يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

يقلل مستحضر Xiaoyao San المعدل من السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب والنخر المبرمج العصبي في نموذج فأري للإجهاد الخفيف المزمن غير المتوقع

82 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72522

⸱

أغسطس 21, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Collaborative Innovation Center of Research and Development on the Whole Industry Chain of Yu-Yao, Henan Province, Henan University of Chinese Medicine, 2Academy of Chinese Medical Sciences, Henan University of Chinese Medicine, 3Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Traditional Chinese Medicine, Shanghai Tenth People's Hospital, 5College of Chinese Medicine, Henan University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

يوضح هذا البروتوكول كيفية تقييم مستحضر Modified Xiaoyao San في نموذج فأر مصاب بالاكتئاب الناجم عن الضغط النفسي الخفيف المزمن وغير المتوقع، بما في ذلك التقييمات السلوكية والنسيجية والجزيئية للنخر المبرمج العصبي.

الملخص

يُعد فقدان الخلايا العصبية وتلفها من السمات المرضية الهامة للاكتئاب، وقد اقتُرح أن الموت الخلوي المبرمج النخرِي (necroptosis) يمثل آلية محتملة لموت الخلايا العصبية. وقد حدد تحليل مجموعات البيانات من أرشيف تعبير الجينات (GEO) (GSE54565 وGSE54566 وGSE54568) وجود ارتباط بين الاكتئاب والموت الخلوي المبرمج النخرِي، مما يشير إلى أن تثبيط هذا المسار قد يمثل استراتيجية علاجية محتملة. تم تطوير مستحضر Xiaoyao San المعدل (MXYS)، وهو تركيبة معدلة من دواء Xiaoyao San التقليدي في الطب الصيني، من خلال دمج أعشاب تعمل على تطهير الحرارة وتبريد الدم وتعزيز الإدراك وتحفيز الإنعاش لتحسين الفعالية العلاجية. ومع ذلك، لا تزال آثاره على الموت الخلوي المبرمج النخرِي للخلايا العصبية والمكونات النشطة التي تصل إلى أنسجة الدماغ غير واضحة. استُخدم الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء المقترنة بمطياف الكتلة عالي الدقة (UHPLC-HRMS) لتحديد مكونات MXYS المكتشفة في أنسجة الدماغ بشكل مبدئي. كما تم تقييم الفعالية العلاجية في نموذج فأر مصاب بالاكتئاب ناتج عن الإجهاد الخفيف غير المتوقع المزمن (CUMS) باستخدام التقييمات السلوكية، والفحص النسيجي، والوميض المناعي، وبصمة ويسترن (western blotting)، والتحليلات المعلوماتية الحيوية. ارتبط إعطاء MXYS بتحسن السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب، وتخفيف إصابة الدماغ المرضية، وتقليل فسفرة البروتين كيناز 3 المتفاعل مع المستقبل (RIPK3) والبروتين الشبيه بنطاق كيناز السلالة المختلطة (MLKL). تشير هذه النتائج إلى أن MXYS يمارس تأثيرات شبيهة بمضادات الاكتئاب ترتبط بانخفاض علامات الموت الخلوي المبرمج النخرِي للخلايا العصبية، مما يوفر دعماً تجريبياً لمزيد من الاستقصاء حول MXYS كاستراتيجية علاجية محتملة للاكتئاب.

المقدمة

يُعد الاكتئاب اضطراباً نفسياً شديداً ضمن طيف اضطرابات المزاج، ويتميز بشكل أساسي بالمزاج المنخفض المستمر ويتأثر بعوامل متعددة1. ومن الناحية السريرية، يُظهر المرضى الذين يعانون من الاكتئاب عادةً أعراضاً مثل تعكر المزاج، والبطء المعرفي، وانخفاض التواصل اللفظي والنشاط البدني، وفي الحالات الشديدة، يظهر سلوك إيذاء النفس والأفكار الانتحارية2. ونظراً لارتفاع معدلات انتشار الاكتئاب وتكراره ومعدلات العجز والانتحار المرتبطة به، فإنه يمثل سبباً رئيسياً للإعاقة في جميع أنحاء العالم ويفرض أعباءً اجتماعية واقتصادية جسيمة3. ووفقاً لمنظمة الصحة العالمية، من المتوقع أن يصبح الاكتئاب المساهم الرئيسي في عبء المرض العالمي بحلول عام 2030، متجاوزاً السرطان وأمراض القلب والأوعية الدموية وأمراض الأوعية الدموية الدماغية3. بالإضافة إلى ذلك، ارتبطت جائحة مرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) بزيادة قدرها 27.6% في الانتشار العالمي لاضطراب الاكتئاب الجسيم4. وفي الصين، تبلغ نسبة الانتشار السنوي للاكتئاب 3.6%، مع نسبة انتشار مدى الحياة تصل إلى 6.8%5. ولا يزال ميكانزم إمراض الاكتئاب غير مفهوم بشكل كامل بسبب مسبباته المعقدة وعوامله المتعددة المساهمة. وبناءً على ذلك، لا تزال خيارات العلاج محدودة، حيث يصاب ما يقرب من 30%–40% من المرضى باكتئاب مقاوم للعلاج نتيجة الاستجابة غير الكافية لمضادات الاكتئاب المتاحة حالياً6. علاوة على ذلك، لا يزال التأخر في بدء المفعول، والأعراض المتبقية، والسمية العصبية، والآثار الجانبية المرتبطة بمضادات الاكتئاب الحالية تمثل تحديات علاجية كبيرة7.

لقد ظل موت الخلايا المبرمج لفترة طويلة محوراً رئيسياً في الأبحاث الطبية الحيوية. وتشير الأدلة المتزايدة إلى أن الاكتئاب مرتبط بالنخر المبرمج (necroptosis)8,9,10,11. ويُعد النخر المبرمج، مثل الموت الخلوي المبرمج (apoptosis)، شكلاً من أشكال موت الخلايا المبرمج؛ ومع ذلك، وعلى عكس الموت الخلوي المبرمج، فإنه يثير استجابات مناعية والتهابية ملحوظة12. وفي حالة غياب نشاط caspase-8، يرتبط عامل نخر الورم ألفا (TNF-α) بمستقبل عامل نخر الورم 1 (TNFR1)، مما يؤدي إلى تنشيط البروتين كيناز 1 المتفاعل مع المستقبل (RIPK1)13. يتفاعل RIPK1 المنشط مع البروتين كيناز 3 المتفاعل مع المستقبل (RIPK3) لتشكيل معقد النيكروسوم (necrosome complex)، والذي يقوم بدوره بتنشيط البروتين الشبيه بنطاق كيناز السلالة المختلطة (MLKL)14. وبعد عملية التعدد (oligomerization)، ينتقل MLKL من السيتوبلازم إلى الغشاء البلازمي، مما يسبب تورم العضيات15,16، واختلال سلامة الغشاء الخلوي، وإطلاق المحتويات داخل الخلوية، بما في ذلك الأنماط الجزيئية المرتبطة بالتلف (DAMPs) والوسائط الالتهابية مثل TNF-α، والإنترلوكين (IL)-1، وIL-6، مما يؤدي بالتالي إلى تفاقم الاستجابات الالتهابية17. وقد ارتبط النخر المبرمج بالعديد من الأمراض الالتهابية والتنكسية العصبية، بما في ذلك التصلب المتعدد، والاكتئاب، والتصلب الجانبي الضموري، ومرض باركنسون، ومرض الزهايمر18,19,20. وأظهرت التحليلات البروتومية أن الاكتئاب الناجم عن الإجهاد الخفيف غير المتوقع المزمن (CUMS) يرتبط بزيادة تعبير RIPK3 وMLKL وتنشيط مسار النخر المبرمج2. وفي نموذج فأر آخر للاكتئاب ناتج عن CUMS، أظهر الفلوكسيتين تأثيرات مضادة للاكتئاب ارتبطت بتثبيط النخر المبرمج بوساطة RIPK110. علاوة على ذلك، تبين أن Nec-1s، وهو مثبط للنخر المبرمج، يعمل على تحسين السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب الناجمة عن عديد السكاريد الشحمي (LPS)21. وبما أن الإصابة العصبية تمثل سمة مرضية مهمة للاكتئاب، فإن استهداف النخر المبرمج قد يمثل استراتيجية علاجية واعدة لعلاج الاكتئاب.

يمتلك الطب الصيني التقليدي (TCM) تاريخاً طويلاً في علاج الاكتئاب. ووفقاً لنظرية الطب الصيني التقليدي، فإن الكبد يتحكم في التدفق الحر للطاقة (qi)؛ ولذلك يعزى الاكتئاب بشكل أساسي إلى الضيق العاطفي الذي يؤدي إلى ركود طاقة الكبد. وبناءً على ذلك، تتمثل الاستراتيجية العلاجية الرئيسية في تهدئة الكبد وتخفيف الاكتئاب. ويُعد "Xiaoyao San (XYS)" وصفة عشبية كلاسيكية تُستخدم على نطاق واسع لهذا الغرض، وتدعم أدلة واسعة تطبيقه في علاج الاكتئاب22. علاوة على ذلك، أفادت التقارير أن XYS يمتلك خصائص مضادة للنخر الخلوي المبرمج (anti-necroptotic)23,24. واستناداً إلى مفاهيم الطب الصيني التقليدي حول "تحول اكتئاب الكبد إلى نار" و"صعود الـ yang النقي إلى الدماغ"، تم تعديل XYS بإضافة Moutan Cortex (Mudan Pi) وGardeniae Fructus (Zhizi) لتصفية الحرارة وتبريد الدم، جنباً إلى جنب مع Acori Tatarinowii Rhizoma (Shi Changpu) وPolygalae Radix (Yuan Zhi) لتعزيز الوظيفة الإدراكية والإنعاش. وقد أُطلق على التركيبة الناتجة اسم Modified Xiaoyao San (MXYS)، وطُوّرت لتوفير تأثيرات علاجية معززة بناءً على مبادئ الطب الصيني التقليدي. ومع ذلك، لم يتم إجراء مقارنة مباشرة مع تركيبة XYS الأصلية في هذه الدراسة25. وقد أثبتت الدراسات السريرية الفعالية المضادة للاكتئاب لـ MXYS26,27,28، وقد تكون تأثيراته العلاجية مرتبطة بتنظيم المحور الوطائي-النخامي-الكظري (HPA) وتثبيط الالتهاب العصبي29,30,31. ورغم ذلك، لا يزال من غير الواضح ما إذا كان MXYS مرتبطاً بتقليل النخر الخلوي المبرمج للعصبونات.

في الدراسة الحالية، استُخدم تقنية الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء المقترنة بمطياف الكتلة عالي الدقة (UHPLC-HRMS) لتحديد المركبات المشتقة من MXYS والتي تم اكتشافها في أنسجة الدماغ بشكل مبدئي. كما استُخدمت مجموعات بيانات Gene Expression Omnibus (GEO) المتاحة للعامة والتحليلات المعلوماتية الحيوية، بما في ذلك تحليل شبكة التعبير الجيني المشترك الموزونة (WGCNA)، وتحليل التعبير التفاضلي، وتحليل الإثراء، لاستقصاء الارتباطات بين MXYS والاكتئاب والموت الخلوي المبرمج (necroptosis). وبناءً على هذه النتائج، افترضنا أن MXYS قد يمارس تأثيرات مضادة للاكتئاب ترتبط بانخفاض مؤشرات الموت الخلوي المبرمج العصبي، مع اعتبار مسار عامل النسخ المنشط 4 (ATF4)/البروتين الرابط لعنصر استجابة cAMP (CREB)/العامل العصبي المشتق من الدماغ (BDNF) آلية ارتباط مرشحة. ولتقييم هذه الفرضية، تم تحديد المركبات المكتشفة في أنسجة الدماغ بشكل مبدئي باستخدام UHPLC-HRMS، وأُجريت تحليلات معلوماتية حيوية لتحديد الأهداف العلاجية المحتملة، كما نُفذت تجارب في الجسم الحي (in vivo) لفحص ما إذا كان العلاج بـ MXYS يرتبط بتغيرات في مؤشرات الموت الخلوي المبرمج ومسار ATF4/CREB/BDNF. تقدم هذه النتائج دليلاً أولياً يدعم التطبيق العلاجي المحتمل لـ MXYS في حالات الاكتئاب، مع الإقرار بضرورة إجراء دراسات مقارنة مع تركيبة XYS الأصلية والتحقق من استجابة الجرعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على التجارب الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة هنان للطب الصيني (رقم الموافقة DWLLGZR2022023). وقد أُجريت جميع الإجراءات وفقاً للإرشادات المؤسسية والوطنية الخاصة برعاية الحيوان، مع الالتزام بإرشادات ARRIVE. تم الحصول على ذكور جرذان Sprague–Dawley (SD) من مورد معتمد للحيوانات المختبرية. وُضعت الحيوانات في مساكن ذات درجة حرارة ورطوبة محكومة مع دورة ضوء/ظلام مدتها 12 h، وقُدم لها العلف القياسي والماء حسب الرغبة.

تحديد المكونات الموجودة في أنسجة الدماغ لتركيبة MXYS
تحضير مسحوق MXYS المجفف بالتجميد:
نُقعت الأعشاب الـ 1 المكونة لـ MXYS في 10 أحجام من الماء المقطر لمدة 2 h ثم غُلِيَت لمدة 40 min. وأضيفت النعناع خلال آخر 5 min من عملية الغلي. كما حُضّر مستخلص ثانٍ بنفس الطريقة باستخدام 8 أحجام من الماء المقطر. جُمِع المستخلصان معاً، ورُشِّحا عبر قطعة شاش، ثم رُكِّزا تحت ضغط منخفض حتى وصل التركيز إلى 1 g/mL (ما يعادل الدواء الخام)، وجُفِّفا بالتجميد تحت الفراغ لمدة 48 h للحصول على مسحوق MXYS المجف بالتجميد. بلغت نسبة حصيلة الاستخلاص 21.7% (w/w)25,29,31.

الحيوانات وإعطاء MXYS:
تم توزيع اثني عشر من ذكور جرذان SD عشوائياً على مجموعتين، حيث أُعطيت إما MXYS أو ماءً منقّى مرتين يومياً عن طريق التغذية القسرية الفموية. تم إجراء الإعطائين اليوميين في تمام الساعة 8:0 صباحاً و8:0 مساءً (بفاصل 12 ساعة). أُذيب مسحوق MXYS في ماء منقّى وأُعطي بجرعة 24.4 g/kg (حوالي ضعف الجرعة السريرية للجرذان)25. بينما تلقت مجموعة الضبط ماءً منقّى بحجم مكافئ (10 mL/kg).

تحضير أنسجة الدماغ المحتوية على MXYS:
بعد مرور 14 يوماً، تم تخدير جميع الجرذان باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم (40 mg/kg، عن طريق الحقن داخل الصفاق) بعد ساعتين من الجرعة الأخيرة من MXYS. تم جمع أنسجة الدماغ بعد إجراء تروية عبر القلب بمحلول ملحي طبيعي. تم استئصال الأدمغة كاملة على الفور ووضعها على الثلج للحصول على عينات من أنسجة الدماغ الضابطة وعينات من أنسجة الدماغ المعالجة بـ MXYS.

ظروف الكروماتوغرافيا/طيف الكتلة وقاعدة البيانات:
تم تحليل مسحوق MXYS المجف بالتجميد، وأنسجة دماغية فارغة مضاف إليها مسحوق MXYS، وأنسجة دماغية فارغة، ومستخلصات أنسجة دماغية تحتوي على MXYS باستخدام نظام كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء مجهز بعمود HSS-T3 (10 × 2.1 mm، 1.8 μm) تم الحفاظ عليه عند درجة حرارة 35°C. وتكونت الأطوار المتحركة من الماء الذي يحتوي على 0.1% حمض الفورميك (الطور المتحرك A) والأسيتونيتريل الذي يحتوي على 0.1% حمض الفورميك (الطور المتحرك B). وفُصلت العينات بمعدل تدفق 0.3 mL/min باستخدام تدرج بنسبة 5% B لمدة 1 min، تزداد إلى 98% B على مدار 16 min، ثم تعود إلى 5% B خلال 0.5 min، وتثبت عند 5% B لمدة 2.5 min.

تم الحصول على أطياف الكتلة في نمطي التأين بالرش الكهربائي الموجب والسالب باستخدام تقنية الاكتساب المعتمد على البيانات عبر نطاق m/z يتراوح بين 90–1,30. كما تم توليد أطياف MS/MS من أكثر 10 أيونات سلفاً كثافة باستخدام طاقات تصادم متدرجة للتفكك التصادمي عالي الطاقة بلغت 20 و40 و60 eV. وتم الحفاظ على درجة حرارة الشعيرة عند 320°C، بينما ضُبطت درجة حرارة مسخن المسبار عند 350°C.

تَمَّ توصيف المركبات من خلال مطابقة الكتلة الدقيقة، والتوزيع النظائري، وأطياف MS/MS مع قاعدة بيانات داخلية للأدوية الصينية التقليدية وقاعدة بيانات GNPS العامة.32، ReSpect33، وMassBank34 قواعد البيانات. وقد تم الاحتفاظ بالمركبات التي أظهرت تطابقاً موثوقاً في طيف الكتلة المتسلسل (MS/MS) وأشكالاً متسقة لقمم الكروماتوغرافيا. تتوفر القائمة الكاملة للمركبات التي تم تحديدها مبدئياً في الجدول التكميلي 1.

المعلوماتية الحيوية
اختيار مجموعة البيانات ومعالجتها مسبقاً من قاعدة بيانات GEO:
تم بحث الدور المحتمل للتنخر المبرمج (necroptosis) في باثولوجيا الاكتئاب من خلال البحث في قاعدة بيانات GEO باستخدام الكلمة المفتاحية "depression". وبناءً على معايير الاختيار، تم تحديد ثلاث مجموعات من البيانات (GSE5456 وGSE54565 وGSE54568) لإجراء مزيد من التحليل. اشتُقّت مجموعات البيانات هذه من مناطق مختلفة من الدماغ: GSE54565 (القشرة الحزامية الأمامية)، وGSE5456 (اللوزة الدماغية)، وGSE54568 (القشرة الجبهية الظهرانية الجانبية، BA9). وقد تم إنتاج جميع مجموعات البيانات باستخدام منصة Affymetrix Human Genome U13 Plus 2.0 Array (GPL570)، وتكونت من عينات أنسجة دماغية بعد الوفاة لمرضى يعانون من الاضطراب الاكتئابي الجسيم (MDD) وضوابط غير نفسية. تم تلخيص الخصائص التفصيلية للعينات لكل مجموعة بيانات في الجدول التكميلي 2. تضمنت مجموعات البيانات هذه بيانات ترانسكريبتومية من ثلاث مناطق في الدماغ مرتبطة بالاكتئاب. أُجري تحليل للتعبير الجيني التفاضلي بين مجموعتي MDD والمجموعة الضابطة لكل مجموعة بيانات، ثم دُمجت الجينات التي أظهرت ارتفاعاً أو انخفاضاً مستمراً في التعبير باستخدام حزمة R الخاصة بـ Robust Rank Aggregation (RRA).

تمت معالجة جميع مجموعات البيانات مسبقاً باستخدام خوارزمية متوسط المصفوفات المتعددة القوي (RMA) لتصحيح الخلفية والمعايرة. وبعد معايرة RMA، تم تطبيق خوارزمية ComBat المضمنة في حزمة sva R لضبط تأثيرات الدفعة عبر مجموعات البيانات، مع اعتبار مصدر مجموعة البيانات كمتغير مشترك للدفعة. وقد أدى هذا الإجراء إلى تقليل التباين التقني بين مجموعات البيانات وتحسين قابلية المقارنة للتحليلات اللاحقة.

أُجريت التحليلات المعلوماتية الحيوية باستخدام برنامج R (الإصدار 4.2.1). وشملت حزم R الرئيسية كل من ClusterProfiler (الإصدار 4.8.2) لتحليلات إثراء الوجود الجيني (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)، وWGCNA (الإصدار 1.72) لتحليل شبكة التعبير الجيني المشترك الموزون، وRRA لدمج الجينات المتباينة، وsva (الإصدار 3.48.0) لتصحيح تأثير الدفعة باستخدام ComBat. وتكون سير العمل التحلي من الحصول على البيانات، وتطبيع RMA، وتصحيح تأثير الدفعة بـ ComBat، وتحليل التعبير المتباين مع دمج RRA، وبناء وحدات WGCNA، وتحليلات إثراء GO وKEGG بمعدل اكتشاف كاذب (FDR) < 0.05، والتنبؤ بالأهداف مع تحليل شبكة التفاعل بين البروتينات (PPI).

استخدام تحليل شبكة التعبير الجيني المشترك المرجح (WGCNA) لبناء شبكات التعبير الجيني المشترك وتحديد الوحدات المرتبطة بشكل معنوي بالاكتئاب والنخر المبرمج:
يعمل WGCNA على بناء شبكات التعبير الجيني المشترك المرجحة من خلال تطبيق قوة العتبة المرنة (قيمة β) لتقريب توبولوجيا خالية من المقياس. تم اختيار قيمة β عندما وصل معامل الارتباط بين log(k) و log(p(k)) إلى 0.9 على الأقل. وبعد اختيار قيمة β، تم تحديد الوحدات الجينية باستخدام طريقة القطع الشجري الديناميكي. وقد تم ضبط المعاملات الإضافية كما يلي: minModuleSize = 30، و cutHeight = 0.25، و deepSplit = 2. تم اختيار قيمة β عندما وصل معامل الارتباط بين log(k) و log(p(k)) إلى 0.9 على الأقل. واستُخدمت قوة عتبة مرنة بقيمة β = 7 لبناء الشبكة. كما تم حساب الجين الذاتي للوحدة (ME) لكل وحدة لتلخيص أنماط التعبير الجيني وتقييم الارتباطات بالسمات البيولوجية. وفي وقت لاحق، تم حساب الأهمية الجينية (GS) وعضوية الوحدة (MM)، وجرى تقييم العلاقات بين الوحدة والسمة باستخدام معامل الارتباط (cor) وقيمة p المقابلة. وقد أشارت معاملات الارتباط الأعلى وقيم p الأقل إلى وجود ارتباطات أقوى بين الوحدات الجينية والسمات البيولوجية.

تحليل الإثراء الوظيفي وبناء شبكة تفاعل البروتينات (PPI):
تم استخدام ClusterProfiler لإجراء تحليل إثراء مسار KEGG. وطُبقت طريقة Benjamini–Hochberg FDR لتصحيح الاختبارات المتعددة، واعتُبرت قيمة p المعدلة (FDR) < 0.05 ذات دلالة إحصائية. وبعد تحديد الوحدة المستهدفة، تم تقاطع الجينات الرئيسية داخل الوحدة مع الجينات المرتبطة بـ MXYS والنخر الخلوي المبرمج (necroptosis). وبناءً على ذلك، تم إنشاء شبكة PPI باستخدام قاعدة بيانات STRING.

توقع الأهداف للمركبات المكتشفة في أنسجة الدماغ:
استُخدمت المركبات الـ 143 التي تم تحديدها مبدئياً في أنسجة دماغ الجرذ بعد إعطاء MXYS للتنبؤ بالأهداف. وبالنسبة لكل مركب، تم استرداد الأهداف المحتملة من قاعدة بيانات GeneCards باستخدام وظيفة الأهداف ذات الصلة (Related Targets) مع درجة صلة > 5. دُمجت الأهداف المكررة، وتم الإبقاء فقط على الجينات البشرية ذات الرموز الجينية الرسمية، مما نتج عنه 3,164 هدفاً فريداً. خضعت هذه الأهداف لتحليلات إثراء GO وKEGG باستخدام حزمة ClusterProfiler لغة R، مع اعتبار قيمة FDR < 0.05 دالة إحصائياً. تألفت مجموعة الجينات المرجعية من جميع الجينات البشرية المشفرة للبروتين والمصنفة في قاعدة بيانات KEGG.

التحقق التجريبي
زراعة الخلايا:
تم الحصول على خلايا HT-2 من شركة Procell Life Science & Technology Co., Ltd. ‏(CL-0697, RRID: CVCL_0321) وزراعتها في وسط نمو مكمل بـ 10% مصل جنين البقر (FBS) و 10 U/mL بنسيلين/ستريبتومايسين. وقد حُفظت الخلايا عند 37°C في حاضنة رطبة تحتوي على 5% CO₂.

نشاط MXYS المضاد للنخر المبرمج (Necroptosis):
أعيد تكوين مسحوق MXYS المجف بالتجميد في وسط نمو الخلايا بتركيز 1.0 g/mL، وتم تعقيمه باستخدام مرشح غشائي بمسامية 0.2 μm، وحُفظ في درجة حرارة −20°C حتى وقت الاستخدام. تم استزراع خلايا HT-2 بكثافة 8,0 خلية لكل بئر في أطباق ذات 96 بئراً، بواقع ثلاثة آبار لكل مجموعة. خُف MXYS في وسط النمو للوصول إلى تركيزات نهائية قدرها 2 و 4 و 6 mg/mL. وبعد التحضين لمدة 12 h، عولجت الخلايا بمركب SM-164 hydrochloride (بتركيز 10 nM) ومثبط الكاسبيز z-VAD-fmk (بتركيز 20 μM) لمدة 30 min، ثم تلا ذلك التحفيز باستخدام عامل نخر الورم البشري-α (h-TNF-α; 20 ng/mL) لمدة 12 h إضافية. تم تقييم حيوية الخلايا باستخدام مقايسة حيوية الخلايا بالتألق الضوئي وفقاً لإرشادات الشركة المصنعة. وقيس التألق باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة. كما فُحص شكل الخلايا تحت مجهر مقلوب، واكتُسبت صور ممثلة للتحليل.

الحيوانات:
تمت الموافقة على التجارب الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة هنان للطب الصيني (رقم الموافقة DWLLGZR202023). وأُجريت جميع الإجراءات وفقاً للإرشادات المؤسسية والوطنية الخاصة برعاية الحيوان وبالتزام تام مع إرشادات ARRIVE. استُخدمت ذكور الفئران من سلالة BALB/c التي تتراوح أعمارها بين 6 و8 أسابيع فقط لإنشاء نموذج CUMS. وُضعت الحيوانات في بيئة ذات درجة حرارة ورطوبة مضبوطة مع دورة ضوء/ظلام مدتها 12 h، ووُفر لها العلف القياسي والماء حسب الرغبة.

نموذج الاكتئاب المستحث بـ CUMS:
تم توزيع الفئران عشوائياً على مجموعة ضابطة أو مجموعة CUMS. وبعد أسبوع من التأقلم، خضعت الفئران في مجموعة CUMS لضغوط نفسية خفيفة متقطعة وغير متوقعة، بينما بقيت الفئران في المجموعة الضابطة دون تدخل. تضمن نموذج الإجهاد 13 مجهداً مختلفاً، بما في ذلك إمالة القفص، وهز القفص، وتبديل الأقفاص، وفرش السرير المبلل، وحرمان من الماء، والإضاءة الومضية، والتعرض للضوضاء، والضوء المستمر، والظلام المستمر، والإضاءة المتقطعة، والسباحة في الماء البارد (4°C)، والسباحة في الماء الدافئ (40°C)، وإجهاد التقييد، ومجهدات خفيفة أخرى. تم تطبيق كل مجهد لمدة تتراوح بين 2–6 h لكل جلسة بتسلسل عشوائي للحفاظ على عنصر عدم التوقع. وتعرضت الفئران لمجهد واحد أو مجهدين مختلفين يومياً وفقاً لجدول زمني عشوائي.

المجموعات والعلاج الدوائي:
بعد ستة أسابيع من التعرض لـ CUMS، وُزعت الفئران عشوائياً على مجموعات العلاج التالية: CUMS، وMXYS، وparoxetine، وNec-1. تلقت مجموعة MXYS مسحوق MXYS المجف بالتجميد عن طريق التزقيم الفموي بجرعة 35.2 g/kg/day. وتلقت مجموعة paroxetine عقار paroxetine بجرعة (20 mg/kg) عن طريق التزقيم الفموي، بينما تلقت مجموعة Nec-1 عقار Nec-1 بجرعة (10 mg/kg) عن طريق الحقن داخل الصفاق لمدة أربعة أسابيع متتالية. وخلال الفترة نفسها، تلقت مجموعتا الضبط وCUMS حجماً مكافئاً من المحلول الملحي العادي عن طريق التزقيم الفموي.

التجارب السلوكية:
تم توزيع الفئران عشوائيًا على المجموعات التجريبية باستخدام تسلسل أرقام عشوائية تم توليده بواسطة الحاسوب قبل البدء في إعطاء الدواء. وقد قام بتوليد تسلسل التوزيع العشوائي باحث مستقل لم يشارك في التجارب اللاحقة أو تحليل البيانات.

أجرى أحد الباحثين الاختبارات السلوكية مع تعمية تامّة عن مجموعات العلاج. كما قام الباحث نفسه بإجراء التقييم السلوكي القائم على الفيديو (وقت السكون، والمسافة المقطوعة، والوقت الذي قضاه الحيوان في المركز) باستخدام برنامج تتبع آلي لتقليل الانحياز الشخصي. ولم يتمكن الباحث المعمّى من الوصول إلى رموز تخصيص المجموعات حتى تم جمع كافة البيانات السلوكية وتسجيلها.

أجرى باحث منفصل تحليلات التألق المناعي، وكان هذا الباحث أيضاً محجوباً عن معرفة المجموعات التجريبية. تم تمييز العينات باستخدام معرفات مشفرة، ولم يتم الكشف عن تخصيص المجموعات إلا بعد الانتهاء من قياسات قياس الكثافة أو شدة التألق. أما التحليلات الإحصائية فقد أجراها باحث ثالث كان محجوباً عن تخصيص المجموعات والنتائج التجريبية المقابلة لها حتى تم تجميع كافة البيانات الكمية.

اختبار تفضيل السكروز (SPT): أُجريت الاختبارات السلوكية بعد الجرعة الأخيرة من الدواء. وقبل الاختبار، تم تعويد الفئران على محلول سكروز بتركيز 1% من خلال توفير زجاجتين تحتويان على محلول سكروز بتركيز 1% لمدة 12 ساعة، تلتها زجاجة واحدة تحتوي على محلول سكروز بتركيز 1% وزجاجة تحتوي على ماء شرب لمدة 12 ساعة إضافية. ثم حُرمت الفئران من الطعام والماء لمدة 12 ساعة قبل الاختبار الرسمي. وخلال الاختبار، وُفرت لكل فأر زجاجة واحدة تحتوي على محلول سكروز بتركيز 1% وزجاجة تحتوي على ماء شرب. وبعد مرور 12 ساعة، تم قياس الحجم المستهلك من كل زجاجة. وحُسب تفضيل السكروز وفق المعادلة التالية:

معادلة تفضيل السكروز، مؤشر تفضيل النظام الغذائي؛ الصيغة: مخطط نسبة تناول السكروز مقابل الماء.

اختبار تعليق الذيل (TST): ثُبِّت ذيل كل فأر في الجزء العلوي من جهاز الاختبار باستخدام شريط لاصق. سُجِّل سلوك الفئران لمدة 6 دقائق باستخدام برنامج لتحليل وتسجيل السلوك بالفيديو. كما تم قياس مدة عدم الحركة خلال الدقائق الأربع الأخيرة من الاختبار.

اختبار المجال المفتوح (OFT): تم وضع كل فأر بشكل فردي في مركز جهاز المجال المفتوح. سُجل النشاط السلوكي وحُلل لمدة 5 min باستخدام برنامج تتبع سلوكي، بما في ذلك مسافة التنقل ونشاط الحركة. بعد كل اختبار، تم تنظيف الجهاز باستخدام 75% ethanol.

جمع العينات:
تم استبعاد الفئران التي نفقت أثناء إجراء CUMS أو التي ظهرت عليها علامات مرض شديد (مثل فقدان الوزن بنسبة >20%، أو عدوى ظاهرة، أو عدم القدرة على الحركة) من الدراسة. تم تنفيذ القتل الرحيم بواسطة موظفين معتمدين باستخدام جرعة زائدة من sodium pentobarbital (بمقدار 150 mg/kg، عن طريق الحقن داخل الصفاق). وبعد فقدان الوعي، تم إجراء خلع الرقبة كطريقة ثانوية للتأكد من الوفاة. ولإجراء تحليلات صبغة Nissl والفلورة المناعية، تم اختيار ثلاثة فئران عشوائياً من كل مجموعة. أما أنسجة الحصين المخصصة لتحليل western blot فقد تم تشريحها فوراً على الثلج ثم تجميدها سريعاً في النيتروجين السائل.

صبغة نيسل:
لإجراء صبغة نيسل وتحليلات التألق المناعي، تم تخدير الفئران تخديرًا عميقًا باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم (150 mg/kg، عن طريق الحقن داخل الصفاق) ثم تم فصل الرأس دون تروية عبر القلب. استُؤصلت الأدمغة بسرعة وثُبتت في 4% بارافورمالدهيد لمدة 24-48 h قبل الطمر في البارافين. قُطعت مقاطع البارافين بسمك 3 μm. أُزيل البارافين من المقاطع عن طريق التحضين المتسلسل في محلول إزالة الشمع، والإيثانول المطلق، وإيثانول 75% قبل الشطف بالماء الجاري. أما المقاطع المجمدة، عند استخدامها، فقد أُعيدت إلى درجة حرارة الغرفة، وثُبتت باستخدام مثبت الأنسجة لمدة 15 min، ثم شُطفت بالماء الجاري. صُبغت مقاطع الأنسجة بمحلول صبغة نيسل لمدة 2-5 min، ثم شُطفت بالماء، ومُيزت باستخدام حمض الخليك الثلجي بتركيز 0.1%، وغُسلت لإيقاف التفاعل، وراقبت مجهريًا للتحكم في عملية التمييز، ثم جُففت، ونُقيت في الزايلين لمدة 10 min، وثُبتت باستخدام وسط تثبيت متعادل.

التألق المناعي:
أُجريت إجراءات التألق المناعي باستخدام الطرق القياسية. تم تثبيت أنسجة الدماغ في 4% paraformaldehyde وطمرها في البارافين لصبغ التألق المناعي. حُضنت مقاطع الأنسجة طوال الليل عند 4°C مع الأجسام المضادة الأولية ضد NeuN (1:20)، وMLKL (1:30)، وATF4 (1:50)، وCREB (1:10). وعقب التحضين مع الأجسام المضادة الأولية، غُسلت المقاطع أربع مرات باستخدام PBS وحُضنت لمدة 1 h في الظلام مع الأجسام المضادة الثانوية الفلورية المقابلة: goat anti-mouse IgG المقترن بـ CY3 (1:30، Servicebio، GB21301) لـ mouse anti-ATF4؛ وgoat anti-mouse IgG المقترن بـ Alexa Fluor 48 (1:400، Servicebio، GB25301) لـ mouse anti-MLKL؛ وgoat anti-rabbit IgG المقترن بـ CY3 (1:30، Servicebio، GB21303) لـ rabbit anti-NeuN؛ وgoat anti-rabbit IgG المقترن بـ Alexa Fluor 48 (1:400، Servicebio، GB25303) لـ rabbit anti-CREB. بعد ذلك، صُبغت المقاطع بـ DAPI لمدة 10 min في درجة حرارة الغرفة، وغُسلت بـ PBS، ثم ثُبتت باستخدام وسط تثبيت مانع للتلاشي، واكتُسبت صور التألق باستخدام المجهر البؤري.

لطخة وسترن:
تم تجنيس أنسجة الدماغ في محلول RIPA لتقويض الخلايا. تم تحديد تركيزات البروتين، ثم فُصل 20 μg من البروتين الكلي لكل مسار باستخدام الفصل الكهربائي للهلام بتركيز 10% من كبريتات دوديسيل الصوديوم وبولي أكريلاميد (SDS-PAGE) قبل النقل إلى أغشية PVDF. بعد عملية الحجب، حُضنت الأغشية طوال الليل عند 4°C مع الأجسام المضادة الأولية (1:100)، تلا ذلك التحضين مع الأجسام المضادة الثانوية المقترنة ببيروكسيداز الفجل (HRP) لمدة 1 h. تم تصور حزم البروتين باستخدام نظام تصوير كيميائي مضيء، وقُيّمت شدة الحزم باستخدام برنامج ImageJ. بالنسبة لتحليل لطخة وسترن لأنسجة الحصين، تم تحليل فأرين لكل مجموعة، وتظهر الصور الممثلة للمناعة. وبالنسبة لتجارب خلايا HT-2، أُجري تحليل لطخة وسترن مرة واحدة كتجربة ممثلة. تُعرض هذه البيانات كملاحظات لاتجاهات نوعية بدلاً من نتائج مكممة إحصائياً.

التحليل الإحصائي:
تم تحليل الفروق بين المجموعات باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA)، يليه اختبار توكي للمقارنات المتعددة. وعُرضت البيانات في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (SD). p قيمة < اعتُبِرت القيمة 0.05 ذات دلالة إحصائية.

توفر البيانات:
إن مجموعات البيانات التي تم إنتاجها وتحليلها خلال هذه الدراسة مدرجة في هذا المقال المنشور ومواده التكميلية. تتوفر نتائج تحديد المركبات بواسطة UHPLC-HRMS في الجدول التكميلي 1، بينما تلخص خصائص مجموعات بيانات GEO المستخدمة في التحليلات المعلوماتية الحيوية في الجدول التكميلي 2. كما تتوفر بيانات داعمة إضافية في المواد التكميلية، بما في ذلك التألق المناعي لبروتين GFAP (الشكل التكميلي 1)، وتلوين التألق المناعي لـ p-RIPK3 و p-MLKL (الشكل التكميلي 2)، والتصميم التجريبي والجدول الزمني لتوزيع الحيوانات (الشكل التكميلي 3)، وصور لطخة ويسترن الأصلية غير المقصوصة (الشكل التكميلي 4).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحديد WGCNA لوحدة جينية مرتبطة بالاكتئاب وغنية بمسار النخر المبرمج
استُخدمت حزمة RRA لدمج الجينات ذات التعبير التفاضلي التي أظهرت زيادة أو نقصاناً في التعبير بشكل متسق عبر مجموعات البيانات GSE54566 وGSE54565 وGSE54568، مما أدى إلى تحديد 2,513 جيناً. وتظهر الخريطة الحرارية لهذه الجينات في الشكل 1A. وقد استُمدت مجموعات البيانات الثلاث من مناطق دماغية مختلفة — القشرة الحزامية الأمامية، واللوزة الدماغية، والقشرة الجبهية الظهرية الجانبية — وشملت عينات من مرضى يعانون من اضطراب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يلعب الموت العصبي غير الطبيعي دوراً حاسماً في إمراضية الاكتئاب8. وقد خضع النخر المبرمج (Necroptosis)، وهو شكل من أشكال موت الخلايا المبرمج، لبحث مستفيض، مما أدى إلى تقدم كبير في تطوير مثبطات تستهدف هذا المسار39. ومنذ تحديد مثبط النخر المبرمج Nec-1 في عام 200540، تم إحراز تقدم ملحوظ في تطوير مركبات تستهدف المكونات الرئيسية لمسار إشارات النخر المبرمج. وقد أظهر Nec-1 تأثيرات وقائية ضد النخر المبرمج في نماذج من الأمراض العصبية والقلبية الوعائية والكلوية<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

تضارب المصالح:
ليس لدى المؤلفين ما يفصحون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال مشروع البحث العلمي الرئيسي لمؤسسات التعليم العالي في Henan بالصين (رقم 26A360008)، ومشروع البحث العلمي للطب الصيني التقليدي في مقاطعة Henan (رقم 2025ZY3152)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82274496)، ومشروع أبحاث العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة Henan (رقم 232301420018)، ومشروع Zhang Zhongjing للتوريث والابتكار التابع لإدارة العلوم والتكنولوجيا في الإدارة الوطنية للطب الصيني التقليدي (رقم GZY-KJS-2022-044-1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
جذمور أكوروس تاتارينووي (Acorus tatarinowii Schott؛ Shi Changpu)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين231001المكون العشبي (12 جم)
شريط لاصقغير قابل للتطبيقغير قابل للتطبيقاختبار تعليق الذيل
جذر أنجيليكا سينينسيس (Angelica sinensis (Oliv.) Diels؛ دانغ غوي)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصينG01230507-16مكون عشبي (10 جم)
جسم مضاد لـ ATF4 (تألق مناعي)ServicebioGB111137الجسم المضاد الأولي
جسم مضاد لـ ATF4 (لطخة ويسترن)MedChemExpressHY-P80486الجسم المضاد الأولي
جسم مضاد لـ BDNFMedChemExpressHY-P80567الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن
جسم مضاد لـ CREBBeyotimeAF1018الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن والفلورة المناعية
جسم مضاد لـ GAPDHAbcamab181602ضابط التحميل
جسم مضاد لـ MLKLProteintech66675-1-Igالأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن والتألق المناعي
جسم مضاد لـ NeuNServicebioGB11138الجسم المضاد الأولي للفحص المناعي الفلوري
الأجسام المضادة لبروتين CREB المفسفرBeyotimeAF5785الجسم المضاد الأولي
جسم مضاد لـ phospho-MLKLBiossbsm-54104Rالجسم المضاد الأولي
جسم مضاد مضاد لـ RIPK1 المفسفرBiolynxBX60008الأجسام المضادة الأولية
جسم مضاد لـ RIPK3 المفسفرAbcamab195117الجسم المضاد الأولي
جسم مضاد لـ RIPK1تكنولوجيا تأشير الخلايا3493Sالأجسام المضادة الأولية
جسم مضاد لـ RIPK3Proteintech17563-1-APالجسم المضاد الأولي
Atractylodes macrocephala (Atractylodes macrocephala Koidz.; باي تشو)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين230801مكون عشبي (10 جم)
برنامج تتبع سلوكي مؤتمتPanlab (Harvard Apparatus)لا ينطبقبرنامج SMART 3.0 لتتبع الفيديو في اختبارات الحقل المفتوح وتعليق الذيل
طقم مقايسة البروتين بطريقة BCACWBIOCW0014Sتقدير كمية البروتين
نظام تسجيل السلوكPanlab (Harvard Apparatus)SMART V3.0اختبارات المجال المفتوح وتعليق الذيل
نظام التصوير بالتألق الكيميائي من Bio-RadBio-Rad12003154نظام التصوير ChemiDoc MP للكشف عن لطخة ويسترن بالتلألؤ الكيميائي
طقم مقايسة حيوية الخلايا بالتألق الضوئي CellTiter-Lumi IIBeyotimeC0056XLمقايسة حيوية الخلايا
المجهر البؤريNikon Eclipse C1نظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تزويدي بالنص الذي ترغب في ترجمته من الإنجليزية إلى العربية وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة.التصوير المناعي الفلوري
DAPIServicebioG1012صبغة نووية
محلول إزالة الشمع الصديق للبيئةServicebioG1128إزالة الشمع البارافيني
مصل جنين البقر (FBS)الذكاء الاصطناعي (AI)C04001-500مكمل المزارع الخلوية
ثمار الغاردينيا (Gardenia jasminoides J. Ellis؛ Zhi Zi)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين22102109مكون عشبي (12 جم)
جذر العرقسوس (Glycyrrhiza uralensis Fisch.; Gan Cao)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين230301مكون عشبي (3 جم)
جسم مضاد من الماعز ضد IgG الفأري مقترن بـ CY3ServicebioGB21301جسم مضاد ثانوي فلوري للفأر المضاد لـ ATF4 (IF, CY3, 1:300)
جسم مضاد من الماعز ضد IgG الفأري مقترن بـ Alexa Fluor 488ServicebioGB25301جسم مضاد ثانوي فلوري للفأر المضاد لـ MLKL (تألق مناعي، Alexa Fluor 488، بنسبة 1:400)
جسم مضاد من الماعز ضد IgG الأرنب المقترن بـ CY3ServicebioGB21303جسم مضاد ثانوي فلوري للأجسام المضادة للأرانب ضد NeuN (IF, CY3, 1:300)
جسم مضاد IgG من الماعز ضد الأرنب مقترن بـ Alexa Fluor 488ServicebioGB25303جسم مضاد ثانوي فلوري ضد جسم مضاد لـ CREB من الأرنب (IF, Alexa Fluor 488, 1:400)
جسم مضاد من الماعز ضد IgG الأرنبي مرتبط بـ HRPأبسينabs20040الأجسام المضادة الثانوية لتحليل لطخة ويسترن
جسم مضاد للفأر مضاد للسلسلة الخفيفة لـ IgG للأرنب مقترن بـ HRPABclonalAS061الأجسام المضادة الثانوية لتحليل لطخة ويسترن
عامل نخر الورم البشري-αNovoproteinC008محفز النخر المبرمج
خلايا HT-22ProcellCL-0697RRID: CVCL_0321
وسط نمو HyCloneCytiva (HyClone)SH30022.01وسط زراعة الخلايا
ImageJالمعاهد الوطنية للصحة (NIH)برمجيات مجانيةالتقدير الكمي للنطاقات
مجهر مقلوبNikonEclipse Ti-SRمورفولوجيا الخلية
النيتروجين السائلشركة هينان جيلاي لتكنولوجيا الطاقة الجديدة المحدودة (Henan Jilai New Energy Technology Co., Ltd.)لا ينطبقحفظ الأنسجة
قارئ الأطباق الدقيقة من Molecular DevicesMolecular DevicesSpectraMax M5قياس التلألؤ البيولوجي
لحاء الموتان (Paeonia suffruticosa Andr.؛ Mu Danpi)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين22121714مكون عشبي (12 غرام)
نيكروستاتين-1 (Nec-1)SelleckS8037مُثبط RIPK1
بارافورمالدهيدServicebioG1101-500ملتثبيت الأنسجة
هيدروكلوريد الباروكستين نصف المميّهعلاء الدينP129711ضابط إيجابي
المحلول الملحي المنظم بالفوسفاتServicebioG4202-500MLمحلول غسيل منظم
النعناع (Mentha haplocalyx Briq.؛ Bo He)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين230101المكون العشبي (6 جم)
البنسلين–ستريبتومايسينGibco15140-122مضاد حيوي لزراعة الخلايا
جذر البوليجالا (Polygala tenuifolia Willd.; Yuan Zhi)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين20221101مكون عشبي (12 جم)
غشاء بولي فينيليدين فلورايد (PVDF)Merck MilliporeISEQ00010لطخة ويسترن (Western blot)
بوريا (Wolfiporia cocos؛ فو لينغ)شركة بكين تونغ رين تانغ المحدودة (Beijing Tongrentang Co., Ltd.)، تشنغتشو، الصينD23070601مكون عشبي (15 جم)
محلول التحلل الخاص بمقايسة الترسيب المناعي الإشعاعي (RIPA)CWBIO (Jiangsu Cowin Biotech Co., Ltd.)CW2333Sاستخلاص البروتين
جذر بوبلوروم (Bupleurum chinense DC.; Chai Hu)شركة Beijing Tongrentang المحدودة، تشنغتشو، الصين230801مكون عشبي (12 جم)
كواشف الفصل الكهربائي للهلام بوجود دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS-PAGE)Solarbio؛ Servicebio؛ شركة شنغهاي يواني للتقنية الحيوية المحدودة (Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd.).غير قابل للتطبيقأكريلاميد، وبيس-أكريلاميد، وتريس (Tris)، وSDS، وAPS، وTEMED محضرة داخلياً
بنتوباربيتال الصوديومشركة Sinopharm Chemical Reagent المحدودة69020181مخدر
نظام الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداءThermo Fisher Scientificنظام Vanquish UHPLCتحليل الكروماتوغرافيا السائلة ومطيافية الكتلة (LC-MS)
عمود UHPLC HSS-T3 (100 × ٢.١ مم، ١.٨ μم)واترز186003539الفصل الكروماتوغرافي
z-VAD-fmkTargetMolT6013مثبط الكاسبيز الشامل

المراجع

  1. Zhang Y, et al. Natural volatile oils derived from herbal medicines: A promising therapy way for treating depressive disorder. Pharmacol Res. 2021;164:105376.
  2. O’Connor EA, et al. Depression and suicide risk screening: Updated evidence report and systematic review for the US Preventive Services Task Force. JAMA. 2023;329(23):2068-85.
  3. World Health Organization. The global burden of disease: 2004 update. World Health Organization; Geneva; 2008.
  4. Pedrosa-Naudín MA, et al. Non-adherence to antidepressant treatment and related factors in a region of Spain: A population-based registry study. Pharmaceutics. 2022;14(12):2696.
  5. Huang Y, et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 2019;6(3):211-24.
  6. Thase ME. New medications for treatment-resistant depression: A brief review of recent developments. CNS Spectr. 2017;22(S1):39-48.
  7. Monteggia LM, Malenka RC, Deisseroth K. Depression: The best way forward. Nature. 2014;515(7526):200-1.
  8. Cao H, et al. Hippocampal proteomic analysis reveals activation of necroptosis and ferroptosis in a mouse model of chronic unpredictable mild stress-induced depression. Behav Brain Res. 2021;403:113261.
  9. Sun Y, et al. Dysmyelination by oligodendrocyte-specific ablation of Ninj2 contributes to depressive-like behaviors. Adv Sci (Weinh). 2022;9(3):e2103065.
  10. Zeb S, et al. Necroptotic kinases are involved in the reduction of depression-induced astrocytes and fluoxetine’s inhibitory effects on necroptotic kinases. Front Pharmacol. 2022;13:1060954.
  11. Duan YW, Chen SX, Li QY, Zang Y. Neuroimmune mechanisms underlying neuropathic pain: The potential role of the TNF-α-necroptosis pathway. Int J Mol Sci. 2022;23(13):7191.
  12. Frank D, Vince JE. Pyroptosis versus necroptosis: Similarities, differences, and crosstalk. Cell Death Differ. 2019;26(1):99-114.
  13. Vandenabeele P, Galluzzi L, Vanden Berghe T, Kroemer G. Molecular mechanisms of necroptosis: An ordered cellular explosion. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11(10):700-14.
  14. Linkermann A, Green DR. Necroptosis. N Engl J Med. 2014;370(5):455-65.
  15. Sun L, et al. Mixed lineage kinase domain-like protein mediates necrosis signaling downstream of RIP3 kinase. Cell. 2012;148(1-2):213-27.
  16. Cai Z, et al. Plasma membrane translocation of trimerized MLKL protein is required for TNF-induced necroptosis. Nat Cell Biol. 2014;16(1):55-65.
  17. Kaczmarek A, Vandenabeele P, Krysko DV. Necroptosis: The release of damage-associated molecular patterns and its physiological relevance. Immunity. 2013;38(2):209-23.
  18. Wallach D, Kang TB, Kovalenko A. Concepts of tissue injury and cell death in inflammation: A historical perspective. Nat Rev Immunol. 2014;14(1):51-9.
  19. Yuan J, Amin P, Ofengeim D. Necroptosis and RIPK1-mediated neuroinflammation in CNS diseases. Nat Rev Neurosci. 2019;20(1):19-33.
  20. Mitroshina EV, Saviuk M, Vedunova MV. Necroptosis in CNS diseases: Focus on astrocytes. Front Aging Neurosci. 2022;14:1016053.
  21. Gong Q, et al. RIPK1 inhibition mitigates neuroinflammation and rescues depressive-like behaviors in a mouse model of LPS-induced depression. Cell Commun Signal. 2024;22(1):427.
  22. Kwon TG, et al. A review of antidepressant and anxiolytic effects of Soyo-san (Xiaoyao-san) and modified Soyo-san in animal models. Phytomedicine. 2024;135:155387.
  23. Jiao H, et al. Xiaoyaosan ameliorates CUMS-induced depressive-like and anorexia behaviors in mice via necroptosis-related cellular senescence in the hypothalamus. J Ethnopharmacol. 2024;318(Pt A):116938.
  24. Yan ZY, et al. Antidepressant mechanism of traditional Chinese medicine formula Xiaoyaosan in a CUMS-induced depressed mouse model via RIPK1-RIPK3-MLKL-mediated necroptosis based on network pharmacology analysis. Front Pharmacol. 2021;12:773562.
  25. Wu M, et al. Integration of network pharmacology and experimental verification to reveal the active components and molecular mechanism of modified Danzhi Xiaoyao San in the treatment of depression. J Ethnopharmacol. 2025;337:118739.
  26. Chen X, et al. Therapeutic effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder combined with intravenous human umbilical cord mesenchymal stem cells on post-stroke depression. Chin J Pathophysiol. 2019;35(12):2274-79.
  27. Zhang J. Clinical observation of Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets in the treatment of 30 cases of depression. New J Tradit Chin Med. 2008;40(11):48-49.
  28. Zhang J, Zhang B. Thirty-five patients with post-stroke depression were treated with Shugan Jiannao Tiaoyu Tablets. New J Tradit Chin Med. 2006;38(3):75-76.
  29. Su P, et al. Modified Xiaoyao San reverses lipopolysaccharide-induced depression-like behavior through suppressing microglial M1 polarization by enhancing autophagy via the PI3K/AKT/mTOR pathway in mice. J Ethnopharmacol. 2023;308:116659.
  30. Guo X, et al. Effect of Jiawei Danzhi Xiaoyao Powder on mineralocorticoid receptor and glucocorticoid receptor in the hippocampus of depression model rats. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2014;20(11):119-22.
  31. Wang B, et al. Modified Danzhi Xiaoyaosan inhibits neuroinflammation by regulating the TRIM31/NLRP3 inflammasome in chronic unpredictable mild stress-induced depression. Exp Gerontol. 2024;187:112451.
  32. Wang M, et al. Sharing and community curation of mass spectrometry data with Global Natural Products Social Molecular Networking. Nat Biotechnol. 2016;34(8):828-37.
  33. Sawada Y, et al. RIKEN tandem mass spectral database (ReSpect) for phytochemicals: A plant-specific MS/MS-based data resource and database. Phytochemistry. 2012;82:38-45.
  34. Horai H, et al. MassBank: A public repository for sharing mass spectral data for life sciences. J Mass Spectrom. 2010;45(7):703-14.
  35. Wang M, et al. Targeting programmed cell death in inflammatory bowel disease through natural products: New insights from molecular mechanisms to targeted therapies. Phytother Res. 2024;38:4587-611.
  36. Huang X, et al. Shikonin overcomes drug resistance and induces necroptosis by regulating the miR-92a-1-5p/MLKL axis in chronic myeloid leukemia. Aging (Albany NY). 2020;12(17):17662-80.
  37. Yuan J, Najafov A, Py BF. Roles of caspases in necrotic cell death. Cell. 2016;167(7):1693-704.
  38. Mu R, et al. Activation of TGR5 ameliorates streptozotocin-induced cognitive impairment by modulating apoptosis, neurogenesis, and neuronal firing. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:3716609.
  39. Gardner CR, et al. From (tool)bench to bedside: The potential of necroptosis inhibitors. J Med Chem. 2023;66(4):2361-85.
  40. Degterev A ,et al. Chemical inhibitor of nonapoptotic cell death with therapeutic potential for ischemic brain injury. Nat Chem Biol. 2005;1(2):112-19.
  41. Cao L, Mu W. Necrostatin-1 and necroptosis inhibition: Pathophysiology and therapeutic implications. Pharmacol Res. 2021;163:105297.
  42. Vissers M, et al. Safety, pharmacokinetics and target engagement of the novel RIPK1 inhibitor SAR443060 (DNL747) for neurodegenerative disorders: Randomized, placebo-controlled, double-blind phase I/Ib studies in healthy subjects and patients. Clin Transl Sci. 2022;15(8):2010-23.
  43. Mo K, et al. Targeting HNRNPC suppresses thyroid follicular epithelial cell apoptosis and necroptosis through m6A-modified ATF4 in autoimmune thyroid disease. Pharmacol Res. 2023;195:106933.
  44. Liu J, et al. Brain-derived neurotrophic factor elevates activating transcription factor 4 (ATF4) in neurons and promotes ATF4-dependent induction of SESN2. Front Mol Neurosci. 2018;11:62.
  45. Tang H, Kang R, Liu J, Tang D. ATF4 in cellular stress, ferroptosis, and cancer. Arch Toxicol. 2024;98(4):1025-41.
  46. Pang BPS, et al. Deficiency of muscle-generated brain-derived neurotrophic factor causes inflammatory myopathy through reactive oxygen species-mediated necroptosis and pyroptosis. Redox Biol. 2024;74:103418.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نموذج فأر مصاب بالاكتئابالإجهاد المزمن غير المتوقعالتقييم السلوكيلطخة ويسترنتحليل التألق المناعيإصابة أنسجة الدماغفسفرة RIPK3UHPLC-HRMS
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.