يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

يعمل الروسكوجينين على تثبيط تطور سرطان البلعوم الأنفي من خلال خفض تنظيم KDM1A لتحفيز الموت الحديدي والموت الخلوي المبرمج بشكل مشترك

58 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72523

⸱

سبتمبر 3, 2026

1School of Stomatology and Optometry, Hubei University of Science and Technology

في هذه المقالة

ملخص

يهدف هذا البروتوكول إلى تقييم الفعالية المضادة للأورام لمادة ruscogenin في خلايا سرطان البلعوم الأنفي. ويفصل البروتوكول منهجيات شاملة — بما في ذلك فحوصات الحيوية، والهجرة، والاستماتة، والموت الحديدي — لتوضيح كيفية تحريض هذا المركب لموت الخلايا المزدوج عن طريق استهداف وتثبيط KDM1A.

الملخص

تعد سرطانة البلعوم الأنفي (NPC) ورماً خبيثاً شديد العدوانية. ويظهر المركب الطبيعي روسكوجينين (Rus) إمكانات مضادة للسرطان. توضح هذه الدراسة آلية العمل المحددة في سرطانة البلعوم الأنفي (NPC) من خلال استقصاء تأثيراته على خلايا NPC والمسار الجزيئي الكامن. تمت معالجة خط خلايا سرطانة البلعوم الأنفي البشري (NPC)، C666-1، بتركيزات مختلفة من Rus. وقد أجريت سلسلة من المقاييس in vitro لتقييم حيوية الخلايا، وتكاثرها، وهجرتها، وغزوها، والموت الخلوي المبرمج، والموت الحديدي. كما تم استقصاء دور نازعة ميثيل الليسين المحددة 1A (KDM1A) باستخدام لطخة ويسترن والرسو الجزيئي، وتم التحقق من دوره الوسيط من خلال تجارب إنقاذ فرط التعبير. أدى الروسكوجينين، بطريقة تعتمد على الجرعة، إلى تقليل القدرات التكاثرية، وتكوين المستعمرات، والهجرية، والغزوية لخلايا C666-1. ومن الناحية الميكانيكية، حفزت المعالجة بـ Rus كلاً من الموت الخلوي المبرمج، وهو ما ثبت من خلال تنشيط caspase-3 التنفيذي والتحول نحو إشارات محفزة للموت الخلوي المبرمج عبر توازن Bax/Bcl-2، والموت الحديدي، الذي تميز بارتفاع بيروكسيد الدهون والحديد داخل الخلايا. وارتبطت هذه التأثيرات المضادة للأورام ارتباطاً وثيقاً بتثبيط تعبير KDM1A. ومن الأهمية بمكان أن فرط التعبير القسري لـ KDM1A قلل بشكل كبير من الموت الخلوي المبرمج والموت الحديدي الناجم عن Rus، وعكس تثبيط الأنماط الظاهرية الخبيثة، مما يؤكد الدور الوسيط الحاسم لـ KDM1A. يثبط الروسكوجينين التقدم الخبيث لسرطانة البلعوم الأنفي عن طريق تثبيط تعبير KDM1A، وبالتالي تعزيز الموت الخلوي المبرمج والموت الحديدي. وتحدد هذه النتائج محور Rus-KDM1A كهدف علاجي واعد لعلاج NPC.

المقدمة

تُعدُّ سرطانة البلعوم الأنفي (NPC) نوعاً من السرطانات التي تنجم عن تضافر عوامل وراثية وبيئية1. وعلى الرغم من تحقيق العلاج الإشعاعي لتقدم ملحوظ في العلاج، إلا أن معدل البقاء على قيد الحياة الإجمالي لمرضى سرطانة البلعوم الأنفي لا يزال غير مرضٍ. ويرجع ذلك على الأرجح إلى قدرة خلايا سرطانة البلعوم الأنفي على التكاثر بسرعة وميلها الشديد للانتقال إلى العقد الليمفاوية الإقليمية والأعضاء البعيدة2. لذا، من الضروري استكشاف الآليات الجزيئية التي تعزز تطور سرطانة البلعوم الأنفي. ومؤخراً، وُجد أن الموت الحديدي (ferroptosis)، وهو نمط جديد من موت الخلايا يتم تنظيمه بواسطة Fe2+ وبيروكسيدات الدهون بطريقة تعتمد على الحديد، يلعب دوراً حاسماً في سرطانة البلعوم الأنفي3. وقد أثبتت الأدلة الحالية أن الموت الحديدي يلعب دوراً هاماً في سرطانة البلعوم الأنفي، وأن تحفيزه يمكن أن يعزز العلاج الإشعاعي للسرطان4,5.

نظرًا لانخفاض السمية وقلة الآثار الجانبية، استُخدمت التركيبات العشبية الصينية على نطاق واسع لعلاج السرطان لآلاف السنين6,7. وبصفتها نوعًا من الأدوية متعددة المكونات والأهداف ذات التأثير التآزري، استُخدمت وصفات الطب الصيني التقليدي (TCM) كعلاج تكميلي فعال في الوقاية من السرطان وعلاجه، بما في ذلك سرطان البلعوم الأنفي NPC8,9,10. وقد أفيد بأن جذور الأوفيوپوجون (RO)، وهي جذور النبات العشبي المعمر Ophiopogon japonicus، تخفف بفعالية من حدة سرطان البلعوم الأنفي NPC كعلاج مساعد11,12. كما أفيد بأن الروسكوجينين (Rus)، المكون الرئيسي في RO، يمتلك تأثيرات قوية مضادة للسرطان13. وفي نماذج الفئران المصابة بسرطان القولون والمستقيم، يمكن لـ Rus تحسين إصابة الموصلات المحكمة وتثبيط هجرة الورم14. والأهم من ذلك، يمكن لـ Rus أيضًا تقليل حيوية خلايا سرطان البنكرياس عن طريق تحفيز الموت الحديدي (ferroptosis). ومع ذلك، لا يزال تأثير Rus على سرطان البلعوم الأنفي NPC غير واضح.

تعد علم الوراثة فوق الجينية (Epigenetics) المجال البحثي الرئيسي في دراسة إمراض السرطان، وتوفر العديد من العلاجات الفعالة15. وباعتبارها إحدى التعديلات فوق الجينية المدروسة جيداً، تساهم ميثيلة الهيستون (histone methylation) في تطور السرطان، كما أنها تشكل هدفاً هاماً لتصميم الأدوية16. ويتم التعديل الديناميكي لميثيلة الهيستون بواسطة إنزيمات ناقلات الميثيل (methyltransferases) وإزالة الميثيل (demethylases)17. ويُعد KDM1A إنزيماً لإزالة ميثيلة ليسين الهيستون، وقد وُجد أنه يشارك بشكل حاسم في تكون السرطان نظراً لدوره في التعديل فوق الجيني18. بالإضافة إلى ذلك، وُجد أن KDM1A هو بروتين ورمي يتم التعبير عنه بشكل مرتفع في سرطانات متعددة، مثل سرطان الرئة وسرطان البنكرياس19. وقد ذكر Guo وآخرون أن ارتفاع KDM1A يمكن أن يثبط تعبير البروتين المتجانس للفوسفاتيز والتنسين (PTEN) ويعزز تكاثر خلايا سرطان البلعوم الأنفي (NPC) وهجرتها، بينما يثبط الموت الخلوي المبرمج20. وفي الوقت نفسه، وُجد أيضاً أن زيادة تنظيم KDM1A يمكن أن تكبح الموت الخلوي الحديدي (ferroptosis) في سرطان الرئة21. وأشار تحليل قاعدة بيانات Super-PRED إلى أن KDM1A يمثل هدفاً محتملاً لـ Rus.

على الرغم من الإمكانات المضادة للأورام المعترف بها لـ Rus في أنواع أخرى من السرطانات، إلا أن دوره المحدد وآلياته الجزيئية في سرطان البلعوم الأنفي لا يزالان غير مثبتين تماماً، مما يمثل فجوة بحثية كبيرة. علاوة على ذلك، وبينما ربطت تقارير سابقة بشكل منفصل KDM1A بتكاثر الورم ومقاومة الموت الحديدي (ferroptosis)، لم تستكشف أي دراسة حتى الآن ما إذا كان استهداف KDM1A يمكن أن يحفز مسارات متعددة لموت الخلايا في NPC في آن واحد. لذلك، توفر هذه الدراسة مبرراً قوياً لفرضية أن Rus قد يثبط التطور الخبيث لخلايا NPC من خلال التثبيط المباشر لـ KDM1A.

هدفت هذه الدراسة إلى معالجة هذه الفجوة من خلال التقييم المنهجي لتأثير Rus على تكاثر خلايا NPC وهجرتها وغزوها. تكمن الجدة الأساسية لهذا البحث في الكشف عن استراتيجية ذات آلية مزدوجة، حيث تم التركيز على قدرة Rus على تحفيز كل من الموت الخلوي المبرمج التقليدي (apoptosis) والموت الخلوي الحديدي (ferroptosis) المعتمد على الحديد في آن واحد. ومن خلال التحقق من محور إشارات Rus-KDM1A الجديد، تعزز هذه الدراسة المعرفة الحالية بشكل كبير عبر توضيح كيف يمكن لمركب طبيعي واحد التغلب على مرونة الورم من خلال حصر مسارات متعددة في وقت واحد، مما يقدم مبرراً واعداً في المرحلة قبل السريرية للعلاج الموجه لـ NPC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

زراعة الخلايا ومعالجتها وترنسفيكشن (نقل الجينات)

تم شراء خط خلايا سرطان البلعوم الأنفي البشري (NPC)، C666-1 (RRID: CVCL_M597)، وخط خلايا الظهارة الأنفية البلعومية البشرية غير الخبيثة، NP69 (RRID: CVCL_F755)، من مورد تجاري. تم توثيق كلا الخطين الخلويين عن طريق تحليل التكرارات المترادفة القصيرة (STR) والتأكد من خلوهما من تلوث الميكوبلازما قبل الاستخدام. وللزراعة الروتينية، تم إكثار خلايا C666-1 في وسط RPMI 1640 المدعم بـ 10% مصل جنين البقر (FBS) و 1% بنسيلين-ستريبتوميسين. أما خلايا NP69 فقد تمت زراعتها في وسط خالي من المصل للخلايا الكيراتينية مدعم بـ 10% FBS، و 10 ng/mL من عامل نمو البشرة المؤتلف، و 1% بنسيلين-ستريبتوميسين. تم شراء مادة Ruscogenin (Rus؛ نقاء ≥ 98%) من مورد تجاري. تم الحفاظ على كلا الخطين الخلويين في حاضنة مرطبة عند 37 °C تحت 5% CO₂. ولأغراض المعالجة، تعرضت الخلايا لـ Ruscogenin (Rus) بتركيزات متفاوتة (10، 20، 50 µM) لمدة 24 h22. ولعملية عفن الخلايا (transfection)، تم إدخال بلازميدات تشفر إنزيم lysine-specific demethylase 1A للإفراط في التعبير (oe-KDM1A) وناقل فارغ كمجموعة ضابطة سلبية مقابلة (oe-NC)، تم الحصول عليها من مورد تجاري، إلى خلايا C666-1 عندما وصلت درجة تلاقي الخلايا إلى 70–80%. وتحديداً، تم تخفيف 2.5 µg من DNA البلازميد و 5 µL من كاشف عفن يعتمد على الدهون في 150 µL من وسط منخفض المصل لكل منهما، ثم خلطهما بلطف، وحضنهما لمدة 20 min في درجة حرارة الغرفة، ثم إضافتهما إلى كل بئر في طبق سداسي الفتحات (6-well plate) وفقاً لبروتوكول الشركة المصنعة. تم تحضين الخلايا لمدة 48 h عند 37 °C، ومن ثم تم التأكد من كفاءة عملية العفن.

مقايسة مجموعة عد الخلايا-8 (CCK-8)

تم قياس حيوية الخلايا بعد العلاج بـ Rus باستخدام مقايسة CCK-8. وفي هذا الإجراء، تم استزراع الخلايا أولاً في أطباق ذات 96 بئراً وحضنها طوال الليل. ثم بدأت المقايسة بإضافة 10 µL من محلول CCK-8، وبعد تحضينها لمدة 2 h، تم قياس التغير اللوني الناتج ككثافة ضوئية (OD) عند 450 nm باستخدام قارئ الأطباق.

اختبار تكوين المستعمرات

لتقييم البقاء على قيد الحياة من خلال تكوين المستعمرات، تم استزراع خلايا C666-1 في أطباق ذات 6 آبار وتربيتها لمدة 14 يوماً. وبعد فترة الحضانة، تم تثبيت المستعمرات الناتجة باستخدام ميثانول 100% لمدة 10 دقائق، ثم تمت معاينتها باستخدام البنفسج البلوري 0.5% لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك، تم تقدير عدد المستعمرات المصبوغة عن طريق التصوير المجهري والعد.

لطخة وسترن (Western blot)

لإجراء تحليل لطخة ويسترن (Western blot)، تم أولاً استخلاص البروتين الكلي من الخلايا باستخدام منظم RIPA، ثم تم إجراء طرد مركزي للنواتج المحللة (12,000 × g) لجمع السائل الطافي. واستُخدم مقايسة BCA لتقدير مستويات البروتين. تم تحميل كميات متساوية من البروتين الكلي (30 µg لكل مسار) وفصلها بواسطة الفصل الكهربائي للهلام بتركيز 10% من دوديسيل كبريتات الصوديوم وبولي أكريلاميد (SDS-PAGE). وعقب الفصل، نُقلت البروتينات إلى أغشية فلوريد متعدد الفينيليدين (PVDF) عند جهد ثابت قدره 100 V لمدة 90 دقيقة على الثلج. ثم حُجبت الأغشية في 5% من ألبومين المصل البقري (BSA) المُحضّر في محلول ملحي منظم بالتريس مع 0.1% من Tween 20 (TBST) لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، تم تحضين الأغشية طوال الليل عند 4°C مع الأجسام المضادة الأولية التالية والمخففة في محلول الحجب (جميعها بنسبة 1:1000): Ki67 وPCNA وMMP2 وMMP9 وBcl-2 وBax وKDM1A وSLC7A11 وGPX4 وACSL4 وTFR1 وβ-actin. وأخيراً، بعد التحضين لمدة ساعتين مع أجسام مضادة ثانوية مقترنة بـ HRP، تم تصور النطاقات التفاعلية مناعياً باستخدام كاشف كشف التألق الكيميائي المعزز (ECL)، وأجري التحليل القياس الكثافي باستخدام برنامج تحليل الصور.

مقايسة خدش الجرح

بالنسبة لاختبار التئام الجروح، تم استزراع خلايا C666-1 حتى تصل إلى 80% من درجة التلاقي في أطباق مكونة من 6 آبار. تم إحداث جرح منتظم في الطبقة أحادية الخلايا عن طريق الكشط باستخدام رأس ماصة سعة 200 µL. تمت إزالة الخلايا المنفصلة بغسلها باستخدام PBS، وبعد ذلك استُبدل وسط الاستزراع بوسط خالٍ من المصل لفترة حضانة مدتها 24-h. تم التقاط صور لمنطقة الجرح عند الساعة 0 h و24 h باستخدام مجهر ضوئي لتقييم هجرة الخلايا.

مقايسة ترانسويل (Transwell assay)

تم تقييم غزو الخلايا باستخدام غرف transwell (حجم مسام 8-µm) مطلية مسبقاً بـ 50 µL من مصفوفة الغشاء القاعدي. وقُدرت القدرة الغزوية لخلايا C666-1 باستخدام غرف Transwell؛ حيث زُرعت الخلايا في الحجيرات العلوية وهي معلقة في وسط خالٍ من المصل، بينما احتوت الآبار السفلية على DMEM مع 10% FBS. وبعد تحضين لمدة 24-h، أُزيلت الخلايا المتبقية على الجانب القمي للغشاء بعناية. ولغرض القياس الكمي، ثُبتت الخلايا الموجودة على السطح القاعدي الجانبي في الميثانول، وصُبغت بـ 0.1% crystal violet، ثم تم عدّها من الصور الملتقطة بواسطة المجهر الضوئي.

قياس التدفق الخلوي

تم قياس الموت الخلوي المبرمج (Apoptosis) كمياً باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي (flow cytometry). ولتحضير العينات، جُمعت خلايا C666-1، وغُسلت بمحلول PBS مبرد بالثلج، ثم أُعيد تعليقها في 100 µL من محلول الربط المنظم (binding buffer). بعد ذلك، صُبغت الخلايا صبغاً مشتركاً باستخدام Annexin-V-FITC بتركيز (20 µg/mL) ويوديد البروبيديوم (PI). أُجريت عملية الصبغ هذه لمدة 15 min على الثلج، مع الحماية من الضوء. ثم جُمعت البيانات فوراً باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي لتحديد النسبة المئوية للخلايا التي تعاني من الموت الخلوي المبرمج.

الكشف عن نشاط caspase-3

تم قياس نشاط Caspase-3 باستخدام طقم مقايسة تجاري وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. وباختصار، تم تحليل خلايا C666-1، وجمعت الرواسب الطافية بعد الطرد المركزي عند 14,000 × g. وبعد تحضين لمدة 2 h مع الكاشف المرفق، تم تقدير الامتصاصية لكل راسب طافٍ عند 405 nm.

تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)

تم تنقية الحمض النووي الريبي الكلي (Total RNA) من خلايا C666-1 باستخدام كاشف تجاري لاستخلاص الـ RNA. ثم تم تحويل الـ RNA الناتج إلى حمض نووي ريبي منقوص الأكسجين متمم (cDNA) للسلسلة الأولى باستخدام طقم تجاري وفقاً لبروتوكول الشركة المصنعة. وبناءً على ذلك، أُجري تحليل التعبير الجيني بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) على نظام PCR في الوقت الفعلي باستخدام مزيج رئيسي يعتمد على SYBR Green. واستُخدمت طريقة Ct المقارنة (2⁻△△Ct) لتحديد مستويات النسخ النسبية. وكانت تسلسلات البادئات المستخدمة للتضخيم هي: β-actin (الأمامي: 5'-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3'؛ والعكسي: 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3') و KDM1A (الأمامي: 5'-TGACCGGATGACTTCTCAAGA-3'؛ والعكسي: 5'-GTTGGAGAGTAGCCTC AAATGTC-3').

مقايسة المواد المتفاعلة مع حمض الثيوباربيتوريك (TBARS)

لقياس بيروكسيد الدهون، جُهزت الرواسب الطافية أولاً من خلايا C666-1 عن طريق الترسيب (15% TCA، 500 mM BHA) والطرد المركزي لمدة 10 min عند 10,000 × g. بعد ذلك، تم تفاعل هذه الرواسب الطافية مع 0.375% حمض الثيوباربيتوريك، وسُخنت عند 100 °C لمدة 10 min لتكوين ناتج إضافة MDA-TBA. تم تحديد مستوى هذا الناتج، الذي يشير إلى بيروكسيد الدهون، عن طريق قياس الامتصاصية عند 532 nm باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة (microplate reader)23.

الكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) الدهنية

تم الكشف عن بيروكسيد الدهون باستخدام مسبار فلوروسنتي لبيروكسيد الدهون. تم استزراع خلايا C666-1 في أطباق ذات 6 آبار، وحُضنت طوال الليل، ثم عُرِّضت للمسبار الفلوروسنتي (2 µM). يظهر هذا المسبار إزاحة في الفلوروسنت من اللون الأحمر إلى الأخضر عند الأكسدة. تم تحليل نسبة الفلوروسنت الأخضر/الأحمر باستخدام مجهر بؤري ماسح بالليزر وبرنامج لتحليل الصور. كانت نسبة الفلوروسنت الأخضر/الأحمر المخططة محددة بوضوح واستُخدمت كمؤشر كمي لمستويات بيروكسيد الدهون24.

الكشف عن Fe2+

تم قياس مستوى حديد الحديد داخل الخلايا (Fe2⁺) باستخدام مسبار فلوري للحديد داخل الخلايا. حُضنت خلايا C666-1 مع 10 µM من المسبار الفلوري لمدة 10 min. وبعد الغسل باستخدام PBS لإزالة المسبار الزائد، تم تحليل الخلايا بواسطة المجهر الفلوري.

تحليل الالتحام الجزيئي

يُعد الالتحام الجزيئي طريقة حاسوبية محورية تسهل تصميم أدوية جديدة عن طريق التنبؤ بتقارب الارتباط والتفاعل بين الربيطة والبروتين المستهدف من خلال تقييم أنماط ارتباطهما25. تم الحصول على البنية ثلاثية الأبعاد لبروتين KDM1A (PDB ID: 6NQU) من صفحة الويب الخاصة بـ RCSB PDB (https://www.rcsb.org/). ولتحضير بنية بروتين KDM1A، تمت إزالة الماء والربيطات الصغيرة غير ذات الصلة. وقد أُجريت محاكاة الالتحام الجزيئي عبر برنامج الالتحام الجزيئي باستخدام الخوارزمية الجينية اللاماركية، بينما نُفذ التصوير المرئي باستخدام برنامج التصوير الجزيئي26.

التحليل الإحصائي

أُجريت جميع التجارب باستخدام ثلاث مكررات بيولوجية مستقلة على الأقل، وعُرضت النتائج كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD). أُجري التحليل الإحصائي باستخدام برنامج للتحليل الإحصائي. وقُيمت الاختلافات بين المجموعات المتعددة بواسطة تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعاً باختبار توكي (Tukey) للمقارنات المتعددة البعدية. واعتُبرت القيمة الاحتمالية (P-value) التي تقل عن 0.05 مؤشراً على وجود فرق ذو دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يعمل الروسكوجينين (Ruscogenin) بشكل انتقائي على تثبيط حيوية وتكاثر خلايا سرطان البلعوم الأنفي

بحثت الدراسة أولاً في تأثير ruscogenin (Rus) على حيوية كل من الخلايا الظهارية الطبيعية للبلعوم الأنفي (NP69) وخلايا سرطان البلعوم الأنفي (NPC) (C666-1). وكما تم تحديده بواسطة مقايسة CCK-8، لم يظهر علاج Rus بتركيزات 10 و20 و50 µM أي سمية ملحوظة تجاه خلايا NP69 الطبيعية. وعلى العكس من ذلك، أدى Ruscogenin (Rus) إلى إضعاف بقاء خلايا سرطان C666-1 بشكل كبير وبطريقة تعتمد على كل من التركيز و...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تعد سرطانة البلعوم الأنفي (NPC) ورماً خبيثاً شديداً يتسم بنسبة عالية من الانتشار، مما يفسر الحاجة الملحة إلى تدخلات علاجية أفضل27. يتم توضيح أن مادة الروسكوجينين (Rus)، وهي منتج طبيعي تم الحصول عليه كمشتق من Radix ophiopogonis، تمتلك تأثيرات قوية مضادة للأورام في خلايا سرطانة البلعوم الأنفي. كما خَلُص البحث إلى أن الروسكوجينين يمنع تطور سرطانة البلعوم الأنفي عن طريق تثبيط نازع ميثيل الهيستون KDM1A، وهو ما يحفز لاحقاً نوعين مختلفين من الموت الخلوي المبرمج، وهما الموت الخلوي المبرمج (apopto...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود أي تضارب في المصالح المالية. كما يعلن المؤلفون أنه لم يتم استخدام أي أدوات ذكاء اصطناعي توليدي في تصور الدراسة، أو جمع البيانات، أو تحليلها، أو إنشاء الأشكال التوضيحية. وقد استُخدمت التقنيات المساعدة بالذكاء الاصطناعي حصراً لإجراء تعديلات لغوية طفيفة وتصحيح القواعد النحوية أثناء صياغة هذه المخطوطة. ويتحمل المؤلفون المسؤولية الكاملة عن محتوى وسلامة العمل المنشور.

شكر وتقدير

غير قابل للتطبيق.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام 7500 Fast Real-Time PCRApplied Biosystems4351106تحليل RT-qPCR
طقم قياس موت الخلايا المبرمج Annexin-V-FITC/PIBD Biosciences556547كشف الموت الخلوي المبرمج باستخدام قياس التدفق الخلوي
جسم مضاد لبروتين ACSL4Abcamab155282الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن
جسم مضاد لبروتين BaxCell Signaling Technology (CST)5023الأجسام المضادة الأولية لطريقة "وسترن بلوت" (Western blot)
جسم مضاد لبروتين Bcl-2تكنولوجيا إشارات الخلايا (CST)15071الجسم المضاد الأولي لاختبار لطخة ويسترن
الأجسام المضادة
جسم مضاد لـ GPX4Abcamab125066الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة وسترن
جسم مضاد لـ KDM1A (LSD1)Cell Signaling Technology (CST)2139الأجسام المضادة الأولية لبصمة ويسترن (Western blot)
جسم مضاد لـ Ki67Abcamab16667الأجسام المضادة الأولية لبصمة ويسترن (Western blot)
جسم مضاد لـ MMP2Abcamab92536الأجسام المضادة الأولية لتقنية لطخة ويسترن
جسم مضاد لـ MMP9Abcamab76003الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن
جسم مضاد لـ PCNACell Signaling Technology (CST)13110الأجسام المضادة الأولية لتقنية لطخة ويسترن
مضاد IgG للأرنب، مرتبط بـ HRPCell Signaling Technology (CST)7074جسم مضاد ثانوي
جسم مضاد لـ SLC7A11 (xCT)Abcamab175186الأجسام المضادة الأولية لللطخة الغربية
جسم مضاد لـ TFR1Abcamab84036الأجسام المضادة الأولية لتحليل لطخة ويسترن
مضاد-βجسم مضاد لبروتين الأكتينCell Signaling Technology (CST)4970الأجسام المضادة الأولية للتحكم في تحميل البروتين
أطقم المقايسة
Autodock 4.2معهد سكريبس للأبحاث (Scripps Research Institute)يرجى تقديم النص المراد ترجمته.محاكاة الالتحام الجزيئي
طقم مقايسة البروتين بطريقة BCABeyotime BiotechnologyP0012تقدير كمية البروتين
مسبار BODIPY 581/591 C11Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)D3861الكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلية للدهون (2 μM)
خط الخلايا C666-1iCell Bioscience Inc.iCell-h378خط خلايا سرطان البلعوم الأنفي البشري
طقم مقايسة نشاط كاسبيز-3Beyotime BiotechnologyC1115تقييم الموت الخلوي المبرمج
طقم فحص CCK-8Dojindo Molecular TechnologiesCK04قياس حيوية الخلايا
المواد الكيميائية & الكواشف
جهاز قياس التدفق الخلوي CytoFLEXBeckman CoulterCytoFLEXتحليل الموت الخلوي المبرمج
كاشف الكشف بالتلألؤ الكيميائي الكهربائيMilliporeSigmaWBKLS0500تصوير لطخة وسترن (Immobilon)
المعدات
مصل جنين البقر (FBS)Gibco (Thermo Fisher Scientific)10099141مكمل المزرعة الخلوية
GraphPad Prism 8.0برمجيات GraphPadنظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تزويدي بالنص الإنجليزي المراد ترجمته إلى اللغة العربية وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة.التحليل الإحصائي والرسم البياني
برنامج ImageJالمعاهد الوطنية للصحة (NIH)يرجى تزويدي بالنص المصدر المراد ترجمته.تحليل قياس كثافة الصور
وسط خالٍ من المصل للخلايا الكيراتينيةiCell Bioscience Inc.iCell-019لأجل زراعة خلايا NP69
المجهر البؤري الماسح بالليزرCarl ZeissLSM 880التصوير الفلوري باستخدام BODIPY C11
مجهر ضوئي / مجهر فلوريOlympusIX73اختبار خدش الجرح، ترانسويل (Transwell) & تصوير أيونات الحديد الثنائي (Fe2+)
LightCycler 480 SYBR Green I MasterRoche Diagnostics4887352001تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي
كاشف Lipofectamine 2000Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)11668019كاشف عفن الخلايا
ماتريجيل (Matrigel)Corning356234مصفوفة الغشاء القاعدي لاختبار الغزو
قارئ الأطباق الدقيقةMolecular DevicesSpectraMax M5قياس الامتصاصية (405، 450، 532 نانومتر)
خط الخلايا NP69iCell Bioscience Inc.iCell-h431خط خلايا ظهارية أنفية بلعومية بشرية طبيعية
oe-KDM1A & بلازميدات oe-NCشركة Shanghai GenePharma Co., Ltd.التخليق المخصصالبلازميدات الخاصة بزيادة تعبير KDM1A
مسبار Phen Green SK (PGSK)Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)P14312الكشف عن أيونات الحديد الثنائي (Fe2+) داخل الخلايا (10 μM)
Pymol 3.0شيرودرöدينجرنظرًا لعدم توفر نص مصدر، يرجى تزويدي بالمحتوى العلمي الذي ترغب في ترجمته إلى اللغة العربية، وسأقوم بصياغته بدقة وفقًا للمعايير الأكاديمية والتقنية المحددة.تصوير الالتحام الجزيئي
طقم النسخ العكسيRoche Diagnostics4379012001طقم تخليق الحمض النووي المتمم (cDNA) للشريط الأول Transcriptor
محلول RIPA المنحل (RIPA lysis buffer)Solarbio (بكين، الصين)R0010استخلاص البروتين الكلي
وسط RPMI 1640iCell Bioscience Inc.iCell-0002لاستزراع خلايا C666-1
روسكوجينين (Rus)MedChemExpress (MCE)HY-N0193العلاج الدوائي، النقاء ≥ 98%
برمجيات
طقم فحص TBARSCayman Chemical10009055قياس بيروكسيد الدهون
كاشف TRizolInvitrogen (Thermo Fisher Scientific)*15596026استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (Total RNA)

المراجع

  1. Zhou R, Qiu L, Zhou L, Geng R, Yang S, Wu J. P4HA1 activates HMGCS1 to promote nasopharyngeal carcinoma ferroptosis resistance and progression. Cell Signal. 2023;105:110609.
  2. Cao JY, Liu L, Chen SP, Zhang X, Mi YJ, Liu ZG, et al. Prognostic significance and therapeutic implications of centromere protein F expression in human nasopharyngeal carcinoma. Mol Cancer. 2010;9:237.
  3. Dixon SJ, Lemberg KM, Lamprecht MR, Skouta R, Zaitsev EM, Gleason CE, et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell. 2012;149(5):1060-72.
  4. Liu S, Zhang HL, Li J, Ye ZP, Du T, Li LC, et al. Tubastatin A potently inhibits GPX4 activity to potentiate cancer radiotherapy through boosting ferroptosis. Redox Biol. 2023;62:102677.
  5. Amos A, Jiang N, Zong D, Gu J, Zhou J, Yin L, et al. Depletion of SOD2 enhances nasopharyngeal carcinoma cell radiosensitivity via ferroptosis induction modulated by DHODH inhibition. BMC Cancer. 2023;23(1):117.
  6. Jiang H, Li M, Du K, Ma C, Cheng Y, Wang S, et al. Traditional Chinese medicine for adjuvant treatment of breast cancer: Taohong Siwu decoction. Chin Med. 2021;16(1):129.
  7. Shang L, Wang Y, Li J, Zhou F, Xiao K, Liu Y, et al. Mechanism of Sijunzi decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115876.
  8. Yang CH, Tung KL, Wu YT, Liu C, Lin SC, Yang CC, et al. Qing Yan Li Ge Tang, a Chinese herbal formula, induces autophagic cell death through the PI3K/Akt/mTOR pathway in nasopharyngeal carcinoma cells in vitro. Evid Based Complement Alternat Med. 2021;2021:9925684.
  9. Ren T, Bai XY, Yang MZ, Xu N, Guo XZ, Qin LJ, et al. Gambogic acid suppresses nasopharyngeal carcinoma via rewiring the molecular network of cancer malignancy and immunosurveillance. Biomed Pharmacother. 2022;150:113012.
  10. Zhou T, Zhao S, Tang S, Wang Y, Wu R, Zeng X, et al. Guggulsterone promotes nasopharyngeal carcinoma cells' exosomal Circfip1L1 to mediate miR-125a-5p/VEGFA, affecting tumor angiogenesis. Curr Mol Pharmacol. 2023;16(8):870-80.
  11. Feng X, Shi H, Chao X, Zhao F, Song L, Wei M, et al. Deciphering the pharmacological mechanism of the herb Radix Ophiopogonis in the treatment of nasopharyngeal carcinoma by integrating iTRAQ-coupled 2-D LC-MS/MS analysis and network investigation. Front Pharmacol. 2019;10:253.
  12. Kim W, Lee WB, Lee J, Min BI, Lee H, Cho SH. Traditional herbal medicine as adjunctive therapy for nasopharyngeal cancer: a systematic review and meta-analysis. Integr Cancer Ther. 2015;14(3):212-20.
  13. Zhao J, He B, Seshadri VD, Xu S. Anticancer effect of ruscogenin in B(a)P-induced lung cancer in mice via modulation of proinflammatory cytokines and mitochondrial enzymes. Appl Biochem Biotechnol. 2022;194(12):5862-77.
  14. Rabitha R, Shivani S, Showket Y, Sudhandiran G. Ferroptosis regulates key signaling pathways in gastrointestinal tumors: underlying mechanisms and therapeutic strategies. World J Gastroenterol. 2023;29(16):2433-51.
  15. Feinberg AP, Koldobskiy MA, Göndör A. Epigenetic modulators, modifiers and mediators in cancer etiology and progression. Nat Rev Genet. 2016;17(5):284-99.
  16. Song Y, Wu F, Wu J. Targeting histone methylation for cancer therapy: enzymes, inhibitors, biological activity and perspectives. J Hematol Oncol. 2016;9(1):49.
  17. Zhang W, Ruan X, Li Y, Zhi J, Hu L, Hou X, et al. KDM1A promotes thyroid cancer progression and maintains stemness through the Wnt/β-catenin signaling pathway. Theranostics. 2022;12(4):1500-17.
  18. Ismail T, Lee HK, Kim C, Kwon T, Park TJ, Lee HS. KDM1A microenvironment, its oncogenic potential, and therapeutic significance. Epigenetics Chromatin. 2018;11(1):33.
  19. Hou X, Li Q, Yang L, Yang Z, He J, Li Q, et al. KDM1A and KDM3A promote tumor growth by upregulating cell cycle-associated genes in pancreatic cancer. Exp Biol Med (Maywood). 2021;246(17):1869-83.
  20. Guo D, Liu F, Zhang L, Bian N, Liu L, Kong L, et al. Long non-coding RNA AWPPH enhances malignant phenotypes in nasopharyngeal carcinoma via silencing PTEN through interacting with LSD1 and EZH2. Biochem Cell Biol. 2021;99(2):195-202.
  21. Lu C, Cai Y, Liu W, Peng B, Liang Q, Yan Y, et al. Aberrant expression of KDM1A inhibits ferroptosis of lung cancer cells through up-regulating c-Myc. Sci Rep. 2022;12(1):19168.
  22. Hua H, Zhu Y, Song YH. Ruscogenin suppressed the hepatocellular carcinoma metastasis via PI3K/Akt/mTOR signaling pathway. Biomed Pharmacother. 2018;101:115-22.
  23. Sun Q, Zhen P, Li D, Liu X, Ding X, Liu H. Amentoflavone promotes ferroptosis by regulating reactive oxygen species (ROS) /5'AMP-activated protein kinase (AMPK)/mammalian target of rapamycin (mTOR) to inhibit the malignant progression of endometrial carcinoma cells. Bioengineered. 2022;13(5):13269-79.
  24. Carlsen CU, Kurtmann L, Brüggemann DA, Hoff S, Risbo J, Skibsted LH. Investigation of oxidation in freeze-dried membranes using the fluorescent probe C11-BODIPY(581/591). Cryobiology. 2009;58(3):262-7.
  25. Liu J, Yuan S, Yao Y, Wang J, Scalabrino G, Jiang S, et al. Network pharmacology and molecular docking elucidate the underlying pharmacological mechanisms of Houttuynia cordata in treating SARS-CoV-2 pneumonia. Viruses. 2022;14(7).
  26. Zhu W, Li Y, Zhao J, Wang Y, Li Y, Wang Y. The mechanism of triptolide in the treatment of connective tissue disease-related interstitial lung disease based on network pharmacology and molecular docking. Ann Med. 2022;54(1):541-52.
  27. Lee AWM, Ng WT, Chan JYW, Corry J, Mäkitie A, Mendenhall WM, et al. Management of locally recurrent nasopharyngeal carcinoma. Cancer Treat Rev. 2019;79:101890.
  28. Li BH, Ma H, Zhu J, Chen J, Dai YQ, Zhang XJ, et al. Semisynthesis and anti-cancer properties of novel honokiol derivatives in human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells. J Enzyme Inhib Med Chem. 2023;38(1):2244694.
  29. Qiao H, Zhang W, Liu P, Zhu R, Zhang J, Gao J, et al. Ropivacaine inhibits proliferation and invasion and promotes apoptosis and autophagy in bladder cancer cells via inhibiting the PI3K/AKT pathway. J Biochem Mol Toxicol. 2023;37(1):e23233.
  30. Zhao L, Han S, Hou J, Shi W, Zhao Y, Chen Y. The local anesthetic ropivacaine suppresses the progression of breast cancer by regulating miR-27b-3p/YAP axis. Aging (Albany, NY). 2021;13(12):16341-52.
  31. Ghasemi A, Khanzadeh T, Zadi Heydarabad M, Khorrami A, Jahanban Esfahlan A, Ghavipanjeh S, et al. Evaluation of BAX and BCL-2 gene expression and apoptosis induction in acute lymphoblastic leukemia cell line CCRFCEM after high-dose prednisolone treatment. Asian Pac J Cancer Prev. 2018;19(8):2319-23.
  32. Wadey KS, Johnson JL, George SJ. Monitoring cellular proliferation and apoptosis in atherosclerotic plaques and intimal thickenings. Methods Mol Biol. 2022;2419:507-19.
  33. Chen P, Wang D, Xiao T, Gu W, Yang H, Yang M, et al. ACSL4 promotes ferroptosis and M1 macrophage polarization to regulate nasopharyngeal carcinoma tumorigenesis. Int Immunopharmacol. 2023;122:110629.
  34. Forcina GC, Dixon SJ. GPX4 at the crossroads of lipid homeostasis and ferroptosis. Proteomics. 2019;19(18):e1800311.
  35. Zhao Y, Li Y, Zhang R, Wang F, Wang T, Jiao Y. The role of erastin in ferroptosis and its prospects in cancer therapy. Onco Targets Ther. 2020;13:5429-41.
  36. Sareddy GR, Nair BC, Krishnan SK, Gonugunta VK, Zhang QG, Suzuki T, et al. KDM1 is a novel therapeutic target for glioma treatment. Oncotarget. 2013;4(1):18-28.
  37. Ferrari-Amorotti G, Fragliasso V, Esteki R, Prudente Z, Soliera AR, Cattelani S, et al. Inhibiting the interactions between the lysine demethylase LSD1 and snail/slug blocks cancer cell invasion. Cancer Res. 2013;73(1):235-45.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

المعالجة بالروسكوغينينتثبيط KDM1Aتحفيز الموت الحديديتحفيز الموت الخلوي المبرمجخلايا C666-1تكاثر الخلايالطخة ويسترنبيروكسيد الدهونتنشيط كاسبيز-3
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.