مقالة منهجية

جمع وقياس وسطاء Nociceptive والتهاب في الجروح الجراحية

DOI:

10.3791/962

⸱

أكتوبر 29, 2008

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

في هذه المقالة

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهناك تقنية لجمع وقياس وسطاء الجروح الجراحية البيوكيميائية في نقطة زمنية محددة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت أهداف هذه الدراسة لاختبار جدوى جمع وقياس وسطاء التهابات والبيوكيميائية nociceptive في موقع الجراحة ، وتقييم العلاقة بين الجرح ومستويات المصل ، وتحديد أي علاقة بين الافراج عن الوسيط والألم واستهلاك المسكنات بعد القيصرية التسليم. تم تسجيل عشرين امرأة سليمة تمر الولادة القيصرية الاختيارية مع التخدير الشوكي. تم قياس الافرازات الجرح وسطاء المصل ، درجات الألم والمسكنات الاستهلاك بنسبة 6 ، 1 ، 24 ، و 48 ساعة بعد القيصرية. في الافرازات الجرح ، تم الكشف عن 19 من أصل موثوق بها وسطاء بينهم 20 IL - 1β ، IL - 2 ، IL - 4 ، IL - 6 ، IL - 7 ، IL - 8 ، IL - 10 ، IL - 12 ، IL - 13 ، IL -17 ، TNFα ، INFγ ، G - CSF ، جنرال موتورز CSF ، 1 - MCP وMIP 1β ، عامل نمو الاعصاب (NGF) ، E2 البروستاجلاندين (PG - E2) ، وبلغت ذروتها مادة P. بالجروح PG - E2 والسيتوكينات المختلفة في وقت مبكر ، في حين أظهرت NGF بيان تأخر أكثر. لم تكن هناك علاقة بين تركيز مقابل التعريف وقت الجرح والسيتوكينات المصل. هذه الدراسة تدل على جدوى جمع وقياس وسطاء nociceptive والتهابات في الجروح الجراحية في نقطة زمنية محددة. عدم وجود ارتباط كبير بين مستويات المصل الجرح ويؤكد على أهمية تحديد مواقع محددة بالإفراج عنه إذا المترجمة هي الأمراض التي يتعين دراستها.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nociceptive والتهابات جمع الوسيط البيوكيميائية

  1. يتم إدراج على سؤال الألم ® ® PainBuster نظام الإغاثة في طبقة تحت الجلد من قبل الفريق الجراحي فقط قبل اغلاق الجرح. نظام يسلم باستمرار المالحة العادي (أو مخدر موضعي) تحت الجلد في الجرح بمعدل 2 مل / ساعة.
  2. أدرج ألف محبس ثلاثي في ​​هذا النظام للسماح للتطلع الافرازات الجرح عند نقاط زمنية محددة.
  3. في نقطة زمنية محددة بواسطة بروتوكول (على سبيل المثال ، 1 ، 6 ، 24 عاما ، وبعد 48 ساعة من الولادة القيصرية) ، يتم سحب 1 مل من الافرازات الجرح في فنجان يحتوي على 30 مادة البولي ايثيلين ميكرولتر من بروتين مثبط.
  4. في فترات الوقت نفسه يتم جمع 10 مل من الدم إلى أعلى خضراء تحتوي على جمع الدم أنبوب الهيبارين الليثيوم. ثم يتم إضافة 300 ميكرولتر من بروتين مثبط للعينات الدم.
  5. في حدود 1 ساعة لجمع ، يتم وضع العينات في الثلج وطرد في 3000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة.
  6. تتم إزالة المصل وsupranate الجرح ومكان في أنبوب microcentrifuge القياسية وتخزينها في -20 درجة مئوية.

تحليل مقايسة

  1. حالما يتم جمع كل العينات ، وإذابة وتحليلها في الوقت نفسه.
  2. ومن ثم يتم قياس السيتوكينات باستخدام A17 - الصفيف متعددة المناعه حبة لوحة. مقايسة المناعية متعددة تتيح تقنية المعايرة يصل إلى 100 analytes في الجسم عينات من السائل كما صغير في الحجم إلى 50 ميكرولتر وتحقيق نتائج قابلة للمقارنة مع تلك التي حصلنا عليها مع إليسا. هذا الطبق هو قادر على قياس انترلوكين 1ß (IL - 1ß) ، انترلوكين 2 (IL - 2) ، انترلوكين 4 (IL - 4) ، انترلوكين 5 (IL - 5) ، وانترلوكين 6 (IL - 6) ، 7 انترلوكين (IL -7) ، انترلوكين 8 (IL - 8) ، انترلوكين (IL - 10) ، انترلوكين 12 (IL - 12) ، انترلوكين 13 (IL - 13) ، انترلوكين 17 (IL - 17) ، وعامل نخر الورم α (TNFα) ، انترفيرون α (INFα) ، عامل تحفيز مستعمرة الكريات البيضاء (G - CSF) ، محببة ، عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (GM - CSF) ، البروتين الوحيدات جاذب كيميائي 1 (MCP - 1) والبلاعم بروتين الالتهابي 1 (MIP - 1β).
  3. يقاس عامل نمو الأعصاب مع الضد NGF DY256 عن طريق إضافته إلى لوحة 17 - نوع plex مع المعونة من المجموعة الأمينات الحيوية اقتران الصفيف.
  4. يتم القياس في كل التكرارات وفقا لمواصفات الشركة المصنعة. يتم إنشاؤها المنحنيات القياسية لكل تحليلها باستخدام analytes المرجعية المقدمة من قبل الشركات المصنعة في تركيزات 0.20 ، 0.78 ، 3.13 ، 12.5 ، 50 ، 200 ، 800 ، 3200 جزء من الغرام / مل زائد صفر القياسية (العادية المالحة فقط). وترد في كل المنحنيات القياسية تشغيل وحسبت تركيزات عينة مع برنامج إدارة الصفيف الحيوية.
  5. تقاس البروستاغلاندين E2 و ف مادة شديدة الحساسية باستخدام أطقم ELISA مقايسة يتم تنفيذ كل من نسختين وفقا لمواصفات الشركة المصنعة.

    الشكل 1
    الشكل 1

    الشكل 1 : مستويات المصل والافرازات المختلفة السيتوكينات المؤيدة والمضادة للالتهابات (انترلوكين 1ß (IL - 1ß) ، انترلوكين 2 (IL - 2) ، انترلوكين 4 (IL - 4) ، انترلوكين 5 (IL - 5) ، وانترلوكين 6 (IL - 6) ، 7 انترلوكين (IL - 7) ، انترلوكين 8 (IL - 8) ، انترلوكين (IL - 10) ، انترلوكين 12 (IL - 12) ، انترلوكين 13 (IL - 13) ، انترلوكين 17 (IL -17) ، عامل نخر الورم α (TNF - α) ، الإنترفيرون γ (INFγ) ، عامل تحفيز مستعمرة الكريات البيضاء (G - CSF) ، محببة ، عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (GM - CSF) ، والبروتين الوحيدات جاذب كيميائي 1 (MCP - 1 ) والبلاعم بروتين الالتهابي 1 (MIP - 1ß) ، عامل النمو العصبي (NGF) ، E2 البروستاجلاندين (PG - E2) والجوهر P (SP) المستويات (بيكوغرام / مل) يقاس في الأساس ، 6 و 24 ساعة بعد الولادة القيصرية .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وينبغي أن تدرج على سؤال الألم ® ® PainBuster نظام الإغاثة عبر شق في طبقة تحت الجلد بأكمله فقط قبل اغلاق الجرح. يسهل هذا الطموح من خلال محبس ثلاثي في ​​فترات زمنية محددة. وعلى سؤال ® نظام يسلم باستمرار المالحة تحت الجلد الطبيعي في الجرح بمعدل 2 مل / ساعة. هذا يمنع تخثر القسطرة ويحسن من الاعتمادية في منظومة لإنتاج عينات من الافرازات. إذا تطلع الافرازات صعب (حوالي 5 ٪ من الحالات) ، والنظر في تغيير الموقف هذا الموضوع (على سبيل المثال ، يجلس المريض لأعلى أو الكذب عليهم الشقة) ، ودفع برفق فوق الجرح ، وذلك ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضاربات مصالح للإفصاح عنها.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويدعم عمل الدكتور كارفالو في وظائف عن طريق البناء المتعدد التخصصات في صحة المرأة منحة بحثية من مكتب بحوث صحة المرأة والمعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية التابع لمعاهد الصحة القومية (5K12 HD043452). استقبل الدكتور أنغست اللوازم (وعلى سؤال PainBuster ® ® تخفيف الآلام بعد العملية النظام) والتمويل لإجراء فحوصات البيوكيميائية من تدفق - I (بحيرة الغابات ، كاليفورنيا).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام On-Q® PainBuster® لتسكين الآلام بعد الجراحةI-Flow, Lake Forest, CA
مثبط بروتينات شامل (Complete proteinase inhibitor)Roche Group
لوحة Bio-PlexTM للمقايسة المناعية بالخرزات متعددة الإرسال (17-multiplex bead immunoassay)Bio-Rad
طقم ربط الأمين Bio-PlexBio-Rad
جسم مضاد لـ NGF من النوع DY256R&D Systems
أطقم ELISA لقياس Prostaglandin E2 وsubstance PAssay Designs

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

E2 P