ينخفض مستوى miR‑486‑3p لدى مرضى الاحتشاء الدماغي الحاد المصابين بمتلازمة انقطاع التنفس النومى الانسدادي، ويرتبط سلبًا بشدة المرض والمؤشرات الالتهابية، كما يتنبأ بسوء الإنذار المرضي على مدى عام واحد، مما يدعم إمكانية استخدامه كعلامة بيولوجية تشخيصية وتنبؤية.
مقالة بحثية
دراسة أترابية استرجاعية لمستويات miR-486-3p في الدم المحيطي لدى المرضى المصابين باحتشاء دماغي حاد ومتلازمة انقطاع التنفس النومى الانسدادي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ينطوي احتشاء الدماغ الحاد (ACI) المصحوب بمتلازمة انقطاع التنفس sleep apnea obstructive syndrome (OSAS) على مخاطر عالية لتكرار السكتة الدماغية والوفاة، ومع ذلك لا تزال المؤشرات الحيوية الفعالة لهذه الحالة المرضية المشتركة محدودة. شملت هذه الدراسة الأترابية الاستعادية 270 مريضاً مصاباً باحتشاء الدماغ الحاد بين نوفمبر 2020 وديسمبر 2023، تم تصنيفهم إلى مجموعة ACI (العدد = 100، مؤشر انقطاع التنفس ونقص التنفس [AHI] < 5) ومجموعة ACI المصحوبة بـ OSAS (العدد = 170، AHI ≥ 5)، مع تقسيم المجموعة الأخيرة إلى مجموعات فرعية: خفيفة (5 ≤ AHI < 15، العدد = 60)، ومتوسطة (15 ≤ AHI < 30، العدد = 75)، وشديدة (AHI ≥ 30، العدد = 35). تم قياس تعبير miR-486-3p في المصل بواسطة RT-qPCR، كما تم تقدير المؤشرات الالتهابية، بما في ذلك عامل نخر الورم ألفا (TNF-α)، والبروتين التفاعلي C (CRP)، والعامل 1-ألفا المحث بنقص الأكسجين (HIF-1α)، باستخدام تقنية ELISA. تم تقييم القيمة التشخيصية لـ miR-486-3p باستخدام تحليل منحنى خصائص التشغيل للمستقبل، وتم تقييم أهميته الإنذارية من خلال تحليل البقاء لـ Kaplan-Meier ونماذج انحدار Cox. كان تعبير miR-486-3p أقل بشكل ملحوظ في المجموعة المصابة بالمرضين معاً، وأظهر قدرة تشخيصية قوية (AUC = 0.927). ومن الملاحظ وجود اتجاه واضح يعتمد على الجرعة عبر المجموعات الفرعية لشدة OSAS، حيث انخفض miR-486-3p تدريجياً بينما زاد TNF-α و CRP تدريجياً من الحالات الخفيفة إلى الشديدة من OSAS. وأظهرت تحليلات ارتباط Spearman أن miR-486-3p يرتبط ارتباطاً عكسياً مع AHI، ودرجة NIHSS، و TNF-α، و CRP. عند المتابعة لمدة عام واحد، أظهر المرضى الذين يعانون من تعبير منخفض لـ miR-486-3p نتائج وظيفية أسوأ بكثير مقارنة بمن لديهم تعبير مرتفع. وأكد تحليل انحدار Cox متعدد المتغيرات أن miR-486-3p يمثل عاملاً وقائياً مستقلاً للإنذار لمدة عام واحد. تشير هذه النتائج إلى أن miR-486-3p قد يعمل كمؤشر حيوي تشخيصي وإنذاري جديد لمرضى ACI المصابين بـ OSAS، ربما من خلال دوره التنظيمي في الالتهاب الجهازي، وهو ما يستدعي مزيداً من التحقق في مجموعات استشرافية أكبر.
المقدمة
تعد متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي النومي (OSAS) حالة شائعة تتميز بانقطاعات متكررة في التنفس أثناء النوم1. وغالباً ما ترتبط هذه المتلازمة بأمراض مصاحبة مثل الاضطرابات الأيضية، والقلبية الوعائية، والكلوية، والرئوية، والعصبية النفسية2. وعلاوة على ارتباطاتها العامة بأمراض القلب والأوعية الدموية والأمراض الأيضية، تشكل متلازمة OSAS تهديداً محدداً وخطيراً في حالات السكتة الدماغية الإقفارية الحادة، حيث تضاعف تعقيد ما يصل إلى 70% من الحالات وتزيد من مخاطر التدهور العصبي، والوفاة، وتكرار السكتة الدماغية3,4,5. ويشكل الاحتشاء الدماغي الحاد (ACI) الشكل الأكثر شيوعاً للسكتة الدماغية. ورغم تحقيق تقدم كبير في علاج الاحتشاء الدماغي الحاد في السنوات الأخيرة، إلا أن معظم المرضى لا يزالون يعانون من إعاقة شديدة أو حتى الوفاة6. ويؤدي التفاعل التآزري بين الاحتشاء الدماغي الحاد ومتلازمة OSAS إلى تفاقم التلف الإقفاري والالتهاب الجهازى، مما يرفع بشكل كبير من مخاطر تكرار السكتة الدماغية والإعاقة والوفاة. وبناءً على ذلك، تبرز أهمية قصوى لتحديد مؤشرات حيوية موثوقة للتشخيص المبكر وإدارة هذه الحالة المرضية المصاحبة عالية المخاطر.
أظهرت جزيئات الحمض النووي الريبي الميكروي (miRNAs) وعوداً كبيرة كعلامات بيولوجية في السنوات الأخيرة. ومن بين هذه الجزيئات، يكتسب miR-486-3p أهمية كبيرة في الأمراض الوعائية العصبية. وقد أظهرت الأبحاث السابقة أن تعبير miR-486-3p يكون مثبطاً في حالات انقطاع التنفس الانسدادي النومي (OSA)7. بالإضافة إلى ذلك، فإن العلاج باستخدام الإكسوسومات المحملة بـ miR-486-3p والبروتين السكري لفيروس داء الكلب يمكن أن يخفف من الاضطرابات السلوكية العصبية، والوذمة الدماغية، وتلف الحاجز الدموي الدماغي، والتنكس العصبي8، مما يشير إلى أن miR-486-3p يلعب دوراً في إصابة الدماغ. بعد حدوث الاحتشاء الدماغي الحاد (ACI)، يتم تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة في أنسجة الدماغ التالفة، مما يعزز إفراز السيتوكينات الالتهابية5. وتسبب متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي النومي (OSAS) أعراض نقص الأكسجة المتقطع، مما يؤدي إلى تنشيط الجهاز العصبي الودي والإجهاد التأكسدي، وبالتالي تحفيز سلسلة تفاعلات التهابية جهازية9. ويرتبط miR-486-3p ارتباطاً وثيقاً بالالتهابات10. وتشير هذه الأدلة إلى أن miR-486-3p قد يعمل كحلقة وصل جزيئية بين نقص الأكسجة المرتبط بـ OSAS، والالتهاب الجهازي، والتعافي بعد السكتة الدماغية.
ومع ذلك، لم يتم استقصاء ملف تعبيره، ودقته التشخيصية، وأهميته الإنذارية بشكل منهجي لدى مرضى ACI المصابين بـ OSAS، كما لا يزال من غير المعروف ما إذا كان يرتبط بشدة OSAS أو الوسطاء الالتهابيين بطريقة تعتمد على الجرعة. ولمعالجة هذه الفجوات، قيمت هذه الدراسة القيمة التشخيصية لـ miR-486-3p لمرض OSAS لدى مرضى ACI، وفحصت علاقته المعتمدة على الجرعة مع شدة OSAS والمؤشرات الالتهابية (TNF-α و CRP و HIF-1α)، وقيمت فائدته الإنذارية للنتائج الوظيفية لمدة عام واحد. وعلى حد علمنا، هذه هي الدراسة الشاملة الأولى التي تثبت أن miR-486-3p قد يعمل كعلامة بيولوجية تشخيصية وإنذارية جديدة للمراضة المشتركة ACI-OSAS، ربما من خلال تنظيم الالتهاب الجهازي.
البروتوكول
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات في المستشفى التابع لجامعة Xuzhou الطبية. (رقم الموافقة: XYFY2024-KL238-01) وقد أُعفيت من شرط الحصول على موافقة مستنيرة إضافية من المرضى. وترد الكواشف والمعدات المستخدمة في الـ جدول المواد.
المرضى والعينات
كانت هذه الدراسة دراسة أتراب استرجاعية. في الفترة من نوفمبر 2020 إلى ديسمبر 2023، تم استقطاب ما مجموعه 270 مريضاً خضعوا لعلاج ACI من المستشفى التابع لجامعة Xuzhou الطبية بشكل متتابع. وتلخص الشكل التكميلي 1 عملية اختيار المرضى. تم تحديد المرضى المؤهلين من خلال الفحص اليومي لجميع الحالات الجديدة التي أُدخلت إلى وحدة السكتة الدماغية. وتم التحقق من بدء ظهور الأعراض خلال 72 h قبل الإدخال من خلال مراجعة السجلات الطبية للطوارئ، وأكد ذلك طبيب أعصاب معتمد من خلال التاريخ المرضي والمقابلة مع الأسرة. تم حساب حجم العينة بناءً على القدرة على اكتشاف فرق معنوي في مستويات miR-486-3p بين المجموعات. وبافتراض حجم تأثير قدره 0.5، وقيمة α ثنائية الجانب قدرها 0.05، وقوة (1-β) تبلغ 0.80، كانت هناك حاجة إلى 64 مريضاً كحد أدنى لكل مجموعة. وتعكس أحجام المجموعات النهائية عمليات الاستقطاب الفعلية والانتشار الأعلى لـ OSAS بين مرضى السكتة الدماغية، وليس تخصيصاً محدداً مسبقاً. تمت متابعة المرضى المصابين بـ ACI المصاحب بـ OSAS من حيث مآل المرض لمدة عام واحد.
كانت معايير الاشتمال هي: (1) السكتة الدماغية الإقفارية الحادة مع ظهور الأعراض خلال 72 ساعة قبل الدخول إلى المستشفى، مؤكدة بالتصوير بالرنين المغناطيسي. (2) القدرة على فهم وإكمال استبيانات الدراسة والتقييمات العصبية. (3) تم تقييم شدة الإصابة بالسكتة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) باستخدام مقياس المعهد الوطني للصحة للسكتة الدماغية (NIHSS) عند الدخول. عندما تكون درجة مقياس NIHSS <٥، فيُصنف على أنه قصور دماغي حاد (ACI) خفيف؛ وعندما تكون درجة مقياس المعهد الوطني للسكتات الدماغية (NIHSS) بين ٥ و٢٠، يُعتبر القصور الدماغي الحاد متوسطاً. وشملت معايير الاستبعاد الرئيسية وجود تاريخ من الأورام الخبيثة، أو إعاقة جسدية شديدة سابقة أو اضطرابات نفسية، أو قصور شديد في القلب أو الرئة أو الكلى، أو خضوع المريض لجراحة كبرى أو تعرضه لصدمة خلال الأشهر الثلاثة السابقة، أو وجود عدوى نشطة أو أمراض مناعية ذاتية؛ أو إصابة بسكتة دماغية سابقة خلال ٦ أشهر؛ أو تلقي علاج مثبط للمناعة؛ أو تشخيص مسبق أو علاج لمتلازمة انقطاع التنفس الانسدادي النومي (OSAS) (بما في ذلك العلاج بضغط المجرى الهوائي الإيجابي المستمر).
للتأكيد عبر التصوير بالرنين المغناطيسي، خضع جميع المرضى لتصوير رنين مغناطيسي قياسي للدماغ باستخدام نظام 3.0-T، بما في ذلك التسلسلات التالية: التوزين T1، والتوزين T2، والاسترداد الانعكاسي بتوهين السوائل (FLAIR)، والتصوير الموزون بالانتشار (DWI)، وتخطيط معامل الانتشار الظاهري (ADC). وقد عُرِّفت الاحتشاءات الحادة بوجود إشارة عالية الكثافة في تصوير DWI مع إشارة منخفضة الكثافة مقابلة لها في تخطيط ADC. قام اثنان من أطباء الأشعة العصبية ذوي الخبرة بتفسير جميع صور الرنين المغناطيسي، وكانوا غير مطلعين على البيانات السريرية، مع حل أي تعارضات عن طريق التوافق. كما تم إجراء تقييم NIHSS عند الدخول من قبل أطباء أعصاب معتمدين قبل أي علاج مذيب للجلطات أو علاج داخل الأوعية الدموية.
جُمعت عينات دم وريدية في حالة صيام بعد مرور 24 ساعة إلى 48 ساعة من بداية السكتة الدماغية، وذلك بعد صيام ليلة كاملة لمدة 8 h على الأقل. وقد أُجري سحب الدم بين الساعة 6:00 صباحاً و8:00 صباحاً لتقليل التباين اليوماوي. جُمع إجمالي 5 mL من الدم الوريدي الطرفي في أنابيب تفريغ مطلية بمادة EDTA. وفي غضون ساعتين من الجمع، تم طرد عينات الدم مركزياً عند 1,500 × g لمدة 15 min عند 4 °C باستخدام جهاز طرد مركزي مبرد. ثم نُقل المزيج الطافي من المصل بعناية إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 mL خالية من RNase، وخُزنت فوراً عند −80 °C حتى استخلاص RNA. تم تجنب دورات التجميد والإذابة المتكررة بدقة؛ حيث خضعت جميع العينات الموزعة لدورة تجميد وإذابة واحدة كحد أقصى قبل التحليل.
تجميع المرضى
تم تجميع المشاركين بناءً على درجات مؤشر توقف التنفس ونقص الأكسجين (AHI) المستمدة من تخطيط النوم. أُجريت جميع التسجيلات في مختبر النوم بالمستشفى بين الساعة 10:00 مساءً و6:00 صباحاً ولمدة لا تقل عن 7 h. شملت القنوات الفسيولوجية المراقبة ما يلي: تخطيط كهربائية الدماغ (EEG؛ ست قنوات)، وتخطيط كهربائية العين (EOG؛ قناتان)، وتخطيط كهربائية العضلات (EMG؛ الذقن والعضلات الظنبوبية الأمامية الثنائية)، وتخطيط كهربائية القلب (ECG؛ طرف واحد)، وتدفق الهواء الأنفي (المقاوم الحراري ومحول الضغط)، والجهد التنفسي الصدري والبطني (تخطيط تحريض التنفس)، وقياس تأكسج النبض (SpO2). قام فني دراسة النوم بحساب AHI. تم تقييم مراحل النوم والأحداث التنفسية يدوياً بواسطة فني نوم معتمد وفقاً لدليل تسجيل الأكاديمية الأمريكية لطب النوم (AASM) لعام 2012، باستخدام برنامج Somnolyzer 24×7. وفقاً للمعايير التشخيصية المقبولة على نطاق واسع من الأكاديمية الأمريكية لطب النوم، فإن قيمة AHI التي تبلغ 5 أحداث أو أكثر في الساعة هي العتبة القياسية لتشخيص انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSA). وبناءً على ذلك، صُنِّف المشاركون الذين لديهم AHI < 5 ضمن مجموعة ACI (العدد = 100)، بينما صُنِّف الذين لديهم AHI ≥ 5 ضمن مجموعة ACI المصابة بـ OSAS (العدد = 170). ومن بين أولئك الذين لديهم AHI ≥ 5 (مجموعة ACI المصابة بـ OSAS، العدد = 170)، تم تقسيم المرضى إلى ثلاث مجموعات فرعية حسب شدة الحالة بناءً على المعايير المعتمدة: OSAS خفيف (5 ≤ AHI < 15، العدد = 60)، وOSAS متوسط (15 ≤ AHI < 30، العدد = 75)، وOSAS شديد (AHI ≥ 30، العدد = 35). مكّن هذا التقسيم من تقييم العلاقة المعتمدة على الجرعة بين عبء نقص الأكسجة، وتعبير miR‑486‑3p، والمؤشرات الالتهابية. لم يتم إدراج المرضى الذين خضعوا لعلاج سابق لـ OSAS (مثل CPAP) في الدراسة لتجنب تداخل النتائج في قياس AHI الأساسي.
تقييم الإنذار المرضي
تتيح النقطة الزمنية عند مرور سنة واحدة تلاشي التأثيرات الحادة وظهور العبء التراكمي لنقص الأكسجة الناتج عن OSAS، مما يوفر نافذة قوية لتقييم تأثيره الإنذاري. تم تقييم الإنذار السريري للمرضى الذين يعانون من ACI المصاحب لـ OSAS باستخدام مقياس رانكين المعدل (mRS) بعد ظهور المرض. أجرى جميع تقييمات mRS أطباء أعصاب معتمدون خضعوا لتدريب معياري قبل الدراسة، وذلك باستخدام نموذج مقابلة mRS المهيكل. تم تقييم الموثوقية بين المقيمين باستخدام معامل كابا >0.85. أُجري تقييم المتابعة من خلال زيارة مجدولة للعيادات الخارجية. أما بالنسبة للمرضى غير القادرين على الحضور شخصيًا، فقد أجرت ممرضة أبحاث مدربة مقابلة هاتفية مهيكلة باستخدام نص معياري. كان جميع المقيمين عميانيين تجاه مستويات miR-486-3p وحالة OSAS لدى المرضى. وللحفاظ على الاتساق بين تقييمات العيادات الخارجية والتقييمات الهاتفية، استخدم كلا التنسيقين نفس الاستبيان المهيكل، وأكمل جميع المقيمين تمرين معايرة قبل الدراسة. تم وضع المرضى الذين سجلوا درجات من 0 إلى 2 في مجموعة الإنذار الجيد، وأولئك الذين سجلوا درجات من 3 إلى 6 في مجموعة الإنذار السيئ. لم يتم فقدان أي مريض أثناء المتابعة. تم تقييم SAQLI وESS وTNF-α وHIF-1α كمتغيرات إنذارية بدلاً من استخدامها لتحديد مجموعات الإنذار. تم إجراء NIHSS وSAQLI وESS من قبل موظفي أبحاث مدربين. كما أُجري SAQLI وESS كاستبيانات يديرها القائم بالمقابلة في غرفة هادئة.
مؤشر التقييم
يعد NIHSS مقياساً كمياً للسكتة الدماغية11، حيث تشير الدرجات الأعلى إلى شدة أكبر في ACI. أما SAQLI فهو استبيان لجودة الحياة لمرضى OSA على مقياس من 1 إلى 7، وتشير الدرجات الأعلى إلى جودة حياة أسوأ، وهو يغطي الأنشطة اليومية، والتفاعلات الاجتماعية، والحالات العاطفية، والأعراض، والأعراض المرتبطة بالعلاج12. ويُستخدم ESS لفحص النعاس النهاري المبلغ عنه ذاتياً من قبل المرضى، وتتراوح درجاته من 0 إلى 24، وتشير الدرجة > 10 إلى وجود نعاس نهاري13.
استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA) والنسخ العكسي
تم استخلاص الـ RNA الكلي من 200 µL من المصل باستخدام كاشف TRIzol. وباختصار، خُلطت عينات المصل مع 800 µL من TRIzol، وحُضنت في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 min، ثم وُضعت في جهاز الطرد المركزي عند 12,000 × g لمدة 15 min عند 4 °C. أُضيف الكلوروفورم (200 µL)، ورُج الخليط بقوة لمدة 15 s، ثم حُضن لمدة 3 min، ووُضع في جهاز الطرد المركزي عند 12,000 × g لمدة 15 min عند 4 °C. نُقلت الطور المائي إلى أنبوب جديد، ورُسب الـ RNA باستخدام 500 µL من الإيزوبروبانول، وحُضن عند −20 °C لمدة 1 h، ثم وُضع في جهاز الطرد المركزي عند 12,000 × g لمدة 10 min عند 4 °C. غُسلت كتلة الـ RNA المترسبة بإيثانول 75%، وجُففت بالهواء، ثم أُذيبت في 20 µL من ماء خالٍ من RNase. تم تقييم تركيز ونقاء الـ RNA باستخدام مقياس الطيف الضوئي للميكرو-حجم، مع قبول نسبة A260/A280 التي تتراوح بين 1.8 و 2.0 للتحليلات اللاحقة. كما تم التحقق من سلامة الـ RNA عن طريق الفصل الكهربائي لهلام الأجاروز.
أُجري النسخ العكسي باستخدام 500 ng من إجمالي RNA باستخدام Reverse Transcription Kit في حجم تفاعل كلي قدره 20 µL، مع استخدام بادئات سداسية عشوائية (random hexamer primers) وفقاً لبروتوكول الشركة المصنعة. نُفذ تفاعل النسخ العكسي عند 25 °C لمدة 10 min، ثم عند 42 °C لمدة 60 min، وأخيراً عند 70 °C لمدة 5 min. حُفظ الـ cDNA الناتج عند −20 °C حتى وقت الاستخدام.
تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)
تم الكشف عن تعبير miR-486-3p باستخدام طقم PCR في الوقت الحقيقي يعتمد على SYBR Green لتقدير كمية microRNA على نظام PCR كمي في الوقت الحقيقي (qPCR). احتوى مزيج التفاعل على 10 µL من 2× SYBR Green Master Mix، و2 µL من قالب cDNA (مخفف بنسبة 1:5)، و1 µL من كل بادئ (10 µM)، وماء خالٍ من النوكلياز حتى يصل الحجم النهائي إلى 20 µL. تسلسلات البادئات هي كما يلي (من 5'-3'): miR-486-3p-forward: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU، وreverse: CTCAACTGGTGTCGTGGA؛ وU6-forward: CTCGCTTCGGCAGCACA، وreverse: AACGCTTCACGAATTTGCGT. كانت ظروف دورات qPCR كالتالي: 95 °C لمدة 2 min، تليها 40 دورة من 95 °C لمدة 30 s، و60 °C لمدة 30 s، و72 °C لمدة 60 s. تم تشغيل كل عينة في ثلاث مكررات، وتم تضمين ضابط خالي من القالب في كل تشغيلة. تم تأكيد خصوصية التضخيم من خلال تحليل منحنى الانصهار من 60 °C إلى 95 °C. تم تحديد عتبة الدورة (Ct) تلقائياً بواسطة برنامج QuantStudio 6 Pro (v1.5) باستخدام إعداد العتبة الافتراضي. حُسب مستوى miR-486-3p باستخدام طريقة 2-ΔΔCT وتمت معايرته بالنسبة إلى U6. تم التحقق من U6 كجين مرجعي مستقر في عينات المصل الخاصة بنا باستخدام خوارزمية NormFinder لضمان الاتساق عبر المجموعات. كانت معاملات الاختلاف بين المقاييس وداخل المقياس الواحد <5%.
مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
تم قياس تركيزات البروتين التفاعلي C (CRP)، وTNF-α، وHIF-1α في المصل باستخدام مجموعة أدوات ELISA. وقد نُفذت الإجراءات التجريبية وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. وباختصار، تم إذابة عينات المصل على الجليد وتخفيفها بنسبة 1:2 باستخدام محلول التخفيف المرفق. أضيفت العينات والمعايير إلى ألواح ذات 96 بئراً مطلية مسبقاً (100 µL/بئر) وحُضنت لمدة 2 h عند 37°C. وبعد الغسل أربع مرات باستخدام 300 µL من محلول الغسل، أضيف 100 µL من الجسم المضاد للكشف المقترن بالبيوتين وحُضن لمدة 1 h عند 37°C. وعقب خطوة غسل أخرى، أضيف 100 µL من الستريبت افيدين المقترن ببيروكسيداز الفجل (horseradish peroxidase) وحُضن لمدة 30 min عند 37°C في الظلام. ثم أضيفت المادة التفاعل اللونية (tetramethylbenzidine، 100 µL) وحُضنت لمدة 15 min عند 37°C مع الحماية من الضوء. أوقف التفاعل بإضافة 50 µL من محلول الإيقاف، وقِيست الامتصاصية عند 450 nm باستخدام قارئ الألواح الدقيقة (microplate reader). حُسبت التركيزات من منحنيات قياسية أُنتجت باستخدام تركيزات معروفة من البروتينات المؤشبة. قِيست كل عينة في مكررات، واستُخدمت القيمة المتوسطة للتحليل. كما تضمنت كل لوحة عينات ضبط الجودة المقدمة من الشركة المصنعة؛ ولم تُقبل النتائج إلا عندما وقعت قيم ضبط الجودة (QC) ضمن النطاق المحدد من قبل الشركة المصنعة.
ضبط الجودة وقابلية التكرار
أُجريت جميع المقايسات المختبرية وفقًا لإرشادات MIQE (الحد الأدنى من المعلومات لنشر تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي) الخاصة بـ RT-qPCR ومعايير التقارير المناسبة لتقنية ELISA. وقد تمت معايرة الأجهزة الرئيسية وفقًا لجداول الشركة المصنعة. كما شملت كل مجموعة من تشغيلات RT-qPCR وELISA عينات ضابطة سالبة وموجبة لمراقبة التباين بين الأطباق. سُجلت جميع البيانات وأُديرت باستخدام برنامج Microsoft Excel، وسيقوم المؤلف المسؤول بتوفير البروتوكولات التجريبية التفصيلية والبيانات الخام بناءً على طلب معقول.
التحليل الإحصائي
تم تحليل البيانات باستخدام برنامج SPSS 23.0 وبرنامج آخر للإحصاء والرسم البياني. وقُيِّم التوزيع الطبيعي باستخدام اختبار شابيرو-ويلك (Shapiro–Wilk). وتُعرض المتغيرات المستمرة في صورة متوسط حسابي. ± الانحراف المعياري أو الوسيط (المدى الرباعي)، وتمت مقارنتها باستخدام اختبار t أو اختبار مان-ويتني U، حسبما كان مناسباً. أما المتغيرات الفئوية فقد قورنت بواسطة χ2 الاختبار. تم فحص الارتباطات باستخدام تحليلات بيرسون أو سبيرمان بناءً على توزيع البيانات. كما تم تحديد القيمة التنبؤية باستخدام منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC)، وتم التحقق منها من خلال التحقق المتقاطع خماسي الطيات (5-fold cross-validation). وتحددت قيمة القطع المثلى لـ miR-486-3p من خلال تعظيم مؤشر يودن (Youden index). واستُخدمت تحليلات ارتباط بيرسون وسبيرمان لتقييم الارتباطات. وفيما يخص تحليل الإنذار، تم تقسيم المرضى إلى طبقات بناءً على القيمة الوسيطة للتعبير عن miR‑486‑3p؛ واستُخدمت منحنيات كابلان-ماير مع اختبار رتبة السجلات (log‑rank test) لمقارنة نتائج البقاء على قيد الحياة بين المجموعات. أما المتغيرات ذات... P < أُدخلت المتغيرات التي كانت قيمة p لها 0.1 أو أقل في تحليل ريجريشن كوكس أحادي المتغير إلى نموذج كوكس متعدد المتغيرات. P < اعتُبرت القيمة 0.05 ذات دلالة إحصائية.
النتائج
الخصائص الأساسية في مجموعة ACI ومجموعة ACI المصابة بـ OSAS مجتمعة
كما هو موضح في الجدول 1، تكونت مجموعة ACI من 68 ذكراً و32 أنثى، بمتوسط عمر بلغ 62.84 ± 12.65 سنة، بينما شملت مجموعة ACI المصابة بـ OSAS مجتمعة 16 ذكراً و54 أنثى، بمتوسط عمر بلغ 61.31 ± 1.25 سنة. أظهرت مجموعة ACI المصابة بـ OSAS مجتمعة ارتفاعاً ملحوظاً في قيمة AHI، ودرجات NIHSS، ومستويات CRP. ومع ذلك، أظهرت المجموعتان توزيعات متقاربة من حيث العمر، والجنس، وBMI، وارتفاع ضغط الدم، وDM، وأمراض القلب، وعسر شحوم الدم، والتدخين، والشرب، وإذابة الخثرة، وTOAST.
التغيرات في miR-486-3p وعلامات الالتهاب عبر المجموعات الفرعية لشدة OSAS
لتقييم العلاقة المعتمدة على الجرعة بين شدة OSAS والتغيرات الجزيئية، قمنا بتصنيف 170 مريضاً يعانون من ACI و OSAS إلى مجموعات فرعية خفيفة (5 ≤ AHI < 15، العدد = 60)، ومتوسطة (15 ≤ AHI < 30، العدد = 75)، وشديدة (AHI ≥ 30، العدد = 35) بناءً على معايير AHI. وكما هو موضح في الشكل 1A–C، لوحظ نمط متدرج واضح عبر المجموعات الأربع (ACI، وOSAS الخفيفة، والمتوسطة، والشديدة). وتحديداً، انخفض تعبير miR-486-3p تدريجياً من مجموعة ACI وصولاً إلى المجموعة الفرعية لـ OSAS الشديدة (الشكل 1A، P < 0.01 مقارنة بـ مجموعة ACI). وفي المقابل، ارتفعت مستويات TNF-α و CRP في المصل تدريجياً مع زيادة شدة OSAS (الشكل 1B,C، P < 0.01 مقارنة بمجموعة ACI). وتشير هذه النتائج إلى أن العبء الناجم عن نقص الأكسجة الذي يفرضه OSAS يرتبط بتثبيط متدرج لـ miR-486-3p وزيادة موازية في الالتهاب الجهازِي.
القيمة التشخيصية لـ miR-486-3p في الكشف عن متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم لدى المرضى المصابين بالسكتة الدماغية الإقفارية الحادة
قد يكون لـ miR-486-3p قيمة تشخيصية كبيرة في حالات متلازمة انقطاع النفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) المصاحبة لقصور التروية الدماغية الحاد (ACI)، حيث بلغت المساحة تحت المنحنى (AUC) 0.927 (وكانت قيمة القطع المثلى 0.845)، بينما بلغت الحساسية والنوعية 92.94% و79.0% على التوالي (الشكل 1D). ولتقييم متانة النموذج التشخيصي واستبعاد احتمالية حدوث فرط التخصيص (overfitting)، تم إجراء تحقق تبادلي خماسي الطيات (5‑fold cross‑validation) لتحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC analysis) لـ miR‑486‑3p. وكما هو موضح في الجدول التكميلي 1وكان متوسط المساحة تحت المنحنى (AUC) عبر الطيات الخمس 0.928 (تراوحت بين 0.847 و0.969)، وهو ما يتوافق بشدة مع المساحة تحت المنحنى الظاهرية البالغة 0.927 من التحليل الأصلي. وكان متوسط الحساسية والخصوصية 8.83% و87.00% على التوالي.
ارتباطات miR-486-3p مع شدة السكتة الدماغية وعلامات الالتهاب في حالات ACI المصحوبة بـ OSAS
في مجموعة ACI مع OSAS، كشفت تحليلات ارتباط سبيرمان أن تعبير miR-486-3p ارتبط ارتباطاً سلبياً معنوياً مع درجة NIHSS (الشكل 2A)، وTNF-α (الشكل 2B)، وCRP (الشكل 2C).
المؤشرات الإنذارية في مجموعتي الإنذار الجيد والإنذار السيئ
تم تقسيم المرضى المصابين بالسكتة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) المصحوبة بمتلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) إلى مجموعة ذات إنذار جيد ومجموعة ذات إنذار سيئ بناءً على درجات مقياس رانكين المعدل (mRS). وكما هو موضح في الجدول 2، فقد ارتفعت درجات mRS، ودرجات SAQLI، ودرجات ESS، ومستويات HIF-1α، وTNF-α في مجموعة الإنذار السيئ.
القيمة الإنذارية لـ miR-486-3p بالنسبة للنتائج بعد عام واحد لدى المرضى المصابين بـ ACI المقترنة بـ OSAS
أشارت نتائج منحنى Kaplan-Meier إلى أن المستويات المرتفعة من miR-486-3p كانت مرتبطة بإنذار جيد، بينما ارتبطت المستويات المنخفضة بإنذار سيئ (الشكل 2D). وفي التحليل أحادي المتغير، ارتبط تعبير miR-486-3p ودرجة NIHSS بالنتائج السريرية. وأظهرت متغيرات أخرى، بما في ذلك درجة SAQLI (P = 0.078)، و HIF-1α (P = 0.086)، و TNF-α (P = 0.072)، والعمر (P = 0.082)، و DM (P = 0.067)، واعتلال القلب (P = 0.065)، و AHI (P = 0.069)، ارتباطات ذات دلالة إحصائية هامشية بالإنذار، والتي أُدرجت أيضاً في تحليل Cox متعدد المتغيرات. وفي التحليل متعدد المتغيرات، ظل miR-486-3p عاملاً وقائياً مستقلاً (HR = 0.437, 95% CI: 0.278–0.684, P < 0.01)، بينما ظهر اعتلال القلب (HR = 1.82, 95% CI: 1.070–3.104, P = 0.027) ودرجة NIHSS (HR = 1.597, 95% CI: 1.08–2.529, P = 0.046) كعوامل خطر مستقلة للنتائج السريرية السيئة (الجدول 3).
ملخص النتائج
باختصار، أظهرت الدراسة الحالية أن miR‑486‑3p ينخفض بشكل ملحوظ لدى مرضى ACI المصابين بـ OSAS كمرض مصاحب، ويظهر دقة تشخيصية عالية في تحديد OSAS لدى هذه الفئة من المرضى. وقد لوحظت علاقة واضحة تعتمد على الجرعة عبر المجموعات الفرعية لشدة OSAS، حيث ينخفض miR‑486‑3p تدريجياً وتزداد المؤشرات الالتهابية (TNF‑α و CRP) تدريجياً من OSAS الخفيف إلى الشديد. وأكدت تحليلات الارتباط كذلك أن miR‑486‑3p يرتبط ارتباطاً عكسياً بكل من شدة السكتة الدماغية (NIHSS) والالتهاب الجهازي. والأهم من ذلك، أن انخفاض تعبير miR‑486‑3p تنبأ بنتائج وظيفية سيئة بعد عام واحد، وحدد تحليل انحدار Cox متعدد المتغيرات أن miR‑486‑3p يمثل عاملاً وقائياً مستقلاً بعد التعديل للمتغيرات المربكة المحتملة، بما في ذلك NIHSS و AHI. وبشكل جماعي، تدعم هذه النتائج الفرضية القائلة بأن miR‑486‑3p قد يعمل كعلامة بيولوجية تشخيصية وتنبؤية جديدة للمرض المصاحب ACI‑OSAS، ربما من خلال دوره التنظيمي في الالتهاب الجهازي.
توافر البيانات:
البيانات الخام التي تدعم نتائج هذه الدراسة متاحة في الملف التكميلي 1، والذي يتضمن الخصائص الأساسية، ومستويات تعبير miR‑486‑3p، وقياسات ELISA، وبيانات متابعة mRS لمدة سنة واحدة لجميع المرضى المسجلين.
الشكل 1التغيرات في miR-486-3p والمؤشرات الالتهابية عبر المجموعات الفرعية لشدة متلازمة انقطاع النفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) المقترنة بمؤشر تكرار انقطاع النفس والقصور التنفسي (ACI)، والأداء التشخيصي لـ miR-486-3p في تشخيص متلازمة انقطاع النفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS). (Aالتعبير النسبي لـ miR-486-3p في مجموعة السكتة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) والمجموعات الفرعية التي تجمع بين السكتة الدماغية الإقفارية الحادة ومتلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS).Bتركيز TNF-α المدمج في المصل.كربونتركيز بروتين سي التفاعلي (CRP) في مصل الدم لدى مجموعة مؤشر التقطع التنفسي أثناء النوم (ACI) (مؤشر توقف التنفس ونقص التأكسج (AHI < 5، n=100) وخفيف (5 ≤ AHI < 15، العدد = 60)، متوسطة (15 ≤ مؤشر توقف التنفس أثناء النوم (AHI) < والمجموعات الفرعية لمتلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) من الفئة المتوسطة (مؤشر انقطاع التنفس ونقص التأكسج AHI من 15 إلى أقل من 30، والعدد ن=75)، والشديدة (مؤشر انقطاع التنفس ونقص التأكسج AHI ≥ 30، والعدد ن=35). (دمنحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) لـ miR-486-3p للتمييز بين مرضى السكتة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) المصابين بمتلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) وأولئك غير المصابين بها.P < 0.001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2ارتباطات miR-486-3p مع شدة السكتة الدماغية والمؤشرات الالتهابية، وقيمته الإنذارية للنتائج بعد عام واحد. (أ–جتحليلات ارتباط سبيرمان للتعبير عن miR-486-3p مع درجة مقياس السكتة الدماغجية الوطنية (NIHSS)، وعامل نخر الورم ألفا (TNF-α)، والبروتين التفاعلي C (CRP).دمنحنيات كابلان-ماير لبقاء المرضى (Kaplan-Meier survival curves) لاحتمالية التكهن الجيد بالمرض عند المتابعة لمدة عام واحد، مصنفة وفقاً لوسيط تعبير miR-486-3p.P < 0.001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| المتغير | ACI (n=100) | ACI و OSAS (n=170) | قيمة P | |
| العمر (سنوات) | 62.84 ± 12.65 | 61.31 ± 1.25 | 0.303 | |
| الجنس (ذكر/أنثى) | 68/32 | 16/54 | 0.968 | |
| مؤشر كتلة الجسم (kg/m2) | 24.74 ± 3.57 | 25.02 ± 3.47 | 0.531 | |
| ارتفاع ضغط الدم، n (%) | 74 (74%) | 134 (78.82%) | 0.365 | |
| داء السكري، n (%) | 22 (2%) | 43 (25.29%) | 0.543 | |
| اعتلال عضلة القلب، n (%) | 13 (13%) | 25 (14.71%) | 0.698 | |
| مؤشر توقف التنفس - الاستيقاظ (مرات/ساعة) | 2.07 ± 1.42 | 19.95 ± 9.19 | < 0.01*** | |
| درجة NIHSS | 1.70 ± 1.18 | 4.05 ± 1.73 | < 0.01*** | |
| البروتين التفاعلي C (ng/mL) | 2.03 ± 0.17 | 3.01 ± 0.27 | < 0.01*** | |
| درجة ACI (خفيفة/متوسطة) | 9/1 | 69/101 | < 0.01*** | |
| عسر شحوم الدم (نعم/لا) | 52/48 | 96/74 | 0.478 | |
| التدخين (نعم/لا) | 48/52 | 91/79 | 0.382 | |
| شرب الكحول (نعم/لا) | 40/60 | 87/83 | 0.076 | |
| إذابة الخثرة (نعم/لا) | 38/62 | 81/89 | 0.124 | |
| تصنيف TOAST | 0.487 | |||
| صمة قلبية (n) | 2 | 36 | ||
| انسداد الأوعية الصغيرة (n) | 18 | 28 | ||
| تصلب الشرايين الكبيرة (n) | 13 | 25 | ||
| سكتة دماغية ذات سبب غير محدد (n) | 5 | 19 | ||
| سكتة دماغية ذات سبب محدد آخر (n) | 42 | 62 | ||
الجدول 1: الخصائص الأساسية لمرضى الاحتشاء الدماغي الحاد (ACI) مع وبدون متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS). يتم عرض البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD) للمتغيرات المستمرة، أو العدد (النسبة المئوية) للمتغيرات الفئوية. تم حساب قيم P باستخدام اختبار t-test المستقل للمتغيرات المستمرة واختبار مربع كاي للمتغيرات الفئوية. ACI: الاحتشاء الدماغي الحاد؛ OSAS: متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم؛ BMI: مؤشر كتلة الجسم؛ DM: داء السكري؛ AHI: مؤشر انقطاع التنفس ونقص التنفس؛ NIHSS: مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية؛ CRP: البروتين التفاعلي C؛ TOAST: تجربة Org 10172 في علاج السكتة الدماغية الحادة.
| المتغير | إنذار جيد (n=97) | إنذار سيئ (n=73) | قيمة P |
| درجة mRS | 0.88 ± 0.84 | 4.5 ± 1.08 | < 0.001*** |
| درجة SAQIL | 2.59 ± 1.17 | 3.12 ± 1.48 | 0.09** |
| درجة ESS | 8.69 ± 2.76 | 10.05 ± 2.79 | 0.02** |
| HIF-1α (pg/mL) | 159.94 ± 27.86 | 1283.8 ± 45.15 | 0.027* |
| TNF-α (pg/mL) | 121.4 ± 12.87 | 128.4 ± 1.67 | < 0.01*** |
الجدول 2: المؤشرات الإنذارية في مجموعات الإنذار الجيد والسيئ لمرضى ACI المصابين بـ OSAS. تم تقسيم المرضى إلى مجموعات ذات إنذار جيد (mRS 0–2, n = 97) وإنذار سيئ (mRS 3–6, n = 73) بناءً على درجات mRS بعد مرور عام واحد. تُمثل البيانات كمتوسط ± SD. تم حساب قيم P باستخدام t-test المستقل. mRS: مقياس رانكن المعدل؛ SAQLI: مؤشر كالغاري لجودة الحياة مع انقطاع التنفس أثناء النوم؛ ESS: مقياس إب워ث للنعاس؛ HIF‑1α: العامل 1-ألفا المحفز بنقص الأكسجة؛ TNF‑α: عامل نخر الورم-ألفا.
| المتغير | HR | فاصل ثقة 95% أحادي المتغير | P | HR | فاصل ثقة 95% متعدد المتغيرات | P | ||
| الحد الأدنى | الحد الأعلى | الحد الأدنى | الحد الأعلى | |||||
| miR-486-3p | 0.442 | 0.28 | 0.679 | <0.01 | 0.437 | 0.278 | 0.684 | <0.01 |
| درجة SAQLI | 0.628 | 0.375 | 1.053 | 0.078 | 0.713 | 0.416 | 1.2 | 0.217 |
| درجة ESS | 0.92 | 0.595 | 1.429 | 0.718 | ||||
| HIF-1α | 0.694 | 0.457 | 1.053 | 0.086 | 0.802 | 0.523 | 1.29 | 0.31 |
| TNF-α | 1.469 | 0.96 | 2.233 | 0.072 | 1.494 | 0.978 | 2.284 | 0.063 |
| العمر | 1.45 | 0.95 | 2.18 | 0.082 | 1.29 | 0.845 | 1.97 | 0.238 |
| الجنس | 0.829 | 0.534 | 1.285 | 0.401 | ||||
| BMI | 1.196 | 0.786 | 1.821 | 0.402 | ||||
| ارتفاع ضغط الدم | 0.754 | 0.465 | 1.2 | 0.252 | ||||
| DM | 1.512 | 0.972 | 2.351 | 0.067 | 1.246 | 0.79 | 1.965 | 0.343 |
| اعتلال عضلة القلب | 1.61 | 0.971 | 2.673 | 0.065 | 1.82 | 1.07 | 3.104 | 0.027 |
| AHI | 1.468 | 0.97 | 2.2 | 0.069 | 1.125 | 0.734 | 1.725 | 0.58 |
| درجة NIHSS | 1.58 | 1.027 | 2.45 | 0.037 | 1.597 | 1.08 | 2.529 | 0.046 |
| خلل شحوم الدم | 1.178 | 0.76 | 1.788 | 0.442 | ||||
| التدخين | 0.895 | 0.593 | 1.35 | 0.596 | ||||
| شرب الكحول | 1.16 | 0.738 | 1.689 | 0.603 | ||||
| إذابة الخثرات | 1.259 | 0.834 | 1.902 | 0.272 | ||||
الجدول 3: تحليلات انحدار كوكس أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات للتنبؤ بضعف الإنذار لمدة عام واحد لدى مرضى السكتة الدماغية الإقفارية الحادة الذين يعانون من انقطاع التنفس الانسدادي النومي. HR، نسبة المخاطر؛ CI، فاصل الثقة؛ SAQLI، مؤشر كالغاري لجودة الحياة مع انقطاع التنفس النومي؛ ESS، مقياس إب워ث للنعاس؛ HIF‑1α، العامل المحفز بنقص التأكسج‑1α؛ TNF‑α، عامل نخر الورم‑α؛ BMI، مؤشر كتلة الجسم؛ DM، داء السكري؛ AHI، مؤشر انقطاع التنفس ونقص التنفس؛ NIHSS، مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية. المتغيرات التي كانت قيمة P لها < 0.1 في التحليل أحادي المتغير تم إدراجها في نموذج كوكس متعدد المتغيرات.
الشكل التكميلي 1: مخطط انسيابي لعملية اختيار المرضى وتصنيف المجموعات الفرعية.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 1: التحقق المتبادل خماسي الطيات للتحقق الداخلي من القيمة التشخيصية لـ miR‑486‑3p. AUC، المساحة تحت المنحنى؛ CI، فاصل الثقة. تم حساب متوسط AUC والحساسية والخصوصية كمتوسط حسابي عبر الطيات الخمس.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الملف التكميلي 1: البيانات الخام التي تدعم نتائج هذه الدراسة.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
المناقشة
يعاني المرضى المصابون بـ OSAS من انهيار وانسداد متكرر في الممرات الهوائية، مما يؤدي إلى نقص الأكسجة المتقطع (IH) والنعاس المفرط أثناء النهار (EDS)، وهو ما قد يتسبب في تلف عصبي14. وينتشر OSA بشكل كبير بعد ACI، حيث يؤثر على ما يقرب من 72% من المرضى، ويزيد بشكل ملحوظ من المخاطر القلبية الوعائية15. ويشكل ACI طيفًا من العجز العصبي الناتج عن نقص تروية ونقص أكسجة دماغي موضعي ثانوي لعدم كفاية التروية16. ومن المرجح أن نقص الأكسجة المتقطع الذي يعد أساسيًا في باثولوجيا OSAS يتآزر مع الإصابة الإقفارية في ACI، مما يفاقم إصابة الدماغ. ومع ذلك، فإن الأبحاث التي تركز تحديدًا على هذه الحالة المرضية المشتركة عالية الخطورة نادرة. وتشير الأدلة المتراكمة إلى أن miRNAs تلعب أدوارًا محورية في pathogenesis لكل من OSAS و ACI17,18. وقد لوحظ سابقًا أن miR-486-3p قد يكون مرتبطًا بـ OSAS و ACI. لذلك، بحثنا في miR-486-3p كرابط جزيئي محتمل بين OSAS و ACI. ومن الجدير بالذكر أن هذه المجموعة قد تم تسجيلها من نوفمبر 2020 إلى ديسمبر 2023، وهي فترة غطت جائحة COVID-19. وتشير الأدلة المتراكمة إلى أن الالتهاب الجهازي المستمر الناتج عن عدوى SARS-CoV-2 قد يفاقم الإصابة العصبية ويعزز تطور الآفات التنكسية العصبية19,20. ومع ذلك، فإن الدراسة الحالية لا تركز على عدوى SARS-CoV-2/COVID-19، كما أن أهداف بحثنا وتصميمه غير مرتبطين بـ COVID-19. وقد وُجد انخفاض ملحوظ في مستويات miR-486-3p في المصل لدى حالات ACI المقترنة بـ OSAS، مما يقدم دليلًا سريريًا أوليًا على دوره في هذه الحالة المرضية المشتركة ويسلط الضوء على الحاجة إلى مزيد من الدراسة.
يمكن لمقياس NIHSS تقييم شدة السكتة الدماغية11. ويُستخدم مؤشر AHI في تخطيط النوم عادةً لتشخيص OSAS، وكلما ارتفعت قيمة مؤشر AHI، زادت شدة حالة OSAS21. وبالنظر إلى التحديات السريرية واللوجستية المرتبطة بتخطيط النوم، فإن تحديد مؤشرات حيوية يسهل الوصول إليها لتشخيص انقطاع التنفس النومى الانسدادي لدى مرضى السكتة الدماغية يعد أمراً بالغ الأهمية22. وأشارت النتائج الحالية إلى أن miR-486-3p يتمتع بإمكانات تشخيصية كبيرة لحالات ACI المصاحبة لـ OSAS، حيث ترتبط مستوياته عكسياً بكل من مؤشري AHI وNIHSS، مما يعكس شدة المرض.
من الناحية المنهجية، تُظهر هذه الدراسة جدوى دمج التوصيف الجزيئي مع التوصيف المظهري السريري الكمي في مجموعة واحدة لتقييم الدقة التشخيصية، وعلاقات الاستجابة للجرعة، والقيمة الإنذارية في آن واحد. وقد يعمل هذا الإطار المتكامل كمرجع لدراسات اكتشاف المؤشرات الحيوية المستقبلية في المراضة المشتركة المرتبطة بالسكتة الدماغية، حيث غالبًا ما تؤدي التفاعلات المعقدة بين المسارات الفيزيولوجية المرضية المتعددة إلى تعقيد التحليلات التقليدية ذات النقطة النهائية الواحدة.
تُعد نقص التأكسج المتقطع (IH) سمة مميزة لمتلازمة انقطاع النفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS)، حيث يحفز الالتهاب وتلف الأنسجة عن طريق تفعيل مسارات إشارات محفزة للالتهابات23. ومن الناحية الحرجة، تتقاطع هذه الحالة الالتهابية مع إمراضية الإصابة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) وتؤدي إلى تفاقمها، حيث يتوسط الالتهاب ما بعد الإقفار الإصابة الدماغية الثانوية24,25. تزداد مستويات الوسائط الالتهابية الرئيسية مثل TNF-α و CRP في كلتا الحالتين، حيث تقع عند نقطة التقاء الشلالات الالتهابية الناتجة عن نقص التأكسج وتلك المحفزة بالإقفار، مما يجعلها جزيئات محورية في الاعتلال المرضي المشترك لـ ACI و OSA26,27,28. وبناءً على ذلك، تم قياس تركيزات TNF-α و CRP في المصل لدى المرضى المصابين بـ ACI المصاحبة لـ OSAS. وفي هذه الدراسة، تشير الارتباطات السلبية الملحوظة بين مستويات miR-486-3p في المصل ومستويات TNF-α و CRP في حالات ACI المصاحبة لـ OSAS إلى وجود صلة محتملة بين هذا الـ miRNA والحالة الالتهابية الجهازية التي تميز هذه الحالة المرضية المشتركة.
يؤثر انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) بشكل سلبي للغاية على جودة الحياة، ويُعد مؤشر جودة الحياة الخاص بانقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (SAQLI) استبياناً مخصصاً لتقييم جودة الحياة في حالات OSAS29. وتعتبر النعاس المفرط في النهار (EDS) عرضاً شائعاً لـ OSAS، حيث يؤدي OSAS المصحوب بـ EDS إلى المزيد من الأحداث السلبية وسوء الإنذار الطبي30. ويُستخدم مقياس النعاس في النهار (ESS) بشكل شائع لتحديد شدة النعاس النهاري31. وفي حالات OSAS، تُعتبر النوبات المتكررة من نقص الأكسجين المتقطع (IH) عامل خطر مستقل لأمراض الأوعية الدموية32. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يؤدي الإجهاد التأكسدي الناتج عن IH إلى مضاعفات مثل هشاشة العظام، وزيادة مخاطر القلب والأوعية الدموية، وتغيرات عصبية33. وبناءً على ذلك، بحثت هذه الدراسة أيضاً في تعبير HIF-1α. ويتماشى اكتشاف ارتفاع HIF-1α في مجموعة الإنذار الطبي السيئ لمرضى السكتة الدماغية الإقفارية الحادة (ACI) المصابين بـ OSAS مع الفسيولوجيا المرضية لنقص الأكسجين المتقطع المزمن في OSAS. علاوة على ذلك، أظهرت النتائج أن miR-486-3p و TNF-α يرتبطان بالإنذار الطبي في حالات ACI المصاحبة لـ OSAS، كما ارتبطت المستويات المنخفضة من miR-486-3p بسوء الإنذار الطبي. وهذا يشير إلى تسلسل محتمل يقوم فيه HIF-1α المحفز بواسطة IH بتثبيط miR-486-3p، مما يساهم بدوره في زيادة تنظيم الوسائط الالتهابية مثل TNF-α، وبالتالي يؤدي إلى تفاقم إصابة الدماغ في حالات ACI.
لا تزال هذه الدراسة تعاني من بعض القصور؛ حيث تقتصر الدراسة على غياب المجموعات الضابطة (الأصحاء، والمصابون بـ OSAS فقط)، وهو ما يمنع تحديد النطاق الطبيعي لـ miR-486-3p والتمييز بين التغيرات الخاصة بالأمراض المصاحبة وتلك الناتجة عن OSAS وحده. وبناءً على ذلك، يجب أن تتضمن الأعمال المستقبلية هذه المجموعات لرسم مخطط تعبير miR-486-3p بشكل كامل. وعلاوة على ذلك، لا يكفي استنتاج الآلية التنظيمية المحددة لـ miR-486-3p بناءً على الارتباط فحسب، لذا سنقوم بالتحقق من آليته الجزيئية في تجارب مستقبلية.
من منظور ترجمي، تشير الدقة التشخيصية العالية والقيمة الإنذارية المستقلة لـ miR‑486‑3p إلى العديد من التطبيقات السريرية المحتملة. فبصفته مؤشراً حيوياً يعتمد على الدم، يمكن دمجه في الفحوصات الروتينية للسكتات الدماغية لتحديد مرضى ACI الذين يعانون من OSAS الكامن، مما يسهل الإحالة المبكرة لإجراء تخطيط النوم والتدخل في الوقت المناسب. كما قد يساعد رصد مستويات miR‑486‑3p خلال المراحل الحادة وتحت الحادة في تتبع ديناميكيات الالتهاب وتصنيف المرضى حسب المخاطر الإنذارية، مما يتيح استراتيجيات إعادة تأهيل مخصصة. وتستحق هذه المسارات الترجمية مزيداً من الاستقصاء في دراسات مستقبلية متعددة المراكز. وبشكل عام، قد يشارك miR-486-3p في ACI المصحوب بـ OSAS من خلال تنظيم العوامل الالتهابية، وله قيمة تشخيصية وإنذارية في ACI المصحوب بـ OSAS.
الإفصاحات
تم تمويل هذه الدراسة من قبل "أبحاث تقنيات الوقاية من السكتة الدماغية وعلاجها" (رقم WKZX2023CZ0143).
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| جهاز التصوير بالرنين المغناطيسي بقوة 3.0 تسلا | سيمنز هيلثينيرز، ألمانيا | MAGNETOM Skyra | تصوير الدماغ لتأكيد الاحتشاء الدماغي الحاد |
| أطباق ميكرو-إليسا (ELISA) ذات 96 بئراً | شركة شينزين شينبوشينغ البيولوجية المحدودة، الصين | لوحة XBS-PLATE | تفاعل المستضد والأجسام المضادة للكشف بواسطة مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) |
| إرشادات الممارسة السريرية لجمعية طب النوم الأمريكية (AASM) بشأن التنفس المضطرب أثناء النوم | الأكاديمية الأمريكية لطب النوم | الدليل الإرشادي الكامل لعام 2020 | معايير تشخيص مؤشر توقف التنفس ونقص التأكسج (AHI) الموحدة ومعايير تصنيف شدة متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) |
| النسخة المعتمدة باللغة الصينية من مؤشر كالغاري لجودة الحياة لدى مرضى انقطاع التنفس أثناء النوم (SAQLI) | جامعة كالغاري | طبعة مترجمة لعام ٢٠٢١ | تقييم جودة الحياة للمرضى الذين يعانون من السكتة الدماغية الإقفارية المصحوبة بانقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم |
| أنابيب جمع الدم بالتفريغ سعة 5 مل تحتوي على EDTA-K2 | BD Biosciences، الولايات المتحدة الأمريكية | 367863 | جمع الدم الوريدي الطرفي لفصل المصل |
| نسخة مصادق عليها باللغة الصينية من مقياس إيبورث للنعاس (ESS) | جامعة جونز هوبكنز | طبعة منقحة لعام 2018 | تقييم النعاس النهاري لدى مرضى السكتة الدماغية |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software، الولايات المتحدة الأمريكية | الإصدار 9.4.1 | مخططات التشتت، والمخططات الصندوقية، وتصوير منحنى خصائص التشغيل للمستقبل (ROC) |
| طقم مقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بالإنزيم لبروتين سي التفاعلي البشري (CRP ELISA Kit) | شركة شينزين شينبوشينج البيولوجية المحدودة، شينزين، الصين | XBS-H001 | الكشف الكمي عن البروتين التفاعلي C في المصل |
| العامل المحفز لنقص الأكسجة-1 البشري (Human HIF-1)α طقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) | شركة شينزين شينبوشينغ البيولوجية المحدودة، شينزين، الصين | XBS-H007 | الكشف الكمي عن العامل 1 المحث بنقص التأكسج في المصلα |
| عامل نخر الورم البشري-ألفا (Human TNF-α)α طقم مقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA Kit) | شركة شينزين شينبوشينغ البيولوجية المحدودة (Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd.)، شينزين، الصين | XBS-H003 | الكشف الكمي عن عامل نخر الورم ألفا (TNF-α) في المصلα عامل التهاب |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM، أرمونك، نيويورك، الولايات المتحدة الأمريكية | الإصدار 23.0 | جميع التحليلات الإحصائية (اختبار t، والارتباط، ومنحنى خصائص تشغيل المستقبل ROC، وكابلان-ماير)–(تحليل ماير-كابلان، وانحدار كوكس) |
| مقياس الطيف الضوئي للأطباق الدقيقة | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | Multiskan FC | قراءة الامتصاصية لأطباق مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) عند 450 نانومتر |
| miR-486-3p & بادئات qPCR لـ U6 | Sangon Biotech، شنغهاي، الصين | التخليق المخصص | تضخيم الجينات المستهدفة والمرجعية من أجل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) |
| طقم miScript SYBR Green PCR | Qiagen GmbH، هيلدن، ألمانيا | 218073 | تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي لـ miR-486-3p وU6 |
| النسخة الصينية المعتمدة من مقياس معاهد الصحة الوطنية للسكتة الدماغية (NIHSS) | المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (NINDS)، الولايات المتحدة الأمريكية | الإصدار السريري القياسي | تقييم شدة الحالة العصبية عند خط الأساس لمرضى الإصابة الدماغية الحادة (ACI) |
| برنامج تسجيل درجات نوم تخطيط النوم (PSG) | شركة BMC Medical المحدودة، الصين | الإصدار 3.2 | التقييم الأولي الآلي لأحداث الجهاز التنفسي أثناء النوم |
| نظام QuantStudio 6 Pro لتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-Time PCR) | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | QuantStudio 6 Pro | تضخيم RT-qPCR، الحصول على منحنى الانصهار، تسجيل قيمة Ct |
| برنامج QuantStudio لتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-Time PCR) | Applied Biosystems, الولايات المتحدة الأمريكية | إصدار 1.7 | تصدير البيانات الخام لـ qPCR، تحليل قيمة Ct |
| جهاز طرد مركزي مخبري مبرد لسطح المختبر | شركة شيانغيي لأجهزة الطرد المركزي المحدودة، هونان، الصين | TDZ5-WS | فصل المصل من الدم الكامل (2700 × جم، 4 °C) |
| طقم RevertAid RT للنسخ العكسي | Thermo Fisher Scientific، والثام، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية | K1691 | النسخ العكسي لـ miRNA في المصل إلى cDNA |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 مل خالية من RNase | Axygen، الولايات المتحدة الأمريكية | MCT-150-C | تجزئة وتخزين المصل المفصول |
| كاشف TRIzol لعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | 15596026 | استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (Total RNA) من عينات مصل الدم البشري |
| مجمد بدرجة حرارة منخفضة للغاية | Haier Biomedical، شاندونغ، الصين | DW-86L388 | تخزين عينات المصل لفترات طويلة في −80 °C |
| جهاز مراقبة polysomnography طراز YH-600B | شركة BMC Medical المحدودة، بكين، الصين | YH-600B | مراقبة النوم طوال الليل وحساب مؤشر انقطاع التنفس ونقص التأكسج (AHI) لتشخيص متلازمة انقطاع التنفس الانسدادي أثناء النوم (OSAS) |
المراجع
- Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
- Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
- Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
- Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
- Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
- Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
- Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
- Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
- May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
- Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
- Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
- Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
- Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
- Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
- Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
- Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
- Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
- Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
- Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
- Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
- Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
- Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
- Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
- Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
- Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
- Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
- Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
- Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
- Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
- Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
- Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
- Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
- Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.