطفال، وقد يساهم انخفاض تعبيره في تطور المرض وإصابة الجهاز الهضمي المصاحبة. وتشير هذه النتائج إلى أن miR-93-5p قد يعمل كعلامة حيوية تشخيصية محتملة لمرض MPP ومرض MPP المصحوب بإصابة في الجهاز الهضمي.

المقدمة

Mycoplasma pneumoniae (MP) هي مسبب مرضي رئيسي مسؤول عن الإصابة بالالتهاب الرئوي لدى الأطفال1، وغالبًا ما تؤدي إلى مراضة تنفسية كبيرة في جميع أنحاء العالم. ورغم أن MP تسبب في المقام الأول عدوى رئوية، إلا أنها قد تسبب أيضًا مضاعفات خارج الرئة تشمل أنظمة متعددة من أعضاء الجسم2. وخلال الإصابة بـ M. pneumoniae، تشمل الأعراض الهضمية الأكثر شيوعًا الغثيان، والقيء، والإسهال، وآلام البطن3. كما تم تحديد مجموعة من الحالات والمظاهر الهضمية كجزء من الأمراض خارج الرئة المرتبطة بـ M. pneumoniae (MPEPDs)2. ويواجه المرضى من الأطفال المصابون بـ M. pneumoniae pneumonia (MPP) المصحوبة بإصابة في الجهاز الهضمي تحديات سريرية قد تزيد من شدة المرض وتعقد إدارته العلاجية4. وتشير الأدلة الناشئة إلى وجود تفاعل بين العدوى الرئوية والخلل الوظيفي المعوي، وهو ما قد يكون الأساس لهذا الارتباط5,6. كما قد يرتبط خلل تنظيم الاستجابات المناعية أثناء الإصابة بـ MP بإصابة الجهاز الهضمي7.

على الرغم من التقدم في الوسائل التشخيصية8، لا يزال التشخيص المبكر والدقيق لالتهاب الرئة السنكي النخري (MPP) يمثل تحدياً بسبب تداخل المظاهر السريرية مع الإصابات التنفسية الأخرى وتفاوت الإصابة خارج الرئتين9. وتعد الرئة والأمعاء مكونين أساسيين في الجهاز المناعي المخاطي المشترك، ويمكن لهذه الأعضاء أن تؤثر في وظائف بعضها البعض، وهو ما ينعكس في الاضطرابات المعوية أثناء أمراض الرئة والتأثيرات المتبادلة، وهي ظاهرة تُعرف باسم التواصل الرئوي المعوي (lung-gut crosstalk)10. علاوة على ذلك، تركز الرعاية التمريضية للأطفال بشكل أساسي على إدارة الأعراض التنفسية11، بينما قد لا يتم التعرف بشكل كافٍ على المظاهر المعدية المعوية أو يتم عزوها إلى الآثار الجانبية للعلاج. وتؤكد هذه الفجوة الحاجة إلى تقييم شامل يدمج بين الفحص الرئوي والمعوي لتحسين التدخلات التمريضية الداعمة12. وقد سلطت الدراسات الجزيئية الحديثة الضوء على منظمات مسارات الإشارات الالتهابية المشاركة في كل من اعتلال الرئة والالتهاب المعوي في حالات MPP12,13.

لقد ثبت تورط MiR-93-5p في إمراضية إصابة الرئة الحادة، حيث يرتبط انخفاض تعبيره بضعف الوظائف الرئوية وتفاقم الاستجابات الالتهابية14,15. وبناءً على هذه النتائج، وُضعت فرضية مفادها أن miR-93-5p يكون منخفض التعبير بشكل مماثل في مصل الأطفال المصابين بالتهاب الرئة الحاد المرتبط بالعدوى الميكروبية (MPP). وقد حدد التحليل المعلوماتي الحيوي باستخدام قاعدة بيانات TargetScan مستقبل Toll-like 4 (TLR4) كهدف مباشر محتمل لـ miR-93-5p. وقد أفادت التقارير بأن TLR4 يلعب دوراً هاماً في تنظيم محور الرئة-الأمعاء16,17، ولذلك اعتُبر مرتبطاً باحتمالية حدوث مضاعفات في الجهاز الهضمي لدى مرضى MPP. وبناءً على ذلك، بحثت هذه الدراسة في دور miR-93-5p لدى المرضى الأطفال المصابين بـ MPP والمصابين بمضاعفات في الجهاز الهضمي.

البروتوكول

تمت مراجعة هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في المستشفى التابع لجامعة Yangzhou (رقم الموافقة 2023-YKL01-(16)؛ 17 يناير 2023). تم جمع عينات دم وريدية محيطية من كل مشارك لإجراء المقايسات المختبرية ذات الصلة. وقبل المشاركة، تم الحصول على موافقة مستنيرة من الأوصياء القانونيين لجميع المشاركين. وترد الكواشف والمعدات والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول في جدول المواد.

1. جمع العينات السريرية

تم إدراج ما مجموعه 108 أطفال تتراوح أعمارهم بين 2 و14 عاماً في المستشفى التابع لجامعة Yangzhou في الفترة ما بين فبراير 2023 وديسمبر 2024. تم تشخيص جميع الأطفال الـ 108 المصابين بـ MPP، وهو ما تم تأكيده عن طريق تصوير الصدر واختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للكشف عن MP DNA في عينات البلعوم الأنفي. تم الكشف عن MP DNA في مسحات البلعوم الأنفي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي الذي يستهدف جين P1 adhesin النوعي لـ MP.

صُنِّف المرضى وفقاً لحالة المرض إلى مجموعتين: التهاب البنكرياس المزمن (MPP) بدون تدهور في حالة الجهاز الهضمي (DSI) (العدد = 60)، والتهاب البنكرياس المزمن (MPP) مع تدهور في حالة الجهاز الهضمي (DSI) (العدد = 48). عُرِّف تدهور حالة الجهاز الهضمي (DSI) بوجود عرض واحد على الأقل من أعراض الجهاز الهضمي، بما في ذلك الإسهال (≥3 مرات تبرز لين أو مائي في اليوم واستمراره لمدة... >(24 ساعة)، أو الغثيان، أو القيء، أو ألم البطن المستمر مع وجود أو عدم وجود ألم ارتدادي، مصحوباً بمعلمة مخبرية غير طبيعية واحدة على الأقل و/أو نتيجة تصوير تأكيدية للبطن. شملت المعلمات المخبرية غير الطبيعية ارتفاع مستويات ترانساميناز المصل، أو الأميليز، أو الليباز، و/أو زيادة مؤشرات نفاذية الأمعاء، مثل D-lactate والداخلي السموم (endotoxin). وشملت نتائج تصوير البطن التأكيدية تثخن جدار الأمعاء، أو تضخم العقد الليمفاوية المساريقية، أو الانصباب الصفاقي المكتشف بواسطة التصوير بالموجات فوق الصوتية أو التصوير المقطعي المحوسب. بالإضافة إلى ذلك، تم الاستعانة بـ 60 طفلاً سليماً يخضعون لفحوصات روتينية كمجموعة ضابطة.

  1. معايير الاشتمال
    تم تصنيف المرضى الذين يعانون من أعراض هضمية مصحوبة باختلالات مخبرية أو تصويرية ضمن مجموعة DSI.
  2. معايير الاستبعاد
    شملت معايير الاستبعاد الالتهاب الرئوي الفيروسي أو البكتيري، والسل، وتاريخ الحساسية الدوائية تجاه الأدوية المستخدمة في الدراسة، والاضطرابات المناعية، وسوء التغذية، والقصور الكلوي، والتشوهات الهضمية، وتلقي علاج سابق بالمضادات الحيوية قبل دخول المستشفى.

2. زراعة الخلايا ونموذج MPP

Mycoplasma pneumoniae السلالة القياسية ATCC 15531 تم استزراعها في مرق PPLO. كما تم استزراع خلايا A549 الظهارية السنخية البشرية في وسط RPMI-1640 الذي يحتوي على 10% من مصل الجنين البقري تحت ظروف رطبة عند 37 °C مع 5% CO₂.

لإنشاء نموذج مختبري لمرض الالتهاب الرئوي الناجم عن الميكوبلازما (MPP)، تم إصابة خلايا A549 بمعلقات من M. pneumoniae بمعدل عدوى (MOI) قدره 1:10018. وبعد الإصابة، تمت إزالة البكتيريا غير المرتبطة عن طريق استبدال وسط الزرع. وتم التأكد من كفاءة الإصابة عن طريق الكشف عن DNA الخاص بـ MP في الطافات العليا للمزرعة بعد الإصابة باستخدام تقنية qPCR.

3. بناء البلازميد والترانسفكشن

تم تصنيع محاكيات MiR-93-5p، وبلازميدات الإفراط في تعبير TLR4 (oe-TLR4)، والضوابط السلبية المقابلة لها تجارياً. تم ترانسفكشن خلايا A549 المصابة بـ MP باستخدام كاشف ترانسفكشن قائم على الدهون. تم تقييم كفاءة الترانسفكشن بعد 48 h من العملية عن طريق تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي بالنسخ العكسي (RT-qPCR).

4. تحليل RT-qPCR

تَم استخلاص الحمض النووي الريبي (RNA) الكلي من خلايا A549 التي جُمعت في نهاية التجارب. تم تحلل الخلايا ومجانستها باستخدام المحلول الملحي الملحق بالفوسفات (PBS). ونُقِّي الـ RNA الكلي باستخدام كاشف استخلاص RNA قائم على الفينول. استُخدمت مجموعة أدوات النسخ العكسي لإجراء النسخ العكسي لـ miR-93-5p، بينما تم تخليق الحمض النووي المكمل (cDNA) لتحليل الـ mRNA باستخدام كاشف نسخ عكسي متاح تجارياً. وأُجري تحليل RT-qPCR باستخدام تقنية SYBR Green.

5. مقايسة MTT

تم حصاد خلايا A549 المنقولة من كل مجموعة تجريبية وزرعها في أطباق ذات 96 بئراً بكثافة 2 × 103 خلية لكل بئر. بعد ذلك، تمت إضافة 20 µL من كاشف بروميد ميثيل ثيازوليل ثنائي فينيل تترازوليوم (MTT) إلى كل بئر. وعقب الحضن لمدة ساعتين إضافيتين عند 37 °C، تمت إزالة السوائل الطافية بعناية. ثم أُذيبت بلورات الفورمازان الناتجة عن الخلايا النشطة أيضياً وفقاً لتعليمات المقايسة. وتم تقدير حيوية الخلايا بشكل غير مباشر عن طريق قياس الكثافة الضوئية (OD) عند 490 nm باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة.

6. المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم

استُخدمت مجموعات تجارية من مقايسة الممتز المنيعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لقياس مستويات إنترلوكين-6 (IL-6) وعامل نخر الورم-α (TNF-α). وأُجريت المقايسات وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. كما نُفذت القياسات في ثلاث مكررات عبر تجربتين مستقلتين لضمان الدقة وقابلية التكرار.

7. مقايسة المراسل لوسيفيراز المزدوج

مواقع ارتباط MiR-93-5p ضمن المنطقة 3′ تَمَّ التنبؤ بالمنطقة غير المترجمة (UTR) الخاصة بـ TLR4 باستخدام قاعدة بيانات TargetScan. ثم استُنْسخت شظايا تحتوي على التسلسلات من النوع البري (WT) أو التسلسلات الطافرة (MUT) في ناقل تقرير لوسيفرين. وقد أُجري تر transfection مشترك لخلايا A549 باستخدام 500 نانوجرام من بنية WT أو MUT جنباً إلى جنب مع محاكيات miR-93-5p أو ضوابط، وذلك باستخدام كاشف تر transfection قائم على الدهون. وبعد مرور 48 ساعة، قِيس نشاط اللوسيفرين باستخدام مقايسة تقرير لوسيفرين مزدوجة. وتم تطبيع نشاط لوسيفرين اليراعة (Firefly luciferase) نسبةً إلى نشاط لوسيفرين رينيلا (Renilla luciferase) لمراعاة كفاءة عملية الـ transfection.

8. مقايسة لطخة ويسترن

بالنسبة لطريقة لطخة ويسترن (Western blotting)، تم خلط مستخلصات الخلايا مع محلول التحميل وطردها مركزياً عند 10,000 × g لمدة 3 min. خضعت السوائل الطافية للفصل الكهربائي بهلام بولي أكريلاميد ودوديسيل كبريتات الصوديوم، ثم نُقلت البروتينات إلى أغشية بولي فينيليدين فلوريد. حُجبت الأغشية باستخدام 5% bovine serum albumin (BSA) لمدة 1 h في درجة حرارة الغرفة، ثم حُضنت طوال الليل عند 4 °C مع أجسام مضادة أولية ضد glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) وinhibitor kappa B alpha (IκBα) بتخفيف 1:1000 في محلول Tris-buffered saline يحتوي على Tween 20 و5% BSA. وبعد ثلاث غسلات، حُضنت الأغشية مع goat anti-rabbit IgG المقترن بـ HRP بتخفيف (1:500) لمدة 1 h في درجة حرارة الغرفة. وعقب غسلات إضافية، تم تصوير حزم البروتين باستخدام ركيزة التألق الكيميائي المعززة وجهاز تصوير التألق الكيميائي. تم قياس كثافة الحزم للبروتينات المستهدفة وGAPDH من ثلاث تجارب مستقلة باستخدام برنامج لتحليل الصور.

9. التحليل الإحصائي

أُجريت التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج للتحليل الإحصائي. وقد تم تقييم توزيع البيانات القياسية للتأكد من طبيعيتها باستخدام اختبار شابيرو-ويلك (Shapiro-Wilk). وتُعرض البيانات ذات التوزيع الطبيعي في صورة المتوسط الحسابي. ± والانحراف المعياري، وتمت مقارنتها باستخدام اختبار t للعينات المستقلة لمجموعتين، أو تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) للمجموعات المتعددة. وعندما أشار تحليل التباين إلى وجود فرق إجمالي جوهري، استُخدم اختبار توكي للمقارنات البعدية (Tukey’s post hoc test) لإجراء المقارنات الزوجية. أما البيانات غير الموزعة توزيعاً طبيعياً فقد حُللت باستخدام اختبار مان-ويتني يو (Mann-Whitney U test). وعُبر عن المتغيرات الفئوية في شكل أعداد ونسب مئوية، وقورنت باستخدام اختبارات كاي تربيع. كما استُخدم تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لتقييم القدرة التشخيصية لـ miR-93-5p في التنبؤ بالتهاب السحايا القيحي (MPP) أو التهاب السحايا القيحي المصحوب بقصور في الإفرازات الدماغية النخاعية (DSI). ولتحديد العوامل التنبؤية المرتبطة بالتهاب السحايا القيحي المصحوب بقصور في الإفرازات الدماغية النخاعية، أُجري تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات. وشملت المتغيرات التي أُدخلت في النموذج العمر، والجنس، ومدة الحمى، ومدة استخدام المضادات الحيوية، وتعبير miR-93-5p المقسم ثنائياً عند القيمة الوسيطة. واعتُبرت قيمة P ثنائية الجانب <اعتُبرت القيمة 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

انخفاض مستويات MiR-93-5p في حالات التهاب الغشاء البريتوني القيحي لدى الأطفال
تم تقييم الأداء التشخيصي لـ miR-93-5p لاستكشاف إمكانياته كعلامة حيوية في حالات التهاب الغشاء البريتوني القيحي (MPP) لدى الأطفال. وكما هو موضح في الشكل 1A، انخفض تعبير miR-93-5p بشكل ملحوظ لدى المرضى الأطفال المصابين بـ MPP مقارنة بالمجموعات الضابطة السليمة. تم تلخيص الخصائص الديموغرافية والدموية للمجموعتين في الجدول 1. ولم تُلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية في توزيع العمر أو الجنس بين المجموعات (P > 0.05). ومع ذلك، ارتفع عدد خلايا الدم البيضاء الطرفية (WBC)، ونسبة الخلايا المتعادلة (Net%)، ومستويات البروتين التفاعلي-C (CRP) بشكل ملحوظ في مجموعة MPP مقارنة بالمجموعات الضابطة السليمة (P < 0.001).

أُجري تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لتقييم الأداء التشخيصي لـ miR-93-5p بشكل أكبر في التمييز بين المرضى المصابين بـ MPP والأطفال الأصحاء (الشكل 1B). بلغت المساحة تحت المنحنى (AUC) قيمة 0.9009 [فاصل ثقة (CI) 95%: 0.8537–0.9482]، مع حساسية بلغت 80.56% ونوعية بلغت 88.33%. وتشير هذه النتائج إلى أن انخفاض مستويات miR-93-5p في المصل كان مرتبطاً بمرض MPP لدى الأطفال.

تأثير miR-93-5p على نماذج خلايا MPP
أُجريت سلسلة من التجارب المخبرية لتقييم تأثير miR-93-5p في نموذج خلايا MPP. وبالمقارنة مع الخلايا الضابطة، انخفض تعبير miR-93-5p في نموذج خلايا MPP (الشكل 2A). كما ارتبطت عدوى MP بانخفاض حيوية خلايا A549 (الشكل 2B). بالإضافة إلى ذلك، ارتفعت مستويات السيتوكينات المحفزة للالتهاب IL-6 وTNF-α في نموذج MPP مقارنة بالمجموعات الضابطة (الشكل 2C).

ولمزيد من التقييم للأثر الوظيفي لـ miR-93-5p، تم إنشاء نموذج للإفراط في تعبير miR-93-5p في خلايا A549 المصابة بـ MP (الشكل 2D). وقد أدى الإفراط في تعبير miR-93-5p إلى زيادة حيوية الخلايا بشكل ملحوظ مقارنة بنموذج MPP بدون الإفراط في تعبير miR-93-5p (الشكل 2E). واتساقاً مع هذه النتائج، ترافق زيادة تعبير miR-93-5p مع انخفاض في إنتاج IL-6 و TNF-α (الشكل 2F). وتشير هذه النتائج إلى أن انخفاض تعبير miR-93-5p ارتبط بانخفاض حيوية الخلايا وزيادة الاستجابات الالتهابية أثناء الإصابة بـ MP، بينما أدى الإفراط في تعبير miR-93-5p إلى تخفيف هذه التغييرات.

يستهدف MiR-93-5p مستقبل TLR4
لتوضيح العلاقة التنظيمية بين miR-93-5p وTLR4، حدد التحليل المعلوماتي الحيوي موقع ارتباط متوقع لـ miR-93-5p ضمن المنطقة غير المترجمة 3′ (UTR) لـ TLR4 mRNA (الشكل 3A). وقد زاد تعبير TLR4 في نموذج خلايا MP مقارنة بالمجموعات الضابطة (الشكل 3B). بعد ذلك، تم تقييم التفاعل المتوقع باستخدام مقايسة مراسل لوسيفيراز. وأدى التعداء المشترك مع محاكيات miR-93-5p إلى خفض نشاط اللوسيفيراز في البناء من النوع البري، مما يشير إلى الارتباط النوعي بالموقع المتوقع (الشكل 3C).

أدى الإفراط في تعبير miR-93-5p في الخلايا المصابة بـ MP إلى خفض تعبير TLR4 مقارنة بالمجموعات الضابطة المصابة التي لم تتلقَّ علاج المحاكي (الشكل 3D). ولمزيد من الاستقصاء حول التأثيرات المصبّية المرتبطة بتعديل TLR4، تم إنشاء نماذج من خلايا A549 مع الإفراط في تعبير TLR4 (الشكل 3E). وأظهر تحليل لطخة ويسترن زيادة في مستويات IκBα عقب الإفراط في تعبير TLR4 (الشكل 3F).

أدى الفرط في تعبير TLR4 إلى انخفاض ملحوظ في حيوية الخلايا بعد العدوى بـ MP مقارنة بالخلايا الضابطة، بينما عكس الفرط في التعبير المتزامن لـ miR-93-5p هذا الانخفاض (الشكل 3G). كما أظهر قياس السيتوكينات الالتهابية أن الفرط في تعبير TLR4 زاد من مستويات الوسائط المحفزة للالتهاب، بينما خفف الفرط في تعبير miR-93-5p من هذه التغيرات حتى في وجود الفرط في تعبير TLR4 (الشكل 3H). وتشير هذه النتائج إلى أن miR-93-5p ينظم تعبير TLR4 سلبيًا ويخفف من التغيرات الخلوية المرتبطة بالعدوى بـ MP.

القيمة التشخيصية لـ miR-93-5p في التهاب الرئة الحاد (MPP) والتهاب الرئة الحاد المصحوب بإصابة في الجهاز الهضمي (MPP with DSI)
وصفت تقارير سابقة مشاركة TLR4 في أنسجة الرئة والقولون16. وبناءً على ذلك، تم تقييم الارتباط المحتمل بين miR-93-5p وإصابة الجهاز الهضمي في حالات MPP سريرياً. وكما هو موضح في الشكل 4A، انخفض تعبير miR-93-5p في مجموعة MPP+DSI مقارنة بمجموعة MPP.

تم تلخيص الخصائص الديموغرافية والدموية في الجدول 2. لم تُلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية في العمر أو الجنس بين المجموعات. ومع ذلك، كانت مدة الحمى واستخدام المضادات الحيوية أطول بشكل ملحوظ لدى المرضى الذين يعانون من عدوى تيار الدم المرتبطة بالقسطرة (DSI) المتزامنة (P < 0.05).

تم تقييم القيمة التشخيصية لـ miR-93-5p للتمييز بين حالات MPP المصابة بـ DSI والحالات غير المصابة بـ DSI باستخدام تحليل منحنى ROC. بلغت قيمة AUC 0.7866 (95% CI: 0.6889–0.8843) (الشكل 4B)، ببحساسية بلغت 85.71% ونوعية بلغت 57.45%.

حدد تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات أن انخفاض تعبير miR-93-5p، وطول مدة الحمى، والاستخدام الممتد للمضادات الحيوية هي عوامل مرتبطة بإصابة الجهاز الهضمي أثناء عدوى MP (الجدول 3; P < 0.05).

مخطط صندوقي يقارن تعبير miR-935-5p في الأصحاء مقابل مرضى MPP؛ منحنى ROC لدقة التشخيص.
الشكل 1: تعبير والقيمة التشخيصية لـ miR-93-5p في الضوابط الصحية (n = 60) والمرضى المصابين بـ MPP (n = 108). (A) انخفض تعبير MiR-93-5p لدى المرضى المصابين بـ MPP. (B) تحليل منحنى ROC لـ miR-93-5p. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

رسوم بيانية شريطية توضح التعبير النسبي لـ mRNA، وحيوية الخلايا، والعوامل الالتهابية (TNF-α, IL-6).
الشكل 2: التأثيرات الوظيفية لـ miR-93-5p في نموذج الخلايا المصابة بـ MP. (A) انخفض تعبير miR-93-5p في النموذج المصاب بـ MP. (B) انخفضت حيوية الخلايا في النموذج المصاب بـ MP. (C) ارتفعت مستويات TNF-α وIL-6 في النموذج المصاب بـ MP. (D) كفاءة ترانسفكشن محاكي miR-93-5p. (E) زادت حيوية الخلايا بعد الإفراط في تعبير miR-93-5p. (F) انخفضت مستويات TNF-α وIL-6 بعد الإفراط في تعبير miR-93-5p. n = 3. P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الرسوم البيانية الشريطية للتعبير الجيني؛ التفاعل بين TLR4 وmiR-93-5p؛ نتائج لوسيفيراز، والرنا المرسال (mRNA)، وحيوية الخلايا.
الشكل 3يستهدف MiR-93-5p بشكل مباشر TLR4. (أ) موقع الارتباط المتوقع بين miR-93-5p وTLR4. (ب) تعبير TLR4 في نموذج العدوى بـ MP. (ج) مقايسة مراسل لوسيفيراز المزدوج. (د) التنظيم السلبي لمستقبل TLR4 بواسطة miR-93-5p. (هـ) كفاءة الإفراط في تعبير TLR4. (و) تحليل لطخة ويسترن لبروتين IκBα. (ج) حيوية الخلايا. (هـ) مستويات TNF-α وIL-6. العدد = 3. P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مستويات تعبير miRNA، التحليل الإحصائي، منحنى ROC، الحساسية مقابل النوعية، البيانات التجريبية.
الشكل 4: تعبير والقيمة التشخيصية لـ miR-93-5p في المرضى المصابين بـ MPP (العدد = 60) والمرضى المصابين بـ MPP مع DSI (العدد = 48). (A) تعبير miR-93-5p في مجموعة MPP+DSI. (B) تحليل منحنى ROC لـ miR-93-5p. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

متغيرأصحاء (العدد = 60)MPP (العدد = 108)P
العمر (بالسنوات)6.81± 3.147.12 ± 3.550.559
الجنس (ذكر/أنثى)28/3249/590.872
خلايا الدم البيضاء ( × 109/لتر)7.27 ± 0.899.86 ± 1.36<0.001
البروتين التفاعلي C (ملجم/لتر)2.35 ± 0.1711.53 ± 2.01<0.001
النسبة المئوية الصافية %42.55 ± 5.6256.51 ± 15.40<0.001

الجدول 1: مقارنة الخصائص الديموغرافية ومعايير الدم الروتينية بين المجموعات الضابطة السليمة والمرضى المصابين بـ MPP. يلخص هذا الجدول الخصائص الديموغرافية والمعايير الدموية الروتينية للمجموعات الضابطة السليمة والمرضى المصابين بـ MPP، بما في ذلك العمر، والجنس، وWBC، ونسبة الخلايا المتعادلة، ونسبة الخلايا الحمضية، ونسبة الخلايا القاعدية، وCRP. كما يتم عرض المقارنات بين المجموعات وقيم P المقابلة لها.

متغيرMPP (العدد = 60)MPP+DSI (العدد = 48)P
العمر (سنوات)6.88 ± 3.877.42 ± 3.110.441
الجنس (ذكر/أنثى)31/2928/200.494
خلايا الدم البيضاء (× 10^9/لتر)8.9 ± 0.8911.05 ± 0.76<0.001
البروتين التفاعلي C (ملجم/لتر)10.94 ± 1.6212.27 ± 2.22<0.001
النسبة المئوية الصافية55.87 ± 14.7557.32 ± 16.290.629
مدة الحمى (يوم)4.60 ± 1.837.26 ± 1.04<0.001
وقت استخدام المضاد الحيوي (باليوم)4.65 ± 1.1476.29 ± 0.771<0.001

الجدول 2: مقارنة الخصائص الديموغرافية ومعايير الدم الروتينية بين المرضى المصابين بـ MPP والمرضى المصابين بـ MPP+DSI.تقارن هذه الجدول الخصائص الديموغرافية، والمعايير الدموية الروتينية، والخصائص السريرية ذات الصلة بين المرضى المصابين بـ MPP وحدها وأولئك المصابين بـ MPP المصحوب بـ DSI. كما يتم عرض المقارنات بين المجموعات وقيم P المقابلة لها.

المتغيرنسبة الأرجحية (OR)فاصل الثقة 95% (CI)القيمة الاحتمالية (P value)
الحد الأدنىالحد الأعلى
miR-93-5p (منخفض مقابل مرتفع)6.7021.48730.2110.013
العمر1.1260.2864.4370.866
الجنس1.0710.274.2480.923
مدة الحمى73.41615.018358.895<0.001
وقت استخدام المضادات الحيوية7.9211.87733.4210.005

جدول 3: تحليل الانحدار اللوجستي للأطفال المصابين بعدوى MP التي تعقدت بإصابة في الجهاز الهضمي. يعرض هذا الجدول نتائج تحليل الانحدار اللوجستي لتقييم العوامل المرتبطة بإصابة الجهاز الهضمي بين الأطفال المصابين بعدوى MP. ويتضمن التحليل نسبة الأرجحية (OR)، وفاصل الثقة 95% (95% CI)، وقيمة P لكل متغير.

الاختصارات: Baso%، نسبة الخلايا القاعدية؛ CI، فاصل الثقة؛ CRP، البروتين التفاعلي C؛ DSI، إصابة الجهاز الهضمي؛ Eos%، نسبة الخلايا الحمضية؛ IκBα، مثبط كابا B ألفا؛ IL-6، إنترلوكين-6؛ MP، الميكوبلازما الرئوية Mycoplasma pneumoniae؛ MPP، الالتهاب الرئوي الناتج عن الميكوبلازما الرئوية؛ NC، ضابط سلبي؛ Net%، نسبة الخلايا المتعادلة؛ oe-TLR4، فرط تعبير TLR4؛ OR، نسبة الأرجحية؛ ROC، خاصية تشغيل المستقبِل؛ TLR4، مستقبل الشبيه بالتول 4؛ TNF-α، عامل نخر الورم-ألفا؛ WBC، عدد خلايا الدم البيضاء.

توافر البيانات:

تتوفر البيانات الرقمية الخام التي تستند إليها الأشكال والجداول على النحو التالي: الجدول التكميلي 1.

الجدول التكميلي 1: البيانات الرقمية الخام للأشكال والجداول. يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

على الرغم من اعتبار عدوى MP بشكل أساسي ممرضاً رئوياً، إلا أنها يمكن أن تسبب مضاعفات متنوعة خارج الرئة تؤثر على أنظمة أعضاء متعددة تتجاوز الرئتين19,20. وتشير الأدلة الناشئة إلى وجود تفاعل على طول محور الرئة والأمعاء، حيث تؤدي الوسائط الالتهابية التي يتم إفرازها أثناء الاعتلال الرئوي إلى اختلال توازن الفلورا المعوية21 والوظيفة المعوية22. ويسلط هذا التفاعل ثنائي الاتجاه الضوء على أهمية التقييم الشامل للمريض الذي يتناول كلاً من الأعراض التنفسية وصحة الجهاز الهضمي. وبناءً على ذلك، حظيت المؤشرات الحيوية في المصل الدوراني باهتمام متزايد كأدوات طفيفة التوغل ذات قيمة تشخيصية أو إنذارية محتملة23,24. وقد ظهرت الـ MiRNAs كمرشحات واعدة نظراً لاستقرارها وأدوارها في تنظيم مسارات إشارات الالتهاب المشاركة في إمراضية MP25,26,27. استكشفت هذه الدراسة بشكل منهجي دور والأهمية السريرية لـ miR-93-5p في حالات MPP لدى الأطفال، ولا سيما عندما تكون مصحوبة بإصابة في الجهاز الهضمي. وقد انخفضت مستويات miR-93-5p لدى الأطفال المصابين بـ MPP مقارنة بالمجموعات الضابطة السليمة، وانخفضت بشكل أكبر لدى أولئك الذين يعانون من إصابة في الجهاز الهضمي. وتشير هذه النتائج إلى دور محتمل لخلل تنظيم miR-93-5p في الاعتلال الرئوي وكمؤشر حيوي محتمل للمظاهر خارج الرئة.

أظهرت جزيئات miRNAs قيمة تشخيصية في حالات الالتهاب الرئوي الشديد، مع حساسية ونوعية ودقة تشخيصية إجمالية واعدة28,29. ومن الناحية السريرية، عانى الأطفال المصابون بالالتهاب الرئوي بالميكوبلازما (MPP) المصحوب بمضاعفات إصابة الجهاز الهضمي (DSI) من فترة حمى أطول وعلاج بالمضادات الحيوية ممتد مقارنة بأولئك الذين لم يعانوا من مضاعفات هضمية. وارتبطت المستويات المنخفضة من miR-93-5p بشكل مستقل بإصابة الجهاز الهضمي، إلى جانب هذه المعايير السريرية، في تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات. علاوة على ذلك، أظهر تحليل منحنى ROC أداءً تشخيصياً جيداً لـ miR-93-5p في المصل للتمييز بين مرضى MPP المصابين بـ DSI وأولئك غير المصابين بها. وبالتالي، فإن قياس miR-93-5p قد يوفر قيمة إضافية للتعرف المبكر وتصنيف المخاطر في عدوى MP لدى الأطفال.

فيما يتعلق بالأداء التشخيصي لـ miR-93-5p المتداول مقارنة بعلامات الالتهاب السريرية الروتينية، تشير النتائج إلى أن miR-93-5p قد يوفر قيمة تكميلية بدلاً من استبدال المؤشرات التقليدية. لا يزال كل من CRP والبروكالسيتونين (PCT) من المؤشرات الحيوية شائعة الاستخدام في الممارسة السريرية لتقييم شدة العدوى وتوجيه العلاج بالمضادات الحيوية، حيث أظهرت التحليلات التلوية أن PCT يتمتع بدقة تشخيصية أعلى قليلاً مقارنة بـ CRP في حالات الالتهاب الرئوي البكتيري30. ومع ذلك، فإن هذه المفاعلات في المرحلة الحادة غير نوعية إلى حد كبير لأنها تستجيب لمحفزات التهابية متنوعة، ولا يمكنها التمييز بشكل موثوق بين عدوى MP ومسببات الأمراض التنفسية الأخرى، أو عكس مخاطر المضاعفات خارج الرئة بشكل محدد. وفي المقابل، فإن miR-93-5p، باعتباره جزيئاً تنظيمياً مرتبطاً بإشارات TLR4/nuclear factor kappa B (NF-κB)، قد يوفر معلومات فيزيولوجية مرضية متميزة تكمل المؤشرات التقليدية. وقد أفادت التقارير بأن الارتباط بين miR-93-5p وCRP ضعيف نسبياً (Pearson r = 0.2698)، مما يشير إلى أن miR-93-5p قد يعكس جانباً مختلفاً من الاستجابة الالتهابية عن الاستجابة الجهازية في المرحلة الحادة.

أظهرت الأدلة الناشئة من النماذج الحيوانية أن عدوى Mycoplasma pneumoniae لا تسبب اعتلالات تنفسية فحسب، بل تؤدي أيضاً إلى إصابة الجهاز الهضمي عبر محور الرئة-الأمعاء الذي تتوسطه الفلورا المعوية31. وفي الفئران المصابة بـ MP، لوحظت إصابة مرضية في كل من الرئتين والقولون، إلى جانب تغيرات في تكوين ميكروبيوم الأمعاء، بما في ذلك انخفاض وفرة البكتيريا النافعة مثل Corynebacterium glutamicum وزيادة وفرة المسببات المرضية المحتملة مثل Lachnospiraceae NK4A136 group وEscherichia-Shigella، وصاحب ذلك ارتفاع في مستويات عديد السكاريد الشحمي (LPS) في محتويات القولون والدم32. كما أفيد بأن مادة Baicalin تخفف من التهاب الرئة وتنظم الفلورا المعوية في فئران MPP عبر مسار TLR4/NF-κB، مما يدعم مشاركة شلال التأشير هذا في التواصل المتبادل بين الرئة والأمعاء33. وتتسق هذه النتائج مع الاحتمال القائل بمشاركة تأشير NF-κB في محور miR-93-5p/TLR4 الذي تمت دراسته في البحث الحالي.

على المستوى الميكانيكي، لوحظ ارتفاع في تعبير TLR4، وهو وسيط رئيسي للمناعة الفطرية المرتبطة بالاستجابات المسببة للالتهابات34,35,36,37، أثناء العدوى بـ MP. وقد ترافق ارتفاع تعبير TLR4 مع زيادة مستويات السيتوكينات الالتهابية IL-6 وTNF-α وانخفاض حيوية الخلايا الظهارية. كما أدى الإفراط في تعبير miR-93-5p إلى كبح تعبير TLR4، وتخفيف إطلاق السيتوكينات الالتهابية، وتحسين بقاء الخلايا في ظل ظروف العدوى. وبناءً على ذلك، فإن انخفاض تعبير miR-93-5p لدى المرضى المصابين بـ MPP، وخاصة أولئك الذين يعانون من إصابات في الجهاز الهضمي، قد يكون مرتبطاً بزيادة إشارات الالتهاب التي يتوسطها TLR4 واستجابات التهابية جهازية أوسع. ولا تثبت النتائج الحالية تنشيط مسار NF-κB المصب، وذلك لعدم تقييم IκBα وp65 المفسفرين.

يجب الإقرار بعدة قيود في هذه الدراسة. أولاً، كانت هذه دراسة أحادية المركز مع حجم عينة صغير نسبياً، لا سيما بالنسبة للمجموعة الفرعية DSI، مما قد يحد من القوة الإحصائية وإمكانية تعميم النتائج. وهناك حاجة إلى التحقق الخارجي في مجموعات أكبر ومتعددة المراكز لتأكيد هذه النتائج وتحديد قيم قطع سريرية موثوقة. ثانياً، على الرغم من الكشف عن IκBα بواسطة لطخة ويسترن (Western blotting)، إلا أنه لم يتم إجراء تحقق شامل للمكونات الأخرى المصبة في مسار TLR4/NF-κB، بما في ذلك MyD88 وp-IκBα وp65. ومن شأن التحقق من هذه المكونات الإشارية على مستوى البروتين أن يعزز التفسير الميكانيكي. ثالثاً، يحول التصميم الرصدي دون الاستنتاج السببي؛ لذا يلزم إجراء تجارب فقدان واكتساب الوظيفة، بما في ذلك استخدام محاكيات miRNA أو المثبطات في المختبر (in vitro) أو في الجسم الحي (in vivo)، لتحديد ما إذا كان miR-93-5p يساهم بشكل مباشر في الإصابة الهضمية المرتبطة بـ MPP. رابعاً، أجريت التجارب المختبرية في خلايا A549 الظهارية الرئوية. ورغم أن هذا النموذج مناسب لتقييم التأثيرات المضادة للالتهابات لـ miR-93-5p في سياق رئوي، إلا أنه لا يمكنه نمذجة الأمراض المعدية المعوية بشكل مباشر. إن الارتباط المقترح بين إشارات miR-93-5p/TLR4 الرئوية والمظاهر الهضمية، والتي قد تكون بوساطة محور الرئة والأمعاء، تتطلب تحققاً مباشراً في نماذج الخلايا الظهارية المعوية، مثل خلايا Caco-2، وفي نماذج حيوانية في الجسم الحي لعدوى MP. وأخيراً، تظل التحديات التقنية المرتبطة بالكشف عن miRNA، بما في ذلك استقرار RNA واستراتيجيات التقييس، عوائق أمام التطبيق السريري الروتيني. ورغم هذه القيود، توفر النتائج أساساً للدراسات الميكانيكية المستقبلية وجهود التحقق واسعة النطاق.

في الختام، أدى زيادة تنظيم miR-93-5p إلى تخفيف الالتهاب الناجم عن MP في الخلايا الطلائية الرئوية من خلال تثبيط TLR4. ومن الناحية السريرية، ارتبط انخفاض مستويات miR-93-5p المتداولة في الدم بإصابة الجهاز الهضمي لدى الأطفال المصابين بـ MPP، مما يشير إلى فائدته المحتملة كعلامة حيوية مساعدة لتحديد المرضى المعرضين لخطر حدوث مضاعفات في الجهاز الهضمي.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عن عدم وجود تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خلايا A549 الظهارية السنخية البشريةATCC، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج CCL-185؛ معرف مورد الموارد RRID: CVCL_0023خط خلايا ظهارية سنخية بشرية مستخدم في نموذج MPP المختبري
جسم مضاد لـ GAPDHشركة هانغتشو شيان-تشي للتكنولوجيا البيولوجية (Hangzhou XianZhi Biological Technology)، الصينرقم الكتالوج AB-P-R001؛ معرف مورد البحث (RRID): AB_3096355الأجسام المضادة الأولية المستخدمة للكشف عن GAPDH كضابط تحميل في لطخة ويسترن
مضاد IκBα جسم مضادBeyotime، الصينرقم الكتالوج AG2741؛ معرف مورد البحث RRID: AB_3731391الأجسام المضادة الأولية المستخدمة في IκBα الكشف بواسطة لطخة ويسترن
ألبومين المصل البقري (BSA)Solarbio، الصينرقم الكتالوج A8012كاشف الحجب المستخدم أثناء تحليل لطخة ويسترن
جهاز طرد مركزيThermo Fisher Scientific، الولايات المتحدة الأمريكيةMultifuge X4 Pro؛ رقم الكتالوج 75016066؛ معرف مورد الأبحاث RRID: SCR_020726جهاز طرد مركزي مستخدم أثناء استزراع الخلايا وتحضير العينات
نظام التصوير بالتلألؤ الكيميائيتانون، الصين5200Multi; RRID: SCR_027114نظام تصوير يستخدم لتصور إشارات لطخة ويسترن ذات التألق الكيميائي
نظام مقايسة المراسل لـ لوسيفيراز المزدوجPromega، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج E1910تُستخدم لقياس أنشطة لوسيفيريز اليراعة (firefly) ولوسيفيريز رينيلا (Renilla)
مصل جنين البقر (FBS)Gibco، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج A5256701مكمّل المصل لوسط استزراع الخلايا
جسم مضاد من الماعز ضد IgG للأرانب، مقترن بـ HRPCell Signaling Technology، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج # 7074؛ معرف مورد البحث: AB_2099233جسم مضاد ثانوي مقترن بإنزيم HRP مستخدم في لطخة ويسترن
GraphPad Prismبرمجيات GraphPadالإصدار 10.1.2؛ رابط URL: https://www.graphpad.comالبرامج المستخدمة في التحليل الإحصائي والعرض البياني
طقم مقايسة الممتز المنسي (ELISA) للإنترلوكين-6 (IL-6)Elabscience، الصينرقم الكتالوج E-EL-H6156؛ معرف مورد المصدر RRID: AB_3665145طقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) المستخدم لتقدير كمية IL-6
كاشف ترانزفيكشن Lipofectamine 3000Thermo Fisher Scientificرقم الكتالوج L3000015كاشف قائم على الدهون مستخدم في ترانسفكشن خلايا A549
قارئ الأطباق الدقيقةTecan، سويسراInfinite M Plex؛ RRID: SCR_026522قارئ الأطباق الدقيقة المستخدم لقياس الكثافة الضوئية عند 490 نانومتر
محاكيات miR-93-5pRibobio، الصينرقم الكتالوج miR10000093-1-5محاكي miR-93-5p الاصطناعي المستخدم للإفراط في تعبير miR-93-5p
ضابط سلبي لـ miR-93-5pRibobio، الصينرقم الكتالوج miR1N0000001-1-5الضابط السلبي لعملية ترنسفكشن محاكي miR-93-5p
طقم تحليل MTT لتكاثر الخلايا والسمية الخلويةبيوتايم، الصينرقم الكتالوج C0009Sتُستخدم لتقييم حيوية الخلايا
السلالة القياسية *Mycoplasma pneumoniae* ATCC 15531ATCC، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج 15531سلالة M. pneumoniae القياسية المستخدمة لإنشاء نموذج العدوى
ناقل التعبير المراسلي للوسيفيراز pGL3-BasicPromega، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج E1751ناقل تقريري مستخدم في مقايسة التقرير المزدوج للوسيفريز
المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS)Solarbio، الصينرقم الكتالوج IP9212المحلول المنظم المستخدم في غسل الخلايا وتحضير العينات
ركيزة Pierce ECL للوسترن بلوتThermo Scientific، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج 32209الركيزة المضيئة كيميائياً المستخدمة في الكشف بتقنية لطخة ويسترن
وسط زراعة الكائنات الشبيهة بالالتهاب الرئوي الجنبي (PPLO)BD، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج 255420وسط استزراع المستخدم لبكتيريا M. pneumoniae
غشاء بولي فينيليدين فلورايد (PVDF)Bio-Radرقم الكتالوج 1620177الغشاء المستخدم لنقل البروتين أثناء عملية لطخة ويسترن (Western blotting)
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)شركة Takara Bio Inc.، اليابانرقم الكتالوج RR036Aمزيج رئيسي للنسخ العكسي المستخدم في تخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين المتمم (cDNA)
طقم كاشف PrimeScript RTشركة Takara Bio Inc.، اليابانرقم الكتالوج RR037Aطقم الكواشف المستخدم في النسخ العكسي
نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-time PCR)Applied Biosystems، الولايات المتحدة الأمريكيةنظام QuantStudio 3 للتفاعل البوليميرازي المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-Time PCR)؛ معرف المصدر RRID: SCR_020238جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي المستخدم لتحليل qPCR
وسط RPMI-1640Gibco، الولايات المتحدة الأمريكيةرقم الكتالوج 11875135وسط استزراع الخلايا المستخدم لخلايا A549
SPSSIBMالإصدار 27.0؛ معرف الموارد البحثية: SCR_016479البرامج المستخدمة في التحليل الإحصائي
ضابط سلبي للإفراط في تعبير TLR4Ribobio، الصينلا يوجد نص للترجمة.الضابط السلبي لتجارب فرط التعبير عن مستقبل TLR4
بلازميد التعبير المفرط لـ TLR4 ‏(oe-TLR4)Ribobio، الصينلا يوجد نص متاح للترجمة. يرجى تزويدي بالنص الذي ترغب في ترجمته.البلازميد المستخدم للإفراط في تعبير TLR4
كاشف TRIzolInvitrogen, Thermo Fisher Scientificرقم الكتالوج# 15596026الكاشف المستخدم لاستخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) الكلي
عامل نخر الورم-α (عامل نخر الورم-αطقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA Kit)Elabscience، الصينرقم الكتالوج E-EL-H0109؛ معرف مورد البحث RRID: AB_3665144طقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) المستخدم لتقدير كمية TNF-αα
مزيج SYBR qPCR الرئيسي الشاملشركة Takara Bio Inc.، اليابانرقم الكتالوج BL697Aالمزيج الرئيسي المستخدم في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي
نظام الرحلان الكهربائي للهلام الخاص ببصمة ويسترن (Western blot)Bio-Rad، الولايات المتحدة الأمريكيةميني-بروتيان تيترا سيل (Mini-PROTEAN Tetra Cell)؛ رقم الكتالوج 1658004نظام الرحلان الكهربائي المستخدم لفصل البروتينات

المراجع

  1. Yan C et al. Current status of Mycoplasma pneumoniae. infection in China. World Journal of Pediatrics. 2024;20(1):1-4.
  2. Poddighe D. Extra-pulmonary diseases related to Mycoplasma pneumoniae. in children: recent insights into the pathogenesis. Current Opinion in Rheumatology. 2018;30(4). doi:10.1097/BOR.0000000000000494.
  3. Schildgen O et al. Clinical manifestations in infants and children with Mycoplasma pneumoniae. infection. PLOS ONE. 2018;13(4). doi:10.1371/journal.pone.0195288.
  4. Li X et al. Intestinal necrosis due to nonocclusive mesenteric ischemia in a child with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia: a case report. BMC Infectious Diseases. 2025;25(1):1049.
  5. Ran B, Yang Z, Li M. METTL3-mediated miR-4534 maturation promotes IVDD progression by targeting the Sirt6-mediated Nrf2/HO-1 pathway. 2024;21(6):2795-2813.
  6. Du B et al. The lung-gut crosstalk in respiratory and inflammatory bowel disease. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2023;13. doi:10.3389/fcimb.2023.1218565.
  7. Jiang Y et al. Intestinal bacteria flora changes in patients with Mycoplasma pneumoniae pneumonia. with or without wheezing. Scientific Reports. 2022;12(1):5683.
  8. Lin L-J et al. The diagnostic value of serological studies in pediatric patients with acute Mycoplasma pneumoniae. infection. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 2020;53(2):351-356.
  9. Cui J et al. Integrated microfluidic cartridge for rapid and colorimetric detection of Mycoplasma pneumoniae. Microchimica Acta. 2025;192(9):559.
  10. Wang X, Starodubtseva MN, Kapron CM, et al. Cadmium, von Willebrand factor and vascular aging. NPJ Aging. 2023;9(1):11.
  11. Chen J. Efficacy of the PDCA cyclic care model in improving lung function and speed of recovery in children with Mycoplasma pneumonia. American Journal of Translational Research. 2025;17(3):1792-1802.
  12. Li Y et al. Clinical significance of serum miR-98-5p in children with Mycoplasma pneumoniae. infection complicated with digestive system damage. Immunobiology. 2025;230(4):153101.
  13. Zhang Y, Wu ZM. LINC02605 involved in paediatric pneumonia complicated with diarrhoea via miR-539-5p/CXCL1 axis. European Journal of Clinical Investigation. 2024;54(9). doi:10.1111/eci.14234.
  14. Gao H et al. Knockdown of lncRNA MEG3 protects against sepsis-induced acute lung injury in mice through miR-93-5p-dependent inhibition of NF-κB signaling pathway. Pathology - Research and Practice. 2022;239:154142.
  15. Gao H et al. MicroRNA-93 contributes to the suppression of lung inflammatory responses in LPS-induced acute lung injury in mice via the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Int J Mol Med. 2020;46(2):561-570.
  16. Wedgwood S et al. Intestinal dysbiosis and the developing lung: the role of Toll-like receptor 4 in the gut-lung axis. Frontiers in Immunology. 2020;11. doi:10.3389/fimmu.2020.00357.
  17. Zou N et al. Transcutaneous auricular vagus nerve stimulation as a novel therapy connecting the central and peripheral systems: a review. Int J Surg. 2024;110(8):4993-5006.
  18. Chen Y et al. Combination of azithromycin and methylprednisolone alleviates Mycoplasma pneumoniae.-induced pneumonia by regulating miR-499a-5p/STAT3 axis. Exp Ther Med. 2022;24(3):578.
  19. Poddighe D. Mycoplasma pneumoniae.-related extra-pulmonary diseases and antimicrobial therapy. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 2020;53(1):188-189.
  20. Meyer Sauteur PM, Ramien ML, Theiler M. Mycoplasma pneumoniae.: extrapulmonary manifestations in children with focus on mucocutaneous disease. The Pediatric Infectious Disease Journal. 9900. doi:10.1097/INF.0000000000004946.
  21. Liu C et al. Mast cells participate in regulation of lung-gut axis during Staphylococcus aureus pneumonia. Cell Proliferation. 2019;52(2).
  22. Guo J et al. People are an organic unity: gut-lung axis and pneumonia. Heliyon. 2024;10(6).
  23. Fan F et al. Clinical characteristics and serum inflammatory markers of community-acquired mycoplasma pneumonia in children. The Clinical Respiratory Journal. 2023;17(7):607-617.
  24. Ding L, Jiang Y. Biomarkers associated with the diagnosis and prognosis of Mycoplasma pneumoniae. pneumonia in children: a review. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2025;15. doi:10.3389/fcimb.2025.1552144.
  25. Peng W et al. Comparative analysis of the efficacy and safety of different methods for injecting polidocanol in the treatment of venous malformations. Phlebology. 2024;39(9):629-635.
  26. Wang J et al. Peripheral blood microR-146a and microR-29c expression in children with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia and its clinical value. Italian Journal of Pediatrics. 2023;49(1):119.
  27. Chu C et al. High expression of miR-222-3p in children with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia. Italian Journal of Pediatrics. 2019;45(1):163.
  28. Powell BH, Witwer KW, Meffert MK. Cellular miRNAs and viruses: trends in miRNA sequestering and target de-repression. J Virol. 2025;99(7).
  29. Gan T, Yu J, He J. miRNA, lncRNA and circRNA: targeted molecules with therapeutic promises in Mycoplasma pneumoniae. infection. Arch Microbiol. 2023;205(8):293.
  30. Im PK et al. Hyperuricemia, gout and the associated comorbidities in China: findings from a prospective study of 0.5 million adults. The Lancet Regional Health – Western Pacific. 2025;58. doi:10.1016/j.lanwpc.2025.101572.
  31. Hu J et al. Insight into the pathogenic mechanism of Mycoplasma pneumoniae. Curr Microbiol. 2022;80(1):14.
  32. Li B et al. Cecropin AD ameliorates pneumonia and intestinal injury in mice with Mycoplasma pneumoniae. by mediating gut microbiota. BMC Vet Res. 2025;21(1):39.
  33. Song D et al. The mechanism of baicalin in improving pulmonary inflammatory response and injury and regulating intestinal flora in Mycoplasma pneumoniae pneumoni.a mice. Cellular Signalling. 2025;126:111530.
  34. Coutinho-Wolino KS et al. Bioactive compounds modulating Toll-like 4 receptor (TLR4)-mediated inflammation: pathways involved and future perspectives. Nutrition Research. 2022;107:96-116.
  35. Thorburn AN et al. TLR2, TLR4 and MyD88 mediate allergic airway disease (AAD) and Streptococcus pneumoniae-induced suppression of AAD. PLOS ONE. 2016;11(6).
  36. Tang J et al. Effect of gut microbiota on LPS-induced acute lung injury by regulating the TLR4/NF-kB signaling pathway. International Immunopharmacology. 2021;91:107272.
  37. Jia H et al. Pulmonary epithelial TLR4 activation leads to lung injury in neonatal necrotizing enterocolitis. The Journal of Immunology. 2016;197(3):859-871.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الالتهاب الرئوي بالميكوبلازما الرئوية لدى الأطفالالمؤشر الحيوي التشخيصيتفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسيحيوية الخليةالسيتوكينات المحفزة للالتهابتعبير TLR4تحليل منحنى خصائص التشغيل للمستقبل
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.