استخراج Soxhlet للمؤشرات الحيوية للدهون من الرواسب

1. إعداد وإعداد المواد

1. اجمع عينة من الرواسب البحرية المجمدة والمجففة بالتجميد والمسحوقة والمتجانسة. عينة مثل هذه تحتوي على العديد من المركبات اللازمة للمعايير.
   1. غالبا ما تصنع المعايير من الرواسب المتبقية بعد رحلة استكشافية أو تحليل. على سبيل المثال ، في هذه التجربة ، يتم استخراج الرواسب التي تم الحصول عليها من "رقعة الطين" الواقعة جنوب كيب كود. تم أخذ هذه الرواسب كجزء من رحلة استكشافية للحفر ولكن لن يتم استخدامها للإجابة على الأسئلة العلمية. لذلك يمكننا استخدامه لوضع معيار.
   2. ضع قطعة ~ 100 جم من الرواسب في الفريزر طوال الليل حتى تتجمد.
   3. بمجرد تجميد الرواسب تماما ، قم بتشغيل مجفف التجميد (المتوفر من العديد من تجار التجزئة للمعدات العلمية مثل Fisher) وانتظر حتى يصل المكثف إلى نقطة الضبط (غالبا ~ -30 درجة مئوية).
   4. قم بتحميل عينة الرواسب في مجفف التجميد وأغلق عملية التطهير لبدء سحب الفراغ على العينة.
   5. اعتمادا على كمية الماء في الرواسب وحجم العينة ، قد يستغرق الأمر عدة أيام حتى تجف العينة.
   6. بمجرد أن تجف العينة ، قم بإيقاف تشغيل مجفف التجميد ، وقم بتهويته ، وإزالة العينة.
   7. ضع العينة في ملاط مغسول بمذيب وطحنها إلى مسحوق باستخدام مدقة. افعل ذلك على العينة بأكملها وقم بتخزينها في وعاء زجاجي في الفريزر حتى تصبح جاهزة للاستخراج.
2. اعتمادا على حجم العينة ، استخدم قوارير بأحجام تتراوح من 4-60 مل. في هذه التجربة ، استخدم قوارير زجاجية من البورسليكات (40 مل) وأغطية آمنة للمذيبات. قم بحرق القوارير والماصات الزجاجية البورسليكات وعلب الوزن عند 550 درجة مئوية لمدة 6 ساعات قبل ضمان إزالة الملوثات العضوية المحتملة.
3. احصل على ثنائي كلورو الميثان والميثانول (كلاهما شائع في معظم مختبرات الكيمياء الجيولوجية العضوية) ، ثم استخدمهما بشكل فردي لشطف أدوات المختبر والأواني الزجاجية قبل الاستخدام. يستخدم خليط من ثنائي كلورو الميثان (DCM) إلى الميثانول (MeOH ؛ 9: 1) في العديد من المختبرات لاستخراج المؤشرات الحيوية بكفاءة مع مجموعة واسعة من الأقطاب. يجب أن تكون المذيبات خالية من الملوثات العضوية.
4. احصل على جهاز soxhlet لاستخدامه في هذه التجربة (يمكن شراؤها من Fisher Scientific أو بائع تجزئة علمي آخر) ، ثم اغسله وحرقه عند 550 درجة مئوية لمدة 6 ساعات قبل الاستخدام.
5. احصل على كشتبانات من الألياف الزجاجية (يمكن شراؤها من Whatman) وحرقها عند 550 درجة مئوية لمدة 6 ساعات قبل الاستخدام.

2. تحضير العينة

1. ضع علبة وزن محترقة على ميزان المختبر ثم فارغها.
2. اشطف ملعقة المختبر بالمذيب ، ثم استخدمها لنقل كتلة مناسبة من العينة إلى علبة الوزن ، وتسجيل الكتلة.
   1. تختلف كتلة العينة حسب محتواها من المواد العضوية. قد تتطلب المواد العضوية الخالية من الدهون نسبيا (الطين البحري) عدة جرامات ، بينما قد تتطلب المواد العضوية الغنية (أنسجة الأوراق) أقل بكثير.
3. انقل كل المواد الموجودة في علبة الوزن إلى كشتبان من الألياف الزجاجية المحترقة.

3. الاستخراج

1. انقل ~ 400 مل من خليط DCM: MeOH (9: 1) إلى القارورة ذات القاع المستدير (يجب أن تكون القارورة أكثر من نصفها ممتلئة) وضعها في عباءة التسخين. أضف عدة (5-10) رقائق غليان مغسولة بالمذيبات.
2. ضع كشتبان العينة ، في الطرف المفتوح ، في محور جهاز Soxhlet.
3. ضع القطعة المركزية أعلى القارورة ذات القاع المستدير وثبتها بمشبك الأواني الزجاجية.
4. قم بتثبيت المكثف أعلى القطعة المركزية من Soxhlet وقم بتثبيته بمشبك الأواني الزجاجية.
5. قم بتوصيل أحد خطوط الماء البارد من المكثف بخط الماء البارد في غطاء المحرك باستخدام مشبك خرطوم. وجه الآخر في البالوعة.
6. قم بتشغيل الماء لضمان الدورة الدموية والصرف المناسبين.
7. قم بتشغيل عباءة التسخين واضبط درجة الحرارة حتى يغلي المذيب الموجود في القارورة ذات القاع المستدير قليلا.
8. راقب الاستخراج عدة مرات خلال الساعة التالية.
   1. تحقق للتأكد من ضبط درجة الحرارة بشكل صحيح عند درجة غليان منخفضة ، وأن المذيب يتكثف في المكثف ويقطر في القطعة المركزية ، وأن القطعة المركزية تمتلئ وتفرغ بشكل صحيح ، وأن الماء يتم تصريفه بشكل صحيح في مصرف الغطاء.
9. راقب الاستخراج خلال ال 36 ساعة التالية.
   1. تأكد من ضبط درجة الحرارة بشكل صحيح عند درجة غليان منخفضة ، وأن المذيب يتكثف في المكثف ويقطر في القطعة المركزية ، وأن القطعة المركزية تمتلئ وتفرغ بشكل صحيح ، ويتم تصريف المياه بشكل صحيح في مصرف غطاء المحرك ، ولا يزال مستوى المذيب في القارورة ذات القاع المستدير ممتلئا بحوالي النصف.
10. بعد 36 ساعة ، أوقف الاستخراج عن طريق إيقاف تشغيل عباءة التسخين.
11. قم بتسمية القارورة "TLE".