مقالة بحثية

يعمل تعبير مير-488-3ب (Mir-488-3p) في المصل كمؤشر حيوي تشخيصي غير باضع لدى المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي

27 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72346

⸱

أغسطس 28, 2026

 , 
1Department of Medical Laboratory, Hefei BOE Hospital

في هذه المقالة

ملخص

قد يعمل miR-488-3p كعلامة تشخيصية جديدة غير جراحية لمرض RA. يقوم miR-488-3p بتنظيم الوظيفة البيولوجية للخلايا الزليلية عبر ROCK1. وقد أظهر ارتباطاً سلبياً ملحوظاً مع شدة المرض لدى مرضى RA.

الملخص

لا يزال تشخيص التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) يشكل تحدياً بسبب محدودية المؤشرات الحيوية الحالية. كان الغرض من هذه الدراسة هو استقصاء إمكانية استخدام miR-488-3p في المصل كمؤشر حيوي لالتهاب المفاصل الروماتويدي والكشف عن آلية عمله المحتملة. شملت الدراسة 135 مريضاً بالتهاب المفاصل الروماتويدي، و130 مريضاً بالفصال العظمي (OA)، و125 شخصاً من الأصحاء كمجموعة ضابطة. تم فحص مستويات تعبير miR-488-3p باستخدام تقنية RT-qPCR. كما حُللت آلية العمل من خلال الاختبارات الوظيفية (CCK-8، وقياس التدفق الخلوي، وELISA) وتجارب التحقق من الأهداف (جين مراسل لوسيفيريز، وRIP). وكانت مستويات تعبير miR-488-3p في المصل أقل بكثير لدى مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي مقارنة بمرضى الفصال العظمي (OA) والأصحاء (p < 0.001). وأظهر تحليل منحنى ROC أن miR-488-3p يتمتع بدقة تشخيصية عالية في تمييز التهاب المفاصل الروماتويدي عن الأصحاء ومرضى الفصال العظمي. وارتبط miR-488-3p ارتباطاً عكسياً مع معدل ترسب الكريات الحمراء (ESR)، والبروتين التفاعلي C (CRP)، والعامل الروماتويدي (RF)، ودرجات DAS28. وكشف التحقق الوظيفي أن الإفراط في تعبير miR-488-3p ثبط تكاثر والاستجابة الالتهابية للخلايا الزليلية مع تحفيز الموت الخلوي المبرمج. وأظهرت الدراسات الميكانيكية أن miR-488-3p يمكن أن يستهدف مباشرة بروتين كيناز 1 المحتوي على ملف لولبي مرتبط بـ Rho (ROCK1)، والذي يتوسط تأثيراته الوقائية. ويعد miR-488-3p في المصل واعداً كمؤشر تشخيصي غير جراحي جديد لالتهاب المفاصل الروماتويدي ويوفر الحماية للخلايا الزليلية من الإصابة.

المقدمة

يعد التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) مرضاً شائعاً من أمراض المناعة الذاتية، ويتميز بالتهاب الغشاء الزلالي وتآكل المفاصل وتدميرها1,2. ويبلغ معدل الانتشار العالمي لهذا المرض حوالي 0.5%–1%3، مما يؤثر بشكل خطير على جودة حياة المرضى وقدرتهم على العمل. يتسم المرض ببداية خفية، وغالباً ما تكون الأعراض المبكرة غير نمطية ويسهل تشخيصها بشكل خاطئ أو إغفالها4. ومع تطور المرض، يمكن أن يؤدي إلى تشوه المفاصل وفقدان الوظيفة، بل وقد يزيد من خطر الإصابة بمضاعفات مثل أمراض القلب والأوعية الدموية5، مما يضع عبئاً كبيراً على المرضى وعائلاتهم وأنظمة الرعاية الصحية.

في الوقت الحالي، يتطلب تشخيص التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) مزيجاً من الأعراض السريرية، والعلامات، والاختبارات المعملية، وتقييم التصوير الشعاعي6. وتشمل المؤشرات المعملية الشائعة الاستخدام سرعة ترسيب كريات الدم الحمراء (ESR) والبروتين التفاعلي C (CRP)، وهما علامتان غير نوعيتين للالتهاب الجهازي، بالإضافة إلى العامل الروماتويدي (RF) والأجسام المضادة للببتيد السيتروليني الحلقي (anti-CCP)، واللذين يمثلان مؤشرات حيوية مصلية مهمة لالتهاب المفاصل الروماتويدي7,8. ومع ذلك، فإن هذه المؤشرات الحيوية التقليدية تعاني من بعض القصور؛ حيث يمكن أن يكون RF إيجابياً لدى بعض الأشخاص الأصحاء والمرضى الذين يعانون من أمراض مناعية ذاتية أخرى (معدل إيجابية كاذبة بنسبة 5% تقريباً)، أما anti-CCP، فعلى الرغم من نوعيته العالية (>95%)، إلا أن حساسيته محدودة في المراحل المبكرة من المرض (حوالي 60–70%)4,9، كما يظل بعض مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي سلبيي المصل10. لذلك، من المهم إيجاد مؤشرات حيوية أكثر حساسية ونوعية للتشخيص المبكر، ومراقبة المرض، وتقييم مآل التهاب المفاصل الروماتويدي11.

تعد جزيئات الـ MicroRNAs (miRNAs) مجموعة من جزيئات RNA التنظيمية الداخلية غير المشفرة، والتي يتراوح طولها تقريباً بين 22–25 قاعدة12,13. وقد وُجد أن الـ miRNAs تعمل كمنظمات رئيسية في تطور مجموعة متنوعة من الأمراض، ويرتبط تعبيرها غير الطبيعي ارتباطاً وثيقاً بالإمراضية13,14,15، مما يجعل الـ miRNAs مؤشرات حيوية واعدة لتشخيص الأمراض والمراقبة العلاجية. وفي السنوات القليلة الماضية، حظي دور الـ miRNAs في مرض التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) باهتمام متزايد16. وقد أظهرت الدراسات أن العديد من الـ miRNAs ترتبط بتعبير غير منظم (على سبيل المثال، miR-146a و miR-155، وغيرها) في المصل، والأنسجة الزليلية، والخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMCs) لدى مرضى RA17,18,19. وتساهم هذه الـ miRNAs في إمراضية RA من خلال تنظيم إنتاج السيتوكينات الالتهابية، وتحفيز تكاثر وغزو الخلايا الزليلية، والتأثير على تمايز ناقضات العظم20. ومن بين هذه الجزيئات، يقع miR-488 في منطقة الكروموسوم البشري 1q25.221، وقد أكدت الدراسات السابقة تأثيراته الواقية للأعصاب: حيث يلعب دوراً تنظيمياً في تطور الأورام الدبقية22 والأورام العصوية23، ومن الملاحظ أن miR-488-3p يحفز الموت الخلوي المبرمج للخلايا الغضروفية المصابة بالالتهاب في حالات الفصال العظمي (OA)24. وبالرغم من أن OA و RA هما مرضان مختلفان يصيبان المفاصل، إلا أنهما يشتركان في آليات عامة في العمليات المرضية للالتهاب الزليلي وتدمير الغضاريف25. وقد افترضنا أن miR-488-3p قد يلعب دوراً في RA من خلال تنظيم مسارات مستهدفة مماثلة. ومع ذلك، فإن الدور المحدد والآليات المحتملة لـ miR-488-3p في RA لم يتم توضيحها بعد.

بحثت هذه الدراسة في التغيرات في مستويات تعبير miR-488-3p في المصل لدى مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) وعلاقته بنشاط المرض والمؤشرات السريرية، وذلك بهدف تقييم قيمته المحتملة كعلامة تشخيصية غير جراحية للالتهاب المفاصل الروماتويدي. تقدم هذه الدراسة رؤية جديدة حول الفحص المبكر والتنبؤ بتطور المرض في حالات التهاب المفاصل الروماتويدي، مما يساهم في تحسين الإنذار المرضي للمصابين بهذا المرض.

البروتوكول

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى Hefei BOE (رقم الموافقة 2021–1)، وتم الحصول على موافقة كتابية مستنيرة من جميع المشاركين قبل تسجيلهم.

المرضى والعينات

شملت هذه الدراسة 135 مريضًا مصابًا بالتهاب المفاصل الروماتويدي (تم تشخيصهم وفقًا لمعايير تصنيف ACR/EULAR لعام 2010) من قسم الروماتيزم والمناعة في مستشفى Hefei BOE، و130 مريضًا مصابًا بالفصال العظمي من قسم جراحة العظام (تم تشخيصهم وفقًا لمعايير تشخيص الفصال العظمي الصادرة عن الجمعية الطبية الصينية لعام 2018)، و125 شخصًا سليمًا من مجموعات الضبط المتطابقة من حيث العمر والجنس من مركز الفحص الطبي في المستشفى نفسه. تراوحت أعمار المشاركين بين 30 و80 عامًا. وتم التأكد من خلو مجموعات الضبط السليمة من الأمراض المناعية الذاتية، واضطرابات المفاصل، والعدوى الحادة من خلال مراجعة شاملة للتاريخ المرضي، والفحص البدني، والاختبارات المختبرية. وقد استُبعد المشاركون في حال وجود أمراض مناعية ذاتية مصاحبة، أو تاريخ من الإصابة بالعدوى أو الصدمات خلال الأشهر الثلاثة السابقة، أو الأورام الخبيثة، أو في حالة الحمل أو الرضاعة.

أخذ العينات والتحضير

جُمِعت عينات دم وريدي على الريق من جميع المشاركين في الدراسة. وبعد ترك العينات للتجلط في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 min، عُزلت عينات المصل عن طريق الطرد المركزي بسرعة 1500 × g لمدة 15 min. ثم حُفظ المصل في درجة حرارة -80°C حتى إجراء التحاليل اللاحقة.

الكشف عن المؤشرات السريرية والمصلية

لتقييم حالة المرض والنشاط الالتهابي بشكل شامل، تم قياس المؤشرات الحيوية السريرية والمصليّة باستخدام طرق مختبرية سريرية قياسية. تم قياس سرعة ترسب الدم (ESR) باستخدام طريقة ويسترغرين (Westergren) لتقييم الالتهاب الجهازِي غير النوعي. كما تم تقدير كمية البروتين التفاعلي C (CRP) باستخدام مقايسة العكارة المناعية (القيمة المرجعية الطبيعية: <10 mg/L) لتقييم الاستجابة الالتهابية في المرحلة الحادة. وتم قياس العامل الروماتويدي (RF) باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) بقيمة مرجعية طبيعية ≤20 IU/mL. كما تم قياس الأجسام المضادة لـ CCP (Anti-CCP antibodies) باستخدام مقايسة ELISA من الجيل الثاني لتوفير دليل مصلي لتشخيص التهاب المفاصل الروماتويدي (RA).

خطوط الخلايا وزراعتها

تمت زراعة الخلايا السينوفية الشبيهة بالأرومات الليفية البشرية المصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي (HFLS-RA) في وسط ديلبيكو المعدل (DMEM) المكمل بـ 10% مصل جنين البقر (FBS) و1% بنسيلين-ستريبتومايسين. حُفظت الخلايا في حضانة عند درجة حرارة 37 °C مع 5% CO₂، واستُخدمت الخلايا التي تتراوح ممراتها بين الثالث والسادس في جميع التجارب.

استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي باستخدام النسخ العكسي (quantitative real-time RT-PCR)

تم استخلاص RNA الكلي من عينات المصل باستخدام كاشف لاستخلاص RNA. وأُجري النسخ العكسي باستخدام طقم تخليق الشريط الأول لـ miRNA الخاص بـ miRNAs، وطقم نسخ عكسي للجينات المستهدفة من RNA المرسال (mRNA) وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. كما أُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR) باستخدام نظام PCR في الوقت الحقيقي مع مزيج رئيسي (master mix) لـ PCR قائم على SYBR Green. تم ضبط برنامج الدورة الحرارية على 95 °C لمرحلة ما قبل المسخ لمدة 30 s؛ تليها 40 دورة تضخيم (مسخ عند 95 °C لمدة 5 s، وارتباط/تطويل عند 60 °C لمدة 30 s). تم تحليل كل عينة في ثلاث مكررات. واستُخدم RNA النووي الصغير U6 (U6 snRNA) وإنزيم جليسيرالدهيد-3-فوسفات ديهيدروجيناز (GAPDH) كجينات مرجعية داخلية لتقييس miRNA وmRNA على التوالي. وقد لُخصت تسلسلات البادئات في الجدول التكميلي 1. وحُسبت مستويات التعبير النسبي لـ miR-488-3p وجيناته المستهدفة باستخدام طريقة 2−ΔΔCt. كما تم تحليل التغيرات في مستويات mRNA للجينات المستهدفة بعد الإفراط في التعبير عن miR-488-3p أو تثبيطه للتحقق من علاقاتها التنظيمية.

ترصيف الخلايا

تم استزراع خلايا HFLS-RA في أطباق ذات 6 آبار بكثافة 5 × 105 خلية/بئر. وأُجريت عملية عفن الخلايا باستخدام كاشف عفن يعتمد على الليبوزومات وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. شملت مجموعات العفن مجموعات عفن فردي ومجموعات عفن مشترك. كانت مجموعات العفن الفردي هي: 1) المجموعة الضابطة—خلايا غير معفنة؛ 2) المجموعة الضابطة السلبية للمحاكي (NC)—خلايا معفنة بالضابط السلبي لمحاكي miR-488-3p؛ 3) محاكي miR-488-3p—خلايا معفنة بمحاكي miR-488-3p؛ 4) المجموعة الضابطة السلبية للمثبط (NC)—خلايا معفنة بالضابط السلبي لمثبط miR-488-3p؛ 5) مثبط miR-488-3p—خلايا معفنة بمثبط miR-488-3p. أما مجموعات العفن المشترك فكانت: 1) محاكي miR-488-3p + الضابط السلبي للإفراط في التعبير (oe-NC)—خلايا معفنة مشتركاً بمحاكي miR-488-3p والضابط السلبي لناقلات الإفراط في التعبير عن ROCK1؛ 2) محاكي miR-488-3p + oe-ROCK1—خلايا معفنة مشتركاً بمحاكي miR-488-3p وناقلات الإفراط في التعبير عن ROCK1. وقد لُخصت جميع تسلسلات العفن في الجدول التكميلي 1. تم إنشاء ناقل الإفراط في التعبير عن ROCK1 عن طريق استنساخ منطقة التسلسل المشفّر (CDS) في بلازميد pcDNA 3.1. وأصبحت الخلايا المعفنة جاهزة للتجارب التالية بعد 48 h من عملية العفن.

مقايسة الوظيفة الخلوية

اختبار تكاثر الخلايا (طقم عد الخلايا-8 [CCK-8]): تم استزراع خلايا HFLS-RA المنقولة في أطباق ذات 96 بئراً بكثافة 5 × 103 خلية/بئر، مع ثلاثة آبار مكررة لكل مجموعة. وعند الساعات 0 و24 و48 و72 بعد عملية النقل، أضيف 10 µL من محلول CCK-8 إلى كل بئر، تلتها عملية تحضين عند 37 °C لمدة 2 h. وقيس الامتصاص الضوئي عند 450 nm (طول موجة الكشف) و630 nm (طول موجة مرجعي) باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة. وحُسب معدل التكاثر النسبي باستخدام الساعة 0 كخط أساس.

الكشف عن الموت الخلوي المبرمج (قياس التدفق الخلوي): تم تقييم الموت الخلوي المبرمج عن طريق التحليل باستخدام مقايسة الموت الخلوي المبرمج بـ Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/propidium iodide (PI). تم ترانسفكشن الخلايا بالبلازميدات المناسبة ثم جُمعت بعد عملية التريبسين (trypsinization). وقد تم تحديد معدل الموت الخلوي المبرمج بواسطة قياس التدفق الخلوي.

مقايسة العوامل الالتهابية (مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم [ELISA]): تم استزراع خلايا HFLS-RA في أطباق ذات 24 بئراً، ثم تم إجراء عملية ترنسفكشن (transfection) لها باستخدام miR-488-3p mimic، أو miR-488-3p inhibitor الموضحين، أو الضوابط السلبية المقابلة لها لمدة 48 h. وتم تقدير تركيزات إنترلوكين-6 (IL-6)، وعامل نخر الورم-ألفا (TNF-α)، وإنترلوكين-1 بيتا (IL-1β) في السوائل الطافية لمزرعة الخلايا باستخدام أطقم ELISA.

التحقق من صحة الهدف

التنبؤ بالهدف: تُنبئ قاعدة بيانات TargetScan بأن ROCK1 يمثل هدفاً في المصب لـ miR-488-3p.26مواقع الارتباط المتوقعة بين miR-488-3p و... ROCK1 3′- المنطقة غير المترجمة (3′المنطقة غير المترجمة (UTR) كما تم تحديدها أيضاً.

مقايسة الجين المراسل ثنائي اللوسيفيراز: تم استنساخ المنطقة 3′UTR من النوع البري أو الطافر لـ ROCK1 في بلازميد pGL3. وتظهر مواقع الارتباط والمتغيرات المتوقعة في الشكل 4. وقد تم إجراء عفن مشترك لخلايا HEK- 293T باستخدام محاكي miR-488-3p أو مثبط له مع النواقل التي تم بناؤها27. وقيس نشاط اللوسيفيراز بعد 48 h من عملية العفن باستخدام محاكي miR-488-3p أو مثبط له.

الترسيب المناعي للحمض النووي الريبي (RIP): تم تحضين خلايا HFLS-RA مع جسم مضاد لـ Argonaute 2 (Ago2) (RRID: AB_2882071، بتخفيف 1:200) أو جسم مضاد ضابط من immunoglobulin G (IgG) (RRID: AB_2819160، بتخفيف 1:5000)، يليه استخلاص الحمض النووي الريبي وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) لتقدير إثراء mRNA الخاص بـ ROCK1 وفقاً لما تم وصفه سابقاً.

التحليل الإحصائي

تم تحليل الدراسة إحصائياً باستخدام برنامج SPSS 23.0 (RRID: SCR_002865) وبرنامج GraphPad Prism 9.0 (RRID: SCR_002798). وعُبِّر عن بيانات القياس في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (SD). أُجريت جميع التجارب باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية، وتم تحليل كل مكرر بيولوجي في ثلاث نسخ. وقد أُرفقت البيانات الخام في المواد التكميلية. وقُيمت البيانات باستخدام مخطط الاحتمال الطبيعي (P-P) قبل إجراء الاختبارات الإحصائية البارامترية. استُخدم اختبار t للعينات المستقلة لمقارنة المتغيرات الأساسية المستمرة (مثل العمر، ومؤشر كتلة الجسم [BMI]، وغيرها)، بينما استُخدم اختبار مربع كاي للمتغيرات الفئوية (مثل الجنس، وغيرها). وقورنت مستويات التعبير الجيني باستخدام اختبار t للعينات المستقلة. كما حُللت التغيرات في تكاثر الخلايا عند نقاط زمنية مختلفة باستخدام تحليل التباين للقياسات المتكررة (ANOVA)، في حين استُخدم تحليل التباين أحادي الاتجاه لمقارنة معدلات الموت الخلوي المبرمج التي تم تحديدها عن طريق قياس التدفق الخلوي. وأُجري تحليل الارتباط باستخدام معامل سبيرمان (للمتغيرات التي لا تتبع التوزيع الطبيعي) ومعامل بيرسون (للمتغيرات التي تتبع التوزيع الطبيعي). وقُيم الأداء التشخيصي باستخدام تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC). كما حُددت قيمة القطع المثلى، والحساسية، والنوعية باستخدام مؤشر يودن الأقصى. كانت جميع الاختبارات الإحصائية ثنائية الطرف، واعتبرت قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

الخصائص الأساسية للمشاركين في الدراسة

شملت هذه الدراسة 125 شخصاً من الأصحاء كمجموعة ضابطة، و130 مريضاً بمرض OA، و135 مريضاً بمرض RA لإجراء تحليل منهجي (الجدول 1). لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في الخصائص الأساسية للمجموعات الثلاث من حيث العمر (p = 0.191)، ونسبة الجنس (p = 0.203)، ومؤشر BMI (p = 0.562)، مما ضمن قابلية المقارنة بين مجتمع الدراسة. وفيما يتعلق بخصائص المرض، كانت مستويات ESR (82.63 ± 40.32 مقابل 18.39 ± 6.38 mm/h، p < 0.001) ومستويات CRP (56.33 ± 38.07 مقابل 10.54 ± 4.98 mg/L، p < 0.001) في مجموعة RA أعلى بكثير منها في مجموعة OA، مما يعكس مستوى الالتهاب الجهازي. وفي الوقت ذاته، كان RF، وهو مؤشر مصلِي مرتبط بمرض RA، إيجابياً لدى 70.37% (95/135)، مع تركيز مصلي أعلى بكثير (144.13 ± 81.05 مقابل 5.10 ± 1.37 IU/mL، p < 0.001)؛ كما بلغت نسبة إيجابية anti-CCP لدى مرضى RA نحو 56.30% (76/135)، مع درجة DAS28 بلغت 4.12 ± 1.36.

خصائص التعبير والقيمة التشخيصية لـ miR-488-3p لدى مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)

انخفضت مستويات تعبير miR-488-3p في المصل بشكل ملحوظ لدى مرضى RA مقارنة بمرضى OA والمجموعات الضابطة السليمة (p < 0.0001، الشكل 1A). وأظهر تحليل منحنى ROC أن miR-488-3p يتمتع بدقة تشخيصية عالية في التمييز بين RA وOA والمجموعات الضابطة السليمة: ففي التمييز بين RA والمجموعات الضابطة السليمة، بلغت قيمة AUC ‏0.931 (95% CI: 0.896–0.967)، وحساسية قدرها 96.15% (95% CI: 91.31%–98.35%) ونوعية قدرها 80.95% (95% CI: 73.22%–86.85%، p < 0.001، الشكل 1B)؛ وعند التمييز بين مرضى RA ومرضى OA، كانت قيمة AUC ‏0.800 (95% CI: 0.747–0.854)، مع حساسية قدرها 85.93% (95% CI: 79.06%–90.80%) ونوعية قدرها 66.15% (95% CI: 57.66%–73.72%، p < 0.001، الشكل 1C). كما حدد تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات أن miR-488-3p يمثل عاملاً مستقلاً مرتبطاً بخطر الإصابة بـ RA (OR = 0.166، 95% CI: 0.097–0.284؛ الجدول 2).

تحليل الارتباط بين miR-488-3p والمؤشرات السريرية لمرض التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)

ارتبطت مستويات تعبير miR-488-3p في المصل ارتباطاً عكسياً معنوياً بالمؤشرات السريرية الرئيسية لالتهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، بما في ذلك ESR وCRP وRF وDAS28 (جميع قيم p < 0.001؛ الجدول 3). وتحديداً، ارتبط miR-488-3p ارتباطاً عكسياً مع ESR (r = −0.718)، وCRP (r = −0.726)، وRF (r = −0.805)، ودرجة DAS28 (r = −0.836) (الجدول 3).

يؤدي الإفراط في تعبير miR-488-3p إلى تثبيط تكاثر الخلايا والاستجابات الالتهابية وتحفيز الموت الخلوي المبرمج في خلايا HFLS-RA

لبحث تأثير miR-488-3p على وظيفة HFLS-RA، قمنا بتعديل تعبيره عن طريق عفن (transfection) باستخدام المحاكيات والمثبطات. وأكد تحليل RT-qPCR أن مستوى تعبير miR-488-3p كان أعلى بكثير في مجموعة محاكي miR-488-3p مقارنة بمجموعة الضبط (p = 0.0001)، بينما كان مستوى التعبير في مجموعة مثبط miR-488-3p أقل بكثير (p = 0.0003، الشكل 2A). وأظهر مقايسة CCK-8 أن الإفراط في تعبير miR-488-3p ثبط تكاثر الخلايا، والذي كان أقل بكثير مما هو عليه في مجموعة الضبط عند 24 h و48 h و72 h (p = 0.0208، p < 0.0001، p = 0.0036)، بينما أدى تثبيط تعبير miR-488-3p إلى زيادة تكاثر الخلايا بشكل ملحوظ (الشكل 2B). كما أظهر قياس التدفق الخلوي (Flow cytometry) أن الإفراط في تعبير miR-488-3p عزز بشكل ملحوظ من عملية الموت الخلوي المبرمج (apoptosis) (p = 0.0033، الشكل 2C).

قمنا بعد ذلك بإجراء تحليل ELISA لاستقصاء تأثير زيادة تعبير miR-488-3p على مستويات السيتوكينات الالتهابية. وأظهرت النتائج أنه عند زيادة تعبير miR-488-3p، انخفضت مستويات السيتوكينات الالتهابية (IL-6 و TNF-α و IL-1β) بشكل ملحوظ (p < 0.0001، الشكل 3A-C)، بينما أدى تثبيط تعبير miR-488-3p إلى إحداث تأثير عكسي. وقد تم التحقق من هذه التأثيرات التنظيمية الملحوظة في جميع التجارب الثلاث المكررة بيولوجياً بشكل مستقل، ولم تظهر الضوابط السلبية أي تغيرات ذات دلالة إحصائية (p > 0.05).

ينظم MiR-488-3p تعبير جزيئات ROCK1

لتوضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء دور miR-488-3p في تطور مرض التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، استكشفنا الأهداف النهائية لـ miR-488-3p. وأظهرت تحليلات المعلوماتية الحيوية أنه من المتوقع أن يرتبط miR-488-3p بمنطقة 3'UTR لـ ROCK1 (الشكل 4A). وأكد اختبار مراسل اللوسيفيراز المزدوج أن نشاط اللوسيفيراز انخفض بشكل ملحوظ عند التعداء المشترك لـ ROCK1 3'UTR من النوع البري مع محاكيات miR-488-3p (p < 0.0001)، كما ارتفع نشاط اللوسيفيراز بشكل ملحوظ عند تثبيط تعبير miR-488-3p (p < 0.0001)؛ في حين لم يحدث تغيير ملحوظ في هذا التأثير التنظيمي بعد طفرة موقع الارتباط (الشكل 4B). وعززت تجارب الترسيب المناعي للـ RNA (RIP) هذه العلاقة التنظيمية، حيث أظهرت أن مستوى تعبير mRNA لـ ROCK1 كان مرتفعاً بشكل ملحوظ في المعقدات المخصبة بالأجسام المضادة لـ Ago2 مقارنة بضوابط IgG (p < 0.0001، الشكل 4C).

بالإضافة إلى ذلك، أظهر ROCK1 في العينات السريرية نمط تعبير معاكس لنمط miR-488-3p، حيث لوحظ ارتفاع معنوي في تعبير ROCK1 مقارنة بكل من مرضى OA والمجموعات الضابطة السليمة (الشكل 4D). وفي خلايا HFLS-RA، كشف تحليل RT-qPCR أن الإفراط في تعبير miR-488-3p أدى إلى انخفاض معنوي في تعبير ROCK1 (p = 0.0093)، بينما أدى تثبيط miR-488-3p إلى زيادة معنوية في تعبير ROCK1 (p = 0.0003، الشكل 4E).

يتوسط ROCK1 التأثيرات التنظيمية لـ miR-488-3p على خلايا HFLS-RA

في خلايا HFLS-RA، تم عكس تثبيط تعبير ROCK1 الناتج عن الإفراط في تعبير miR-488-3p عن طريق عفن ناقلات الإفراط في تعبير ROCK1 (الشكل 5A). وبالمثل، تم تخفيف التأثير المثبط للإفراط في تعبير miR-488-3p على تكاثر الخلايا من خلال الإفراط في تعبير ROCK1 (الشكل 5B). علاوة على ذلك، أدى الإفراط في تعبير ROCK1 أيضاً إلى عكس زيادة الموت الخلوي المبرمج الناجم عن miR-488-3p (الشكل 5C) واستعادة مستويات السيتوكينات الالتهابية التي تم تثبيطها بسبب الإفراط في تعبير miR-488-3p (الشكل 5D).

مخططات الكمان ومنحنيات ROC التي توضح تحليل التعبير والحساسية والنوعية في دراسة التهاب المفاصل الروماتويدي.
الشكل 1. مستويات التعبير والأداء التشخيصي لـ miR-488-3p لدى المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، والتهاب المفاصل التنكسي (OA)، ومجموعة ضابطة من الأصحاء. (A) مقارنة لمستويات التعبير النسبية لـ miR-488-3p في مرضى RA، ومرضى OA، والمجموعة الضابطة من الأصحاء. (B) تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لـ miR-488-3p للتمييز بين RA والمجموعة الضابطة من الأصحاء. (C) تحليل منحنى ROC لـ miR-488-3p للتمييز بين RA ومرضى OA. AUC، المساحة تحت المنحنى؛ CI، فاصل الثقة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تحليل التعبير الجيني؛ مخططات شريطية ورسم بياني خطي؛ حيوية الخلايا، وموت الخلايا المبرمج، وتأثيرات miR-488-3p.
الشكل 2. التأثيرات الوظيفية لـ miR-488-3p في خلايا HFLS-RA. (A) التعبير النسبي لـ miR-488-3p في خلايا HFLS-RA المنقولة، والذي تم تحديده بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي للنسخ العكسي (RT-qPCR). (B) تأثيرات زيادة تعبير miR-488-3p وتثبيطه على تكاثر الخلايا. (C) تأثيرات زيادة تعبير miR-488-3p وتثبيطه على موت الخلايا المبرمج. البيانات معروضة كمتوسط ± SD. أُجريت جميع القياسات باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية، مع ثلاث مكررات تقنية لكل منها. تشير قيمة p < 0.05 إلى وجود فرق ذو دلالة إحصائية بين المجموعات المحددة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخططات شريطية لتركيز السيتوكينات؛ اللوحات A-C؛ IL-6 وTNF-α وIL-1β؛ مقارنة إحصائية.
الشكل 3. تأثير miR-488-3p على إفراز السيتوكينات الالتهابية. (A) إنترلوكين-6 (IL-6). (B) عامل نخر الورم ألفا (TNF-α). (C) إنترلوكين-1 بيتا (IL-1β). تم قياس تركيزات السيتوكينات باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). البيانات معروضة كمتوسط ± SD. أجريت جميع القياسات باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية، مع ثلاث مكررات تقنية لكل منها. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخطط مقايسة اللوسيفيريز: تفاعل miRNA مع ROCK1، ومخططات بيانية شريطية، ونتائج تحليل البيانات.
الشكل 4. التحقق من الآلية الجزيئية الكامنة وراء التنظيم المستهدف لـ ROCK1 بواسطة miR-488-3p. (A) موقع الارتباط المتوقع لـ miR-488-3p ضمن المنطقة غير المترجمة 3′ (3′UTR) لـ ROCK1. (B) مقايسة مراسل اللوسيفيريز المزدوج التي توضح التفاعل بين miR-488-3p و 3′UTR لـ ROCK1 من النوع البري أو الطافر. (C) مقايسة الترسيب المناعي للـ RNA (RIP) التي توضح إثراء الحمض النووي الريبوزي المرسال (mRNA) لـ ROCK1 في المعقدات المثرى بالأجسام المضادة لـ Argonaute 2 (Ago2). (D) مستويات التعبير النسبية لـ ROCK1 في المرضى المصابين بـ RA، والمرضى المصابين بـ OA، والمجموعات الضابطة السليمة. (E) التعبير النسبي لـ ROCK1 في خلايا HFLS-RA المنقولة والمحدد بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي باستخدام النسخ العكسي (RT-qPCR). البيانات معروضة كمتوسط ± SD. أجريت جميع القياسات باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية، مع ثلاث مكررات تقنية لكل منها. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

مخططات التعبير الجيني التي تقارن مستويات ROCK1 والعلامات الالتهابية باستخدام طريقة محاكي miR-488-3p.
الشكل 5. دور ROCK1 في تنظيم خلايا HFLS-RA بواسطة miR-488-3p. (A) تنظيم تعبير ROCK1 في خلايا HFLS-RA بعد ترنسفكشن الخلايا. (B) تأثيرات زيادة تعبير ROCK1 على تكاثر الخلايا في ظل زيادة تعبير miR-488-3p. (C) تأثيرات زيادة تعبير ROCK1 على الموت الخلوي المبرمج في ظل زيادة تعبير miR-488-3p. (D) تأثيرات زيادة تعبير ROCK1 على إنتاج السيتوكينات الالتهابية في ظل زيادة تعبير miR-488-3p. تُعرض البيانات كمتوسط ± SD. أُجريت جميع القياسات باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية، مع ثلاث مكررات تقنية لكل منها. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

متغيرمجموعة الضبط (العدد = 125)الفصال العظمي (العدد = 130)التهاب المفاصل الروماتويدي (العدد = 135)pالقيمة الاحتمالية (p-value)
العمر (سنوات)55.10 ± 9.3057.21 ± 10.2755.22 ± 11.610.191
الجنس (ذكر/أنثى)74/5163/6769/660.203
مؤشر كتلة الجسم (كجم/م²2)22.79 ± 1.7322.98 ± 1.9823.04 ± 2.050.562
مدة المرض (بالسنوات)-7.96 ± 4.008.03 ± 3.830.882
إيجابي للأجسام المضادة لبروتين السيترولين المكرر (العدد/النسبة المئوية)--76 (56.30)-
معدل ترسب الكريات الحمراء (ملم/ساعة)18.39 ± 6.3882.63 ± 40.32<0.001
البروتين التفاعلي C (ملغم/لتر)10.54 ± 4.9856.33 ± 38.07<0.001
إيجابي لعامل الروماتويد--95 (70.37)
عامل الروماتويد (وحدة دولية/مل)-5.10 ± 1.37144.13 ± 81.05<0.001
مؤشر نشاط المرض في التهاب المفاصل الروماتويدي 28 (DAS28)--4.12 ± 1.36-

الجدول 1: الخصائص الأساسية للمشاركين في الدراسة. كانت المجموعات الثلاث للدراسة متكافئة فيما يتعلق بالخصائص الديموغرافية. وأظهر مرضى RA ارتفاعاً في علامات الالتهاب ومستويات RF.

متغيرأوفاصل ثقة 95%pالقيمة الاحتمالية (p-value)
العمر (بالسنوات)1.4110.822–2.4220.211
الجنس (ذكر/أنثى)1.2090.707–2.0670.489
مؤشر كتلة الجسم (كجم/م²)2)1.3360.778–2.2950.293
مدة المرض (سنوات)1.130.663–1.9290.653
MiR-483-3p0.1660.097–0.284<0.001

الجدول 2: العوامل المستقلة المستمدة من تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات والمرتبطة بتطور الفصال العظمي إلى التهاب المفاصل الروماتويدي. تم تحديد ارتباط MiR-488-3p بخطر تطور التهاب المفاصل الروماتويدي لدى مرضى الفصال العظمي.

البنودMiR-488-3p (التهاب المفاصل الروماتويدي)p-value
الارتباط (r)
ESR (mm/h)-0.718<0.001
CRP (mg/L)-0.726<0.001
RF (IU/mL)-0.805<0.001
DAS28 -0.836<0.001

الجدول 3: الارتباطات بين miR-488-3p والسمات السريرية المرضية لمرضى التهاب المفاصل الروماتويدي (RA). ارتبط miR-488-3p ارتباطاً سلبياً معنوياً مع ESR وCRP وRF ودرجة DAS28 لدى المرضى المصابين بـ RA.

الجدول التكميلي 1. معلومات التسلسل لعمليتي ترنسفكشن الخلايا ومقايسة PCR. ملخص لتسلسلات البادئات وكواشف الترنسفكشن المستخدمة في الدراسة.يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

المناقشة

كما أكد Smolen وآخرون1 في أحدث الإرشادات الخاصة بتشخيص وعلاج التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، فإن تطوير مؤشرات حيوية جديدة له قيمة سريرية كبيرة. في هذه الدراسة، أكدنا أن miR-488-3p في المصل كان منخفض التعبير بشكل ملحوظ لدى المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي وأظهر أداءً تشخيصياً واعداً، مع حساسية ونوعية مرضية نسبياً. لطالما كان التشخيص المبكر لالتهاب المفاصل الروماتويدي يمثل صعوبة سريرية، كما أن المؤشرات الحيوية الحالية ليست حساسة بما يكفي لتشخيص المرض، بينما قد تملأ القدرة التشخيصية الكبيرة لـ miR-488-3p هذه الفجوة، خاصة في تحديد المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي السلبي المصل. وبالمقارنة مع الأفراد الأصحاء، أظهر مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي التهاباً جهازياً أكثر وضوحاً. وفي حين يعاني مرضى الفصال العظمي (OA) بشكل أساسي من اضطراب مفصلي تنكسي موضعي، إلا أنه غالباً ما يُلاحظ وجود التهاب جهازي منخفض الدرجة. وبناءً على ذلك، فإن كفاءة التمييز لـ miR-488-3p أعلى بكثير عند مقارنته بالأفراد الأصحاء مقارنة بما هي عليه عند مقارنته بمرضى الفصال العظمي. لم يتم مقارنة الأداء التشخيصي لـ miR-488-3p مباشرة مع المؤشرات الحيوية السريرية المعتمدة. وقد تم تشخيص المرضى المشمولين في هذه الدراسة وفقاً للمعيار السريري الذهبي الحالي لالتهاب المفاصل الروماتويدي، والذي يتضمن مؤشرات حيوية معتمدة مثل أجسام مضادة لـ anti-CCP، وRF، وESR، وCRP. وقد لوحظت فروق ذات دلالة إحصائية في هذه المؤشرات بين مرضى الفصال العظمي والتهاب المفاصل الروماتويدي (الجدول 1). لذا، لم تكن هذه المجموعة مناسبة للمقارنة المباشرة بين الأداء التشخيصي لـ miR-488-3p وهذه المؤشرات الحيوية المعتمدة، حيث تتطلب مثل هذه المقارنات مجموعة تحقق مستقلة.

بالإضافة إلى ذلك، وُجد أن مستويات تعبير miR-488-3p ترتبط ارتباطاً عكسياً معنوياً مع مؤشرات سريرية مختلفة لالتهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، بما في ذلك علامات الالتهاب الجهازية (ESR, CRP)28، والأجسام المضادة الذاتية (RF)6. ومن الناحية السريرية تحديداً، أظهر miR-488-3p ارتباطاً عكسياً قوياً مع درجة نشاط المرض (DAS28). ويُعد DAS28 مؤشراً مركباً يعكس نشاط المرض بناءً على تورم المفاصل، والحساسية، والالتهاب، والحالة السريرية للمرضى. وبناءً على ذلك، تشير هذه النتائج إلى أن miR-488-3p قد يعمل كمؤشر حيوي محتمل لنشاط المرض في حالات التهاب المفاصل الروماتويدي (RA). كما يدعم ذلك دوره التنظيمي في إمراضية التهاب المفاصل الروماتويدي، وقد يؤثر على تطور المرض عن طريق تثبيط مسارات الإشارات الالتهابية أو الاستجابات المناعية الذاتية29.

في التجارب الوظيفية، وجدنا أن miR-488-3p ثبط تكاثر خلايا HFLS-RA وحفز موت الخلايا المبرمج في هذه الخلايا المأخوذة من مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، كما قلل بشكل كبير من إنتاج السيتوكينات الالتهابية (IL-6 وTNF-α وIL-1β). تلعب خلايا HFLS-RA دورًا رئيسيًا في العملية المرضية لالتهاب المفاصل الروماتويدي30، حيث يمكن أن يؤدي تكاثرها الشاذ ونموها الاجتياحي إلى فرط تنسج الغشاء الزليلي وتدمير المفاصل، بينما يؤدي الإفراط في إنتاج العوامل الالتهابية إلى تفاقم الاستجابات الالتهابية الموضعية والجهازية31. لذلك، فإن تنظيم وظيفة HFLS-RA بواسطة miR-488-3p قد يثبط بشكل مباشر الغزو الزليلي وتآكل العظام في حالات التهاب المفاصل الروماتويدي، مما يوفر أساسًا نظريًا لتطوير استراتيجيات علاجية مستهدفة جديدة. وقد أظهرت دراسات سابقة أن جزيئات miRNA أخرى مثل miR-155 يمكن أن تؤثر على تطور التهاب المفاصل الروماتويدي من خلال تنظيم وظيفة الخلايا الزليلية19، مما يدعم نتائجنا بشكل أكبر.

أثبتت الدراسات الميكانيكية أن miR-488-3p يمكنه استهداف ROCK1 بشكل مباشر وتثبيط تعبيره عن طريق الارتباط بمنطقة 3'UTR الخاصة به. ويُعد ROCK1 جزيئاً مؤثراً رئيسياً في مسار إشارات Rho/ROCK، الذي يشارك في إعادة تنظيم الهيكل الخلوي، والاستجابة الالتهابية، والتليف32. وقد أظهرت دراسات سابقة أن ROCK1 يتم التعبير عنه بمستويات عالية في الخلايا الزليلية لمرضى التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)، مما يعزز هجرتها وغزوها33. وكما كان متوقعاً، أدى الفرط في تعبير ROCK1 إلى عكس تأثيرات miR-488-3p بشكل ملحوظ على خلايا HFLS-RA، مما يشير إلى مشاركته في الدور التنظيمي لـ miR-488-3p في تطور التهاب المفاصل الروماتويدي.

ومع ذلك، لا يزال هناك الكثير من العمل الذي يتعين القيام به في الأبحاث المستقبلية. فقد تم تقييم تعبير miR-488-3p في العينات السريرية باستخدام RT-qPCR مع استخدام U6 كمرجع داخلي. وقد أفادت دراسات سابقة بنتائج متضاربة حول استقرار U6، خاصة في العينات الدورانية، مثل المصل. وعلى الرغم من إجراء تجارب أولية في هذه الدراسة لضمان استقرار U6، إلا أن التقلب المحتمل لـ U6 لا يزال يشكل قيداً، مما يزيد من خطر التشخيص الخاطئ. لذا، فإن إجراء المزيد من التحقق باستخدام جينات مرجعية داخلية أكثر استقراراً يعد أمراً ضرورياً. من ناحية أخرى، استند التقييم السريري لـ miR-488-3p إلى مجموعة من مركز واحد دون التحقق الخارجي. كما كان حجم العينة صغيراً نسبياً، ومقصوراً على نطاق المستشفى. علاوة على ذلك، كان هناك نقص في المتابعة الطولية لتقييم القيمة الإنذارية لـ miR-488-3p. ويجب معالجة هذه القيود في الدراسات المستقبلية. بالإضافة إلى ذلك، تظهر بعض الدراسات أن إيصال miRNAs in vivo لا يزال يمثل تحدياً رئيسياً للترجمة السريرية34. ويمكن للدراسات المستقبلية التحقق من الإمكانات العلاجية لـ miR-488-3p في الجسم الحي عن طريق إنشاء فئران ذات تعطيل جيني مشروط أو استخدام أنظمة إيصال مستهدفة مثل الناقلات النانوية35.

وفي الختام، كشفت هذه الدراسة عن القيمة المحتملة لـ miR-488-3p في تشخيص التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) واستهدافه علاجياً. وقد أظهر miR-488-3p أداءً تشخيصياً عالياً، كما عمل على تثبيط تكاثر والاستجابات الالتهابية لخلايا HFLS-RA مع تعزيز عملية الموت الخلوي المبرمج. وهذا يشير إلى أنه قد يمثل هدفاً واعداً لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة لالتهاب المفاصل الروماتويدي. وينبغي أن تركز الأبحاث المستقبلية على 1) التحقق من الاستقرار التشخيصي لـ miR-488-3p في مجموعات كبيرة متعددة المراكز، 2) استكشاف تأثيراته التآزرية مع العوامل العلاجية الموجودة، مثل مثبطات JAK أو الأدوية البيولوجية28، و 3) تحسين أنظمة إيصال miRNA لتعزيز جدواها في التطبيق السريري36.

توافر البيانات:

البيانات الأولية التي تدعم نتائج هذه الدراسة متاحة في المواد التكميلية المقدمة مع هذه المخطوطة.

الإفصاحات

يقر المؤلفون بعدم وجود تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
طقم كشف موت الخلايا المبرمج باستخدام Annexin V-FITCBD Bioscience556547موت الخلايا المبرمج
جسم مضاد لـ Ago2Proteintech66720-1-Igالترسيب المناعي للحمض النووي الريبوزي (RNA Immunoprecipitation)
محلول CCK-8DojindoCK04تكاثر الخلايا
وسط دولبيكو المعدل من وسط إيجل (DMEM)Thermo Fisher121000146زراعة الخلايا
مصل جنين البقرThermo Fisher10437028زراعة الخلايا
جهاز قياس التدفق الخلويBD Bioscience FACSCaliburموت الخلايا المبرمج
طقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للأجسام المضادة البشرية لـ CCPCusabioCSB-E09077h الكشف عن الأجسام المضادة لـ CCP (البروتين الببتيدي الدوري)
طقم مقايسة الممتز المنيعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للعامل الروماتويدي من نوع IgA البشريFeien BiotechnologyEH4270الكشف عن الترددات الراديوية
الخلايا الزليلية الشبيهة بالأرومات الليفية لدى البشر المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي (HFLS-RA)تطبيقات خلويةHFLS-RA-200التحقق من صحة وظيفة miR-488-3p مخبرياً
الجسم المضاد الضابط IgGAbcamab205718الترسيب المناعي للحمض النووي الريبوزي (RNA Immunoprecipitation)
إنترلوكين-1β (IL-1βطقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA Kit)R&أنظمة DDY201-05الإنترلوكين-1 الخلوي (cellular IL-1)β تركيز
طقم مقايسة الممتز المجهري المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لإنترلوكين-6 (IL-6)R&أنظمة دي (D Systems)D6050Bتركيز إنترلوكين-6 الخلوي
كاشف ترانسفكشن الليبوزوم 3000إن جينويتِي لايف تكنولوجيز (Ingenuity Life Technologies)L3000015نقل الجينات إلى الخلايا (transfection)
قارئ الأطباق الدقيقةBioTek ELx808مقايسة إليسا (ELISA)
طقم Mir-XTM لتخليق الشريط الأول من الـ miRNAشركة Nihonbao Bioengineering Co., Ltd.638313النسخ العكسي
وسط Opti-MEMIngenuity Life Technologies, Inc31985070ترانسفكشن الخلايا (نقل الجينات إلى الخلايا)
pcDNA 3.1InvitrogenV790-20فرط تعبير ROCK1
بنسلين-ستربتومايسينThermo Fisher15140122زراعة الخلايا
نظام مختبر Phadia 250Thermo Fisher Phadia 250تحليل الدم
طقم PrimeScriptTM للنسخ العكسيشركة Nihonbao Bioengineering Co., Ltd.RR037Aالنسخ العكسي
يوديد البروبيديوم (PI)/ ريبونوكلياز (RNase)BD Bioscience550825الموت الخلوي المبرمج
نظام QuantStudio 5Applied Biosystems, Inc.A28138مقايسة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)
كاشف RNAiso Plusشركة Nihonbao Bioengineering Co., Ltd.9108عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA)
SYBR Green Premix Ex Taqشركة Nippon Poh Bio-Engineering Co., Ltd.RR420Aتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)
قاعدة بيانات TargetScanTargetScanنظرًا لعدم وجود نص مصدر، يرجى تزويدي بالمحتوى الذي ترغب في ترجمته من الإنجليزية إلى العربية وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة.التنبؤ بمواقع الارتباط، (https://www.targetscan.org/) 
تحديد كمية البروتين التفاعلي C باستخدام تقنية Tina-quant IVروتش ديانجوستيكس (Roche Diagnostics)7876033190كشف البروتين التفاعلي C (CRP)
عامل نخر الورم-α (عامل نخر الورم-αطقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)R&أنظمة DDY210-05عامل نخر الورم الخلوي-αα تركيز

المراجع

  1. Smolen JS, et al. Rheumatoid arthritis. Nat Rev Dis Primers. 2018;4:18001.
  2. Kook HY, et al. Serum miR-214 as a novel biomarker for ankylosing spondylitis. Int J Rheum Dis. 2019;22(7):1196-201.
  3. Alamanos Y, Voulgari PV, Drosos AA. Incidence and prevalence of rheumatoid arthritis, based on the 1987 American College of Rheumatology criteria: a systematic review. Semin Arthritis Rheum. 2006;36(3):182-8.
  4. van der Linden MPM, et al. Long-term impact of delay in assessment of patients with early arthritis. Arthritis Rheum. 2010;62(12):3537-46.
  5. Anderson J, et al. Rheumatoid arthritis disease activity measures: American College of Rheumatology recommendations for use in clinical practice. Arthritis Care Res (Hoboken). 2012;64(5):640-7.
  6. Aletaha D, et al. 2010 rheumatoid arthritis classification criteria: an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative. Arthritis Rheum. 2010;62(9):2569-81.
  7. Yang J, et al. MicroRNA-488: a miRNA with diverse roles and clinical applications in cancer and other human diseases. Biomed Pharmacother. 2023;165:115115.
  8. Molendijk M, Hazes JMW, Lubberts E. From patients with arthralgia, pre-RA and recently diagnosed RA: what is the current status of understanding RA pathogenesis? RMD Open. 2018;4(1):e000256.
  9. van Venrooij WJ, van Beers JJBC, Pruijn GJM. Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future. Nat Rev Rheumatol. 2011;7(7):391-8.
  10. Szodoray P, et al. Anti-citrullinated protein/peptide autoantibodies in association with genetic and environmental factors as indicators of disease outcome in rheumatoid arthritis. Autoimmun Rev. 2010;9(3):140-3.
  11. Filer A, et al. Utility of ultrasound joint counts in the prediction of rheumatoid arthritis in patients with very early synovitis. Ann Rheum Dis. 2011;70(3):500-7.
  12. Zuo C, Fan P, Yang Y, Hu C. MiR-488-3p facilitates wound healing through CYP1B1-mediated Wnt/β-catenin signaling pathway by targeting MeCP2. J Diabetes Investig. 2024;15(2):145-58.
  13. Mendell JT, Olson EN. MicroRNAs in stress signaling and human disease. Cell. 2012;148(6):1172-87.
  14. Cai Z, Poulos RC, Liu J, Zhong Q. Machine learning for multi-omics data integration in cancer. iScience. 2022;25(2):103798.
  15. Fabian MR, Sonenberg N. The mechanics of miRNA-mediated gene silencing: a look under the hood of miRISC. Nat Struct Mol Biol. 2012;19(6):586-93.
  16. Duroux-Richard I, et al. Circulating miRNA-125b is a potential biomarker predicting response to rituximab in rheumatoid arthritis. Mediators Inflamm. 2014;2014:342524.
  17. Zakeri Z, et al. MicroRNA and exosome: key players in rheumatoid arthritis. J Cell Biochem. 2019;120(7):10930-44.
  18. Pauley KM, et al. Upregulated miR-146a expression in peripheral blood mononuclear cells from rheumatoid arthritis patients. Arthritis Res Ther. 2008;10(4):R101.
  19. Kurowska-Stolarska M, et al. MicroRNA-155 as a proinflammatory regulator in clinical and experimental arthritis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011;108(27):11193-8.
  20. Pers YM, et al. miR-155 contributes to the immunoregulatory function of human mesenchymal stem cells. Front Immunol. 2021;12:624024.
  21. Fu Q, et al. miR-488-3p alleviates neuropathic pain by regulating target gene ROCK1. Acta Neurobiol Exp (Wars). 2023;83(3):271-9.
  22. Xue W, et al. PVT1 regulates the malignant behaviors of human glioma cells by targeting miR-190a-5p and miR-488-3p. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2018;1864(5 Pt A):1783-94.
  23. Muiños-Gimeno M, et al. Human microRNAs miR-22, miR-138-2, miR-148a, and miR-488 are associated with panic disorder and regulate several anxiety candidate genes and related pathways. Biol Psychiatry. 2011;69(6):526-33.
  24. Le TD, Zhang J, Liu L, Li J. Computational methods for identifying miRNA sponge interactions. Brief Bioinform. 2017;18(4):577-90.
  25. Scanzello CR, Goldring SR. The role of synovitis in osteoarthritis pathogenesis. Bone. 2012;51(2):249-57.
  26. McGeary SE, et al. The biochemical basis of microRNA targeting efficacy. Science. 2019;366(6472):eaav1741.
  27. Liu X, et al. Impaired AGO2/miR-185-3p/NRP1 axis promotes colorectal cancer metastasis. Cell Death Dis. 2021;12(4):390.
  28. Smolen JS, Aletaha D, McInnes IB. Rheumatoid arthritis. Lancet. 2016;388(10055):2023-38.
  29. O'Connell RM, Rao DS, Baltimore D. microRNA regulation of inflammatory responses. Annu Rev Immunol. 2012;30:295-312.
  30. Bottini N, Firestein GS. Duality of fibroblast-like synoviocytes in RA: passive responders and imprinted aggressors. Nat Rev Rheumatol. 2013;9(1):24-33.
  31. Firestein GS, McInnes IB. Immunopathogenesis of rheumatoid arthritis. Immunity. 2017;46(2):183-96.
  32. Amano M, Nakayama M, Kaibuchi K. Rho-kinase/ROCK: a key regulator of the cytoskeleton and cell polarity. Cytoskeleton (Hoboken). 2010;67(9):545-54.
  33. Peng H, et al. ROCK1 induces endothelial-to-mesenchymal transition in glomeruli to aggravate albuminuria in diabetic nephropathy. Sci Rep. 2016;6:20304.
  34. van der Meel R, et al. Smart cancer nanomedicine. Nat Nanotechnol. 2019;14(11):1007-17.
  35. Yin H, et al. Non-viral vectors for gene-based therapy. Nat Rev Genet. 2014;15(8):541-55.
  36. Setten RL, Rossi JJ, Han SP. The current state and future directions of RNAi-based therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 2019;18(6):421-46.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

المؤشر الحيوي المصلِيتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)موت الخلايا الزليلي المبرمجالاستجابة الالتهابيةمنحنى خصائص تشغيل المستقبِل (ROC)هدف ROCK1قياس التدفق الخلوي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.