نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح الجهاز العصبي المركزي يرقات ذبابة الفاكهة من المركز الثالث طور مرحلي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشريح الجهاز العصبي المركزي اليرقات في Melanogaster ذبابة الفاكهة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الجهاز العصبي المركزي (CNS) من يرقات ذبابة الفاكهة معقدة وغير مفهومة. طريقة واحدة للتحقيق في الجهاز العصبي المركزي هو استخدام المناعية للنظر في التعبير عن رواية مختلفة والبروتينات علامة. تلطيخ اليرقات كله هو غير عملي لأن بشرة صعبة يمنع اختراق الأجسام المضادة من داخل تجويف الجسم. من أجل هذه الأنسجة وصمة عار لا بد من تشريح الحيوان قبل تثبيت والتلوين. نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح يرقات ذبابة الفاكهة دون الإضرار الجهاز العصبي المركزي. أبدأ تمزيق يرقة في نصف مع غرامة زوج من ملقط ، ثم تتحول إهاب "من الداخل إلى الخارج" لفضح الجهاز العصبي المركزي. إذا أجري تشريح الجهاز العصبي المركزي بعناية سوف تظل تعلق على بشرة. نستمر في الجهاز العصبي المركزي عادة تعلق على بشرة طوال خطوات التثبيت والتلوين ، وفقط إزالة الجهاز العصبي المركزي من إهاب قبيل تركيب العينات على الشرائح الزجاجية. نعرض أيضا بعض الصور ممثل CNS اليرقات ملطخة حواء ، عامل النسخ التي أعرب عنها في مجموعة فرعية من الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي. ويختتم المقال بمناقشة بعض الاستخدامات العملية لهذه التقنية ، والصعوبات المحتملة التي قد تنشأ.
البروتوكول
- تشريح 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة ، وترك الجهاز العصبي المركزي التابعة لبشرة. مكان في أنبوب مل 1.5.
- الإصلاح في برنامج تلفزيوني (1X) التي تحتوي على الفورمالديهايد 2 ٪ لمدة 40 دقيقة مع هزاز. ؛ استخدم 250ul لكل 50-10 تشريح الجهاز العصبي المركزي.
- إزالة الفورمالديهايد ، ويغسل 3 مرات لفترة وجيزة مع برنامج تلفزيوني + 0.1 ٪ تريتون X - 100 (PBST). استخدام سحبت ناعما باستور ماصة لتجنب فقدان الأنسجة.
- حجب المواقع البروتين غير محددة وملزمة وpermeabilize أغشية الخلايا التي تفرخ الأنسجة 1-8 ساعات في جيش صرب البوسنة PBST + 5 ٪ ، هزاز في 4 درجات مئوية.
- في احتضان الضد الأولية مخففة في PBST + هزاز BSA 5 ٪ عند 4 درجات مئوية خلال الليل. وسوف تختلف الضد الأمثل التخفيف عن الأجسام المضادة المختلفة.
- شطف 3X في PBST تليها اثنين من يغسل 30min في 4 درجات مئوية.
- في احتضان الضد الثانوية مخففة في PBST + 5 ٪ لجيش صرب البوسنة 1-3 ساعات هزاز في 4 درجات مئوية. شطف 3X في PBST تليها اثنين من يغسل 30min في 4 درجات مئوية. إذا كان الثانوي هو مترافق لمجمع الحساسة للضوء ، والتفاف الأنبوب في رقائق الألومنيوم.
- تشريح الأنسجة أخرى (عند الحاجة) وجبل على الشرائح.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا الفيديو يوضح كيفية تشريح الجهاز العصبي المركزي يرقات ذبابة الفاكهة من المركز الثالث طور مرحلي. بعد التشريح ، ويمكن للجهاز العصبي المركزي الملون باستخدام بروتوكول المناعية القياسية. حاليا ، لا تزال غير معروفة كثيرا حول كيفية إنشاء نظام أخلاقي العصبي ، وكذلك الكيفية التي يخزن وينقل المعلومات. وينبغي للدراسات الجهاز العصبي المركزي النامية اليرقات ذبابة الفاكهة تعزيز معرفتنا الأسلاك الجهاز العصبي وظيفة.
يرقات ذبابة الفاكهة المعرض عددا من السلوكيات stereo...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تعارض مصالح للإفصاح عنه.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| ملقط | دقيق الرأس | |||
| زجاجة ساعة بـ 9 فجوات | ||||
| طبق بتري بلاستيكي |
المراجع
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128. , 1899-1909 (2001).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
