يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

التحليل الارتباطي لحبيبات Qiming مع الشبكة المتمحورة حول CMKLR1 والالتهاب الجهازى عبر محور الأمعاء-الشبكية في اعتلال الشبكية السكري

121 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/72700

⸱

سبتمبر 15, 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه الدراسة أن حبيبات Qiming (QMG) تعمل على تحسين اعتلال الشبكية السكري (DR) من خلال تعديل محور الأمعاء والشبكية. لقد أعادت QMG تشكيل ميكروبيوتا الأمعاء، وكبحت الالتهاب الجهازي، واستعادت الشبكة التنظيمية التي تتمحور حول CMKLR1، مما أدى إلى عكس التلف النسيجي المرضي للشبكية. وتجعل هذه النتائج من QMG استراتيجية علاجية واعدة تستهدف محور الأمعاء والشبكية لعلاج اعتلال الشبكية السكري.

الملخص

تعد اعتلال الشبكية السكري (DR) مضاعفة عصبية وعائية ناتجة عن ارتفاع نسبة السكر في الدم المزمن والالتهابات الجهازية، مع وجود أدلة ناشئة تسلط الضوء على محور الأمعاء-الشبكية كهدف علاجي حيوي ولكنه غير مستغل بشكل كافٍ. تبحث هذه الدراسة فيما إذا كانت حبيبات Qiming (QMG) تمارس فعاليتها الوقائية ضد اعتلال الشبكية السكري عن طريق تعديل محور الأمعاء-الشبكية. تم توزيع فئران C57BL/6 عشوائياً على مجموعات تجريبية وأخضعت لتدخلات مختلفة. تم تقييم التغيرات النسيجية المرضية للشبكية عن طريق صبغ Hematoxylin-Eosin (HE). وقِيست مستويات السيتوكينات الالتهابية في المصل (IL-1β, IL-6, TNF-α) باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). كما تم الكشف عن تعبير البروتينات التنظيمية الرئيسية (CMKLR1, Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53) في كل من أنسجة الشبكية والقولون عن طريق لطخة ويسترن (WB). وتم توصيف تكوين وتنوع ميكروبيوم الأمعاء عن طريق تسلسل 16S rDNA كامل الطول. أُجريت تحليلات ارتباطية لتقييم العلاقات بين ميكروبيوم الأمعاء والعوامل الالتهابية أو البروتينات الرئيسية. أدى العلاج بـ QMG إلى تحسين التشوهات النسيجية المرضية في الشبكية، كما يتضح من استعادة البنية الصفائحية للشبكية، والتعافي الجزئي لأعداد خلايا العقد الشبكية (P < 0.001)، وعكس ترقق الشبكية (P < 0.01). كما خفض بشكل ملحوظ مستويات IL-1β وIL-6 وTNF-α في المصل (P < 0.0001). وعلى طول محور الأمعاء-الشبكية، عكس QMG التعبير غير الطبيعي للبروتينات التنظيمية الرئيسية، لاسيما الشبكة المتمحورة حول CMKLR1 (Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53). علاوة على ذلك، استعاد QMG تكوين وتنوع ووظيفة ميكروبيوم الأمعاء، وكشفت تحليلات الارتباط أن QMG يربط بين الالتهاب الجهازي وهذه البروتينات التنظيمية لتعديل محور الأمعاء-الشبكية. تقدم هذه الدراسة دليلاً فارماكولوجياً أولياً على أن QMG يحسن حالة اعتلال الشبكية السكري من خلال ربط الشبكة التنظيمية المتمحورة حول CMKLR1 (بما في ذلك Wnt5a وPPAR-γ وAP-1 وTP53) والالتهاب الجهازي عبر محور الأمعاء-الشبكية، مما يضع QMG كاستراتيجية علاجية واعدة لمحور الأمعاء-الشبكية في علاج اعتلال الشبكية السكري.

المقدمة

تعد اعتلال الشبكية السكري (DR)، وهي واحدة من أكثر المضاعفات الوعائية الدقيقة شيوعاً لمرض السكري (DM)، سبباً رئيسياً للعمى بين البالغين في سن العمل في جميع أنحاء العالم1. وعالمياً، يصيب اعتلال الشبكية السكري ما يقرب من 20-30% من مرضى السكري2. ويؤدي فرط سكر الدم المزمن إلى دفع إمراضية اعتلال الشبكية السكري من خلال تحفيز سلسلة من الأحداث المرضية، بما في ذلك ضعف الاقتران العصبي الوعائي، وزيادة الاستجابات الالتهابية، والإجهاد التأكسدي3. مؤخراً، لُحظت تغيرات في تنوع وتركيب ميكروبيوم الأمعاء لدى مرضى السكري المصابين باعتلال الشبكية مقارنة بأولئك غير المصابين به4,5. وبناءً على ذلك، برز محور الأمعاء والشبكية — وهو شبكة تواصل ثنائية الاتجاه تربط التوازن المعوي بصحة الشبكية — كمساهم جديد في تطور اعتلال الشبكية السكري. ومع ذلك، لا تزال الوسائط الجزيئية المحددة التي تترجم إشارات محور الأمعاء والشبكية إلى اعتلال مرضي في الشبكية غير معروفة إلى حد كبير، مما يحد من تحديد المؤشرات الحيوية والمستهدفات العلاجية الموثوقة.

يوضح المحور المعوي الشبكي شبكة اتصالات ثنائية الاتجاه ومعقدة بين ميكروبيوتا الأمعاء ونواتج أيضها مع أنسجة الشبكية عبر مسارات مناعية، وأيضية، وعصبية صماوية، ووعائية، مما يعمل على تنظيم توازنها الاستتبابي6. ومن الناحية الجزيئية، يتميز المحور المعوي الشبكي بخلل في تنظيم بروتينات رئيسية مسؤولة عن الاستجابة للإجهاد وتحديد مصير الخلايا، وتحديداً AP-1 و TP537,8,9. علاوة على ذلك، يبرز CMKLR1، وهو مستقبل كيموكين رئيسي، كوسيط أساسي في الخلل الوظيفي للبطانة واختلال التنظيم الأيضي، مما يشكل رابطاً حرجاً بين تغيرات ميكروبيوتا الأمعاء وإمراضية اعتلال الشبكية السكري10. ومن الأهمية بمكان أن إشارات Wnt تنسق أدواراً تنظيمية مزدوجة في الحفاظ على التوازن الوعائي للشبكية ووظيفة الحاجز الظهاري المعوي11، بينما تعمل إشارات PPAR كمنظم رئيسي للاستجابات الالتهابية والعمليات الأيضية في كل من الأنسجة العينية والمعوية12,13. وتشكل هذه العناصر الجزيئية مجتمعة شبكة إشارات مترابطة ضمن المحور المعوي الشبكي، مما يقدم رؤى ميكانيكية جديدة وفرصاً علاجية للمضاعفات المرتبطة بمرض السكري. وبناءً على ذلك، فإن استهداف التغيرات التركيبية والوظيفية على طول هذا المحور يمثل استراتيجية واعدة لإدارة اعتلال الشبكية السكري (DR).

لعب الطب الصيني التقليدي (TCM) تاريخياً دوراً هاماً في علاج داء السكري واعتلال الشبكية المرتبط به، حيث استندت القرارات العلاجية إلى تمييز المتلازمات14. وتُستخدم حبيبات تشيمينغ (QMG)، المكونة من Astragalus membranaceus, Pueraria lobata, Rehmannia glutinosa, Lycium barbarum, Senna obtusifolia, Leonurus japonicus, Typha angustifolia, و Whitmania pigra، على نطاق واسع في علاج اعتلال الشبكية السكري (DR). وقد اجتازت حبيبات QMG، المعتمدة من قبل الإدارة الوطنية للمنتجات الطبية في الصين (رقم الموافقة Z20090036)، التجارب السريرية بنجاح وحصلت على ترخيص التسويق. وتظهر حبيبات QMG تأثيرات وقائية من خلال منع تسمك الغشاء القاعدي في الشعيرات الدموية الشبكية، وتقليل الضرر الذي يلحق بالخلايا الحولية والأوعية الدموية الدقيقة في الشبكية، والحفاظ على المورفولوجيا المرضية المحلية للعين15، مما يجعلها علاجاً واعداً للتصدي لاعتلال الشبكية السكري. ومن خلال استهداف البروتينات الرئيسية والعوامل الالتهابية، تفرض المكونات النشطة في QMG تأثيرات مضادة للالتهابات، ومضادة للأكسدة، ومضادة لموت الخلايا المبرمج، مما يوفر أساساً ميكانيكياً لتعديلها لـ محور الأمعاء والشبكية16. توفر هذه الخصائص أساساً ميكانيكياً للتعديل المحتمل الذي تجريه QMG على محور الأمعاء والشبكية، ومع ذلك، استكشفت دراسات قليلة هذه الصلة. لذلك، تهدف هذه الدراسة إلى التحقق من فعالية حبيبات QMG في تعديل محور الأمعاء والشبكية، مما يوفر دليلاً تجريبياً على إمكاناتها العلاجية في حالات اعتلال الشبكية السكري.

تربط هذه الدراسة التنبؤات النظرية بالبيانات التجريبية داخل الجسم الحي للتحقق من فعالية QMG في تعديل المحور المعوي الشبكي. وتظهر هذه النتائج أن QMG يحسن من اعتلال الشبكية السكري (DR) من خلال ربط الشبكة التنظيمية المتمحورة حول CMKLR1 (بما في ذلك Wnt5a وPPAR-γ وAP-1 وTP53) بالالتهاب الجهازي عبر المحور المعوي الشبكي، مما يجعل QMG استراتيجية علاجية واعدة لاستهداف المحور المعوي الشبكي في علاج اعتلال الشبكية السكري. ويظهر الملخص الرسومي في الشكل 1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أُجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقاً لإرشادات ARRIVE. وقد تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة مراجعة أخلاقيات البحث في شركة Sichuan Scientist Biotechnology Co., Ltd. (IACUC ISSUE SYST-2024-011).  ويتوفر جدول زمني تجريبي مفصل يلخص تصميم الدراسة في الشكل التكميلي 1.

تحضير الحيوانات ومعالجتها

خُدرت الفئران تخديرًا عميقًا باستنشاق isoflurane بنسبة 2%. وتحت تأثير التخدير العميق، جُمعت عينات الدم عن طريق استئصال العين من خلف المحجر. وفور جمع الدم، استؤصلت مقلتا العين لحصد أنسجة الشبكية. وعقب ذلك، تم إجراء خلع رقبي تحت التخدير العميق لضمان القتل الرحيم. ثم شُرِّحت أنسجة القولون على الفور. أما الحيوانات التي ظهرت عليها آثار جانبية فقد استُبعدت فورًا من الدراسة وتلقت الرعاية البيطرية المناسبة.

العشوائية والتعمية

تم إيواء فئران ذكور من سلالة C57BL/6، تبلغ من العمر 5 أسابيع وتتراوح أوزانها بين 20 و30 جراماً، في ظروف خاضعة لرقابة صارمة، بما في ذلك درجة الحرارة والرطوبة. وبعد أسبوع من فترة التأقلم، تم توزيع فئران C57BL/6 عشوائياً على ثلاث مجموعات (المجموعة الضابطة، ومجموعة النموذج، ومجموعة التدخل) باستخدام تسلسل أرقام عشوائية تم إنشاؤه بواسطة الحاسوب. وقد تولى إنشاء تسلسل التوزيع العشوائي باحث لم يشارك في التعامل مع الحيوانات أو تقييم النتائج.

لضمان التعمية، قام باحثون غير مدركين لتوزيع المجموعات بجميع إجراءات رعاية الحيوان، وإعطاء الأدوية، وجمع البيانات. ولم يتم الكشف عن رموز توزيع المجموعات إلا بعد الانتهاء من جميع التجارب والتحليلات الإحصائية. وقد شملت التعمية كلاً من: الفني الذي قام بعملية التزقيم الفموي؛ وأخصائي الأمراض الذي قام بتقييم النسيج الشبكي؛ والمحلل الذي قام بقياس نطاقات تحليل لطخة ويسترن (WB).

حساب حجم العينة

تم تحديد حجم العينة بناءً على تجربة أولية لتقييم تعداد خلايا العقد الشبكية (RGC) تحت نفس الظروف التجريبية. وبافتراض مستوى دلالة ثنائي الجانب (α) قدره 0.05 وقوة إحصائية (1-β) تبلغ 0.80، تطلب الأمر وجود 5 فئران كحد أدنى في كل مجموعة للكشف عن فرق ذو صلة سريرياً في تعداد خلايا RGC بين مجموعتي النموذج والتدخل. ونظراً لمعدل تسرب محتمل يقدر بنحو 20%، تم تحديد كل مجموعة لتشمل 6 فئران.

تجهيز الحيوانات المصابة بمرض السكري

تلقّت المجموعة الضابطة نظاماً غذائياً قياسياً، بينما أُعطيت مجموعتا التدخل والنموذج نظاماً غذائياً عالي الدهون والسكريات (HFHSD) لمدة أربعة أسابيع. وعقب هذه الفترة الغذائية، خضعت مجموعتا التدخل والنموذج لحقن داخل الصفاق بمحلول Streptozotocin (STZ) بتركيز 1% وبجرعة 35 mg/kg17,18,19,20. وبعد مرور اثنتين وسبعين ساعة على الحقن، اعتبرت الفئران التي أظهرت مستويات غلوكوز في الدم (في حالة عدم الصيام) تتجاوز 16.7 mmol/L قد نجحت في تحريض نموذج مرض السكري (DM) وتم اختيارها لإجراء المزيد من التجارب. واستمرت حيوانات نموذج DM في تناول النظام الغذائي عالي الدهون والسكريات لمدة أربعة أشهر إضافية، بينما حافظت المجموعة الضابطة على نظامها الغذائي القياسي.

التحقق التصنيفي وتقييم الجودة

تم التحقق تصنيفيًا من المكونات الثمانية في QMG باستخدام أداة البحث المحدثة عن أسماء النباتات (MPNS, http://mpns.kew.org/mpns-portal/). كما تم تقييم جودة الإبلاغ عن التركيبة لـ QMG باستخدام أداة ConPhYMP.

طرق الإعطاء

في مجموعة التدخل، أُعطيت الحيوانات عقار QMG عن طريق الفم. تم شراء QMG من شركة Zhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd. (رقم اعتماد الدواء الوطني الصيني Z20090036). وحُضِّر معلق QMG عن طريق خلط QMG بشكل متجانس مع الماء المقطر. تم إعطاء الفئران في مجموعة التدخل المعلق عن طريق التغذية القسرية الفموية بحجم مكافئ للمجموعات النموذجية والضابطة. وقد حُسبت الجرعة بناءً على الجرعة العلاجية الفردية السريرية البالغة 4.5 جم لكل 60 كجم من البالغين (الجرعة القياسية لوحدة التركيبة المسوقة) باستخدام طريقة تسوية مساحة سطح الجسم (BSA) الموصى بها من قبل إدارة الغذاء والدواء (FDA) وريغان-شو (Reagan-Shaw).21كان معامل التحويل بين البشر البالغين (Km = 37) والفئران (Km = 3) هو 12.33، مما أدى إلى تحديد جرعة للفئران قدرها 0.9 جم/كجم من وزن الجسم. وتلقت مجموعة النموذج والمجموعة الفارغة حجماً مكافئاً من المحلول الملحـي عن طريق التغذية القسرية الفموية. وقد أجري الإعطاء يومياً بين الساعة 9 صباحاً و11 صباحاً لمدة 3 أشهر متواصلة.

مؤشرات الملاحظة والاختبار

المراقبة العامة للعلامات الحيوية

تَمَّت مراقبة وتسجيل العلامات الحيوية العامة والمؤشرات الفسيولوجية بشكل منهجي، بما في ذلك وزن الجسم، ومستويات جلوكوز الدم، واستهلاك الماء والغذاء، وإخراج البول، ومستويات النشاط والسلوك، ودرجة حرارة الجسم، بالإضافة إلى حالة الفراء والجلد، وذلك لتقييم التدخلات العلاجية بشكل شامل والكشف عن المضاعفات المحتملة.

مراقبة التغيرات المورفولوجية في الشبكية عن طريق تحليل صبغة HE

تمت معالجة جميع العينات عبر جهاز تجفيف آلي باستخدام سلسلة من محاليل الإيثانول والزايلين بعد التثبيت، تلا ذلك الطمر في البارافين. لاحقاً، تم قطع مقاطع بارافينية بسمك 4 µm وصبغها بـ HE ثم تثبيتها باستخدام الصمغ المتعادل. تم مسح صور الشبكية باستخدام ماسح 3DHISTECH Pannoramic SCAN. وأجري تحليل الصور وقياس البيانات بواسطة برنامج Image-Pro Plus.

كشف مستويات IL-6 وTNF-α وIL-1β في المصل عن طريق تحليل ELISA

تم جمع عينات الدم عن طريق استئصال العين من خلف المحجر. وفُصل المصل عن طريق الطرد المركزي عند 1,000 × g لمدة 15 دقيقة عند 4 °C، ثم خُزن في درجة حرارة -80 °C حتى وقت التحليل. وقِيست مستويات مصل IL‑1β وIL‑6 وTNF‑α وفقاً للإجراءات القياسية، بما في ذلك موازنة الكواشف، وإضافة العينات، والحضن، والغسيل، وإضافة المتقارن والركيزة، وإيقاف التفاعل، وقياس الكثافة الضوئية، وحساب التركيز بناءً على منحنى قياسي. وقُرئت الكثافة الضوئية عند 450 nm باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة، وحُسبت تركيزات السيتوكينات مقابل المنحنيات القياسية.

الكشف عن البروتينات التنظيمية الرئيسية في الشبكية والقولون عن طريق تحليل WB

أُجريت ثلاث مكررات بيولوجية مستقلة على غشاء واحد، وفُحصت بالتتابع للكشف عن البروتينات المستهدفة. وقد اشتُققت جميع المكررات من مجموعة واحدة من الحيوانات التي تم التضحية بها في وقت واحد. وعندما كان الوزن الجزيئي للبروتين المستهدف قريبًا جدًا من الوزن الجزيئي لبروتين GAPDH (<(فرق قدره 5 كيلو دالتون)، فقد تم تحليلها على أغشية منفصلة لمنع تداخل الإشارات. وقد فُحص كل غشاء حصرياً إما للبروتين المستهدف أو لبروتين GAPDH لضمان دقة التحديد الكمي. استُخدمت الأجسام المضادة الأولية التالية: GAPDH متعدد النسائل جسم مضاد (1:5000)، وجسم مضاد متعدد النسائل لـ CMKLR1 (1:1000)، وجسم مضاد متعدد النسائل لـ Wnt5a (1:1000)، وجسم مضاد متعدد النسائل لـ TP53 (1:1000)، وجسم مضاد أحادي النسيلة لـ AP-1 (1:5000)، وPPAR gamma (PPAR-γجسم مضاد متعدد النسائل (1:1000). تم الحصول على البروتينات الكلية عن طريق تحلل الخلايا متبوعاً بالطرد المركزي. وتم تحديد تركيزات البروتين باستخدام مقايسة حمض البيكولينيك (BCA). تم فصل البروتينات المستخلصة بواسطة الفصل الكهربائي للهلام بتركيز مادة SDS (SDS-PAGE) باستخدام هلام فصل بنسبة 12%، ثم نُقلت لاحقاً إلى أغشية. حُجبت الأغشية في محلول TBST يحتوي على 5% من الحليب الخالي من الدسم، وحُضنت مع الأجسام المضادة الأولية المناسبة طوال الليل في درجة حرارة 4 °Cبعد الغسل، حُضنت الأغشية مع أجسام مضادة ثانوية مضادة للأرانب أو مضادة للفئران مقترنة بإنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP) بتخفيف 1:10,000. وفي الختام، تم تصوير حزم البروتين وتحليلها عن طريق التصوير بالتلألؤ الكيميائي. وأثناء التصوير ومعالجة البيانات، تم قص لطخات البروتين أفقيًا لإزالة مناطق الوزن الجزيئي غير ذات الصلة، مع الاحتفاظ بجميع مسارات العينات دون إزالة المناطق الفاصلة بين المسارات. وقد يحدث تشويه طفيف في الحواف أثناء عملية القص لإزالة مناطق الهلام غير ذات الصلة.

كشف ميكروبيوم الأمعاء عن طريق تحليل تسلسل 16S rDNA

جُمعت عينات براز حديثة من كل فأر قبل الإجراءات النهائية. وُضع كل فأر على حدة في أقفاص معقمة لمدة 10–15 min للسماح بالتبرز التلقائي. جُمعت كرات البراز فوراً باستخدام ملقط معقم، ونُقلت إلى أنابيب معقمة سعة 1.5 mL، ثم جُمدت سريعاً في نيتروجين سائل، وحُفظت في درجة حرارة -80 °C حتى استخلاص DNA. نُفذت جميع الإجراءات تحت ظروف معقمة لتقليل التلوث الخلطي. كما تم الحفاظ على الفاصل الزمني بين التبرز والتجميد في غضون 10 min لضمان سلامة الميكروبات. نُقيت عينات DNA الجينومي (gDNA) البرازية باستخدام طقم استخلاص Fecal gDNA، وتلى ذلك تضخيم جين 16S rDNA كامل الطول عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام البادئات العامة 8F (5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’) و 1492R (5’-CGGTTACCTTGTTACGACTT-3’). حُللت نواتج PCR لاحقاً عن طريق الفصل الكهربائي لهلام الأغاروز، ثم نُقيت وقُدرت كميتها للتطبيقات اللاحقة. أُجري التسلسل عالي الإنتاجية باستخدام جهاز التسلسل Nanopore GridION. وشملت عملية تحليل البيانات استدعاء القواعد (basecalling)، ومراقبة جودة البيانات، وتصنيف الأنواع، وبناء الشجرة التطورية، وتحليل المجتمع الميكروبي، وتحليل تنوع ألفا وبيتا، وتحليل الأنواع ذات الوفرة المتباينة  والتنبؤ بوظيفة المجتمع. واستُخدمت أدوات وقواعد بيانات متنوعة خلال التحليل، مثل NanoFilt، وUsearch، ولغة البرمجة R، وPython، وقاعدة بيانات SILVA.

تحليل الارتباط بين محور الأمعاء والشبكية والالتهاب الجهازي وميكروبيوتا الأمعاء متعددة المستويات

لاستكشاف الارتباطات المحتملة بين الميكروبات المعوية متعددة المستويات والسايتوكينات الالتهابية في المصل والبروتينات التنظيمية الرئيسية، تم إجراء تحليل الارتباط باستخدام منصة Luoning Bio-Cloud. في البداية، تم استخراج بيانات وفرة الأنواع على مستويات المملكة، والشعبة، والطائفة، والرتبة، والفصيلة، والجنس، والنوع من نتائج التسلسل. كما جُمعت العوامل الفيزيوكيميائية، بما في ذلك السايتوكينات الالتهابية في المصل ومستويات تعبير البروتين، في ملف العوامل البيئية. ولضمان موثوقية الارتباطات وتصورها، خضعت البيانات لعملية تطبيع (normalization) لإزالة الاختلافات في المقاييس بين الوفرة الميكروبية ووحدات القياس السريرية. وتم حساب معاملات الارتباط (R-values) ومستويات الدلالة المقابلة لها (P-values). عُرضت النتائج باستخدام خريطة حرارية للارتباط، حيث تشير تدرجات الألوان إلى قوة واتجاه الارتباط (يمثل اللون الأحمر ارتباطاً إيجابياً، واللون الأزرق ارتباطاً سلبياً)، وتشير النجمات (**) إلى الدلالة الإحصائية (P < 0.01).

الطرق الإحصائية

أُجريت جميع التحليلات الإحصائية والتصوير البياني باستخدام برنامج GraphPad Prism. واستُخدم اختبار t لمقارنة المتوسطات للبيانات التي اتبعت التوزيع الطبيعي. وفي الحالات التي انحرفت فيها البيانات عن التوزيع الطبيعي، استُخدم اختبار Kruskal-Wallis. كما أُجري تحليل ارتباط Spearman أو Pearson لدراسة العلاقات بين المتغيرات. وقد أُجريت جميع الاختبارات الإحصائية كاختبارات ثنائية الذيل، مع تحديد مستوى الدلالة الإحصائية عند 0.05.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

General situation of experimental animals

Blood glucose levels were significantly elevated in the model group (27.21 ± 6.03 mmol/L) compared with the blank group (P < 0.001), indicating the successful induction of the DM model. During the study period, the experimental animals showed stable body weight, continuous water and food intake, normal urine output, body temperature, healthy fur and skin condition, and normal behavior during the experiment.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يُعد اعتلال الشبكية السكري (DR) مضاعفة عصبية وعائية معقدة يحركها ارتفاع سكر الدم المزمن والالتهاب والخلل في التنظيم الأيضي22. وتصنف الأكاديمية الأمريكية لطب العيون اعتلال الشبكية السكري إلى اعتلال شبكية سكري غير تكاثري واعتلال شبكية سكري تكاثري، والذي يتميز ببدء تكوّن أوعية دموية جديدة23. ونظراً لمحدودية الاستراتيجيات العلاجية الحالية، برز استكشاف آليات جديدة كتوجه واعد لمعالجة اعتلال الشبكية السكري. ومن الجدير بالذكر أن الاختراقات الحديثة حددت محور الأمعاء-الشبكية كهدف علا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يصرح المؤلفون بأنه ليس لديهم أي مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن تبدو مؤثرة على العمل الوارد في هذه الورقة.

شكر وتقدير

يود المؤلف أن يتقدم بالشكر لـ جميع أعضاء فريق عمله الذين قدموا قدراً كبيراً من الدعم والمساعدة لإتمام هذا البحث.

تم دعم هذا البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (منحة رقم: 82474580)، ومشروع الاستكشاف الحر لمؤسسة المستشفى في مستشفى جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم 23ZYTS1601).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
جسم مضاد أحادي النسيلة لـ AP-1Proteintech66313-1-IG1:5000
جسم مضاد متعدد النسيلة لـ CMKLR1الألفةAF52911:1000
جسم مضاد متعدد النسيلة لـ GAPDHالألفةAF70211:5000
جسم مضاد من الماعز مضاد لـ IgG (السلسلة الثقيلة + الخفيفة) للفئران مرتبط بإنزيم HRPتعدد التخصصات العلميةGAM00721:10000
جسم مضاد من الماعز ضد IgG (H+L) للأرانب مرتبط بإنزيم HRPعلوم متعددةGAR00721:10000
GraphPad Prism/الإصدار 9.5
Image-Pro PlusMedia Cybernetics, Inc.، روكفيل، ماريلاند، الولايات المتحدة الأمريكيةالإصدار 6.0
منصة Luoning Bio-Cloud http://www.biomediv.cn/login.html
إنترلوكين-1 للفئران (Mouse IL-1)βطقم مقايسة الممتز المربوط إنزيمياً (ELISA) لإنترلوكين 1 بيتا (Interleukin 1 Beta)ElabscienceE-EL-M0037الكشف عن السيتوكينات في المصل
طقم مقايسة الممتز المجهري المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لإنترلوكين-6 (IL-6) للفئرانإيلابساينس (Elabscience)E-EL-M0044كشف السيتوكينات في المصل
عامل نخر الورم في الفئران (Mouse TNF-α)αطقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لعامل نخر الورم ألفا (Tumor Necrosis Factor Alpha)إلاب ساينس (Elabscience)E-EL-M3063كشف السيتوكينات في المصل
نانو فيلت (NanoFilt)/الإصدار 2.7.1
جهاز تسلسل النانوبور GridIONOxford Nanopore Technologieshttps://store.nanoporetech.com/gridion.html
Pannoramic SCAN IIماسح 3DHISTECH Pannoramic SCAN https://www.3dhistech.com/scanners/pannoramic-scan-ii-digital-scanner/
مستقبلات بيروكسيسوم proliferate-activated receptor gamma (PPAR-γجسم مضاد متعدد النسائل إيمونو واي (ImmunoWay)bs-0530R1:1000
بايثون/الإصدار 3.7.4
حبيبات تشي مينج (Qiming Granule)شركة تشيجيانغ سانسينج ماندي للصناعات الدوائية المحدودة (Zhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd.)رقم الموافقة الوطنية الصينية على الدواء Z20090036٠,٩ جم/كجم، تغذية قسرية عن طريق الفم
لغة البرمجة R/الإصدار 4.0.3
قاعدة بيانات SILVA/الإصدار 138
ستريبتوزوتوسين (STZ)Sigma-AldrichS013035 ملجم/كجم، عن طريق الحقن peritoneal (i.p.)
جسم مضاد متعدد النسائل لـ TP53Abcamab1314421:1000
يو سيرش (Usearch)/الإصدار 10.0.240
جسم مضاد متعدد النسائل لـ Wnt5aProteintech55184-1-AP1:1000
طقم Zymo Research BIOMICS DNA Microprep KitZymo ResearchD4301استخلاص الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الجينومي (gDNA) من البراز

المراجع

  1. Lei C, et al. Homocysteine and diabetic retinopathy. Exp Eye Res. 2026;262:110729.
  2. Owens DR, et al. IDF diabetes Atlas: A worldwide review of studies utilizing retinal photography to screen for diabetic retinopathy from 2017 to 2024 inclusive. Diabetes Res Clin Pract. 2025;226:112346.
  3. Zhu J, Huang J, Sun Y, Xu W, Qian H. Emerging role of extracellular vesicles in diabetic retinopathy. Theranostics. 2024;14(4):1631–1646.
  4. Xie L, Lin W. The role of gut microbiota dysbiosis in the inflammatory pathogenesis of diabetic retinopathy. Front Immunol. 2025;16:1604315.
  5. Niu J, Liu Y, Peng H, Chen J, Chen L. Early-stage diabetic retinopathy: gut-metabolic triggers, immune-neurodegeneration, and interventions. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2025;263(10):2723–2736.
  6. Rowan S, et al. Involvement of a gut-retina axis in protection against dietary glycemia-induced age-related macular degeneration. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(22):E4472–E4481.
  7. Rzeczycki P, Pęciak O, Plust M, Droździk M. Gut Microbiota in the Regulation of Intestinal Drug Transporters: Molecular Mechanisms and Pharmacokinetic Implications. Int J Mol Sci. 2025;26(24):11897.
  8. Yang H, et al. Mediating role of aging and obesity in the relationship between dietary index for gut microbiota and metabolic syndrome and its potential regulatory mechanisms. Eur J Med Res. 2025;31(1):137.
  9. Zahavi EE, et al. Repeat-element RNAs integrate a neuronal growth circuit. Cell. 2025;188(16):4350–4365.e22.
  10. Dander E, et al. The chemerin/CMKLR1 axis regulates intestinal graft-versus-host disease. JCI Insight. 2023;8(5):e154440.
  11. Zhang J, et al. Therapeutic targets in the Wnt signaling pathway: Treating cancer with specificity. Biochem Pharmacol. 2025;236:116848.
  12. Liu M, Lim ST, Song W, Coffman TM, Wang X. Beyond lipids: fenofibrate in diabetic retinopathy and nephropathy. Trends Pharmacol Sci. 2026;47(3):325–341.
  13. Wu Y, et al. The active ingredient β-sitosterol in the anti-inflammatory agents alleviates perianal inflammation in rats by inhibiting the expression of Srebf2, activating the PPAR signaling pathway, and altering the composition of gut microbiota. Int Immunopharmacol. 2025;152:114470.
  14. Lin T, Chen C, Zhao LC, Zhu HY, Li W. The beneficial effects of Traditional Chinese Medicine on diabetic retinopathy: mechanisms, therapeutics, and prospects. Acupunct Herb Med 2026;6(2):188–204.
  15. Huo J, et al. Evaluation of individualized treatment of nonproliferative diabetic retinopathy: a multicenter, randomized, parallel-controlled study. J Tradit Chin Med. 2022;42(1):90–95.
  16. Huang Y, et al. Pharmacological mechanism and clinical study of Qiming granules in treating diabetic retinopathy based on network pharmacology and literature review. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115861.
  17. Salma B, et al. Ameliorative Efficacy of the Cassia auriculata Root Against High-Fat-Diet + STZ-Induced Type-2 Diabetes in C57BL/6 Mice. ACS Omega. 2020;6(1):492–504.
  18. Srinivasan K, Viswanad B, Asrat L, Kaul CL, Ramarao P. Combination of high-fat diet-fed and low-dose streptozotocin-treated rat: a model for type 2 diabetes and pharmacological screening. Pharmacol Res. 2005;52(4):313–320.
  19. Liu Y, Deng J, Fan D. Ginsenoside Rk3 ameliorates high-fat-diet/streptozocin-induced type 2 diabetes mellitus in mice via the AMPK/Akt signaling pathway. Food Funct. 2019;10(5):2538–2551.
  20. Hu RY, et al. AFG Ameliorates Diabetic Retinopathy through AMPK-Dependent Autolysosomal Pathway: From Network Pharmacology to In Vivo and In Vitro Validation. J Agric Food Chem. 2026;74(2):2124–2139.
  21. Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659–661.
  22. Zou Q, et al. Oxidative stress in diabetic retinopathy. Clin Chim Acta. 2026;584:120871.
  23. Clements JN, Mesawich J, Twisdale C. Current and Emerging Pharmacologic Therapies for Diabetic Retinopathy. Pharmacotherapy. 2026;46(3):e70119.
  24. Rezvani Z, Khani F, Afarid M, Asadian F, Takhshid MA. Clinical values of systemic inflammatory indices in diabetic retinopathy. Clin Exp Optom. 2026;109(3):371–385.
  25. Zhu Z, et al. Targeting the CMKLR1-Mediated Signaling Rebalances Immunometabolism State in Middle-Age Testicular Macrophages. Adv Sci (Weinh). 2026;13(14):e15166.
  26. Lin Y, et al. Epithelial chemerin-CMKLR1 signaling restricts microbiota-driven colonic neutrophilia and tumorigenesis by up-regulating lactoperoxidase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022;119(29):e2205574119.
  27. Puthanmadhom Narayanan S, et al. Epigenetic Alterations Are Associated With Gastric Emptying Disturbances in Diabetes Mellitus. Clin Transl Gastroenterol. 2020;11(3):e00136.
  28. Wang L, et al. Chemerin/CMKLR1 Axis Promotes the Progression of Proliferative Diabetic Retinopathy. Int J Endocrinol. 2021;2021:4468625.
  29. Zheng C, et al. α-NETA down-regulates CMKLR1 mRNA expression in ileum and prevents body weight gains collaborating with ERK inhibitor PD98059 in turn to alleviate hepatic steatosis in HFD-induced obese mice but no impact on ileal mucosal integrity and steatohepatitis progression. BMC Endocr Disord. 2023;23(1):9.
  30. Dranse HJ, et al. The impact of chemerin or chemokine-like receptor 1 loss on the mouse gut microbiome. PeerJ. 2018;6:e5494.
  31. Flores-Hernández E, et al. Canonical and non-canonical Wnt signaling are simultaneously activated by Wnts in colon cancer cells. Cell Signal. 2020;72:109636.
  32. Qi Y, et al. Heat-inactivated Bifidobacterium adolescentis ameliorates colon senescence through Paneth-like-cell-mediated stem cell activation. Nat Commun. 2023;14(1):6121.
  33. Ou W, et al. Cooperation of Wnt/β-catenin and Dll1-mediated Notch pathway in Lgr5-positive intestinal stem cells regulates the mucosal injury and repair in DSS-induced colitis mice model. Gastroenterol Rep (Oxf). 2024;12:goae090.
  34. Dong Y, et al. Berberine ameliorates DSS-induced intestinal mucosal barrier dysfunction through microbiota-dependence and Wnt/β-catenin pathway. Int J Biol Sci. 2022;18(4):1381–1397.
  35. Escandon P, et al. The role of peroxisome proliferator-activated receptors in healthy and diseased eyes. Exp Eye Res. 2021;208:108617.
  36. Blot G, et al. Perilipin 2-positive mononuclear phagocytes accumulate in the diabetic retina and promote PPARγ-dependent vasodegeneration. J Clin Invest. 2023;133(19):e161348.
  37. Zhou W, et al. TREM2-dependent activation of microglial cell protects photoreceptor cell during retinal degeneration via PPARγ and CD36. Cell Death Dis. 2024;15(8):623.
  38. Bala Kumar S, et al. Gut microbial metabolites targeting JUN in renal cell carcinoma via IL-17 signaling pathway: network pharmacology approach. Mol Divers. 2026;30(1):613–632.
  39. Wang L, et al. Gut microbial bile acid metabolite skews macrophage polarization and contributes to high-fat diet-induced colonic inflammation. Gut Microbes. 2020;12(1):1–20.
  40. Hagan T, et al. Antibiotics-Driven Gut Microbiome Perturbation Alters Immunity to Vaccines in Humans. Cell. 2019;178(6):1313–1328.e13.
  41. Meng Y, et al. Jinlida ameliorates diabetic kidney disease via gut microbiota-dependent production of pyridoxamine targeting renal AGEs/RAGE and TGF-β pathways. Phytomedicine. 2026;150:157744.
  42. Zhou H, Zhang L, Ding C, Zhou Y, Li Y. Upregulation of HMOX1 associated with M2 macrophage infiltration and ferroptosis in proliferative diabetic retinopathy. Int Immunopharmacol. 2024;134:112231.
  43. Mohammad HMF, et al. Neuroprotective effect of levetiracetam in mouse diabetic retinopathy: Effect on glucose transporter-1 and GAP43 expression. Life Sci. 2019;232:116588.
  44. Peng H, et al. Autophagy and senescence of rat retinal precursor cells under high glucose. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;13:1047642.
  45. Ding Y, Chen L, Xu J, Feng Y, Liu Q. APAF1 Silencing Ameliorates Diabetic Retinopathy by Suppressing Inflammation, Oxidative Stress, and Caspase-3/GSDME-Dependent Pyroptosis. Diabetes Metab Syndr Obes. 2024;17:1635–1649.
  46. Yang T, et al. Clinical study on the modulating effects of Jiaotaiwan on the modulating effects of microbiota–SCFAs–neurotransmitter/immune axis in patients with depression. Acupunct Herb Med 2025;5(4):456–468.
  47. Luo XX, et al. Effect of qiming granule on retinal blood circulation of diabetic retinopathy: a multicenter clinical trial. Chin J Integr Med. 2009;15(5):384–388.
  48. Hu Z, et al. Add-on effect of Qiming granule, a Chinese patent medicine, in treating diabetic macular edema: A systematic review and meta-analysis. Phytother Res. 2021;35(2):587–602.
  49. Yang M, et al. The Efficacy and Safety of Qiming Granule for Dry Eye Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Front Pharmacol. 2020;11:580.
  50. Ma XF, et al. Efficacy and Safety of Qiming Granule for Nerve Injury Associated with Non-proliferative Diabetic Retinopathy: A Multicenter, Randomized, Non-inferiority, Active-Controlled Clinical Trial. Chin J Integr Med. 2026;32(3):195–203.
  51. Zhou Q, et al. Qiming granules regulate Müller cell pyroptosis and the P2X7R/NLRP3 immune inflammatory pathway in diabetic retinopathy. Chin Med. 2026;21(1):89.
  52. Zhou L, Qin T, Lv Y, Wu Z. Qiming Granules Ameliorate Diabetic Retinopathy by Regulating the PI3K/Akt Signaling Pathway. J Ocul Pharmacol Ther. 2026;42(3):202–212.
  53. Li HD, Li MX, Zhang WH, Zhang SW, Gong YB. Effectiveness and safety of traditional Chinese medicine for diabetic retinopathy: A systematic review and network meta-analysis of randomized clinical trials. World J Diabetes. 2023;14(9):1422–1449.
  54. Chen F, et al. Isorhamnetin promotes functional recovery in rats with spinal cord injury by abating oxidative stress and modulating M2 macrophages/microglia polarization. Eur J Pharmacol. 2021;895:173878.
  55. Naudhani M, Thakur K, Ni ZJ, Zhang JG, Wei ZJ. Formononetin reshapes the gut microbiota, prevents progression of obesity and improves host metabolism. Food Funct. 2021;12(24):12303–12324.
  56. Qu Y, et al. Kaempferol Alleviates Murine Experimental Colitis by Restoring Gut Microbiota and Inhibiting the LPS-TLR4-NF-κB Axis. Front Immunol. 2021;12:679897.
  57. Saikia L, et al. Therapeutic Potential of Quercetin in Diabetic Neuropathy and Retinopathy: Exploring Molecular Mechanisms. Curr Top Med Chem. 2024;24(27):2351–2361.
  58. Yao H, et al. Kaempferol Protects Blood Vessels From Damage Induced by Oxidative Stress and Inflammation in Association With the Nrf2/HO-1 Signaling Pathway. Front Pharmacol. 2020;11:1118.
  59. Zhang HX, Li YY, Liu ZJ, Wang JF. Quercetin effectively improves LPS-induced intestinal inflammation, pyroptosis, and disruption of the barrier function through the TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway in vivo and in vitro. Food Nutr Res. 2022;66:10.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

شبكة CMKLR1ميكروبيوم الأمعاءالهيستوباثولوجيا الشبكيةالسيتوكينات الالتهابيةلطخة ويسترنتسلسل 16S rDNA
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.