تحديد القوارض II

تعد القدرة على تحديد البحث الفردية جانبا أساسيا من حفظ السجلات العلمية وجمع البيانات. يضمن التمييز بين استخدام الموضوع الصحيح للإجراء التجريبي المقصود.

هناك العديد من الطرق الدائمة والمؤقتة التي يستخدمها العلماء لتحديد المختبر الفردية. في هذا الفيديو ، سنناقش الطرق التي تتضمن وشم ذيل القوارض البالغة وأصابع القدم حديثي الولادة وأصابع القدم البالغة. بعد ذلك ، سنتطرق إلى تقنية وضع الرقاقة الدقيقة التي يتم إجراؤها بشكل شائع في الفئران البالغة ، متبوعة بطريقة التحديد المؤقت العالمية التي تستخدم الأصباغ غير السامة.

قبل الخوض في بروتوكولات هذه الطرق ، دعنا نراجع اعتبارات وفوائد وأوجه القصور في كل من هذه التقنيات. يعد وشم الذيل مفيدا في العديد من بروتوكولات البحث ، مثل التجارب التي تنطوي على تصوير التصوير بالرنين المغناطيسي أو تلك التي تكون فيها معرضة وراثيا للأمراض الجلدية بما في ذلك التهاب الجلد التقرحي. ميزة أخرى للوشم الذيل هي أنه يمكن تصورها بسهولة دون الحاجة إلى كبح جماح يدويا.

تتطلب بعض البروتوكولات التجريبية التنميط الجيني لحديثي الولادة في وقت مبكر من اليوم الأول ، مما يجعل من الضروري تحديد هذه الجراء بشكل دائم. يسمح استخدام وشم إصبع القدم بالتعرف على هذه حتى تصبح كبيرة بما يكفي لوضع علامات على الأذن أو تثقيب الأذن. من الجيد وضع وشم إصبع قدم مماثل على الأم البالغة لمنعها من الإفراط في رد الفعل والعناية المفرطة بالوشم الجديد لجروها. على الرغم من وجود العديد من المزايا لاستخدام هذه الطريقة ، إلا أن العيب هو أن الإجراء يتطلب مهارة وممارسة ويد ثابتة ومعدات متخصصة.

طريقة التحديد الدائمة التالية قيد الدراسة هي الرقائق الدقيقة. على الرغم من أن زرع الرقائق الدقيقة عملية سهلة نسبيا ، إلا أن هناك العديد من العوامل التي تحد من فائدتها. أولا ، هذه الرقائق بحجم حبة أرز كبيرة تقريبا وتتطلب إبرة قياس 10-12 للزرع ، وهي كبيرة جدا بالنسبة للفأر ، مما يحد من الطريقة على الفئران البالغة. ثانيا ، الرقائق الدقيقة باهظة الثمن وبالتالي فهي ليست مثالية لتحديد أعداد كبيرة من. أخيرا ، لا يمكن استخدام الرقائق الدقيقة في التجارب التي تنطوي على التصوير بالرنين المغناطيسي. ومع ذلك ، إذا كانت هناك مجموعة من القيمة مثل المربات ذات علم الوراثة الفريد الذي يجب تحديده بشكل دائم ، فيمكن استخدام الرقائق الدقيقة.

الطريقة الأخيرة التي سنناقشها هي تحديد الهوية المؤقت باستخدام علامات غير سامة. العلامات غير السامة مصنوعة لتلوين فراء البحث. هذه الطريقة مثالية للدراسات قصيرة المدى التي تتطلب التعرف على لبضع ساعات أو أيام فقط ، على الرغم من أن الأصباغ يمكن أن تظل مرئية لعدة أسابيع. يستخدم بعض الباحثين هذه العلامات جنبا إلى جنب مع طرق تحديد الهوية الأخرى لاكتشاف معينة بسهولة في مجموعة.

الآن بعد أن ناقشنا الخلفية ، دعنا نتعلم الإجراءات ، بدءا من وشم الذيل. هنا ، سنوضح الإجراء على الفئران البالغة ، ولكن يمكن تطبيق الشيء نفسه على الفئران البالغة والفطام.

لتقليل أي خوف أو ضيق للحيوانات ، يجب إجراء وشم الذيل في غرفة العمليات بدلا من منطقة سكن. قبل وضع الوشم ، قم بتقييد الماوس باستخدام مقبض الكوب ، مع سحب الذيل مشدودا من الفتحة. يتم تثبيت شفة الكوب في مكانها عبر منصة زجاجية متخصصة. بعد ذلك ، نظف الذيل بكمية صغيرة من منظف الأنسجة المخفف على مسحة قطنية. هذه الخطوة مهمة لإزالة أي تراكم للقشور والحطام قد يتداخل مع الوشم. بعد ذلك ، ضع زيت الأنسجة على جلد الذيل بمسحة أخرى. هذا يقلل من تلف الأنسجة عن طريق تليين الجلد وتوفير تزييت لإبرة الوشم. بالإضافة إلى ذلك ، يذيب الزيت الأوساخ التي لم تتم إزالتها من خلال عملية التنظيف ويمنع تلطيخ الحبر على الجلد غير الموشوم. أنت الآن جاهز لتطبيق الوشم.

أثناء إيقاف تشغيل الماكينة ، اغمس طرف إبرة الوشم ، وهي إما إبرة لانسيت أو تحت الجلد ، في الصبغة. بعد ذلك ، قم بتنشيط البندقية باستخدام دواسة القدم ، ضع أداة الوشم على الذيل ، وأحضر طرف الإبرة إلى موقع الوشم. اقترب من الجلد بالإبرة عند 90؟ زاوية وتخترق بعمق كاف في الأدمة بحيث يتم ترسيب الصبغة بشكل دائم. يمكن أن يساعد التغيير في صوت الإبرة المنشطة في تمييز العمق. قم بعمل ضربات قصيرة متساوية في اتجاه واحد ، وتشكيل الأرقام والحروف. حاول استخدام الحد الأدنى من المنحنيات والزوايا عند تطبيق الوشم.

لإضافة صبغة إضافية ، اغمس طرف الإبرة في خزان الصبغة لكل حرف أو حرفين للفئران وكل حرف واحد للفئران. امسح الوشم المكتمل بمنشفة ورقية لإزالة الصبغة الزائدة. يشير وجود الدم على الوشم أو المنشفة الورقية إلى أن الوشم كان عميقا جدا ، وبالتالي من غير المرجح أن يكون دائما. عزز الأحرف الرقيقة بصبغة إضافية عن طريق وضع الإبرة موازية للصبغة المودعة بالفعل وليس فوقها. قم بتنظيف معدات الوشم جيدا بعد كل استخدام ، ويجب استخدام إبرة جديدة أو معقمة وإمدادات جديدة من الحبر بين الأقفاص لمنع انتقال الأمراض.

بعد ذلك ، سوف نتعلم كيفية تطبيق وشم أصابع القدم على حديثي الولادة والبالغين. هنا ، سنوضح الإجراء في الفئران ، لكن نفس الخطوات تنطبق على الفئران.

يتم وشم الأطفال حديثي الولادة على أصابع قدمهم لأن عظام الذنب غير متحجرة وطول الذيل صغير جدا. أيضا مع نمو الذيل ، سيتمدد الجلد وقد تصبح الأرقام مشوهة وخافتة وغير قابلة للقراءة. ابدأ بوضع بقعة من عجينة الوشم الخضراء على سطح غير مسامي مثل رقائق الألومنيوم. بعد ذلك ، ضع الجرو المفطوم مسبقا في يدك باستخدام وسادة شاش. ضع القدم بين إبهامك ومحتال إصبعك السبابة لكشف أصابع القدم المختارة للوشم. أمسك القدم بالقرب من أصابع القدم بحيث يكون لإصبع القدم المحدد سطح صلب خلفها لمنعها من الانحناء.

الآن ، اغمس طرف إبرة الوخز مقاس 4.5 مم في معجون الوشم. بعد ذلك ، قم بوخز إصبع القدم المطلوب وفقا للرمز المحدد مسبقا. لضمان النفاذية المناسبة ، كزة نفس البقعة ثلاث مرات. اخترق الجلد بدرجة كافية حتى يترك المعجون علامة ، لكن تجنب الوخز بعمق بحيث ينزف إصبع القدم. امسح الوشم الجديد برفق بالشاش لإزالة أي معجون وشم زائد ، وأعد إلى قفصه. استخدم إبرة وخز جديدة للقمامة التالية. بعد يوم واحد من العملية ، تحقق من أن الوشم مرئي.

عندما يتم وشم الجراء المرضعة ، ينصح أيضا بوشم السد. قد يمنعها هذا من المبالغة في رد الفعل والإفراط في إعداد وشم الجرو. لتطبيق وشم إصبع القدم على شخص بالغ ، مرة أخرى ، ضع أولا بقعة صغيرة من معجون الوشم الأخضر على ورق الألمنيوم. بعد ذلك ، قم بتقييد باستخدام مخروط بلاستيكي أو مصفاة زجاج شبكي تسمح بالوصول إلى القدمين الخلفيتين. مد القدم من جهاز التقييد وضع القدم بين إبهامك ومحتال إصبعك السبابة لكشف أصابع القدم المختارة للوشم.

الآن ، اغمس طرف إبرة الوخز 5 مم في معجون الوشم. وكما كان من قبل ، قم بتطبيق الوشم عن طريق وخز وثقب جلد إصبع القدم المطلوب ثلاث مرات على الأقل لضمان الاختراق المناسب. بعد ذلك ، امسح الوشم برفق لإزالة أي معجون زائد ، وأعد إلى قفصه. كما هو الحال مع حديثي الولادة ، تحقق من الوشم بعد يوم واحد من العملية. إذا كانت العلامة مرئية في اليوم التالي للوشم ، فيجب أن تظل مرئية طوال حياة. إذا كان باهتا أو غير مرئي ، فأعد الوشم كما هو موضح سابقا.

تتضمن طريقة التحديد التالية التي سنناقشها زرع الرقائق الدقيقة في القوارض. الشريحة المستخدمة بشكل شائع لوضع العلامات على المختبر هي رقاقة تحديد الترددات الراديوية أو RFID. عادة ، يتم تحميل الشريحة مسبقا في إبر ، والتي يمكن وضعها بعد ذلك في التطبيق. لإدخال الرقائق ، استخدم أنبوب زجاج شبكي لكبح جماح مع التأكد من أنه لا يزال بإمكانك الإمساك بالجلد فوق الكتفين. أولا ، ضع خيمة على الجلد لإنشاء جيب. ثم ضع الإبرة من خلال الجلد ، وشطبة ، موازية للعمود الفقري ، وتوجيهها نحو الذيل. أخرج الرقاقة تحت الجلد واسحب الإبرة. اقرص الجلد مغلقا في موقع الحقن لمنع الرقاقة من اتباع الإبرة من الجلد. استمر في الضغط لتوفير الإرقاء لأي نزيف جلدي. قم بإزالة من جهاز التقييد ومسح الرقاقة باستخدام القارئ المقدم من المصنع لتأكيد رمز التعريف.

أخيرا ، دعنا نتعلم كيفية تطبيق الأصباغ المؤقتة على القوارض للتعرف عليها. لنبدأ بالفئران. أولا ، كبح جماح بحيث يمكن الوصول إلى المنطقة الواقعة بين لوحي الكتف. هذا الجزء من الجسم آمن من الاستمالة الذاتية. ضع بقعة أو خطا من الصبغة على الفراء في هذه المنطقة وضع مرة أخرى في قفصه.

بالنسبة للفئران ، قم بتقييد يدويا عن طريق الإمساك بالذيل وإمساكه مشدودا. هذا يضمن سهولة الوصول إلى منطقة تطبيق الصبغة ، والتي يمكن أن تكون رأسا أو كتفين أو ردف. ضع بقعة أو خط من الصبغة على الفراء. من الممكن أحيانا تطبيق صبغة غير سامة دون تقييد. تحقق من العلامات الموجودة على هذه بشكل دوري ، خاصة إذا كنت تستخدمها كمعرف وحيد لأكثر من بضعة أيام.

الآن بعد أن راجعنا إجراءات طرق تحديد الهوية المختلفة هذه ، دعنا نرى كيف يستخدمها العلماء في دراسات بحثية مختلفة اليوم.

استخدام القوارض في التجارب السلوكية شائع جدا. هنا ، استخدم الباحثون وشم الذيل لتمييز بشكل دائم ثم راقبوها لعدة أيام في بيئة قفص منزلية مصطنعة. كشفت البيانات التي تم جمعها عن اختلافات في السلوكيات ، مثل المسافة المقطوعة ، بين التحكم التجربة ، على مدى 10 أيام بعد الجراحة.

في تجربة سلوكية أخرى ، أجرى الباحثون وشم أصابع القدم في حديثي الولادة ووضعوهم في صندوق تسجيل به ميكروفونات خاصة لتسجيل الأصوات بالموجات فوق الصوتية. كان الغرض من هذه التجربة هو النظر في الاختلافات في معدل المكالمة ، أي عدد الأصوات في الدقيقة ، في النوع البري والفئران التي تعاني من نقص Shank2 - نموذج للتوحد - على مدى 12 يوما من فترة حديثي الولادة وغطاء رأس البالغين.

أخيرا ، كما تمت مناقشته سابقا ، يعد استخدام الصبغة غير السامة طريقة فعالة لتمييز لإجراء تجارب قصيرة المدى. هنا ، كان العلماء مهتمين بالتعبير العابر لبروتين البلازما. لذلك قاموا بتمييز بعلامات مؤقتة ، وحقنوا الحمض النووي البلازميد عن طريق الوريد ، وجمعوا عينة الدم بعد يومين لتحديد تعبير البروتين باستخدام تقنية اللطخة الغربية.

لقد شاهدت للتو مقدمة JoVE للوشم ، ووضع الرقائق الدقيقة ، وطرق تحديد الهوية المؤقتة لفئران المختبر والجرذان. يعد تحديد مكونا أساسيا لحفظ السجلات في البحث. لذلك ، عند اختيار طريقة تحديد الهوية المناسبة ، يجب مناقشة العديد من العوامل. يتضمن ذلك مستوى الانزعاج للحيوان ، وسهولة التقنية ، والاحتياجات التجريبية ، وأخيرا التكلفة المرتبطة بالطريقة. كما هو الحال دائما ، شكرا على المشاهدة!