توفر هذه التجربة العشوائية ذات الشواهد بروتوكولاً قابلاً للتكرار لاستخدام الوخز بالإبر المعياري بالإضافة إلى مغلي Xiaoxuming المعدل كعلاج تكميلي لرعاية السكتة الدماغية الإقفارية الحادة. وقد ارتبط هذا التدخل بتحسن عصبي متواضع في اليوم 28 واختلافات في مؤشرات حيوية مختارة؛ ولم تدعم التحليلات على مستوى المشاركين وجود وسيط أو ادعاء بوجود وساطة سببية.
مقالة بحثية
الوخز بالإبر القياسي بالإضافة إلى مغلي Xiaoxuming المعدل لعلاج السكتة الدماغية الإقفارية الحادة: تجربة عشوائية محكومة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ترافق السكتة الدماغية الإقفارية الحادة التهاب جهازي واضطراب في الميكروبيوم المعوي. اختبرت هذه التجربة العشوائية ذات الشواهد، أحادية المركز والمعماة للمقيم، ما إذا كان الوخز بالإبر المعياري بالإضافة إلى منقوع Xiaoxuming المعدل، مضافاً إلى الرعاية القياسية، قد حسّن التعافي العصبي المبكر وارتبط بمؤشرات حيوية محددة مسبقاً للأمعاء والالتهاب. تم توزيع البالغين المصابين بسكتة دماغية إقفارية حادة مؤكدة بالتصوير في غضون 72 h وبدرجة تتراوح بين 4–15 على مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية (NIHSS) عشوائياً بنسبة 1:1 لتلقي الرعاية القياسية أو التدخل المشترك لمدة 28 يوماً، بواقع 64 مشاركاً في كل مجموعة. كانت النهاية الأولية هي درجة NIHSS في اليوم 28 المعدلة وفقاً لدرجة NIHSS الأساسية، والعمر، والجنس، وعلاج إعادة التروية، والوقت من بداية الإصابة حتى التوزيع العشوائي، مع معالجة النتائج المفقودة عن طريق الإسناد المتعدد بمقدار 30 ضعفاً. وشملت النتائج الثانوية والاستكشافية مؤشر Barthel، ومقياس Rankin المعدل (mRS) في اليوم 90، والأحداث الضائرة، وعلامات الالتهاب، والعديد من السكريات الدهنية (LPS)، وتنوع الميكروبات البرازية، وأجناس مختارة، والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة. قدّر تحليل الإسناد المتعدد درجة NIHSS أقل في اليوم 28 في مجموعة التدخل (الفرق المعدل: −1.30 نقطة؛ فاصل ثقة 95%: −2.36 إلى −0.24؛ P = 0.017). وكان مؤشر Barthel في اليوم 28 أعلى، بينما لم تختلف درجة NIHSS ومؤشر Barthel ومقياس mRS الملاحظ 0–2 في اليوم 90 بشكل ملحوظ. وفي اليوم 28، سجلت مجموعة التدخل تنوع Shannon أعلى وبوتيرات برازية أعلى، وانخفاضاً في إنترلوكين-6 وLPS. لم تكن التغيرات على مستوى المشاركين في البوتيرات وإنترلوكين-6 وLPS وتنوع Shannon مرتبطة بشكل ملحوظ بالتغير في NIHSS؛ ولذلك لم يتم إجراء تحليل الوساطة. لم يتم تحديد أي حدث ضائر خطير متعلق بالتدخل. ارتبط التدخل المشترك بتحسن عصبي مبكر متواضع واختلافات في مؤشرات حيوية مختارة، ولكن النتائج البيولوجية استكشافية ولا تثبت وجود مسار سببي بين الدماغ والأمعاء.
المقدمة
لا تزال السكتة الدماغية تمثل سببًا رئيسيًا للوفاة والعجز طويل الأمد في جميع أنحاء العالم، وتشكل السكتة الدماغية الإقفارية معظم هذه الحالات. تركز الرعاية القياسية على التشخيص السريع، وإعادة التروية عند استدعي ذلك، والعلاج بمضادات الصفائح الدموية، وإدارة عوامل الخطر، والوقاية من المضاعفات، وإعادة التأهيل1,2. وبالرغم من هذه التدابير، تظل العجوزات العصبية المتبقية شائعة، مما يدفع إلى تقييم التدخلات المساعدة القابلة للتكرار.
تساهم الالتهابات التالية لنقص التروية، وإجهاد الخلايا البطانية والحاجز الدموي الدماغي، والتنشيط المناعي الطرفي، والاضطراب الأيضي في الإصابة الثانوية والتعافي3. كما يمكن أن تؤدي السكتة الدماغية إلى تغيير حركية الأمعاء، ونفاذيتها، وتركيب الميكروبات، والإشارات المناعية المشتقة من الأمعاء، مما يخلق ارتباطات ثنائية الاتجاه توصف عادةً بأنها محور الدماغ-الأمعاء4.
ربطت الدراسات السريرية السكتة الدماغية الإقفارية الحادة باختلال التوازن الميكروبي في الأمعاء، وتغير ملامح الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFA)، وتدهور النتائج العلاجية5. ويثير البيوتيرات الاهتمام لأنه يدعم سلامة الحاجز الظهاري وينظم الإشارات المناعية6. وتبرر هذه الملاحظات قياس التنوع الميكروبي، والمستقلبات الميكروبية، والتعرض للداخليات المعوية، والوسطاء الالتهابيين جنباً إلى جنب مع النتائج العصبية، مع الإدراك بأن التغيرات المتوازية لا تثبت وجود علاقة وساطة.
لقد تم تقييم الوخز بالإبر كعلاج مساعد للسكتة الدماغية، إلا أن التجارب المنشورة تختلف في التوقيت، واختيار نقاط الوخز، والتكرار، وتقييم النتائج7,8. لذا، يتطلب البروتوكول القابل للتكرار إجراءات صريحة فيما يتعلق بالوخز، والتحفيز، ومدة بقاء الإبر، والسلامة، والالتزام. ويُعد مغلي Xiaoxuming تركيبة عشبية كلاسيكية تُستخدم في الحالات المرتبطة بالسكتة الدماغية. وتشير الدراسات المنهجية والدوائية إلى فائدة محتملة، ولكن الأدلة السريرية تظل محدودة بسبب حجم العينة، وعدم التجانس، وخطر الانحياز9,10. ولا يمكن فصل مساهمته عن الوخز بالإبر في تصميم تدخل مشترك يتكون من مجموعتين.
قيّم هذا التجربة تدخلاً مشتركاً موحداً باستخدام النتائج السريرية ومؤشرات حيوية استكشافية محددة مسبقاً للأمعاء والالتهابات11. وكانت الفرضية هي أن إضافة الوخز بالإبر الموحد بالإضافة إلى منقوع Xiaoxuming المعدل إلى الرعاية القياسية من شأنه أن يحسن التعافي العصبي المبكر ويغير بشكل إيجابي المؤشرات الحيوية المحددة مسبقاً والمتعلقة بمحور الدماغ والأمعاء.
البروتوكول
صدرت الموافقة الأخلاقية لهذه الدراسة من لجنة الأخلاقيات الطبية في مستشفى الطب الصيني التقليدي والطب الغربي في مدينة داتشو بتاريخ 10 يونيو 2025 (رقم الموافقة 2025–29؛ صالحة حتى 9 يونيو 2027). قدم كل مشارك أو ممثل مفوض قانوناً موافقة كتابية مستنيرة قبل التوزيع العشوائي. شملت الموافقة الوخز بالإبر، والعلاج بالأعشاب، وجمع عينات الدم والبراز، وحماية بيانات الميكروبيوم، والانسحاب من أخذ العينات البيولوجية دون فقدان الرعاية القياسية. اتبعت الإجراءات إعلان هلسنكي. تدرج أدوات البحث المستخدمة في البروتوكول في جدول المواد. لم يتم تسجيل التجربة مسبقاً لأن التسجيل لم يكن قد اكتمل قبل بدء توظيف المشاركين.
١. تصميم الدراسة والتوزيع العشوائي
تم استقطاب المشاركين في الفترة من 1 مارس إلى 31 ديسمبر 2025، وتمت متابعة كل مشارك لمدة 90 يوماً. اعتمدت الدراسة تصميماً أحادياً المركز، بمجموعات متوازية، مع تعمية المقيم، وتدخل نشط استمر لمدة 28 يوماً. تم توزيع المشاركين المؤهلين بنسبة 1:1 على الرعاية القياسية أو الرعاية القياسية بالإضافة إلى الوخز بالإبر ومغلي Xiaoxuming المعدل. استخدمت عملية التوزيع العشوائي كتلًا تم إنشاؤها بواسطة الكمبيوتر مكونة من 4 أو 6، وكانت طبقية بناءً على درجة NIHSS الأساسية (4–8 مقابل 9–15). وتم إخفاء التخصيص باستخدام مظاريف مختومة ومعتمة ومرقمة بالتسلسل.
اكتمل التدخل النهائي الذي استمر لمدة 28 يوماً في 28 يناير 2026، واكتملت المتابعة النهائية في 31 مارس 2026، وتم إغلاق قاعدة البيانات في 15 أبريل 2026، واكتمل التحليل المحدد مسبقاً بحلول 30 أبريل 2026. اتبعت الدراسة مبادئ CONSORT12؛ ويظهر تدفق المشاركين في الشكل 1، بينما يتوفر جدول التقييم في الجدول 1.
2. فحص المشاركين وتسجيلهم
تم فحص المرضى المصابين بسكتة دماغية إقفارية حادة تم تأكيدها بواسطة التصوير المقطعي المحوسب أو التصوير بالرنين المغناطيسي خلال 72 h من بدء ظهور الأعراض أو آخر وقت عُرف فيه أن المريض كان بحالة جيدة. شمل المشاركون المؤهلون البالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 40 و80 عاماً، والذين تراوحت درجاتهم الأساسية في مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية (NIHSS) بين 4 و15، وكانت علاماتهم الحيوية مستقرة بعد التقييم الطارئ، مع القدرة على بدء التدخل المخصص خلال 24 h، والرغبة في تقديم عينات من الدم والبراز. وقد أجرى مقيمون مدربون تقييمات NIHSS13.
تمثلت معايير الاستبعاد في: النزيف داخل الدماغ؛ النوبات الإقفارية العابرة دون حدوث احتشاء؛ الغيبوبة؛ الجراحة المزيلة للضغط المخطط لها؛ عدم القدرة على التناول الفموي الآمن؛ العدوى النشطة التي تتطلب مضادات حيوية جهازية؛ استخدام المضادات الحيوية، أو المكملات البروبيوتيكية، أو المكملات البريبيوتيكية خلال 4 أسابيع؛ أمراض الأمعاء الالتهابية؛ الإسهال المزمن؛ خضوع المريض لجراحة في الجهاز الهضمي خلال 6 أشهر؛ الأورام الخبيثة؛ القصور الكبدي أو الكلوي الشديد؛ ارتفاع ضغط الدم غير المنضبط؛ أمراض الشرايين التاجية غير المستقرة؛ عدم انتظام ضربات القلب غير المناسب؛ عدد الصفائح الدموية < 80 × 109/L؛ وجود موانع لاستخدام الوخز بالإبر؛ الحساسية تجاه التركيبة العشبية؛ الحمل أو الرضاعة؛ المشاركة في تجربة تدخلية أخرى خلال 3 أشهر؛ أو عدم القدرة على إتمام المتابعة. ولم تُصنف الأطعمة النباتية العادية، والخضروات المخللة، والتوفو المخمر كمنتجات محظورة نظرًا لتعذر توحيد المعايير الغذائية الصينية الروتينية بشكل كامل.
3. الرعاية القياسية والتعرضات ذات الصلة بالميكروبيوم
تلقى كلا المجموعتين الرعاية الموجهة وفقاً للإرشادات، بما في ذلك تحلل الخثرات الوريدي و/أو استئصال الخثرة ميكانيكياً عند دواعي الاستعمال؛ وإدارة مضادات الصفائح الدموية، وخافضات الدهون، وضغط الدم، والجلوكوز؛ والترطيب والتغذية؛ وفحص عسر البلع؛ والوقاية من الالتهاب الرئوي وتجلط الأوردة العميقة؛ وإعادة التأهيل؛ والوقاية الثانوية14. ولم يتم تأخير علاج إعادة التروية أو استبداله بسبب المشاركة في الدراسة.
منذ مرحلة التوزيع العشوائي وحتى اليوم 28، مُنعت ممارسات الوخز بالإبر غير المدرجة في الدراسة، والكي (moxibustion)، والوصفات العشبية المتعلقة بالسكتة الدماغية، والمكملات الحيوية (probiotic/prebiotic/synbiotic)، والمستحضرات التي تستهدف الميكروبيوتا. كما تم إبلاغ المشاركين ومقدمي الرعاية بأن هذه القيود تنطبق على المكملات ومنتجات البروبيوتيك المسوقة تجارياً وليس على الأطعمة الروتينية.
تم تسجيل علاج إعادة التروية والانحرافات عن البروتوكول. كما تم تسجيل النظام الغذائي، وشدة عسر البلع، والتغذية المعوية، والمضادات الحيوية المستخدمة بعد التوزيع العشوائي، واستخدام مثبطات مضخة البروتون، والإمساك، ومدة الإقامة كعوامل مربكة محتملة مرتبطة بالميكروبيوم. لم يتم إدراج هذه المتغيرات كمتغيرات مصاحبة في النماذج الإحصائية للميكروبيوم، وبالتالي اعتبرت عوامل مربكة متبقية.
4. تعمية التخصيص
قام إحصائي مستقل بإنشاء تسلسل العشوائية. وقد أعد منسق لم يشارك في عمليات التوظيف، أو العلاج، أو تقييم النتائج، أو العمل المخبري، أو التحليل الإحصائي مغلفات معتمة ومختومة ومرقمة بالتسلسل. ولم يتم فتح المغلف التالي إلا بعد الحصول على الموافقة المستنيرة، وتأكيد الأهلية، واستكمال تقييمات خط الأساس. كما تم تخزين تسلسل العشوائية في ملف محمي بكلمة مرور ظل غير متاح لمقيمي النتائج، وموظفي المختبر، والمحللين حتى اكتمال التحليل الأولي.
5. تعمية النتائج والمختبر والتحليل
أجرى مقيمون منفصلون عن فريق تقديم العلاج تقييمات NIHSS، ومؤشر Barthel، ومقياس Rankin المعدل (mRS). كما وُجِّه المشاركون ومقدمو الرعاية بعدم الكشف عن تخصيص العلاج لمقيمي النتائج. تم تمييز العينات البيولوجية باستخدام معرفات مشفرة، وظل موظفو المختبر والإحصائيون معمين عن أكواد المجموعات حتى تم الانتهاء من التحليلات المحددة مسبقاً. وقد تم توثيق أي حالات كشف غير مقصود عن التعمية.
6. الوخز بالإبر اليدوي الموحد
بدأ العلاج بالإبر الصينية في غضون 24 ساعة بعد التوزيع العشوائي، وذلك بعدما أكد طبيب الأعصاب المعالج الاستقرار الديناميكي الدموي ومستوى مقبول من مخاطر النزيف. تم تحديد جدول العلاج ليكون عبارة عن جلسة واحدة مدتها 30 دقيقة يومياً، بمعدل 5 أيام في الأسبوع لمدة 4 أسابيع، بإجمالي 20 جلسة مخططة.
تم وضع المشاركين في وضعية آمنة، وتم تعقيم الجلد قبل عملية الوخز. تم وخز نقاط Baihui (GV20) وShuigou (GV26) ونقطتي Fengchi (GB20) على الجانبين، وQuchi (LI11) وHegu (LI4) وZusanli (ST36) وYanglingquan (GB34) وSanyinjiao (SP6)، وذلك وفقاً للجانب والعمق المحددين في Table 215.
استُخدمت إبر وخز بالإبر معقمة ووحيدة الاستخدام من الفولاذ المقاوم للصدأ بمقاس 0.25 mm × 40 mm. تم إدخال الإبر إلى أعماق تتراوح بين 10–25 mm وفقاً لنقطة الوخز وبنية الجسم. طُبقت تقنيات الرفع والدفع والتدوير اليدوي حتى الوصول إلى حالة الـ deqi أو حدوث استجابة موضعية للوخز. بقيت الإبر في مكانها لمدة 30 min مع إعادة تحفيزها يدوياً كل 10 min. ولم يُستخدم الوخز الكهربائي.
تم إجراء الوخز بالإبر بواسطة مختصين مرخصين في الوخز بالإبر لديهم خبرة سريرية لا تقل عن 5 سنوات. تم تأجيل الجلسات في حالات الحمى، أو عدم استقرار ضغط الدم، أو التدهور العصبي، أو النزيف النشط، أو الهياج الشديد أو الإرهاق، أو رفض المشارك. كما تم تسجيل سبب التأجيل وأي حدث ضار مرتبط به.
7. منقوع شياو شومينغ المعدل
احتوت كل جرعة يومية على Ephedrae Herba 6 g، وCinnamomi Ramulus 9 g، وPaeoniae Radix Alba 12 g، وSaposhnikoviae Radix 9 g، وZingiberis Rhizoma Recens 6 g، وGlycyrrhizae Radix et Rhizoma 6 g، وAngelicae Sinensis Radix 10 g، وChuanxiong Rhizoma 10 g، وAstragali Radix 20 g، وPoria 15 g، وPaeoniae Radix Rubra 12 g. وقد تم التحقق من هويات الأعشاب الخام الموصوفة من قبل صيدلية المستشفى قبل التحضير، كما تم اتباع إجراءات الصرف والطبخ الروتينية. تفاصيل التركيبة موضحة في الجدول 39˒16.
سُمح فقط بالتعديلات المحددة مسبقاً؛ حيث يمكن إضافة 10 g من Cannabis Fructus في حالات الإمساك، وزيادة كمية Poria إلى 20 g في حالات البراز الرخو، وزيادة كمية Astragali Radix إلى 30 g في حالات التعرق التلقائي الملحوظ. وتم تسجيل كل تعديل، أو جرعة فائتة، أو نوبة قيء، أو انقطاع في العلاج.
تم غلي جرعة يومية واحدة في صيدلية المستشفى وتركيزها لتصل إلى 400 mL. قُسِّم المستحضر إلى جزأين سعة كل منهما 200 mL، وأُعطيا بعد وجبتي الإفطار والعشاء لمدة 28 يومًا. تم تعليق الإعطاء في حالات صعوبة البلع، أو القيء المستمر، أو الحساسية، أو عندما تكون مستويات ناقلة أمين الألانين/الأسبرتات >3× الحد الأعلى الطبيعي، أو معدل الترشيح الكبيبي المقدر <45 mL/min/1.73 m2، أو ضغط الدم غير المنضبط، أو تسارع ضربات القلب المرضي ذو الأهمية السريرية، أو ظهور آلام جديدة في الصدر، أو في حال وجود مخاطر يحددها الباحث.
8. قيود المجموعة الضابطة
تلقى المشاركون الذين تم توزيعهم على المجموعة الضابطة الرعاية القياسية وحدها. وقد تم حظر استخدام الوخز بالإبر غير المدرج في البروتوكول، والكي بالموكسا، والعلاجات العشبية المرتبطة بالسكتة الدماغية، ومكملات البروبيوتيك/البريبايوتيك/السينبيوتيك، والمنتجات التي تستهدف الميكروبيوتا حتى اليوم 28. وسُجل أي استخدام لهذه التدخلات على أنه انحراف عن البروتوكول.
9. مراقبة الالتزام والسلامة
تم حساب الالتزام بالوخز بالإبر عن طريق قسمة عدد الجلسات المكتملة على 20 جلسة مخططة. كما تم تقييم الالتزام بالعلاجات العشبية باستخدام العبوات المرتجعة ومذكرات الأدوية. وعُرِّف الالتزام وفق البروتوكول بأنه إكمال 16 جلسة وخز بالإبر على الأقل واستهلاك 80% على الأقل من جرعات المستخلصات الموصوفة. خضع المرضى المقيمون للمراقبة يومياً، بينما تمت مراقبة المرضى الخارجيين في زيارات المتابعة المقررة. شملت الأحداث الضائرة المسجلة النزيف الموضعي، والتجمع الدموي، والألم، والدوخة، والإغماء، والعدوى، وأعراض الجهاز الهضمي، والطفح الجلدي، واختلالات وظائف الكبد أو الكلى، وخفقان القلب، وتقلب ضغط الدم، والحساسية. وقد صنف طبيبان بشكل مستقل الأحداث الضائرة الخطيرة ومدى ارتباطها بالتدخل العلاجي على أنها: غير مرتبطة، أو ربما تكون مرتبطة، أو من المرجح أن تكون مرتبطة، أو مرتبطة بالتأكيد.
10. تقييم المخرجات السريرية
تم تقييم مقياس السكتة الدماغية الوطنية (NIHSS) عند نقطة الأساس وفي الأيام 14 و28 و90. وكانت قيمة NIHSS في اليوم 28، بعد تعديلها وفقاً لقيمة NIHSS عند نقطة الأساس، هي النقطة النهائية الأولية. كما تم تقييم مؤشر بارثل (Barthel Index) عند نقطة الأساس وفي اليومين 28 و90، بينما تم تقييم المقياس المعدل رانكن (mRS) في اليوم 90. وتم تسجيل حالات السكتة الدماغية المتكررة، والوفيات لجميع الأسباب، والأحداث الضارة حتى اليوم 9017. عُرِفت النتيجة المواتية في اليوم 90 بأنها الحصول على درجة 0-2 في مقياس mRS. والنتائج السريرية والبيولوجية، ونقاط التقييم الزمنية، والتعريفات، وتصنيفات التحليل ملخصة في الجدول 4.
11. جمع الدم ومقايسات المؤشرات الحيوية
تَمّ جمع عينات الدم الوريدي في الخط الأساسي قبل التدخل، وفي اليومين 14 و28، ويفضل أن يكون ذلك بين الساعة 06:30 و08:30 بعد صيام ليلة كاملة. وتم توثيق حالات الجمع في حالة عدم الصيام عند الاقتضاء.
تمت معالجة العينات خلال ساعتين. أُجري الطرد المركزي عند 850 × g لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة 4 °C. قُسم المصل والبلازما إلى حصص في أنابيب تجميد معقمة وحُفظت عند درجة حرارة −80 °C. كما تم الاحتفاظ بالعينات المأخوذة من المشارك نفسه ضمن نفس دفعة التحليل كلما أمكن ذلك.
تم تقدير كمية البروتين التفاعلي C عالي الحساسية، والإنترلوكين-6 (IL-6)، وعامل نخر الورم-ألفا، والعديد السكري (LPS)، والزونولين باستخدام المقاييس المحددة. تم قياس IL-6 وعامل نخر الورم-ألفا وLPS والزونولين في مكررات، وأعيدت القياسات عندما تجاوز معامل التباين للمكررات 15%.
كانت مواصفات الكتالوج الواردة من الشركة المصنعة، بدلاً من نتائج التحقق الخاصة بالدراسة، كما يلي: حساسية hs-CRP، 5.36 pg/mL؛ والمدى، 18.75–1,200 pg/mL؛ ومعاملات الاختلاف (CVs) داخل وبين المقايسات للمصل، 1.4%/4.0%؛ وحساسية IL-6، 0.7 pg/mL؛ والمدى، 3.12–300 pg/mL؛ ومعامل الاختلاف داخل المقايسة للمصل/البلازما، 1.6%–4.2%؛ ومعامل الاختلاف بين المقايسات، 3.3%–6.4%؛ وحساسية tumor necrosis factor-alpha، 6.23 pg/mL؛ والمدى، 15.6–1,000 pg/mL؛ ومعامل الاختلاف داخل المقايسة، 2.2%–3.0%؛ ومعامل الاختلاف بين المقايسات، 7.3%–8.4%؛ وحد الكشف عن zonulin، 0.183 ng/mL؛ وحد التحديد الكمي، 0.183 ng/mL؛ والخطية، 3.03–40.25 ng/mL؛ ومعامل اختلاف التكرارية، 3.5%–6.0%؛ ومعامل اختلاف إعادة الإنتاجية، 7.7%–8.3%. وقد ذكرت الشركة المصنعة حد الكشف وحد التحديد الكمي لـ zonulin قبل تطبيق عامل تخفيف العينة.
تم تسجيل تركيزات LPS بوحدة EU/mL، بينما سُجلت تركيزات trimethylamine N-oxide في البلازما بوحدة µmol/L. وقد عوملت كلتا القياسين كنواتج استكشافية للمؤشرات الحيوية.
12. جمع العينات البرازية وتسلسل 16S rRNA
جُمعت عينات البراز عند خط الأساس وفي اليوم 28 في أنابيب معقمة، وسُجلت أوقات التبرز والتجميد. وعندما تعذر على المشارك التبرز ضمن نافذة الجمع المخطط لها، جُمعت العينة التالية التلقائية بمجردما كان ذلك ممكناً من الناحية السريرية. وقد قدم جميع المشاركين الذين خضعوا للتوزيع العشوائي في النهاية عينات براز صالحة لتحليلات الميكروبيوم والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة؛ ولم تؤدِ إجراءات الجمع المتأخرة إلى فقدان عينات البراز المخصصة للتحليلات المخطط لها القائمة على البراز. كما تم توثيق تأخر الجمع وحالة الإمساك، ولم يتم إعطاء الملينات لغرض أخذ عينات البحث فقط.
نُقلت عينات البراز الطازجة خلال ساعتين. وفي حال تعذر النقل الفوري، حُفظت العينات عند 4 °C لمدة لا تتجاوز 6 h قبل تخزينها عند −80 °C. تم تجنب دورات التجميد والإذابة المتكررة. استُخلص الحمض النووي DNA باستخدام طقم استخلاص DNA البرازي المحدد. تم تضخيم المنطقة V3–V4 باستخدام البادئات 338F و806R، وأُجري تسلسل مزدوج الطرف بطول 300-bp. وفي برنامج QIIME 2 الإصدار 2024.10.1 (RRID: SCR_021258)، تم إلغاء تعدد الإرسال (demultiplexing) للقراءات وتقليم البادئات. استُخدم DADA2 لترشيح الجودة، وإزالة الضجيج (denoising)، ودمج القراءات المزدوجة، وإزالة الكيميرا (chimera removal)، واستنتاج متغيرات تسلسل الأمبليكون (ASV). تم تعيين التصنيف بناءً على قاعدة بيانات SILVA الإصدار 138.1 (RRID: SCR_006423).
تم حساب مؤشري Shannon وChao1 لقياس التنوع ألفا (alpha diversity). واستُخدمت مسافات Bray–Curtis وتحليل الإحداثيات الرئيسية لقياس التنوع بيتا (beta diversity)، بينما استُخدم تحليل التباين متعدد المتغيرات التبادلي (PERMANOVA) لتقييم الاختلافات في التنوع بيتا18.
13. تقدير كمية الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة في البراز
تم خلط ما يقرب من 100 mg من البراز المذاب مع 1.0 mL من حمض الفوسفوريك بتركيز 0.5%، ورُجَّ المزيج بجهاز vortex لمدة 60 s، ثم طرُد مركزياً عند 14,000 × g لمدة 10 min عند درجة حرارة 4 °C. استُخلِص الطافي باستخدام أسيتات الإيثيل التي تحتوي على حمض 4-methylvaleric كمعيار داخلي.
تم تحليل جزء قدره 1 µL بواسطة كروماتوغرافيا الغاز المقترنة بالكشف الانتقائي للكتلة باستخدام عمود DB-FFAP بمقاس 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm. استُخدم الهيليوم بمعدل تدفق 1.0 mL/min مع نسبة تقسيم 10:1 وتأين إلكتروني عند 70 eV.
تم تقدير كميات كل من الأسيتات، والبروبيونات، والبيوتيرات، وأيزوبوتيرات، والفاليرات، وأيزوفاليرات، وعُرِّفت الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة الكلية بأنها مجموع هذه الأحماض. وظل المحللون غير مدركين لتوزيع المجموعات العلاجية، واعتُبرت تحليلات الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة استكشافية.
14. استجابة المؤشرات الحيوية الاستكشافية
تم تعريف الاستجابة المركبة الاستكشافية على أنها وجود اثنين على الأقل من أربعة تغيرات في اليوم 28: زيادة في مؤشر Shannon بمقدار > 0.20، وزيادة في بوتيرات البراز بمقدار > 20%، وانخفاض في LPS في البلازما بمقدار > 15%، وانخفاض في IL-6 بمقدار > 20%. كانت هذه العتبات العملية تهدف إلى تجاوز التقلبات التحليلية الصغيرة، ولم يتم التحقق منها سريرياً، واستُخدمت فقط للوصف الاستكشافي. ولم يتم استخدام أي عتبة لمؤشر Shannon أقل من < 1.5.
15. حساب حجم العينة
افترض حساب حجم العينة وجود فرق قدره 1.2 نقطة بين المجموعات في تغير مقياس NIHSS في اليوم 28، وانحراف معياري قدره 2.3، ومستوى ألفا ثنائي الجانب قدره 0.05، وقوة إحصائية بنسبة 80%. وقد تطلب هذا الحساب 58 مشاركاً في كل مجموعة. وبافتراض وجود 10% من نقاط النهاية الأولية غير المكتملة، نتج عن ذلك استهداف تسجيل 64 مشاركاً في كل مجموعة، بإجمالي 128 مشاركاً تم توزيعهم عشوائياً19.
16. إدارة البيانات ومراقبة الجودة
تم تسجيل البيانات السريرية باستخدام نماذج تقارير حالات موحدة، وخضعت لعملية إدخال البيانات المزدوج. كما طُبقت فحوصات النطاق والاتساق قبل إغلاق قاعدة البيانات، وتم حل التعارضات بالرجوع إلى السجلات المصدرية. وتم تدريب مقيمي النتائج قبل مرحلة التسجيل. كما تم تتبع جمع العينات، ووقت المعالجة، ودرجة حرارة التخزين، ودورة التجميد والذوبان، وتشغيلة المقايسة، وتشغيلة التسلسل باستخدام معرفات مرمزة.
17. التحليل الإحصائي
شمل تحليل النية المسبقة للعلاج الأساسي جميع المشاركين العشوائيين البالغ عددهم 128 مشاركاً. وقد تم تحديد مجتمع الدراسة وفقاً للبروتوكول بناءً على إكمال تقييم اليوم 28، وتلقي ما لا يقل عن 80% من التعرض للتدخل المحدد، وعدم وجود انتهاك جسيم للبروتوكول. كما شملت تحليلات السلامة جميع المشاركين الذين تلقوا العلاج. وأُجريت تحليلات الميكروبيوم والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة باستخدام عينات براز قابلة للتقييم جُمعت عند الخط الأساسي وفي اليوم 28. ونظراً لأن جميع المشاركين العشوائيين قدموا عينات براز قابلة للتحليل، لم يتم استبعاد أي مشارك، ولم تكن هناك حاجة لتعويض العينات المفقودة في التحليلات القائمة على البراز.
تم تعويض قيم NIHSS المفقودة في اليوم 28 لـ 30 مرة بناءً على افتراض الفقد العشوائي (missing-at-random) باستخدام نماذج ريدج البايزية ذات المعادلات المتسلسلة (chained-equation Bayesian ridge models) التي تضمنت العلاج، وقيم NIHSS الأساسية وفي اليوم 14، ومؤشر بارثل الأساسي، والعمر، والجنس، وعلاج إعادة التروية، والوقت من بداية الأعراض حتى التوزيع العشوائي. تم تجميع التقديرات باستخدام قواعد روبن، وأُجري تحليل الحالات الكاملة كتحليل حساسية.
تم فحص المخططات التكرارية (Histograms) ومخططات Q–Q، وطُبقت اختبارات Shapiro–Wilk على البواقي النموذجية. وكانت البواقي الناتجة عن تحليل التباين المصاحب (ANCOVA) الأساسي للحالات الكاملة متوافقة مع التوزيع الطبيعي (P = 0.308). كما تم تحويل المؤشرات الحيوية ذات الالتواء القوي نحو اليمين قبل النمذجة الخطية عند الحاجة. وبالنسبة للانحدار اللوجستي، لم يكن توزيع النتيجة الثنائية مطلوباً أن يكون طبيعياً؛ بل تم تقييم خطية المتنبئات المستمرة والملاحظات المؤثرة.
تم استخدام تحليل التباين المصاحب (ANCOVA) لتقييم مقياس NIHSS في اليوم 28، مع إدراج العلاج، ودرجة NIHSS الأساسية، والعمر، والجنس، وعلاج إعادة التروية، والوقت من بداية الإصابة حتى التوزيع العشوائي في النموذج20. واستُخدمت النماذج الخطية المعدلة وفقاً للقيم الأساسية للنتائج الاستكشافية المستمرة في اليوم 28. كما استُخدم اختبار كا-تربيع (Chi-square) أو اختبار فيشر الدقيق (Fisher exact) للمقارنة بين النسب، واستُخدم تحليل التباين متعدد المتغيرات للتباديل (PERMANOVA) مع 9,999 تبديلاً لقياس مسافات Bray–Curtis. ولم يتم تعديل تحليلات تنوع الميكروبيوم وبنية المجتمع بناءً على النظام الغذائي، أو شدة عسر البلع، أو التغذية المعوية، أو المضادات الحيوية بعد التوزيع العشوائي، أو استخدام مثبطات مضخة البروتون، أو الإمساك، أو مدة الإقامة في المستشفى؛ حيث اعتبرت هذه العوامل عوامل مربكة متبقية محتملة.
تم تطبيق تصحيح Benjamini–Hochberg لمعدل الاكتشافات الكاذبة عبر الأجناس الثلاثة المعروضة، وتم تسجيل كل من قيم P الاسمية وقيم q. استُخدم معامل Spearman rho مع 5,000 عينة إعادة سحب (bootstrap resamples) للارتباطات الاستكشافية على مستوى المشاركين، ولم تُستخدم معاملات ارتباط Pearson للتفسير الاستدلالي. كما خُطط لإجراء تحليل الوساطة فقط في حال دعم الارتباطات بين التعرض والوسيط، وبين الوسيط والنتيجة. واعتُمدت قيمة P ثنائية الجانب < 0.05 للنتائج السريرية الأولية والمحددة مسبقاً.
الشكل 1: تدفق المشاركين وجدول التقييم. (A) مخطط تدفق على نمط CONSORT يوضح الفرز (n = 176)، والاستبعاد (n = 48)، والتوزيع العشوائي (64/مجموعة)، وإذابة الخثرة عن طريق الوريد (16 مجموعة ضابطة؛ 18 مجموعة التدخل)، واستئصال الخثرة ميكانيكياً (4؛ 5)، وتوفر مقياس NIHSS في اليوم 28 (59؛ 58)، والمتابعة الملحوظة في اليوم 90 (57؛ 56)، ومجموعات التحليل. (B) جدول التدخل والتقييم. NIHSS، مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية؛ ITT، تحليل نية العلاج؛ mRS، مقياس رانكن المعدل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| إجراءات الدراسة | الفحص المسحي | الخط المرجعي | اليوم 1-28 | اليوم 14 | اليوم 28 | اليوم 90 |
| نافذة التقويم | ١ مارس – ٣١ ديسمبر ٢٠٢٥ | في نفس يوم التوزيع العشوائي | مارس 2025–يناير 2026 | ±يومان | ±٣ أيام | ±7 أيام |
| تقييم الأهلية | ✓ | |||||
| موافقة مستنيرة مكتوبة | ✓ | |||||
| تأكيد السكتة الدماغية الإقفارية عن طريق التصوير المقطعي المحوسب أو التصوير بالرنين المغناطيسي | ✓ | |||||
| جمع البيانات الديموغرافية والسريرية | ✓ | |||||
| التوزيع العشوائي | ✓ | |||||
| الرعاية القياسية للسكتة الدماغية الإقفارية الحادة | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| الوخز بالإبر اليدوي الموحد | ✓ | |||||
| مغلي شياو شومينغ المعدل | ✓ | |||||
| تقييم مقياس المعهد الوطني للصحة للسكتة الدماغية (NIHSS) | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ||
| تقييم مؤشر بارثل | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| تقييم مقياس رانكين المعدل | ✓ | |||||
| جمع عينات الدم الطرفي | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| جمع عينات البراز | ✓ | ✓ | ||||
| مراقبة الأحداث الضائرة | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| إتمام المتابعة السريرية النهائية | بحلول 31 مارس 2026 | |||||
| تنقية البيانات والتحليل الإحصائي | ١ أبريل – ٣٠ أبريل ٢٠٢٦ |
الجدول 1: الجدول الزمني للدراسة، والتعرض للتدخل، وجمع العينات، وتقييمات النتائج. CT، التصوير المقطعي المحوسب؛ MRI، التصوير بالرنين المغناطيسي؛ NIHSS، مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية.
| نقطة الوخز | فئة الموقع | الجانبية | عمق الإبرة | طريقة التحفيز | زمن الاستبقاء | تكرار العلاج | احتياطات السلامة |
| باي هوي (GV20) | نقطة فروة الرأس | فردي | 10-15 ملم | إدخال مائل مع تحفيز يدوي خفيف | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | تجنب التحفيز المفرط للمرضى الذين يعانون من عدم استقرار في العلامات الحيوية |
| شوي غو (GV26) | نقطة وجهية | منفرد | ٥-١٠ مم | إدخال مائل مع تحفيز يدوي خفيف | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | تجنب استخدام الإبر لدى المرضى الذين يعانون من إصابة جلدية موضعية، أو عدوى، أو ضعف في التعاون. |
| فنغ تشي (GB20) | نقطة الرأس والعنق | ثنائي الجانب | ١٥-٢٥ مم | إدخال مائل؛ تم تجنب الإبر العميق الإنسي | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | تجنب الإدخال العميق باتجاه القناة الشوكية أو منطقة الشريان الفقري |
| كوتشي (LI11) | نقطة الطرف العلوي | ثنائي الجانب | 15-25 مم | الرفع والدفع والتدوير اليدوي | 30 دقيقة | ٥ جلسات في الأسبوع لمدة ٤ أسابيع | تجنب الوخز عبر الجلد المكدوم، أو الذي يعاني من وذمة، أو المصاب بعدوى |
| هيغو (LI4) | نقطة الطرف العلوي | ثنائي الجانب | 10-20 مم | الرفع والدفع والتدوير اليدوي | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | تجنب الإفراط في المناولة لدى المرضى الضعفاء أو المرضى الذين يعانون من عدم تحمل الألم |
| زوسانلي (ST36) | نقطة الطرف السفلي | ثنائي الجانب | ٢٠-٢٥ ملم | الرفع والدفع والتدوير اليدوي | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات في الأسبوع لمدة ٤ أسابيع | تجنب الوخز بالإبر في المناطق التي تعاني من الوذمة أو العدوى أو الصدمات الموضعية |
| يانغ لينغ تشوان (GB34) | نقطة الطرف السفلي | ثنائي الجانب | ٢٠-٢٥ مم | الرفع والدفع والتدوير اليدوي | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | تجنب استخدام الإبر لدى المرضى الذين يعانون من آلام شديدة في الأطراف، أو إصابات رضحية، أو حالة من الهياج. |
| سانيينجياو (SP6) | نقطة الطرف السفلي | ثنائي الجانب | ١٥-٢٥ ملم | الرفع والدفع والتدوير اليدوي | ٣٠ دقيقة | ٥ جلسات أسبوعياً لمدة ٤ أسابيع | يجب تجنب استخدامه أثناء الحمل وفي المرضى الذين يعانون من آفات جلدية موضعية |
الجدول 2: وصفة الوخز بالإبر الموحدة وبروتوكول التشغيل. ملاحظات التشغيل: استُخدمت إبر من الفولاذ المقاوم للصدأ معقمة ومخصصة للاستخدام مرة واحدة بمقاس 0.25 mm × 40 mm. طُبق التحفيز اليدوي حتى الإبلاغ عن الشعور بـ deqi أو ملاحظة استجابة موضعية للوخز. تم الإبقاء على الإبر لمدة 30 min، مع تكرار التحفيز اليدوي كل 10 min أثناء فترة الإبقاء.
| المكون | الاسم الصيدلاني اللاتيني | الجرعة اليومية | الدور الوظيفي في التركيبة | ملاحظات مراقبة الجودة والسلامة |
| إيفيدرا | Ephedrae Herba | 6 g | مكون لطرد الرياح وفتح القنوات | تمت مراقبة ضغط الدم، وخفقان القلب، وعدم الارتياح في الصدر، والأرق أثناء العلاج |
| غصن القرفة | Cinnamomi Ramulus | 9 g | مكون للتدفئة ودعم الدورة الدموية | يستخدم بحذر لدى المرضى الذين يعانون من تعرق مفرط أو أعراض مرتبطة بالحرارة |
| جذر الفاونيا الأبيض | Paeoniae Radix Alba | 12 g | مكون للتنسيق ومضاد للتشنج | كان مطلوباً توثيق الدفعة والمصادقة الصيدلانية |
| جذر سابوشنيكوفيا | Saposhnikoviae Radix | 9 g | مكون لطرد الرياح | كان مطلوباً توثيق الدفعة والمصادقة الصيدلانية |
| زنجبيل طازج | Zingiberis Rhizoma Recens | 6 g | مكون لتنسيق وظائف الجهاز الهضمي | يتم وقف الإعطاء في حال حدوث قيء مستمر |
| جذر عرق السوس | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | 6 g | مكون لتنسيق التركيبة | تمت مراقبة اضطرابات الكهرليات والوذمة لدى المرضى المعرضين لمخاطر عالية |
| جذر أنجيليكا | Angelicae Sinensis Radix | 10 g | مكون لتغذية الدم ودعم الدورة الدموية | تم تسجيل الاستخدام المتزامن لمضادات الصفائح الدموية أو مضادات التخثر |
| ريزوم تشوان شيونغ | Chuanxiong Rhizoma | 10 g | مكون لتنشيط الدم | تمت مراقبة وتسجيل الأحداث الضائرة المرتبطة بالنزيف |
| جذر الأستراغالوس | Astragali Radix | 20 g | مكون لدعم الطاقة (Qi) | يمكن زيادة الجرعة إلى 30 g في حالات التعرق التلقائي الملحوظ، إذا سُجل ذلك كتعديل محدد في البروتوكول |
| بوريا | Poria | 15 g | مكون لدعم الطحال وإزالة الرطوبة | يمكن زيادة الجرعة إلى 20 g في حالات البراز الرخو، إذا سُجل ذلك كتعديل محدد في البروتوكول |
| جذر الفاونيا الأحمر | Paeoniae Radix Rubra | 12 g | مكون لتنشيط الدم ومضاد للالتهابات | كان مطلوباً توثيق الدفعة والمصادقة الصيدلانية |
| بذور القنب | Cannabis Fructus | 10 g، عند الحاجة | لتعديل الإمساك فقط | تضاف فقط في حالات الإمساك وتُسجل كتعديل محدد في البروتوكول |
الجدول 3: تركيبة وبروتوكول إعطاء مغلي Xiaoxuming المعدل. بروتوكول الإعطاء: يتم تحضير جرعة يومية واحدة عن طريق الغلي في صيدلية المستشفى وتركيزها إلى 400 mL. يُقسم المغلي إلى جرعتين بحجم 200 mL لكل منهما، ويتم إعطاؤهما عن طريق الفم بعد وجبتي الإفطار والعشاء لمدة 28 يوماً متتالياً. يتم وقف الإعطاء للمرضى الذين يعانون من صعوبات في البلع غير آمنة، أو قيء مستمر، أو اشتباه في تفاعل تحسسي، أو ارتفاع في إنزيم ناقلة أمين الألانين أو ناقلة أمين الأسبارتات لأكثر من ثلاث مرات الحد الأعلى للطبيعي، أو معدل ترشيح كبيبي تقديري أقل من 45 mL/min/1.73 m2، أو ضغط دم غير منضبط بعد الإدارة القياسية، أو تسارع ضربات القلب مع عدم انتظام النظم ذو دلالة سريرية، أو ألم جديد في الصدر، أو أي مخاوف تتعلق بالسلامة يحددها الباحث.
| فئة النتيجة | متغير | نقطة زمنية للتقييم | التعريف أو القياس | تصنيف التحليل |
| العجز العصبي | درجة مقياس المعهد الوطني للصحة للسكتة الدماغية (NIHSS) | الخط الأساسي، اليوم 14، اليوم 28، اليوم 90 | مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية الذي تم تقييمه بواسطة أطباء أعصاب معميّين | النتيجة السريرية الأولية في اليوم 28؛ والنتائج الثانوية في اليوم 14/اليوم 90 |
| وظائف الحياة اليومية | مؤشر بارثل | الخط الأساسي، اليوم 28، اليوم 90 | درجة أنشطة الحياة اليومية التي تم تقييمها بواسطة مقيمين مدربين ومعمّىين | النتيجة السريرية الثانوية |
| الإعاقة العالمية | مقياس رانكين المعدل | اليوم 90 | درجة العجز الوظيفي 0-6 | النتيجة السريرية الثانوية؛ التوزيع الملحوظ والتقسيم الثنائي لمجموعة نية العلاج (ITT) المصنفة بشكل منفصل |
| نتيجة وظيفية إيجابية | مقياس رانكن المعدل 0-2 | اليوم 90 | المشاركون الذين سجلوا 0 أو 1 أو 2 في مقياس رانكين المعدل (mRS) | النتيجة السريرية الثانوية |
| تكرار السكتة الدماغية | السكتة الدماغية الإقفارية المتكررة | حتى اليوم 90 | تشخيص طبيب أعصاب باستخدام التصوير عند توفره | النتيجة المتعلقة بالسلامة |
| معدل الوفيات | الوفاة لجميع الأسباب | حتى اليوم 90 | الوفاة بسبب أي سبب | نتيجة السلامة |
| الالتهاب الجهازي | البروتين التفاعلي C عالي الحساسية، إنترلوكين-6، عامل نخر الورم ألفا | الخط الأساسي، اليوم 14، اليوم 28 | تركيزات المصل/البلازما | نتيجة المؤشر الحيوي الاستكشافية |
| مؤشرات السموم الداخلية/الحواجز | عديد السكاريد الشحمي، زونولين | الخط الأساسي، اليوم 14، اليوم 28 | التركيزات القائمة على الدم | نتيجة المؤشرات الحيوية الاستكشافية |
| مستقلب ميكروبي | أكسيد ثلاثي ميثيل أمين (TMAO) | الخط القاعدي، اليوم 28 | تركيز البلازما | نتيجة المؤشرات الحيوية الاستكشافية |
| تنوع ميكروبيوم الأمعاء | شانون، تشاو 1، براي-كيرتس | القيمة المرجعية، اليوم 28 | التنوع المشتق من rRNA 16S | نتيجة المؤشر الحيوي الاستكشافية |
| التركيب الميكروبي | أجناس مختارة | اليوم ٢٨ | الوفرة النسبية على مستوى الجنس | استكشافي؛ القيمة الاحتمالية الاسمية P ومعدل الاكتشاف الخاطئ المصحح بطريقة BH-FDR عبر ثلاثة أجناس مُقدمة |
| الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة | أسيتات، بروبيونات، بوتيرات، إجمالي الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs) | اليوم 28 | تركيزات البراز بواسطة تقنية GC-MS | نتيجة المؤشر الحيوي الاستكشافية |
| استجابة استكشافية | استجابة مركبة | اليوم ٢٨ | اثنان على الأقل: شانون >٠.٢٠؛ بوتيرات >%20؛ انخفاض LPS >15%؛ انخفاض في IL-6 >20% | استكشافي؛ العتبات غير مصادق عليها سريريًا |
| سلامة التدخل | الأحداث الضائرة والأحداث الضائرة الخطيرة | اليوم 1–90 | الأحداث المسجلة من قبل الباحث وعزوها | مُخرجات السلامة |
الجدول 4: النتائج السريرية والبيولوجية، والنوافذ الزمنية، والتعريفات، وتصنيف التحليل. يلخص هذا الجدول النتائج السريرية والبيولوجية المحددة مسبقاً، ونقاط زمن تقييمها، والتعريفات التشغيلية، وتصنيفات التحليل. FDR، معدل الاكتشاف الكاذب؛ hs-CRP، البروتين التفاعلي C عالي الحساسية؛ IL-6، إنترلوكين-6؛ LPS، عديد السكاريد الدهني؛ mRS، مقياس رانكن المعدل؛ NIHSS، مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية؛ SCFA، الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة؛ TMAO، ثلاثي ميثيل أمين N-أكسيد.
النتائج
تدفق المشاركين ومجموعات التحليل
من بين 176 مريضاً خضعوا للفحص، تم استبعاد 48 مريضاً قبل التوزيع العشوائي، بينما تم توزيع 128 مريضاً عشوائياً (64 لكل مجموعة؛ الشكل 1). شملت جميع المشاركين الذين تم توزيعهم عشوائياً في مجموعات تحليل نية العلاج ومجموعات السلامة. تم رصد مقياس NIHSS في اليوم 28 لـ 59 مشاركاً في مجموعة الضبط و58 مشاركاً في مجموعة التدخل؛ وأكمل المتابعة في اليوم 90 ما مجموعه 57 و56 مشاركاً على التوالي. تألفت مجموعات الالتزام بالبروتوكول من 58 و57 مشاركاً (الشكل 2).
الخصائص الأساسية
كانت الخصائص الأساسية متشابهة بين المجموعات (الجدول 5). حيث كان متوسط العمر 65.1 ± 8.7 مقابل 64.7 ± 9.1 سنة، وكانت درجة مقياس السكتة الدماغنية الوطنية (NIHSS) الأساسية 8.6 ± 2.6 مقابل 8.4 ± 2.9، وكان مؤشر بارثل الأساسي 43.5 ± 13.2 مقابل 44.8 ± 12.7. تم إعطاء مذيبات الخثرات وريدياً لـ 16/64 (25.0%) من المشاركين في مجموعة الضبط، و18/64 (28.1%) من المشاركين في مجموعة التدخل؛ بينما أُجري استئصال الخثرة الميكانيكي لـ 4/64 (6.3%) و5/64 (7.8%) على التوالي.
الالتزام بالتدخل
في مجموعة التدخل، كان متوسط عدد جلسات الوخز بالإبر 18 (المدى الربيعي، 17–20)؛ حيث أتم 57 مشاركاً ≥ 16 جلسة، واستهلك 58 مشاركاً ≥ 80% من المغلي. حدث استخدام لبروبيوتيك/بريبايوتيك خارج البروتوكول لدى اثنين من مشاركي مجموعة الضبط ومشارك واحد من مجموعة التدخل؛ وقد تم إدراج هؤلاء المشاركين في تحليل نية العلاج ولكن تم استبعادهم من تحليل الالتزام بالبروتوكول (الجدول التكميلي 1).
النتائج السريرية
انخفض مقياس NIHSS الملحوظ من 8.6 ± 2.6 إلى 5.5 ± 3.1 في المجموعة الضابطة (n = 59 في اليوم 28) ومن 8.4 ± 2.9 إلى 4.1 ± 2.9 في مجموعة التدخل (n = 58؛ الشكل 3A). وكانت متوسطات التغيرات الملحوظة −3.34 ± 4.14 و −3.97 ± 4.03 نقطة على التوالي (الشكل 3B). وفي تحليل ANCOVA المحدد مسبقاً بـ 30 عملية تعويض، كان مقياس NIHSS المعدل في اليوم 28 أقل بمقدار 1.30 نقطة مع التدخل (فاصل ثقة [CI] 95%، من −2.36 إلى −0.24؛ P = 0.017).
بلغ مقياس NIHSS في اليوم 14 قيمة 5.49 ± 2.45 مقابل 4.61 ± 2.23 (قيمة P المعدلة وفقاً للقيمة الأساسية = 0.041)، بينما بلغت قيمة NIHSS المرصودة في اليوم 90 قيمة 3.68 ± 2.68 (n = 57) مقابل 2.88 ± 2.36 (n = 56؛ P = 0.091؛ الشكل 3A).
بلغ مؤشر بارثل في اليوم الثامن والعشرين 61.39 ± 18.80 مقابل 68.82 ± 19.36 (القيمة المعدلة وفقاً للقيمة الأساسية P = 0.040)؛ وكانت القيم الملحوظة في اليوم 90 هي 75.56 ± 19.22 مقابل 81.49 ± 17.67 (P = 0.098؛ الشكل 3جمن بين المشاركين الذين شملهم تحليل مقياس رانكين المعدل (mRS) في اليوم 90 للحالات المرصودة، حدثت نتيجة إيجابية لدى 32/57 من مجموعة الضبط (56.1%) و38/56 من المشاركين في مجموعة التدخل (67.9%؛ P = 0.200). ويظهر التوزيع الكامل لفئات مقياس رانكين المعدل (mRS) للحالات المرصودة في الشكل 3D و الجدول التكميلي 1تقديرات تحليل النية بالعلاج (ITT) لنتيجة مقياس رانكين المعدل (mRS) ثنائي التقسيم باستخدام التضمين المتعدد (36/64) مقابل (٤٤/٦٤؛ P = ٠.١٤٤) وتُذكر بشكل منفصل.
المؤشرات الحيوية المرتبطة بمحور الدماغ والأمعاء
كانت عينات البراز متاحة وتم تحليلها بنجاح لجميع المشاركين الذين تم توزيعهم عشوائياً (64 مشاركاً لكل مجموعة) في النقطة الزمنية المخطط لها للتحليل. بلغ مؤشر تباين شانون (Shannon diversity) في اليوم 28 قيمة 3.08 ± 0.52 مقابل 3.31 ± 0.57 (قيمة P المعدلة حسب خط الأساس = 0.019؛ الشكل 4A)، وكان مستوى بوتيرات البراز 10.21 ± 4.27 مقابل 12.91 ± 5.08 µmol/g (قيمة P = 0.002؛ الشكل 4B).
كان مستوى IL-6 هو 18.23 ± 9.44 مقابل 15.62 ± 8.06 pg/mL في اليوم 14 (القيمة الاسمية P = 0.095) و14.61 ± 8.18 مقابل 11.84 ± 6.83 pg/mL في اليوم 28 (قيمة P المعدلة حسب خط الأساس = 0.041؛ الشكل 4C). وكان مستوى LPS هو 0.85 ± 0.32 مقابل 0.78 ± 0.30 EU/mL في اليوم 14 (P = 0.204) و0.78 ± 0.31 مقابل 0.66 ± 0.28 EU/mL في اليوم 28 (قيمة P المعدلة حسب خط الأساس = 0.023؛ الشكل 4D).
في اليوم 28، كانت أجناس Faecalibacterium وRoseburia أكثر وفرة في مجموعة التدخل (القيمة الاسمية P = 0.006 و0.009 على التوالي؛ وكلاهما q = 0.013)، بينما لم تحقق Bifidobacterium دلالة إحصائية اسمية (P = q = 0.056؛ الشكل 4E). تم تطبيق تصحيح Benjamini–Hochberg على الأجناس الثلاثة المعروضة.
حدثت الاستجابة المركبة الاستكشافية لدى 21/64 من مجموعة الضبط (32.8%) و34/64 من المشاركين في مجموعة التدخل (53.1%؛ P = 0.020). وتم عرض النتائج المكونة في الشكل 4F و الجدول التكميلي 2؛ وتعتبر هذه العتبات استكشافية ولم يتم التحقق من صحتها سريرياً.
الارتباطات الاستكشافية على مستوى المشارك
تم تقييم الارتباطات الاستكشافية على مستوى المشاركين باستخدام معامل ارتباط سبيرمان (Spearman's rho) مع 5,000 عينة إعادة سحب (bootstrap resamples). ولم تكن التغيرات في بوتيرات البراز، وIL-6، وLPS، وتنوع شانون مرتبطة بشكل كبير بالتغيرات العصبية أو تغيرات المؤشرات الحيوية المقابلة (الشكل 5).
لم تكن التغيرات في مستويات البوتيرات في البراز ومقياس NIHSS مرتبطة بشكل ملحوظ (Spearman rho = −0.05؛ فاصل ثقة bootstrap بنسبة 95% [CI]، من −0.23 إلى 0.13؛ P = 0.601؛ n = 117). كما لم يرتبط التغير في IL-6 بالتغير في NIHSS (rho = −0.01؛ 95% bootstrap CI، من −0.18 إلى 0.15؛ P = 0.887؛ n = 117)، ولم يرتبط التغير في LPS بالتغير في IL-6 (rho = −0.14؛ 95% bootstrap CI، من −0.29 إلى 0.03؛ P = 0.125؛ n = 128).
لم يكن التغير في تنوع شانون مرتبطاً بشكل ملحوظ بالتغير في مقياس NIHSS (القيمة rho = −0.15؛ فاصل ثقة 95%، من −0.34 إلى 0.06؛ P = 0.119؛ n = 117). ونظراً لعدم ثبوت الارتباطات المحددة مسبقاً على مستوى المشاركين بين التعرض والوسيط وبين الوسيط والنتيجة، لم يتم إجراء تحليل الوساطة، ولم يتم استنتاج أي تأثير غير مباشر أو مسار سببي بين الدماغ والأمعاء.
نتائج السلامة
حدث أي حدث ضار لدى 8/64 من مجموعة الضبط و11/64 من المشاركين في مجموعة التدخل (12.5% مقابل 17.2%؛ P = 0.456). وظهر كدم في موقع الوخز لدى 0 مقابل 5 مشاركين (P = 0.023) وتماثلوا للشفاء دون علاج؛ كما حدث انزعاج معدي معوي خفيف لدى 3 مقابل 6 مشاركين (P = 0.300؛ الجدول 6).
حدثت آثار جانبية خطيرة لدى 3 من المشاركين في مجموعة الضبط ومشاركين اثنين في مجموعة التدخل (P = 0.648). ووقعت حالة وفاة واحدة في كل مجموعة؛ ولم يتم تقييم أي أثر جانبي خطير على أنه مرتبط بشكل مؤكد بالوخز بالإبر أو بمغلي Xiaoxuming المعدل.
باختصار، ارتبط التدخل المدمج بتحسن طفيف في مقياس NIHSS في اليوم 28 وفي مؤشرات حيوية مختارة في اليوم 28. ولم تكن الاختلافات السريرية في اليوم 90 ذات دلالة إحصائية، كما لم تدعم البيانات على مستوى المشاركين وجود وساطة من خلال المؤشرات الحيوية المقاسة.
الشكل 2: سير عمل أخذ العينات السريرية والبيولوجية. جُمعت عينات الدم والبراز لقياسات الميكروبيوم، والأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFA)، والمؤشرات الالتهابية، والمؤشرات المتعلقة بحاجز الأمعاء. يحدد سير العمل هذا الارتباطات الاستكشافية ولا يؤكد وجود آلية سببية بين الدماغ والأمعاء. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3: النتائج السريرية. (أ) مسار مقياس NIHSS؛ تمثل النقاط المتوسط ± SD، مع توضيح قيمة n عند كل نقطة زمنية. (ب) التغير الملحوظ في مقياس NIHSS من baseline إلى اليوم 28، معروضاً كمتوسط ± SD (مجموعة التحكم n = 59؛ مجموعة التدخل n = 58)؛ يشير التعليق التوضيحي إلى تحليل ANCOVA المعتمد على 30 عملية imputation والمعدل حسب NIHSS عند baseline والعمر والجنس وإعادة التروية والوقت من بداية الأعراض حتى التوزيع العشوائي. (ج) مؤشر Barthel، معروضاً كمتوسط ± SD، مع توضيح قيمة n. (د) فئات mRS في اليوم 90 للحالات الملحوظة (مجموعة التحكم n = 57؛ مجموعة التدخل n = 56)؛ تعتمد النسب المئوية على المقامات الملحوظة. قيم P ذات اتجاهين. لم تُستخدم رموز الدلالة الإحصائية. CI، فاصل الثقة؛ MI، imputation متعددة؛ SD، الانحراف المعياري. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4: المؤشرات الحيوية الاستكشافية. تمثل الأعمدة والنقاط المتوسط ± SD. قدم جميع المشاركين الذين تم توزيعهم عشوائياً عينات قابلة للتقييم للتحليلات المقابلة؛ وبناءً عليه، كان n = 64/group متاحاً لكل لوحة. تم جمع ومعالجة عينات البراز بنجاح من جميع المشاركين، بما في ذلك أولئك الذين تطلب الأمر تأخير الجمع ضمن نافذة الجمع المحددة مسبقاً. (A) مؤشر شانون و(B) بيوتيرات البراز: النماذج الخطية المعدلة حسب خط الأساس في اليوم 28. (C) مسارات IL-6 و(D) مسارات LPS: اختبارات Welch في اليوم 14 والنماذج المعدلة حسب خط الأساس في اليوم 28. (E) أجناس مختارة في اليوم 28: اختبارات Welch مع تصحيح Benjamini–Hochberg عبر الأجناس الثلاثة المعروضة؛ حيث تظهر كل من قيم P الاسمية وقيم q. (F) مكونات الاستجابة: اختبارات Pearson chi-square. جميع قيم P ذات جانبين؛ ولم تُستخدم رموز الدلالة الإحصائية. IL-6، إنترلوكين-6؛ LPS، عديد السكاريد الدهني؛ SCFA، حمض دهني قصير السلسلة؛ SD، الانحراف المعياري. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 5: ارتباطات استكشافية على مستوى المشاركين. (A) التغير في مستوى البوتيرات مقابل التغير في NIHSS (العدد = 117). (B) التغير في IL-6 مقابل التغير في NIHSS (العدد = 117). (C) التغير في LPS مقابل التغير في IL-6 (العدد = 128). تظهر الخطوط للتوضيح البصري فقط ولا تمثل استدلالاً قائماً على الانحدار. استند الاستدلال الإحصائي إلى معامل ارتباط سبيرمان (Spearman's rho) مع 5,000 عينة إعادة سحب (bootstrap resamples). (D) تقديرات سبيرمان مع فترات ثقة 95% بطريقة إعادة السحب لـ 5,000 عينة، بما في ذلك التغير في مؤشر شانون (Shannon) مقابل التغير في NIHSS (العدد = 117). لم يستوفِ أي ارتباط قيمة P < 0.05؛ وبناءً عليه، لم يتم إجراء تحليل الوساطة. لا توجد رموز دلالة إحصائية مستخدمة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| المتغير | مجموعة الضبط (n = 64) | مجموعة التدخل (n = 64) | قيمة P |
| العمر، سنوات | 65.1 ± 8.7 | 64.6 ± 9.0 | 0.775 |
| الجنس الذكري، n (%) | 40 (62.5) | 39 (60.9) | 0.855 |
| المدة من البداية حتى التوزيع العشوائي، h | 41.7 ± 14.9 | 40.9 ± 15.7 | 0.773 |
| درجة NIHSS الأساسية | 8.6 ± 2.6 | 8.4 ± 2.9 | 0.665 |
| مؤشر بارثيل الأساسي | 43.5 ± 13.2 | 44.8 ± 12.7 | 0.573 |
| ارتفاع ضغط الدم، n (%) | 42 (65.6) | 41 (64.1) | 0.855 |
| داء السكري، n (%) | 18 (28.1) | 17 (26.6) | 0.839 |
| إذابة الخثرة وريدياً، n (%) | 16 (25.0) | 18 (28.1) | 0.690 |
| استئصال الخثرة الميكانيكي، n (%) | 4 (6.3) | 5 (7.8) | 0.732 |
| hs-CRP, mg/L | 7.21 ± 4.18 | 7.04 ± 4.03 | 0.813 |
| IL-6, pg/mL | 24.03 ± 10.14 | 23.62 ± 9.96 | 0.817 |
| TNF-alpha, pg/mL | 30.5 ± 11.2 | 30.0 ± 11.0 | 0.799 |
| مؤشر شانون | 2.84 ± 0.55 | 2.86 ± 0.56 | 0.833 |
| بيوتيرات البراز، µmol/g | 8.41 ± 3.99 | 8.53 ± 4.04 | 0.859 |
| LPS, EU/mL | 0.94 ± 0.34 | 0.93 ± 0.35 | 0.870 |
| زونولين، ng/mL | 54.50 ± 15.60 | 54.11 ± 15.08 | 0.885 |
الجدول 5: الخصائص الديموغرافية والسريرية والمؤشرات الحيوية الأساسية. يلخص هذا الجدول الخصائص الديموغرافية والسريرية والمتعلقة بالعلاج والمؤشرات الحيوية الأساسية في مجموعتي الضبط والتدخل. القيم معبر عنها كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD) أو العدد (%). تم إدراج إزالة الخثرة الوريدية وإزالة الخثرة الميكانيكية كفئات منفصلة ضمن الرعاية القياسية.
| نتائج السلامة | المجموعة الضابطة (n=64) | مجموعة التدخل (n=64) | القيمة الاحتمالية P Value |
| أي حدث ضار، n (%) | 8 (12.5) | 11 (17.2) | 0.456 |
| كدمات في موقع الإبرة، n (%) | 0 | 5 (7.8) | 0.023 |
| انزعاج هضمي خفيف، n (%) | 3 (4.7) | 6 (9.4) | 0.3 |
| دوار عابر، n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| طفح جلدي خفيف، n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| خلل في وظائف الكبد، n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| خلل في وظائف الكلى، n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
| تقلب في ضغط الدم، n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| خفقان، n (%) | 0 | 1 (1.6) | 0.315 |
| حدث ضار خطير، n (%) | 3 (4.7) | 2 (3.1) | 0.648 |
| حدث ضار خطير متعلق بالتدخل، n (%) | 0 | 0 | -- |
| الوفاة لجميع الأسباب، n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
الجدول 6: الأحداث الضائرة والأحداث الضائرة الخطيرة. يلخص هذا الجدول الأحداث الضائرة، والأحداث الضائرة الخطيرة، والأحداث الضائرة الخطيرة المرتبطة بالتدخل، والوفاة الناجمة عن جميع الأسباب في مجموعتي الضبط والتدخل. تُعرض القيم على هيئة n (%).
توافر البيانات:
البيانات المجهولة للهوية على مستوى المشاركين والتي تدعم التحليلات السريرية، والمؤشرات الحيوية، والميكروبيوم، والالتزام، والسلامة الواردة في التقرير متاحة للعامة في Zenodo (https://zenodo.org/records/22725409).
الجدول التكميلي 1: المتابعة والالتزام والنتائج السريرية. تم تصنيف مجموعات تحليل الملاحظة والتحليل المنسوب بشكل منفصل. يعتمد التقدير الأساسي على عملية تعويض متعددة بمقدار 30 ضعفاً وتحليل التباين المصاحب (ANCOVA) المعدل وفقاً لدرجة NIHSS عند baseline، والعمر، والجنس، وإعادة التروية، والوقت من بداية الإصابة حتى التوزيع العشوائي. CI، فاصل الثقة؛ IQR، المدى الربيعي؛ mRS، مقياس رانكين المعدل؛ NIHSS، مقياس المعاهد الوطنية للصحة للسكتة الدماغية.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 2: نتائج المؤشرات الحيوية الاستكشافية. القيم هي المتوسط ± SD أو n (%). يتم التمييز بين قيم P الاسمية وقيم q المعدلة حسب FDR. تطلبت الاستجابة المركبة حدوث اثنين على الأقل من أربعة تغييرات محددة مسبقاً، وهي غير معتمدة سريرياً. تحليلات الارتباط استكشافية؛ ولم يتم إجراء تحليل الوساطة لأن الارتباطات المسبقة على مستوى المشاركين لم تكن ذات دلالة إحصائية.يرجى النقر هنا لتحميل هذا الملف.
الملف التكميلي 1: البيانات الخام المقابلة للأشكال والجداول.يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.
المناقشة
أدى البروتوكول المشترك إلى تحسن طفيف في العجز العصبي المبكر، حيث قدرت تحليل التباين المصاحب (ANCOVA) بطريقة التعويض المتعدد فرقاً قدره −1.30 نقطة في مقياس NIHSS في اليوم 28. كما اختلفت مؤشرات Barthel Index في اليوم 28 وبعض المؤشرات الحيوية المختارة في اليوم 28، بينما لم تصل نتائج اليوم 90 إلى الدلالة الإحصائية. وتدعم هذه النتائج تقييم التدخل المشترك كعلاج مساعد وليس كبديل لإعادة التروية، أو العلاج المضاد للتخثر، أو التأهيل، أو غيرها من الرعاية القياسية.
يتسق التأثير السريري الملحوظ في هذه التجربة مع الرؤية المتنامية بأن الوخز بالإبر قد يساهم في التعافي بعد السكتة الدماغية بما يتجاوز مجرد التعديل العرضي. وقد أشارت أعمال سابقة إلى أن الوخز بالإبر قد يحسن الوظيفة العصبية ويقلل من النشاط الالتهابي في السكتة الدماغية الإقفارية الحادة، رغم أن حجم الفائدة واستمراريتها لا يزالان متغيرين عبر الدراسات21. وتوسع النتائج الحالية هذا الخط من الأدلة من خلال دراسة الوخز بالإبر كجزء من تدخل مشترك مع تركيبة عشبية معيارية، وعن طريق ربط التأثير السريري بمؤشرات حيوية محددة مسبقاً تتعلق بمحور الدماغ-الأمعاء. كان حجم التأثير متواضعاً وليس جذرياً، وهو أمر مهم للتفسير. فقد يكون الفرق المعدل بمقدار نقطة واحدة في مقياس NIHSS ذا دلالة في السكتات الدماغية الخفيفة إلى المتوسطة عندما يصاحبه إشارات وظيفية وبيولوجية، ولكن لا ينبغي تفسيره كدليل على أن التدخل وحده هو الذي يحدد التعافي. أما الخطوات الأكثر حساسية من حيث قابلية التكرار فهي: توقيت الأهلية المتسق، التخصيص المخفي، الوخز الآمن، التعرض المعياري للمغلي، التقييم الأعمى للنتائج، والمعالجة السريعة للعينات تحت التحكم في درجة الحرارة. وتشمل المشكلات التشغيلية الشائعة جلسات الوخز بالإبر الفائتة، والبلع غير الآمن، وتأخر إنتاج البراز، والذوبان أثناء النقل. وقد تمت معالجة هذه المشكلات من خلال توثيق التأجيلات، ووقف العلاج الفموي عند عدم أمانه، وجمع البراز التلقائي التالي دون استخدام ملينات مخصصة للبحث فقط، وتسجيل الإمساك وتأخر الجمع، وتتبع تاريخ المعالجة والتجميد والذوبان.
كانت الاختلافات في مؤشر شانون للتنوع، والبيوتيريت، وIL-6، وLPS في اليوم 28 عبارة عن ارتباطات استكشافية على مستوى المجموعة. ولم تدعم التحليلات الاستكشافية على مستوى المشاركين للارتباطات بين البيوتيريت وNIHSS، وIL-6 وNIHSS، وLPS وIL-6، وشانون وNIHSS العلاقات المسبقة المطلوبة لتحليل الوساطة؛ وبناءً على ذلك، لم يتم إجراء تحليل الوساطة، ولا تثبت البيانات وجود مسار سببي بين الدماغ والأمعاء. إن المقاربات البديلة، بما في ذلك الميتاجينوميات الشاملة (shotgun metagenomics)، والميتابولوميات المستهدفة باستخدام معايير مُعلمة بنظائر مشعة، وسجلات النظام الغذائي المتسلسلة، وأخذ عينات متكررة من المؤشرات الحيوية، من شأنها أن تحدد الوظيفة والترتيب الزمني بشكل أكثر مباشرة من تسلسل 16S rRNA ونقطتين زمنيتين لعينات البراز22,23,24.
يقتصر التفسير على كون العينة من مركز واحد، وعدم تعمية المشاركين، وغياب التسجيل المسبق للتجارب قبل مرحلة القيد، وتصميم التدخل المشترك دون وجود مجموعات خضعت للوخز بالإبر فقط أو لمستخلصات الأعشاب فقط. وبناءً عليه، لا يمكن لهذا التصميم عزو التأثيرات إلى مكون واحد أو إلى تآزر بين المكونات. قد تؤثر الحمية الغذائية المعتادة، وشدة عسر البلع، والتغذية المعوية، والمضادات الحيوية بعد العشوائية، واستخدام مثبطات مضخة البروتون، والإمساك، وكثافة إعادة التأهيل، ومدة الإقامة كعوامل مربكة لنتائج الميكروبيوم. لم تُدرج هذه العوامل في نماذج الميكروبيوم المعدلة، وبالتالي تظل عوامل مربكة متبقية محتملة. كما اقتصر تصحيح معدل الاكتشاف الخاطئ (FDR) للأجناس المختارة على الأجناس الثلاثة المعروضة، ولم يتم التحقق خارجيًا من عتبات الاستجابة الاستكشافية. وكانت تحليلات المؤشرات الحيوية استكشافية؛ حيث انخفضت بعض تركيزات IL-6 و TNF-alpha عن النطاقات الاسمية للمقاييس المحددة من قبل الشركات المصنعة، لذا يجب تفسيرها بحذر.
يجب أن تعتمد الدراسات المستقبلية على التسجيل الاستباقي، وتوظيف المشاركين من مراكز متعددة، وتصميم عاملي، وبيانات تدخلات مشتركة تم التحقق من مصدرها، ورصد موحد للنظام الغذائي/التعرض، ومسارات تحليل للميكروبيوم والميتابولوميات قابلة للتكرار بشكل مستقل. كما يلزم وجود عينات أكبر وأخذ عينات بوتيرة أكثر تكراراً قبل اختبار الوساطة، أو تأثيرات مكونات العلاج، أو اختيار العلاج المحدد بناءً على الميكروبيوم. لم تظهر مراقبة السلامة أي أحداث ضائرة خطيرة مؤكدة الصلة بالتدخل، إلا أن العينة كانت صغيرة جداً بحيث لا يمكن استبعاد الأضرار غير الشائعة. ويجب إيلاء اهتمام خاص لمخاطر النزيف، وسلامة البلع، وعدم التحمل المعدي المعوي، ووظائف الكبد والكلى، وضغط الدم، واضطراب نظم القلب عند دمج الوخز بالإبر والعلاج بالأعشاب مع علاج السكتة الدماغية الحادة.
وفي الختام، ارتبط الوخز بالإبر المعياري بالإضافة إلى مغلي Xiaoxuming المعدل بتحسن عصبي متواضع في اليوم 28 واختلافات في مؤشرات حيوية مختارة عند إضافتهما إلى الرعاية القياسية. وتعد النتائج البيولوجية مولدة للفرضيات ولا تثبت وجود آلية سببية بين الدماغ والأمعاء.
الإفصاحات
يصرح المؤلفون بعدم وجود تضارب في المصالح.
إسهامات المؤلفين:
ساهم Zhiqiang Huang في وضع التصور، والمنهجية، والبحث، وتنظيم البيانات، وكتابة المسودة الأصلية؛ وساهم Bo Wang في التحليل الرسمي، والبرمجيات، والتصور البصري، وكتابة المراجعة والتحرير؛ وساهم Zhen Chen في البحث، وتوفير الموارد، والتحقق من الصحة؛ وساهمت Aiping Wang في البحث، وتنظيم البيانات، وإدارة المشروع؛ وساهم Longhai Wang في وضع التصور، والإشراف، وإدارة المشروع، وكتابة المراجعة والتحرير. وقد وافق جميع المؤلفين على المخطوطة النهائية
شكر وتقدير
يتوجه المؤلفون بخالص الشكر إلى الطاقم السريري والمخبري في مستشفى الطب الصيني التقليدي والطب الغربي في مدينة دازو بمقاطعة سيتشوان، لدعمهم خلال عملية استقطاب المشاركين، والرعاية السريرية، وجمع البيانات. كما يشكر المؤلفون المرضى وعائلاتهم على مشاركتهم في هذه التجربة العشوائية المنضبطة. لم يتلق هذا البحث أي منحة محددة من أي وكالة تمويل في القطاعات العامة أو التجارية أو غير الربحية.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حمض 4-ميثيل فاليريك | Sigma-Aldrich، الولايات المتحدة الأمريكية | 142342 | المعيار الداخلي لقياس الطيف الكتلي المقترن بالكروماتوغرافيا الغازية (GC-MS) |
| بادئات جين 16S rRNA (المنطقة V3–المنطقة V4) | Sangon Biotech، الصين | التخليق المخصص | زوج البادئات 341F/806R |
| إبر الوخز بالإبر | هواتو (مصنع سوزو للأجهزة الطبية)، الصين | 0.25 × ٤٠ مم | إبر من الفولاذ المقاوم للصدأ معقمة ومخصصة للاستخدام مرة واحدة |
| تقييم مؤشر بارثل | غير قابل للتطبيق | غير قابل للتطبيق | تقييم أنشطة الحياة اليومية |
| أنابيب التجميد العميق | Corning، الولايات المتحدة الأمريكية | 430659 | تخزين عينات البراز |
| إيثيل أسيتات (درجة كروماتوغرافية) | Merck، ألمانيا | 109623 | مذيب استخلاص عضوي |
| رؤوس ماصات ذات مرشح | Axygen، الولايات المتحدة الأمريكية | متنوعة | خالٍ من RNase وDNase |
| جهاز كروماتوغرافيا الغاز | Agilent Technologies، الولايات المتحدة الأمريكية | جهاز الكروماتوغرافيا الغازية 7890B | نظام فصل الكروماتوغرافيا الغازية |
| طقم مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم لإنترلوكين 6 البشري (Human IL-6 ELISA Kit) | R&D Systems، الولايات المتحدة الأمريكية | D6050 | تحديد كمية إنترلوكين 6 في المصل |
| طقم مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لعديد السكاريد الدهني (LPS) البشري | Cusabio، الصين | CSB-E13066h | تقدير كمية عديد السكاريد الشحمي (LPS) في المصل |
| طقم مقايسة TMAO البشري | Sigma-Aldrich، الولايات المتحدة الأمريكية | MAK264 | التقدير الكمي لـ TMAO باستخدام القياس اللوني/الفلوري |
| كاشف انتقائي للكتلة | Agilent Technologies، الولايات المتحدة الأمريكية | 5977B MSD | مطياف الكتلة رباعي الأقطاب |
| برمجيات محطة عمل MassHunter | Agilent Technologies، الولايات المتحدة الأمريكية | G1701EA | جمع بيانات جهاز كروماتوغرافيا الغاز ومطياف الكتلة (GC-MS) وتحليلها |
| الماصات الدقيقة | إيبندورف، ألمانيا | سلسلة ريسيرش بلس (Research plus) | مناولة السوائل المختبرية |
| طقم كواشف MiSeq الإصدار الثالث (600 دورة) | Illumina، الولايات المتحدة الأمريكية | MS-102-3003 | القراءة المزدوجة الطرفية 2 × تسلسل بمقدار 300 زوج قاعدي |
| نظام MiSeq | Illumina، الولايات المتحدة الأمريكية | SY-410-1003 | منصة تسلسل النهايات المزدوجة؛ 2 × كيمياء تسلسل الحمض النووي بطول 300 زوج قاعدي |
| تقييم مقياس رانكين المعدل (mRS) | غير قابل للتطبيق | غير قابل للتطبيق | تقييم النتائج الوظيفية في اليوم 90 |
| مغلي شياو شومينغ المعدل (تركيبة عشبية) | صيدلية المستشفى، مستشفى الطب الصيني التقليدي والطب الغربي في مدينة دازو | غير قابل للتطبيق | أُعدت وفقاً لمعايير الصيدلة المؤسسية؛ وتم توثيقها وصرفها من قبل صيادلة المستشفى |
| نموذج تقييم مقياس معاهد الصحة الوطنية للسكتة الدماغية (NIHSS) | المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية | غير قابل للتطبيق | أداة تقييم سريري موحدة |
| NumPy | مطورو NumPy | RRID: SCR_008633 | الإصدار 1.26.x |
| بانداز (pandas) | فريق تطوير pandas | RRID: SCR_018239 | الإصدار 2.1.x |
| حمض الفوسفوريك | Sigma-Aldrich، الولايات المتحدة الأمريكية | 79619 | كاشف بدرجة تحليلية |
| بايثون | مؤسسة برمجيات بايثون (Python Software Foundation) | RRID: SCR_008394 | الإصدار 3.11.x |
| طقم QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit | Qiagen، ألمانيا | 51804 | استخلاص الحمض النووي للميكروبيوم في البراز |
| QIIME 2 | فريق تطوير QIIME 2 | RRID: SCR_008249 | الإصدار 2024.5 |
| طقم مقايسة Qubit dsDNA HS Assay Kit | Thermo Fisher Scientific، الولايات المتحدة الأمريكية | Q32851 | تقدير كمية الحمض النووي (DNA) القائم على الفلورة |
| scikit-learn | مطورو scikit-learn | RRID: SCR_002577 | الإصدار 1.4.x |
| SciPy | مطورو SciPy | RRID: SCR_008058 | الإصدار 1.11.x |
| قاعدة بيانات SILVA rRNA | مشروع SILVA | معرف مورد الموارد: SCR_006423 | الإصدار 138.1 |
| مجمد ذو درجة حرارة منخفضة للغاية | Thermo Fisher Scientific | TSX60086A | −80 °C التخزين |
المراجع
- GBD 2019 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. Lancet Neurol. 2021;20(10):795-820. doi:10.1016/S1474-4422(21)00252-0.
- Campbell BCV et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 2019;5(1):70. doi:10.1038/s41572-019-0118-8.
- Iadecola C, Anrather J. The immunology of stroke: from mechanisms to translation. Nat Med. 2011;17(7):796-808. doi:10.1038/nm.2399.
- Benakis C et al. Commensal microbiota affects ischemic stroke outcome by regulating intestinal gamma delta T cells. Nat Med. 2016;22(5):516-523. doi:10.1038/nm.4068.
- Xia GH et al. Stroke Dysbiosis Index (SDI) in gut microbiome are associated with brain injury and prognosis of stroke. Front Neurol. 2019;10:397. doi:10.3389/fneur.2019.00397.
- Dalile B, Van Oudenhove L, Vervliet B, Verbeke K. The role of short-chain fatty acids in microbiota-gut-brain communication. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2019;16(8):461-478. doi:10.1038/s41575-019-0157-3.
- Tsai CY et al. Acupuncture improves neurological function and anti-inflammatory effect in patients with acute ischemic stroke: a double-blinded randomized controlled trial. Complement Ther Med. 2024;82:103049. doi:10.1016/j.ctim.2024.103049.
- Cao JP et al. Acupuncture as adjunctive therapy for acute cerebral infarction: a randomized clinical trial. Front Neurol. 2025;16:1509204. doi:10.3389/fneur.2025.1509204.
- Fu DL et al. Xiaoxuming decoction for acute ischemic stroke: a systematic review and meta-analysis. J Ethnopharmacol. 2013;148(1):1-13. doi:10.1016/j.jep.2013.04.002.
- Li DH et al. A network pharmacology-based identification study on the mechanism of Xiao-Xu-Ming Decoction for cerebral ischemic stroke. Evid Based Complement Alternat Med. 2020;2020:2507074. doi:10.1155/2020/2507074.
- Winek K, Dirnagl U, Meisel A. The gut microbiome as therapeutic target in central nervous system diseases: implications for stroke. Neurotherapeutics. 2016;13(4):762-774. doi:10.1007/s13311-016-0475-x.
- Moher D et al. CONSORT 2010 explanation and elaboration: updated guidelines for reporting parallel group randomised trials. BMJ. 2010;340:c869. doi:10.1136/bmj.c869.
- Brott T et al. Measurements of acute cerebral infarction: a clinical examination scale. Stroke. 1989;20(7):864-870. doi:10.1161/01.STR.20.7.864.
- Powers WJ et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke. Stroke. 2019;50(12):e344-e418. doi:10.1161/STR.0000000000000211.
- Chen L et al. Additional effects of acupuncture on early comprehensive rehabilitation in patients with mild to moderate acute ischemic stroke: a multicenter randomized controlled trial. BMC Complement Altern Med. 2016;16:226. doi:10.1186/s12906-016-1193-y.
- Lan R et al. Xiao-Xu-Ming Decoction protects against blood-brain barrier disruption and neurological injury induced by cerebral ischemia and reperfusion in rats. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:629782. doi:10.1155/2013/629782.
- Broderick JP, Adeoye O, Elm J. Evolution of the Modified Rankin Scale and its use in future stroke trials. Stroke. 2017;48(7):2007-2012. doi:10.1161/STROKEAHA.117.017866.
- Battaglini D et al. Gut microbiota in acute ischemic stroke: from pathophysiology to therapeutic implications. Front Neurol. 2020;11:598. doi:10.3389/fneur.2020.00598.
- Xu M, Li D, Zhang S. Acupuncture for acute stroke. Cochrane Database Syst Rev. 2018;3(3):CD003317. doi:10.1002/14651858.CD003317.pub3.
- Vickers AJ, Altman DG. Statistics notes: analysing controlled trials with baseline and follow up measurements. BMJ. 2001;323(7321):1123-1124. doi:10.1136/bmj.323.7321.1123.
- Yu F et al. Usage, anti-inflammatory effect and safety of adjunctive acupuncture for cerebral infarction: an Apriori algorithm-based data mining and meta-analysis. Front Neurol. 2025;16:1546194. doi:10.3389/fneur.2025.1546194.
- Iadecola C, Buckwalter MS, Anrather J. Immune responses to stroke: mechanisms, modulation, and therapeutic potential. J Clin Invest. 2020;130(6):2777-2788. doi:10.1172/JCI135530.
- Tan C et al. Dysbiosis of gut microbiota and short-chain fatty acids in acute ischemic stroke and the subsequent risk for poor functional outcomes. JPEN J Parenter Enteral Nutr. 2021;45(3):518-529. doi:10.1002/jpen.1861.
- Zhang W, Dong XY, Huang R. Gut microbiota in ischemic stroke: role of gut bacteria-derived metabolites. Transl Stroke Res. 2023;14(6):811-828. doi:10.1007/s12975-022-01096-3.
- Zhang Q et al. Xiaoxuming Decoction: a traditional herbal recipe for stroke with emerging therapeutic mechanisms. Front Pharmacol. 2021;12:802381. doi:10.3389/fphar.2021.802381.