مقالة بحثية

إسكات LINC00707 يخفف من الالتهاب والإجهاد التأكسدي في الخلايا الدبقية الصغيرة BV2 المحفزة بـ LPS عبر محور miR-145-5p/TRAF6 في إصابة الحبل الشوكي

111 مشاهدة

⸱

سبتمبر 11, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nursing, Zhangjiakou First Hospital, 2Department of Orthopedics, Zhangjiakou First Hospital, 3Department of Pediatrics, Zhangjiakou First Hospital

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يرتفع تعبير LINC00707 في البلازما عند حدوث إصابة في الحبل الشوكي، وهو ما يعزز الالتهاب والإجهاد التأكسدي بوساطة الخلايا الدبقية الصغيرة عبر محور إشارات miR-145-5p/TRAF6. ويؤدي إسكات LINC00707 إلى تخفيف هذه الاستجابات المرضية، مما يسلط الضوء على إمكانية اعتباره هدفاً علاجياً.

الملخص

تسبب إصابة الحبل الشوكي (SCI) إعاقة مدى الحياة، وتقلل بشكل كبير من مستوى الرفاهية، وتفرض عبئاً اجتماعياً واقتصادياً جسيماً. بحثت هذه الدراسة في دور LINC00707 في إصابة الحبل الشوكي من خلال تنظيم محور إشارات miR-145-5p/TRAF6. تم تحليل عينات بلازما من 30 شخصاً سليماً و75 مريضاً يعانون من إصابة الحبل الشوكي لقياس تعبير LINC00707 وmiR-145-5p وTRAF6 باستخدام تقنية RT-qPCR. كما تم تقييم الارتباطات بين مستويات LINC00707 في البلازما والعوامل المحفزة للالتهابات لدى المرضى المصابين بإصابة الحبل الشوكي. وعُرِضت خلايا microglial من نوع BV2 لـ 100 ng/mL من LPS، وقِيست العوامل المرتبطة بالالتهاب والإجهاد التأكسدي. كما تم تقييم التفاعلات الجزيئية باستخدام مقايسة مراسل اللوسيفيراز المزدوج (dual-luciferase reporter assay). واستُخدم تحليل الانحدار اللوجستي لتحديد العوامل المرتبطة بتعبير LINC00707. أظهرت النتائج زيادة مستويات LINC00707 وTRAF6 في بلازما المرضى المصابين بإصابة الحبل الشوكي، بينما انخفضت مستويات miR-145-5p. وارتبطت مستويات LINC00707 في البلازما إيجابياً بمستويات العوامل الالتهابية في البلازما. عمل LINC00707 كإسفنجة جزيئية لـ miR-145-5p، وكان TRAF6 جيناً مستهدفاً لـ miR-145-5p. وأدى تثبيط LINC00707 إلى خفض العوامل الالتهابية، والمواد المحفزة للإجهاد التأكسدي، ومستويات mRNA لـ TRAF6 في خلايا BV2. بينما أحدث تثبيط miR-145-5p تأثيرات معاكسة. تشير هذه النتائج إلى أن ارتفاع تعبير LINC00707 يرتبط بشدة إصابة الحبل الشوكي، وأن تثبيط LINC00707 قد يخفف من الالتهابات والإجهاد التأكسدي بوساطة الخلايا الدبقية الصغيرة عن طريق تنظيم محور إشارات miR-145-5p/TRAF6.

المقدمة

تُعد إصابة الحبل الشوكي (SCI) حالة رضخية تؤدي إلى تلف الحبل الشوكي، وهو مكون حيوي في الجهاز العصبي المركزي. وتتسبب إصابة الحبل الشوكي في تعطيل مسارات التوصيل العصبي بشكل مباشر بين الحبل الشوكي والدماغ، مما يؤدي إلى خلل جسيم في الوظائف الحركية والحسية واللاإرادية1,2. وقد أشارت الدراسات الوبائية إلى أن معدل الإصابة السنوي يبلغ حوالي 5 حالات لكل 100,000 شخص، مع وصول معدل الوفيات المرتبطة بالمرض إلى 16.7%3,4. كما قدّر مسح كندي تكلفة إعادة التأهيل مدى الحياة لكل مريض مصاب بإصابة في الحبل الشوكي بنحو 336,000 دولار أمريكي5. إن ارتفاع معدلات الإصابة والوفيات والتكاليف الباهظة المرتبطة بالتشخيص والعلاج وإعادة التأهيل تجعل من إصابة الحبل الشوكي تحدياً سريرياً كبيراً يتطلب تحسين الاستراتيجيات العلاجية.

يتكون التطور المرضي لإصابة الحبل الشوكي (SCI) من مرحلتين: الإصابة الأولية والإصابة الثانوية. تنتج الإصابة الأولية عن الضغط الميكانيكي الرضحي أو تمزق أنسجة الحبل الشوكي، بينما تتوسط العمليات المرضية، بما في ذلك الالتهاب والإجهاد التأكسدي، الإصابة الثانوية6,7. وفي الظروف الفسيولوجية، يساهم الالتهاب العصبي الذي تتوسطه الخلايا الدبقية الصغيرة في الحفاظ على التوازن الداخلي للجهاز العصبي المركزي8,9,10. ومع ذلك، بعد إصابة الحبل الشوكي، تصبح الخلايا الدبقية الصغيرة منشطة بشكل مفرط وتفرز كميات كبيرة من الوسائط المحفزة للالتهاب11,12. وتؤدي هذه الوسائط إلى إنتاج مفرط لأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS)، مما يسبب تلف الخلايا العصبية وموتها ويفاقم إصابة الحبل الشوكي الثانوية13,14. وبناءً على ذلك، فإن تثبيط التنشيط المفرط للخلايا الدبقية الصغيرة وقطع تسلسل الالتهاب يمثلان استراتيجيات علاجية واعدة لتعزيز التعافي العصبي وتحسين النتائج بعد إصابة الحبل الشوكي.

تُعد الحمض النووي الريبي غير المشفّر الطويل (lncRNAs) فئة من الأحماض النووية الريبية غير المشفرة التي يزيد طولها عن 200 نوكليوتيد وتفتقر إلى القدرة على تشفير البروتين15. بعد أن كانت تُعتبر في البداية مجرد "ضوضاء" نسخية، يُعترف الآن بـ lncRNAs كمنظمات مهمة لمختلف العمليات الفسيولوجية والمرضية16. وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن lncRNAs تلعب أدواراً حاسمة في الإصابة العصبية. وقد ظهر الحمض النووي الريبي غير المشفّر البروتيني طويل المدى 707 (LINC00707) كمنظم مهم لاضطرابات الجهاز العصبي. وأفادت دراسات سابقة أن LINC00707 يفاقم إصابة الدماغ الرضية من خلال تعزيز الالتهاب الذي تتوسطه الخلايا الدبقية الصغيرة17. بالإضافة إلى ذلك، أثبت Zhu et al. أن إسكات LINC00707 أدى إلى تخفيف الالتهاب وموت الخلايا المبرمج الناتج عن عديد السكاريد الشحمي (LPS) في خلايا PC12 بشكل ملحوظ18. وتوفر هذه النتائج أساساً نظرياً أولياً لاستكشاف دور LINC00707 في إصابة الحبل الشوكي (SCI). ومع ذلك، لا يزال من غير الواضح ما إذا كان LINC00707 ينظم الالتهاب الذي تتوسطه الخلايا الدبقية الصغيرة أثناء إصابة الحبل الشوكي.

تعمل الـ LncRNAs كإسفنجات جزيئية من خلال آلية الرنا الداخلي التنافسي (ceRNA)، حيث تقوم بعزل الـ microRNAs (miRNAs) وتنظيم تعبير الجينات المستهدفة في المصب19. ويشارك هذا النمط التنظيمي على نطاق واسع في إمراضية العديد من الأمراض. ومن الجدير بالذكر أن miR-145-5p ينخفض تعبيره بشكل ملحوظ في أنسجة إصابات الحبل الشوكي (SCI)20 وأثناء الإصابة الناجمة عن LPS21، ويؤدي الإفراط في تعبيره إلى تخفيف استجابات الإجهاد التأكسدي والالتهاب في الخلايا الدبقية الصغيرة بشكل فعال22. كما يلعب العامل 6 المرتبط بمستقبل عامل نخر الورم (TRAF6) دورًا محوريًا في إمراضية إصابات الحبل الشوكي23,24,25. ومع ذلك، لا يزال من غير الواضح ما إذا كانت LINC00707 و miR-145-5p و TRAF6 تمارس وظائف تنظيمية منسقة في إصابات الحبل الشوكي.

في الدراسة الحالية، ارتفع تعبير LINC00707 بشكل ملحوظ في الخلايا الدبقية الصغيرة المحفزة بـ LPS. وبناءً على ذلك، افترضنا أن LINC00707 قد يعمل كمنظم محفز للالتهاب في الخلايا الدبقية الصغيرة، وأن تثبيط تعبيره قد يخفف من الاستجابة الالتهابية العصبية، مما يؤدي إلى تحسين التطور المرضي لإصابة الحبل الشوكي (SCI). بحثت هذه الدراسة فيما إذا كان LINC00707 ينظم الاستجابات الالتهابية للخلايا الدبقية الصغيرة ويساهم في إمراضية SCI.

البروتوكول

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى تشانغجياكو الأول (رقم الموافقة 2024-KY-18). تم إبلاغ جميع المشاركين بأهداف الدراسة والمخاطر المحتملة، وقدموا موافقة مستنيرة مكتوبة قبل الالتحاق. جُمعت عينات دم وريدي من ضوابط أصحاء أثناء الفحوصات البدنية الروتينية، ومن مرضى الإصابة بنخاع الشوكي (SCI) فور دخولهم المستشفى. أُجريت القياسات المختبرية بواسطة المختبر السريري في المستشفى. أدوات البحث المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في جدول المواد.

1. الأشخاص المشاركون
تم استقطاب ما مجموعه 75 مريضاً يعانون من إصابات النخاع الشوكي (SCI) من مستشفى تشانغ جيا كاو الأول في الفترة ما بين يناير 2023 ويناير 2025. شملت معايير الاختيار المرضى الذين تم تأكيد إصابتهم بـ SCI عن طريق التصوير المقطعي المحوسب (CT) أو التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI)، وبشرط أن تكون المدة من وقت الإصابة وحتى الدخول إلى المستشفى ≤ 12 h. بينما شملت معايير الاستبعاد وجود تاريخ من إصابات أو جراحات في النخاع الشوكي أو الدماغ خلال الأشهر الستة الماضية؛ أو الإصابة بأمراض قلبية وعائية شديدة، بما في ذلك احتشاء عضلة القلب أو عدم انتظام ضربات القلب؛ أو الحمل أو الرضاعة؛ أو الأورام الخبيثة، أو قصور وظائف الكبد أو الكلى، أو أمراض الأوعية الدموية الدماغية الشديدة، أو الأمراض المعدية.

وفقاً لمعايير التصنيف العصبي الخاصة بالجمعية الأمريكية لإصابات النخاع الشوكي (ASIA)26، تم تصنيف 75 مريضاً يعانون من إصابة النخاع الشوكي (SCI) إلى مجموعات: الوظيفة العصبية الطبيعية (n = 21)، وإصابة النخاع الشوكي غير المكتملة (n = 36)، وإصابة النخاع الشوكي المكتملة (n = 18). وكان توزيع مواقع الإصابة كما يلي: العنقية 36.0%، والصدرية 30.7%، والقطنية 33.3%. كما تم استقطاب 30 شخصاً سليماً بشكل عشوائي، بما يتناسب مع مجتمع الدراسة، ليكونوا بمثابة مجموعة ضابطة. وجُمِعت المعلومات السريرية الأساسية لجميع المشاركين. وتضمنت معايير الاشتمال للأفراد الأصحاء: عدم وجود تاريخ من إصابات النخاع الشوكي أو صدمات الدماغ، أو العمليات الجراحية، أو الاضطرابات العصبية؛ وعدم وجود تاريخ من الأمراض الالتهابية المزمنة، أو اضطرابات المناعة الذاتية، أو الأورام الخبيثة؛ وعدم الإصابة بأمراض قلبية وعائية أو كبدية أو كلوية شديدة؛ وعدم وجود عدوى حادة أو مزمنة خلال الأسابيع الأربعة الماضية؛ وعدم وجود حمل أو رضاعة؛ وأن يكون العمر والجنس متطابقين مع مجموعة إصابة النخاع الشوكي (SCI).

استُخدم مقياس الاستقلالية الوظيفية (FIM) لتقييم الاستقلالية الوظيفية في الأنشطة اليومية. تبلغ الدرجة القصوى لمقياس FIM 126 درجة. كما استُخدمت درجات الإحساس اللمسي، وتمييز الأحجام (acmesthesia)، والدرجات الحركية لتقييم الوظائف الحسية والحركية. كانت الدرجة القصوى للإحساس اللمسي وتمييز الأحجام 112، بينما كانت الدرجة القصوى للوظيفة الحركية 100. وتشير الدرجات المنخفضة إلى ضعف عصبي أكثر شدة.

2. زراعة الخلايا، بناء النموذج، والترانسفكشن
تم الحصول على خلايا BV2 الدبقية الصغيرة المخلدة من الفئران من مركز موارد الخلايا في معهد شنغهاي للتكنولوجيا الحيوية. زُرعت الخلايا في وسط Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) عالي الجلوكوز مضافًا إليه 10% من مصل الجنين البقري (FBS)، والبنسلين (100 U/mL)، والستريبتومايسين (100 U/mL). حُفظت الخلايا عند 37 °C في حاضنة رطبة تحتوي على 5% CO₂.

لبناء النموذج، تم تحفيز خلايا BV2 باستخدام 0، أو 10، أو 20، أو 50، أو 100، أو 150، أو 200 ng/mL من عديد السكاريد الشحمي (LPS) لمدة 24 h. وقد تم اختيار التركيز الأمثل لـ LPS بناءً على النتائج التجريبية.

لإجراء عملية عفن الخلية (transfection)، تم استزراع خلايا BV2 في أطباق ذات 6 آبار، وتم إجراء عملية العفن بمجرد وصول الخلايا إلى درجة التلاقي المناسبة. استُخدم كاشف العفن بتركيز 1.5 µL لكل بئر وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. وبعد مرور 6 h، تم استبدال وسط الاستزراع بوسط جديد، واستمر استزراع الخلايا لمدة 24 h إضافية. استُخدم كل من بناء تثبيط LINC00707، والضابط السلبي المقابل، وأوليغونوكليوتيد miR-145-5p، وأوليغونوكليوتيد الضابط المقابل بتركيز 50 nM لكل بئر. كُررت جميع تجارب العفن بشكل مستقل 5 مرات على الأقل، مع إجراء 3 مكررات متوازية لكل تجربة مستقلة. وقد حُللت البيانات إحصائياً باستخدام نتائج 5 تجارب مستقلة على الأقل.

3. المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA)
جُمِعت السوائل الطافية للمزرعة من خلايا BV2 التي تم نقل الجينات إليها وتحفيزها بواسطة LPS عن طريق الطرد المركزي بسرعة 12,000 × g لمدة 10 دقائق، وقِيست مستويات إنترلوكين-1β (IL-1β)، وIL-6، وعامل نخر الورم-α (TNF-α) باستخدام أطقم ELISA المقابلة. وبإيجاز، أُجري الفحص من خلال التحضين المتتالي مع جسم مضاد مرتبط بالبيوتين، ومرافق HRP-streptavidin، وركيزة TMB وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. سُجل الامتصاصية عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة. حُددت مستويات السيتوكينات من منحنيات قياسية. قِيست كل عينة في ثلاث مكررات، وأُجريت 6 تجارب مستقلة.

4. قياس أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS)
تم قياس مستويات ROS داخل الخلايا في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS باستخدام طقم فحص أنواع الأكسجين التفاعلية. باختصار، حُضنت الخلايا مع 10 µmol/L من DCFH-DA عند 37 °C لمدة 20 min. بعد الحضن، تم التخلص من السائل الطافي، وغُسلت الخلايا 3 مرات بمحلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS) لإزالة المسبار الزائد خارج الخلايا. وقيست شدة الفلورة باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة عند أطوال موجية للإثارة والانبعاث تبلغ 488 nm و 525 nm على التوالي. وحُسبت مستويات ROS النسبية بناءً على شدة الفلورة. حُللت جميع العينات في ثلاث مكررات، وكُررت التجربة بأكملها بشكل مستقل 5 مرات على الأقل.

5. الكشف عن المالوندdialdehyde، وسوبر أكسيد ديسميوتاز، والجلوتاثيون
جُمعت خلايا BV2 المعالجة، وحُضرت مستحلبات خلوية. نُفذ طرد مركزي للعينات بسرعة 12,000 × g لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة 4 °C للحصول على الرائق. استُخدمت أطقم كشف تجارية لكل من المالوندdialdehyde (MDA)، وسوبر أكسيد ديسميوتاز (SOD)، والجلوتاثيون (GSH) وفقًا لإرشادات الشركة المصنعة لتحديد مستوياتها في الرائق الخلوي. حُللت جميع العينات في ثلاث مكررات، وكُررت التجربة بأكملها بشكل مستقل 5 مرات على الأقل.

6. مقايسة مراسل لوسيفيراز المزدوج
تم استنساخ قطع المنطقة غير المترجمة 3' (3' UTR) لـ LINC00707 و TRAF6 التي تحتوي على مواقع ارتباط miR-145-5p المتوقعة، جنباً إلى جنب مع التسلسلات الطافرة المقابلة، في ناقل مراسل اللوسيفيراز pmirGLO لإنتاج بنيات مراسلة من النوع البري (WT-LINC00707 و WT-TRAF6) وبنيات طافرة (MUT-LINC00707 و MUT-TRAF6). تم إجراء ترنسفكشن مشترك لخلايا BV2 باستخدام بنيات المراسل وأوليغونوكليوتيدات miR-145-5p، ثم زُرعت لمدة 24 h. بعد ذلك، جُمعت الخلايا وقِيست أنشطة لوسيفيراز اليراع (firefly) و Renilla باستخدام قارئ الأطباق الدقيقة.

7. RT-qPCR
تم استخلاص الحمض النووي الريبي الكلي (Total RNA) باستخدام كاشف استخلاص RNA. وقُيمت جودة RNA باستخدام نسبة OD₂₆₀/OD₂₈₀، حيث اعتبرت القيم التي تتراوح بين 1.8 و 2.0 مقبولة. تم نسخ حوالي 1 µg من RNA الكلي عكسياً إلى cDNA باستخدام طقم النسخ العكسي. وتم قياس التعبير الجيني بواسطة RT-qPCR باستخدام مزيج SYBR Green PCR الرئيسي. أُجري النسخ العكسي عند 42 °C لمدة 15 min، تلا ذلك تثبيط إنزيم النسخ العكسي عند 95 °C لمدة 3 min. وحُفظ cDNA المُصنّع عند −20 °C حتى التحليل. أُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (Quantitative real-time PCR) بدءاً بمسخ أولي عند 95 °C لمدة 1 min، تلا ذلك 40 دورة من المسخ عند 95 °C لمدة 5 s، والارتباط والتمديد عند 60 °C لمدة 15 s. جُمعت إشارات الفلورة في نهاية كل خطوة ارتباط وتمديد. وأُجري تحليل منحنى الانصهار عند 95 °C لمدة 15 s، تلا ذلك 60 °C لمدة 1 min. حُسبت مستويات التعبير النسبي باستخدام طريقة 2⁻ΔΔCt. واستُخدم GAPDH أو 5S كمرجع داخلي لتقييس التعبير الجيني. وكانت تسلسلات البادئات كما يلي: LINC00707، الأمامي 5'-CCAACAGGGTATCAGAATTCTC-3' والعكسي 5'-TGCTGACAATAGCCATTAGG-3'؛ miR-145-5p، الأمامي 5'-GCCGAGGTCCAGTTTTCCCA-3' والعكسي 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'؛ TRAF6، الأمامي 5'-ATTACAACTGAGGTGCTTCT-3' والعكسي 5'-GCATCTGGTTCTGTTATAGGA-3'؛ GAPDH، الأمامي 5'-ATCCCATCACCATCTTCCAGG-3' والعكسي 5'-CGCCCCACTTGATTTTGG-3'؛ و 5S، الأمامي 5'-TCGTCTGATCTCGGAAGCTAA-3' والعكسي 5'-AAGCCTACAGCACCCGGTAT-3'.

8. التحليل الإحصائي
أُجريت التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج إحصائي متخصص. وتم تقييم طبيعية توزيع البيانات باستخدام اختبار Shapiro-Wilk، حيث أشارت قيمة P > 0.05 إلى توزيع طبيعي. عُرضت البيانات ذات التوزيع الطبيعي في صورة المتوسط ± SD، بينما عُرضت البيانات غير الموزعة طبيعياً في صورة الوسيط (P25, P75). وبالنسبة للمتغيرات المستمرة ذات التوزيع الطبيعي، أُجريت المقارنات بين مجموعتين باستخدام اختبار Student's t-test، والمقارنات بين مجموعات متعددة باستخدام اختبار ANOVA أحادي الاتجاه يليه اختبار Tukey's post hoc. أما بالنسبة للبيانات غير الموزعة طبيعياً، فقد استُخدم اختبار Mann-Whitney U للمقارنات بين مجموعتين، واختبار Kruskal-Wallis للمقارنات بين مجموعات متعددة. واستُخدم اختبار مربع كاي (chi-square test) لتحليل المتغيرات الفئوية بين المجموعات. كما استُخدمت تحليلات الانحدار اللوجستي أحادي المتغير ومتعدد المتغيرات لتقييم العوامل السريرية المرتبطة بتعبير LINC00707. وتم تقسيم المتغيرات المستمرة إلى فئتين عند وسيط المجموعة (مجموعة القيمة العالية = 1؛ مجموعة القيمة المنخفضة = 0). وأُدخلت المتغيرات التي كانت قيمة P لها < 0.05 في تحليل الانحدار اللوجستي أحادي المتغير إلى تحليل الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات. وعُرضت النتائج في صورة نسب الأرجحية (ORs) مع فواصل ثقة (CIs) بنسبة 95%، حيث أشارت قيمة OR > 1 إلى ارتباط إيجابي وOR < 1 إلى ارتباط سلبي. تضمنت جميع تجارب النمط الظاهري للخلايا 4 مكررات بيولوجية مستقلة على الأقل، مع 3 مكررات تقنية لكل مكرر بيولوجي. واعتُبرت قيمة P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

ارتفعت مستويات LINC0707 في البلازما لدى المرضى الذين يعانون من إصابة النخاع الشوكي (SCI)
تم تحليل الخصائص السريرية الأساسية لـ 30 شخصاً سليماً و75 مريضاً يعانون من إصابة النخاع الشوكي (SCI). وبالمقارنة مع الأشخاص السليمين، أظهر المرضى الذين يعانون من إصابة النخاع الشوكي انخفاضاً ملحوظاً في درجات الإحساس اللمسي، وفقدان الإحساس بالألم (acmesthesia)، والوظائف الحركية، ومقياس الاستقلال الوظيفي (FIM)، مما يشير إلى ضعف في الوظائف الحسية والحركية. بالإضافة إلى ذلك، كانت مستويات السيتوكينات المسببة للالتهاب في المصل أعلى بكثير لدى المرضى الذين يعانون من إصابة النخاع الشوكي مقارنة بالمجموعة الضابطة من الأشخاص السليمين (الجدول 1، P < 0.01)، مما يشير إلى استجابة التهابية معززة.

البنودHSSCIP-value
(n=30)(n=75)
العمر (سنة)45.83±10.0646.17±9.920.786
مؤشر كتلة الجسم (kg/m2)2.82±1.5723.94±1.290.69
الجنس (رجل، n)18410.619
التدخين (n)1280.949
شرب الكحول (n)1430.804
تصنيف ASIA لإصابات SCI (n)/
إصابة SCI كاملة/18
إصابة SCI غير كاملة/36
وظيفة عصبية طبيعية/21
مستوى إصابة SCI (n, %)/
الفقرة العنقية/27 (36.0%)
الفقرة الصدرية/23 (30.7%)
الفقرة القطنية/25 (33.3%)
درجة الإحساس اللمسي/53.42±2.12
درجة acmesthesia/53.39±24.68
درجة التمرين/49.07±18.74
درجة مقياس الاستقلال الوظيفي/71.33±19.41
IL-1β (pg/mL)1.47±0.5252.21±1.32<0.01
IL-6 (pg/mL)2.14±0.9788.47±23.52<0.01
TNF-α (pg/mL)2.84±1.1361.09±18.24<0.01
CRP (mg/L)1.42±0.6362.67±21.85<0.01
الاختصارات: HS، شخص سليم؛ SCI، إصابة الحبل الشوكي؛ BMI، مؤشر كتلة الجسم؛ ASIA، الجمعية الأمريكية لإصابات الحبل الشوكي؛ FIM، مقياس الاستقلال الوظيفي؛ IL، إنترلوكين؛ TNF، عامل نخر الورم؛ CRP، البروتين التفاعلي C.

الجدول 1: مقارنة الخصائص السريرية الأساسية بين الأشخاص الأصحاء والمرضى المصابين بإصابات النخاع الشوكي.تقارن هذه الجدولة بين الخصائص الديموغرافية، ودرجات الوظيفة العصبية، والمتغيرات المرتبطة بالإصابة، ومستويات المؤشرات الالتهابية بين الأشخاص الأصحاء والمرضى المصابين بإصابات النخاع الشوكي. الاختصارات: HS، الأشخاص الأصحاء؛ SCI، إصابة النخاع الشوكي؛ ASIA، الجمعية الأمريكية لإصابات النخاع الشوكي؛ FIM، مقياس الاستقلال الوظيفي؛ IL، إنترلوكين؛ TNF، عامل نخر الورم؛ CRP، البروتين التفاعلي C.

تم قياس مستوى تعبير LINC0707 في البلازما باستخدام تقنية RT-qPCR. وبالمقارنة مع الأصحاء، أظهر المرضى المصابون بـ SCI زيادة معنوية في تعبير LINC0707 في البلازما (الشكل 1A، P < 0.001). وقد قدم تحليل منحنى خصائص تشغيل المستقبل (ROC) أدلة أولية على أن تعبير LINC0707 قد يمتلك قيمة تمييزية في التفريق بين المرضى المصابين بـ SCI والأفراد الأصحاء (الشكل 1B). علاوة على ذلك، ازداد تعبير LINC0707 في البلازما مع زيادة الشدة السريرية لإصابة SCI (الشكل 1C، P < 0.01). وأظهر تحليل الارتباط أن تعبير LINC0707 في البلازما يرتبط إيجابياً بمستويات IL-1β (r = 0.635, P < 0.01)، وIL-6 (r = 0.612, P < 0.001)، وTNF-α (r = 0.675, P < 0.01)، والبروتين المتفاعل C (CRP; r = 0.61, P < 0.01) (الشكل 1D–G). وتشير هذه النتائج إلى أن ارتفاع تعبير LINC0707 يرتبط بالاستجابات الالتهابية لدى المرضى المصابين بـ SCI.

مخططات شريطية لتحليل التعبير A وC؛ منحنى ROC B؛ مخططات تشتت الارتباط D-G؛ مقارنة البيانات العلمية.
الشكل 1تعبير LINC0707 في البلازما وارتباطاته بعوامل الالتهاب في البلازما. (Aكان تعبير LINC0707 في البلازما أعلى لدى المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI) مقارنة بالأفراد الأصحاء. وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام اختبار t للعينات المستقلة.Bقدم تحليل منحنى خصائص التشغيل للمستقبل (ROC) مؤشرًا أوليًا على أن التعبير عن LINC0707 قد يكون مفيدًا في تمييز المرضى الذين يعانون من إصابة النخاع الشوكي (SCI) عن الأشخاص الأصحاء.سيزاد تعبير LINC0707 في البلازما مع زيادة شدة إصابة الحبل الشوكي (SCI) وفقاً لتصنيف الجمعية الأمريكية لإصابات العمود الفقري (ASIA). وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) متبوعاً باختبار توكي للمقارنات البعدية (Tukey’s HSD post hoc test).د–زارتبط تعبير LINC0707 في البلازما ارتباطاً إيجابياً بمستويات العوامل الالتهابية. أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل ارتباط بيرسون. *P < 0.01 و **P < 0.01. أصحاء، العدد = 30؛ مرضى مصابون بإصابة النخاع الشوكي (SCI)، العدد = 75. البيانات معروضة كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تم تحليل العوامل المرتبطة بتعبير LINC00707 باستخدام تحليل الانحدار اللوجستي أحادي المتغير ومتعدد المتغيرات
أُجريت تحليلات الانحدار اللوجستي أحادية المتغير ومتعددة المتغيرات لتحديد العوامل المرتبطة بتعبير LINC0707. وأظهر التحليل أحادي المتغير أن تصنيف ASIA لإصابة SCI (OR = 3.912, 95% CI: 1.792–8.537, P < 0.001)، ودرجة FIM (OR = 0.281, 95% CI: 0.108–0.729, P = 0.09)، ومستوى CRP (OR = 4.60, 95% CI: 1.724–12.271, P = 0.02) كانت مرتبطة بتعبير LINC0707. وبعد التعديل للمتغيرات المربكة المحتملة، أظهر الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات أن تصنيف ASIA لإصابة SCI (OR = 2.598, 95% CI: 1.08–6.203, P = 0.032)، ودرجة FIM (OR = 0.303, 95% CI: 0.102–0.902, P = 0.032)، ومستوى CRP (OR = 3.202, 95% CI: 1.024–10.015, P = 0.045) كانت عوامل مستقلة مرتبطة بتعبير LINC0707 (الجدول 2). وقد ارتبط تصنيف ASIA الأكثر شدة ومستويات CRP المرتفعة بتعبير أعلى لـ LINC0707، بينما ارتبطت درجة FIM الأعلى بتعبير أقل لـ LINC00707. وتدعم هذه الارتباطات بشكل أكبر احتمالية مشاركة LINC0707 في العملية المرضية لإصابة SCI.

العناصرتحليل الانحدار أحادي المتغيرتحليل الانحدار متعدد المتغيرات
أوفاصل ثقة 95%Pالقيمة الاحتمالية (p-value)أوفاصل ثقة 95%Pالقيمة الاحتمالية (p-value)
العمر 1.1760.475-2.9140.725
الجنس1.3030.524-3.2400.57
تصنيف ASIA لإصابات الحبل الشوكي 3.9121.792-8.537<0.0012.5981.088-6.2030.032
تصنيف ASIA لإصابات الحبل الشوكي (SCI)0.5880.497-1.4800.582
درجة الإحساس اللمسي0.850.343-2.1050.725
مقياس درجة فقدان الحس الطرفي (Acmesthesia score)0.8540.345-2.1190.734
درجة التمرين0.3920.153-1.0060.051
درجة مقياس استقلال الوظائف (FIM)0.2810.108-0.7290.0090.3030.102-0.9020.032
إنترلوكين-1 بيتا (IL-1β)1.1810.475-2.9350.72
إنترلوكين-6 1.4530.585-3.6080.42
TNF-α1.3040.526-3.2330.567
البروتين التفاعلي سي (CRP) 4.61.724-12.2710.0023.2021.024-10.0150.045
الاختصارات: OR، نسبة الأرجحية؛ CI، فاصل الثقة؛ ASIA، الجمعية الأمريكية لإصابات النخاع الشوكي؛ FIM، مقياس الاستقلال الوظيفي؛ IL، إنترلوكين؛ TNF، عامل نخر الورم؛ CRP، البروتين التفاعلي C.

الجدول 2: تحليل الانحدار اللوجستي للعوامل المرتبطة بالتعبير عن LINC0707. يعرض هذا الجدول تحليلات الانحدار اللوجستي أحادي المتغير ومتعدد المتغيرات المستخدمة لتحديد العوامل السريرية المرتبطة بالتعبير عن LINC0707 لدى المرضى المصابين بإصابات النخاع الشوكي. يتم عرض النتائج كنسب أرجحية مع فواصل ثقة 95% وقيم P المقابلة. الاختصارات: OR، نسبة الأرجحية؛ CI، فاصل الثقة؛ ASIA، الجمعية الأمريكية لإصابات النخاع الشوكي؛ FIM، مقياس الاستقلال الوظيفي؛ IL، إنترلوكين؛ TNF، عامل نخر الورم؛ CRP، البروتين التفاعلي C.

أدى تثبيط LINC0707 إلى تخفيف الالتهاب والإجهاد التأكسدي في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS
عولجت خلايا BV2 بتركيزات متزايدة من LPS (بواقع 0، 10، 20، 50، 10، 150، أو 20 ng/mL). وأظهر تحليل RT-qPCR أن تعبير LINC0707 زاد بشكل ملحوظ بعد المعالجة بتركيزات 10، 150، و20 ng/mL من LPS (الشكل 2A، P < 0.01، n = 6). وبناءً على هذه النتائج وتقارير سابقة27˒28، تم اختيار تركيز 10 ng/mL من LPS لإنشاء نموذج SCI in vitro. وبالمقارنة مع المجموعة الضابطة، ارتفع تعبير LINC0707 بشكل ملحوظ في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. وقد أدى التعداء بـ si-LINC0707 إلى تثبيط تعبير LINC00707 بفعالية (الشكل 2B، P < 0.01، n = 6).

تم تقييم تأثيرات تثبيط LINC0707 على الالتهاب والإجهاد التأكسدي لاحقاً. أدى التحفيز بـ LPS إلى زيادة معنوية في إفراز IL-1β (الشكل 2C، P < 0.001، n = 5)، و IL-6 (الشكل 2D، P < 0.001، n = 5)، و TNF-α (الشكل 2E، P < 0.01، n = 5)، بالإضافة إلى زيادة مستويات ROS داخل الخلايا (الشكل 2F، P < 0.01، n = 6) ومحتوى MDA (الشكل 2G، P < 0.01، n = 5). وفي المقابل، خفض التحفيز بـ LPS بشكل معنوي من مستويات مؤشرات مضادات الأكسدة SOD (الشكل 2H، P < 0.01، n = 6) و GSH (الشكل 2I، P < 0.001، n = 5). وقد أدى إسكات LINC0707 إلى خفض معنوي في إفراز السيتوكينات المحفزة للالتهاب ومستويات مؤشرات الإجهاد التأكسدي، بينما استعاد مستويات مضادات الأكسدة في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. تشير هذه النتائج إلى أن تثبيط LINC0707 يخفف من الاستجابات الالتهابية والإجهاد التأكسدي الناجم عن LPS في خلايا BV2.

سلسلة مخططات بيانية شريطية لتحليل تعبير السيتوكينات والمؤشرات الكيميائية الحيوية في تجربة محفزة بـ LPS.
الشكل 2تأثيرات تثبيط LINC0707 على الالتهاب والإجهاد التأكسدي في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. تم تحفيز خلايا BV2 بـ 10 نانوغرام/مل من عديد السكاريد الشحمي (LPS).Aتم قياس تعبير LINC0707 بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR) في خلايا BV2 المعالجة بتركيزات مختلفة من LPS.Bزادت تعبيرات LINC00707 في مجموعة LPS وانخفضت بعد عملية عفن (transfection) باستخدام si-LINC0707.ج–هـأظهر مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) أن إفراز العوامل المحفزة للالتهاب قد ازداد في مجموعة LPS وانخفض عقب تثبيط LINC0707.و–زارتفعت مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ومحتوى المالونديالدهيد (MDA) في مجموعة LPS، وانخفضت بعد تثبيط LINC0707.H–Iانخفض نشاط إنزيم سوبر أكسيد ديسميوتاز (SOD) ومستويات الجلوتاثيون المختزل (GSH) في مجموعة LPS، بينما ارتفعا بعد تثبيط LINC0707. **P** < 0.01؛ ns، غير دال إحصائياً. n ≥ 5. أُجريت التحليلات الإحصائية باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) متبوعاً باختبار توكي للمقارنات البعدية (Tukey’s HSD post hoc test). تُمثَّل البيانات في صورة المتوسط ± الانحراف المعياري (mean ± SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

يعمل LINC0707 كإسفنجة جزيئية لـ miR-145-5p
لتقصي الآلية الجزيئية الكامنة وراء الوظيفة البيولوجية لـ LINC0707، استُخدمت قاعدة بيانات ENCORI للتنبؤ بـ miRNAs المستهدفة المحتملة. وقد حدد التحليل المعلوماتي الحيوي وجود تسلسلات ارتباط تكميلية بين LINC00707 و miR-145-5p (الشكل 3A). وأظهرت مقايسات مراسل لوسيفيراز المزدوج أن نشاط اللوسيفيراز في بنية WT-LINC0707 قد انخفض بشكل ملحوظ بفعل محاكي miR-145-5p وزاد بفعل مثبط miR-145-5p. وفي المقابل، لم تؤثر أي من المعالجتين على نشاط اللوسيفيراز في بنية MUT-LINC0707 (الشكل 3B، P < 0.01، n = 4)، مما يؤكد التفاعل المباشر بين LINC00707 و miR-145-5p.

أظهر تحليل RT-qPCR أن تعبير miR-145-5p في البلازما انخفض بشكل ملحوظ لدى المرضى المصابين بإصابة الحبل الشوكي (SCI) مقارنة بالأصحاء (الشكل 3C، P < 0.01). بالإضافة إلى ذلك، ارتبط تعبير LINC0707 ارتباطاً عكسياً مع تعبير miR-145-5p (الشكل 3D، P < 0.01)، وانخفضت مستويات miR-145-5p في البلازما تدريجياً مع زيادة شدة إصابة الحبل الشوكي (الشكل 3E، P < 0.01). أما في المختبر، فقد انخفض تعبير miR-145-5p بشكل ملحوظ في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS مقارنة بخلايا التحكم، بينما أدى تثبيط LINC00707 إلى استعادة تعبير miR-145-5p (الشكل 3F، P < 0.01، n = 6). وتشير هذه النتائج إلى أن LINC0707 يعمل كحمض نووي ريبي داخلي متنافس (ceRNA) عن طريق عزل miR-145-5p وبالتالي تنظيم تعبيره أثناء التطور المرضي لإصابة الحبل الشوكي.

تحليل التعبير الجيني؛ miR-145-5p، مقايسة لوسيفيراز، مخطط الارتباط؛ مخططات شريطية، محاذات التسلسل.
الشكل 3يعمل LINC0707 كإسفنجة جزيئية لـ miR-145-5p. (أ) تنبأت قاعدة بيانات ENCORI بوجود تسلسلات ارتباط تكميلية بين LINC0707 وmiR-145-5p. (ب) أكد مقايسة مراسل لوسيفيراز المزدوج التفاعل بين LINC0707 و miR-145-5p. وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين ثنائي الاتجاه (two-way ANOVA) متبوعاً باختبار Tukey’s HSD للمقارنات البعدية. (ج) أظهر تحليل RT-qPCR انخفاض تعبير miR-145-5p في بلازما المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI). وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام اختبار t للعينات المستقلة. (د) ارتبط تعبير LINC0707 ارتباطاً عكسياً مع تعبير miR-145-5p لدى المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI). وقد أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل ارتباط بيرسون. (هـ) انخفض تعبير miR-145-5p في البلازما مع زيادة شدة إصابة النخاع الشوكي وفقاً لتصنيف ASIA. أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) يليه اختبار توكي للمقارنات البعدية (Tukey’s HSD post hoc test). (و) انخفض تعبير miR-145-5p في مجموعة LPS، وارتفع عقب عملية عفن (transfection) باستخدام si-LINC0707، وانخفض عقب عملية عفن باستخدام مثبط miR-145-5p. وكان التحليل الإحصائي... أُجريت باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA)، يليه اختبار توكي للمقارنات المتعددة (Tukey’s HSD post hoc test).. P < 0.05, *P < 0.01، و **P < 0.01؛ ns، غير دال إحصائياً. الأشخاص الأصحاء، ن = 30؛ المرضى المصابون بإصابة النخاع الشوكي (SCI)، ن = 75؛ التجارب الخلوية، ن ≥ 4. البيانات معروضة كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تثبيط miR-145-5p عزز الالتهاب والإجهاد التأكسدي في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS
لبحث دور miR-145-5p، تم ترانسفكشن خلايا BV2 بمثبط miR-145-5p أو التحكم السلبي المقابل. بعد ذلك، تم تقييم مستويات السيتوكينات الالتهابية وعلامات الإجهاد التأكسدي. ومقارنة بمجموعة التحكم السلبي للمثبط، أدى تثبيط miR-145-5p إلى زيادة ملحوظة في إفراز IL-1β (الشكل 4A، P < 0.01، n = 5)، وIL-6 (الشكل 4B، P < 0.01، n = 5)، وTNF-α (الشكل 4C، P < 0.01، n = 5). بالإضافة إلى ذلك، زادت مستويات ROS داخل الخلايا (الشكل 4D، P < 0.01، n = 6) ومحتوى MDA (الشكل 4E، P < 0.01، n = 5) بشكل ملحوظ، بينما انخفضت مستويات SOD (الشكل 4F، P < 0.01، n = 6) وGSH (الشكل 4G، P < 0.01، n = 5) بشكل ملحوظ. تشير هذه النتائج إلى أن تثبيط miR-145-5p يعكس التأثيرات الوقائية لخفض تعبير LINC0707 على الالتهاب والإجهاد التأكسدي الناجم عن LPS في خلايا BV2.

مخططات شريطية تقارن مستويات التعبير البروتيني مع المعالجة بـ LPS في دراسة تثبيط الجينات.
الشكل 4تأثيرات تثبيط miR-145-5p على الالتهاب والإجهاد التأكسدي في خلايا BV2. (أ–جأظهر مقايسة الممتز المكون من الإنزيم المرتبط بالفلورة (ELISA) أن إفراز العوامل المحفزة للالتهاب قد زاد بشكل ملحوظ بعد عملية عفن (transfection) باستخدام مثبط miR-145-5p.د-هـارتفعت مستويات أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) ومحتوى الملونديالدهيد (MDA) بشكل ملحوظ بعد عفن (transfection) مثبط miR-145-5p.و–زانخفض نشاط سوبر أكسيد ديسميوتاز (SOD) ومستويات الجلوتاثيون (GSH) بشكل ملحوظ بعد عملية عفن (transfection) باستخدام مثبط miR-145-5p. **P** < 0.01. n ≥ 5. أجريت التحليلات الإحصائية باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) يليه اختبار توكي للمقارنات المتعددة (Tukey’s HSD post hoc test). عُرضت البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (mean ± SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

تم تحديد TRAF6 كجين مستهدف لـ miR-145-5p
تنبأت قاعدة بيانات miRDB بأن TRAF6 يمثل هدفاً محتملاً لـ miR-145-5p. وقد تم تحديد تسلسلات الارتباط المكملة بين المنطقة غير المترجمة 3′ UTR لـ TRAF6 و miR-145-5p (الشكل 5A). وأظهرت فحوصات مراسل اللوسيفيراز المزدوج (Dual-luciferase reporter assays) أن نشاط اللوسيفيراز في بنية WT-TRAF6 انخفض بشكل ملحوظ بفعل محاكي miR-145-5p وزاد بفعل مثبط miR-145-5p. في المقابل، لم تؤثر أي من المعالجتين على نشاط اللوسيفيراز في بنية MUT-TRAF6 (الشكل 5B، P < 0.001, n = 4)، مما يؤكد أن TRAF6 هو هدف مباشر لـ miR-145-5p.

أظهر تحليل RT-qPCR أن تعبير mRNA لـ TRAF6 في البلازما قد زاد بشكل ملحوظ لدى المرضى المصابين بـ SCI (الشكل 5C، P < 0.001). وكان تعبير TRAF6 مرتبطاً ارتباطاً عكسياً مع تعبير miR-145-5p (الشكل 5D، P < 0.01)، كما زادت مستويات mRNA لـ TRAF6 في البلازما مع زيادة شدة SCI (الشكل 5E، P < 0.01). أما In vitro، فقد زاد تعبير TRAF6 بشكل ملحوظ في خلايا BV2 المحفزة بواسطة LPS مقارنة بمجموعة الضبط، ولكنه انخفض بشكل ملحوظ بعد تثبيط LINC0707 (الشكل 5F، P < 0.01، n = 6). وعلى العكس من ذلك، أدى تثبيط miR-145-5p إلى استعادة تعبير TRAF6 (الشكل 5G، P < 0.01، n = 6). وتشير هذه النتائج إلى أن LINC0707 ينظم تعبير TRAF6 من خلال مسار إشارات miR-145-5p.

مخطط تنظيم التعبير الجيني مع تفاعل miR-145-5p؛ يتضمن معادلات ورسوماً بيانية وبيانات.
الشكل 5يُعد TRAF6 جيناً مستهدفاً لـ miR-145-5p. (Aتوقعت قاعدة بيانات miRDB وجود تسلسلات ربط تكميلية بين TRAF6 وmiR-145-5p.Bأكد مقايسة مراسل لوسيفيراز المزدوج العلاقة الاستهدافية بين TRAF6 وmiR-145-5p. أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين ثنائي الاتجاه (two-way ANOVA)، يليه اختبار توكي للمقارنات المتعددة (Tukey’s HSD post hoc test).سيأظهر تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR) ارتفاع مستوى تعبير TRAF6 في بلازما المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI). وقد أُجري التحليل الإحصائي باستخدام اختبار t للعينات المستقلة.دارتبط تعبير TRAF6 ارتباطاً عكسياً مع تعبير miR-145-5p في البلازما لدى المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI). وقد أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل ارتباط بيرسون.هـزاد تعبير TRAF6 في البلازما مع زيادة شدة إصابة الحبل الشوكي وفقاً لتصنيف ASIA. وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) متبوعاً باختبار Tukey’s HSD للمقارنات البعدية.فزاد تعبير TRAF6 في خلايا BV2 المحفزة بـ LPS، وانخفض عقب تثبيط LINC0707. أُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) متبوعاً باختبار توكي للمقارنات المتعددة (Tukey’s HSD post hoc test).جزادت تعبيرات TRAF6 بعد تثبيط miR-145-5p. وأُجري التحليل الإحصائي باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (one-way ANOVA) متبوعاً باختبار توكي للفرق المعنوي الأدنى (Tukey’s HSD post hoc test). P < *P*، 0.05 < 0.01، و **P < 0.01؛ ns، غير دالة إحصائياً. الأشخاص الأصحاء، ن = 30؛ المرضى المصابون بإصابة النخاع الشوكي (SCI)، ن = 75؛ تجارب الخلايا، ن ≥ 4. تُعرض البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

توافر البيانات:
مجموعات البيانات التي تم إنشاؤها و/أو تحليلها في هذه الدراسة متاحة في مستودع Zenodo: https://doi.org/10.5281/zenodo.21470454.

المناقشة

تُعد إصابة الحبل الشوكي (SCI) اضطراباً صدمياً شديداً في الجهاز العصبي المركزي يؤدي إلى ضعف أو فقدان تام للتوصيل العصبي عبر الحبل الشوكي، مما يتسبب في خلل حركي وحسي وذاتي lifelong، بالإضافة إلى عواقب فسيولوجية ونفسية عميقة29˒30. وتزداد شدة هذه الاعتلالات عموماً بزيادة مدى إصابة الحبل الشوكي. وفي الدراسة الحالية، ارتفع تعبير LINC00707 في البلازما لدى المرضى المصابين بإصابة الحبل الشوكي، وارتبط ذلك إيجابياً بمستويات السيتوكينات المسببة للالتهابات في الدورة الدموية، مما يشير إلى دور محتمل لـ LINC00707 في الالتهابات والإجهاد التأكسدي المرتبطين بإصابة الحبل الشوكي. وبناءً على هذه النتائج السريرية، قمنا بمزيد من الاستقصاء حول الدور التنظيمي لـ LINC00707 في الالتهاب والإجهاد التأكسدي في خلايا BV2 المعالجة بـ LPS في سياق إمراضية إصابة الحبل الشوكي.

ارتبط LINC00707 بمجموعة متنوعة من العمليات البيولوجية من خلال تنظيم مسارات إشارات متعددة31. وبالإضافة إلى تنظيم تكاثر الخلايا، والموت الخلوي المبرمج، والهجرة، والغزو، فقد تبين أن LINC00707 يشارك في الاستجابات الالتهابية والإجهاد التأكسدي18˒32˒33. وقد أفادت دراسات سابقة بزيادة تعبير LINC00707 في سرطانات الرئة34، والثدي35، وعنق الرحم36، والكبد37، حيث يعمل على تعزيز تطور المرض عن طريق تنظيم الأهداف الجزيئية المصبة. بالإضافة إلى ذلك، فإن إسكات LINC00707 يعزز التمايز العظمي للخلايا الجذعية الميزنكيمية في نخاع العظم من خلال تنظيم miR-103a-3p38. وأثبت Zou et al. كذلك أن LINC00707 يعزز الاستجابات الالتهابية المستحثة بواسطة LPS في خلايا MRC-5، مما يدعم دوره المحفز للالتهاب33. وتماشياً مع هذه النتائج، أظهرت الدراسة الحالية أن تعبير LINC00707 زاد بشكل ملحوظ في خلايا BV2 المحفزة بواسطة LPS، بينما أدى تقليل تعبير LINC00707 إلى خفض إنتاج السيتوكينات المحفزة للالتهاب ومؤشرات الإجهاد التأكسدي. وتدعم هذه النتائج بشكل أكبر مشاركة LINC00707 في استجابات الإجهاد الالتهابي والتأكسدي.

أُبلغ أيضًا أن LINC00707 يعمل كـ RNA داخلي منافس (ceRNA) من خلال تنظيم miR-145-5p في العديد من الحالات المرضية، بما في ذلك مرض القلب الروماتزمي39، وسرطان المثانة40، والتمايز العظمي41. وقد أثبتت الدراسات السابقة أن miR-145-5p يمارس تأثيرات وقائية في إصابات النخاع الشوكي (SCI) عن طريق تثبيط الالتهاب والإجهاد التأكسدي42˒43، ومن خلال تعزيز تكوين الأوعية الدموية والإصلاح العصبي44˒45. وتماشيًا مع هذه الملاحظات، أظهرت الدراسة الحالية أن تعبير miR-145-5p في البلازما انخفض لدى المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي وفي خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. كما تم التأكد من أن LINC00707 يتفاعل مباشرة مع miR-145-5p، وأدى إسكات LINC00707 إلى استعادة تعبير miR-145-5p. علاوة على ذلك، أدى تثبيط miR-145-5p إلى عكس التأثيرات الوقائية لتعطيل LINC00707 على الاستجابات الالتهابية والإجهاد التأكسدي. وتشير هذه النتائج إلى أن LINC00707 قد يساهم في تطور إصابة النخاع الشوكي من خلال تنظيم الاستجابات الالتهابية واستجابات الإجهاد التأكسدي التي يتوسطها miR-145-5p.

أظهرت الدراسات السابقة أن TRAF6 يلعب دوراً هاماً في أمراض الجهاز العصبي المركزي46. كما تشير الأدلة إلى أن تثبيط TRAF6 يمكن أن يحسن بشكل ملحوظ من حالات إصابة الحبل الشوكي (SCI)47˒48. وقد حددت الدراسة الحالية TRAF6 كهدف مباشر لـ miR-145-5p. وقد زاد تعبير TRAF6 بشكل ملحوظ لدى المرضى المصابين بـ SCI وفي خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. بالإضافة إلى ذلك، أدى تثبيط LINC00707 إلى تقليل تعبير TRAF6، بينما أدى تثبيط miR-145-5p إلى استعادة تعبير TRAF6. وتsuggest هذه النتائج أن LINC00707 قد ينظم تعبير TRAF6 من خلال miR-145-5p أثناء إصابة الحبل الشوكي.

تشير هذه الدراسة إلى أن LINC00707 قد يؤثر على الاستجابات الالتهابية التي تتوسطها الخلايا الدبقية الصغيرة وإصابات الإجهاد التأكسدي أثناء إصابة الحبل الشوكي (SCI) عن طريق تنظيم محور إشارات miR-145-5p/TRAF6. وتتوافق هذه النتيجة مع تقرير سابق لـ Zhu et al.، الذين أثبتوا أن تثبيط LINC00707 خفف من الالتهاب والموت الخلوي المبرمج الناجم عن LPS في خلايا PC-12؛ ومع ذلك، تضمنت الآلية الكامنة في دراستهم محور miR-30a-5p/Neurod118. وبوجه عام، تشير هذه النتائج إلى أن LINC00707 قد لا يعمل من خلال هدف miRNA واحد، بل عبر شبكات miRNA متميزة بطريقة تعتمد على نوع الخلية، مما يساهم في العمليات المرضية لإصابة الحبل الشوكي (SCI).

تتضمن هذه الدراسة عدة قيود. أولاً، تم تقييم تعبير mRNA الخاص بـ TRAF6 فقط، بينما لم يتم فحص تعبير البروتين. يجب أن تشمل الدراسات المستقبلية التحقق على مستوى البروتين، مثل تحليل Western blot، لمزيد من التوصيف للعلاقة التنظيمية بين LINC00707 وmiR-145-5p وTRAF6. ثانياً، أُجريت هذه الدراسة حصرياً على المستوى الخلوي باستخدام نموذج خلايا BV2 الدبقية الصغيرة المحفزة بـ LPS، دون التحقق in vivo. ونظراً لتعقيد البيئة المجهرية لإصابة الحبل الشوكي (SCI)، قد لا تعكس النتائج الحالية الظروف المرضية الفسيولوجية in vivo بشكل كامل. ولا يزال من غير المؤكد ما إذا كان LINC00707 يمارس تأثيرات التهابية مماثلة في النماذج الحيوانية لإصابة الحبل الشوكي. ستعمل الدراسات المستقبلية على إنشاء نماذج حيوانية لإصابة الحبل الشوكي للتحقق من الدور التنظيمي لـ LINC00707 والآليات الجزيئية الكامنة وراءه. ثالثاً، على الرغم من أن نتائجنا تشير إلى أن LINC00707 يعمل من خلال مسار إشارات miR-145-5p/TRAF6 للتأثير على الالتهاب، إلا أنه لا يزال من غير المعروف ما إذا كان LINC00707 يعمل فقط كإسفنجه لـ miRNAs محددة أو يرتبط أيضاً بشكل مباشر ببروتينات معينة. هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتوضيح هذه التفاصيل الآلية. رابعاً، استند تحليل منحنى ROC إلى بيانات من مركز طبي واحد وعدد صغير نسبياً من المرضى، مما قد يكون قد أدى إلى حدوث انحياز، وجعل النتائج أولية. لذا، هناك حاجة إلى دراسات متعددة المراكز وأكبر حجماً تشمل عدداً أكبر من المرضى لتأكيد القدرة التشخيصية للمؤشرات الحيوية المحددة.

تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن LINC00707 قد يمثل علامة بيولوجية استكشافية محتملة في البلازما وهدفاً علاجياً لإصابات الحبل الشوكي (SCI). ومع ذلك، فإن ترجمة هذه النتائج إلى تطبيقات سريرية ستتطلب عدة خطوات إضافية؛ فأولاً، يجب تقييم القيمة التمييزية المحتملة لـ LINC00707 في البلازما ضمن مجموعات أكبر متعددة المراكز، ومجموعات تحقق مستقلة، ومجموعات ضابطة ذات صلة بالصدمات أو الالتهابات، مع العلم أن التقييم السريري والفحص الإشعاعي لا يزالان النهجين الأساسيين لتشخيص إصابات الحبل الشوكي. ثانياً، ينبغي تقييم القدرة العلاجية لاستهداف LINC00707 في نماذج حيوانية لتقدير مدى فعاليتها وسلامتها. وفي نهاية المطاف، قد يوفر تعديل مسار إشارات LINC00707/miR-145-5p/TRAF6 نهجاً جديداً للتخفيف من الالتهاب العصبي والإجهاد التأكسدي لدى المرضى الذين يعانون من إصابات الحبل الشوكي، رغم بقاء الكثير من العمل لسد الفجوة بين الأبحاث المخبرية والتطبيقات السريرية.

بشكل عام، ارتفع تعبير LINC00707 وTRAF6 في البلازما، بينما انخفض تعبير miR-145-5p لدى المرضى المصابين بإصابة النخاع الشوكي (SCI) وفي خلايا BV2 المحفزة بـ LPS. أدى تثبيط LINC00707 إلى تخفيف الاستجابات الالتهابية والإجهاد التأكسدي من خلال محور إشارات miR-145-5p/TRAF6، مما يشير إلى أن هذا المسار التنظيمي قد يمثل هدفاً علاجياً محتملاً لإصابة النخاع الشوكي (SCI).

الإفصاحات

يصرح المؤلفون بأنه لا يوجد لديهم أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال مشروع أبحاث العلوم الطبية في Hebei (منحة رقم 20251479).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملكيرجنKG2211أنبوب بولي بروبيلين بغطاء كبسي، خالٍ من الـ DNase والـ RNase، غير مسبب للحمى، قوة طرد مركزية قصوى 20,000 × g، لتخزين عينات الحمض النووي الريبي (RNA)/البروتين وطردها مركزياً.
طبق زراعة خلايا ذو 6 فجواتCorning3516طبق بوليسترين معالج لزراعة الخلايا (TC-treated) ذو قاع مسطح، معقم ومغلف بشكل فردي؛ حجم البئر 16.8 مل ومساحة النمو 9.5 سم²
إبرة سحب الدمBecton, Dickinson and Company367283إبرة جمع الدم ذات الاستخدام الواحد من BD Vacutainer. تتميز بتصميم إبرة مزدوج الطرف، حيث يُستخدم أحد الطرفين لسحب الدم وريديًا، بينما يتصل الطرف الآخر بالحامل وأنبوب التفريغ لجمع العينات في أنابيب متعددة. الإبرة مطلية بالسيليكون لتقليل شعور المريض بعدم الارتياح أثناء الإدخال.
أنابيب جمع الدمBecton, Dickinson and Company367605أنابيب جمع الدم المفرغة من BD Vacutainer. تشير السدادات ذات الأكواد اللونية المختلفة إلى إضافات متنوعة، بما يتوافق مع اختبارات مختبرية محددة.
خط خلايا BV2 المخلدة من الخلايا الدبقية الصغيرة للفئرانمركز الموارد الخلوية في معهد شنغهاي للتكنولوجيا الحيويةمعرف مورد الموارد: CVCL_0182خط خلوي من الخلايا الدبقية الصغيرة الفأرية المخلدة التي تعبر بشكل مستقر عن واسمات محددة للخلايا الدبقية الصغيرة (Iba1، CD11b، F4/80). وعند تحفيزها بـ LPS، تفرز خلايا BV2 سيتوكينات محرضة للالتهابات (IL-1β، وإنترلوكين-6 (IL-6)، وعامل نخر الورم ألفا (TNF-α)α) وتراكم أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) والمالون دايالدهيد (MDA) داخل الخلايا لمحاكاة التنشيط الالتهابي للخلايا الدبقية الصغيرة في الجسم الحي بعد إصابة الحبل الشوكي. تُزرع الخلايا في وسط DMEM عالي الجلوكوز مضاف إليه 10% من مصل جنين البقر (FBS) و1× بنسلين-ستربتومايسين، يتم الحفاظ عليه عند 37 °C مع 5% من أول أكسيد الكربون (CO)2 حضّانة مرطبة؛ يتم نقل الخلايا عند وصولها إلى 70% من الكثافة–تلاقي بنسبة 80% لتجنب التنشيط المفرط.
طقم فحص المالوندdialdehyde (MDA) في الخلايامعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA003-4-2طقم تحليل لوني يعتمد على الأطباق الدقيقة للكشف الكمي عن المالون داي ألدهيد الخلوي، وهو مؤشر على بيروكسيد الدهون. يتفاعل MDA مع حمض الثيوباربيتوريك (TBA) تحت التسخين لتكوين نواتج إضافة حمراء؛ ويتم قياس الامتصاصية عند طول موجي 532 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي للأطباق الدقيقة. تم تحسين الطقم لعينات مستخلصات الخلايا، والتشغيل عالي الإنتاجية باستخدام أطباق ذات 96 بئراً، ويغطي نطاق التكميم الخطي مستويات أكسدة الدهون المنخفضة إلى المتوسطة في الخلايا الدبقية الصغيرة.
أول أكسيد الكربون2 حضّانةThermo Scientific3111ثاني أكسيد الكربون (CO2) المرطب والمحاط بغلاف مائي2 حضّانة بحجم داخلي 184 لتر، مع نظام CO2 بالأشعة تحت الحمراء2 مستشعر، ونظام ترشيح هواء عالي الكفاءة (HEPA) لتقليل التلوث الميكروبي. يحافظ على بيئة استزراع مستقرة عند 37 °C، 5% ثاني أكسيد الكربون (CO2)2 ورطوبة مشبعة لزراعة الخلايا الملتصقة لفترات طويلة.
طقم مقايسة الجين المراسل للوسيفيراز المزدوجBeyotime BiotechnologyRG028تتيح هذه المجموعة الخاصة بقياس لوسيفيراز المزدوج الكشف الكمي المتسلسل عن لوسيفيراز اليراعات ولوسيفيراز رينيلا (Renilla) في نواتج تحلل الخلايا. يتم قياس إشارة لوسيفيراز اليراعات أولاً باستخدام ركيزة اللوسيفيرين؛ ويحتوي كاشف الكشف عن رينيلا اللاحق على مُخمد قوي يعمل على إزالة >بقاء 99.9% من لومينيسنس اليراعات (firefly luminescence)، مما يضمن قراءة نقية لإشارة رينيلا (Renilla) باستخدام ركيزة السيلينترازين (coelenterazine). تتضمن المجموعة منظم محلول لتحلل الخلايا مخصص لتحلل الخلايا الملتصقة، وهو متوافق مع مقياس لومينيسنس للأطباق الدقيقة ذات 96 بئراً. كاشف اليراعات عبارة عن سائل مخلوط مسبقاً للاستخدام المباشر؛ ويتم تسجيل قيم لومينيسنس اليراعات ورينيلا بالتتابع لحساب نشاط لوسيفيراز النسبي المُعاير (نسبة اليراعات/رينيلا) للتحقق من أهداف الـ ceRNA.
وسط إيجل المعدل من دولبيكوGibco11995065يعد وسط DMEM وسطاً أساسياً واسع الاستخدام لدعم نمو العديد من الخلايا الثديية المختلفة. تحتوي هذه التركيبة على نسبة عالية من الجلوكوز، وL-glutamine، والفينول الأحمر، وبيروفات الصوديوم. ويتطلب هذا الوسط إضافة مكملات، غالباً ما تكون بنسبة 10% من مصل الجنين البقري (FBS)، و5–١٠٪ CO2 بيئة للحفاظ على الرقم الهيدروجيني الفسيولوجي.
مصل جنين البقركل أخضر13011-8611مصل جنين بقري (FBS) من درجة ممتازة، منخفض السموم الداخلية، وخالٍ من الميكوبلازما & سالب العاثيات البكتيرية، يُضاف إلى وسط DMEM بنسبة 10% حجماً/حجماً لدعم نمو الخلايا.
GraphPad Prism الإصدار 9برمجيات GraphPad، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكيةلم يتم تقديم نص للمراجعة أو الترجمة. يرجى تزويدي بالنص المصدر باللغة الإنجليزية لترجمته إلى اللغة العربية وفقاً للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة.برنامج للرسوم البيانية العلمية والتحليل الإحصائي متخصص في بيانات التجارب الخلوية في المختبر. تم استيراد جميع قيم امتصاص qPCR، وELISA، والإجهاد التأكسدي، والوميض المزدوج للوسيفيراز الخام إلى برنامج Prism 9 لإجراء التحقق من التوزيع الطبيعي، والمقارنات المجموعية المعلمية وغير المعلمية، وإنشاء جميع الأشكال الكمية، وحساب المتوسط. ± الانحراف المعياري (SD)، وقيم P الدقيقة، وفترات الثقة 95% (CIs)، وتصدير أشكال عالية الدقة (300 نقطة في البوصة) تستوفي معايير النشر في المجلات العلمية. كما تم إيداع ملفات مشروع .prism الأصلية لجميع الرسوم البيانية في مستودع البيانات العام وفقاً للمتطلبات.
برنامج IBM SPSS Statistics الإصدار 26.0شركة IBM Corporation، أرمونك، نيويورك، الولايات المتحدة الأمريكيةلم يتم توفير نص للمراجعة أو الترجمة. يرجى تزويدنا بالمحتوى المطلوب ترجمته.حزمة برمجيات إحصائية شاملة تُستخدم لفرز البيانات الأساسية للعينات السريرية، واختبارات التوزيع الطبيعي (اختبار شابيرو-ويلك)، واختبار t للعينات المستقلة/غير المرتبطة، وتحليل التباين أحادي الاتجاه مع اختبار توكي.’وتصحيح المقارنات المتعددة، واختبار مان-ويتني (Mann-Whitney U) اللامعلمي، وحساب القيم الاحتمالية (P-values) الدقيقة وفواصل الثقة بنسبة 95% لجميع مجموعات البيانات الكمية البشرية والخلوية. كما تمت معالجة وتحليل جميع البيانات الديموغرافية والمخبرية الخاصة بالمرضى السريريين ضمن هذه المنصة.
إنترلوكين-1 (IL-1)β طقم مقايسة الممتز المالي المقاس بالإنزيم المرتبط (ELISA) بنظام SimpleStepAbcamab255730تعتمد مجموعة اختبار ELISA اللونية الساندوتشية ذات الغسلة الواحدة هذه على تقنية SimpleStep الحصرية، مما يتيح إتمام إجراء الكشف بالكامل في غضون 90 دقيقة. وتقيس هذه المجموعة كمياً إنترلوكين-1 لدى الجرذان.β في السائل الطافي لمزرعة الخلايا، والمصل، وعينات بلازما EDTA/السترات/الهيبارين. وتصل حساسية الكشف إلى 26.58 بيكوغرام/مل، مع نطاق تقدير كمي خطي يبلغ 54.69–3500 بيكوغرام/ملل. يتضمن الطقم لوحة ميكروية ذات شرائط قابلة للكسر مكونة من 8 آبار ومطلية مسبقاً. يتم الكشف عن إشارات الامتصاصية عند 450 نانومتر بواسطة قارئ اللوحات الميكروية لحساب تركيز IL-1β تركيز.
طقم مقايسة الممتز الوظيفي المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) من نوع SimpleStep لإنترلوكين-6 (IL-6)Abcamab234570طقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) من نوع الساندوتش الملون وبتقنية SimpleStep، مُحسَّن للكشف الكمي عن إنترلوكين-6 (IL-6) في جرذان التجارب في عينات السائل الطافي للمزارع الخلوية، والمصل، وعينات البلازما المحضرة باستخدام السترات أو EDTA أو الهيبارين. يعتمد الطقم سير عمل يتضمن تحضينًا في خطوة واحدة وغسلة واحدة لتقليل إجمالي وقت المقايسة إلى 90 دقيقة، مع حساسية كشف تصل إلى 43 بيكوغرام/مل ونطاق قياس كمي خطي يتراوح من 125 بيكوغرام/مل إلى 8000 بيكوغرام/مل. يتضمن الطقم لوحًا دقيقًا (microplate) من الشرائط القابلة للكسر مكونًا من 8 آبار ومطلية مسبقًا؛ وتُقرأ قيم الامتصاصية عند طول موجي 450 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي للألواح الدقيقة لحساب التركيز النهائي لـ IL-6.
لوحة LightCycler متعددة الآبار 96، بيضاءRoche LifeScience، سويسرا4729692001أطباق تفاعل من البولي بروبيلين الأبيض ذات 96 بئراً وبحواف جزئية، محسنة خصيصاً لجهاز LightCycler 96 للـ PCR في الوقت الحقيقي. تعمل جدران الآبار البيضاء على تقليل تداخل الفلورة في الخلفية وتعزيز انعكاس الإشارة لتحسين حساسية الكشف عن النسخ ذات الوفرة المنخفضة. ويضمن تصميم الجدران الرقيقة الموحد توصيلاً حرارياً ثابتاً عبر جميع الآبار، وهي متوافقة مع أحجام التفاعل التي تتراوح من 10 إلى 50 μLخالٍ من دي إن إي ز (DNase) و آر إن إي ز (RNase) وخالٍ من المسببات الحمية لاختبارات تضخيم الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (cDNA) المشتق من الحمض النووي الريبوزي (RNA).
كاشف ترانسفكشن LipofectamineTM 3000Thermo Fisher ScientificL3000015يتيح كاشف ترانسفكشن الجسيمات النانوية الدهنية، المقترن بالمحسن P3000، إجراء ترانسفكشن عالي الكفاءة للـ siRNA أو البلازميد في خلايا BV2 الدبقية الصغيرة مع سمية خلوية منخفضة.
طقم تخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (cDNA) للشريط الأول لـ lnRcute lncRNATIANGENKR202-02تم تحسين هذه المجموعة خصيصاً لعملية النسخ العكسي للحمض النووي الريبي غير المشفر الطويل (lncRNAs) ذي الوفرة المنخفضة، ومحتوى GC المتغير، والبنى الثانوية المعقدة. وهي تحتوي على محلول منظم مستقل لإزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) للتخلص من تلوث الحمض النووي الجينومي قبل عملية النسخ العكسي، ومزيج بادئات lnR-RT متخصص لإثراء قوالب lncRNA كاملة الطول. يتيح إنزيم النسخ العكسي المعدل تخليقاً فعالاً للحمض النووي المتمم (cDNA) طويل السلسلة من مدخلات الحمض النووي الريبي الكلي التي تتراوح من 10 نانوجرام إلى 2 نانوجرام.
طقم الكشف عن الـ lncRNA بواسطة qPCR من lnRcute (SYBR Green)TIANGENFP402مزيج مسبق مخصص لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) القائم على صبغة SYBR Green لقياس كمية الحمض النووي الريبي غير المشفر الطويل (lncRNA). يضمن إنزيم بوليميراز الحمض النووي بآلية البدء الساخن المعتمدة على الأجسام المضادة خصوصية تضخيم عالية؛ بينما تعمل مكونات المنافس H (H-competitor) على تقليل تداخل البنية الثانوية لقوالب lncRNA ذات المحتوى العالي من الجوانين والسيتوزين (GC). يتوافق هذا المزيج مع الحمض النووي الريبي المتمم (cDNA) الناتج عن طقم النسخ العكسي lnRcute lncRNA، وهو مناسب لقياس التعبير النسبي لـ lncRNA منخفض الوفرة.
قليل النيوكليوتيدات miR-145-5pGeneralbiol (ووهان، الصين)لم يتم توفير نص للمصدر. يرجى تزويدي بالنص الذي ترغب في ترجمته.محاكي miR-145-5p الاصطناعي، ومثبطه، وأوليغونوكليوتيدات التحكم السلبية المقابلة المستخدمة لتعديل نشاط miR-145-5p في خلايا BV2. تُستخدم في مقايسات التعبير، والالتهاب، والإجهاد التأكسدي، ومقايسات لوسيفيراز المزدوجة للمراسل.
طقم تحضير الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (cDNA) للشريط الأول لـ miRNA من miRcute PlusTIANGENKR211-02يعتمد هذا الأسلوب على تفاعل أحادي الأنبوب يجمع بين إضافة ذيل poly (A) والنسخ العكسي لتبسيط سير العمل التجريبي. يحتوي مزيج الإنزيمات على إنزيم poly (A) polymerase من بكتيريا E. coli، وإنزيم النسخ العكسي المفتقر إلى نشاط RNase H، ومثبط RNase، مما يجعله يستهدف تحديداً جزيئات miRNA أحادية السلسلة الناضجة، ويتجنب تداخل التضخيم الناتج عن جزيئات pre-miRNA ذات تراكيب دبوس الشعر. وهو مناسب لجزيئات miRNA المستخلصة من تحلل الخلايا، أو البلازما، أو عينات الأنسجة.
طقم الكشف عن miRNA بتقنية qPCR (SYBR Green) من miRcute PlusTIANGENFP411مزيج SYBR Green الجاهز والمحسن لتقدير كمية الـ miRNA الناضج، والمتوافق تماماً مع نواتج النسخ العكسي لـ miRcute. يعمل نظام المحلول المنظم على تحسين كفاءة ارتباط البادئات لقطع تضخيم الـ miRNA القصيرة، ويوفر إشارات فلورية مستقرة وحساسية عالية للكشف عن جزيئات الـ miRNA ضعيفة التعبير. يُستخدم U6 snRNA عادةً كمرجع داخلي لعملية التنميط (التقييس).
محلول بنسيلين-ستربتومايسين (100×)Beyotime BiotechnologyC0222مزيج مرشح معقم يحتوي على 10,000 وحدة/مل من البنسلين و10 مجم/مل من الستربتومايسين؛ التخفيف العامل 1:100 في وسط الزرع لمنع التلوث البكتيري.
طقم مقايسة أنواع الأكسجين التفاعلية مع المخففبيوتيم للتكنولوجيا الحيوية (Beyotime Biotechnology)S0034Mتعتمد هذه المجموعة على المسبار الفلوري DCFH-DA لقياس أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) داخل الخلايا كمياً. يتغلغل DCFH-DA عبر الغشاء الخلوي ويتم تحلله مائياً بواسطة إنزيم الإستيراز داخل الخلايا إلى DCFH، والذي يتأكسد بدوره بواسطة أنواع الأكسجين التفاعلية لإنتاج DCF الفلوري. تتوافق هذه المجموعة مع الأطباق الدقيقة ذات الـ 96 بئراً وقارئ الأطباق الدقيقة الفلوري للكشف عالي الإنتاجية (طول موجة الإثارة = 488 نانومتر، وطول موجة الانبعاث = 525 نانومتر). كما أنها مزودة بمخفف مسبار مخصص وكاشف التحكم الموجب Rosup لتثبيت إشارات الصبغ، وهي مناسبة للكشف عن الإجهاد التأكسدي في خلايا BV2 الدبقية الصغيرة الملتصقة دون الحاجة إلى تحلل الخلايا.
طقم تحليل الجلوتاثيون المختزل (GSH)معهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA006-1-2طقم لوح ميكروي قياسي لوني للكشف عن الجلوتاثيون المختزل (GSH)، وهو مضاد الأكسدة الأساسي داخل الخلايا. يتفاعل GSH مع حمض ثنائي ثيو ثنائي نيتروبنزويك (DTNB) لإنتاج منتج لوني أصفر، ويتم قياس الامتصاصية عند 405 نانومتر باستخدام قارئ الألواح الميكروية. يقوم الطقم بتكييف بروتوكول الأنابيب القياسي ليتناسب مع الكشف عالي الإنتاجية باستخدام لوح ميكروي مكون من 96 بئراً لتحليل مضادات الأكسدة في نواتج تحلل الخلايا.
si-LINC00707GenePharma (شنغهاي، الصين)لا يتوفر نص للمصدر. يرجى تزويدي بالنص الإنجليزي الذي ترغب في ترجمته.حمض ريبوزي نووي متداخل صغير مصمم لتقليل تعبير LINC00707 في خلايا BV2. يُستخدم في تجارب فقدان الوظيفة لتقييم آثار تثبيط LINC00707 على الاستجابات الالتهابية، والإجهاد التأكسدي، وتعبير miR-145-5p، وتعبير TRAF6.
si-LINC00707 NCGenePharma (شنغهاي، الصين)يرجى تزويدي بالنص المصدر الذي ترغب في ترجمته.يُستخدم حمض ريبوزي نووي متداخل صغير غير مستهدف كضابط سلبي لعملية ترانسفكشن si-LINC00707، وذلك للضبط والتحكم في التأثيرات غير النوعية الناتجة عن إجراء الترانسفكشن والتعرض لـ siRNA.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGEN4992777مزيج مسبق التحضير عالمي لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) باستخدام صبغة SYBR Green للتقدير الكمي النسبي للحمض الريبي النووي المرسال (mRNA)، يحتوي على إنزيم Taq polymerase ذو البداية الساخنة (hot-start)، والديوكسي نيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، وصبغة SYBR Green I، وصبغة ROX المرجعية لمعايرة الفلورة. يتميز بانخفاض التضخيم غير النوعي، وكفاءة تضخيم مستقرة، ويُستخدم على نطاق واسع في التقدير الكمي للجينات المستهدفة في الحمض الريبي النووي المرسال (مثل TRAF6 وGAPDH وغيرها).
جهاز الطرد المركزي المكتبي الصغير Thermo Scientific™ Sorvall™ ST 8Thermo Scientific75200709الخيار التقليدي للمختبرات السريرية، والقادر على التعامل مع ما يصل إلى 24 × أنابيب جمع الدم سعة 5/7 مل في المرة الواحدة. وتُعد السلسلة R نسخة مبردة، والتي يمكنها توفير حماية أفضل للعينات التي تتطلب عملية طرد مركزي في درجات حرارة منخفضة.
طقم TIANScript II لتخليق الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين التكميلي (cDNA) للشريط الأولTIANGENGKR107-02صُمم هذا المنتج لعملية النسخ العكسي العام للحمض الريبي النووي المرسال (mRNA) لتوليد حمض نووي متمم (cDNA) طويل يصل طوله إلى 12 كيلوباز (kb). وهو مزود بكل من بادئات Oligo (dT) 15 وبادئات السداسيات العشوائية (random hexamer primers) لتوفير استراتيجيات بَدْء مرنة. ويقوم إنزيم النسخ العكسي M-MLV المعدل بقراءة التراكيب الثانوية المعقدة لـ mRNA والمناطق الغنية بـ GC بكفاءة عالية، مع توافق واسع مع عمليات تضخيم qPCR لـ mRNA في الخطوات اللاحقة.
عامل نخر الورم-α طقم SimpleStep ELISAAbcamab236712طقم مقايسة الممتز المباشر (sandwich ELISA) من نوع SimpleStep سريع التنفيذ بغسلة واحدة، ومُحسّن للكشف الكمي عن عامل نخر الورم في الجرذان-α (عامل نخر الورم ألفا-α) في طافي المزرعة الخلوية، والمصل، وعينات بلازما متنوعة. تبلغ المدة الإجمالية للمقايسة 90 دقيقة، بحساسية فائقة تصل إلى 1.04 بيكوغرام/ملل، ونطاق كشف خطي يتراوح من 15.63 بيكوغرام/ملل إلى 1000 بيكوغرام/ملل. مجهز بـ 8 قابلة للفصل×لوح مكسو مسبقاً بـ 12 بئراً؛ يتم تسجيل قيم الكثافة الضوئية عند 450 نانومتر لـ TNF- النهائيα حساب كمي.
طقم تحليل إجمالي سوبر أكسيد ديسميوتيز (T-SOD)معهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA001-3-2طقم أطباق دقيقة ملونة WST-1 للكشف عن النشاط الإنزيمي الكلي لـ SOD. يقوم SOD بالتخلص من جذور أنيون السوبر أكسيد ويثبط تفاعل اختزال WST-1. يتم تسجيل الامتصاصية عند 450 نانومتر بواسطة قارئ الأطباق الدقيقة لحساب النشاط. مناسب لعينات متجانسات الخلايا والمصل والأنسجة، مع تطور لوني مستقر وقابلية تكرار عالية لتقييم القدرة المضادة للأكسدة.
كاشف TRIzolThermo Fisher Scientific15596018كاشف الفينول-غوانيدين أيزوثيوسيانات أحادي الطور لعزل الحمض النووي الريبي الكلي في خطوة واحدة من خلايا دبقية صغيرة مستنبتة؛ حيث يستخلص الحمض النووي الريبيوزي والبروتين في آن واحد من عينات متماثلة.

المراجع

  1. Trueblood CT, Singh A, Cusimano MA, Hou S. Autonomic dysreflexia in spinal cord injury: mechanisms and prospective therapeutic targets. Neuroscientist. 2024;30(5):597-611.
  2. Anderson MA, Squair JW, Gautier M, Hutson TH, Kathe C, Barraud Q, et al. Natural and targeted circuit reorganization after spinal cord injury. Nat Neurosci. 2022;25(12):1584-96.
  3. Liu Y, Yang X, He Z, Li J, Li Y, Wu Y, et al. Spinal cord injury: global burden from 1990 to 2019 and projections up to 2030 using Bayesian age-period-cohort analysis. Front Neurol. 2023;14:1304153. doi:10.3389/fneur.2023.1304153.
  4. Sekhon LH, Fehlings MG. Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury. Spine (Phila Pa 1976). 2001;26(24 Suppl):S2-12.
  5. Chan BC, Cadarette SM, Wodchis WP, Krahn MD, Mittmann N. The lifetime cost of spinal cord injury in Ontario, Canada: a population-based study from the perspective of the public health care payer. J Spinal Cord Med. 2019;42(2):184-93.
  6. Van Broeckhoven J, Sommer D, Dooley D, Hendrix S, Franssen A. Macrophage phagocytosis after spinal cord injury: when friends become foes. Brain. 2021;144(10):2933-45.
  7. Xiao S, Zhong N, Yang Q, Li A, Tong W, Zhang Y, et al. Aucubin promoted neuron functional recovery by suppressing inflammation and neuronal apoptosis in a spinal cord injury model. Int Immunopharmacol. 2022;111:109163. doi:10.1016/j.intimp.2022.109163.
  8. Li F, Wang Y, Zheng K. Microglial mitophagy integrates the microbiota-gut-brain axis to restrain neuroinflammation during neurotropic herpesvirus infection. Autophagy. 2023;19(2):734-6.
  9. Beattie MS. Inflammation and apoptosis: linked therapeutic targets in spinal cord injury. Trends Mol Med. 2004;10(12):580-3.
  10. Brennan FH, Li Y, Wang C, Ma A, Guo Q, Li Y, et al. Microglia coordinate cellular interactions during spinal cord repair in mice. Nat Commun. 2022;13(1):4096. doi:10.1038/s41467-022-31797-0.
  11. Kwon HS, Koh SH. Neuroinflammation in neurodegenerative disorders: the roles of microglia and astrocytes. Transl Neurodegener. 2020;9(1):42. doi:10.1186/s40035-020-00221-2.
  12. Zhong J, Qiu X, Yu Q, Chen H, Yan C. A novel polysaccharide from Acorus tatarinowii protects against LPS-induced neuroinflammation and neurotoxicity by inhibiting TLR4-mediated MyD88/NF-κB and PI3K/Akt signaling pathways. Int J Biol Macromol. 2020;163:464-75.
  13. Han X, Xu T, Fang Q, Zhang H, Yue L, Hu G, et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via .the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 2021;44:102010. doi:10.1016/j.redox.2021.102010.
  14. Simpson DSA, Oliver PL. ROS generation in microglia: understanding oxidative stress and inflammation in neurodegenerative disease. Antioxidants (Basel). 2020;9(8):743. doi:10.3390/antiox9080743.
  15. Onoguchi-Mizutani R, Akimitsu N. Long noncoding RNA and phase separation in cellular stress response. J Biochem. 2022;171(3):269-76.
  16. Zhang Y. LncRNA-encoded peptides in cancer. J Hematol Oncol. 2024;17(1):66. doi:10.1186/s13045-024-01591-0.
  17. Hu W, Zhou J, Jiang Y, Bao Z, Hu X. Silencing of LINC00707 alleviates brain injury by targeting miR-30a-5p to regulate microglia inflammation and apoptosis. Neurochem Res. 2024;49(1):222-33.
  18. Zhu S, Zhou Z, Li Z, Shao J, Jiao G, Huang YE, et al. Suppression of LINC00707 alleviates lipopolysaccharide-induced inflammation and apoptosis in PC-12 cells by regulating miR-30a-5p/Neurod1. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;83(11):2049-56.
  19. Long J, Lan W, Shen B, Liao F, Cai H, Li J, et al. LncRNA-miRNA-mRNA network in schizophrenia. J Mol Neurosci. 2025;75(3):104.
  20. De Gasperi R, Graham ZA, Harlow LM, Bauman WA, Qin W, Cardozo CP. The signature of microRNA dysregulation in muscle paralyzed by spinal cord injury includes downregulation of microRNAs that target myostatin signaling. PLoS One. 2016;11(12):e0166189.
  21. Lin Y, Liu L, Lin Y, Yang R, Liao S, Xu M, et al. MiR-145 alleviates sepsis-induced inflammatory responses and organ injury by targeting ADAM17. Front Biosci (Landmark Ed). 2024;29(1):44. doi:10.31083/j.fbl2901044.
  22. Wang C, Gu L, Yang Z, Su J, Wen X. Mume Fructus total flavonoids modulate miR-145-3p expression to inhibit lipopolysaccharide-induced inflammatory cytokine production in BV2 cells. Comb Chem High Throughput Screen. 2026;29. doi:http://dx.doi.org/10.2174/0113862073447531260414195911
  23. Chen S, Wei J, Huang L, Feng B, Guo W. MiRNA-194-5p inhibits inflammatory response after spinal cord injury via .regulating TRAF6. Minerva Med. 2020;111(6):603-6.
  24. Lu Y, Jiang BC, Cao DL, Zhang ZJ, Zhang X, Ji RR, et al. TRAF6 upregulation in spinal astrocytes maintains neuropathic pain by integrating TNF-α and IL-1β signaling. Pain. 2014;155(12):2618-29.
  25. Zhao Y, Li T, Zhang L, Yang J, Zhao F, Wang Y, et al. TRAF6 promotes spinal microglial M1 polarization to aggravate neuropathic pain by activating the c-JUN/NF-κB signaling pathway. Cell Biol Toxicol. 2024;40(1):54. doi:10.1007/s10565-024-09900-6.
  26. Kirshblum SC, Memmo P, Kim N, Campagnolo D, Millis S, American Spinal Injury Association. Comparison of the revised 2000 American Spinal Injury Association classification standards with the 1996 guidelines. Am J Phys Med Rehabil. 2002;81(7):502-5.
  27. Xue MT, Sheng WJ, Song X, Shi YJ, Geng ZJ, Shen L, et al. Atractylenolide III ameliorates spinal cord injury in rats by modulating microglial/macrophage polarization. CNS Neurosci Ther. 2022;28(7):1059-71.
  28. Zhang H, Xiang L, Yuan H, Yu H. PTPRO inhibition ameliorates spinal cord injury through shifting microglial M1/M2 polarization via .the NF-κB/STAT6 signaling pathway. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2024;1870(5):167141. doi:10.1016/j.bbadis.2024.167141.
  29. Eli I, Lerner DP, Ghogawala Z. Acute traumatic spinal cord injury. Neurol Clin. 2021;39(2):471-88.
  30. Brouwers E, van der Meent H, Curt A, Maier DD, Abel RF, Weidner N, et al. Recovery after traumatic thoracic and lumbar spinal cord injury: the neurological level of injury matters. Spinal Cord. 2020;58(9):980-7.
  31. Yao Q, Li Z, Chen D. Review of LINC00707: a novel lncRNA and promising biomarker for human diseases. Front Cell Dev Biol. 2022;10:813963. doi:10.3389/fcell.2022.813963.
  32. Chen L, Chen Y, Huang J, Zhang J. LncRNA LINC00707 serves as a sponge of miR-382-5p to alleviate lipopolysaccharide-induced WI-38 cell injury through upregulating NKAP in infantile pneumonia. Autoimmunity. 2022;55(5):328-38.
  33. Zou X, Gao C, Shang R, Chen H, Wang B. Knockdown of lncRNA LINC00707 alleviates LPS-induced injury in MRC-5 cells by acting as a ceRNA of miR-223-5p. Biosci Biotechnol Biochem. 2021;85(2):315-23.
  34. Ma T, Ma H, Zou Z, He X, Liu Y, Shuai Y, et al. The long intergenic noncoding RNA 00707 promotes lung adenocarcinoma cell proliferation and migration by regulating Cdc42. Cell Physiol Biochem. 2018;45(4):1566-80.
  35. Li H, Liu Q, Hu Y, Yin C, Zhang Y, Gao P. LINC00707 regulates autophagy and promotes the progression of triple-negative breast cancer by activation of the PI3K/AKT/mTOR pathway. Cell Death Discov. 2024;10(1):138. doi:10.1038/s41420-024-01906-7.
  36. Fang F, Guo C, Zheng W, Li Q. LINC00707 promotes cell proliferation in cervical cancer via .the miR-374c-5p/SDC4 axis. Biomed Res Int. 2022;2022:5793912. doi:10.1155/2022/5793912.
  37. Wei M, Lu L, Ma J, Luo Z, Tan X, Wang J. LINC00707 impairs natural killer cell antitumor activity in hepatocellular carcinoma by decreasing YTHDF2 stability. J Cell Mol Med. 2024;28(5):e18106.
  38. Liu J, Wu M, Feng G, Li R, Wang Y, Jiao J. Downregulation of LINC00707 promotes osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells by regulating DKK1 via .targeting miR-103a-3p. Int J Mol Med. 2020;46(3):1029-38.
  39. Zhao W, Huang G, Ye J. LINC00707 inhibits myocardial fibrosis and immune disorder in rheumatic heart disease by regulating miR-145-5p/S1PR1. Biotechnol Genet Eng Rev. 2024;40(4):3073-86.
  40. Gao T, Ji Y. Long noncoding RNA LINC00707 accelerates tumorigenesis and progression of bladder cancer via .targeting the miR-145/CDCA3 regulatory loop. Urol Int. 2021;105(9–10):891-905.
  41. Cai WL, Zeng W, Liu HH, Zhu BY, Liu JL, Liu Y. LncRNA LINC00707 promotes osteogenic differentiation of hBMSCs through the Wnt/β-catenin pathway activated by the LINC00707/miR-145/LRP5 axis. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(1):18-28.
  42. Jiang L, Wei ZC, Xu LL, Yu SY, Li C. Inhibition of miR-145-5p reduces spinal cord injury-induced inflammatory and oxidative stress responses via .affecting the Nurr1-TNF-α signaling axis. Cell Biochem Biophys. 2021;79(4):791-9.
  43. Jiang Z, Zhang J. Mesenchymal stem cell-derived exosomes containing miR-145-5p reduce inflammation in spinal cord injury by regulating the TLR4/NF-κB signaling pathway. Cell Cycle. 2021;20(10):993-1009.
  44. Park AJ, Fandl HK, Garcia VP, Coombs GB, DeSouza NM, Greiner JJ, et al. Differential expression of vascular-related microRNA in circulating endothelial microvesicles in adults with spinal cord injury: a pilot study. Top Spinal Cord Inj Rehabil. 2023;29(2):34-42. doi:10.46292/sci22-00032.
  45. Gao C, Yin F, Li R, Ruan Q, Meng C, Zhao K, et al. MicroRNA-145-mediated KDM6A downregulation enhances neural repair after spinal cord injury via .the NOTCH2/Abcb1a axis. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:2580619. doi:10.1155/2021/2580619.
  46. Dou Y, Tian X, Zhang J, Wang Z, Chen G. Roles of TRAF6 in the central nervous system. Curr Neuropharmacol. 2018;16(9):1306-13.
  47. Huang T, Jia Z, Fang L, Cheng Z, Qian J, Xiong F, et al. Extracellular vesicle-derived miR-511-3p from hypoxia-preconditioned adipose mesenchymal stem cells ameliorates spinal cord injury through the TRAF6/S1P axis. Brain Res Bull. 2022;180:73-85.
  48. Wei J, Wang J, Zhou Y, Yan S, Li K, Lin H. MicroRNA-146a contributes to SCI recovery via .regulating TRAF6 and IRAK1 expression. Biomed Res Int. 2016;2016:4013487.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تنظيم الالتهابتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-qPCR)مقايسة لوسيفيراز المزدوجةتنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.